Влияние аналога тетрапептида холецистокинина на поведенческие и нейрохимические эффекты морфина у крыс тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.45, кандидат биологических наук Шохонова, Вера Алексеевна

• Шохонова, Вера Алексеевна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шохонова, Вера Алексеевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Опиоидная система и ее роль в формировании толерантности и зависимости от морфина у экспериментальных животных.

1.2. Взаимодействие холецистокининовой и опиоидной систем в условиях действия морфина.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Выраженность анальгетического эффекта морфина при различных режимах введения аналога ССК-4 и морфина.

3.2. Влияние аналога ССК-4 на связывающую активность i- и 5-ОР in vitro и при однократном введении морфина in vivo.

3.3. Развитие толерантности к анальгетическому действию морфина и зависимости от наркотика при введении аналога ССКна фоне хронической морфинизации.

3.4. Связывающая активность ji- и 5-ОР при хроническом сочетанном введении морфина и аналога ССК-4.

3.5. Влияние аналога ССК-4 на связывающую активность ц- и 5-ОР при отмене морфина.

3.6. Влияние аналога ССК-4 на связывающую активность ССК-рецепторов мозга при длительном введении морфина

3.7. Базальный и форсколинстимулированный уровень цАМФ при введении аналога ССК-4 на фоне однократного и хронического введения морфина.

3.8. Влияние аналога ССК-4 на потребление морфина у животных с опийной зависимостью.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние аналога тетрапептида холецистокинина на поведенческие и нейрохимические эффекты морфина у крыс»

Актуальность исследования. В России наиболее часто употребляемыми наркотическими средствами являются опий кустарного производства, героин и его самодельные аналоги (Иванец Н.Н. и др., 2005; Кошкина Е.А. и др., 2005; Кошкина Е.А. и др., 2006), поэтому лечение и профилактика опийной наркомании являются чрезвычайно актуальной проблемой.

Согласно современным представлениям, в формировании зависимости от опиатов существенную роль играет изменение опиоидной рецепции, прежде всего, на уровне таких регуляторных процессов, как десенситизация и интернализация рецепторов (Williams J.T. et al., 2001). В связи с этим в научной литературе обсуждается возможность поиска эффективных средств лечения опийной наркомании среди соединений, модулирующих опиоидную рецепцию (Blake A.D. et al., 1997), а в клинической наркологии в настоящее время широко используются препараты, являющиеся антагонистами опиоидных рецепторов (Сиволап Ю.П., Савченков В.А., 2005).

Физиологические эффекты опиоидных пептидов реализуются посредством их взаимодействия со специфическими рецепторами ц-, б- и к-типа, широко представленными в ЦНС и на периферии (Mansour A. et al., 1995), и регулируются большим числом нейромодуляторов, в том числе и биологически активными фрагментами холецистокинина (cholecystokinin, ССК) - окта- и тетрапептидами ССК, ССК-8 и ССК-4 (Wiesenfeld-Hallin Z. et al., 1999). Если ССК-8 взаимодействует в ЦНС с двумя типами ССК-рецепторов (ССК1 и ССК2), то ССК-4 обладает выраженной селективностью к ССК2-рецепторам (Rehfeld J.F. et al., 1985; Wank S.A., 1995). Авторадиографические исследования показали, что биологически активные фрагменты ССК и опиоидные пептиды обнаруживаются в одних и тех же морфологических структурах мозга, а их специфические рецепторы локализованы на мембране одних и тех же нейронов (Noble F. et al., 1993;' Zhang X. et al., 2000).

В большинстве работ, посвященных изучению взаимодействия между ССК- и опиоидной системами, исследуется влияние лигандов ССК-рецепторов на аналитический эффект эндогенных опиоидов и морфина (Itoh S. et al., 1982; Ding X.L. et al., 1986; Friedrich A.E., Gebhart G.F., 2000; Falicio J.F. et al., 2001). И лишь незначительное число исследований пытается ответить на вопрос, каким образом лиганды ССК-рецепторов модифицируют подкрепляющий и анксиолитический эффекты опиоидов, а также поведенческие и вегетативные реакции, индуцируемые отменой морфина у животных с опийной зависимостью (Valverde О. et al., 1996; Hernando F. et al., 1996; KayserV. et al., 1998).

В настоящее время доминирует мнение, что стимуляция ССК2-рецепторов снижает анальгетическое действие морфина и эндогенных опиоидных пептидов (Backus R.C. et al., 1997), тогда как антагонисты ССК2-рецепторов усиливают индуцируемые опиоидами анальгезию (Smadja С. et al., 1995) и антидепрессантно-подобный эффект (Backus R.C. et al., 1997). В то же время, сообщается и о способности агонистов ССК-рецепторов (ССК-8S и церулеина) предотвращать развитие толерантности к анальгетическому эффекту морфина при его длительном употреблении и снижать выраженность синдрома отмены наркотика (Zarrindast M.R. et al., 1995; Zarrindast M.R. et al., 1997). При этом практически открытым остается вопрос о влиянии лигандов ССК-рецепторов на связывающую и функциональную активность опиодных рецепторов.

Представленные данные послужили основанием для проведения настоящего исследования, в котором в качестве лиганда ССК-рецепторов планировалось использовать пептидное соединение, созданное путем модификации эндогенного тетрапептида ССК (аналог ССК-4) с выраженной избирательностью к ССК 1-рецепторам (Анохина И.П. и соавт., 1999; Проскурякова Т.В., 2000).

Цель работы состояла в изучении влияния аналога ССК-4 на опиоидергические механизмы формирования толерантности и зависимости от морфина у животных.

Задачи исследования:

1. Исследовать влияние аналога ССК-4 на выраженность эффектов однократного и хронического введения морфина: анальгетического действия морфина, толерантности и зависимости от наркотика.

2. Изучить характер влияния аналога ССК-4 на связывающую активность агонистов опиоидных рецепторов в экспериментах in vitro.

3. Изучить влияние аналога ССК-4 на связывающую и функциональную активность опиоидных и холецистокининовых рецепторов в различных структурах мозга крыс при однократном и хроническом введении морфина.

4. Оценить влияние аналога ССК-4 на потребление морфина в условиях свободного выбора у животных с опийной зависимостью.

Научная новизна. Структура аналога ССК-4, созданного путем модификации эндогенного тетрапептида холецистокинина является приоритетной. Впервые установлено, что аналог ССК-4 подавляет развитие основных симптомов опийной зависимости, а именно, предотвращает развитие толерантности к анальгетическому эффекту морфина, снижает тяжесть физической зависимости от наркотика, а также снижает потребление морфина у животных с опийной зависимостью. Механизм действия аналога ССК-4 при однократном и хроническом введении морфина связан с его модулирующим влиянием на связывающую и функциональную активность опиоидных рецепторов в структурах мозга.

Практическое значение. Проведенные исследования выявили у аналога ССК-4 фармакологическую активность, которая позволяет рассматривать это соединение в качестве потенциального средства для лечения опийной наркомании. Это пополнит имеющийся на настоящий момент арсенал фармакологических препаратов для лечения опийной наркомании принципиально новым средством, механизм действия которого связан с модулирующим влиянием на связывающую и функциональную активность опиоидных рецепторов.

Способность аналога ССК-4 потенцировать анальгетический эффект морфина позволяет снижать дозу наркотика, что имеет практическое значение при использовании морфина в качестве обезболивающего средства.

Положения, выносимые на защиту.

Взаимодействие холецистокининовой и опиоидной систем играет существенную роль в реализации эффектов острого и хронического введения морфина.

В качестве эффективных средств лечения опийной зависимости могут быть использованы препараты, модулирующие связывающую и функциональную активность опиоидных рецепторов.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на заседании межлабораторной конференции ННЦ наркологии Росздрава (Москва, июнь 2003); Российском симпозиуме по химии и биологии пептидов (Москва, ноябрь 2003); на научной конференции «Нейрохимия: фундаментальные и прикладные аспекты», март 2005); на VIII-ой региональной конференции Европейского колледжа по нейропсихофармакологии (Москва, апрель 2005); на Н-ом Российском симпозиуме по химии и биологии пептидов (Санкт-Петербург, май 2005); на заседании Проблемной комиссии ННЦ наркологии (Москва, апрель 2007).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 научных работ.

Структура и объём работы. Диссертация состоит из введения, обзора данных литературы, описания материалов и методов исследования, изложения собственных результатов и их обсуждения, заключения и выводов. Работа изложена на 130 страницах, содержит 16 таблиц и 8 рисунков. Список цитированной литературы включает 169 источников, из которых -15 работ отечественных авторов.

Заключение диссертации по теме «Наркология», Шохонова, Вера Алексеевна

выводы

1. В экспериментах in vitro аналог ССК-4 ингибирует специфическое связывание селективного агониста ц-рецепторов и увеличивает специфическое связывание селективного агониста 5-рецепторов, что свидетельствует о его модуляторном действии на опиоидную рецепцию.

2. Аналог ССК-4 предотвращает наблюдаемое при однократном введении морфина увеличение числа б-рецепторов и усиливает падение сродства ц-рецепторов во фронтальной коре.

3. При формировании зависимости от морфина и толерантности к его анальгетическому эффекту наблюдается снижение числа ц-рецепторов во фронтальной коре и стриатуме, увеличение числа б-рецепторов во фронтальной коре и падение сродства 5-рецепторов в стриатуме.

4. Аналог ССК-4, вводимый на фоне хронической морфинизации, частично предотвращает развитие толерантности к анальгетическому эффекту морфина и снижает тяжесть опийной зависимости, что сопровождается нормализацией числа (i-рецепторов и увеличением числа 5-рецепторов в стриатуме.

5. Аналог ССК-4 снижает у животных с опийной зависимостью потребление морфина в условиях свободного выбора, при этом уменьшается как суточная доза морфина, так и индекс предпочтения.

6. При хроническом введении морфина изменяются параметры связывания ССК-рецепторов во фронтальной коре и гипоталамусе. Действие аналога ССК-4, вводимого на фоне хронической морфинизации, проявляется только при отмене морфина и выражается в нормализации сродства ССК-рецепторов во фронтальной коре и гипоталамусе и снижении числа ССК-рецепторов в гипоталамусе.

7. Увеличение форсколинстимулированного уровня цАМФ в стриатуме и фронтальной коре при введении аналога ССК-4 на фоне хронической морфинизации может свидетельствовать об изменении под действием пептида внутриклеточных процессов, развивающихся при активации опиоидных рецепторов, вследствие чего изменяется их функциональная активность.

8. Полученные результаты позволяют рассматривать аналог ССК-4 как принципиально новое средство для лечения опийной зависимости, так как механизм его действия связан с модулирующим влиянием на связывающую и функциональную активность опиоидных рецепторов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Поведенческие и нейрохимические эффекты острого и, особенно, хронического введения морфина являются предметом изучения на протяжении очень длительного периода времени. Благодаря этим исследованиям были обнаружены нарушения обмена практически всех нейромедиаторов и нейромодуляторов, в том числе и на уровне внутриклеточных процессов (Williams J.T. et al., 2001). Эти нарушения, вероятно, лежат в основе изменения мотивации поступков и реакции на стресс при хроническом употреблении морфина и обусловливают, в конечном счете, формирование основных симптомов опийной зависимости: патологического влечения к опиатам, развитие толерантности к их физиологическим эффектам и синдрома отмены.

На настоящий момент наиболее обсуждаемой является теория, связывающая механизм формирования зависимости от психоактивных веществ, в том числе и морфина с нарушением обмена дофамина в структурах мезолимбической системы мозга (Анохина И.П., 1995). Доказано, что ПАВ активируют проводящие пути ДА-нейронов, локализованных в вентральной области покрышки среднего мозга, в прилежащее ядро и префронтальную кору (Nutt D.J., 1996). Но при этом никто не отрицает важной роли опиодных систем в развитии толерантности и зависимости от морфина, так как начальным этапом фармакологического действия морфина является его связывание со специфическими рецепторами ц-, 5- и к-типа, широко представленными в ЦНС и на периферии (Mansour A. et al., 1995).

Физиологические эффекты морфина регулируются большим числом нейромодуляторов. ССК, как нейромодуляторный пептид, попал в поле зрения исследователей после того, как в 1982 г. S.Itoh et al., обнаружили ингибирующее действие CCK-8S на анальгетический эффект (3-эндорфина. В дальнейшем появилось множество исследований, посвященных изучению влияния лигандов ССК-рецепторов не только на анальгетический эффект морфина (Faris P.L. et al., 1983; Zarrindast M.R. et al., 1997; Williams C.L. et al.,

1997; Friedrich A.E., Gebhart G.F., 2000; Falicio J.F. et al., 2001 и др.), но и на подкрепляющий (Smadja С. et al., 1995; Valverde О. et al., 1996 и др.) и антидепрессантноподобный эффекты морфина (Hernando F. et al., 1994), а также поведенческие и вегетативные реакции, индуцируемые отменой морфина у животных опийной зависимостью (Maldonado R. et al., 1995; Zarrindast M.R. et al., 1995; Kayser V. et al., 1998).

Эти исследования преследовали две цели. Во-первых, получить доказательства, что ССК-система играет важную роль в реализации эффектов морфина при остром и хроническом введении наркотика. И, во-вторых, оценить возможность использования лигандов ССК-рецепторов различной химической природы для купирования основных симптомов опийной зависимости.

Представленные данные литературы и послужили основанием для проведения настоящего исследования с использование в качестве лиганда ССК-рецепторов пептидного соединения, созданного путем модификации эндогенного ССК-4 (аналог ССК-4) и являющегося лигандом ССК1-рецепторов (Анохина И.П. и соавт., 1999; Проскурякова Т.В. и соавт., 2000)

В результате выполненной работы удалось обнаружить увеличение анальгетического эффекта морфина при его совместном введении с аналогом ССК-4, и это увеличение было наиболее выраженным, когда введение пептида предшествовало введению морфина. Используя этот режим введения аналога ССК-4 и морфина в условиях хронического введения наркотика, наблюдалось частичное предотвращение развития толерантности к анальгетическому эффекту морфина и значительное снижение тяжести физической зависимости от морфина. И, наконец, у животных с физической опийной зависимостью было выявлено снижение под действием аналога ССК-4 потребления морфина в условиях свободного выбора между растворами морфина и хинина. Ингибирующий эффект аналога ССК-4 на потребление морфина наблюдался при двух способах введения аналога ССК-4 (внутрибрюшинном и интраназальном) и наиболее значимо проявлялся после прекращения введения пептида. При внутрибрюшинном способе введения аналога ССК-4 снижение потребления морфина отмечалось у животных с высокой и низкой суточной дозой потребления морфина, т.е. не зависело от чувствительности животных к морфину. При интраназальном способе введения аналога ССК-4 снижение потребления морфина отмечалось только у животных с низкой суточной дозой потребления морфина. Следует отметить, что у животных интраназальное введение сопровождается развитием стресса, вызванного кратковременной иммобилизацией животного в руках экспериментатора. Этот факт, вероятно, трудно привлечь для объяснения отсутствия ингибирующего действие аналога ССК-4 на потребление морфина у животных с высокой суточной дозой потребления наркотика при интраназальном способе введения пептида. Скорее всего, в условиях стресса потребление морфина должно было бы возрастать, но этого не наблюдалось. Вместе с тем, при хроническом введении морфина реакция на стресс изменяется.

На наш взгляд, представляют интерес данные, согласно которым у животных с опийной зависимостью, получавших аналог ССК-4, в период отмены морфина снижался уровень тревожности. Известно, что существует положительная корреляционная связь между редукцией тревожности и снижением влечения к ПАВ, в том числе и морфину.

В настоящей работе было уделено внимание изучению влияния аналога ССК-4 на связывающую активность опиоидных рецепторов ц- и 5- типа в экспериментах in vitro и in vivo. Но при этом наиболее значимым было решение двух вопросов. Первый вопрос предполагал выяснить, каким образом изменяется связывающая активность ц- и 8- опиоидных и ССК-рецепторов при сочетанном введении аналога ССК-4 и морфина в условиях однократного, и особенного, хронического введения наркотика. Второй вопрос касался изменений в тех же условиях образования цАМФ, одного из вторичных внутриклеточных посредников, так как образование цАМФ является показателем функциональной активности ц- и 8- опиоидных и ССК-рецепторов.

В результате выполненных исследований было показано, что если в экспериментах in vitro аналог ССК-4 при добавлении в реакционную среду вызывал дозозависимое ингибирование специфического связывания селективного лиганда ц-ОР (3Н-ДАГО) и увеличивал специфическое связывание селективного агониста 8-ОР (3Н-ДАДЛ) за счет возрастания числа 8-ОР, то в экспериментах in vivo при однократном введении аналога ССК-4 связывающая активность ц-ОР во фронтальной коре и стриатуме не изменялась, но при этом в обеих структурах мозга отмечалось достоверное увеличение числа мест 8-ОР на фоне падения сродства лиганда к 8-ОР.

Стоит отметить, что обнаруженное в экспериментах in vitro ингибирование аналогом ССК-4 специфического 3Н-ДАГО не является доказательством наличия у пептида сродства к Ц.-ОР, потому что ССК- и ц-опиоидные рецепторы локализованы на одних и тех же нейронах.

Обращают внимание и различия в действии самого аналога ССК-4 на связывающую активность ц- и 8- ОР при однократном и хроническом введении пептида. При однократном введении аналога ССК-4 изменялась только связывающая активность 8-ОР. Эти изменения выражались в увеличении мест связывания 3Н-ДАДЛ падении его сродства к 8-ОР во фронтальной коре и стриатуме по сравнению с контрольными животными, которым вместо аналога ССК-4 вводили эквивалентный объем 0,9% раствора NaCl. При длительном введении аналога ССК-4 наблюдалось увеличение мест связывания 3Н-ДАГО во фронтальной коре и увеличение мест связывания Н-ДАДЛ во фронтальной коре и стриатуме при падении сродства этих лигандов к (д.- и 8-ОР в обеих структурах мозга.

Различия в изменении параметров связывания используемых в работе агонистов {д.- и 8-ОР наблюдались при однократном и хроническом введении морфина, а также в том случае, когда на фоне однократного и хронического введения морфина животным вводился аналог ССК-4.

Если при однократном введении морфина отмечалось лишь падение сродства Н-ДАГО к ц-ОР во фронтальной коре и стриатуме, то при хроническом введении морфина наблюдалось снижение мест специфического связывания 3Н-ДАГО в исследуемых структурах мозга. Инъекция аналога ССК-4, предшествующая однократному введению морфина, усиливала падение сродства 3Н-ДАГО к ji-ОР во фронтальной коре, тогда как введение аналога ССК-4 на фоне хронической морфинизации приводило к нормализации мест связывания 3Н-ДАГО в стриатуме.

Продолжительность введения морфина не оказывала влияния на связывающую активность 5-ОР: и при однократном, и при хроническом л введении морфина наблюдалось увеличение мест связывания Н-ДАДЛ во фронтальной коре и падение сродства 3Н-ДАДЛ к 8-ОР в стриатуме. Различия обнаруживались в том случае, когда введению морфина предшествовало введение аналога ССК-4. Если при однократном введении л аналога ССК-4 и морфина наблюдалась нормализация мест связывания Н-ДАДЛ во фронтальной коре, то при введении аналога ССК-4 на фоне хронической морфинизации отмечалось увеличение мест связывания 3Н-ДАДЛ в стриатуме.

Необходимо отметить, что при однократном введении аналога ССК-4 и морфина регистрировалось увеличение анальгетического эффекта морфина. Известно, что в основе анальгетического эффекта морфина, во-первых, лежит способность наркотика тормозить болевой импульс на путях его иррадиации по ЦНС, а именно на интернейронах спинного мозга, ретикулярной формации ствола, таламуса и коры больших полушарий, которые содержат главные болевые центры. И, во-вторых, способность морфина изменять восприятие боли и, следовательно, изменять реакции на болевой импульс, что позволяет связывать анальгетический эффект морфина с его влиянием на нейроны коры головного мозга. Эти данные позволяют связывать потенцирующее действие аналога ССК-4 на анальгетический эффект морфина с изменением связывающей активности, прежде всего, 5-ОР во фронтальной коре, несмотря на то, что для определения анальгетического действия морфина использовался тест отдергивания хвоста.

Если сконцентрировать внимание на данных, полученных при определении связывающей активности |х- и 5-опиоидных рецепторов у животных, длительное время получавших морфин в сочетании с аналогом ССК-4, то можно придти к заключению, что наблюдаемое при этом предотвращение развития толерантности к анальгетическому эффекту морфина и снижение тяжести опийной зависимости сопровождается нормализацией числа ц-рецепторов и увеличением числа 8-рецепторов в стриатуме.

Механизм формирования толерантности и зависимости от морфина до сих пор окончательно неясен, несмотря на длительность исследования этих феноменов. Результаты, полученные при изучении механизма развития толерантности и зависимости от морфина на уровне ц-опиоидной рецепции, оказались противоричивыми. Наряду с данными об отсутствии изменений связывающей активности ц-рецепторов при длительном введении морфина (Wong C.S. et al., 1996) имеются сообщения о снижении их плотности и/или аффинности в структурах головного мозга экспериментальных животных (Jordan В., Devi L.A., 1998). При этом наиболее устойчиво феномен down-регуляции fi-OP проявляется при хроническом воздействии опиатами в опытах in vitro (Self D.W. et al., 1995). В ряде работ сообщается о ир-регуляции, т.е. повышении числа jj.-OP при хроническом введении опиатов (Ueda Н. et al., 1997; Georges F. et al., 1999).

Необходимо подчеркнуть трудность сопоставления результатов разных авторов, так как регуляция экспрессии ц-ОР в условиях действия морфина очень нестабильна. К тому же связывающая активность ц-ОР зависит от нескольких факторов, таких как локализация ц-ОР рецепторов в ЦНС, схема морфинизации (доза и длительность введения морфина), используемая авторами для формирования толерантности и зависимости от морфина, и метод определения параметров связывания ц-ОР. Так, использование авторадиографического или гистохимического методов позволяет определять только плотность рецепторов. Применение радиорецепторного анализа позволяет определять не только число рецепторов, но и константу диссоциации. Но при сопоставлении результатов, полученных разными авторами с помощью радиорецепторного анализа, важным моментом является использование различных меченых лигандов, обладающих, как правило, различной избирательностью к рецепторам. Если же используются одни и те же меченые лиганды, то опять возникает проблема, связанная с фирмой-проиводителем этих лигандов, так как одни и те же меченые лиганды, изготовляемые разными фирмами, не всегда имеют одни и те же параметры связывания.

В задачи настоящей работы не входило изучение влияния аналога ССК-4 на синдром отмены морфина. Однако, учитывая тот факт, что о снижении тяжести физической зависимости от морфина у животных, которым на фоне хронической морфинизации вводился аналог ССК-4, мы судили по менее выраженному синдрому отмены морфина, нами было выполнено исследование связывающей активности ц- и 8-опиоидных рецепторов мозга в период отмены морфина. Согласно полученным результатам, в период отмены морфина у животных, получавших один морфин, наблюдалось снижение числа ц-ОР в стриатуме и во фронтальной коре. У животных, получавших морфин в сочетании с аналогом ССК-4, в период отмены морфина число р,-ОР в этих структурах мозга не отличалось от контрольных значений, и при этом суммарный показатель выраженности синдрома отмены был ниже, чем у животных, получавших один морфин. Эти данные позволили нам связать менее выраженный синдром отмены у животных, которым на фоне хронической морфинизации вводился аналог ССК-4, с нормализацией числа (i-опиоидных рецепторов во фронтальной коре.

Изучение механизма, лежащего в основе изменения эффектов морфина под действием ССК, на протяжении последних 15-ти лет проводилось как на уровне опиоидной рецепции, так и на уровне внутриклеточных процессов, развивающихся при активации OP. L.Zhang et al. (1993) показал, что CCK-8S л в широком диапазоне концентраций ингибирует связывание Н-налоксона с ОР в мозге крыс, что выражается в уменьшении числа ОР на фоне увеличения константы диссоциации. Нам удалось получить аналогичные данные только в отношении числа ц-ОР в экспериментах in vitro и при хроническом введении морфина и аналога ССК-4 при использовании 3Нл

ДАГО в качестве лиганда ц-ОР. Уменьшал сродство Н-эторфина к ОР и один из вторичных внутриклеточных посредников, гуанозин-5 - 0 - 3(3-тиотрифосфат), и этот эффект в значительной степени снижался в присутствии CCK-8S. На основании полученных данных авторы выдвинули предположение, что CCK-8S ингибирует связывание лигандов ОР как на рецепторном, так и на пост-рецепторном уровнях. В первом случае действие CCK-8S проявляется в снижении числа и аффинности ОР, а механизм действия пептида, скорее всего, связан с изменением конформации рецепторного белка ОР после связывания CCK-8S со специфическими рецепторами. С этим можно согласиться, но при этом необходимо помнить, что при связывании CCK-8S со специфическими рецепторами также происходит изменение конформации рецепторного белка ССК 1-рецептора. Во втором случае действие CCK-8S проявляется, по-видимому, в подавлении процесса спаривания рецепторного белка ОР с G-белками.

Эти данные имеют чрезвычайно важное значение, т.к. действие аналога ССК-4 на фоне однократного и хронического введения морфина происходит в условиях конкуренции с эндогенным CCK-8S за места специфического связывания. Правда, ранее при сравнении селективности аналога ССК-4 с селективностью эндогенного CCK-8S было обнаружено, что при одновременной модифицикации N- и С- терминальных участков в структуре эндогенного ССК-4 посредством замены Met31 на Nle и введения в С-концевой амид пространственного заместителя [СН(СНз)2] у аналога ССК-4 более чем на порядок увеличивается селективность к ССК 1-рецепторам по сравнению с CCK-8(S) (Проскурякова Т.В. и соавт., 2000).

Объяснить способность аналога ССК-4 предотвращать развитие толерантности к анальгетическому эффекту морфина и снижать тяжесть зависимости от морфина невозможно без привлечения полученных в работе данных об уровне цАМФ.

До сих пор изменения аденилатциклазной активности обсуждаются в качестве одной из гипотез развития толерантности и зависимости от опиатов. Согласно этой гипотезе, связываясь со специфическими рецепторами, морфин вызывает ингибирование аденилатциклазы. Если действие морфина носит хронический характер, то включаются компенсаторные клеточные механизмы, благодаря которым происходит увеличение числа молекул аденилатциклазы и повышение концентрации цАМФ до нормального уровня. Эту гипотезу нам удалось подтвердить в отношении как базального, так и форсколинстимулированного уровня цАМФ практически во всех изучаемых отделах мозга при хроническом введении морфина. При этом форсколинстимулированный уровень цАМФ в стриатуме при хроническом введении морфина был сниженным.

В литературе снижение форсколинстимулированного уровня цАМФ рассматривается в качестве показателя отсутствия десенситизации ОР при длительном введении морфина (Blake A.D. et al., 1997). На наш взгляд, объяснить полученные результаты возможно, если обратить внимание на тот факт, что именно в стриатуме обнаружена наибольшая плотность не только (х-, но и б-ОР. Морфин же, как известно, чаще рассматривается в качестве селективного агониста ц-ОР и хроническое введение морфина приводит к десенситизации именно этого подтипа ОР. В связи с этим, можно предположить, что в стриатуме, несмотря на длительное введение морфина, часть ОР, скорее всего, 8-типа сохранили чувствительность к наркотику.

Особого внимания заслуживают выявленное в работе повышение форсколин-стимулированного уровня цАМФ в стриатуме и фронтальной коре животных, которым на фоне хронического введения морфина осуществлялась инъекция аналога ССК-4, и сохранение повышенного форсколин-стимулированного уровня цАМФ у этих животных после отмены морфина. При этом введение аналога ССК-4, как отмечалось выше, предшествовало введению морфина.

Опираясь на известные данные литературы о том, что ССК 1-рецепторы, выраженной избирательностью к которым обладает аналог ССК-4, спарены с Gs-белком, самое простое объяснение повышения форсколин-стимулированного уровня цАМФ можно было бы свести к активации под действием аналога ССК-4 ССК 1-рецепторов, при которой наблюдается увеличение образования ц-АМФ. Вместе с тем последующее введение морфина приводит к активации (i- и 5-опиоидных рецепторов, которые спарены с Gi -белками и поэтому активация этих рецепторов инициирует снижение образования цАМФ. В связи с этим возникает вопрос, почему не изменяется форсколин-стимулированный уровень, ответить на который на основании полученных в работе данных, не так просто.

Можно предположить, что аналог ССК-4, связываясь со специфическими рецепторами, вызывает конформационные изменения не только ССК 1-рецепторов, но и локализованных в непосредственной близости ОР. В результате этого, по-видимому, нарушается процесс спаривания ОР с G-белком, а, возможно, и процесс фосфорилирования G-белка и, как следствие этого, не происходит диссоциации G-белка на составляющие его субъединицы. Главным моментом при этом является то, что если а-субъединица не диссоциирует из G-белка, то не произойдет и её воздействия на аденилатциклазу и, следовательно, снижения уровня цАМФ.

Полученные нами результаты позволяют констатировать, что увеличение форсколинстимулированного уровня цАМФ в стриатуме и фронтальной коре при введении аналога ССК-4 на фоне хронической морфинизации может свидетельствовать об изменении под действием пептида внутриклеточных процессов, развивающихся при активации опиоидных рецепторов, вследствие чего изменяется их функциональная активность.

Таким образом, выявленная в настоящей работе фармакологическая активность аналога ССК-4 свидетельствует, что взаимодействие ССК- и опиоидной систем в условиях действия морфина играет важную роль в развитии основных симптомов опийной зависимости. Некоторые вопросы и, прежде всего, механизм этого взаимодействия остаются, в известной степени, открытыми. Но уже на данном этапе исследований можно обсуждать возможность разработки на основе аналога ССК-4 принципиально нового лекарственного средства для лечения опийной наркомании, механизм действия которого связан с молулирующим действием на связывающую и функциональную активность ц- и 5-опиоидных рецепторов мозга. Однако окончательный ответ об эффективности его применения в практической наркологии могут дать только клинические испытания, потому что в развитии опийной зависимости существенную роль играют не только физиологическая, но и психологическая составляющая, особенно, при формировании патологического влечения к опиатам. В условиях эксперимента на животных наиболее объективно оценивается физиологическая составляющая опийной зависимости, хотя разработаны подходы и к оценке психологической составляющей (уровня тревожности, депрессивно-подобного состояния, мотивации к употреблению психоактивных веществ), но интерпретация результатов, полученных с использованием этих подходов, требует определенной корректности.

110

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Шохонова, Вера Алексеевна, 2007 год

1. Анохина И.П. Биологические механизмы зависимости от психоактивных веществ. //Вопр. наркологии. 1995. - № 2. - С. 27-31.

2. Анохина И.П., Векшина Н.Л., Веретинская А.Г. Центральные механизмы предрасположенности к зависимости от психоактивных веществ. // Журн. неврологии и психиатрии им. С.С.Корсакова. -1997.-Т. 97.-№ 12.-С. 83-86.

3. Анохина И.П., Беспалова Ж.Д., Проскурякова Т.В. и др. Оценка антиалкогольной активности аналогов тетрапептида холецистокинина. // Вопр. Наркологии. 1997. - № 2. - С. 50-56.

4. Анохина И.П., Проскурякова Т.В., Беспалова Ж.Д. и др. Тетрапептид Trp-Nle-Asp-PheNH-CH(CH3)2) обладающий антиалкогольной активностью. // Патент на изобретение № 2142470. -М., 1999.

5. Анохина И.П., Проскурякова Т.В., Беспалова Ж.Д. и др. Тетрапептид Trp-Nle-Asp-PheNH-CH(CH3)2, обладающий анксиолитической активностью. // Патент на изобретение № 2142813. -М., 1999.

6. Ашмарин И.П., Каменская М.А. Нейропептиды в синаптической передаче. // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Физиология человека и животных. Москва. 1988. - Т. 34. - 184 с.

7. Беспалов А.Ю., Звартау Э.Э. // Нейропсихофармакология антагонистов NMDA-рецепторов. Санкт-Петербург: Невский диалект. - 2000. - 295 с.

8. Головко А.И., Коноплин Д.А., Ю.А. Некрасов и др. Нейрохимия опиатной наркомании. // Нейрохимия. -2000. Т. 17. - № 1. - С. 3-12.

9. Панченко Л.Ф., Судаков С.К., Гуревич К.Г. Роль опиоидных рецепторов в патогенезе наркомании и алкоголизма. // Руководство по наркологии. Москва: Медпрактика М. - 2002. - Т.1. - С. 42-61.

10. Иванец Н.Н., Кошкина Е.А., Киржанова В.В. Распространенность наркоманий и токсикоманий в России. // Наркомании в России угроза национальной безопасности страны.2005.-М.,-С. 68-80.

11. Кошкина Е.А., Киржанова В.В., Ружников Ю.Н. и др. Современные эпидемиологические методы мониторинга распространенности наркотиков. Москва, из-во «Радуга», 2005. .245.

12. Кошкина Е.А., Киржанова В.В., Чумакова О.В. и др. Информационно-аналитические материалы. Москва, из-во «Радуга»,2006, 56 стр.

13. Проскурякова Т.В., Анохина И.П., Панкратова Н.В. и др. Новый аналог тетрапептида холецистокинина как основа для разработки лекарственного средства купирования состояния тревоги. // Рос. психиатр, журнал. 1998. -.№ 6. - С. 12-16.

14. Проскурякова Т.В., Петриченко О.Б., Панкратова Н.В. Механизм реализации анксиолитической активности нового аналога эндогенного тетрапептида холецистокинина. // Рос. психиатр, журнал. -2000.-№4.-С. 69-74.

15. Сиволап Ю.П., Савченков В.А. Злоупотребление опиоидами и опиоидная зависимость. М., из-во «Медицина». 2005. - С.301.

16. Abdelhamid Е.Е., Sultana М., Portoghese P.S., Takemori А.Е. Selective blockaga of delta opioid receptors prevents the development of morphine tolerance and dependence in mice. // Pharmacol. Exp. Ther. -1991.-V. 258.-P. 299-303.

17. Adler M.W. Human subject issues in drug abuse research. College on Problems of Drug Dependence. // Drug Alcohol Depend. 1995. - V. 37. -P. 167-75.

18. Agnes R.S., Lee Y.S., Davis P. et al. Structure-activity relationships of bifunctional peptides based on overlapping pharmacophores at opioidand cholecystokinin receptors. // J.Med.Chem. 2006. - V. 49. - P. 28682875.

19. Akil H., Owens C., Gutstein H. et al. Endogenous opioids: overview and current issues. // Drug Alcohol Depend. 1998. - V.51. - P. 127-140.

20. Allard В., Beinfeld M.C. Vasoactive intestinal polypeptide (VIP) inhibits potassium-induced release of cholecystokinin (CCK) from rat caudate-putamen but not from cerebral cortex. // Neuropeptides. 1986. -V.8.-P. 287-293.

21. Backus R.C., Howard K.A., Rogers Q.R. The potency of dietary amino acids in elevating plasma cholecystokinin immunoreactivity in cats is related to amino acid hydrophobicity. // Regulatory Peptides. 1997. -V. 72.-P. 31-40.

22. Becker C., Pohl M., Thiebot M.H. et al. delta-opioid receptor-mediated increase in cortical extracellular levels of cholecystokinin-like material by subchronic morphine in rats. // Neuropharmacology. 2000. -V. 39. - P.161-171.

23. Benedetti F., Amanzio M., Casadio C. et al. Blockade of nocebo hyperalgesia by cholecystokinin antagonist proglumide. // Pain. 1997. -V.71.-P. 135-140.

24. Blake A.D., Bot G., Tallent M. et al. Molecular regulation of opioid receptors. // Receptors Channels. 1997. - V. 5. - P. 231-235.

25. Blake A.D., Bot G., Freeman J.C. et al. Differential opioid agonist regulation of the mouse mu opioid receptor. // J. Biol. Chem. 1997. - V. 272. - P. 782-790.

26. Blanke S.E., Johnsen A.H., Rehfeld J.F. N-terminal fragments of intestinal cholecystokinin evidance for release of CCR-8 by cleavage onthe carboxyl side arg (74) of proCCK. Regul. // Peptides. 1993. - V. 46. -P. 575-582.

27. Beinfeld M.C., Palkovits M. Distribution of cholecystokinin in the hipothalamus and the limbic system of the rat. // Neuropeptides. 1981. -V. 2.-P. 123-129.

28. Bhave S.V., Hoffman P.L. Ethanol promotes apoptosis in cerebellar granule cells by inhibiting the tropic effect of NMDA. // J. Neurochem. -1997.-V. 68.-P. 578-586.

29. Bohn L.M., Lefkowitz R.J., Gainetdinov R.R. et al. Enhanced morphine analgesia in the mouse lacking P-arrestin 2. // Science. 1999. -V. 286.-P. 2495-2498.

30. Bourgoin S., Benoliel J.J., Collin E. et al. Opioidergic control of the spinal release of neuropeptides. Possible significance for the analgesic effects of opioids. // Fund. Clin. Pharmacol. 1994. - V.8. - P. 307-321.

31. Brodsky M., Elliott K., Hyansky A., Inturrisi C.E. CNS levels of mu opioid receptor (MOR-1) mRNA during chronic treatment with morphine or naltrexone // Brain Res. Bull. 1995. - V.38. - P. 135-141.

32. Brog M.C., Beinfeld M.C. Cholecystokinin release from rat caudate-putamen, cortex and hippocampus is increased by activation of the D1 dopamine receptor. // J. Pharm. Exp. Therap. 1992. - V. 260. - P. 343348.

33. Cesselin F. Opioid and anti-opioid peptides. // Fundam. Clin. Pharmacol. 1995. - V.9. - P. 409-433.

34. Charness M.E. Ethanol and opioid receptor signalling. // Experientia. 1989. -V. 45.-P. 418-428 ).

35. Chen Y., Mestek A., Liu J. et al. Molecular cloning and functional expression of ц opioid receptor from rat brain. // Mol. Pharmacol. -1993.-V. 44.-P. 8-12.

36. Condore-Civiale M.A., Courteix C., Fialip J. et al. Spinal effect of the cholecystokinin-B receptor antagonist CI-988 on hyperalgesia, allodyniaand morphine-induced analgesia in diabetic and mononeuropathic rats. // Pain. 2000. - V. 88.-P. 15-22.

37. Connor M., Christie M.J. Opioid receptor signaling mechanism. //Clin. Exp. Physiol. Pharmacol. 1999. - V.26. - P. 493-499.

38. Darland T. Heinricher M.M., Grandly D.K. Orphanin FQ/nociceptin: a role in pain and analgesia, but so much more. // Trend. Neurosci. 1998. -V. 21.-P. 215-221.

39. De la Fuente M., Carrasco M., Del Rio M., Hernanz A. Modulation of murine lymphocyte functions by sulfated cholecystokinin octapeptide. // Neuropeptides. 1998. - V. 32. - P. 225-233.

40. Detjen K., Yule D., Tseng M.J. et al. CCK-B receptors produce similar signals but have opposite growth effects in CHO and Swiss 3T3 cells. // Am. J. Physiol. 1997. - V. 273. - P. 1449-1457.

41. Ding X.Z., Fan S.G., Zhou J.P., Han J.S. Reversal of tolerance to morphine but no potentiation of morphine-induced analgesia by antiserum against cholecystokinin octapeptide. // Neuropharmacology. 1986. - V. 25.-P. 1155-1160.

42. Ding X.Z., Bayer B.M. Increase of CCK mRNA and peptide in different brain areas following acute and chronic administration of morphine. // Brain Res. 1993. - V. 15. - P. 139-144.

43. Di Piero V., Ferracuti S., Sabatini U. et al. A cerebral blood flow study on tonic pain activation in man. // Pain. 1994. - V. 56. - P. 167173.

44. Dockrey G.J. Cholecystokinin in rat cerebral cortex: identification, purification and characterization by immunochemical methods. // Brain Res. 1980.-V. 188.-P. 155-165.

45. Faris P.L., Komisaruk В., Watkins L.R., Mayer D.J. Evidence for the neuropeptide cholecystokinin as an antagonist of opiate analgesia. // Science. 1983. - V. 219. - P. 310-312.

46. Felicio L.F., Mazzini B.K., Cacheiro R.G. et al. Stimulation of either cholecystokinin receptor subtype reduces while antagonists potentiate or sensitize a morphine-induced excitatory response. // Peptides. 2001 -. V. 22-P. 1299-1304.

47. Friedrich A.E., Gebhart G.F. Effects of spinal cholecystokinin receptor antagonists on morphine antinociception in a model of visceral pain in the rat. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 2000. - V. 292. - P. 538-544.

48. Fundytus M.E., Schiller P.W., Shapiro M. et al. Attenuation of morphine tolerance and dependence with the highly selective delta-opioid receptors antagonist TIPP. // Eur. J. Pharmacol. 1995. - V. 286. - P. 105108.

49. Gall C., Lauterborn J., Burks D., Seroogy K. Co-localisation of enkephalin and cholecystokinin in discrete areas of rat brain. // Brain Res. 1987. -V. 403. - P.403-408.

50. Garson J., Schulz R., Herz A. Evidance for the epsilon-type of opioid receptor in the rat vas deferens. // Mol. Pharmacol. 1985. - V. 28. - P. 18.

51. Gebhart E. The problem of mutagenic side effects of psychotropic substances. // Forschr. Med. 1979. - V. 97. - P. 103-106.

52. Ghosh S., Grasing K. Presynaptic dopaminergic function in the nucleus accumbens following chronic opiate treatment and precipitated withdrawal. //Neurochem. Res. 1999. - V.24. - P.95-107.

53. Grawley J.N. Comparative distribution of cholecystokinin and other neuropeptides. // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1985. - V. 448. - P. 1-8.

54. Gustafsson H., Afrah A.W., Stiller C.O Morphine-induced in vivo of spinal cholecystokinin is mediated by delta-opioid receptors effect of peripheral axotomy. // J. Neurochem. - 2001. V. 78. P. 55-63.

55. Hamilton M.E., Redondo J.L., Freeman A.S. Overflow of dopamine and cholecystokinin in rat nucleus accumbens in response to drug administration. // Synapse. 2000. - V. 38. - P. 238-242.

56. Han S.H., Cho Y.W., Kim C.J. et al. Mu-opioid agonist-induced activation of G- protein-coupled inwardly rectifying potassium current in rat periaqueductial gray neurons. // Neuroscience. 1999. - V. 90. - P. 209-219.

57. Harrison L.M., Kastin A.J., Zadina J.E. Opiate tolerance and dependence: receptors, G-proteins, and antiopiates. // Peptides. 1998. -V. 19.-P. 1603-1630.

58. Hens J.J., De Wit M., Ghijsen W.E. et al. Role of calcineurin in Ca2+-induced release of catecholamines and neuropeptides. // J. Neurochem. -1998.-V. 71.-P. 1978-1986.

59. Hernando F., Fuentes J.A., Roques B.P. and Ruiz-Gayo M. The CCKB receptors antagonist, L-365,260, elicits antidepressant-type effects in the forced-swim test in mice. // Eur. J. Pharmacol. 1994. V. 261. - P. 257-263.

60. Hernando F., Fuentes J.A., Fournie-Zaluski M.C. et al. Antidepressant-like effects of CCK(B) receptor antagonists: involvement of the opioid system. // Eur. J. Pharmacol. 1996. - V. 318. - P. 221-229.

61. Higgins G.A., Nguyen P., Seller E.M. Morphine place conditioning is differentially affected by CCKA and CCKB receptor antagonists. // Brain Res. 1992. - V. 572. - P. 208-215.

62. Higgins G.A., Joharchi N., Wang Y. et al. The CCRA receptor antagonist devazepide does not modify opioid self-admistration or drugdiscrimination: comparison with the dopamine antagonist haloperidol. // Brain Res. 1994. V. 640. - P. 246-254.

63. Hill D.R, Campbell N.J., Shaw T.M., Woodruff G.N. Autoradiographic localization and biochemical characterization of peripheral type CCK receptors in rat CNS using highly selective nonpeptide CCK antagonists. // J. Neurosci. 1987. - V. 7. - P. 29672973.

64. Himmelsbach C.R. With reference to physical dependence. // Federation Proc. 1943. - V. 2. - P.201 -203.

65. Hruby V.J., Agnes R.S., Davis P. et al. Design of novel peptide ligands which have opioid agonist activity and CCK antagonist activity for the treatment of pain. // Life. Sci. 2003. - V. 73. - P. 699-704.

66. Hoffman P.L., Chung C.T., Tabakoff B. Effects of ethanol, temperature, and endogenous regulatory factors on the characteristics of striatal opiate receptors. // Neurochem. 1984. - V. 43. - P. 1003-1010.

67. Innis R.B., Snyder S Distinct cholecystokinin receptors in brain and pancreas. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. - V. 77. - P. 6917-6921.

68. Itoh S., Katsuura G., Maeda Y. Caerulein and cholecystokinin suppress р-endorphin-induced analgesia in the rat. // Eur. J. Pharmacol. -1982.-V. 80.-P.421-425.

69. Jordan В., Devi L.A. Molecular mechanism of opioid receptor signal transduction. // Br. J. Anaesth. 1998. - V. 81. - P. 12-19.

70. Kitchen I., Slowe S.J., Matthes H.W. et al. Quantitative autoradiographic mapping of mu-, delta- and kappa-opioid receptors in knockout mice lacing the mu-opioid receptor gene. // Brain. Res. 1997. -V. 778.-P. 73-88.

71. Knapp R.J., Landsman R., Waite S. et al. Properties of TAN-67, a nonpeptidic delta-opioid receptor agonist, at cloned human delta- and mu-opioid receptors.Eur. J. Pharmacol., 1995. - V. 291. - P. 123-134.

72. Koks S., Soosaar A., Voikar V. et al. Opioid antagonist naloxone potentiates anxiogenic-like action of cholecystokinin agonists in elevated plus-maze. // Neuropeptides. 1998. - V. 32. - P. 235-240.

73. Koks S., Soosaar A., Voikar V. et al. BOC-CCK-4, CCR(B) receptor agonist, antagonizes anxiolytic-like action of morphine in elevated plus-maze. // Neuropeptides. 1999. - V. 33. - P. 63-69.

74. Koks S., Mannistro P.T., Bourin M. et al. Cholecystokinin-induced anxiety in rats: relevance of pre-experimental stress and seasonal variations. // J. Psychatry Neurosci. 2000. - V.25. - P. 33-42.

75. Koob G.F., Roberts A.J., Schulteis G. et al. // Alcoholism: Clin, and Exp. Res. 1998.-V. 22.-P. 3-8.

76. Krieffer B.L. Recent advances in molecular recognition and signal transduction of active peptides: receptors for opioid peptides. // Cell. Mol. Neurobiol. 1995.-V. 15.-P. 615-635.

77. Larssen L.J., Rehfeld J. Localization and molecular heterogeneity of cholecystokinin in the central and peripheral nervous system. // Brain Res. 1979. -V. 165.-P. 201-218.

78. Lavigne G.J., Millington W.R., Mueller G.P. The CCK-A and CCK-B receptor antagonists, devazepide and L-365,260, enhance morphine antinociception only in non-acclimated rats exposed to novel environment. // Neuropeptides. 1992. - V. 21. - P. 119-129.

79. Lee Y.S., Agnes R.S., Badghisi H. et al. Design and synthesis of novel hydrazide-linked bifunctional peptides as delta/mu opioid receptor agonists and CCK-l/CCK-2 receptor antagonists. // J. Med. Chem. 2006. -V. 49.-P. 1773-1780.

80. Li Y., Han J.S. Cholecystokinin-octapeptide antagonizes morphine analgesia in periaqueductal gray of the rat. // Brain Res. 1989. - V. 480. -P. 105-110.

81. Loh H.H., Liu H.C., Cavalli A. et al. mu opioid receptor knockout in mice: effects on ligand-induced analgesia and morphine lethality. // Brain. Res.- 1998.-V. 54.-P. 321-326.

82. Lord A.H., Waterfield A.A., Huges J. et al. Endogenous opioid peptides: multiple agonists and receptors. // Nature. 1977. - V. 267. - P. 495-499.

83. Lu L., Huang M., Ma L., Li J. Different role of cholecystokinin (CCK)-A and (CCK)-B receptors in relapse to morphine dependence in rats. // Behav. Brain. Res. 2001. - V. 120. - P. 105-110.

84. Lucas G.A., Alster P., Brodin E., Wiesenfeld-Hallin Z. Differential release of cholecystokinin by morphine in the spinal cord. // Neurosci. Lett.-1998.-V. 245.-P. 13-16.

85. Maldonado R., Valverde O., Ducos B. et al. Inhibition of morphine withdrawal by the association of RB 101, an inhibitor of enkephalin catabolism, and CCKB antagonist pd-134,308. // Br. J. Pharmacol. 1995. -V. 114.-P. 1031-1039.

86. Mansour A., Fox C.A., Akil H., Watson SJ. Opioid-receptor mRNA expression in the rat CNS: anatomical and functional implications. // Trends Neurosci. 1995. - V. 18. - P. 22-29.

87. Martin W.R., Eades C.G., Tompson J.A. et al. The effects of morphine and nalorphine-like drugs in the nondependent and morphine-dependent chronic spinal dog. // J. Pharmac. Exp. Ther. 1976. - V. 197. - P. 517532.

88. Matthes H.W., Maldonado R., Simonin F. et al. Loss of morphine-induced analgesia, reward effect and withdrawal symptoms in mice lacking the mu-opioid receptor gene. // Nature. 1996. - V. 383. - P. 819-823.

89. McCann B.S, Magee M.S, Broyles F.C. et al. Acute psychological stress and epinephrine infusion in normolipidemic and hyperlipidemic men: effects on plasma lipid and apoprotein concentrations. // Psychosom. Med.- 1995.-V. 57.-P. 165-176.

90. Mestek A., Chen Y, Yu L. Mu opioid receptors: cellular action and tolerance development. // NIDA Res. Monogr. 1996. - V. 161. - P. 104126.

91. Metzler В., Anderton S.M., Manickasingham S.P., Wraith D.C. Kinetics of peptide uptake and tissue distribution following a single dose of peptide. // Immunol. Invest. 2000. - V. 29. - P. 61-70.

92. Meunier J.-C. Nociceptin/orphanin FQ and the opioid receptor-like ORL1 receptor. // Eur. J. Pharmacol. 1997. - V. 340. - P. 1-15.

93. Minami M., Saton S. Molecular biology of opioid receptors: structures, functions and distributions. // Neurosci. Res. 1995. - V. 23. -P.121-145.

94. Mitchell J.M., Basbaum A.I., Fields H.L. A locus and mechanism of action for associative morphine tolerance. // Nat. Neurosci. 2000. - V. 3. -P. 47-53.

95. Mollereau C., Roumy M., Zajac J.M. Opioid-modulating peptides: mechanism of action. // Curr. Top. Med. Chem. 2005. - V. 5. - P. 341355.

96. Moran Т.Н., Robinson P., Goldrich M.C., McHugh P. Two brain CCK-receptors: Implications for behavioral actions. // Brain Res. 1986. -V. 362.-P. 175-179.

97. Moskowitz A.S., Terman G.W., Carter K.R.et al. Analgesic, locomotor and lethal effects of morphine in the mouse: strain comparisons. // Brain Res. 1985. - V. 361. - P. 46-51

98. Motta V., Brando M.L. Aversive and antiaversive effects of morphine in the dorsal periaqueductal grey of rats submitted to the elevated plus-maze test. // Pharmacol. Biochem. Behav. 1993. - V.44. - P. 119-125.

99. Moyse E., Marcel D., Leonard K., Beaudet A. Electron microscopic distribution of mu opioid receptors on noradrenergic neurons of the locus coeruleus. // Eur. J. Neurosci. 1997. -V. 9. - P. 128-139.

100. Юб.Мипго G., Pumford K.M., Russell J.A. Altered cholecystokinin binding site density in the supraoptic nucleus of morphine-tolerante and dependent rats. // Brain Res. 1998. V. 780. - P. 190-198.

101. Nestler EJ. Molecular basis of long-term plasticity underlying addiction. // Nat. Rev. Neurosci. 2001. - V. 2. - P. 119-128.

102. Nitsche J.F., Schuller A.G., King M.A. et al. Genetic dissociation of opiate tolerance and physical dependence in 5-opioid receptor-1 and preproenkephalin knock-out mice. // J. Neurosci. 2002. - V. 22. - P. 10906-10913.

103. Noble F., Derrien M., Rogues B.P. Modulation of opioid antinociception by CCK at the supraspinal level: evidence of regulatory mechanisms between CCK and enkephalin systems in the control of pain. //Br. J. Pharmacol. 1993. -V. 109. - P. 1064-1070.

104. Noble F., Cox B.M. The role of dopaminergic systems in opioid receptor desensitisation in Nucleus Accumbens and Caudate Putamen of rat after chronic morphine treatment. // J. Pharmacol. Exp.Ther. 1997. -V. 83.-P. 557-565.

105. Nutt DJ. Addiction: brain mechanisms and their treatment implications. // Lancet. 1996. - V. 347. - P. 31-36.

106. Okubo Т., Harada S. Polymorphism of the CCK, CCRAR and CCKB genes: an association with alcoholism study. // J. Stud. Alcohol. 2001. -V. 62.-P. 413-421.

107. Onali P., Olianas M.C. Naturally occurring opioid receptor agonists stimulate adenylate cyclase activity in rat olfactory bulb. // Mol. Pharmacol. -1991. V.39. - P. 436-441.

108. Pan Y.X., Xu J., Bolan J. et al. Identification and characterization of three new alternatively spliced ji-opioid receptor isoforms. // Mol. Pharmacol. 1999. -V. 56. P. 396-403.

109. Patel S. , Chapman K.L., Heald A. et al. Measurement of central nervous system activity of systemically administrated CCKB receptor antagonists by ex in vivo binding. // Eur. J. Pharmacol. 1994. - V. 252. -P. 237-244.

110. Pert C.B., Snyder S.H. Opiate receptor binding of agonists and antagonists affected differentially by sodium. // Mol. Pharm. 1973. - V. 10. - P. 868-879.

111. Pietrowsky R., Classen L., Frercks H., Felm H.L., Bom J. Time course of intranasally administred cholecystokinin-8 on central nervous effects. //Neuropsychobiology. 2001. - V. 43. - P. 254-259.

112. Pommier В., Beslot F., Simon A. et al. Deletion of CCK2 receptor in mice results in an upregulation of the endogenous opioid system. // J. Neurosci. 2002. - V. 22. - P. 2001-2011.

113. Rady J.J, Holmes B.B., Tseng L.F., Fujimoto J.M. Inverse agonist action of Leu-enkephalin at S2-opioid receptor mediates spinal analgesia.// J. Pharmacol Exp. Ther. 2001. - V. 297. - P.582-589.

114. Ravovska N. Cholecystokinin- GABA intractions in rat striatum. // Neuropeptides. 1995. - V. 29. - P. 257-262.

115. Raynor К., Kong H., Chen Y. et al. Pharmacological characterization of the cloned kappa-, delta- and mu- opioid receptors. // Mol. Pharmacol. -1994.-V. 45.-P. 330-334.

116. Rehfeld J.F., Hansen H.F., Marley P.D., Stengaard-Pedersen K. // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1985. - V. 448. - P. 11-23.

117. Reisiline Т., Bell G.I. Molecular biology of opioid receptors. // Trends. Neurosci. 1993. - V. 16. - P. 506-510.

118. Rezayat M., Oreizi S., Zarrindast M.R. Caerulein may potentiate morphine-induced antinociception by cholecystokinin-A and/or cholecystokinin-B receptor mechanisms. // Gen. Pharmacol. 1997. - V. 28. - P. 337-340.

119. Roerig S.C., Williams C.L., Hruby V.J. et al. Inhibition of adenylyl cyclase activity by the cholecystokinin analog SNF 9007 in neuroblastoma glioma NG108-15 hybrid cells. // Regul. Pept. 1996. - V. 61. - P. 51-56.

120. Rose C., Vargas F., Facchinetti P. et al. Characterization and inhibition of cholecystokinin -inactivating serine peptidase. // Nature. -1996.-V.380.-P. 403-409.

121. Rossi G.C., Su W., Levental L. et al. Antisense mapping delta 1 opioid receptor in mice: further support for delta receptor subtypes. // Brain Res. 1997. - V. 753. - P. 176-179.

122. Rozengurt E. Gastrointestinal peptide signaling through tyrosine phosphorylation of focal adhesion proteins. // Am. J. Physiol. 1998. - V. 275.-P. 177-182.

123. Runkorg K., Veraksits A., Kurrinkoff K. et al. Distinct changes in the behavioural effects of morphine and naloxone in CCK2 receptor-deficient mice. // Behavioural Brain Research. 2003. - V. 144. - P. 125-135.

124. Schulz S., Schreff M., Koch T. et al. // Immunolocalization of two mu-opioid receptor isoforms (MORI and MOR1B) in the rats central nervous system. // Neuroscience. 1998. - V. 82. - P.613-622.

125. Self D.W., Terwilliger R.L., Nestler E.J., Stein L. Inactivation of G(i) and G(o) proteins in nucleus accumbens reduces both cocaine and heroin reinforcement. //J. Neurosci. 1994. - V.14. - P.6239-6247.

126. Self D.W., McClenahan A.W., Beitner-Johnson D. et al. Biochemical adaptations in the mesolimbic dopamine system in response to heroin self-administration. // Synapse. 1995. - V.21. P. 312-318.

127. Shuster S.J, Rield M., Li X. et al. Stimulus-dependent translocation of к opioid receptors to the plasma membrane. // J. Neurosci. 1999. - V.19. -P. 2658-2664.

128. Simon E.J., Hiller J.M., Groth J., Edelman I. Further properties of stereospecific opiate binding sites in rat brain: on the nature of the sodium effect. //J. Pharmacol. Exp. Ther. 1975. - V. 192. - P. 531-537.

129. Singh V.K., Bajpai K., Biswas S. et al. Molecular biology of opioid receptors: recent advances. // Neuroimmunomodulation. 1997. - V.4. -P.285-297.

130. Smadja C., Maldonado R., Turcaud S. et al. Opposite role of CCKA receptors in the modulation of endogenous enkephalin antidepressant-like effects. // Psychopharmacology. -1995. V. 120. P. 400-408.

131. Smeets R.L., Fouraux M.A., Pouwels W. et al. Mutational analysis of the potential phosphorylation sites for protein kinase С on the CCK (A) receptor. / Br. J. Pharmacol. 1998. - V. 124. - P. 935-945.

132. Smeets R.L., Fouraux M.A., van Emst-de Vries S.E. et al. Protein kinase C-mediated inhibition of transmembrane signalling through CCK(A) and CCK(B) receptors. //Br. J. Pharmacol. 1998. - V. 123 - P. 1189-1197.

133. Stanfa L, Dickenson A, Xu XJ, Wiesenfeld-Hallin Z. Cholecystokinin and morphine analgesia: variations on a theme. // Trends Pharmacol. Sci. -1994.-V. 15-.P. 65-66.

134. Stefano G.B., Liu Y., Goligorsky M.S. Cannabinoid receptors are coupled to nitric oxide release in invertebrate immunocytes, microglia, and human monocytes. // J. Biol. Chem. 1996. - V. 271. - P. 19238-42.

135. Suberg S.N., Culhane E.S., Carstens E., Watkins L.R. The potentiation of morphine-induced inhibition of spinal transmission by proglumide, a putative cholecystokinin antagonist. // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1985.-V. 448.-P. 660-662.

136. Suzuki Т., Kishimoto Y., Ozaki S., Narita M. Mechanism of opioid dependence and interaction between opioid receptors. // Eur. J. Pain. -2001.-V. 5.-P. 63-65.

137. Taylor F., Dickenson A. Nociceptin/orphanin FQ. A new opioid, a new analgesic? // Neuroreport. 1998. -V. 9. - P. R65-67.

138. Tsuda M., Suzuki Т., Misawa M., Nagase H. Involvement of the opioid system in the anxiolytic effect of diazepam in mice. // Eur. J. Pharmacol. 1996. - V. 307. - P. 7-14.

139. Tsubokawa Т., Katayama Y., Ueno Y., Moriyasu N. Evidence for involvement of the frontal cortex in pain-related cerebral events in cats: increase in local cerebral blood flow by noxious stimuli. // Brain Res. -1981.-V. 217.-P. 179-185.

140. Ueda H., Yamaguchi Т., Tokuyama S. et al. Partial loss of tolerance liability to morphine analgesia in mice lacking the nociceptin receptor gene. // Neurosci. Lett. 1997. - V.237. - P. 136-138.

141. Valverde O., Fournie-Zaluski M.C., Roques B.P., Maldonado R. The CCKB antagonist PD-134,308 facilitates rewarding effects of endogenous enkephalins but does not induce place preference in rats. // Psychopharmacology -. 1996. -V. 123. P. 119-126.

142. Valverde O., Roques B.P. Cholecystokinin modulate the aversive component of morphine withdrawal syndrome in rats. // Neuroscience Letters. 1998. - V. 244. - P. 37-40.

143. Vassar E., Harro J., Pold A. et al. Differential involvement of CCKA and CCKB receptor in the regulation of locomotory activity in mice. // Psychopharmacology.- 1991.- V. 105.-P. 393-399.

144. Vigano D., Rubino Т., Di Chiara G. et al. Mu opioid receptor signaling in morphine sensitization. // Neuroscitnce. 2003. - V. 117. - P. 921-929.

145. Wang X. M., Zhou Y., Spangler R. et al. Acute intermittent morphine increases preprodynorphin and kappa opioid receptor mRNA levels in the rat brain. // Brain Res. 1999. - V. 66. - P. 184-187.

146. Wank S.A. Cholecystokinin receptors. // Am. J. Phisiol. 1995. - V. 269. - P. 628-646.

147. Watkins L.R., Kinscheck I.B., Kaufmann E.F. et al. Cholecystokinin antagonists selectively potentiate analgesia induced by endogenous opiates. //BrainRes. 1985. - V. 327. - P. 181-190.

148. Wiertelak E.P., Maier S.F. Watkins L.R. Cholecystokinin antianalgesia: safety cues abolish morphine analgesia. // Science. 1992. -V. 256.-P. 830-833.

149. Wiesenfeld-Hallin Z., de Arauja Lucas G., Alster P. et al. Cholecystokinin/opioid interaction. // Brain Res. 1999. - V. 848. - P. 7889.

150. Williams J.T., Christie M.J., Manzoni О. C., et al. Opposite role of CCKA receptors in the modulation of endogenous enkephalin antidepressant-like effects. // Psychopharmacology. -1995. V. 120. P. 400-408.

151. Williams C.L., Rosenfeld G.C., Burks T.F. Cholecystokinin-induced antinociception is not blocked by CCK-A or CCK-B receptor antagonists. //Peptides. 1997.- V. 18.-P. 409-414.

152. Williams J.T., Christie M. J., Manzoni О. C. Cellular and Synaptic adaptation mediating opioid dependence. // Physiol. Rev. 2001. - V. 81. -P. 299-343.

153. Wong C.S., Cherng C.H., Zuk H. et al. // Eur. J. Pharmacol. 1996. -V. 297. - P.27-33.

154. Woodruff G.N., Hill D.R., Boden P. et al. Functional role of brain CCK receptors. //Neuropeptides. -1991. V. 19. - P. 45-56.

155. Xu W., Ozdener F., Li J.G. et al. Functional role of the spatial proximity of Aspl 14(2.50) in TMH 2 and Asn332(7.49) in TMH 7 of the mu opioid receptor. // FEBS Lett. 1999. - V. 447. - P. 318-324.

156. Yaksh T.L., Furui Т., Kanawati I.S. et al. Release of cholecystokinin from cerebral cortex in vivo: role of GABA and glutamate receptor systems. // Brain Res. 1987. - V. 406. - P. 207-214.

157. Zarrindast M.R., Malekzadeh A., Rezayat M., Ghazi-Khansari M. Effects of cholecystokinin receptor agonist and antagonists on morphine dependence in mice. // Pharmacol. Toxicol. 1995. - V. 77. - P. 360-364.

158. Zarrindast M.R., Zabihi A., Rezayat M. et al. Effects of caerulein and CCK antagonists on tolerance induced to morphine antinociception in mice. // Pharmacol. Biochem. Behav. 1997. - V. 58. - P. 173-178.

159. Zhang L., Wang X., Han J. Modification of opioid receptors and uncoupling of receptors from G proteins as possible mechanisms underlying suppression of opioid binding by cholecystokinin octapeptide. // Clin. Med. Sci. J. 1993. - V.8. - P. 1-4.