Влияние адаптации к теплу на апоптоз в тимусе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.16, кандидат биологических наук Круглов, Сергей Васильевич

• Круглов, Сергей Васильевич
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Круглов, Сергей Васильевич

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Тимус и его функции.

1.1.1 физиологическая функция тимуса.

1.1.2 Тимус и стрессорные факторы среды.

1.2 Лпоптоз.

1.3 Апоптоз в иммунной системе.

1.4 Влияние IISP 70 на апоптоз.

1.5 Влияние NO на апоптоз.

1.6 Влияние высокой температуры на организм.

1.7 Адаптация к теплу.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние адаптации к теплу на апоптоз в тимусе»

Актуальность проблемы

Исследования последних лет показали, что апоптозу принадлежит ключевая роль в реализации ряда физиологических процессов, особенно связанных с поддержанием клеточного гомеостаза и с развитием организма. Нарушение механизмов, участвующих в реализации или контроле апоптоза может стать причиной многих заболеваний. Эти заболевания могут быть обусловлены как ослаблением, так и усилением апоптоза. В случае нарушений, приводящих к ослаблению апоптоза, могут развиваться аутоиммунные заболевания, такие как системная красная волчанка. Ослабление апоптоза способствует также развитию злокачественных опухолей. С усилением апоптоза коррелируют такие заболевания как токсичные гепатиты, болезнь Альцгеймера, инфаркт миокарда, СПИД и др.

При изучении апоптоза было выявлено, что истощение и ускоренная инволюция лимфоидных органов при действии сильных или длительных стрессорных факторов происходит вследствие усиления апоптоза, вызванного этими факторами. В первую очередь это касается главного органа лимфотворения вилочковой железы. (Cohen J.J., 1992). В экспериментах показано, что к индукции апоптоза в тимусе приводят различные стрессоры, такие как иммобилизационный стресс (Hatanaka К., et al 2001.), сепсис ( Ayala A., et al 1996) и гипертермия ( Khan V.R. 2002).

Среди различных стрессорных факторов особое место занимает гипертермия. Повышение температуры может быть вызвано как внешними, например, при длительном нахождении организма в условиях повышенной температуры, так и внутренними факторами, например, при иммунной реакции, когда гипертермия опосредована деятельностью лимфоцитов. При этом с одной стороны, значительное повышение температуры, как и любой другой достаточно сильный стрессор, вызывает стресс-реакцию, увеличивает концентрацию кортикостероидов и катехоламинов в крови (Brenner I., 1998) и, как следствие, создает возможность развития апоптоза в органах иммунной системы. С другой стороны, гипертермия приводит к внутриклеточным повреждениям и в этом случае также способствует индукции апоптоза.

Для профилактики и коррекции стрессорных повреждений и заболеваний, имеющих в своей основе стрессорный компонент, используют адаптацию к различным факторам окружающей среды. Например, адаптацию к периодической гипобарической гипоксии используют для профилактики и лечения патологических состояний, в патогенезе которых присутствует стрессорный компонент. К таким заболеваниям относятся нарушения функции иммунной системы, неврозы, гипертоническая болезнь, параноидальные формы шизофрении и др. (Меерсон Ф.З. и др. 1989; Меерсон Ф.З. 1993; Пшенникова М.Г., 2001). В ряде экспериментальных работ применяли тепловое прекондиционирование (Bolli , 2000) и адаптацию организма к стрессу (Meerson F., et al., 1989).

Исследования последних лет показали, что защитные эффекты адаптации связаны с синтезом защитных стресс-белков группы HSPs (Beckmann R.P., et al., 1990; Malyshev I. et al., 1996). Первоначально считали, что накопление HSPs приводит к повышению теплоустойчивости организма. Однако позднее были получены доказательства того, что HSPs повышают устойчивость организма к различным стрессам: гипоксии, действию тяжелых металлов, оксидативному стрессу, компоненты бактериальных клеток и вирусов и т.д. (Jäättelä M., 1992 Lepore et al., 2001). Главные молекулярные механизмы защитного действия HSPs состоят в дезагрегации аномальных белковых комплексов, утилизации и репарации поврежденных белков, регуляции синтеза белка de novo (Welch D., 1988; Hightower et al., 1994). Важную роль в формировании адаптационной защиты играет оксид азота (NO) (Малышев И.Ю., Манухина Е.Б., 1998). Механизмы действия NO включают антиоксидантное (Siow N. et al., 1999), противовоспалительное действие (Lamas S. et al., 1998) и эффекты, опосредованные продукцией цГМФ (Du Toit et al., 1998). Кроме того, NO способен активировать синтез защитных стрессбелков группы I ISPs (Häuser G.J., et al., 1996; Kim Y.-M., et al., 1999b; Malyshev I. et al., 2000).

И звестно что, I ISP 70 способны регулировать апоптоз, обладая антиапоптотическим действием (Lang et al., 2002; Klein F., Brune, 2002). NO также может выступать в качестве фактора, регулирующего апоптоз. NO в малых и физиологических концентрациях проявляет антиапоптотическое действие (Kim Y. et al., 1999), в больших же дозах оксид азота приводит к индукции апоптоза (Murphy М., 1999.; Dimmeier S., 1997).

Таким образом, имеющиеся данные наводят на мысль о возможности антиапоптотического действия адаптации и участии в этом процессе I ISPs и

NO, так как оба эти вещества синтезируются в процессе адаптации к разным « факторам (Меерсон Ф.З. и др., 1994; Манухина Е.Б. и др., 1996; Kuroshima, 1995; Meerson F., Malyshev I., 1993) и в тоже время способны регулировать апоптоз. Вместе с тем влияние адаптации на ключевой механизм апоптоза -каскадную активацию каспаз — не изучалось. Соответственно, возможность потенциально эффективного использования адаптации для предупреждения и коррекции стресс-индуцированных нарушений иммунологических функций тимуса не оценивалось.

В соответствии с вышеизложенным, цель настоящего исследования состояла в изучении возможности адаптационной защиты клеток тимуса от индуцированного тепловым шоком апоптоза и исследовании молекулярных механизмов, вовлеченных в развитие такой защиты.

В рамках поставленной цели решались следующие основные задачи:

1. Изучить пути активации апоптоза при тепловом шоке.

2. Изучить влияние адаптации к теплу на индуцированный тепловым шоком апоптоз в тимусе.

3. Изучить роль белков теплового шока в молекулярных механизмах антиапоптотического эффекта адаптации к теплу путем оценки f влияния адаптации на синтез Hsp70 и влияния ингибитора синтеза I ISPs на развитие защитных эффектов адаптации

4. Изучить роль N0 в молекулярных механизмах антиапоптотического эффекта адаптации к теплу путем оценки влияния адаптации на синтез N0 и влияния ингибитора N0-синтазы на развитие защитных эффектов адаптации

5. Оценить возможность перекрестного антиапоптотического эффекта адаптации к теплу при сепсис и стресс - индуцированном апоптозе в тимусе.

6. Выявить генетическую детерминированность эффекта адаптации к теплу.

Научная новизна исследования определяется следующими основными результатами.

Тепловой шок приводит к активации эффекторных каспаз 3 и 6 и инициаторных каспаз 8 и 9 в клетках тимуса. При этом активность каспазы 9, вызванная тепловым шоком, выше, чем активность каспазы 8. Это свидетельствует о том, что апоптоз, индуцированный тепловым шоком, развивается в большей степени по митохондриальному пути, чем по рецептор зависимому пути.

Впервые показано, что дозированная адаптация крыс к теплу защищает клетки тимуса от индуцированного тепловым шоком апоптоза. Защитный эффект проявляется в снижении уровня активности инициаторных и эффекторных каспаз.

Впервые показано, что накопление Нзр70 в клетках тимуса в процессе адаптации сопровождается снижением активности каспаз 3, 8 ^9,

V ( индуцированной тепловым шоком. Введение ингибитора синтеза белков теплового шока приводит к устранению адаптационного накопления 11зр70 и потенцированию активности эффекторной каспазы 3 и инициаторной каспазы 9, но не каспаз 8 индуцированной тепловым шоком.

Впервые доказано, что N0 вносит вклад в формирование защитного эффекта адаптации к теплу. При этом ограничение активности эффекторных каспаз происходит как за счет действия самого N0, так и за счет активации механизмов, связанных с накоплением ШР 70. Это подтверждается тем, что ингибитор 1ЧО-синтазы, ограничивая гиперпродукцию N0, уменьшает активность каспазы 3 при тепловом шоке. Вместе с тем ингибитор N0-синтазы отменяет эффект адаптивного ограничения индукции Н5Р70 и адаптационное ограничение индуцированной тепловым шоком активности каспазы 3. Впервые показано, что адаптация к теплу ограничивает индуцированную эмоциональным стрессом и липополисахаридом (ЛПС) активность каспазы 3.

Теоретическое значение работы состоит в том, что в ней впервые продемонстрирована возможность формирования адаптационной защиты клеток тимуса от повреждающих воздействий стрессоров. Продемонстрирована избирательность пути активации апоптоза при действии на организм гипертермии. Раскрыта роль N0 и ШР 70 в защитных эффектах адаптации клеток тимуса от апоптоза индуцированного тепловым шоком. Доказано, что адаптация к теплу обладает перекрестным антиапоптотическим эффектом.

Практическое значение работы состоит в том, что в ней продемонстрирована возможность предупреждения гибели клеток иммунной системы с помощью адаптации к теплу. Это позволяет обосновать возможность применения адаптации к теплу при заболеваниях, связанных с вторичными иммунодефицитами.

Положения, выносимые на защиту:

1. Индукция апоптоза в тимусе при тепловом шоке развивается преимущественно по митохондрий-зависимому пути.

2. Адаптация организма к теплу эффективно защищает тимус от апоптоза, индуцированного тепловым шоком.

3. Молекулярные механизмы адаптации, опосредованные действием НБР и N0, вовлечены в антиапоптотический эффект адаптации к теплу.

4. Адаптация к теплу обладает перекрестным эффектом, защищая от апоптоза вызванного другими стрессорными факторами.

Апробация работы. Основные результаты проведенных исследований были доложены на межлабораторном семинаре Отдела адаптационной медицины НИИ ОПП (Москва, 2004), II международной научно-практической конференции «Дисфункции эндотелия» (Витебск, 2001), на XXI международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации» (Москва,2003), 7-м международном конгрессе Международного общества адаптационной медицины (Сан Диего, США, 2003).

Заключение диссертации по теме «Патологическая физиология», Круглов, Сергей Васильевич

выводы

1. Предварительная адаптация к теплу снижает гибель животных, как во время, так и в последующие 24 ч после теплового шока, защищает от падения артериального давления и ограничивает вызванное тепловым шоком снижение массы тимуса.

2. При тепловом шоке у крыс Вистар в тимусе происходит индукция как инициаторных каспаз 8 и 9, так и эффекторных каспаз 3 и 6. При этом, тепловой шок в большей степени активирует каспазу 9, опосредующую митохондрия-зависимый путь активации апоптоза, а среди эффекторных — каспазу 3.

3. Предварительная адаптация крыс Вистар к теплу в равной степени ограничивает индуцированную тепловым шоком активность инициаторных (8 и 9) и эффекторных (3 и 6) каспаз.

4. Ингибитор синтеза белков теплового шока Н$Р70 кверцетин увеличивает индуцированную тепловым шоком активность эффекторной каспазы 3 в тимусе адаптированных крыс Вистар. Это указывает на важную роль, которую играют Н$Р70 в антиапоптотических механизмах адаптации к теплу.

5. Ингибитор синтеза N0 Ь-ЫЫА ограничивает синтез Н5Р70 и увеличивает индуцированную тепловым шоком активность каспазы 3 у адаптированных к теплу животных. Следовательно, N0 вовлечен в механизмы антиапоптотического действия адаптации к теплу. При этом один из механизмов антиапоптотического действия N0 связан с активацией синтеза П5Р70.

6. Предварительная адаптация крыс Вистар к теплу снижает в тимусе активность каспазы 3, индуцированную липополисахаридом, но не влияет на увеличение активности каспазы 3 после эмоционального стресса. Таким образом, адаптация крыс Вистар к теплу обладает избирательным перекрестным антиапоптотическим эффектом.

7. При сопоставлении крыс линии Вистар с крысами линии Август показано, что адаптация крыс линии Август к теплу, в отличие от крыс линии Вистар, снижет активность каспазы 3, индуцированную эмоциональным стрессом. Таким образом, защитные эффекты адаптации к теплу при стресс-индуцированном апоптозе являются генетически детерминированными.

Заключение

Таким образом, в настоящее время, широко продемонстрировано повреждающее действие гипертермии на иммунную систему, особенно на главный орган лимфопоэза - тимус, посредством активации апоптоза. Для повышения устойчивости организма к острому тепловому воздействию применяют предварительную адаптацию к неповреждающим тепловым воздействиям. Однако возможность адаптационной защиты тимуса при индукции тепловым шоком апоптоза в его клетках до настоящего момента не изучалась, также как не изучалось влияние адаптации на ключевой механизм апоптоза - каскадную активацию каспаз. Соответственно, возможность потенциально эффективного использования адаптации для предупреждения и коррекции иммунологических стресс-индуцированных нарушений не оценивалась. Для изучения такой возможности, необходима разработка адекватной модели адаптации к теплу с последующим анализом влияния такой адаптации на способность организма противостоять апоптотической гибели тимоцитов.

Известно, что в процессе реализации апоптотической программы важную роль играют N0 и IISPs. Вместе с тем NO и I ISPs являются основными медиаторами развития адаптационной защиты в условиях организма, в частности при адаптации к теплу (Malyshev et al., 2000), это косвенно подтверждает возможность антиапоптотического действия адаптации. Однако для докозательства этого предположения необходимо изучить влияния адаптации к теплу на синтез N0 и IISPs и участие этих агентов в развитии защитного эффекта адаптации.

В связи со всем этим были определены следующие задачи работы:

1. Изучить пути активации апоптоза при тепловом шоке.

2. Изучить влияние адаптации к теплу на индуцированный тепловым шоком апоптоз в тимусе.

3. Изучить роль белков теплового шока в молекулярных механизмах антиапоптотического эффекта адаптации к теплу путем оценки влияния адаптации на синтез Hsp70 и влияния ингибитора синтеза I ISPs на развитие защитных эффектов адаптации

4. Изучить роль N0 в молекулярных механизмах антиапоптотического эффекта адаптации к теплу путем оценки влияния адаптации на синтез N0 и влияния ингибитора N0-синтазы на развитие защитных эффектов адаптации

5. Оценить возможность перекрестного антиапоптотического эффекта адаптации к теплу при сепсис и стресс индуцированном апоптозе в тимусе.

6. Выявить генетическую детерминированность эффекта адаптации к теплу.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ II МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Круглов, Сергей Васильевич, 2005 год

1. Горизонтов П.Д., Белоусова О.И., Федотова М.И. Стресс и система крови.- М: Медицина, 1983. 293 с.

2. Гурин В.П., Турин A.B. Терморегуляция и биологически активные вещества крови. Минск: «Бизнесофсет», 2004. - 216 с.

3. Игнатьева Г.А. Актуальные проблемы патофизиологии: Избранные лекции. Под ред. Мороза Б.Б. М.: Медицина, 2001. - 424 с.

4. Карлыев K.M. Адаптация к высокой температуре. // Физиология адаптационных процессов. Ред. О.Г.Газенко, Ф.З.Меерсон. М., Наука.-1986.-С. 305-371.

5. Малышев И.Ю., Манухина Е.Б. Стресс, адаптация и оксид азота. // Биохимия, 1998. - Т.63.- №7 - С. 992-1006.

6. Малышев И.Ю., Малышева Е.В. Белки теплового шока и защита сердца. // Бюл.экспер. биол. и мед.- 1998.- Т. 126.- № 12.- С. 604-611.

7. Манухина Е.Б., Малышев И.Ю., Микоян В.Д., Кубрина Л.Н., Ванин А.Ф., Увеличение продукции оксида азота в органах крысы при тепловом шоке. // Бюл. экспер. биол. и мед. 1996а. - Т. 121.- № 5. - С. 520-523.

8. Манухина Е.Б., Азаматов 3.3., Малышев И.Ю. Влияние теплового шока на эндотелийопосредованные реакции изолированной аорты крысы. // Бюл. экспер. биол. и мед. 1996в. - Т. 122, № 8. - С. 148-151.

9. Меерсон Ф.З. Концепция долговременной адаптации. // М.: Дело. -1993. -138 с.

10. И.Меерсон Ф.З., Малышев И.Ю. Феномен адаптационной стабилизации структур и защита сердца. М.: Наука, 1993. - 158 с.

11. И.Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г. Адаптация к стрессорным ситуациям и физическим нагрузкам. М.: Медицина, 1988. 256 с.

12. Монастырская Е.М., Дучен М.Р., Андреева Л.В., Виегант Ф., Манухина Е.Б., Малышев И.Ю. Антиапоптотический эффект адаптации к теплу в культуре клеток.// Бюл. экспер. биол. и мед. 2003 2 143-146

13. Пшенникова М.Г. Врожденная эффективность стресс-лимитирующих систем, как фактор устойчивости к стрессорным повреждениям.// Успехи физиол. Наук. 2003. - Т.34 - № 3 - С.55-67

14. Смирин Б.В., Покидышев Д.А., Малышев И.Ю., Ванин А.Ф., Манухина Е.Б. Депонирование оксида азота как фактор адаптационной защиты. // Российский физиол. журнал им. И.М.Сеченова 2000. - №4. - С. 447-454.

15. Ярилин A.A. Апоптоз: природа феномена и его роль в норме и при патологии. //Актуальные проблемы патофизиологии (избранные лекции). Под редакцией Б.Б. Мороз. М. Медицина. - 2001. - С. 13-52.

16. Ярилин A.A. Основы иммунологии. М.: Медицина, 1999. - 607 с.

17. Albina J.Е., Cui S., Mateo R.B., Reichner J.S. Nitric oxide-mediated apoptosis in murine peritoneal macrophages. // J. Immunol. 1993. -V.150. - P.5080-5085.

18. Alzeer A., Al-Arifi A., Warsy A.S., Ansari Z., Zhang H., Vincent J.-L. Nitric oxide production is enhanced in patients with heat stroke. // Intensive Care Med.- 1999.- V. 25-P.58-62.

19. Arai Y, Kondo T, Tanabe K, Zhao QL, Li FJ, Ogawa R, Li M, Kasuya M Enhancement of hyperthermia-induced apoptosis by local anesthetics on human, histiocytic lymphoma U937 cells. J Biol Chem. 2002. - May 24;277(21). -P.18986-93.

20. Assreuy J., Cunha F.Q., Liew F.Y., Moncada S. Feedback inhibition of nitric oxide synthase activity by nitric oxide. // Br. J. Pharmacol. 1993. - V.108. -P.833-837.

21. Beckmann R.P., Mizzen L.A., Welch W.J. Interaction of Hsp 70 with newly synthesized proteins: implications for protein folding and assembly. // Science -1990 V.248 - P.850-854.

22. Beere H.M., Green D.R. Stress management heat shock protein-70 and the regulation of apoptosis. // Trends Cell Biol. - 2001. - V. 11. - P.6-10.

23. Benjamin I.J., McMillan D.R. Stress (heat shock) proteins. Molecular chaperones in cardiovascular biology and disease. // Circ. Res. 1998. - V.83. - P.l 17-132.

24. Binder C, Schulz M, Hiddemann W, Oellerich M Caspase-activation and induction of inducible nitric oxide-synthase during TNF alpha-triggered apoptosis. Anticancer Res 1999 - May-Jun 19 - P. 1715-20

25. Bodey B, Bodey B Jr, Kaiser HE. Apoptosis in the mammalian thymus during normal histogenesis and under various in vitro and in vivo experimental conditions. In Vivo. 1998 - Jan-Feb; 12(1)- P. 123-33

26. Bornfeldt K.E. Stressing Rac, Ras and downstream heat shock protein 70. // Circ, Res.- 2000.- V. 86.- P. 1101-1103.

27. Bouchama A., Bridey F., Hammami M.M., Lacombe C., al-Shail E., al-Ohali Y., Combe F., al-Sedairy S., de Prost D. Activation of coagulation and fibrinolysis in heatstroke. // Thromb. Haemost. 1996. - V. 76. - P.909-915.

28. Brive L., Takayama S., Briknarova K., Homma S., Ishida S.K., Reed J.C., Ely K.R. The carboxyl-terminal lobe of Hsc70 ATPase domain is sufficient for binding to BAG1. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001. - V.289. -P. 1099-1105.

29. Buzzard K.A., Giaccia A.J., Killender M., Anderson R.L. Heat shock protein 72 modulates pathways of stress-indused apoptosis. J.Biol.Chem. 1998. -V. 273 - P. 17147-17153.

30. Caron AW, Mosser DD Bourget L. et al. // Mol. Cell. Biol. 1997. - Vol. 17, N. 9.-P.5317-5327

31. Chen HW, Hsu C, Lue SI, Yang RC Attenuation of sepsis-induced apoptosis by heat shock pretreatment in rats. Cell Stress Chaperones. 2000 - Jul;5(3) -P. 188-95

32. Chi S., Mestril R. Stable expression of a human HSP70 gene in a rat myogenic cell line confers protection against endotoxin. // Am. J. Physiol. 1996. -V.270. - P. 1017-1021.

33. Cikala M., Wilm B., Hobmayer E., Bottger A., David C.N. Identification of caspases and apoptosis in the simple metazoan Hydra. // Curr. Biol. 1999. -V.9. - P.959-962.

34. Cohen J.J. // Sem. Immunol. 1992. - Vol. 4. - P.363-369.

35. Devries A.C., Gerber J.M., Richardson H.N., et al. Stress affects corticoteroid and immunoglobulin concentrations in male house mice ( Mus musculus) and prairie voles (Microtus ochrogaster) Compar. Biochemistry and Physiol. 1997 -V.118-P. 655-663

36. Dieing A, Ahlers O, Kerner T, Wust P, Felix R, Löffel J, Riess H, Hildebrandt B. Whole body hyperthermia induces apoptosis in subpopulations of blood lymphocytes. Immunobiology. 2003 - V207(4) - P.265-73.

37. Dimmeler S., Zeiher A.M. Nitric oxide and apoptosis: another paradigm for the double-edged role of nitric oxide. //Nitric Oxide. 1997. - V.l. - P.275-281.

38. Ding X.Z., Fernandez-Prada C.M., Bhattacharjee A.K., Hoover D.L. Overexpression of hsp-70 inhibits bacterial lipopolysaccharide-induced production of cytokines in human monocyte-derived macrophages. // Cytokine. 2001. -V.16. - P.210-219.

39. Earnshaw W.C., Martins L.M., Kaufmann S.H. Mammalian caspases: structure, ' activation, substrates and functions during apoptosis. // Annu. Rev. Biochem.1999. V.68. - P.383-424.

40. Foresti R., Sarathchandra P., Clark J.B., Green C.G., Motterlini R., Peroxynitrite induces haem oxygenase-1 in vascular endothelial cells: a link to apoptosis. It Biochem. J. 1999. - V.339. - P.729-736.

41. Garrido C., Gurbuxani S., Ravagnan L., Kroemer G. Heat shock proteins: Endogenous modulators of apoptotic cell death.//Bioch. And Biophys. Resea. Commun. 2001 - V.286. - P.433-442.

42. Genaro A.M., Hortelano S., Alvarez A., Martinez C., Bosca L. Splenic B lymphocyte programmed cell death is prevented by nitric oxide release throughmechanisms involving sustained Bcl-2 levels. // J. Clin Invest. 1995. - V.95. - P.1884-1890.

43. Haendler J., Zeiher A.M., Dimmeler S. Nitric oxide and apoptosis. // Vitamines and I lormones. 1999. - V.57. - P.49-74.

44. Hall D.M., Baumgardner K.R., Oberley T.D., Gisolfi C.V. Splanchnic tissues undergo hypoxic stress during whole body hyperthermia. // Am. J. Physiol. -1999. -V. 276. P.G1195-G1203.

45. Hall D.M., Buettner G.R., Oberley L.W., Xu L., Matthes R.D., Gisolfi C.V. Mechanisms of circulatory and intestinal barrier dysfunction during whole body hyperthermia. // Am. J. Physiol. 2001. - V. 280. - P. H509-H521.

46. Hashimoto T, Shibata MA, Ito Y, Nakao KI, Sasaki S, Otsuki Y. Elevated levels of intracellular Ca2+ and apoptosis in human lung cancer cells given heat-shock. Int J Hyperthermia. 2003 Mar-Apr; 19(2): 178-92.

47. Hatanaka K., Ikedaya H., Takase I., Kobayashi M. Immobilization stress-induced thymocyte apoptosis in rats. Life sci. Jun. 1 69, 2001, 155-165

48. Heinloth A., Brune B., Fischer B., Galle J. Nitric oxide prevents oxidised LDL-induced p53 accumulation, cytochrome c translocation, and apoptosis in macrophages via guanylate cyclase stimulation. // Atherosclerosis. 2002. -V.162. - P.93-101.

49. Helmbrecht K., Zeise E., Rensing L. Chaperones in cell cycle regulation and mitogenic signal transduction: a review. // Cell Prolif.- 2000.- V. 33.- P. 341O365.

50. Hohfeld J., Jentsch S. GrpE-like regulation of the hsc70 chaperone by the anti-apoptotic protein BAG-1. // EMBO J. 1997. - V. 16. - P.6209-6216.

51. Horowitz M. Heat stress and heat acclimation: the cellular response modifier of autonomic control. // In: Integrative and Cellular Aspects of Autonomic Functions, edited by K. Pleschka and R. Gerstberger. London, Libbey. - 1994. - P.87-95.

52. Jaattelá M. Heat shock proteins as cellular lifeguards. Ann. Med. 1999 - v.31 -p. 261-271.

53. Jáattelá M., Wissing D. Heat shock proteins protect cells from monocyte cytotoxity: possible mechanism of self-protection. // J. Exp. Med. 1993. -V.177. - P.231-236.

54. Jakubowicz-Gil J, Rzymowska J, Gawron A. Quercetin, apoptosis, heat shock. Biochem Pharmacol. 2002 - Dec 1 ;64( 11) - P. 1591 -5

55. Jolly C., Morimoto R.I. Role of the heat shock response and molecular chaperones in oncogenesis and cell death. // J. Natl. Cancer Inst. 2000 - V.92 -P. 1564-1570.

56. Kalkstein LS, Greene JS. An evaluation of climate/mortality relationships in large US cities and the possible impacts of a climate change. // Environ Health Perspect.-1997.- V. 105.- P.84-93

57. Kerr J.F., Wyllie A.H., Currie A.R. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics. // Br. J. Cancer. 1972. -V.26. -P. 239-257.

58. Khan V.R., Brown I.R. The effect of hyperthermia on the induction of cell death in brain, testis, and thymus of the adult and developing rat. Cell stress chaperones. v. 7(1) p. 73-90 2002

59. Kim P.K., Kwon Y.G., Chung H.T., Kim Y.-M. Regulation of caspases by nitric oxide. // Ann. N.-Y. Acad. Sei. 2002. - V.962. - P.42-52.

60. Kim Y.-M., Bombeck C.A., Billiar T.R. Nitric oxide as a bifunctional regulator of apoptosis. // Circ. Res. 1999a. - V.84. - P.253-256.

61. Kim Y.-M., Kim'T.H., Seol D.W., Talanian R.V., Billiar T.R. Nitric oxide supression of apoptosis occurs in association with an inhibition of Bcl-2 cleavage and cytochrome c release. // J. Biol. Chem. 1998. - V.273. -P.31437-31441.

62. Klein S.D., Brune B. Heat-shock protein 70 attenuates nitric oxide-induced apoptosis in RAW macrophages by preventing cytochrome c release. // Biochem. J. 2002. - V.362. - P.635-641.

63. Kluger M.J., Rudolph K., Soszynski D., Conn C.A., Leon L.R., Kozak W., Wallen E.S., Moseley P.L. Effect of heat stress on LPS-induced fever and tumor necrosis factor. // Am. J. Physiol. 1997. - V.273. - P.R858-R863.

64. Kluger M.J., Rudolph K., Soszynski D., Conn C.A., Leon L.R., Kozak W., Wallen E.S., Moseley P.L. Effect of heat stress on LPS-induced fever and tumor necrosis factor. // Am. J. Physiol. 1997. - V.273. - P.R858-R863.

65. Koide N, Sugiyama T, Mu MM, Mori I, Yoshida T, Hamano T, Yokochi T Gamma interferon-induced nitric oxide production in mouse CD5+ Bl-like cell line and its association with apoptotic cell death. Microbiol Immunol 2003 47 p.669-79

66. Kokura S, Yoshida N, Ueda M, Imamoto E, Ishikawa T, Takagi T, Naito Y, Okanoue T, Yoshikawa T. Hyperthermia enhances tumor necrosis factor alpha-induced apoptosis of a human gastric cancer cell line. Cancer Lett. 2003 Nov 10;201(l):89-96.

67. Kroemer G., Zamzami N., Susin N.A. Mitochondrial control of apoptosis. // Immunol. Today. 1997. - V. 18. - P.44-51.

68. Kwong JM, Lam TT, Caprioli J. Hyperthermic pre-conditioning protects retinal neurons from N-methyl-D-aspartate (NMDA)-induced apoptosis in rat. Brain Res. 2003 Apr 25;970(1-2):119-30.

69. Li C.Y., Lee J.S., Ko Y.G., Kim J., Seo G.S. Hsp 70 inhibits apoptosis downstream of cytochrome c release and upstream of caspase-3 activation. J. Biol. Chem. 2000 v.275 25665-25671

70. Li H., Zhu H., Xu C., Yuan J. Cleavage of BID by caspase 8 mediates the mitochondrial damage in the Fas pathway of apoptosis. // Cell. 1998. - V.94. — P.481-490.

71. Li J., BilliarT.R., Talanian R.V., Kim Y.M., Nitric oxide reversibly inhibits seven members of the caspase family via S-nitrosylation. Biochem Biophys Res Commun 1997 Nov 240:419-24

72. Lincoln T.M., Cornwell T.L., Komalavilas P., Boerth N. Cyclic GMP-dependent protein kinase in nitric oxide signalling. // Methods Enzymol. -1996. V.269. - P.149-166.

73. Ma N., Szmitko P., Brade A., Chu I., Lo A., Woodgett J., Klamut H., Liu F.F. Kinase-dead PKB gene therapy combined with hyperthermia for human breast cancer. Cancer Gene Ther. 2004 Jan;l l(l):52-60.

74. Maloyan A., Palman A., Horowitz M. Heat acclimation increases the basal HSP72 level and alters it production dynamics during heat stress. // Am. J. Physiol. 1999. - V.276. - P.1506-1515.

75. Malyshev I.Yu., Bayda L.A., Trifonov A.I., Larionov N.P., Kubrina L.D., Mikoyan V.D., Vanin A.F., Manukhina E.B. Cross-talk between nitric oxide and HSP70 in the antihypotensive effect of adaptation to heat. // Physiol. Res. -2000.-V.49.-V.99-105.

76. Malyshev I.Yu., Malugin A.V., Golubeva L.Yu, Zenina T.A., Manukhina E.B., Mikoyan V.D., Vanin A.F. Nitric oxide donor induces HSP70 accumulation in the heart and in cultured cells. // FEBS Lett. 1996. - V.391. - P.21-23.

77. Malyshev I.Yu., Malugin A.V., Golubeva L.Yu, Zenina T.A., Manukhina E.B., Mikoyan V.D., Vanin A.F. Nitric oxide donor induces HSP70 accumulation in the heart and in cultured cells. // FEBS Lett. 1996. - V.391. - P.21-23.

78. Malyshev I.Yu., Manukhina E.B., Mikoyan V.D., Kubrina L.N., Vanin A.F. Nitric oxide is involved in heat-induced HSP70 accumulation. // FEBS Lett. -1995. V.370. - P.159-162.

79. Malyshev I.Yu., Manukhina E.B., Mikoyan V.D., Kubrina L.N., Vanin A.F. Nitric oxide is involved in heat-induced HSP70 accumulation. // FEBS Lett. -1995.- V.370. P. 159-162.

80. Mannick J.B., Asano K., Izumi K., Kieff E., Stamler J.S. Nitric oxide produced by human B lymphocytes inhibits apoptosis and Epstein-Barr virus reactivation. // Cell. 1994. - V.79. - P.l 137-1146.

81. Marchetti M.C., Di Marco B, Cifone G, Migliorati G, Riccardi C. Dexamethasone-induced apoptosis of thymocytes: role of glucocorticoid receptor-associated Src kinase and caspase-8 activation.Blood. 2003 Jan 15; 101(2): 585-93. Epub 2002 Aug 29.)

82. Matz J.M., Lavoi K.P., Blake M.J. Adrenergic regulation of the heat shock response in brown adipose tissue. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1996. - V.277. -P.1751-1758.

83. McDaniel M.L., Corbett J.A., Kwon G., Hill J.R. A role for nitric oxide and other inflammatory mediators in cytokine-induced pancreatic beta-cell dysfunction and destruction. // Adv. Exp. Med. Biol. 1997. - V.426. - P.313-319.

84. Messmer U.K., Ankarcrona M., Nicotera P., Brune B. p53 Expression in nitric oxide-induced apoptosis. // FEBS Lett. 1994. - V.355. - P.23-26.

85. Migliorati G, Nicoletti I, Crocicchio F, Pagliacci C, D'Adamio F, Riccardi C., I Ieat shock induces apoptosis in mouse thymocytes and protects them from glucocorticoid-induced cell death. // Cell Immunol. 1992 - Sep. 143(2) -p.348-56.

86. Mirkes P.E., Little S.A. Teratogen-induced cell death in postimplantation mouse embryos: differential tissue sensitivity and hallmarks of apoptosis. Cell Death Differ. 1998 JuI;5(7):592-600

87. Mohr S, Zech B, Lapetina EG, Briine BInhibition of caspase-3 by S-nitrosation and oxidation caused by nitric oxide. Biochem Biophys Res Commun 1997 Sep 238:387-91.

88. Morimoto R.I. Cells in stress: transcriptional activation of heat shock genes. // Science. 1993. - V.259. - P.1409-1410.

89. Moseley P.L., Gapen C., Wallen E.S., Walter M.E., Peterson M.W. Thermal stress induces epithelial permeability. // Am. J. Physiol. 1994. - v.267. — p.C425-C434.

90. Mosser D.D., Caron A.W., Bourget L/, Denis-Larose C., Massie B. Role of human heat shock protein hsp70 in protection against stress-induced apoptosis. // Mol. Cell Biol. 1997 - v. 17 - p.5317-5327.

91. Murakami II., Pain D., Blobel G. 70-kD heat shock-related protein is one of at lest two distinct cytosolic factors stimulating protein import into mitochondria. // J. Cell Biol. 1988 - v. 107 - p.2051 -2057.

92. Muzio M., Stock.well B.R., Stennicke H.R., Salvesen G.S., Dixit V.M. An induced proximity model for caspase-8 activation. // J. Biol. Chem. 1998. -v.273. - p.2926-2930.

93. Nagai N., Nakai A., Nagata K. Quercetin suppresses heat shock response by down regulation of HSF1. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. — V.208. - P. 1099-1105.

94. Nicholson D.W., Thornberry N.A. Caspases: killer proteases. // Trends Biochem. Sci. 1997. - V.22. - P.299-306.

95. Nickerson M. Vascular adjustments during the development of shock. // Can. Med. Assoc. J. 1970. - V.103. - P.853-859.

96. Nollen E.A., Brunsting J.F., Roelofsen H., Weber L.A.,Kampinga H.H. In vivo chaperone activity of heat shock protein 70 and thermotolerance. // Mol. Cell Biol. 1999 - v.l 1 - 2069-2079.

97. Nunoshiba T., de Rojas-Walker T., Wishnok J., Tannenbaum S., Demple B. Activation by nitric oxide of an oxidative-stress response that defends Escherichia coli against activated macrophages. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. - V.90. - P.9993-9997.

98. Ohnishi K, Ohnishi T.IIeat-induced p53-dependent signal transduction and its role in hyperthermic cancer therapy. Int J Hyperthermia. 2001 Sep-Oct;17(5):415-27.

99. Okonkwo D.O., Buki A., Siman R., Povlishock J.T. Cyclosporin A limits calcium-induced axonal damage following traumatic brain injury. // Neuroreport. 1999. - V. 10. - P.352-358.

100. Ozoren N, El-Deiry W. Heat shock protects IICT116 and II460 cells from TRAlL-induced apoptosis. Exp Cell Res. 2002 Dec 10;281(2): 175-81.

101. Paidas C.N., Mooney M.L., Theodorakis N.G., De Maio A. Accelerated recovery after endotoxic challenge in heat shock-pretreated mice. // Am. J. Physiol. 2002. - V.282. - P.R1374-R1381.

102. Parcel D.A., Lindquist S. The function of heat shock proteins in stress tolerance: degradation and reactivation of damaged proteins. // Annu. Rev. Genet.- 1993.-V.27- P. 437-496.

103. Park H.S., Lee J., Huh S.H., Seo J.S., Choi E.J. HSP72 functions as a natural inhibitory protein of c-Jun N-terminal Kinase. EMBO J. 2001 - V.20 - P.446-456.

104. Piantelli M, Tatone D, Castrilli G, Savini F, Maggiano N, Larocca LM, Ranelletti FO, Natali PG. Quercetin and tamoxifen sensitize human melanoma cells to hyperthermia. Melanoma Res. 2001 Oct;l l(5):469-76.

105. Rao D.L., Mittal S., Modi G. Meat stroke a probable cause of multiple fetal anomalies. // Indian J. Pediatr. - 1995.-V. 62.- P.493-495.

106. Rao L., Perez D., White E. Lamin proteolysis facilitates nuclear events during apoptosis. 11 J. Cell Biol. 1996. - V.135. - P. 1441-1455.

107. Ravangnan L., Gurbuxani S., Susin S.A., Maisse C., Daugas E., Zamzami N., Mak T., Jaattela M., Penninger J.M., Garrido C., Kroemer G. Heat shock protein antagonizes apoptosis inducing factor. Nat.Cell Biol. 2001

108. RossigL., Fichtlscherer B., Breitschopf K, HaendelerJ, ZeiherAM, Miilsch A, Dimmeler S. Nitric oxide inhibits caspase-3 by S-nitrosation in vivo. J Biol Chem 1999 Mar 274:6823-6

109. Saleh A., Srinivasula S.M., Balkir L., Robbins P.D., AInemri E.S. Negative regulation of the Apaf-1 apoptosome by Hsp70. // Nat. Cell Biol. 2000. - V.2. - P.476-483.

110. Salvino W., Dardcnne M. Neuroendocrine control of thymus physiology Endocrine Reviews 21(4) 412-443 2000

111. Schlesinger M.J., Ashburner M. Ileat-shock: from bacteria to man. // N.Y. Cold Spring Harbor Lab. 1982. - 440 P.Selye II., Syndrome-prodused by diverse nocuous agents.//Natur. - 1936. - V.138.N 3479 - P.32.

112. Semenza J.C. Acute renal failure during heat waves. // Am. J. Prev. Med. -1999. V.17. - P.97.

113. Seo YR, Smith ML, Man SS, Fairbairn DW, O'Neill KL, Ryu JC Mild hyperthermia-induced apoptosis is dependent on p53 in human lymphoid cells. Res Commun Mol Pathol Pharmacol. 1999;104(3):285-92.

114. Shi Y., Thomas J.O. The transport of proteins into the nucleus requires the 70-kilodalton heat shock protein or its cytosolic cognate. // Mol. Cell Biol. — 1992 v. 12 - p.2186-2192.

115. Shiozaki E.N., Chai J., Shi Y. Oligomerization and activation of caspase-9, induced by Apaf-1 CARD. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. - V.99. -P.4197-4202.

116. Simon, HB. Hyperthermia and heatstroke. // Hosp. Pract. 1994. - V.29. -P.65-68.

117. Srinivasula S.M., Ahmad M., Fernandes-Alnemri T., Alnemri E.S. Autoactivation of procaspase-9 by Apaf-1-mediated oligomerization. // Mol. Cell. 1998.- V.1.-P.949-957.

118. Strasser A., Harris A.W., Cory S. Bcl-2 transgene inhibits T cell death and perturbs thymus self-censorship. Cell. 1991. - Vol. 67 - P. 889 - 899

119. Stuhlmeier K.M. Activation and regulation of Hsp32 and IIsp70. // Eur. Biochem. 2000.- V.267.- P.l 161-1167.

120. Torok N.J., Higuchi H., Bronk S., Gores G.J. Nitric oxide inhibits apoptosis downstream of cytochrome C release by nitrosylating caspase 9. // Cancer Res.- 2002. V.62. - P. 1648-1653.

121. Tournier C., Hess P., Yang D.D. et al. // Science. 2000.- Vol. 288, N 5467.- P.870-874.

122. Tzeng E., Kim Y.-M., Pitt B.R., Lizonova A., Kovesdi I., Billiar T.R. Adenoviral transfer of the inducible nitric oxide synthase gene blocks endothelial cell apoptosis. // Surgery. 1997. - V.122. - P.255-263.

123. Walsh D, Grantham J, Zhu XO, Wei Lin J, van Oosterum M, Taylor R, Edwards M. The role of heat shock proteins in mammalian differentiation and development. Environ Med. 1999 Dec;43(2):79-87.

124. Wolf B.B., Green D.R. Suicidal tendencies: apoptotic cell death by caspase family proteinases. //J. Biol. Chem. 1999. - V.274. - P.20049-20052.

125. Wu B.Y., Yu A.C. Quercetin inhibits c-fos, heat shock protein, and glial fibrillary acidic protein expression in injured astrocytes. // J. Neurosci. Res. -2000. V.62. - P.730-736.

126. Wong H.R., Menendez I.Y., Ryan M.A., Denenberg A.G., Wispe J.R. Increased expression of heat shock protein-70 protects A549 cells against hyperoxia. // Am. J. Physiol. 1998 - v.275 - p.L836-841.

127. Yang Y.L., Lu K.T., Tsay II.J., Lin C.H., Lin M.T. Heat shock protein expression protects against death following exposure to heatstroke in rats. // Neurosci. Lett. 1998. - V. 252. - P. 9-12.

128. Yoon S.J., Choi K.H., Lee K.A. Nitric oxide-mediated inhibition of follicular apoptosis is associated with HSP70 induction and Bax suppression. // Mol. Reprod. Dev. -2002. V.61. - P.504-510.

129. Zhao II., Dugas N., Mathiot C., Delmer A., Dugas B., Sigaux F., Kolb J.P. B-cell chronic lymphocytic leukemia cells express a functional inducible nitric oxide synthase displaying anti-apoptotic activity. // Blood. 1998. - V.92. — P.1031-1043.

130. Zou II., Li Y., Liu X., Wang X. An APAF-1 cytochrome c multimeric complex is a functional apoptosome that activates procaspase-9. // J. Biol. Chem. 1999. - V.274. - P. 11549-11556.

131. Murphy MP. Nitric oxide and cell death. // Biochim. et Biophys. Acta. -1999.-V.1411.-P. 401-414.

132. Dimmeler S, Zeiher AM. Nitric oxide and apoptosis: another paradigm for the double-edged role of nitric oxide. Nitric Oxide: Biology and Chemistry. — 1997.-V.1 (4). P.275-281.