Усовершенствование технологии изготовления вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита и изучение ее антигенных и иммуногенных свойств тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат наук Нургалиева, Алиня Равилевна

• Нургалиева, Алиня Равилевна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Нургалиева, Алиня Равилевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ............................................................ 2

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.......................................... 5

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.............................................................. 10

1.1 Этиологическая структура и эпизоотологические особенности инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота............ 10

1.2 Систематика, культурально-морфологические, биохимические и иммунобиологические свойства бактерий Moraxella bovis................... 13

1.3 Питательные потребности бактерий Moraxella bovis и питательные среды для их культивирования....................................................... 20

1.4 Современные способы культивирования микроорганизмов............. 28

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ........................................... 41

2.1 Материалы и методы исследований............................................... 41

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ....................... 49

3.1 Подбор рецептуры оптимального состава питательной среды на

основе ФГМПЭМ...................................................................... 49

3.2 Сравнительная оценка эффективности различных питательных сред

для культивирования бактерий Moraxella bovis................................. 52

3.3 Динамика роста культуры бактерий Moraxella bovis при глубинном культивировании в питательной среде на основе ФГМПЭМ................ 53

3.4 Изучение влияния посевной дозы, аэрации и перемешивания на рост моракселл при глубинном способе культивирования в среде на основе ФГМПЭМ................................................................................. 57

3.4.1 Изучение влияния концентрации и физиологического состояния посевной дозы на рост моракселл при глубинном способе культивирования в среде на основе ФГМПЭМ.................................. 57

3.4.2 Изучение влияния аэрации и перемешивания на рост моракселл при глубинном способе культивирования в питательной среде на основе ФГМПЭМ................................................................................. 60

3.5 Изучение культурально-морфологических и биохимических свойств штаммов Moraxella bovis, при культивировании их разными способами и на различных питательных средах.................................................. 63

3.5.1 Изучение культурально-морфологических и биохимических свойств штаммов бактерий Moraxella bovis, выращенных на кровяном

МПА...................................................................................... 63

3.5.2 Изучение культурально-морфологических и биохимических свойств штаммов бактерий Moraxella bovis, выращенных в питательной

среде на основе ФГМПЭМ при глубинном культивировании................ 65

З.бОценка антигенной активности серий вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота, изготовленных с использованием биомасс, полученных на различных питательных средах 67

3.6.1 Оценка антигенной активности серий вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота, изготовленных с использованием биомасс, полученных на различных питательных средах, на кроликах................................................... 68

3.6.2 Оценка антигенной активности серий вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота, изготовленных с использованием биомасс, полученных на различных

питательных средах, на телятах................................................... 70

3.7 Испытание иммунологической эффективности серий вакцины

против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота, изготовленных с использованием биомасс, полученных на различных

питательных средах.................................................................... 73

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.......................... 78

ВЫВОДЫ................................................................................. 89

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ............................................... 91

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ............................................................... 92

ПРИЛОЖЕНИЯ............................................................................. 120

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Усовершенствование технологии изготовления вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита и изучение ее антигенных и иммуногенных свойств»

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Инфекционный кератоконъюнктивит (ИКК) крупного рогатого скота, вызываемый бактериями Moraxella bovis, регистрируется среди поголовья крупного рогатого скота в разных регионах земного шара, в том числе и России (Карайченцев В.Н., 2003; Иванов A.B. с соавт., 2005; Гаффаров Х.З. с соавт. 2008, Спиридонов Г.Н., 2008; Conceifäo F.R. et al., 2003; Burns M.J., ÖConnor A.M., 2008). Заболевание наносит значительный экономический ущерб животноводству.

Для специфической профилактики этой болезни в ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» разработана «Ассоциированная вакцина против ИКК крупного рогатого скота на основе антигенов бактерии Moraxella bovis и герпесвируса типа 1» (Патент РФ на изобретение №2264227).

Технология промышленного производства этой вакцины требует наработки больших объемов бактериальной массы. Получение поверхностным способом на плотной питательной среде больших объемов бактериальной массы трудоемко и не является технологичным при серийном промышленном производстве вакцины. В этом аспекте перспективным и наиболее продуктивным методом культивирования бактерий считается глубинное выращивание в ферментерах с жидкими питательными средами различного состава. Применение глубинного культивирования при производстве бактериальных вакцин по сравнению с поверхностным способом позволяет значительно повысить продуктивность процесса выращивания микроорганизмов, уменьшить количество и продолжительность подготовительных операций и затраты ручного труда (Озеренко O.A. с соавт., 2004; Самуйленко А.Я. с соавт., 2009; Меньшенин В.В., Школьников Е.Э., 2009; Макаев Х.Н., Сабирова В.В., 2010; Еремец В.И. с соавт., 2012).

Наиболее употребляемые при выращивании различных бактерий жидкие среды готовят на основе гидролизата мышечной ткани. Однако, мясо является ценным пищевым продуктом. Ряд авторов предлагают использовать среды на

основе гидролизатов из различных органов и тканей промысловых видов ластоногих, казеиново-дрожжевых и кровяно-дрожжевых лизатов, белков молока, куриных эмбрионов, отходов рыбной промышленности, соево-эритроцитарного гидролизата (Шептун Н.Г., 1989; Абрамов Д.В., 1990; Рязанова Л.А. с соавт., 1991; Заерко В.И., 1996; Телишевская Л.Я., 2000).

Исходя из того, что рекомендуемые питательные среды для выращивания бактерий Moraxella bovis в стационарных условиях дорогостоящие и не предусмотрены для крупномасштабного культивирования бактерий в биореакторах, изыскание оптимальной по компонентному составу питательной среды из непищевого сырья для глубинного культивирования бактерий Moraxella bovis является актуальной задачей.

Цель и задачи исследований. Целью исследований явилось усовершенствование технологии изготовления вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота путем применения дешевой жидкой питательной среды и разработки оптимальных условий глубинного культивирования бактерий Moraxella bovis для получения биомассы при промышленном производстве вакцины.

Для выполнения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изыскать жидкую питательную среду на основе гидролизата непищевых отходов мясокомбината для выращивания бактерий Moraxella bovis',

2. Разработать технологию глубинного культивирования бактерий Moraxella bovis с использованием предложенной среды в условиях биореактора;

3. Изучить культурально-морфологические, биохимические свойства бактерий Moraxella bovis, выращенных в предложенной питательной среде;

4. Усовершенствовать технологию изготовления вакцины против ИКК крупного рогатого скота путем применения жидкой питательной среды и разработки глубинного способа получения биомассы бактерий Moraxella bovis;

5. Провести в лабораторных и производственных условиях сравнительную оценку эффективности серий вакцины против ИКК крупного рогатого скота,

изготовленных из биомасс, полученных на плотной и в жидкой питательных средах.

Научная новизна. Усовершенствована технология изготовления вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота применением биомассы бактерий Moraxella bovis, полученной глубинно-суспензионным методом культивирования в биореакторе с использованием жидкой питательной среды.

Впервые разработана рецептура жидкой питательной среды на основе ферментативного гидролизата маточно-плацентарно-эмбриональной массы коров с концентрацией 120 мг% аминного азота и содержащая по 5% сыворотки крови крупного рогатого скота и дрожжевого экстракта к общему объему среды для культивирования моракселл глубинно-суспензионным способом.

Впервые установлено, что при выращивании бактерий Moraxella bovis в реакторных условиях в разработанной среде на основе ФГМПЭМ не изменяются их основные культурально-морфологические и биохимические свойства, а также антигенная и иммуногенная активности.

Практическая значимость. На основе проведенных исследований предложена жидкая питательная среда на основе ферментативного гидролизата маточно-плацентарно-эмбриональной массы коров с добавлением сыворотки крови крупного рогатого скота и дрожжевого экстракта для выращивания бактерий Moraxella bovis методом глубинного культивирования.

Усовершенствована технология глубинного культивирования бактерий Moraxella bovis с применением жидкой питательной среды на основе ФГМПЭМ для увеличения производства вакцины против ИКК крупного рогатого скота.

Разработана «Методическая рекомендация по изготовлению питательной среды из ферментативного гидролизата маточно-плацентарно-эмбриональной массы крупного рогатого скота для культивирования бактерий Moraxella bovis», утвержденная 25 января 2013 г. директором ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и получили положительную оценку на:

- ежегодных заседаниях Ученого совета ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ») при обсуждении отчетов о НИР за 2006 - 2012 гг.;

Международной научно-практической конференции Российской федерации (Казань, 2010);

- Международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию со дня основания Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока «Актуальные вопросы ветеринарной медицины Сибири» (Краснообск, 2010);

- Международной научно-практической конференции «Обеспечение продовольственной безопасности России. Если не мы, то кто?» (Курск, 2010);

- Международной научно-практической конференции молодых ученых ФГУ «ВНИИЗЖ» (Владимир, 2010);

Международной научной конференции, посвященной 80-летию организации ВГНКИ «Лекарственные препараты для животных (разработка, производство, эффективность и качество)» (Москва, 2011);

- Всероссийской научно-практической конференции «Научное обеспечение инновационного развития ветеринарной медицины и животноводства» ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана» (Казань, 2011);

- Международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Биотехнологии в решении экологических проблем природы, общества и человека в Евразии: взгляд молодых ученых и специалистов» (Казань, 2013).

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 9 работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Эффективность питательной среды, приготовленной на основе ферментативного гидролизата маточно-плацентарно-эмбриональной массы коров

с добавлением сыворотки крови крупного рогатого скота и дрожжевого экстракта.

2. Оптимизация условий глубинного культивирования бактерий Moraxella bovis в жидкой питательной среде на основе ФГМПЭМ.

3. Культурально-морфологические и биохимические свойства моракселл, полученных при глубинном культивировании в питательной среде на основе ФГМПЭМ.

4. Сравнительная оценка эффективности вакцины против ИКК крупного рогатого скота, изготовленной на основе биомассы Moraxella bovis, полученной в жидкой питательной среде методом глубинного культивирования, и вакцины, полученной из бакмассы, выращенной на плотной питательной среде, на лабораторных и сельскохозяйственных животных.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 120 страницах компьютерного набора и включает следующие разделы: общая характеристика работы, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, библиографический список использованной литературы, состоящий из 250 источников, в том числе 91 иностранных авторов, и приложения. Диссертация содержит 13 таблиц и иллюстрирована 6 рисунками.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Этиологическая структура и эпизоотологические особенности инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота

В последнее время широкое распространение среди молодняка крупного рогатого скота получил инфекционный кератоконъюнктивит, вызываемый бактериями Moraxella bovis (Гаффаров Х.З. с соавт., 2008; Slatter D.H., 1982; Eugster А.К., 1984; Davidson К., 1986; Das R.G., 1988; Stellmacher H., 1988; Nagy A., 1989; Aly S.M., 1995; Piscitelli H.G., 1996; Brown M.H., 1998; Batta M.K., 1999; Conceicao F.R., 2003; Burns M.J., 2008). Согласно последним исследованиям, причиной возникновения и развития заболевания является сочетанное действие биологического возбудителя - бактерии Moraxella bovis и физического фактора -солнечного ультрафиолетового облучения (Русинов А.Ф., 1995; Гаффаров Х.З. с соавт., 1998; Arora A.K. et al., 1982). Частота его проявления в РФ наиболее высока, особенно среди молодняка крупного рогатого скота текущего года рождения и на откормочных площадках с высокой плотностью поголовья (Иванов A.B. с соавт., 2005).

Инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота высококонтагиозная болезнь глаз, характеризующаяся слезотечением, гиперемией сосудов конъюнктивы, светобоязнью, блефароспазмом, иридоспазмом, серозно-гнойным истечением, помутнением и изъязвлением роговицы, деформацией глазного яблока в виде кератоконуса или кератоглобуса, частичной или полной потерей зрения пораженного глаза животного (Плахотин М.В. с соавт., 1966; Карайченцев В.Н. с соавт., 1992; Дуплева Л.Ш., 2009; Wilcox G.E., 1968).

Инфекция чаще всего встречается в летние и осенние месяцы у молодняка в период пастбищного содержания, но может наблюдаться у животных и при стойловом содержании. Она быстро распространяется в стаде при прямом контакте животных. Доказана возможность переноса возбудителя мухами -Musca domestica, Musca autumnalis (Караджов Я.Н., 1979; Pugh G.W. et al., 1968; Brown J.E., Adkins T.R., 1972). Прямое воздействие солнечных лучей, ветер, пыль,

недостаток витамина А благоприятствуют заражению (Эльце К. с соавт., 1977; Русинов А.Ф., 1994; Черванев В.А., Алтухов Б.Н., 1995; Валебная J1.B., 2007).

Заболевание наносит значительный экономический ущерб вследствие массового поражения крупного рогатого скота в пределах хозяйства. Потери складываются из снижения продуктивности и затрат на лечебно-оздоровительные мероприятия (Какоулин Т.Е., 1982; Иванов A.B. с соавт., 2005; Henson J.B., Grumbles L.C., 1960).

В крупных животноводческих комплексах с высокой концентрацией поголовья на небольшой территории заболеваемость составляет 60-90 % (Какоулин Т.Е., 1982; Barth Т. et al., 1986). Заражению особенно подвержены крупный рогатый скот и мелкий рогатый скот, но могут поражаться лошади, свиньи, олени (Фомин К.А., 1968; Андриасян В.Б. с соавт., 1988).

Ведущая роль в возникновении ИКК принадлежит бактериям Moraxella bovis (Русинов А.Ф., 1967, 1995; Дженсен Р. и соавт. 1977; Иванов A.B. с соавт., 2005; Гаффаров Х.З. с соавт., 2008; Hughes J.R. et al., 1965; Baptista P., 1980; Miller R.B., Fales W.H., 1984; Pugh G.W. et al., 1986; Tamzali et al., 1992). В качестве сопутствующей микрофлоры часто встречаются ß-гемолитические стрептококки, стафилококки.

Ранее в качестве возбудителя болезней глаз крупного рогатого скота большинство исследователей считали риккетсий (Орлов Ф.М., 1973; Аллахвердиев P.C., 1978), хламидий (Огняков Д.К., 1973; Pedersen К.В., 1973; Wehr J. et al., 1980) и микоплазм (Langfort E.V., Leach R.H., 1973; Rosenbusch P., 1985).

Основным возбудителем заболевания глаз вирусной природы считается герпесвирус (Борисевич В.Б. с соавт., 2006; McKercher D.G. et al., 1958).

Инфекционный кератоконъюнктивит впервые был описан Billings R.D. в 1899 году как контагиозный кератит, поражающий молочный скот.

Впервые возбудитель инфекционного кератоконъюнктивита человека выделили Morax V. (1896) и Axenfeld Т. (1897) независимо друг от друга. Первое сообщение, подтверждающее инфекционный характер болезни, сделал Penberthy

J. в 1897 году в Англии. Исследователю удалось воспроизвести заболевание у одного из двух телят при их совместном содержании с больными животными.

Allen J.А. в 1919 году сообщил об эпизоотии инфекционного кератита крупного рогатого скота в Канаде. Мазки-отпечатки показали наличие коротких, толстых грамотрицательных диплобацилл. Автору удалось выделить микроорганизм, используя сывороточный агар Леффлера. Возбудитель был полиморфным и соответствовал описаниям Morax V. и Axenfeld Т.

Иссследователь Canham A.S. описал случаи офтальмии в Северной Африке в 1923 году. Однако попытки заражения здоровых животных путем переноса выделений из глаз были безуспешны.

В США в 1945 году Baldwin Е.М. выделил бактерии Moraxella bovis у 83 % крупного рогатого скота, больного инфекционным кератоконъюнктивитом.

В этом же году Reid J.J. и Anigstein L. выделили на кровяном агаре чистую культуру бактерий Moraxella bovis от больных животных с признаками кератоконъюнктивита. В последующие годы ряд исследователей подтвердили патогенную роль бактерий Moraxella bovis при развитии инфекционного кератоконъюнктивита (Jacson F.C., 1953; Gallagher С.Н., 1954; Henson J.B., Grumbles L.C., 1960 и др.).

В нашей стране первым ИКК крупного рогатого скота описал Макашов в 1940 г. В последующем данную болезнь описали Панин Г.Ф. (1953) в Туркменской ССР; Громов В.П. с соавт. (1963) в Свердловской области; Плахотин М.В. с соавт. (1966) и Кадыров К.А. (1968) в Московской области.

На основании проведенных исследований в хозяйствах Харьковской области Русинов А.Ф. (1967, 1995) установил, что ИКК вызывается в тех случаях, когда в силу неблагоприятных факторов снижается резистентность конъюнктивы, роговицы глаза и создаются условия для размножения Moraxella bovis.

Последние десятилетия Гаффаров Х.З. с соавт. (2000, 2002, 2007); Иванов A.B. с соавт. (2005); Валебная J1.B. с соавт. (2007); Спиридонов Г.Н. (2008); Дуплева Л.Ш. (2009) изучали этиологию и клинико-эпизоотологическое проявление ИКК крупного рогатого скота в скотоводческих хозяйствах Среднего

Поволжья и Предуралья, выделили основного возбудителя заболевания — бактерии Moraxella bovis и описали морфологические и биохимические свойства выделенных штаммов.

1.2 Систематика, культурально-морфологические, биохимические и иммунобиологические свойства бактерий Moraxella bovis

Согласно современной классификации зоопатогенных микроорганизмов Moraxella bovis являются грамотрицательными бактериями, относящимися к роду Moraxella семейства Moraxelleaceae (Быков A.C., 2008). Представители данного рода палочки часто очень короткие и толстые, приближающиеся по форме к коккам размером 1,0-1,5x1,5-2,5 мкм, обычно в парах и коротких цепочках. Кокки обычно более мелкие (диаметром 0,6-1,0 мкм) и расположены одиночно или парами, где соприкасающиеся стороны клеток уплощены (Holt J.G., 1997).

При выращивании на питательных средах часто проявляются признаки полиморфизма: клетки варьируют по размеру, форме, могут присутствовать длинные цепочки. Особенно сильно полиморфизм проявляется при недостатке кислорода, культивировании их на неблагоприятных питательных средах и при температуре выше оптимальной (Гаффаров Х.З. с соавт., 2002; Скородумов Д.И., 2005; Валебная Л.В., 2007; Holt J.G.,1997).

В свежевыделенных изолятах могут присутствовать капсулы. Жгутики отсутствуют. Как палочковидные, так и кокковидные бактерии могут иметь фимбрии.

Согласно Сидорову И.А. с соавт. (1995) моракселлы неподвижны, тогда как Holt J.G. (1997) указывает, что некоторые виды (штаммы) могут двигаться рывками по твердой поверхности.

Бактерии Moraxella bovis имеют тенденцию к удержанию красителя кристаллического фиолетового.

Гуанин-Цитозин содержание ДНК варьирует примерно 40-46 мол.% (Holt J.G., 1980).

Отличительным свойством моракселл является чрезвычайная чувствительность к пенициллину, за исключением штаммов, приобретших устойчивость к этому препарату (Шлегель Г., 1987; Поздеев O.K., 2001). Рост бактерий подавляется при концентрациях пенициллина от 1 до 10 ед/см3, тогда как обычно его ингибирующие концентрации для грамотрицательных бактерий лежат в пределах от 100 до 1000 ед/см3 (Стейниер Р., 1979). Микроорганизм достаточно чувствителен к другим широко используемым антибиотикам: стрептомицину, хлорамфениколу, окситетрациклину, неомицину (Бессарабов Б.Ф., 2005; Валебная Л.В., 2007).

Для культивирования возбудителя ИКК крупного рогатого скота необходимы соответствующие питательные среды и условия роста: температура 33-35°С, pH 7,2-7,6. При температуре 15°С и ниже, 40°С и выше культура бактерий Moraxella bovis не растет. При 22°С культура растет медленно, колонии маленькие. Некоторые штаммы выдерживают 50°С в течение 30 минут; 40 минут при этой температуре не выдержал ни один из штаммов (Pedersen К.В., 1970). При нагревании до 60°С Moraxella bovis погибает в течение 5 минут (Бессарабов Б.Ф. с соавт., 2007).

Moraxella bovis относятся к аэробам, но отдельные штаммы могут слабо расти в анаэробных условиях.

По типу питания являются хемоорганотрофами, с окислительным метаболизмом. Характерны сложные потребности в питательных веществах, но конкретные ростовые потребности неизвестны (Holt J.G., 1997).

При культивировании на питательных средах формируются колонии двух типов: гладкие - выпуклые с блестящей поверхностью и ровными краями, называемые S-формами, и шероховатые - плоские с волнистыми краями, обозначаемые как R-формы (Henson J.B., Grumbles L.C., 1960).

Согласно данным Pedersen K.B. (1970), Brinton С.С., Goodnow R.A. (1984) при первичном посеве на кровяном агаре штаммы Moraxella bovis дают плоские шероховатые колонии. При субкультивировании происходит быстрое разделение на более мелкие гладкие выпуклые колонии.

По мнению других авторов, при первичном выделении преобладают гладкие колонии, которые могут в дальнейшем спонтанно диссоциировать даже при оптимальных условиях роста (Валебная JI.B., 2007; Barner R.D., 1952; Jackson F.C., 1953).

Переход от колоний одного типа в колонии другого типа объясняется изменением фазы образования пилей, что является механизмом - регулятором, влияющим на фенотипическую экспрессию пилеобразования. Бактерии, которые имеют пили, могут спонтанно переходить из одного фенотипичекого состояния (с пилями) в другое (без пилей) и наоборот. Смена фазы - процесс обратимый. На нее оказывает влияние внешние условия (Brinton С.С., Goodnow R.A., 1984)..

Согласно исследованиям Bryan H.S. et al. (1973), негемолитический тип Moraxella bovis более распространен в зимние месяцы, тогда как в летние месяцы чаще встречается гемолитический тип Moraxella bovis.

Типичная гладкая культура Moraxella bovis на кровяном агаре после 24-часовой инкубации при 37°С имеет следующие характеристики. Рассеянные колонии не имеют склонности к слиянию, слияние происходит только, если расположены близко друг к другу. Колонии имеют точечную форму диаметром от 1 до 3 мм, гладкие, поверхность блестящая, напоминают каплю росы. Колонии серовато-белого цвета, выпуклые, полупрозрачные, окруженные светлой зоной бета-гемолиза, которая в ширину может достигать 2 мм. Шероховатые колонии имеют размер от 1 до 3 мм. Наблюдается большая тенденция к слиянию при росте.' Колонии сухие, неблестящие, неправильные по форме, серовато-белые. Края волнистые (Гаффаров Х.З. с соавт., 2000; Иванов A.B. с соавт., 2005; Jackson F.C., 1953).

Морфологические характеристики колоний всех изученных штаммов микроорганизмов на триптиказосоевом агаре сходны с характеристиками колоний, полученных на кровяном агаре (Pugh G.W. et al., 1966).

Гладкие колонии слегка врастают в агаровую среду (Карайченцев В.Н. с соавт., 1992; Гаффаров Х.З. с соавт., 2000).

На шоколадном агаре зона гемолиза окрашивается в темный цвет (Сидоров М.А. с соавт., 1995).

Карайченцев В.Н. с соавт. (1992) на кровяном агаре наблюдал крупные гладкие и шероховатые колонии серо-белого цвета диаметром 1-3 мм и шириной зоны гемолиза 0,5-1,0 мм. На сывороточном бульоне микроорганизмы давали незначительное помутнение с образованием осадка на дне пробирки.

Бактерии Moraxella bovis относятся к группе неферментирующих грамотрицательных бактерий, общим свойством которых является отсутствие способности расщеплять углеводы с образованием кислоты.

Moraxella bovis не оказывает ферментирующего действия на средах со следующими углеводами: сахароза, галактоза, лактоза, декстроза, мальтоза, арабиноза, инулин, мальтоза, маннит, манноза, рамноза, салицин, сорбит, трегалоза, ксилоза (Henson J.B., Grumbles L.C., 1960; Pugh G.W., 1966; Pedersen K.B., 1970).

Моракселлы являются каталазовариабельными микроорганизмами (Dwight С. Н., 1999). В 1966 году Pugh G.W. et al. изучили 101 штамм бактерий Moraxella bovis и установил, что 53 из них являются каталазоположительными, а 48 -катал азоотрицательными.

Проба на оксидазу дает положительный результат (Вейант Р. с соавт., 1999).

При посеве культур бактерий в нитратную среду никаких изменений не наблюдается, а это значит - не редуцирует нитраты в нитриты.

Бактерии Moraxella bovis не разлагают мочевину, не образуют фенилаланиндезаминазу, уреазу, индол (Вейант Р. с соавт., 1999; Скородумов Д.И., 2005; Holt J.G., 1997).

Достаточно характерен рост Moraxella bovis в лакмусовом молоке. Через 6-7 суток инкубации культуры образуются хорошовидимые отчетливые зоны: верхняя — темно-синяя жидкость, средняя зона — лилового цвета, творожистая по консистенции, а нижняя - коагулированный казеин бледно-лилового цвета (Reid J.J., Anigstein L., 1945; Валебная JI.B., 2007). Barner R.D. (1952) сообщает, что при изучении 8 культур бактерий Moraxella bovis не заметил четких зон при

пептонизации лакмусового молока, которые наблюдали другие авторы. Скорость пептонизации молока зависит от количества внесенного инокулята (Pedersen К.В., 1970). При увеличении дозы посевного материала процесс пептонизации занимает 48-72 часа, а с уменьшением - реакция замедляется и протекает 8 и более дней (Валебная Л.В., 2007). Негемолитические штаммы не пептонизируют лакмусовое молоко (Arora A.K. et al., 2003).

Бактерии Moraxella bovis патогенны для лабораторных животных: мышей, кроликов. Живые гемолитические культуры Moraxella bovis при внутрибрюшинном заражении вызывают гибель 88% мышей через 1-3 часа, негемолитические культуры вызывают смертность 25% мышей через 5-15 часов после заражения. При введении гемолитической Moraxella bovis в мошонку кроликов наблюдается острая локальная воспалительная реакция, опухание и болезненность семенника, образование твердого некротического участка. Заражение кроликов негемолитической культурой приводит к умеренному опуханию, которое позже исчезает (Arora A.K. et al., 2003).

Для крупного рогатого скота патогенны только гемолитические формы бактерий Moraxella bovis (Rogers D.G. et al., 1987; Dwight C.H., 1999). Гемолитичность - признак вирулентности штамма. Гемолизин Moraxella bovis относится к порообразующим экзотоксинам семейства RTX {repeats in toxin), которая сгруппирована исходя из механизма формирования поры с учетом гомологии белков (Андреева-Ковалевская Ж.И. с соавт., 2008). Цитолизин увеличивает проницаемость мембран для ионов, сдвигает осмотическое равновесие клетки, что приводит к ее набуханию и в конечном итоге к лизису (Clinkenbeard K.D., Thiessen А. Е., 1991).

Kagonyera G.M. с соавт. (1989) изучали цитопатическое действие Moraxella bovis на культуры нейтрофилов и эпителиальных клеток роговицы. В культурах клеток нейтрофилов уже через 2 минуты после внесения возбудителя появлялись ультраструктурные изменения, включавшие вакуолизацию, отек и исчезновение складок наружной цитоплазматической мембраны. Живые микробные клетки

Moraxella bovis лизировали культуру эпителиальных клеток роговицы глаза крупного рогатого скота.

В дальнейшей работе Kagonyera G.M. с соавт. (1989) изучали цитотоксичность 11 изолятов Moraxella bovis для нейтрофилов крупного рогатого скота и установили прямую зависимость между цитотоксичностью и концентрацией живых микробных клеток Moraxella bovis в культурах нейтрофилов крупного рогатого скота. Все 7 испытанных гемолитических изолятов Moraxella bovis были цитотоксичными для нейтрофилов крупного рогатого скота, а 4 негемолитических изолята возбудителя цитотоксичностью не обладали. Приготовленные из старых культур Moraxella bovis гомогенаты и фильтраты цитотоксичностью по отношению к нейтрофилам крупного рогатого скота не обладали.

Другим важным фактором вирулентности Moraxella bovis является ассоциированная с пилями адгезивность (Vandergaast N., Rosenbusch R.F., 1989; Jasinta L.F., 2001). Пили (фимбрии) - нитевидные белковые образования, не имеющие центрального ядра. Они отходят от поверхности клетки и состоят из белка пилина, обладающего антигенной активностью. Фимбрии моракселл облегчают прикрепление инфекта к эпителию слизистой оболочки глаз (Barth Т., 1986; Prieto C.I. et al., 2008).

Для Moraxella bovis характерны пили IV типа, также как для Pseudomonas aeruginosa, Neisseria gonorrhoeae, Dicholobacter nodosus, Pasteurella multocida и Vibrio cholerae (Beard M.K.M. et al., 1990; Heinrich D.W., Glasgow A.C., 1997; Dwight C.H., 1999).

Moore L.J., Rutter J.M. (1989) изучали роль фимбрий в прикреплении Moraxella bovis к роговице глаза и роль антител к фимбриям в резистентности крупного рогатого скота к инфекционному кератоконъюнктивиту. Ученый установил прямую зависимость между наличием у использованных штаммов Moraxella bovis фимбрий и их способностью прикрепляться к поверхности эпителиальных клеток. Штаммы, не образовывавшие фимбрий, адгезивные свойства в условиях эксперимента не проявляли. Кроличьи гипериммунные

сыворотки ингибировали прикрепление гомологичных штаммов Moraxella bovis к клеткам, но не влияли на адгезивные свойства гетерологичных серогрупп возбудителя.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Нургалиева, Алиня Равилевна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Абрамов, Д.В. Технология гидролизатов сывороточных белков молока для ветеринарных целей, их физико-химические и биологические свойства /Д.В. Абрамов: автореферат дис.... канд. биол. наук. -М., 1990.-24 с.

2. Акимов, Е.К. Влияние кислорода на рост бруцелл шт.82 при глубинно-суспензионном методе культивирования / Е.К. Акимов // Диагностика, лечение и профилактика опасных инфекционных заболеваний. Биотехнология. Ветеринария: материалы юбилейной науч. конф., посвященной 70-летию НИИ микробиологии МО РФ. - Киров, 1998. - С.284.

3. Акимов, Е.К. Динамика потребления глюкозы при выращивании F.necrophorum в питательной среде на основе ФГМПЭМ / Е.К. Акимов, Х.Н. Макаев, Д.А. Хузин, В.В. Сабирова и др. // Материалы Международного симпозиума. - Казань, 2005. - С. 14-16.

4. Акимов, Е.К. Изучение роста бруцелл штамма 82 на питательных средах ПМБХ и ГПЭМ при периодическом режиме культивирования / Е.К. Акимов // Актуальные проблемы живот-ва и вет-рии: материалы Республ. научно-произв. конф. - Казань, 1999. - С. 3-4.

5. Алимов, A.M. Изучение аминокислотного обмена и иммунохимии листерий различной вирулентности / Алимов Азат Миргасимович: автореферат дис.... к.б.н. - Казань, 1974. - 202 с.

6. Алимов, A.M. Сравнительная оценка питательных сред при культивировании вакцинного штамма листерий АУФ / A.M. Алимов, O.A. Котылев // Ученые записки КГВИ. - 1975. - Т. 119. -С. 158-162.

7. Аллахвердиев, P.C. Этиология заболеваний глаз крупного рогатого скота / Р.С.Аллахвердиев // Ветеринария. - 1978. - № 8. - С. 51-53.

8. Андреева-Ковалевская, Ж.И. Пороформирующие белки и адаптация организмов к условиям окружающей среды / Ж.И. Андреева-Ковалевская, A.C. Солонин, Е.В. Синева, В.И. Терновский // Успехи биологической химии. -2008. -Т.48. - С. 267-318.

9. Андриасян, В.Б. Инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота в Северо-Западной зоне РСФСР / В.Б.Андриасян // Сб. науч. тр. Ленинградского вет. ин-та. - 1988. - С. 6-11.

10. Антонов, Б.И. Лабораторные исследования в ветеринарии. Бактериальные инфекции / Б.И. Антонов: справочник. - М.: Агропромиздат, 1986.-352 с.

11. Артеменко, В.Л. Использование экспериментально-анаметического метода для балансировки жидких питательных сред для роста и токсинообразования / В.Л. Артеменко, Л.Г. Иванова, В.П. Кенашев // ЖМЭИ. -1985.-№11. -С. 37-40.

12. Аткинсон, Б. Биохимические реакторы / Б. Аткинсон. - Л.: Пищ. пром., 1979.-280 с.

13. Баснакьян, И.А. Оптимизация культивирования микроорганизмов в ^ иммунобиотехнологии / И.А. Баснакьян // Микробиология. - 1989. - №5. -С. 90-96.

14. Баснакьян, И. А. Патология и физиология микробов. Усовершенствование технологии культивирования / И.А. Баснакьян // Микробиология. - 1982. - №12. - С. 28-33.

15. Баснакьян, И.А. Классификация процессов культивирования микроорганизмов /И.А. Баснакьян, В.М. Боровкова, Л.Н. Запорожцев // Тр. Моск. науч.- исслед. ин-та вакцин и сывороток им. Мечникова. - М.,1981. - С. 5-17.

16. Баснакьян, И.А. Морфологические особенности в сопоставлении с физиологически-биохимическими закономерностями жизнедеятельности микроорганизмов при периодическом и непрерывном культивировании / И.А. Баснакьян, Г.П. Дубинина // ЖМЭИ. - 1974. - №7. - С. 3-7.

17. Баснакьян, И.А. Культивирование микроорганизмов с заданными свойствами / И.А. Баснакьян. - М.: Медицина, 1992. - 192 с.

18. Баснакьян, И.А. Пути оптимизации получения вторичных экзаметаболитов и перспективы использования непрерывного культивирования / И.А. Баснакьян, Л.Д. Шафоростова, В.М. Боровкова // Теория и практика

непрерывного культивирования микроорганизмов: 2-е Всесоюзное совещание. -М.: Наука, 1980. - С.32-39.

19. Бекер, М.Е. Введение в биотехнологию / М.Е. Бекер. - М., 1978. — С. 7-23.

20. Белоусов, В.И. Требования к питательным средам для ветеринарных целей / В.И. Белоусов // Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными экзотическими и зоонтропонозными болезнями животных: сборник Междун. научно-практическая конф. - 2000. - С. 230-231.

21. Белоусов, В.И. Исследование основных показателей при культивировании лептоспир в биореакторе / В.И. Белоусов // Науч. основы техн. пром. производства вет. биол. препаратов: тезисы докладов V Всеросс. конф. -Щелково, 1996.-С. 97-98.

22. Бессарабов, Б.Ф. Инфекционные болезни животных / Б.Ф. Бессарабов, A.A. Вашутин, Е.С. Воронин и др. - М.: КолосС, 2007. - 671 с.

23. Беро И.Л. Человек и биотехнология / И.Л. Беро // Ветеринарный врач. -2010.-№ 6.-С. 7-11.

24. Бирюков, В.В. Оптимизация периодических процессов культивирования микроорганизмов /В.В. Бирюков, В.М. Каптере. - Л.: Наука, 1985.-С. 215-292.

25. Бирюков, В.В. Сравнительное изучение биологических и физико-химических свойств питательных основ выпускаемых различными предприятиями России / В.В. Бирюков, Л.В. Сисюк, Е.В. Желудкова, И.Н. Седельников // Тезисы докл. науч. конф., посвященной 70-летию НИИ микробиологии МО РФ. - Киров, 1998. -С. 289-290.

26. Благовещенский, В.А. Метод концентрации и очистки анатоксинов perfringens, приготовленных на казеиновых средах /В.А. Благовещенский, Л.Я. Мармалевская, А.Н. Кузьмина //Материалы по обмену опытом. - М., 1960. -2/58. -С. 68-75.

27. Бовкун, Г.Ф. Ростовые и физиологические свойства бифидобактерий в процессе периодического культивирования / Г.Ф. Бовкун, Н.И. Малик

// Науч. основы производства вет. биол. препаратов: материалы Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 40-летию института. - Щелково, 2009. - С. 382-386.

28. Борисевич, В.Б. Инфекционные кератоконъюнктивиты крупного рогатого скота / В.Б.Борисевич, Б.В.Борисевич, П.Д.Солонин, В.Н.Коваленко, З.К.Мархонь // Ветеринария. - 2006. - № 1. - С. 18-19.

29. Быков, A.C. Атлас по медицинской микробиологи, вирусологии и иммунологии / A.C. Быков. — М.: Медицинское информационное агенство, 2008. — 272 с.

30. Валебная, J1.B. Биологическая характеристика бактерий Moraxella bovis и клинико-эпизоотологические особенности инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / Валебная Людмила Валерьевна: автореферат дис.... канд. биол. наук. - Казань, 2007. — 26 с.

31. Вейант, Р. Определитель нетривиальных патогенных грамотрицательных бактерий / Р. Вейант, У. Мосс, Р. Уивер, Д. Холлис и др. - М.: Мир, 1999. - 791 с.

32. Вейсман, И.Ш. Предпосылки комплексной оценки физиологического состояния бактерий и их популяция / И.Ш. Вейсман // Микробиология. - 1984. -№4.-С. 3-8.

33. Вершаков, Д.С. Приборы для культивирования микроорганизмов / Д.С. Вершаков, Е.А. Сидоров, Б.В. Нестеров // Биофиз. микробов и биоинженерия: сборник - М., 1976.-С. 101-108.

34. Виестур, У.Е. Культивирование микроорганизмов / У.Е. Виестур, М.Ж. Кристапсонс, Е.С. Былинкина. - Л.: Пищевая промышленность, 1980. - 231с.

35. Винник, А.Л. Питательная среда для выделения и культивирования пневмококков /А.Л. Винник, А.К. Баргина, З.И. Ершова // ЖМЭИ. - 1985. - №8. -С. 19-21.

36. Виноградова, И.Н. Использование протеолитических ферментов плесневых грибов в производстве питательных сред для глубинного выращивания / И.Н. Виноградова // Научные основы производства вакцин и сывороток. - М., 1955.-С. 83-87.

37. Виноградова, И.Н. Новые питательные среды и их применение в производстве бактериальных препаратов / И.Н. Виноградова // Проблемы эпидемиологии и микробиологии. - 1959. - №2. - С. 141-152.

38. Власова, В.Е. Получение анатоксина С/, ocdematiens на питательной среде из гидролизата казеина и изучение его антигенных и иммуногенных свойств / В.Е. Власова, И.Н. Виноградова, H.A. Палкина // Микробиология. -I960.-№2.-С. 108-114.

39. Волик, Е.К. Глубинный способ выращивания бактериальных культур для получения биопрепаратов / Е.К. Волик, В.А. Плотникова //Труды контр, инта ветеринарных препаратов. - М., 1954. - №3. - С. 241-250.

40. Воронкина, И.М. Казеиновая среда для дизентерийного бактериофага / И.М. Воронкина // Сб. тр. Горьковского ин-та эпидемиол. и гигиены - Горький, 1959.-№4.-С. 125-128.

41. Гаврилов, В.А. Иммуногенность сибиреязвенной вакцины из штамма 55-ВНИИВВиМ, изготовленной на плотной питательной среде и реакторным способом / В.А. Гаврилов, Ю.В. Числов // Науч. основы техн. пром. производства вет. биол. препаратов: тезисы докладов V Всеросс. конф. - Щелково, 1996. -С. 176-177.

42. Галиакберова, Н.И. Влияние посевного материала на выход бактериальной массы при глубинном культивировании сальмонелл/ Н.И. Галиакберова, A.M. Алимов // Тезисы докл. научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. - Казань, 2001.-С. 24-26.

43. Галиакберова, Н.И. Изыскание питательной среды и оптимизация условий культивирования сальмонелл / Н.И. Галиакберова, A.M. Алимов, Х.Н. Макаев // Научные основы производства вет. биол. препаратов: сборник докладов Междунар. конф. молодых ученых. - Щелково, 2001. - С. 103-106.

44. Галиакберова, Н.И. Изыскание питательной среды и оптимизация условий культивирования сальмонелл / Галиакберова Нажия Ильдаровна: автореферат дис.... канд. биол. наук. - Казань, 2002. - 18 с.

45. Галиакберова, Н.И. Оптимизация условий культивирования сальмонелл на питательной среде из ферментативного маточно-плацентарного гидролизата / Н.И. Галиакберова, A.M. Алимов, Х.Н. Макаев // Вет. патология. -2003.-№1.-С. 147-149.

46. Галиуллина, Э.Р. Ростовые свойства ГПЭМ для различных штаммов бруцелл / Э.Р. Галиуллина, Р.Я. Гильмутдинов, A.M. Фомин // Матер. Всерос. научно-практич. конф. по акт. проблемам агропром. комплекса. - Казань, 2004. — 4.1.-С. 26-27.

47. Галиуллина, Э.Р. Ростовые характеристики питательных сред на основе гидролизата матки яловых коров для различных штаммов бруцелл / Э.Р. Галиуллина, Р.Я. Гильмутдинов, A.M. Фомин // Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных: материалы Международной научной конференции. - Ульяновск, 2006. - С. 46-49.

48. Галиуллина, Э.Р. Использование плацентарно-эмбрионально-маточного гидролизата для культивирования различных микроорганизмов (на примере бруцелл) / Галиуллина Эльвира Равиловна: автореферат дис.... канд. биол. наук. - Казань, 2006. - 18 с.

49. Гаффаров, Х.З. Ассоциированная вакцина против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / Х.З. Гаффаров, А.В. Иванов, Г.Н. Спиридонов, JI.UI. Дуплева, J1.B. Валебная, М.А. Ефимова // Ветеринария. - 2008. - № 5. - С. 18-22.

50. Гаффаров, Х.З. Инфекционного кератоконъюнктивит крупного рогатого скота / Х.З. Гаффаров, А.В. Иванов, JI.B. Валебная, Г.Н. Спиридонов, JI.III. Дуплева и др. // Ветеринария. - 2007. - №12. - С. 21-24.

51. Гаффаров, Х.З. Инфекционный кератоконнъюнктивит крупного рогатого скота в регионе Среднего Поволжья и Предуралья / Х.З. Гаффаров, Л.В. Валебная, Г.Н. Спиридонов // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: материалы Междунар. науч.- практ. конференции. -Воронеж, 2002. - С. 188-191.

52. Гаффаров, Х.З. Морфологические и биохимические свойства штамма Moraxella bovis - возбудителя инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / Х.З. Гаффаров, Г.Н. Спиридонов, JI.B. Валебная // Современные проблемы животноводства: материалы Междунар. конф., посвящ. 70-летию образования зооинженерного факультета. - Казань, 2000. - С. 35.

53. Гаффаров, Х.З. Эпизоотологические и этиологические аспекты инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / Х.З. Гаффаров, Д.М. Миннахметов, Г.Н. Спиридонов, Ф.Ш. Акмалов, A.B. Иванов. - Матер. Междунар. науч. конф., посвящ. 125-летию академии. — Казань, 1998.-Ч. 1.-С. 29-31.

54. Гринь, С.А. Современные биотехнологические процессы и иммунологические методы при промышленном производстве ветеринарных препаратов / Гринь Светлана Анатольевна: автореферат дис.... докт. биол. наук. - * Щелково, 2008.-51 с.

55. Громов, В.П. Риккетсиозный конъюнктивит крупного рогатого скота / В.П. Громов, И.И. Вершинин, H.A. Подшивалов // Ветеринария. - 1963. - № 8. -С. 33-34.

56. Гунин, М.А. Модель клеточного цикла при культивировании в биореакторах / М.А. Гунин, Е.А. Рубан // Науч. основы проиводства вет. биол. препаратов: сборник докладов Междунар. конф. молодых ученых. - Щелково, 2001.-С. 114-116.

57. Дерябина, JI.A. Плацента человека как перспективный источник для получения белковых гидролизатов /JI.A. Дерябина: автореф. дис.... канд. мед. наук. - Рига, 1971. - 22 с.

58. Джавец, Э. Руководство по медицинской микробиологии / Э. Джавец, Д.Л. Мельник, Э.А. Эйдельберг. - М.: Медицина, 1982. - С. 366-368.

59. Дженсен, Р. Болезни крупного рогатого скота при промышленном откорме / Р. Дженсен, Д. Маккей. - М.: Колос. - 1977. - 358 с.

60. Доронин, А.Н. Разработка состава новых питательных сред для глубинного культивирования Bacillus subtilis 3 и Bacillus licheniformis 31 в

производстве биоспорина в различных лекарственных формах / А.Н. Доронин, Н.В. Федорова, В.И. Сабурова, Н.И. Пономаренко // Диагностика, лечение и профилактика инфекционных заболеваний. Биотехнология. Ветеринария: материалы юбилейной науч. конф., посвященной 50-летию Центра военно-технических пролем биол. защиты НИИ микробиологии МО РФ. -Екатеринбург, 1999.-С. 58-59.

61. Дуплева, Л.Ш. Разработка и оценка эффективности вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота на основе антигенов бактерий Moraxella bovis и герпесвируса типа 1 / Дуплева Лилия Шамилевна: автореферат дис.... канд. биол. наук. - Казань. - 2009. - 19 с.

62. Егоров, A.M. Теория и практика иммуноферментного анализа / A.M. Егоров, А.П. Осипов, Б.Б. Дзантиев, Е.М. Гаврилова. - М.: Высшая школа, 1991.-288 с.

63. Блинов, Н.П. Химическая микробиология / Н.П. Блинов. - Л.: Высшая школа, 1989. - 447 с.

64. Блинов, Н.П. Основы биотехнологии / Н.П. Блинов. - М.: Наука, 1995.-600 с.

65. Еремец В.И. Технология производства и испытание иммунобиологических свойств вакцины против геморрагической септицемии (аэромоноза) рыб / В.И. Еремец, Е.Э. Школьников, Г.Ф. Коломнина, И.В. Павленко // Научные основы производства и обеспечения качества биологических препаратов для АПК: материалы Междунар. науч.- практ. конф. - Щелково, 2012. -С. 355-360.

66. Заерко, В.И. Производство живых вакцин против сальмонеллеза животных на питательных средах из непищевого сырья / В.И. Заерко: автореферат дис... канд. вет. наук. -М., 1996. - 18 с.

67. Иванов, A.A. Перспективы федерального центра в области нанобиотехнологий / А. А. Иванов // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. Казань, 2011. - Т. 203. - С. 68-69.

68. Иванов, A.B. Этиология и специфическая профилактика инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / A.B. Иванов, Х.З. Гаффаров, JI.B. Валебная // Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний. - Казань, 2005. - Ч. 2. - С. 155-161.

69. Иванов, A.B. Этиология и патогенез инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / A.B. Иванов, Х.З. Гаффаров, Г.Н. Спиридонов с соавт. // Ветеринарный врач. - Казань. - 2005. - №4. - С. 22-27.

70. Иванов, A.B. Иммуноферментная диагностика инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / A.B. Иванов, Н.В. Саттарова, Г.Н. Спиридонов и др. // Актуальные вопросы ветеринарной медицины Сибири: материалы Междунар. научно-практич. конф., посвящ. 70-летию со дня основания Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока. -Краснообск, 2010. - С. 87-91.

71. Иванов, A.B. Федеральный центр в области биотехнологий / A.B. Иванов, А.Н. Чернов // Международная научно-практич. конференция фармацев. и медиц. биотехнологии. - Москва, 2012. - С. 300-301.

72. Иванов, В.Н. Клеточный цикл микроорганизмов и гетерогенность их популяций / В.Н.Иванов, Г.А. Угодчиков. - Киев: Наукова Думка, 1984. - 157 с.

73. Иерусалимский, Н.Д. Основы физиологии микробов / Н.Д. Иерусалимский. - М.: Из-во АН СССР, 1963. - С. 242-244.

74. Кадыров, A.A. К эпизоотологии риккетсиозного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота в Азербайджане / А.А.Кадыров // Тр. Азербайджанского НИВИ. - 1968. - Т. 23. - С. 53-54.

75. Какоулин, Т.Е. Инфекционный кератоконъюнктивит телят в Иркутской области / Т.Е.Какоулин // Сб. науч. тр. - Иркутск, 1982. -С. 73-75.

76. Камалов, Г.Х. К технологии производства биомассы бруцелл штамма 82 в глубинных условиях культивирования / Г.Х. Камалов, Е.К. Акимов,

*

Р.Г. Габидуллина // Науч. основы техн. пром. производства вет. биол. препаратов: тезисы докладов V Всеросс. конф. - Щелково, 1996. - С. 113.

77. Караджов, Я.Н. Бактериални кератоконюнктивити / Я.Н. Караджов // Заразен кератоконюнктивит по домашните животни при промишленото им отглеждане. - София, 1979. - С. 15-25; 53-59.

78. Карайченцев, В.Н. Инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота, вызываемый Moraxella Bovis (лабораторная диагностика, специфическая профилактика) / Карайченцев Виктор Николаевич: автореферат дис. на соиск. учен. степ, д-ра ветеринар, наук. - Москва, 2005. - 43 с.

79. Карайченцев, В.Н. Характеристика Moraxella bovis выделенных от крупного рогатого скота / В.Н. Карайченцев // Возрастная физиология и патология с.-х. животных: материалы Международной научной конференции, посвященной 90-летию профессора В.Р.Филиппова. - Улан-Удэ, 2003. - Ч. 2. - С. 118-119.

80. Карайченцев, В.Н. Изоляция Moraxella bovis от молодняка крупного рогатого скота при инфекционном кератоконъюнктивите / В.Н. Карайченцев, Г.В.Дунаев, А.Ф.Русинов, О.В.Бабенко // Ветеринария. - 1992. - №2. -С. 26-27.

81. Кириллова, В.В. Токсичность и иммуногенность производственных штаммов Salmonella typhimurium, выращенных в реакторе / В.В. Кириллова //Тр. Всесоюз. гос. научн.- контр, ин-та ветпрепаратов. - 1978. -Т. 27. - С. 57-60.

82. Клыков, С.П. Культивирование Pasteurella multocida на средах, приготовленных из ферментативных гидролизатов рыбно-костной муки, крови и казеина / С.П. Клыков, В.П. Чупрунов, М.М Садиков и др. // Науч. основы техн. пром. производства вет. биол. препаратов: тезисы докладов V Всеросс. конф. -Щелково, 1996.-С. 127.

83. Ковалева, Н.И. Закономерности размножения бактерий кишечно-тифозной группы на синтетических средах в глубинных культурах с аэрацией / Н.И. Ковалева, A.B. Яковлева//Микробиология. - 1960. - №6. - С. 31-34.

84. Комоско, Г.В. Разработка питательной среды на основе панкреатического гидролизата казеина для глубинного культивирования клеток

сибиреязвенного вакцинного штамма СТИ-1 / Г.В. Комоско, А.В. Комиссаров, Е.В. Белова и др. // Диагностика, лечение и профилактика опасных инфекционных заболеваний. Биотехнология. Ветеринария: материалы юбилейной науч. конф., посвященной 70-летию НИИ микробиологии МО РФ. - Киров, 1998. - С. 294.

85. Коротеева, Л.А. Культивирование сальмонелл в питательных средах на основе гидролизата сухого белкового концентрата /Л.А. Коротеева, Л.В. Анисимова, А.А. Раевский, Е.В. Исаев и др. // Науч. основы производства вет. биол. препаратов: материалы Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 35-летию института. - Щелково, 2005. - С. 329-332.

86. Коротеева, Л.А. Питательные среды на основе ферментативного казеиново-дрожжевого гидролизата (ФКДГ) для культивирования вакцинных штаммов колибактерий и пастерелл /Л.А. Коротеева: автореферат дис.... канд. биол. наук. - Л.: 1984. - 22 с.

87. Лебедев, Н.Е. Новые методы выращивания микроорганизмов и изготовление бактериальных препаратов / Н.Е. Лебедев: автореферат дис... докт. наук. - 1950. -18 с.

88. Лиморенко, А.П. Разработка технологии глубинного способа культивирования микроорганизмов В. БиЫШй и В. Пскет/огт1з для производства пробиотиков / Лиморенко Анатолий Петрович: автореферат дис... канд. биол. наук. - 2002. - 22 с.

89. Макаев, Х.Н. Сравнительная оценка эффективности питательной среды на основе ФГМПЭМ при различных условиях культивирования Г.песгоркогит / Х.Н. Макаев, В.В. Сабирова // Биотехнология: токсикологическая, радиационная и биологическая безопасность: материалы Междунар. научно-практич. конф., посвящ. 50-летию Федерального Центра токсикологической, радиационной и биологической безопасности. - Казань, 2010. - С. 416-419.

90. Мамлеева, Н.К. Видовые различия протесолитической активности панкреатической железы, используемой в производстве бактериальных питательных сред / Н.К. Мамлеева, С.Х. Хаертынов // Вопросы инфекционной патологии животных: межвуз. сборник научных трудов. - Казань, 1994. - 66 с.

91. Матвеев, К.И. Ботулизм / К.И. Матвеев. - Л.: Медгиз, 1959. -150 с.

92. Мельникова, В. А. Патология и физиология микробов / В.А. Мельникова, И.А. Баснакьян, Т.К. Рыжникова // Микробиология. - 1984. -№1. - С. 42-46.

93. Меныненин, В.В. Питательная среда для промышленного культивирования F. necrophorum / B.B. Меныненин, Е.Г. Ловченко, О.И. Соломаха // Ветеринария. - 1997. - №3. - С. 27-28.

94. Меныненин, В.В. Оптимизация питательной среды и условий культивирования сальмонелл / В.В. Меньшенин, Е.Э. Школьников // Науч. основы производства вет. биол. препаратов: материалы Междунар. науч.- практ. конф., посвящ. 40-летию института. - Щелково, 2009. - С. 373-375.

95. Огнянов, Д.К. Хламидиален (неориккетсиозен) кератоконюнктивит / Д.К.Огнянов // Заразен кератоконюнктивит по домашните животни при промишленото им отглеждане. - София, 1979. - С. 5-15.

96. Озеренко, O.A. Математическое моделирование процессов глубинного периодическом культивирования аэробных микроорганизмов / O.A. Озеренко, Е.А. Рубан, A.A. Раевский, А.Я. Самуйленко // Ветеринарная биотехнология: Настоящее и Будущее: материалы Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 80-летию ФГУП « Щелковский биокомбинат». - Щелково, 2004. - С. 186189.

97. Орлов, Ф.М. Малоизвестные заразные болезни животных / Ф.М. Орлов. -М.: Колос. - 1973. - С. 202-206.

98. Османова, М.М. Культивирование гонококка в жидких питательных средах / М.М. Османова, В.Н. Беднова, Г.А. Дмитриева и др. // ЖМЭИ. -1987. -№2. - С. 3-6.

99. Панин, Г.Ф. Труды Вологодского молочного ин-та / Г.Ф. Панин // 1953.-С. 125-135.

100. Панкова, Г.Е. Испытание ростовых свойств питательных сред и биологически активных компонентов отечественного производства для культур клеток /Т.Е. Панкова, Л.П. Дьяконов //Труды ВИЭВ. - 1981. -Т. 53. -С. 78-81.

101. Перт, С.Д. Основы культивирования микроорганизмов и клеток / С.Д. Перт. - Л.: Мир, 1978. - 332 с.

102. Плахотин, М.В. К диагностике, лечению и профилактике риккетсиозного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота / М.В.Плахотин, В.И.Захаров, Р.С.Аллахвердиев // Ветеринария. - 1966. - № 9. -С. 33-36.

103. Поздеев, O.K. Медицинская микробиология / O.K. Поздеев - М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. - 778 с.

104. Поляченко, В.М. Конструирование питательной среды для бактерий рода Haemophilus - продуцентов рестрактирующих эндонуклеотид /В.М. Поляченко, В.А. Мельникова, И.М. Грубер, Г.А. Смирнова, Б.М. Раскин // ЖМЭИ. - 1988. - №3. - С. 3-8.

105. Потехин, A.B. Динамика накопления гемолизина в процессе ■ культивирования штамма «1-1» Actinobacillus pleuropneumoniae первого серотипа / A.B. Потехин, Н.В. Лебедев, B.C. Русалеев, Е.С. Орлова // Веткорм. - 2010. - №6. -С. 48-49.

106. Работнова, И.Л. Об изучении физиологического состояния исследуемых микроорганизмов / И.Л. Работнова // Микробиология. - 1980. - Т.49. --Вып. 4.-С. 634-638.

107. Работнова, И.Л. Проблемы культивирования микроорганизмов в СССР за 60 лет / И.Л. Работнова // Микробиология. - 1977. - С. 46-48.

108. Работнова, И.Л. Теория и практика непрерывного культивирования: сборник / И.Л. Работнова. - М., 1980. - С. 220-222.

109. Работнова, И.Л. Процессы культивирования микроорганизмов / И.Л. Работнова, И.А. Баснакьян, В.М. Боровкова и др. // Изв. АН СССР. Сер. Биол. - 1982. - №4. - С. 559-573.

110. Равилов, А.З. Микробиологические среды. /А.З. Равилов, Р.Я. Гильмутдинов, М.Ш. Хусаинов. - Казань: ФЭН, 1999. - 398 с.

111. Раевский, А.А Разработка и испытание ассоциированной вакцины против инфекционных пневмоний свиней бактериальной этиологии

/ A.A. Раевский, В.И. Еремец, JI.B. Анисимова, JI.A. Коротеева и др. // Ветеринарная биотехнология: Настоящее и Будущее: материалы Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 80-летию ФГУП « Щелковский биокомбинат» — Щелково, 2004. - С. 174-177.

112. Раевский, A.A. Изготовление и результаты испытаний вакцин из непрерывных (хемостатных) культур пастерелл / A.A. Раевский, Г.П. Дубинина, М.Я. Ярцев, Л.В. Анисимова // Науч. основы техн. пром. производства вет. биол. препаратов: тезисы докладов V Всеросс. конф. -Щелково, 1996.-С. 95.

113. Раевский, A.A. Исследование и разработка управляемого процесса культивирования стрептококков / A.A. Раевский, Л.В. Анисимова, Л.А. Коротеева, Н.Б. Бушуева и др. // Ветеринарная биотехнология: Настоящее и Будущее: материалы Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 80-летию ФГУП « Щелковский биокомбинат». - Щелково, 2004. - С. 200-203.

114. Раевский, A.A. Усовершенствование технологии изготовления сухой живой вакцины против сальмонеллеза телят из штамма С.дублин № 160 / A.A. Раевский, Л.В. Анисимова, М.Я. Ярцев, И.В. Павленко // Науч. основы техн. пром. производства вет. биол. препаратов: тезисы докладов V Всеросс. конф. - Щелково, 1996. - С. 96.

115. Рубан, Е.А. Гибкая блочно-модульная система глубинного культивирования микроорганизмов, клеток животных и вирусов / Е.А. Рубан, А.Я. Самуйленко // Науч. основы техн. пром. производства вет. биол. препаратов: тезисы докладов V Всеросс. конф. - Щелково, 1996. - С. 240-241.

116. Русалеев, B.C. Глубинное культивирование бактерий Haemophilus parasuis / B.C. Русалеев, В.М. Гневашев, О.В. Прунтова и др. // Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний. - Казань, 2005. - Ч. 2. - С. 293-296.

117. Русинов, А.Ф. Дифференциальная диагностика массовых кератоконъюнктивитов у крупного рогатого скота / А.Ф.Русинов. - Матер, всесоюз. конф. по вопросам вет. хирургии. - Ленинград. - 1967. - С 270-276.

118. Русинов, А.Ф. Инфекционный кератоконъюнктивит у крупного рогатого скота / А.Ф.Русинов // Информ. бюлл. Укр. акад. аграр. наук. Ин-т эксперим. клинич. вет. медицины. - 1995. - С. 31-32.

119. Рязанова, J1.A. Совершенствование питательных сред для выделения возбудителей болезней, предающихся половым путем. Сообщение I. Питательная среда из ферментативных гидролизатов серии «Бактофок» для выделения гонококков / JI.A. Рязанова, Е.С. Гришович, В.Н. Беднова, Т.Н. Данилова // Вестник дерматологии и венерологии. - 1991. - №11. - С. 19-20.

120. Сабирова, В.В. Влияние питательных сред на рост некробактерий в суспензионных условиях / В.В. Сабирова, Е.К. Акимов, Х.Н. Макаев // Ветеринарная биотехнология: Настоящее и Будущее: материалы Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 80-летию ФГУП « Щелковский биокомбинат». -Щелково, 2004. - С. 206-209.

121. Сабирова, В.В. Непрерывное глубинное культивирование бактерий Fusobacterim necrophorum / В.В. Сабирова, Х.Н. Макаев // Биотехнология: токсикологическая, радиационная и биологическая безопасность: материалы Междунар. научно-практич. конф., посвящ. 50-летию Федерального Центра токсикологической, радиационной и биологической безопасности. - Казань, 2010. - С. 462-465.

122. Самуйленко, А.Я. Основы биотехнологии производства биологических препаратов. (Теоритические основы, оборудование, технологические линии). / А.Я. Самуйленко, Е.А. Рубан. - Москва, 2000. -Т.1. -376 с.

123. Самуйленко, А.Я. Основные достижения биотехнологии в области производства биопрепаратов / А.Я. Самуйленко, В.И. Еремец, Е.А. Рубан и др. // Науч. основы проиводства вет. биол. препаратов: сборник докладов Междунар. конф. молодых ученых. - Щелково, 2001. - С. 3-6.

124. Самуйленко, А.Я. Перспективы развития современного производства бактерийных вакцин / А.Я. Самуйленко, В.В. Меныпенин, Е.Э. Школьников //

Науч. основы производства вет. биол. препаратов: материалы Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 40-летию института - Щелково, 2009. - С. 358-359.

125. Самуйленко, А .Я. Перспективные направления в технологии культивирования бактерий при производстве вакцин для ветеринарной медицины / А.Я. Самуйленко, A.A. Раевский, Е.Э. Школьников, J1.B. Анисимова и др. // Науч. основы производства вет. биол. препаратов: материалы Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 35-летию института. - Щелково, 2005. - С. 298-301.

126. Саттарова, Н.В. Разработка набора реагентов для определения специфических антител к бактериям Moraxella bovis иммуноферментным методом / Н.В. Саттарова, Г.Н. Спиридонов, J1.B. Валебная // Ветеринария и кормление. -2010.-№6.-С. 55-56.

127. Сидоров, М.А. Определитель зоопатогенных микроорганизмов: справочник / М.А. Сидоров, Д.И. Скородумов, В.Б. Федотов. - М.: Колос, 1995. -С. 169-176.

128. Сидорчук, A.A. Инфекционный (риккетсиозный) кератоконъюнктивит (парофтальмит) / A.A. Сидорчук, A.A. Глушков // Ветеринария с.-х. животных. -2005.-№7.-С. 18-20.

129. Ситьков, В.И. Совершенствование технологии реакторного метода, выращивания лептоспир / В.И. Ситьков // Науч. основы техн. пром. производства вет. биол. препаратов: тезисы докладов V Всеросс. конф. - Щелково, 1996. -С. 110-111.

130. Скородумов, Д.И Актинобациллезная (гемофилезная) плевропневмония и гемофилезный полисерозит свиней: этиология, лаборатор. диагностика, основы специф. профилактики актинобациллез. Плевропневмонии / Скородумов Дмитрий Иванович: автореферат дис.... докт. вет. наук. - Москва, 1997.-41 с.

131. Скородумов, Д.И. Микробиологическая диагностика бактериальных болезней животных / Д.И. Скородумов, В.В. Субботин, М.А. Сидоров и др. - М.: Изографъ, 2005. - 656 с.

132. Смирнов, B.B. Рост и спорообразование Bacillus subtillis в различных условиях аэрации / В.В. Смирнов, А.И. Осадчая, В.А. Кудрявцев // Микробиолог, журнал. - 1993. - т.55. - № 3. - С. 38-43.

133. Спиридонов, Г.Н. Инфекционный кератоконьюнктивит крупного рогатого скота / Г.Н.Спиридонов // Проблемы профилактики и борьбы с особо опасными, экзотическими и малоизученными инфекционными болезнями животных: труды Международной научно-производственной конф. - Покров, 2008.-С. 195-197.

134. Стейниер, Р. Мир микробов / Р. Стейниер, Э. Эдельберг, Дж. Ингрэм. - М.: Мир, 1979. -Т. 1. - С. 318.

135. Степин, A.A. Получение биомассы бацилл методом глубинного периодического культивирования / A.A. Степин, В.М. Самыгин, И.В. Владимцева, В.П. Кухтин и др. // Биотехнология. - 1994. - №3. - С. 31-33.

136. Студенцов, А.П. Ветеринарное акушерство и гинекология /А.П. Студенцов, B.C. Шипилов, А.Г. Субботина, О.Н. Преображенский. - JL: Агропромиздат, 1989. - 480 с.

137. Тарасов, В.Н. Серия микробиология. Итоги науки и техники. Аппаратура для культурально-технических процессов в микробиологии / В.Н. Тарасов. - Л., 1984. - Т. 14. - 305 с.

138. Телишевская, Л.Я. Белковые гидролизаты. /Л.Я. Телишевская. - Л., 2000.-295 с.

139. Тец, В.В. Фазовые изменения в периодических бактериальных культурах / В.В. Тец, Г.Д. Каминский // Микробиология. -1984. - № 8. - С. 24-30.

140. Тихонов, И.В. Биотехнология / И.В. Тихонов, Е.А. Рубан, Т.Н. Грязнева и др.; под ред. Е.С. Воронина. - СПб.: ГИОРД, 2005. - 792 с.

141. Торбина, М.П. Питательная среда для выращивания бруцелл на основе гидролизатов плацентарно-эмбрионально-маточного материала коров / М.П. Торбина, Г.А. Белозерова, Р.Я. Гильмутдинов // Науч. основы техн. пром. производства вет. биол. препаратов: тезисы докладов V Всеросс. конф. -Щелково, 1996.-С. 115.

142. Фомин, К.А. Инфекционный кератоконъюнктивит / К.А.Фомин // Глазные болезни животных. - М.: Колос, 1968. - С. 168-176.

143. Хаертынов, С.Х. Новые бактериологические и питательные среды для культивирования микроорганизмов / С.Х. Хаертынов, В. А. Никитина, М.П. Торбина. - Казань, 1991. - С. 22-24.

144. Хазипов, Н.З. Биологические свойства бруцелл, выращенных суспензионным методом культивирования / Н.З. Хазипов, Р.Г. Габидуллина,

B.П. Корунов // Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных, биологических препаратов: тез. докл. Всесоюзн. конф. - М., 1978. —

C. 169-170.

145. Хватов, Б.П. Строение и физиологические изменения половой системы самок домашних животных / Б.П. Хватов. - JL: Симферополь, 1955. -53 с.

146. Хиггинс, И. Биотехнология: Принципы и применение / Под. ред. И. Хиггинса. - М.: Мир, 1988.-240 с.

147. Черванев, В.А. Массовые болезни глаз у крупного рогатого скота и их диагностика / В.А. Черванев, Б.Н. Алтухов // Матер, координац. совещ. -Воронеж, 1995.-С. 186-188.

148. Чернышов, A.B. Подбор питательной среды и условий культивирования Ornitobacterium rhinotracheale / A.B. Чернышов, О.И. Ручнова, О.В. Прунтова // Веткорм. - 2010. - №6. - С. 52-53.

149. Шафоростова, Л.Д. Неравномерный рост Е. coli при периодическом культивировании /Л.Д. Шафоростова, Э. Стейскалова, Э. Павлосова, Б. Бегал, С. Нечанова // Микробиология. - 1975. - №44. - С. 780-785.

150. Шафоростова, Л.Д. Особенности роста периодической культуры Вас. megaterium /Л.Д. Шафоростова // Микробиология. - 1971. - Т.40. - №3. - С. 397401.

151. Шептун, Н.Г. Биологические обоснования к получению и использованию гидролизатов фибрина и отходов производства препаратов

иммуноглобулинов / Н.Г. Шептун: автореф. дис.... канд. биол. наук. - Воронеж, 1989.-22 с.

152. Школьников, Е.Э. Разработка технологии получения гемофилезного антигена для иммунизации продуцентов / Е.Э. Школьников, Г.Ф. Коломнина, Е.В. Исаев, JI.B. Анисимова и др. // Науч. основы производства вет. биол. препаратов: материалы Междунар. науч.- практ. конф., посвящ. 35-летию института. — Щелково, 2005. - С. 396-399.

153. Школьников, Е.Э. Усовершенствование питательной среды и условий культивирования бактерии рожи свиней / Е.Э. Школьников, A.JI. Самуйленко, В.И. Еремец, Н.А.Моисеева, В.В. Меныненин // Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзот. и зооантропоноз. болезнями животных: материалы Междунар. науч.- практ. конф.: сб.статей. - Покров, 2000. - С. 251-252.

154. Швецов, С.А. Изучение динамики лизиса микробных клеток В. antracis вакцинного штамма СТИ-1 при глубинном выращивании культур / С.А. Швецов, А.Н. Швецов, A.B. Чернядьев и др. // Диагностика, лечение и профилактика инфекционных заболеваний. Биотехнология. Ветеринария: материалы юбилейной науч. конф., посвященной 50-летию Центра военно-технических пролем биол. защиты НИИ микробиологии МО РФ. - Екатеринбург, 1999.-С. 291.

155. Шлегель, Г. Общая микробиология / Г. Шлегель.- Л.: Мир, 1987. -

567 с.

156. Шмелева, Е.И. Перспективы изучения штаммов патогенных микроорганизмов, применяемых при производстве бактерийных препаратов / Е.И. Шмелева //Сб. тр. центр, науч.-исслед. ин-та вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова. - М., 1987. - №14317. - С. 2-18.

157. Эльце, К. Болезни молодняка с.-х. животных / К.Эльце, Х.Мейер, Г.Штейнбах. - М.: Колос, 1977. - С. 96-98.

158. Ярцев, М.Я. Состояние и перспективы производства бактериальных вакцин на основе современных технологий / М.Я. Ярцев // Науч. основы техн.

пром. производства вет. биол. препаратов: тезисы докладов V Всеросс. конф. — Щелково, 1996. - С. 93-94.

159. Ярцев, М.Я. Технология промышленного производства вакцин / М.Я.Ярцев, Н.Б. Бушуева, А.А. Раевский, J1.B. Анисимова и др. // Ветеринария. -1998.-№3.-С. 22-24.

160. Abd el-Samea, М.М. Study on infectious keratoconjunctivitis in cattle and buffaloes / M.M. Abd el-Samea, A.A. Abou Zaid Bakr, M.F. el Mekkawy// Assiut veter. med. J. - 1993. - Vol.30. - № 59. - P. 178-187.

161. Allen, J.A. A Preliminary Note on Infectious Keratitis / J. A. Allen // J. Am. Vet. Med. Ass. - 1919. - V. 54. - P. 307-313.

162. Aly, S.M. Bacteriological studies on infectious keratoconjunctivitis in dairy calves / S.M. Aly, M.A. Mohammed // Assuit Vet. Med. J. - 1995. -V.32. - №63. - P. 89-95.

163. Arora, A.K. Toxic effects of Moraxella bovis and their relationship to the pathogenesis of infectious bovine keratokonjunktivitis / A.K.Arora // Vet. Arhiv. -1982.-V. 52,-№2.-P. 175-182.

164. Arora, A.K. Bacteriologic and vaccination studies in field epizootic of infectious bovine keratoconjunctivitis in calves / A.K. Arora, A.H. Killinger, M.E. Mansfield // Am. J. Vet. Med. Ass. - 2003. - V. 37. - P. 803-805.

165. Arora, A.K. Serological studies in hemolytic and nonhemolytic types of Moraxella bovis employing a gel diffusion precipition test / A.K. Arora // Acta Vet. -1980. -V. 30. -P. 211-216.

166. Atwell, J.L. Characterization of pilin genes from seven serologically defined prototype strains of Moraxella bovis / J.L. Atwell, J. M. Tennent, A. W. Lepper, and Т. C. Elleman // J. Bacteriol. - 1994. -T.176. - V. 16. - P. 48754882.

167. Axenfeld, T. Uber die chronishe Diplobacillenconjunctivitis / T. Axenfeld // Zentralbl. f. Bakt. - 1897. - V. 21. - P. 1-9.

168. Baldwin, E.M. A Study of Bovine Infectious Keratitis / E.M. Baldwin // Am. J. Vet. Res. - 1945. - V. 6. - P. 180-187.

169. Baptista, P. Infection bovine keratoconjunctivitis a review / P.Baptista // Brit. Vet. J. - 1980. -V. 135. - P. 225-242.

170. Barner, R.D. A Study of Moraxella bovis and its Relations to Bovine Keratitis / R.D. Barner // Am. J. Vet. Res. - 1952. - V. 13. - P. 132-144.

171. Barth, T. Isolierung von Moraxella bovis bei Rindern mit Infektiöser Boviner Keratoconjunctivitis / T. Barth, K. Taurek, W. Wittig // Mh. Veter. Med. -1986. - V.41. - №10. - P. 329-330.

172. Batta, M.K. Pink eye disease outbreak among Jersey calves / M.K. Batta, R.C. Katoch, M. Sharma // Indian J. anim. Sc. - 1999. - Vol.69. - № 4. -P. 224-225.

173. Baumann, P. Study of the Moraxella Group / P. Bauman, M. Doudoroff, R.Y. Stanie // Journal of bacteriology. - V.95. - № 1. - P.58-73.

174. Beard, M.K.M. Morphogenese expression of Moraxella bovis fimbriae (pili) in Pseudomonas aeruginosa /M. K. M. Beard, J. S. Mattick, L.J. Moore, M. R. Mott et al. II J. Bacteriol. - 1990. - V.172. - P. 2601-2607.

175. Behrens, O.K. Pertussis vaccine preparation / O.K. Behrens, P.N. Ensminger//Patent№2. -USA. - 1958.-V.l. '-P.167-178.

176. Billings, F.S. Keratitis Contagiosa in Cattle / F.S. Billings // Agr. Exp. Sta. Nebr. - 1899. - V. 10.-P. 112-116.

177. Billson, F.M. Characterization of hemolysin of Moraxella bovis using a hemolysis-neutralizing monoclonal antibody / F.M. Billson, C. Harbour, P. M. Wojtec et al. // Infection and Immunity. - 2000. - V.68. - №6. - P.3469-3474.

178. Bishop, B. Enzyme - linked immunosorbent assay for measurement of mü-Moraxella bovis antibodies / B. Bishop, G.G. Schurig, H.F. Troutt // Am. Vet. Res. J. - 1982. -V. 43.-P. 1443-1445.

179. Brinton, C.C. Vaccine for immunizing cattle against Infectious Bovine Keratoconjunctivitis infection by Moraxella bovis / C.C. Brinton, R.A. Goodnow // European Patent Application. -№0107845, A2; of 05.09.1984.

180. Brown, M.H. Infectious bovine keratoconjunctivitis: a review / M.H. Brown, A.H. Brightman, B.W. Fenwick and M.A. Rider // J. Vet. Int. Med. -1998.-V.12.-P. 259-266.

181. Brown, J.E. Relationship of feeding of face fly {Musca autumnalis DeGeer) to production of keratoconjunctivitis in calves / J.E. Brown, T.R. Adkins // Am. J. Vet. Res. - 1972. -V.33. - P. 2551-2555.

182. Bryan, H.S. Some Bacteriologic and Ophthalmologic Observations on Bovine Infectious Keratoconjunctivitis in an Illinois Beef Herd / H.S. Bryan, L.C. Helper, A.H. Killinger, H.E. Rhoades, H.E. Mansfield // J. of Amer. Vet. Med. Assoc. - 1973. - V. 163. - № 7. - P. 739-741.

183. Burns, M.J. Assessment of methodological quality and sources of variation in the magnitude of vaccine efficacy: A systematic review of studies from 1960 to 2005 reporting immunization with vaccines in young cattle / M.J. Burns, A.M. OConnor // Vaccine. - 2008. - V.26. - P. 144-152.

184. Canham, A.S. Ophthalmia in Cattle / A.S. Canham // Vet. J. - 1923. - V. 79.-P.389.

185. Clarke, D.H. The phenomenon of in vitro hemolysis produced by the rickettsiae of tuphus fever, with a note on the mechanism of rickettsial toxicity in mice / D.H.Clarke, J.P.Fox // J. Exp. Med. - 1948. - V. 88. - P. 25-41.

186. Clinkenbeard , K. D. Mechanism of action of Moraxella bovis hemolysin / K. D. Clinkenbeard, A. E. Thiessen // Infect. Immun. - 1999 . - V.59. - P. 1148 - 1152.

187. Conceigao, F.R. Antigenic relationships of Moraxella bovis strains recovered from outbreaks of infectious bovine keratoconjunctivitis in Argentine, Brazil and Uruguay between 1983 and 2000 / F.R. Conceifao, A.L. Cobo, F. Paolichi, C.G. Turnes // Can. J. Vet. Res. - 2003. - V.67. - P. 315-318.

188. Das, R.G. Incidence of infectious bovine keratoconjunctivitis in an organized exotic farm in Orissa / R.G. Das, R.K. Patnaik, R.P. Misra // Indian J. anim. Health. - 1988. - T. 27. - № 2. - P. 133-135.

189. Davidson, K. Cloudy view of pinkeye vaccines / K. Davidson // Cattlemen beef mag. - 1986. - V. 49. - № 2. - P. 30, 32.

190. Dolezal, I. Physiological characteristics of chemostatically grown Cytobacter freundii as a function of the specific growth rate and type of nutrient limitation / I. Dolezal, F. Kapralek // Folia Microbiol. -1976. -Vol.2. - №3. - P. 165168.

191. Dwight, C. H. Veterinary Microbiology / C. H. Dwight, Y.C. Zee. - 1999. -P. 151-154.

192. Eugster, A.K. Veterinary outlook / A.K. Eugster // Cattleman. - 1984. - T. 7. -№ l.-P. 48, 67.

193. Fluas, J.M. Estimation de 1 état physiologique des microorganisms dans un bioprocede / J.M. Fluas, A. Cherry, M.N. Pons // APII. - 1990. - Vol. 23. - №3. - P. 221-220.

194. Frank, S. K. Hydrolytic enzymes ofMoraxella bovis / S.K. Frank, J. D. Gerber//J. Clin. Microbiol. - 1981. - №13. -P.269-271.

195. Frey, J. Virulence in Actinobacillus pleuropneumonia and RTX toxins / J. Frey // Trends Microbiol. - 1995. - V.3. - P. 257-261.

196. Gallagher, C.H. Investigations of the Etiology of Infectious Ophthalmia of Cattle / C.H. Gallagher // Austral. Vet. J. - 1954. - V. 30. - P. 61-68.

197. George, L.W. Enhancement of infectious bovine keratoconjunctivitis by modified-live infectious bovine rhinotracheitis virus vaccine/ L.W. George, A. Ardans, J. Mihalyi, M.R. Guerra //Am. J. Vet. Res. - 1988. - V.49. - P. 1800-1806.

198. Gray, J. T. Partial characterization of a Moraxella bovis cytolysin / J.T. Gray, P. J. Fedorka - Cray, D. G. Rogers // Vet. Microbiol. - 1995. - №43. - P. 183 -196.

199. Heinrich, D. W. Transcriptional regulation of type 4 pilin genes and the site-specific recombinase gene, piv, in Moraxella lacunata and Moraxella bovis / D. W. Heinrich, A. C. Glasgow // J. Bacteriol. - 1997. -T.179. - V.23. - P. 72987305.

200. Henson, J.B. Infectious bovine keratoconjunctivitis. I. Etiology / J.B. Henson, L.C. Grumbles // Am. J. Vet. Res. - 1960. - V. 21. - P. 761-766.

201. Henson, J.B. Infectious bovine keratoconjunctivitis. II. Susceptibility of laboratory animals to Moraxella (Hemophilus) bovis / J.B. Henson, L.C. Grumbles // Cornell. Vet. - 1960. - V. 50. - P. 445-458.

202. Hoien-Dalen, P. S. Comparative characterization of the leukocidic and hemolytic activity of Moraxella bovis / P.S. Hoien-Dalen, R.F. Rosenbusch, J. A. Roth // Am. J. Vet. Res. - 1990. -V.5. - P. 191-196.

203. Holt, J.G. Bergey's "Manual of Determinative Bacteriology" / J.G. Holt, N.R. Krieg, P.H.A. Sneath, J.T. Staley, S.T. Williams. - Williams and Wilkins Co.; -пер. с англ.; под ред. акад. РАН Г.А.Заварзина. - М.: Мир. - 9-е изд. - 1997. - Т. 1. -С. 94.

204. Hughes, D.E. Comparison of vaccination and treatment in controlling naturally occurring infectious bovine keratoconjunctivitis / D.E. Hughes, RH. Kohlmeier, G.W. Pugh, G.D. Booth // Am. J. Vet. Res. -1979. -V.40. - №2. - P. 241-244.

205. Hughes, D.E. Effects of vaccination with a Moraxella bovis bacterin of the Subsequent Development of Signs of Corneal Disease and Infection with Moraxella bovis in calves under Natural Enviromental Conditions / D.E. Hughes, G.W. Pugh, RH. Kohlmeier // Am. J. Vet. Res. -1976. -V.37. - №11. - P. 1291-1295.

206. Hughes, D.E. Ultraviolet radiation and Moraxella bovis in the etiology of bovine infectious keratoconjunctivitis / D.E. Hughes, G.W. Pugh, T.J. Mc.Donald // Am. J. Vet. Res. - 1965. -V. 26. - P. 1331-1338.

207. Jacinta, L. F. Molecular Characterization of a Secreted Enzyme with Phospholipase В Activity from Moraxella bovis / L.F. Jacinta, A.S. Richard, A.H. Peter et al. //J. Bacteriol. -2001. -T.183. -V.22. - P. 6717-6720.

208. Jackson, F.C. Infectious Keratoconjunctivitis of Cattle / F.C. Jackson // Am. J. Vet. Res.- 1953.-V. 14.-P. 19-25.

209. Juni, E. Defined medium for Moraxella bovis / E. Juni, G.A. Heym // Microbiology. - 1986. - V.52. - №4. - P. 966-968.

210. Kagonyera, G.M. Cytopathic effects of Moraxella bovis on cultured bovine neutrophils and corneal epithelial cells / G.M. Kagonyera, L.W. George, R. Munn // Am. J. Vet. Res. - 1989. - T. 50. - № 1. - P. 10-17.

211. Kagonyera, G.M. Effects of Moraxella bovis and culture filtrates on 51Cr-labeled bovine neutrophils / G.M. Kagonyera, L. George, M. Miller // Am. J. Vet. Res. - 1989.-T. 50.-№ 1.-P. 18-21.

212. Langford, E.V. Characterization of a mycoplasma isolated from infectious bovine keratoconjunctivitis: M.bovoculi sp. nov. / E.V. Langford, R.H. Leach // Canad. J. Microbiol.- 1973,-V. 19.-P. 1435-1444.

213. Leissig, A. Moraxella bovis infectious bovine keratoconjunctivitis steam-killed bacterin / A. Leissig // US patent. - 1968. - №3.401.219.

214. Lepper, A.W.D. The protective efficacy of cloned Moraxella bovis pili in monovalent and multivalent vaccine formulations against experimentally induced infectious bovine keratoconjunctivitis (IBK) / A.W.D. Lepper, J.L. Atwell, P.R. Lehrbach, C.L. Schwartzkoff, J.R. Egerton and J.M. Tennent // Vet. Microbiol. -

1995.-V.45.-P. 129-138.

215. Maidment, D.C.J. Changes in titres of Moraxella bovis - specific IgG in growing cattle / D.C.J. Maidment, D.L. Batty // Brit. Veter. J. - 1986. - V.142. - №1. -P. 65-69.

216. McConnel, C.S. Infectious bovine keratoconjunctivitis antimicrobial therapy / C.S. McConnel, I. Shum and J.K. House // Aust. Vet. J. -2007 - V.85. -P. 65-69.

217. McKercher, D.G. Current status of the newer virus diseases of cattle / D.G. McKercher, J.K. Saito, E.M. Wada, O.X. Straub // Ann. Proc. U.S. Livestock Sanitary Assoc.; 62 nd. - 1958. - P. 136-156.

218. Meiners, M. Analysis of process dynamics in bioreactors / M. Meiners, W. Rupmundt, N. Wania et al. // J. Chem. Techn. Biotehnol. - 1983. - Vol.33. - № 3. -P. 164-176.

219. Miller, R.B. Infectious bovine keratoconjunctivitis: an update / R.B. Miller, W.H. Fales // Veter. Clin. N. America - large Anim. Pract. - 1984. - V.6. -№3. - P. 597-608.

220. Moore, L.J. A unified serotyping scheme for Moraxella bovis / L.J. Moore, A.W.D. Lepper // Vet. Microbiol. - 1991. - V.29. - P. 75-83.

221. Moore, L.J. Attachment of Moraxella bovis to calf corneal cells and inhibition by antiserum / L.J. Moore, J.M. Rutter // Austral. Veter. J. - 1989. - T. 66. -№ 2. - P. 39-42.

222. Moore, L.J. Antigenic analysis of fimbrial proteins from Moraxella bovis / L.J. Moore, J.M. Rutter // J. Clin. Microbiol. - 1987. - V. 11. - P. 2063-2070.

223. Monod, J. The growth of bacterial cultures / J. Monod //Annual Review of Microbiology. - 1949. - V.3. - P. 371-394.

224. Morax, U. Note sur un diplobacille pathogene pour la conjunctive humane / U. Morax // Ann. Inst. Pasteur. - 1896. - № 10. - P. 337-345.

225. Nagy, A. Further data to the aetiology, pathogenesis and therapy of infectious bovine keratoconjunctivitis / A. Nagy, E. Vandersmissen; P. Kapp // Comp. Immunol. Microbiol, infect. Dis. - 1989. - T. 12. - № 4. - P. 115-127.

226. Ostle, A.G. Immunogenicity of Moraxella bovis hemolysin / A.G. Ostle, R.F. Rosenbusch // Am. J. Vet. Res. - 1985. - V.46. - №5. - P. 1011-1014.

227. Pedersen, K.B. Moraxella bovis isolated from cattle with infectious keratoconjunctivitis / K.B. Pedersen // Acta. Path. Mikrobiol. Scand. Section. - 1970. -

B. 78.-P. 429-434.

228. Penberthy, J. Contagiosus Ophthalmia in Cattle / J.Penberty // J. Comp.: Path. A. Therap. - 1897. - V.10. - P. 263.

229. Piscitelli, H.G. Encuesta epidemiológica sobre la queratoconjuntivitis bovina en la provincia de Córdoba / H.G. Piscitelli, G.C. Zielinski // Therios. - 1996. V.25.-P. 235-243.

230. Prieto, C.I. Vaccine against infectious bovine keratoconjunctivitis: A new approach to optimize the production of highly piliated Moraxella bovis cells /

C.I. Prieto, A. Bosch, G. Zielinski et all. // Vaccine. - 2008. - V.26. - P. 6542-6549.

231. Pugh, G.W. Experimental bovine Infectious keratoconjunctivitis caused by Sunlamp Irradiation of Hemolytic Ability and Pathogenicity / G. W. Pugh, W. George, D.E. Hughes // Am. J. Vet. Res. - 1968. - V. 29. - P. 835-839.

232. Pugh, G.W. Infectious bovine keratoconjunctivitis induced by different experimental methods / G.W. Pugh., D.E. Hughes // Cornell. Vet. J. - 1971. - V. 61. -P. 23-45.

233. Pugh, G.W. Infectious bovine keratoconjunctivitis: Evidence for genetic modulation of resistance in purebred Hereford cattle / G.W. Pugh, T.J. Mc.Donald, K.E. Kopecky, W.G. Kvasnicka // Am. J. Vet. Res. - 1986. -V.47. -№4.-P. 885-889.

234. Pugh, G.W. The isolation and Characterization of Moraxella bovis / G.W. Pugh, D.E. Hughes, T.J. Mc.Donald // Am. J. Vet. Res. - 1966. - V. 27. - P. 957962.

235. Reid, J.J. Investigations on Keratoconjunctivitis in Cattle on the Guff Coast of Texas / J.J. Reid, L. Anigstein // Tex. Rep. Biol. Med. - 1945. - V. 3. - P. 187-203.

236. Riley, W.T. Growth requirements for Moraxella bovis / W.T. Riley // Vet. Microbiol. - 1984. - V.9. - P. 593-598.

237. Rogers, D.G. Pathogenesis of Corneal Lesions Caused by Moraxella bovis in Gnotobiotic Calves / D.G. Rogers, N.F. Cheville, G.W. Pugh // Vet. Pathol. - 1987. -V. 24.-№4.-P. 287-295.

238. Rosenbusch, R. The bovine practioner / R.Rosenbusch // Buffalo, New York.- 1985.-V. 20.-P. 150.

239. Ruehl, W.W. Purification, characterization and pathogenicity of Moraxella bovis pili / W.W. Ruehl, C.F. Marrs, R. Fernandez, S. Falkow and G.K. Schoolnik // J. Exp. Med. - 1988. -V.168. - P. 983-1002.

240. Sandhu, T.S. Production and characterization of Moraxella bovis hemolysin / T.S. Sandhu, F.H. White // Am. J. Vet. Res. - 1977. - V.38. - № 6. - P. 883-885.

241. Sandhu, T.S. White FH: Extracellular antigens of Moraxella bovis / T.S. Sandhu // Am. J. Vet. Res. - 1976. - V.37. - P. 1119-1122.

242. Slatter, D.H. A national survey of the clinical features, treatment and importance of infectious bovine keratoconjunctivitis / D.H. Slatter, M.E. Edwards, C.D. Hawkins, G.E. Wilcox // Austr. Vet. Ass. - 1982. -V.3. - P. 804-807.

243. Stellmacher, H. Untersuchungen zur infektiösen bovinen Keratokonjunktivitis beim Jungrind in der DDR / H. Stellmacher; G. Kehnscherper // Mh. Veter.-Med. - 1988. - T. 43. - № Ю. - P. 340-342.

244. Tamzali, Y. Review of infectious bovine keratoconjunctivitis / Y. Tamzali, J. Marmignon // Maghreb-Veterinaire. - 1992. - V.7. - P. 8-16.

245. Tascon, R. I. The RTX haemolysins Apxl and ApxII major virulence factors of the swine pathogen/i с^шобас il I us pleuropneumoniae: evidence from mutation analysis /R.I. Tascon, J.A. Vazquez-Boland, C.B. Gutierrez-Martin // Mol. Microbiol. -1994.-V. 14.-P. 207-216.

246. Turowsky, G. Аэрированная глубинная культура Haemophilus pertussis в применении к продукции вакцины / G. Turowsky, В. Kusiak // Med. Doswiadczalna I Mikrobiol. - 1959. -V.10. - P. 4. - P. 493-499.

247. Vandergaast, N. Infectious bovine keratoconjunctivitis epizootic associated with area-wide emergence of a new Moraxella bovis pilus type / N. Vandergaast, R.F. Rosenbusch // Am. J. veter. Res. - 1989. - T. 50. - № 9. - P. 14371441.

248. Vrana, D. Age related changes in the physiological state of budding yeast cells / Vrana D., J. Votruba, J. Placek // Exp. Cell. Res. - 1982. -Vol. 138. - № 1. - P. 57-62.

249. Wehr, J. Untersuchungen zur Bedeutung der Chlamydien bei der infektiösen keratokonjunetivitis des Rindes / J. Wehr, H. Blohm, V. Schmidt // Wissensch. Zschr. Humboldt. Univ. Berlin. - 1980. - V. 29. - № 1. - P. 61-65.

250. Wilcox, G.E. Infectious Bovine Keratoconjunctivitis: A Review / G.E.Wilcox // Vet. Bull. - 1968. - V. 38 - P. 349-360.

ПРИЛОЖЕНИЯ

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности»

УТВЕРЖДАЮ: .

Директор Ф^БУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», член-корр. РАСХН, профессор

/^v«4' -''

ovt* / .

'S (VA-B. Иванов

« f&VtäiitUKi! _2013r.

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

по изготовлению питательной среды из ферментативного гидролизата маточно-плацентарно-эмбриональной массы крупного рогатого скота для культивирования бактерий Moraxella bovis

Казань-2013 г.

УТВЕРЖДАЮ:

^ЯЙСг?'*»*,,

МШ^иШтитт, профессор

Р.Х. Юсупов ШШШхЖШ- 2012 год

АКТ

комиссионного испытания антигенной активности экспериментальных серий вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота, изготовленных из антигенов бактерий Moraxella bovis, полученных в жидкой и на плотной питательных средах.

Мы, нижеподписавшиеся, комиссия в составе зав. лабораторией по изучению болезней молодняка, к.в.н. Спиридонова Т.Н.; в.н.с. лаборатории вирусологии, к.в.н. Гумерова В.Г., с.н.с. лаборатории вирусологии, к.б.н. Дуплевой Л.Ш., с участием авторов - ответственных исполнителей работы: мл. научных сотрудников лаборатории по изучению болезней молодняка Нургалиевой А.Р. и Саттаровой Н.В. провели комиссионное испытание антигенной активности экспериментальных серий вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота, изготовленных с использованием антигенов бактерий Moraxella bovis, полученных в жидкой и на плотной питательных средах.

Для изучения антигенной активности изготовили 2 экспериментальные серии вакцины согласно нормативных документов, утвержденных в установленном порядке. Первую серию вакцины изготовили из биомассы бактерий Moraxella bovis, полученной на плотной питательной среде -кровяном МПА; вторую серию вакцины - из биомассы бактерий, выращенной в жидкой питательной среде. В качестве основы жидкой питательной среды использовали ферментативный гидролизат маточно-плацентарно-эмбриональной массы коров (ФГМПЭМ).

Антигенную активность экспериментальных серий вакцин изучили первоначально на 15 кроликах массой 2-2,5 кг, затем на естественно восприимчивых животных - 15 телятах 4-месячного возраста. Антигенную активность каждой серии вакцины оценивали по уровню образования титров специфических антител в сыворотке крови иммунизированных животных, используя метод ИФА.

В первом опыте были сформированы три группы кроликов по 5 гол в каждой. Кроликов I группы иммунизировали вакциной, изготовленной из биомассы бактерий, полученной на плотной питательной среде, II группы -вакциной, изготовленной из бакмассы, полученной в питательной среде на основе ФГМПЭМ. Третья группа животных служила контролем. Вакцину вводили подкожно, двукратно с интервалом 14 дней, в область спины в дозе 2 см3. Перед иммунизацией и через каждые 7 дней после вакцинации производили взятие крови от животных и исследование в ее сыворотке содержание специфических антител к бактериям Moraxella bovis.

Изучение антигенной активности экспериментальных серий вакцин против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота на естественно восприимчивых животных - телятах проводили в ООО «Оршанский сельхозпром» Оршанского района Республики Марий-Эл. При этом были сформированы три группы телят по 5 гол в каждой. Телят I группы иммунизировали вакциной, изготовленной из биомассы бактерий, полученной на плотной питательной среде, II группы - вакциной, изготовленной из бакмассы, полученной в питательной среде на основе ФГМПЭМ. Третья группа животных служила контролем. Вакцину вводили подкожно, двукратно с интервалом 14 дней, в область средней трети шеи в дозе 5 см3. До иммунизации, через 7, 14, 21 и 28 суток после нее у телят из яремной вены брали кровь для определения титров специфических антител в сыворотке методом ИФА, используя «Набор препаратов для выявления антител к бактериям Moraxella bovis методом иммуноферментного анализа» согласно инструкции по его применению.

Результаты исследований антигенной активности экспериментальных серий вакцин на животных приведены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1 - Уровень специфических антител к антигенам бактерий Moraxella bovis в сыворотке крови вакцинированных кроликов (М±ш, п=5)

Сроки исследования Титры антител в ИФА, log2

I группа животных II группа животных III группа животных

До вакцинации - - -

7 дней после первой вакцинации 6,92±0,45 7,12±0,65

14 дней после первой вакцинации 8,52±0,42 9,52±0,42

7 дней после второй вакцинации 10,92±0,27 11,72±0,27

14 дней после второй вакцинации 11,92±0,27 13,32±0,0

Результаты исследования сывороток крови кроликов показали, что наивысший уровень специфических антител к бактериям Moraxella bovis как в первой, так и во второй группе животных, наблюдается на 14 день после второй иммунизации. Титры антител в сыворотке крови кроликов, иммунизированных вакциной, изготовленной из биомассы, полученной на жидкой питательной среде, уже на 7 сутки опыта были выше, чем у животных, иммунизированных вакциной, изготовленной из биомассы, полученной на плотной питательной среде." В последующие сроки эта тенденция сохранялась, на 14 день после второй вакцинации титры специфических антител у животных II группы были на 1,4 log2 выше, чем у животных I группы.

Таблица 2 - Уровень специфических антител к антигенам бактерий Moraxella bovis в сыворотке крови вакцинированных телят (М±т, п=5)

Сроки исследования Титры антител в ИФА, Iog2

I группа животных II группа животных III группа животных

До вакцинации - - -

7 дней после первой вакцинации 7,44±0,22 8,44±0,42 -

14 дней после первой вакцинации 11,64±0,35 12,04±0,27 -

7 дней после второй вакцинации 13,44±0,42 13,24±0,27 -

14 дней после второй вакцинации 13,64±0,35 13,44±0,42 -

Данные, представленные в таблице 2 показывают, что максимальный уровень специфических антител в сыворотках крови телят в обеих группах достигает на 14 день после второй вакцинации. При этом титры специфических антител в опытных группах животных достоверно не отличались и в 1-ой группе они составили - 13,64±0,35 log2, во П-ой группе -13,44±0,42.

Заключение. Вакцина, изготовленная с использованием антигенов бактерий Moraxella bovis, полученных в жидкой питательной среде (ФГМПЭМ), по антигенной активности не уступает вакцине, изготовленной из бакмассы, полученной на плотной питательной среде.

Зав. лаб. по изучению

болезней молодняка, к.в.н.

в.н.с., к.в.н.

с.н.с., к.б.н

м.н.с.

м.н.с.

° /

С C-M/C^ei У

4!

„Г.Н. Спиридонов В.Г. Гумеров Л.Ш. Дуплева А.Р. Нургалиева

s--fLB. Саттарова

УТВЕРЖДАЮ: Зам. директора ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по НИР, профессор

^/¿-¿гр г ^-¿Р Р.Х. Юсупов «-/» ' ОГ-^сП/. с_2012 г.

АКТ

о производственном испытании вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота

Мы, нижеподписавшиеся, главный ветеринарный врач ООО «Среднее Девятово» Руслов А.Н., заведующий лабораторией по изучению болезней молодняка ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», к.в.н. Спиридонов Г.Н., главный зоотехник ООО «Среднее Девятово» Щёкутова И.Д., заведующая МТФ Сарбаева И.Г., младшие научные сотрудники лаборатории по изучению болезней молодняка ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» Нургалиева А.Р. и Саттарова Н.В. составили настоящий акт в том, что в период с 22 марта по 28 сентября 2012 г. в хозяйстве в порядке производственного опыта проходила испытание экспериментальная серия ассоциированной вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота на основе антигенов бактерий Moraxella bovis и герпесвируса типа I, изготовленная в лаборатории по изучению болезней молодняка ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» с использованием жидкой питательной среды.

ООО «Среднее Девятово» является неблагополучным пунктом по инфекционному кератоконъюнктивиту крупного рогатого скота с 2005 г. Болезнь у телят в начальной стадии проявлялась в виде отечности конъюнктивы и слезотечения. В дальнейшем клиническая картина развивалась в определенной последовательности: катаральный конъюнктивит, эрозии, гнойные инфильтраты роговицы, изъязвления и рубцевание. У части животных все слои роговицы перфорировались, воспалительный процесс распространялся на переднюю камеру глаза, что приводило к генерализованному офтальмиту. В конечном итоге наступала одно- или двухсторонняя слепота. В ряде случаев отмечалась деформация глазного яблока в виде кератоконуса или кератоглобуса. При бактериологическом исследовании патологического материала из пораженных глаз сотрудниками лаборатории был выделен возбудитель болезни - бактерий Moraxella bovis.

В хозяйстве проводилось изучение антигенной и иммуногенной активности 2-х серий ассоциированной вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота. Первая серия вакцины была изготовлена согласно инструкции по изготовлению и контролю вакцины (ТУ 9384-005-00492374-2007) с использованием биомассы бактерий Moraxella bovis, полученной на твердой питательной среде. Вторая серия вакцины была

использованием биомассы бактерии Moraxella bovis, полученной в жидкой питательной среде, по антигенной активности не уступает вакцине, изготовленной из биомассы бактерий, полученной на твердой питательной среде.

Производственные испытания вакцины в ООО «Среднее Девятово» показали, что обе серии вакцины (полученный как на твердой питательной среде, так и в жидкой) надежно защищают телят от заболевания. В ходе эксперимента в обеих вакцинированных группах телят больных инфекционным кератоконъюнктивитом в период летне-лагерного содержания не выявлено, тогда как в контрольной не вакцинированной группе заболело 8 (13,3%) телят.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Вакцина против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота, изготовленная на основе биомассы бактерий Moraxella bovis, полученной в жидкой питательной среде, не уступает по антигенной и иммуногенной активности вакцине, изготовленной на основе биомассы бактерий Moraxella bovis, полученной на твердой питательной среде.

Главный ветврач

f)

Заведующий лабораториеи^Ч^да Главный зоотехник

Заведующий МТФ

i 7 i'i *

"■О D'wyi,*.

Младший научный сотрудник лаборатории Младший научный сотрудник лаборатории

' £

А.Н. Руслов

Г.Н. Спиридонов

И.Д. Щёк^Згова

И.Г. Сарбаева А.Р. Нургалиева Н.В. Саттарова