Усовершенствование технологии изготовления и изучение свойств трипсина сухого для вирусологических целей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Попова, Вера Михайловна

• Попова, Вера Михайловна
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Попова, Вера Михайловна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

в »

! , 1.1. Некоторые аспекты производства протеолитических ферментов

1.2. Состояние вопроса и анализ технологии получения протеолитических ферментов (трипсина)

1.2.1. Технологические особенности производства

1.2.2. Методы контроля качества трипсина

1.2.3. Техническое оснащение производства ферментов

1.2.4. Применение протеолитических ферментов в практике

1.3. Заключение

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2 . МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

; 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Усовершенствование технологии и оптимизация

условий изготовления трипсина сухого

3.1.1 . Выбор и подготовка сырья

' 3.1.2. Исследование способов измельчения

исходного сырья и подбор оборудования

3.1.3. Исследование стадий, параметров и выбор режимов

технологии изготовления трипсина

, 3.1.4. Сравнительная оценка методов очистки трипсина

3.1.5. Анализ и выбор методов высушивания трипсина

3.2. Выбор и совершенствование методов контроля качества

трипсина сухого, используемого для вирусологических целей

3.3. Разработка технологической линии производства трипсина сухого

3.4. Освоение опытно-промышленной технологии производства

трипсина сухого для вирусологических целей

3.5. Использование трипсина сухого для получения

культур тканей и вирусов

3.5.1. Применение трипсина сухого для получения

культур клеток при'обработке культуры ткани

3.5.2. Оценка чувствительности к вирусам культур клеток,

полученных с использованием трипсина

3.6. Оценка эффективности использования трипсина сухого

для изготовления противовирусных препаратов

3.7.' Технико-экономическое обоснование промышленного

• производства трипсина сухого для вирусологических целей

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

УСЛОВНЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

БМ - болезнь Марека

ВБА - вирус болезни Ауески

ВГИ - вирус герпеса индеек

ВЧП - вирус чумы плотоядных

ГА - гем агглютинация

ИП - индекс пролиферации

ИРТ - инфекционный ринотрахеит

КРС - крупный рогатый скот

МДБК - перевиваемая линия почек телят

мдск - перевиваемая линия почек собак

НТД - нормативная техническая документация

пвэс - парвовирусный энтерит собак

ПГ-З - парагрипп-3

ПК - почка крольчат

пкш - почка кошек

плк - перевиваемая линия клеток

ПС - питательная среда

пщ 5 - почка щенка

пэк - почка эмбрионов коров

РА - рост (рост стимулирующая активность в баллах)

ск - сыворотка крови

спэв - перевиваемая линия почек свиней

ТБ - текстулы быка

тс - трипсин сухой для вирусологических целей

УК - урожай клеток

ФЭК - фибробласты эмбрионов кур

ФЭП - фибробласты эмбрионов перепелов

ЦПД - цитопатогенное действие вирусов

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Усовершенствование технологии изготовления и изучение свойств трипсина сухого для вирусологических целей»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. В вирусологической практике для диспергирования тканей животных и птиц наиболее широко используется трипсин и значительно реже другие протеолитические ферменты, в основном импортного производства (41, 60). Отечественные препараты, как правило, нестандартны по активности, производятся в незначительных количествах и не обеспечивают возрастающие объемы производства культур клеток и противовирусных пренара-

»

тов.

Анализ существующих технологий изготовления трипсина показал, что для производства препарата используются, в основном, несовершенные способы разделения суспензии, получения и высушивания конечного продукта, которые не отвечают современным требованиям по техническим и технологическим характеристикам и приводят к низкой активности и повышенной токсичности фермента.

Поэтому исследования, направленные на изыскание новых средств и технологических решений промышленного получения трипсина имеют для производства противовирусных препаратов бесспорную актуальность.

Большой вклад в решение указанных проблем внесли отечественные и зарубежные исследователи, труды которых определили общее направление и перспективы дальнейшего научного поиска (6, 15, 16, 48, 91). Многие вопросы еще не решены и нуждаются в теоретическом обосновании, разработке и внедрении в практику.

Цели и задачи исследований. Целью работы явилось усовершенствование технологии и оптимизация условий промышленного производства трипсина сухого для вирусологических целей с использованием современного оборудования, средств и методов контроля препарата, изучение его физико-химических и диспергирующих свойств, оценка эффективности применения препарата в вирусологической практике.

Для достижения цели работы потребовалось решить следующие задачи:

- изучить способы получения и контроля трипсина и изыскать возможные пути усовершенствования технологии производства препарата;

- определить общие требования к исходному сырыо и его подготовке к технологическому процессу;

- изучить влияние различных технологических параметров на эффективность производства и качество конечного продукта;

- разработать и оптимизировать технологию изготовления сухого трипсина с использованием современного оборудования;

- разработать технологическую линию производства трипсина для вирусологических целей;

- отработать методы контроля препарата, отвечающего требованиям квалификации "для культур клеток";

- оценить пригодность трипсина для получения широкого спектра культур клеток, вирусов и противовирусных препаратов;

- разработать нормативно-техническую документацию на получение, контроль и применение трипсина квалификации "для культур клеток" в вирусологической практике.

Научная новизна. Научно обоснован комплекс данных по характеристике биообъекта, общности и специфичности биотехнологических процессов, их оснащенности, выбору средств, методов и оптимальных условий получения трипсина сухого квалификации "для культур клеток".

На основе применения отечественного оборудования разработана технологическая линия и определены оптимальные технологические параметры процессов промышленного производства трипсина. Выявлено влияние различных

факторов на качество готового препарата.

Показана возможность применения сухого трипсина для получения широкого спектра культур клеток, вирусов и противовирусных препаратов.

Практическая ценность работы. Разработана промышленная технология получения трипсина сухого для вирусологических целей, оптимизированы ус-

ловия его производства при применении технологической линии с использованием современного и модернизированного оборудования.

Определеньт общие требования к исходному сырью, подобрано высокопроизводительное отечественное оборудование, определены оптимальные режимы изготовления и методы контроля трипсина сухого квалификации "для культур клеток".

Доказана пригодность и перспективность препарата для использования в вирусологической практике.

Разработана и утверждена нормативно-технологическая документация на изготовление, контроль и применение трипсина для вирусологических целей.

Апробация работы. Основные положения исследований доложены и получили положительную оценку на IV Всесоюзной и V Всероссийской конференциях "Научные основы технологии промышленного производства биологических препаратов" (Москва, 1991, 1996), Всероссийской научной конференции "Инфекционные болезни молодняка сельскохозяйственных животных" (Москва, 1996), на Ц Международной научно-производственной конференции "Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции" (Москва, 1997), на Всероссийской научно-практической конференции "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов" (Щелково, 1998).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 статей, утверждена нормативно-техническая документация.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 178 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения. Работа содержит 35 таблиц, 16 рисунков. Библиографический список включает 167 наименования, из них 101 отечественных и 66 зарубежных авторов.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Попова, Вера Михайловна

В ы в о д ы

I . В результате усовершенствования и оптимизации технологических процессов разработана высокоэффективная технология изготовления трипсина сухого для вирусологических целей, включающая:

- отбор и контроль исходного сырья;

- измельчение поджелудочной железы крупного рогатого скота;

- экстрагирование фермента и центрифугальное разделение суспензии ткани поджелудочной железы;

- высаливание балластных веществ и отделение их с помощью центрифугирования;

- высаливание трипсина и выделение его из суспензии центрифугированием;

- распылительное высушивание фермента;

- контроль препарата по физико-химическим и биологическим свойствам.

Разработанная технология позволяет1 получить трипсин с активностью не менее 200 ЕД по Шоу-Петиколас.

2. Определены общие требования к исходному сырью и его подготовке. Показана перспективность использования в качестве исходного сырья поджелудочной железы крупного рогатого скота со сроком хранения не менее 4 месяцев. Установлено, что двукратное замораживание и оттаивание сырья и измельчение ткани на фрагменты размером не менее 8 мм повышает активность препарата на 20-30%.

3. Отработаны технологические режимы, температурные и временные пае> раметры ведения процессов экстрагирования и высаливания трипсина. Показана целесообразность экстрагирования фермента при пониженных температурах (не выше 16 °С). Установлено, что плавное перемешивание суспензии в автоматическом режиме устраняет образование пены и устойчивой суспензии.

4. Определены эффективные способы разделения суспензии на стадиях экстрагирования и высаливания фермента, подобрано и модифицировано цен-трифугальное оборудование в зависимости ог физико-химических свойств суспензии ткани поджелудочной железы, стадии производства и массы исходною сырья. После экстрагирования отмечено эффективное разделение на жидкую и твердую фазы при использовании осадительной и осадительно-филътрующей центрифуг, после высаливания - при использовании суперцентрифуги, осади-тельно-фильтрующей центрифуги и центробежных жидкостных сепараторов. Замена простого фильтрования на методы центрифугирования и сепарирования суспензии позволяет снизить затраты рабочего времени в 2-3 раза.

5. Показана пригодность безасбестовых фильтр-пластин, мембранных фильтров для получения стерильных растворов трипсина и полых полупроницаемых ультрафильтрационных волокон для очистки, концентрирования и обессоливания растворов ферментного препарата методом диафильтрации.

6. Установлена равноценная активность трипсина в высоле и образцах ферментного препарата, высушенного распылением и сублимацией. Распылительный метод сушки трипсина позволил сократить длительность процесса сушки в сравнении с другими способами (сублимационным, калориферным, конвективным) и одновременно совместить процесс сушки , измельчения и стандартизации препарата.

7. Разработаны методы контроля трипсина сухого квалификации "для культур клеток" и определены предельно допустимые показатели качества, включающие определение внешнего вида, цвета, запаха, растворимости, массовой доли влаги, протеолитической активности, диспергирующих свойств и токсичности препарата в отношении ткани и Клеток куриных эмбрионов. Установлен срок хранения препарата в течение двух лет при температуре 2-6°С.

8. Разработана промышленная технологическая линия по производству трипсина с использованием современного оборудования. Технология изготов

- ления сухого трипсина для вирусологических целей испытана в опытно-промышленных условиях на биопредприятиях, полученные партии трипсина с положительным эффектом применены в вирусологической практике.

9. Установлено, что растворы трипсина пригодны для диспергирования различных видов тканей при получении первичных культур клеток животных

ФЭК, ФЭП, ПЭК, ТБ, ПК, ПКШ, П1Д) и поддержания перевиваемых линий / клеток (МДБК, МДСК, СПЭВ). Диспергент не оказывает влияние на адгезивные и ростовые свойства клеток, срок образования монослоя и морфологию клеток в культуре. Отмечено, что первичные и перевиваемые культуры клеток, изготовленные с использованием диспергента на основе трипсина сухого и контрольного коммерческого препарата обладают равноценной чувствительностью к вирусам и обеспечивают максимальное накопление вирусов в производстве вакцин против болезни Марека, инфекционного ринотрахеита и парагриппа - 3 крупного скога и парвовируса энтерита собак.

10. Определена пригодность трипсина сухого для производства культур клеток ФЭП и выращивания штамма ФС-126 вируса герпеса индеек и штамма ЭПМ вируса чумы плотоядных. Изготовлены опытно-промышленные серии вакцины, в хозяйствах установлена их безвредность, высокая иммуногенность, отмечен положительный эффект препаратов в вегеринарной практике.

11. Установлена экономическая эффективность технологии получения трипсина для вирусологических целей за счет снижения трудозатрат в результате интенсификации процессов разделения, сокращения времени сушки при использовании метода распыления.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

По результатам исследований разработана и утверждена Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода Российской Федерации нормативно-техническая документация:

- Технические условия ТУ 9358.013.00008064-96 " Трипсин сухой для вирусологических целей", утвержденные 04.03. 1996 г.;

- Технологический регламент производства трипсина сухого для вирусологических целей, утвержденный 01.06.1995 г.;

- Временные наставления по применению трипсина сухого для вирусологических целей, утвержденные 29.08.1991 г.

Предложена технология получения трипсина сухого для вирусологи-« ческих целей, которая отработана на базе ВНИТИБП, Омского и Алма-Атинского биокомбинатов, Курганского НПО "Синтез". t

1.3. Заключение

Анализ литературных данных показал, что ферментные препараты долгое время служили и продолжают служить моделью изучения кинетики и специфичности ферментных реакций. Изучению их свойств и структуры были посвящены работы 50-70 годов. Сведения о выделении отдельных ферментов носили общий характер.

Изучение вопроса получения ферментов показало, что дня разработки оптимизированных технологий важное значение имеет использование существующего опыта, а также применение интенсивных способов разделения, очистки, высушивания ферментных препаратов, методов контроля на всех этапах, оценка качества готового продукта и области применения

1—Г «> ^ 1 V1

Получаемый доя однослойных культур клеток аморфный трипсин весьма нестабилен, а сведения о получении его и использовании носят незавершенный характер. Поэтому усовершенствование технологии изготовления трипсина дня вирусологических целей, а также изучение его свойств и эффективности применения в вирусологической практике актуально. Получение высокоактивного препарата возможно.при использовании современных способов изготовления и высокоэффективного оборудования, разработки технологической линии, определения оптимальных технологических параметров, а также общих требований к сырью, его подготовке, выбору количественных методов контроля препарата.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа выполнялась в соответствии с планом НИР ОКР в отделе "Процессы и аппараты" ВНИТИБП по договору 04.03 и 4г (1990-1998гг.) и в лаборатории культур тканей, питательных сред и растворов ВГНКИ, на биопредприятиях (Омском и Алма-Атинском биокомбинатах, Армавирской и Курской биофабриках и НПО Синтез (г. Курган).

Трипсин.' При проведении сравнительных исследований использовали трипсин производства фирм Дифко, Феррак, Мерк, трипсин, изготовленный по РСТ Латвийской ССР 424-84 ТУ ОКП 921.828.1500, трипсин производства ВНИТИБП по ТУ Л 0.07.194-9 ].

Исходное сырье для получения трипсина. Источником получения трипсина было животное сырье. В работе использовали поджелудочную железу (ГОК): крупного рогатого скота (КРС)-говяжыо(Г), свиную (С), куриную (К).

Реагенты для экстрагирования и высаливания. Для экстрагирования фермента были использованы : дистиллированная вода по ГОСТ 6709-72., серная кислота по ГОСТ 4207-77, а для высаливания балластных белков и трипсина - сульфат аммония по ГОСТ 3769-78.

Питательные среды, растворы и сыворотки. В работе использовали: растворы Хенкса (рН 7,2-7,4) и Эрла (рН 7,1-7,2), питательные среды: - с 0,25% ферментным гидролизатом мышц , сухим (ФГМС); производства ВНИИЯИ, Щелковского биокомбината; - с 0,5% гидролизатом лактальбумина (ГЛА) фирмы Дифко и полученного по инструкции ВГНКИ; - Игла, изготовленную ИПиВЭ РАМН, 199 и ГЛА, изготовленные ИПиВЭ РАМН.

Сыворотки крови животных (крупного рогатого скота, плодов коров, телят, овец ) добавляли в питательные среды до концентрации 1-10 %. Питательные среды и растворы готовили в соответствии с требованиями "Методических рекомендаций по изготовлению и использованию питательных сред и растворов для микробиологических целей, культивирования клеток и вирусов".

Первичные культуры клеток. В экспериментах были использованы первичные культуры клеток (ПКК) различного происхождения - почек крольчат (ПК), щенков (ПЩ), кошек (ПКШ ), эмбрионов коров (ПЭК), текстулы быка (ТБ), эмбрионов кур (ФЭК).

Перевиваемые линци клеток. В работе использованы перевиваемые линии клеток (ПЛК) - почек телят (МДБК), почек собак (МДСК), почек свиней ' (СПЭВ).

Доноры тканей. В качестве доноров тканей были взяты: 1-4 недельные крольчата, 1-2 месячные щенки и котята, эмбрионы коров (3-9 месячные), эмбрионы кур (7-12 ).

Вирусы. В работе исследования проводили с вирусами болезни Ауески (ВБА) - штамма БУК-682, парагриппа-3 (ПГ-3) - штамма MB А 1/77, инфекционного ринотрахеита (ИРТ) крупного рогатого скота - штамма МВА 1/80, энтерита собак (ПВЭС) - штамма С и Д, болезни Марека , герпеса индеек (ВГИ) - штамма ФС-126, чумы плотоядных - штамма (ЭПМ).

Контроль трипсина. По ГОСТ 202642-89 определяли органолептические свойства препарата: внешний вид, цвет, запах. Массовую долю влаги - по ГОСТ 24961-89. Растворимость - по ТУ 10.07.194-91.

Измерение концентрации водородных ионов проводили с помощью рН -метра в диапазоне измерения 0-4 и 4-9 ( + 0,05) по инструкции к прибору. Контроль за солесодержанием раствора трипсина осуществляли кондуктометрическим методом с помощью кондуктометра ОК 102/1 (производства Венгрии) по величине электропроводности, выраженной в микросименсах или мега омах. Оптическую плотность растворов трипсина определяли с помощью фотоколориметра . ФЭК-56 М согласно инструкции к прибору (при длине волны 540 нм и использовании кюветы толщиной 10,007). Прозрачность не осветленных растворов трипсина (разведенных ФБР 1:2 - 1:128) определяли на нефелометре типаНФР.

Наличие фермента определяли с помощью экспресс метода с применением фотопленки (69), метода по РСТ Латвийской ССР 424-84 ТУ ОКГ1 921.828.1500.

Протеолитическуго активность трипсина оценивали по методу IIIоу-Петиколас, основанному на турбометрическом определении количества нерас-щепленного казеина после его инкубации с трипсином в строго регламентированных условиях . За единицу активности трипсина принято такое количество фермента, которое за 15-20 мин инкубации при 37°С переводит в состояние неосаждаем ост и трихлоруксусной кислотой половину казеина, содержащегося в 0,25 % растворе при реакции в равных объемах. Пробы колоримегрировали на фотоэлектроколориметре. Активность раствора трипсина определяли по графику, составленному по результатам экстинции исследуемых проб и контрольного раствора, и выражали величиной разведения пробы.

Диспергирующая активность определялась при трехкратном диспергировании тканей куриных эмбрионов с интервалом 30 мин в экспериментальных и контрольных растворах 0,25 % трипсина. Клетки отделяли от трипсина центрифугированием при частоте вращения ротора 1000 об/мин. По выходу клеток с 1 г ткани (до центрифугирования) судили о эффективности диспергирования тканей с применением 0,25 % раствора трипсина.

Токсичность оценивали по жизнеспособности клеток, ростовым свойствам, с учетом посевной дозы отдельно взятой культуры.

Подсчет клеток проводили в камере Горяева.

Ростовые свойства клеток определяли по их адгезивной способности, сроку формирования монослоя, урожаю клеток монослойных культур, индексу пролиферации. с>

Чувствительность культур клеток к вирусам определяли на клетках полученных с использованием трипсина сухого (ТС) опытного и контрольного при заражении общепринятым методом и инкубировали в стандартных условиях при температуре 37°С ± 0,5 С. Образцы культур заражали вирусологическим материалом (ВСМ) и проводили 3-5 пассажей опытных и контрольных культур клеток. Определение тигра вируса проводили по методу Рида и Менча и выражали в ТЦД 5о/мл.

Оборудование и материалы. В работе использовали оборудование, которое входило в технологическую линию по старой и новой технологии (табл.1). В лабораторных исследованиях использовали для разделения суспензии центрифугу 8-70. В технологическом процессе получения трипсина применяли центрифуги ОП11-325, Рапид, ОФСст , ОТР-Ю1К.

Для фильтрования растворов трипсина использовали различное оборудование: рамные фильтры, фильтродержатели, ультрафильтрационные установки, перечень этого оборудования представлен в табл.2.

В технологическом процессе получения ферментного препарата использовали различные фильтрующие материалы, которые указаны в табл.3.

Высушивание препарата проводили на калориферной, конвективной, распылительной и сублимационной установках. Для сублимационной сушки препарата использовали установки типа ТГ-15 и ТГ-50, а для распылительной сушки - установки "Минор" фирмы "Ниро-Атомайзер" и отечественную РСЦ-1,2/09 БК РСЦ-10.

Статистическая обработка результатов. Для статистической обработки материалов использовали метод Стыодента (42). Различия считали достоверными при Р меньше 0,05.

Спецификация оборудования по старой и новой технологии

Наименование оборудования

Этапы Старая технология Новая технология

1 2

Подготовка сырья Холодильник или холодильи. комната Холодильник или холодильн. комната

Измельчение Волчок (0= 1000) Электромясорубка

Экстрагирование \ и 2 Реактор (У=5(Юл) Реактор (\''=630л) (У=1000л)

Разделение суспензии после 1 и 2 экстрагирования Фильтрование через марлю Фильтрование на нутч-фильтре через капроновую сетку.

Центрифугирование Рапид ОГШ ОФС'е, ОФСег 200,1/4) (р-200л/ч)

Высаливание 1 и 2 Реактор (¥=300л) Реактор (У=450 л) (У=630 л)

Разделение суспензии после 1 высаливанщ Фильтрование через мешки из ткани Бета Фильтрование на нутч-филыре через бел ы и н г-ткань

Центрифугирование: OTP- 10! К, ОФСст. Сепарирование: саморазгружающийся сепаратор

Разделение суспензии после 2 высаливания Фильтрование через фильтровальную бумагу Центрифугирование: ОТР-Ю1К, ОФСст. Сепарирование: камерный сепаратор

Сушка Калориферная Распылительная: РСЦ 1,2/09 БК РС.Ц-10; Минор. Сублимационная: ТГ-15;ТГ-50. Конвекционная.

Фильтровальное оборудование , используемое при очистке растворов трипсина

Наименование Тип Используемые Цели оборудования оборудования материалы применения

Рамные филмры ФС-3 Глубинные фильтры Предварительное,

ФС-4 тонкое и

• РФ-39 стерилизующее

РФ-79 фильтрование

Фильтродерлсатели 90 Мембранные фильтры, Предварительное,

0 мм) 142 фильтр-пластины, тонкое и

293 картон стерилизующее фильтрование

Комплект ЛКСФ-1 Полупроницаемые Предварительное, оборудования для мембраны, тонкое и стерилизующего предфильтр-картон стерилизующее оборудования фильтрование

Мультиплетная УСФ-293/7 Блок для глубинных Предварительное, установка фильтров и блок для тонкое и мембранных фильтров стерилизующее фильтрование

Ультрафильтрацион- , УПЛ-06 Полые Очистка и ные установки на УГ1В-6 полупроницаемые концентрирование полых УФУ-6 ультрафильтрационные полупроницаемых волокна волокнах

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Попова, Вера Михайловна, 1999 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Адамс.Р. Методы культуры клеток для биохимиков,- М.: Мир, 1983,- 243 с

2. Артюхов И.Л. Разработка процесса мембранной очистки ферментных раство-poB.-M.-1992.-157 с.

3. Башашкина H.A. Стандартизация методов контроля культуральных питательных сред и компонентов / Автореф. дис...канд. биол. наук. - М., 1994 - 25 с.

4. Безбородов A.M. Ферменты микроорганизмов и их применение // В кн. Биотехнология. Отв. ред. A.A. Баев ,-М.: Наука, 1984.- С.86-92.

5. Березин И.В., Казанская Н.Ф., Ларионова Н.И. Взаимодействие четырех активных форм трипсина со специфическим субстратом и панкреатическим ингибитором // Биохимия. - 1970. -Т. 35. - С.983-985.

6. Биотехнология / Отв. ред. A.A. Баев ,-М.: Наука, 1984.-309 с.

7. Биотехнология клеток животных / Под ред. P.E. Спиер и ДЖ.Б. Гриффитса.-М.: Агропромиздат.-1989.- Т. 1.- 365 с.

8. Биотехнология. Принципы и применение /Под ред. И. Хиггинса, Д. Беста, Дж. Джонса,- М.: Мир, 1988,- 479с.

9. Богачева Т.П., Москвичева Т.В., Терешин И.М. Влияние химической модификации на взаимодействие трипсина с фибрином и фибриногеном. Химия проте-олитических ферментов // Матер. 2 Всесоюзн. симп. по химии протеолитиче-ских ферментов.-М,- 1979,- С. 111.

10. Вагиков В.И. Средства и методы стерилизации применяемые в медицине:-М.: Медицина, 1973. - 104 с.

11. Веремеенко К.Н. Ферменты протеолиза и их ингибиторы в медицинской практике." Киев.: Здоровье, 1979,- 254 с.

12. Ветеринарные препараты. Справочник / Под ред. Д.Ф. Осидзе ,-М.: Колос., 1981,-448 с.

f 13. Вудворд Дж. Иммобилизованные клетки и ферменты. Методы.-М.: Мир, 1988.-.159 с.

14. Галиев И.Ю., Матиссон Б. Новые методы аффинной очистки белков. Аффинное осаждение / Биохимия. - 1997.-Т. 62.-Вып. N 6.-С. 669-676.

15. Грачева И.М. Технология ферментных препаратов - М.: Агр.изд., 1987. -Изд.2,-335 с.

16. Грачева И.М. Технология ферментных препаратов.- М.: Пищ. пр-ть., 1975.-392 с.

17. ГиподманЛ.М. Очистка протеиназ. Химия протеолитических ферментов И Мат. Всесоюзн.симп. по химии прот.ферм.- Вильнюс,- 1973.-С. 15.

18. Готовая форма трипсина для культивирования клеток /М.П.Богрянцева, Г.П. Трасикова, Л.Д. Мартынец, Л.П. Камший, В.Т. Ночевный // Цитолог,- 1994.-Т. 36 - N 6- С.547.

»

19. Диксон М.П., Уэбб Э. Ферменты,- М.:Мир,-1982.-Т.1.- 389 с.

20. Дьяконов Л.П., Глухов В.П., Позняков A.A. Культивирование клеток и ткани животных // Уч. метод.пособие.- Ставрополь,- 1980.- 112 с.

21. Егоров Н.С., Олескин A.B., Самуилов В.Д. Проблемы и перспективы. Биотехнология 1,- М.: Высш. шк.,1987 - С. 159.

22. Блинов Н.П. Основы биотехнологии.-Санкт-Петербург: Наука, 1995.-600 с.

23. Ермолаев Е.Д. Применение ульрафильтрации для выделения и очистки ферментов. // Методы получения высокоочищенных ферментов. Тез. Всесоюзн. симп. - Вильнюс,- 1978,- С. 21-22.

24. Ермолаев М.В. Биологическая химия,- М.: Медицина, 1974,- 264 с.

25. Звягин И.В., Токарик Э.Ф., Нежута A.A. Основные этапы разработки типовой технологии сублимационного высушивания биологических препаратов // Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных препаратов. Тез. докл. 2 Всесоюзн. конф,- М. 1981,- С. 98.

26. Иммобилизованные на неорганических носителях панкреатические протеина-зы / Х.Р. Егоров, К.А. Кивисила, Х..Я. Киппео, А.И. Кестнер // Тез. Всесоюзн.

. симпозиум "Методы получения высокоочищенных ферментов",- Вильнюс.-1978.-С.122.

> ■ >

27. Иммобилизованные ферменты. Современное сосогояние и перспективы / Под ред. И.В. Березина, В.К. Антонова, К. Мартинеса- М.: МГУ, 1976,- Т.1.-296 с, Т. 2. - 357 с.

28. Иммуноанализ ферментов / A.B. Жердев, A.A. Резчиков, Б.Б. Дзантиев, f

А.М.Егоров // ж-ji Всесоюзн. об-во им. Менд,- 1989,- Т. XXXI У. Вып. 1.-С.38-46.

29. Использование центробежных насосов в ультрафильтрационной аппаратуре на основе полых волокон / М.Ф. Аднодворцев, С.М. Панферова, А.И. Гуслав-ский, Е.Э. Школьников и др. // Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов. Тез. докл. IV Всерос-сийск. конф.- М.-1991- С.214-215.

30. Канарский A.B. Структурные и функциональные свойства фильтровальных видов бумаги и картона / Автореф. дис...д-ра тех. наук. Санкт-Петербург, 1994.-51 с.-Список работ авт.: 59 назв.

31. Канарский A.B. Технология фильтровального картона для тонкой предварительной очистки медико-биологических жидкостей // Бум. пром.-М.-1989,- N 12.-С. 25-26.

32. Каверзнева Е.Д. Стандартный метод определения протеолитической активности для комплексных препаратов протеиназ // Прикл. биохимия и микробиология. -1971.- Т. 1. № 2,- С.225-228.

33. Калунянц К.А. Выделение и концентрирование ферментов,- М.: ЦИНГИ Пищепром, 1963.- 35 с.

34. Калунянц К.А. Новые разработки образования, технологии производства и применения ферментных препаратов // Микробиол. промышленность. Научн. техн. рефер. сб. 5 (136).- 1976. - С. 7-10.

35. Качество материалов для культур клеток применяемых в биотехнологии / С.А.Джарылгасов, С.М. Борисова, Н.М. Пухова, В.Л.Лукина, И.Н. Шлыгина // Микробиол. Пр. -М. - 1987. - Вып.З. -29 с.

36. Колодзейская М.В. Способы получения высокоочищенных препаратов не-

которых протеолитических ферментов и исследования их гетерогенности / Канд. дне...канд. хим. наук.- Киев: А Н. УССР, 1967.-180 с.

37. Колосов С.П. Оборудование предприятий ферментной промышленности.-М.: Пищевая пром., 1969.- 378 с.

38. Котов В.Б., Беляева Т.А. Состояние и тенденции развития биотехнологии за рубежом // Итоги науки и техники. Биотехнология.- М.- 1991. - Т.30.-С.110-115.

39. Кувикова А.Ф. Технология выделения ферментов.- М.: Пищпромиздат, 1961.- 187 с.

40. Кугмасов И.С., Завьялова Г.Н. Разработка метода непрерывной трипсиниза-ции тканей крупного рогатого скота / В сб.: Актуальные вопросы вег. виру-сол. Матер. Всесоюзн. конф.- М, 1967. - Ч. I .-С.5-6.

41. Культура животных клеток. Методы. /Под ред. Р.А. Фрешни.-М.: Мир, 1989.-332 с.

42. Лакин Г.Ф. Биометрия. - М .: Высш. шк., 1973.- 343 с.

43. Лысковцов И.В. Разделение жидкости на центробежных аппаратах.-М.: Машиностроение, 1968.-144 с.

44. Любимова I I .13. Фракционирование биологических экстрактов на мембранных фильтрах // Биохимические методы.- М. .Наука, 1987,- С.23-27.

45. Мартинек К. Иммобилизованные ферменты //В кн. Биотехнология . Под ред.А.А.Баева.-М.:Наука, 1984. - С.93-94.

46. Мелик Нубарев Н С. Стабилизация ферментов путем гидрофилизации и поверхности методом химической модификации / МГУ, дис...канд. хим.наку,-М., 1987,- 176 с.

47. Мосолов В.В. Влияние жирных кислот и мочевин на эстеразнуго активность и структуру трипсина // Биохим.-1965.-К 30,- С. 597-608.

48. Мосолов В В. Протеолитические ферменты,- М.: Наука, 1981. 414 с .

49. Мосолов В.В. Характеристика реактивных центров нового ингибитора трипсина и химотрипсина из клубней картофеля / Биохимия,- 1966,- Т. 61.-Вын.1-

С. 126-130.

50. Мосолов В.В., Лушникова Е.В. Адсорбент для очистки ферментных препаратов. А.С.252266 - Бюллютень, № 29, 1969.

51. Мосолов В В.. Лушникова Е.В., Афанасьев П.В. Влияние желчных кислот на трипсина1// Докл. АН СССР-М. - 1967.-N 174 .- С. 230-242.

52. Мослов В.В., Лушникова Е.В. Влияние поверхностно-активных веществ на

t

ферментативную активность трипсина, ацетилтрипсина и су кии 11 ил гр и пси н а // Докл. All СССР.- М„ 1966.-N 164 - С. 454-469.

53. Мосолов В В., Лушкникова Е.В., Остановка протеолиза нерастворимых ингибиторов // Докл. АН СССР.- М„ 1970,- N 191.- С. 951-968.

54/Мосолов В.В., Лушникова Е.В., Принцип очистки пептидгидролаз, основанный на применении нерастворимых ингибиторов белковой природы // - Би-химия.-М.- 1970. С. 440-455.

55. Мосолова О.В. Выделение и изучение свойств протеиназ и металлопрогеи-наз термоактомицен / МГУ,- автореф... канд.биол. дис.наук.-М., 1987.-23 с.

56. Мосс Д.В., Баттерворт П.Д. Энзимология и медицина -М.: Медицина.-1978.-287 с.

57. Мульвани Дж Стерилизация фильтрованием // В кн. Новые методы культивирования животных тканей. Перевод с англ. Франдляндского.-М.: Мир, 1976.- С.37-73.

58. Мухленов А.Г., Шмелева В.Г., Яковлев В.И., Новый специфический носитель для энзимной техники II Тез. Всесоюзн. симп. "Методы получения вы-сокоочитценных ферментов".- Вильнюс.- 1978.- С.88-89.

59. Никитин Е.ЕЦ Звягин И.В. Замораживание и высушивание биологических препаратов. - М.: Колос, 1971.- 343 с.

60. Новохатский A.C. Тканевые и клеточные культуры в вирусологии и молекулярной биологии // Итоги науки и техники. Вирусология.- М.-1979.-Т.8. -С.9-36.

61. Нортроп Д., Кунитц М. Херриотт Р. Кристаллические ферменты. М.: ИЛ.-

1950,- С. 46-58.

62. Оценка протеолитической и диспергирующей активности трипсина в зависимости от условий его хранения / Т.И. Дроздова, Г.Г. Клесникова, В.А. Никифорова, H.A. Шмелева // В кн.: Этиология, эпидемиология, иммунология вирусных инфекций. - Свердловск,- 1984, С. 113-118.

63. Очистка и концентрирование ферментных препаратов методом ультрафильтрации / В.А. Ларин, ГШ. Белов, С.М. Гребешок и др. // Тез. Всесо-юзн.симп. "Методы получения высокоочищенных ферментов". Вильнюс.-1978,- С.24-25.

64. Пинаев Г.П. Методы культивирования клеток // Сб. научных трудов ин-та цитологии АН СССР.- Л.: Наука, 1988, с. 319 с.

65. Получение и исследование свойств некоторых микробных ферментов /Г.Г. Колтушкина, Е.Д. Ермолаев , A.A. Гельперина A.A. и др. // Тез. Всесоюзн. симп. "Методы получения высокоочищенных ферментов",- Вильнюс,- 1978,-С.21-22.

66. Получение и свойства трипсина из пилорических придатков тихоокеанских лососей / Т.М. Пивненко, Л.М. Эпштейн, М.В. Колодзейская и др. // Прикл. биохим. и микробиол.-М,- 1989.- Т. 25,- № 4,- С. 490-497.

67. Получение протеолитических ферментов и их ингибитора из сырья животных крупного скота. Химия протеолитических ферментов / Л.Б. Полонская, В.Н. Борткевич, В.Н. Цыганкова, Л.С. Зубанова. // Матер. Всесоюзн. симп.по химии протеол.ферм.- Вильнюс.- 1973,- С.63.

68. Попова В.М., Сурмило А.П. Обессоливание альбумина методом электродиализа // Тезисы докладов IV Всесоюзн. коферен. Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов.-М,- 1991.-С. 192-194.

69. Простяков А.П., Сергеева СЛ., Телишева Л.Я. Экспресс-метод определения активности трипсина.- М,- ВГНКИ ветпрепаратов.- 1982.-С.5-8.

70. Протасов Г.Е., Чеботарев И.Ю., Соколов Т.Н. Раствор трипсина стерильный,

фармокопейная статья ФС 42-131 ВС-881.- М.- 1988.

71. Пыльдвере K.M. Аспекты проблем биологии первичных трипсинизирован-ных культур // ЦМНИ лаб. Тартутского гос. ун-та, томХП, Архив Анатомии, гистологии и эмбриологии.- Л.-1972.- № 6 .- С 23-27.

72. Системы ультрафильтрации // Каголог фирмы Alfa-Layal (Швеция). Инф. рекл. обзор. Ян. Тех.и пром. 1982,-№ 2.-С. 12-14.

73. Совершенствование технологии ферментов и метод их страндартизации / Ред. Г.М. Горбатов В.М.- М,- 1977.- С. 23-31.

74. Способ выделения, очистки трипсина и химотрипсина /В.Г. Бендикене, Р.В. Берзине-Бердите, И.Г. Песлякас и др. // A.C. 767121.- 30.90.80.

75. Способ очистки иротеолитического комплекса /Н.Б. Аюшин, М.В.Колодзейская, CA. Кудинов и др. //A.C. 1219645.-23.03.86.

76. Способ очистки трипсина / Д.А. Сполите, Д.Я. Кукурсис, А.К. Арен // A.C. 639866.-30.12.78.

77. Способ очистки трипсина / Л.Д. Таран, С.А.Кудинов, А.Р. Шевко и др. II A.C. 1742329.-23.06.92.

78. Способ очистки трипсина /Р.В.Берзиня-Берзите, Д.Я. Дайя, В.Г. Кирхе и др. //A.C. 761456.-10.09.80.

79. Способ очистки трипсина /Т.М. Пивненко, М.В. Колодзейская, С.А. Кудинов//A.C. 1209229.-07.02.86.

80. Способ получения иммобилизованного трипсина / K.M. Веремеенко.В.Г. Судьина, В.Д. Семичневская и др. // A.C. 105571. - 23.11.83.

81. Способ получения иммобилизованного трипсина /М.И. Янкевич, Л.В. Пономарева, В.Р. Шмелева и др. // A.C. 994556.-07.02.83.

82. Способ получения протеолитических концентратов // SU 18378882 - 1993.

83. Способ получения трипсина / С.А. Кудинов, М.В. Колодзейская, Т.М. Пивненко // A.C. 1273392.-30.11.86.

84. Способ получения ферментных и гормональных препаратов / П.Г. Беленький, Л.Б. Полонская, H.H. Чамин // A.C. 241620.- 18.04.69.

85. Структура, селективные и эксплуатационные характеристики ультрафильтрационных полых волокон на основе ароматического полиамида / A.E. ГТоло-укин, C.B. Царева, В.Е. Михайлов, А.П. Борщев. // Тез. докл. IV Всерос. конф.по мембр. метод, разд.смесей, 1987,-М.- 1987,-С. 19-21.

86. Таран Л.Д., Самусь.Н.В. Сравнительное исследование структуры активных центров трипсина быка и тихоокеанских лососевых. // Укр. биохим. ж,- 1994,-Т.66.- № З.-С. 49-54.

87. Таран Л.Д., Смовдырь И.Н. Сравнительные кинетические исследования специфичности трипсина быка и трипсина лососевых // Биохимия.-] 992.-Т.57.-Вып. 1.- С.55-68.

88. Технологическое проецирование предприятий ферментной промышленности / И М. Грачева И.М., К.А. Клунянц, В Н. Кестельман, Н.М. Петрова - М.:, Пищ. пр-ть., 1973.- 288 с.

89. Тривен М. Иммобилизованные ферменты.- М.: Мир, 1983.-213 с.

90. Тугинская М.П. Лабораторные методы клинического исследования.- Варшава.-1965.-С. 425-426.

91. Цыперович A.C. Ферменты.- Киев: Техника, 1971.- 358с.

92. Цыперович A.C., Колодзейская М.В. Исследование гетерогенности кристаллических протеиназ -химотрипсина и трипсина // Укр. биол.ж,- 1966,- N 38. - С. 349-352.

93. Чайка H.A. Клеточные и органные культуры.-Л. - 1976.- С. 225-230

94. Черников М.П. Об автолизе трипсина // Биохимия.-1956.-Т.21 .-С.295-303.

95. Черников М.П. Расщепление сывороточного альбумина различными количествами химотрипсина и автолиз химотрипсина // Биохимия.-1955.-Т.20.-С. 657-662.

96. Черников М.П. Стан Е.Я. Изменение при автолизе трипсина его концентрации и протеиназной, экстеразной и амидной активностей // Докл. АН СССР -1966.-Т. 170.- С. 466-475.

97. Шишков Э.А., Рафальская Т.Я. Роль стерильной фильтрации в процессе по-

лучения кристаллической нейтральной протеиназы.-М.-1967.-С. 25-48.

98. Яровая Г.А., Доценко В.Л., Агапова Э.И. Эффективность действия коммерческих поливалентных ингибиторов протеиназ. Применение гордокса при хирургических вмешательствах по поводу патологии сосудов // Вопр.мед.химии,-1980.-Т.26.-С.837-843.

99. Яровенко B.BV Концентрирование ферментных растворов методом ультрафильтрации // Серия V "Применение ультрафильтрации в промышленности " Гл.упр.мик.биол. пр-ти при Сов.мин. СССР. -1980,- С. 20-35.

100. Яхнина А.А., Токмачева Н.А. Обзор иностранных изобретений. Производство и использование ферментов.- М.: ЦНИИПЛ, 1965- 41 с.

101. Barletta Е., Magnai G. Rudgieri S.// Exp. Cell. Res.- 1989,- V.182.-N.2.- P. 394402.

102. Baschor M. Dispersion and disraption of tissues // Method in Enzymol. - 1979. -LVIIL-P. 119-131.

103.Bauer K.D., Lincjin S.T., Vera-Roma S.M. et. al // Lab. invest - 1987. - V.57. - N 3. - P. 542-546.

104.Bier M., Nord F F. On the mechanism of enzyme action XLVI. The effect of certain ions on crystalline trypsin and reinvestigation of its isoelectric point // Arch. Biochem. Biophys.-1951.- V.33.-P. 320.

105.Biotechnol. Appl. Biochem / L. Linner, N. Garg, R. Kaul and B. Vlattiasson. -1992.-V. 16.-P.48-56.

106.Bowling F.G. e.a. Lancet.- 1987,- N .8537. - P. 826-827.

107. Canrot P.O. On the heterogeneity and purification of commercial trypsin preparations // Acta chem Scand. - 1966,- V.20. -P. 12.

108.Carere J. e .a. Biocyim, et Biophys. acta.- 1986.-V. 883.-G.124.-N.l,-P. 46-53.

109.Chao L-P, Liener J.E. Autoactivation of inert protein on the presenpe and absence of

Calcium // Biochem biophys acta. - 1965,- V.96. - P.508.

t

110.Cole R.D., Kinkade J.M.,Yr A. Chromatographie Stude of trypsin // J.Biol Chem.-1961,-V. 236.-P. 2443.

111. Desnuelle P., Gabeloten C. Sur le role du calcium pendont l'activation du trypsinogene. Par la trypsine// Arch.Bioc hem.Biophys.-1957.-V.69.-P.475.

112.Dexon J.W., Hofmann T. The reaction with nitrogens acid of the "active site" N -

c

terminal isoleicine in chymotrypsin and derivatives // Canad J. Bichem.- 1970,- V. 671.-P.671-674.

- 113. Folk J.I., ^ Schirmer E.W. Chymotrypsin C.I. Isolation of the zymogen and the active enzyme: preliminary structure and specificity studies // J. Biol. Cliem. -1965,-V.240.-P.181.

114.Fraenkel - Conrat H., Bean R.S., Linerwearer IT. Essential qroups for the interaction of ovomucoud / eqq white trypsin inqibitor / and trypsin, and for trypcic actirity // J.Biol. Cliem.- 1949,- V.177. -P. 385.

115. Fractionation of trypsin by paper electrophoresis / A.Jachan, GB.Domont, L.V.Disiczer, J.C. Pervone //Nature,- 1964,-V.203.-P.43.

116.Galaev I.V., Mattiosson B./Biotechnjl.Techniques .- 1992,- V. 6,- P. 353-358.

117. Ham R.G. Surviral and qrowth requirements of nontransformed celles // In.: Tissue growth factor .-Ed. R.Baserga.-Berlin etc.-1981,-P.13-88.

118.Heterogeneous nature of crystalline trypsins / A.A. Hakim, R.L. Peters, E.E. Samsa, V.J.VonMelle // Ensumologia.- 1963.-V. 25.-P.134.

„ 119.Kamashina J. The action of enterokinase on trypsinogen // Biochem. Biophys, Acta.-1956.- V.20.- P.433.

120.Kinkade J.M., Cliromatographie study of trypsin // J. Biochem.-1961,- V. 236,' P.2443-2446.

121.Kiskida T., Liene J.E. Further characterization of turkey trypsin;groups and seguence of histidine-containing peptides // Arch.Biochem.Biophys.- 1968,- V.126. -P.111-114.

122. Kunitz M., Northrop J.H. Isolation of a crystalline proteolytic, enzyme trypsin // Science.- 1933,- V.78.-P.558-561.

123.Kunitz M., Northrop J.H. The isolation of crystalline trypsin // Science - 1934. -V.80.- P.505-508.

- 124.Kunitz M. Effect of the formation of inert protein on the Kinetics of the autocatalytic formation of trypsin from trypsinogen // J. bin Physiol.- 1936,- V.22.- P. 293-429.

125.Labonesse J., Gewais M., Preparation of chemically defined -acetylated trypsin // Europ.J. Biochem.-1967.-V.2 - P.215-217.

126.Le chymotrypsinogene A de porc purification et trypsine de pors / M.Charles, M.Rovery, A.Gnidoni, P.Desmiele // Biochim, biophys.acta.- 1963,- V.65.- P.115-117.

127.Liener J E. Chromotogrophie studies on trypsins trypsinogen and the activation process // Arch.. Biochim. biophys.- V.88.- P.216-218.

128.Liener J E. Vismanatha T. Electrophoretic behaviour of trypsin on a starch // Biochim. biophys. acta. - 1958,- V.22.- P.299-303.

129.Le chymotrypsinogene A de porc purification et etudes de guelgues propriétés / M.Charles, D.Gratecos, M Rovery, P. Desnuelle // Biochem. biophys. acta.-1967,-V.140.- P.395-398.

130.Mares-Gnia M., Shaw E, Cahen W. Studies on the active center of trypsin. Further

t

Characterization of the hydrophobie binding site // J. Biol.chem.- 1967.- V.242.-P.5787-5790".

&

131.Mares-Gnia M., Shaw E., Cahen W. Studies on the active center of trypsin. Further characterization of the hydrophobiebinding site // J.Biol Chem.-19967.-V.242.-P.5777-5793.

132.Mares-Gnia M., Shaw E. Studies oh the active center of trypsin. The binding of amidines and guanidinas models of the substrate - side chain // J. Biol Chem.-

' 1965- V.240.- P.-1579-1581.

133.Maroux S., Rovery M., Desnuelle P. Purification dn trypsinogene et de la trypsine de boouf par chromatographic surcarboxy-methyl-cellulos // Biochim.biophys. acta.-1962.-V.56.-P.202-208.

134.Metrione R.M., Noves A.G., Fruton J.S. Purification and properties of dipeptidyl transferase (cathepsin C) // Biochemistry.-1966.-V.5.-P. 1597-1605.

135. Neurath H., Rubley J.A., Dreyer W.l. Structural changes in the activation of chymotrypsinogen and tripsinogen. Effect of urea ail chymotrypsinogen and

' chymotrypsin // Arch. Biocem.-1956. - V.65.-P.243-247.

136.'Nquyen A.L. and Luany I.H.T. Bioteclinol. bioeng. -1989.-V.34.-P. 11861190.

137. Nord F.F., Bier M.On the mechanism of enzyme action L.V.A. Stuqy of the interaction between calcium and trypsin // Biocim. biophys. acta.- 1953.-V. 12.-P. 56-59.

138. Nortrop J.H., Kunitz M. Isolation of protein crystals prossesing trypsin activity // Science.-1931.-V.73.-P.262-269.

139. Oqawa Y.e.a. Japan .Gastroenterol. -1987.-V. 84.-N.1 .-P.74-83.

140. On the mechanism of enzyme action comporative studies on trypsins of varions origins / A.J.Nithayathil, F.Buck, M.Biel, F.F.Nord // Arch. Biochem. biophys.-1961.-V.92.-P.532-538.

' 141. On the mechanism of enzyme action LX Acyl derivatives of trypsin / L.Terminiello, J.Sri Ram, M.Bier, E.F.Nord // Arch Biochem. biophys.-1955.-V.57.-P.252-254.

142. On the mechanism of enzyme action LXXIII Studies on trypsins from beef, Sheep and pig pancreas/E.F.Buck, A.J.Vithayathil, M.Bier.,F.F.Nord //Arch Biochem. biopys.-1962.-V.97.-P. 417-420.

143. On the tow anionic chymotrypsinogens of porcine pancreas / D.Gratecos, O.Guy, M.Rovery, P.Desnuelle//Biochem. biophys. acta.-1969.-V.175.-P.82-88.

144. Persone J.C., Disitzer L.V. Electrophoretic heterogenety of trypsin // Nature.-1959.-V.183,- P.605-615.

145. Pechere J.F., Neurath H. Studies on the autocatalytic activation of trypsinogen // J.Biol.Chem.-1957.-V.229.-P.389-391.

146. Pechere J.F., Neurath H. Physicochemical investigation of the chymotrypsins. On the mechanism of chymotrypsins // Arch Biochem.Biophys.-1957.-V.66.-366-368. .

f?

«

147. Purification and properties of on anionic Zymogen of phospholipase A from poreine Panereas / G.H. De Haas, N.M. Postema, W. Nienwenhnizen, L.L. Deenen , M. Worn // Biochim. biophys. acta.-1968. V. 159,- P. 118.

148. RDB-a new produkt of plant origin for culture dispersion / P. Ben-Natan, R. Barzila R., A. Lasar A, A. Shahar // Prod, and Expiait. Exist, and New Amin. Cell Subssrat.Proc.Join Esact.-Basel.-1985.-P.467-473.

149. Ryan C.A., Chicken chymotrypsin and turkey trypsin Part 1 .Purification // Arch.Biochem.biophys.- 1965.-V.110,- P.169-175.

150. Ryan C.A., Clary J.Y.,Tomimatsn V. Chicken chymotrypsin and turkey trypsin Part // Physical and enzimic properties. Arch.Biochem.biophys.-1965.-V. 110,-P.175-178.

„ 151. Senstad G., and Mattiasson B.//Biotechnol. bioenq.- 1989,- V.33.- P.216-220.

152. Schweder D.D., Shaw.E. Cliromatography of trypsin and its derivation. Characterization of a new active fom of bovinetrypsin//J. Biot.chem.-1968,-P.2943-2948. :

153. Scrimger S.T., Hofmatin T. The involvement of the amino-terminal amino acid in the activity of pancreatic proteasis 11. The effels of nitrons acid on trypsin // J.Biol.chem.-1967.-V.242,- P.2532.

154. Smith R.L., Shaw E. Psendtrypsin A. Modified bovine trypsin produced by limited autodigestion// J.Biol.chem.-1969.-V.244.-P.4704-4709.

155. Sri Ram J., Terminiello L., Bier M. On the mechanism of enzyme action LL Acetyltrypsin, a stable trypsin derivative // Arch Biochem. biophys.-1954.-V.52,-P.464-467.

156. Sri Ram J., Terminiello L., Bier M. Sur le trypsinogene et la trypsine depore // Biochim.biophys.acta:-1963.-V.69.-P.115-117.

f 157. Terminiello L., Bier M., Nord F.F. On the mechanism of enzyme action LLXV Succinyltrypsin and the reversibility of its denaturation // Arch.Biochem.biophys.-1958.-V.73.-P.171-180'.

158. Timashoff S.N., Sturteraht J.M., Bier M. On the elektrophoretic heterogeneity of trypsin // Arch. Biochem.biophys.-1956.V.63.-P.243-249.

159. Trawis J., Liener J.E. The crystallization and portial characterization of pocine trypsin//J. Biol.chem. - 1965. - V.240. - P.1962-1970.

160. Trawis J. Studies on the active site of sheep trypsin// Biochem.biophys.Res.Communs.-1968.-V.30.-P.730-740.

161. Van Melle P.J., Lewis S.H., Samsa E.G. Crystallization of porcine trypsin // Enzymologia.-1963.-V.26.-P. 133-138.

162. Von J. Action du chlorure de sodium sur i autolyse de La trypsine // Biochem.biopys acta.-1959.-V.31 .-P.75-85.

163. Wang R.C., Liener J.E. Active and inactive modifications of trypsin induced bycetylation // Biochim. biophys acta.- 1960.-V.38.-P.80-84.

164. Waymouth C. Cell culture methods for molecular and cell biology.-1984.-V. 1 .-P.23.

165. Welke C., Drebonkomp B. Zur Qualtatras zellzucht//Arch exper.Veter.-1988.-•P.138-150.

166. Welke G., Dresenkamp B. Zur Qualitat ssicherung von Trypsin zur Zellzucht // Arch.exper.Vet.med.-Leipzig.-1988.-V.42.- P.302-307.

167. Wisentan A. Biochemical basis of free and immobilized enzyme application in industry, analysis, synthisis and therapy // J. Chem. technol and biotechnol.-1980.-V.30.-P.521-529.