Усовершенствование метода выделения L-форм микобактерий из патологоанатомического материала и объектов внешней среды тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат наук Тарасова, Елена Владимировна

• Тарасова, Елена Владимировна
• кандидат наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат наук Тарасова, Елена Владимировна

СОДЕРЖАНИЕ

Перечень условных сокращений

Введение

1. Обзор литературы

1.1. Возбудители туберкулеза и их изменчивость

1.2. L-формы микобактерий и их биологические свойства

1.3. Диагностика туберкулеза

1.3.1. Эпизоотологический метод

1.3.2. Аллергический метод

1.3.3. Патологоанатомический метод 3

1.3.4. Бактериологический метод

1.4. Заключение по обзору литературы

2. Собственные исследования 40 2.1. Материалы и методы исследований

3. Результаты собственные исследований

3.1. Эпизоотическая ситуация по туберкулезу крупного рогатого скота в Российской Федерации

3.2. Разработка метода предпосевной обработки патологоанатомического материала для выделения L-форм микобактерий

3.3. Изучение реверсивных свойств L-форм микобактерий

3.4. Выделение L-форм микобактерий из проб сметаны и молока

3.5. Выделение L-форм микобактерий из проб почвы, кормов и воды

3.6. Изучение влияния антибиотиков на реверсию микобактерий

in vitro

3.7. Изучение сенсибилизирующих и патогенных свойств L-форм микобактерий

4. Анализ и обсуждение результатов исследований

5. Выводы

6. Практические предложения 96 Список использованной литературы 97 Приложения

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ИФА - иммуноферментный анализ

ТЕ - туберкулиновая единица

РА - реакция агглютинации

РП - реакция преципитации

РДП - реакция диффузной преципитации

ККРА - крове - капельная реакция агглютинации

РИД - реакция иммунодиффузии в агаровом геле

ПЦР - полимеразная цепная реакция

KAM - комплексный аллерген из атипичных микобактерий

КРС - крупный рогатый скот

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Усовершенствование метода выделения L-форм микобактерий из патологоанатомического материала и объектов внешней среды»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Увеличение производства и повышение качества продуктов животноводства в значительной степени зависит от благополучия стад по инфекционным болезням, в том числе и по туберкулезу.

В неблагополучных стадах борьба с туберкулезом ведется длительное время. Аллергические исследования при этом не всегда отображает истинную картину туберкулезного процесса, а животные находясь в латентной форме заболевания являются постоянными источниками возбудителей туберкулезной инфекции (В.И. Ротов, В.П. Урбан, 1978; И.А. Бакулов с соавт., 1980; Э.Д. Лакман, 1982; Н.П. Овдиенко, 1986; A.A. Бойко с соавт., 1991; JIM. Ходун с соавт., 1991; A.C. Донченко с соавт., 1990, 1991; В.И. Кузин, 1977, 1992; А.Х. Найманов, 2001; Ю.Ю. Данко, 2006; В А. Кузьмин, 2012) [4, 9, 26, 27, 33, 69, 72, 74, 83, 87, 115, 117, 106, 137, 138].

Аллергический метод является достаточно чувствительным при выявлении больных туберкулезом животных. Однако, этот тест не информативен при проведении аллергических исследований на животных, находящихся в латентной форме развития туберкулезного процесса и сенсибилизированных атипичными микобактериями. При этих состояниях у крупного рогатого скота не находят туберкулезных поражений или иных изменений в исследуемом диагностическом материале (лимфатических узлах). Как следствие возникает проблема выделения микобактерий из биоматериала при проведении лабораторной диагностики (А.З. Равилов, 1999; АА. Безбородова, 2006) [6, 34, 70, 112, 127, 139, 142, 150, 152].

Выделение микобактерий из биоматериала, в силу строения их клеточной стенки, что связано с генетическими и фенотипическими особенностями данных микроорганизмов, представляет трудную задачу при

проведении бактериологических исследований (JI.B. Галатова, 1990, 1993, Керимжанова Б.Ф., 1991,) [7, 12, 59, 108, 114, 118].

Исследования ряда авторов (B.C. Федосеев, 1985; А.И. Бакулов; В.В. Макаров, 1986; A.C. Донченко с соавт., 1986, 2001, 2004; Н.М. Колычев, Б.Ф. Керимжанова, 1991; И.Р. Дорожкова, 1993, 1994; Г.М. Николаева, 1995; К. Duncan, 1997; В.Г. Ощепков, 2001; JI.A. Таллер, 2003; В.И. Голышевская, 2004; A.A. Евглевский 2011) дают основания предположить, что одной из причин длительного неблагополучия хозяйств по туберкулезу крупного рогатого скота, а также рецидивов заболевания в ранее оздоровленных от туберкулезной инфекции хозяйствах может быть персистенция в организме животных L- форм микобактерий туберкулеза [4, 2,17, 20,21, 39,42, 57, 91, 92, 93,103, 109,136].

Проблема изменчивости возбудителей туберкулеза имеет не только теоретическое, но и важное практическое значение. L-варианты микобактерий, особенно находящиеся в нестабильной форме, затрудняют прижизненную аллергическую диагностику туберкулеза, могут обуславливать латентное течение туберкулезной инфекции, а в отдельных случаях вызывать рецидивы этого заболевания, как у людей, так и у животных [86, 129,130,136,141]

Наиболее эффективным методом выявления микобактерий является культуральный метод, сущность которого заключается в посеве на питательные среды суспендированой жидкости, полученной в процессе обработки патологоанатомического материала (В.И. Голышевская и соавт., 1997) [23,41,66,71,79, 144].

Существующие методы предпосевной обработки биоматериала заключаются в длительном воздействии кислот, что приводит к уничтожению не только сопутствующей микрофлоры, но и кислотоучтойчивых микобактерий. При этом возникают трудности, связанные с сохранностью клеточной стенки микобактерий, а в дальнейшем и самих возбудителей во время предпосевной обработки биоматериала (М.И.

Герман, 1990; И.Г. Шемякин и соавт., 2000; Т.А. Васимирская, 2007) [18, 23, 25,32, 46, 59, 108, 118].

В этой связи вопросы усовершенствования предпосевной обработки патологоанатомического материала, лабораторной диагностики, направленные на повышение эффективности существующих методов выделения микобактерий и разработки новых, являются актуальной задачей, что и предопределило цель нашего диссертационного исследования.

Цель исследования. Целью исследования явилось усовершенствование метода выделения L-форм микобактерий из патологоанатомического материала и объектов внешней среды.

В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

- разработать новый способ предпосевной обработки патологоанатомического материала, обеспечивающий повышение эффективности выделения деструктивных по клеточной стенке L-форм микобактерий;

- изучить возможность образования L-форм из бактериальных форм микобактерий в объектах внешней среды и продуктах питания, а также in vitro под действием лекарственных препаратов;

- изучить биологические особенности выделенных L-форм микобактерий, их сенсибилизирующие и вирулентные свойства.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Краткий анализ эпизоотической ситуации по туберкулезу крупного рогатого скота в Российской Федерации.

2. Усовершенствованный способ предпосевной обработки патологоанатомического материала для выделения L-форм микобактерий.

3. Экспериментальные данные по выделению L-форм из бактериальных форм микобактерий в объектах внешней среды и продуктах питания, а также in vitro под действием лекарственных препаратов;

4. Результаты изучения вирулентных и сенсибилизирующих свойств выделенных L-форм микобактерий.

Научная новизна. Разработан новый способ предпосевной обработки для выделения L-форм микобактерий из патологоанатомического материала и объектов внешней среды, заключающийся в обработке патологоанатомического материала 3 %-ным раствором серной кислоты и дополнительной фильтрации, что позволяет повысить на 30 % высеваемость микобактерий туберкулеза из биоматериала от животных и объектов внешней среды (патент UA № 39178 «Способ выделения L-форм микобактерий из патологического материала» от 10.02.2009 г.) Изучена возможность образования L-форм микобактерий в объектах внешней среды и продуктах питания, а также in vitro под действием лекарственных препаратов. Изучены сенсибилизирующие и вирулентные свойства выделенных L-форм микобактерий.

Практическая значимость работы. Повышение выделяемости L-форм микобактерий из биоматериала от животных и объектов внешней среды с использованием усовершенствованного метода предпосевной обработки патологоанатомического материала позволит увеличить рысеваемость микобактерий на питательных средах как в бактериальной, так и в L-форме, что позволит выявить всех инфицированных животных, оперативно организовать противотуберкулезные мероприятия и ускорит проведение оздоровительных мероприятий.

Результаты исследований использованы при разработке методических рекомендаций «Микобактерии, деструктивные по клеточной стенке: диагностика, культивирование, идентификация», утвержденных ученным советом факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия» им. В.Я. Горина (протокол № 1 от 13 сентября 2011 г.), методических рекомендаций «Выделение L-форм микобактерий», утвержденных научно -

методическим советом Государственного комитета ветеринарной медицины Украины (протокол № 1 от 23 декабря 2009 г.).

Материалы исследований использованы при подаче заявки на патент РФ «Способ предпосевной обработки патологоанатомического материала для выделения Ь-форм микобактерий» и получении патента Украины 11А №39178 «Способ выделения Ь-форм микобактерий из патологического материала» от 10.02.2009 г.

Материалы исследования использованы в учебном процессе по дисциплине эпизоотология и инфекционные болезни животных для студентов 4 и 5 курса факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Белгородская ГСХА им В.Я. Горина».

Апробация. Основные положения диссертационной работы были доложены на:

международной научно-практической конференции посвященной «Мониторинг, прогнозирование, диагностика и профилактика инфекционных болезней животных с использованием современных методов эпизоотологии, молекулярной биологии и биотехнологии» (АР Крым, Феодосия, 14-18 сентября 2009 г.);

международной научно-практической и учебно-методической конференции посвященной 125 летнему юбилею кафедры гигиены животных и ьетеринарной санитарии и «Новые достижения и перспективы развития ветеринарной медицины» (Харьков, 2009, 2010 г.);

- заседаниях кафедры инфекционной и инвазионной патологии и отчетных сессиях Ученого совета Белгородской государственной сельскохозяйственной академии им. В .Я. Горина (2011-2012 гг.);

- научно практической конференции, посвященной дню науки в Белгородской ГСХА им. В.Я. Горина (г. Белгород, 8 февраля 2012 г.).

Публикация результатов исследований. Основные результаты диссертационной работы опубликованы в 8 научных статьях, в том числе 2 в изданиях перечня ВАК Российской Федерации.

Получено положительное решение на выдачу патента Российской Федерации и патент Украины.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 120 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, практических предложений. Библиографический список использованной литературы включает 214 отечественных, в том числе 61 - зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована схемой, 15 таблицами и 7 фотографиями.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Возбудители туберкулеза и их изменчивость.

Туберкулез - одна из самых распространенных, древнейших болезней человека и животных. Заболевание людей и животных туберкулезом было известно человечеству за несколько тысяч лет до нашей эры, что подтверждают археологические раскопки: туберкулезные поражения грудных позвонков у людей были обнаружены у египетских мумий. Греки назвали это заболевание рй^в (истощение, чахотка), которое проявляется резким ослабление организма при этой болезни [13, 73, 106, 122, 123, 151].

Исследованиями Гиппократа, Галена, Авиценны подробно были изученные и описаны клинические признаки туберкулеза у людей. Более широкие исследования направленные, на выяснение сущности туберкулеза, относятся к 18 веку, когда врачам разрешили проводить вскрытие трупов людей [9, 62, 94, 97].

Лаеннек впервые в 1819 году опубликовал классическое произведение о туберкулезе, в котором дал научно обоснованное описание патологоанатомической картины этого заболевания. Он установил, что туберкулезные поражения обнаруживаются не только в легких, но и в других органах и тканях больных людей и животных. С этого времени появились данные об общности признаков этого заболевания у людей с описанной ранее «жемчужницей» у крупного рогатого скота. Для названия этой болезни Лаеннек ввел термин «туберкулез» [13, 62, 106].

Кленке (1843) и Виллемин (1865) доказали инфекционную природу туберкулеза в опытах на морских свинках и кроликах при заражении патологическим материалом от больных туберкулезом людей. Это и было основанием для доказательства, что туберкулез является заразным заболеванием [105, 106, 122, 186].

Авторство открытия бактериальной природы этой инфекции принадлежит немецкому ученому Р. Коху, который в 1882 году на заседании Берлинского физиологического общества сообщил о выделении чистой культуры возбудителя туберкулеза. С этого момента началось всестороннее изучение биологии возбудителя [171].

Первоначально Р. Кох и его последователи считали, что туберкулез у человека и сельскохозяйственных животных вызывается одним возбудителем. Однако последующими исследования было установлено, что микобактерии туберкулеза млекопитающих и птиц имеят некоторые отличия [196].

Так, Ривольт в 1888 году [211] указал что, при экспериментальном заражении птиц материалом от больных туберкулезом млекопитающих вызвать заболевание у птиц не удается. Он пришел к выводу, что туберкулез птиц является заболеванием, не идентичным туберкулезу человека и млекопитающих, а в 1889 подробно описал туберкулез птиц.

Н.Ф. Гамалея в 1891 году [97, 123] и J. Strauss [212] впервые описали морфологические, культуральные и биологические отличия возбудителя туберкулеза птиц и млекопитающих.

Т. Смит 1896 году [213] году подробно описал возбудителя туберкулеза крупного рогатого скота, отметив при этом морфологические и культуральные отличия между микобактериями туберкулеза человека и крупного рогатого скота.

На основании многолетних исследований в 1901 году на Лондонском конгрессе, посвященном проблеме туберкулеза, было признано существование трех самостоятельных видов микобактерий туберкулеза: бычьего, птичьего и человеческого. Гораздо позднее Уэльсом в 1937 году был обнаружен и описан возбудитель туберкулеза мышиного вида [34 , 35, 122, 123, 151].

По определителю микроорганизмов D.Bergey [89] возбудитель туберкулеза отнесен к отряду Actinomycetales, семейству Mycobacteriaceae,

роду Mycobacterium, который включает в себя 48 видов кислотоустойчивых микобактерий, как патогенных, так и атипичных.

К патогенным видам микобактерий относятся - М. tuberculosis, М. bovis и М. avium, патогенный для птиц и свиней. М. africanum является промежуточным видом между М. tuberculosis и М. bovis, встречающимся в Африке. Вид М. microti возбудитель туберкулеза полевых мышей, вид М. leprae вызывает проказу у человека, а М. paratuberculosis - вызывают паратуберкулез у крупного рогатого скота [62, 122, 124, 153].

Кроме того, в 50 х годах пришлого века появились сообщения об участившихся случаях выделения из патологического материала от людей и животных кислотоустойчивых микобактерий, которые отличались от известных возбудителей туберкулеза скоростью и особенностями роста на питательных середах. Среди исследователей до настоящего времени ведутся дискуссии относительно происхождения атипичных микобактерий. Одни исследователи утверждают, что атипичные микобактерии, которые называли ранее некласифицироваными, аномальными, оппортунистическими, возникли вследствии действиея антибактериальных препаратов на возбудители туберкулеза [94,174].

За данными A.M. Хомы Лемишко при исследовании проб клинического материала от больных туберкулезом людей, для лечения которых не применяли антибиотики, был выявлен на питательной среде рост атипичных микобактерий [120].

Существует также теория о том, что атипичные микобактерии являются мутантами туберкулезных микобактерий, которые способны переходить в типичные вирулентные формы возбудителей туберкулеза. Также, существует гипотеза, что атипичные микобактерии возникли в результате проникновения в хромосомный апарат типичных микобактерий бактериофагов [38, 40, 41].

Позднее с помощью таких методов газовой хроматографии, масс спектрометрии, ядерного магнитного резонансе, серологических

исследований, анализа нуклеиновых кислот и количественной таксономии было установлено, что атипичные микобактерии являються самостоятельными видами, а не мутантами возбудителей туберкулеза [38].

Объединяющими признаками рода Mycobacterium являются их кислото спиртоустойчивость, а также тинкториальные свойства и антигенное родство. Наиболее отличительными признаками у разных видов микобактерий является неодинаковая скорость и характер их роста на питательных средах, патогенность для морских свинок, кроликов и кур. Эти признаки и были положены в основу биологического метода исследований для определения у культур микобактерий видовой принадлежности и сенсибилизирующих свойств. Значение в этиологии заболевания животных и людей отдельных видов атипичных микобактерий до нынешнего времени остается недостаточно изученным [11, 34, 40, 41].

Со времен открытия Р. Кохом возбудителя туберкулеза было проведено большое количество исследований по изучению морфологических, тинкториальных, биологических и других свойств возбудителя. Р. Кох считал, что открытый им возбудитель туберкулеза является микроорганизмом с навсегда закрепившимися свойствами [43, 189].

Исследованиями Мечникова И.И. [34, 124, 148] установлено, что в культурах, кроме классических палочек, выявляют различные полиморфные формы микобактерий: кокковидные, разветвленные, с колбообразными вздутиями по краям. Другими авторами были описаны фильтрующиеся форми, возникшие при действии на возбудитель туберкулеза рентгеновских лучей [52, 53, 114, 117].

А. Fontes в 1910 году [172] при фильтрации гноя из лимфатического узла также обнаружил фильтрующиеся формы. Многие авторы, повторив опыты А. Fontesa путем пассажирования изолятов фильтрующихся форм через организм лабораторных животных, чувствительных к туберкулезу, подтвердили факт их существования.

Dianes L. [160, 161, 162] было установлено, что в организме лабораторних животных происходит L-трансформация возбудителя туберкулеза, а также доказано, что эти формы являються потомками типичных форм микобактерий и способны возникать спонтанно или после воздействия на них неблагоприятных факторов [121].

При исследовании культур микобактерий английским исследователем Е. Kieneberger - Nobel в 1935 году [187, 188] были выявлены полиморфные гранулы, которые отличались своими ростовыми свойствами и были названы L-формами.

До 1957 года существовала тенденция свести проблему фильтрующихся форм к проблеме L-форм и считать, что фильтрующиеся формы возникают только в пределах L-цикла (R. Tulasne, 1951) [53]. Однако в 1957 г. было предложено разграничить эти два понятия «фильтрующиеся» и «L-формы» как различные категории явлений. В L-цикле, в одном из этапов образуются фильтрующиеся формы, имеющие много общего с фильтрующимися формами, образующимися вне L-цикла. Разница в том, что фильтрующиеся формы возникают непосредственно из клеток, неподвергавшихся каким - либо неблагоприятным воздействиям. На сегодня не виявлено четкой границы между фильтрующимися формами и L-формами, поэтому этот вопрос требует дальнейшего изучения [48, 67, 68, 73, 91, 111,121].

В дальнейшем А.И. Тогунова [121] указала на возможность реверсии фильтрующихся форм в типичные кислотоустойчивые формы. Несмотря на многочисленные эксперименты, сведений о роли фильтрующихся форм в патогенезе туберкулеза очень мало.

Работами И.Р. Дорожковой, З.С. Земсковой [32, 37] установлено, что L-формы не только сохраняют патогенность исходного вида микобактерий, но и приобретают новые свойства, характеризующиеся способностью вызывать неспецифическое воспаление [79,101].

Механизм индукции L-вариантов микобактерий выяснен недостаточно. Их возникновение обычно связывают с адаптацией микроорганизма к действию различных неблагоприятных факторов внешней среды. Наиболее обоснованная и научно - подтвержденная концепция о сущности явления L-трансформации дана в работах С.В. Прозоровского, В.Д. Тимакова, Г.Я. Каган [48, 53, 101]. Они считают, что возникновению L-форм способствует не только воздействие селекционно-мутационного характера, но и нарушения автономной системы репродукции клеточной стенки под действием разнообразных вредных агентов внешней среды, а также макроорганизма. Значение L-форм в этиологии заболевания животных туберкулезом требует дальнейшего детального изучения [51, 57, 70, 75, 93, 103, 134, 136, 145].

М. bovis является основным возбудителем туберкулеза у крупного рогатого скота, также он патогенен для других домашних и диких жвачных, человека, приматов, плотоядных, попугаев и некоторых видов птиц [124]. M.bovis представляют собой слегка изогнутые или прямые, короткие или умеренно длинные, тонкие с закругленными краями палочки (0,3 - 0,6 мкм в ширину, 1,5 - 4 мкм в длину). Внутри палочки иногда встречается зернистость (зерна Муха), обычно оно располагается по краям микобактериальной клетки. Как размер, так и число находящихся в них гранул, зависит от возраста культуры и условий ее роста [34, 46, 50, 71]. Однако полиморфизм микобактерий отмечают не только в культуре, но и патологическом материале, где наряду с коккоподобными формами могут присутствовать и другие морфологические формы. Оптимальная температура роста М. bovis - 37-38°С. Добавление к яичным средам 4 % и более глицерина замедляет рост микобактерий, а при добавлении 5 — 6% рост колоний может вообще прекратится. При высеве патологического материала на среду Левенштейна - Иенсена вырастают круглые, влажные, почти прозрачные колонии цвета слоновой кости (дисгонический рост) через 3040-60 дней, а иногда и позднее. При посеве субкультур видимый рост

колоний на поверхности среды наблюдается на 28-35 день. Культура М. bovis микроаэрофильная и поэтому в жидких или полужидких питательных средах образует рост на поверхности среды. При выделении из патологического материала колонии вырастают в R и S-форме, а при пересевах культура растет в R-форме и адаптируется к аэробному росту.

Микобактерии этого вида являются патогенными для крупного рогатого скота, свиней, овец, коз, лошадей, верблюдов, оленей, буйволов, собак, маралов, приматов, а также человека. Морские свинки и кролики, зараженные возбудителем или патологическим материалом от больных туберкулезом животных, погибают от генерализованой формы туберкулеза в течении 30-60 дней. У кур, зараженных культурой М. bovis, в органах и тканях отсутствуют характерные для туберкулеза поражения. У крупного рогатого скота, зараженного возбудителем туберкулеза М. bovis, в органах и лимфатических узлах, как правило, развиваются безсосудистые бугорки (туберкулы) светло - серого цвета с творожистым некрозом в центре, которые возвышаются над поверхностью пораженной ткани. При генерализации туберкулезного процесса свойственные туберкулезу поражения обнаруживают и на костальной плевре грудной полости. Иногда при тяжелых патологических процессах в туберкулах (туберкулезных бугорках) при разрезе встречаются и участки петрификации.

В месте, с тем из патологического материала при посеве на среду Школьниковой в модификации Дорожковой в редких случаях выделяют и L-формы М. bovis, значение которых в этиологии заболевания туберкулеза не определено [32].

Возбудитель туберкулеза М. bovis весьма устойчив во внешней среде и к действиям дезинфектантов. Так, по данным ряда исследователей [15], микобактерии туберкулеза М. bovis сохраняют жизнеспособность в разных типах почвы до 390-510 дней, в речной воде до двух месяцев, в замороженном мясе - до года, в штабелях навоза - до 24-26 месяцев. Пастбищные участки, на которых выпасались больные животные,

представляют опасность для восприимчивых животных в течении всего летнего периода [81]. В стерильных условиях при температуре 38°С М. bovis выживает до 20 месяцев, а вирулентность М. bovis сохраняется до 7 месяцев. Под действием солнечных лучей микобактерии остаются жизнеспособными от 35 до 43 дней, а в тени - 71-86 дней [56]

М. tuberculosis - основной возбудитель туберкулеза у человека, однако он патогенен и для приматов, собак, белых мышей, попугаев и некоторых других животных, контактирующих с больным туберкулезом человеком. Слабо патогенен для кошек, коз, крупного рогатого скота и домашней птицы. М. tuberculosis имеет вид прямых или слегка изогнутых тонких удлиненных палочек, от 1-6 мкм длиной и 0,3-0,6 мкм шириной, иногда встречаются очень короткие или длинные, а иногда ветвящиеся формы [34, 71]. Микобактериям этого вида свойственен также полиморфизм (L-формы). Особенно часто полиморфные культуры микобактерий выделяют от больных людей, подвергавшися лечению антибактериальными препаратами. Молодые культуры микобактерий (20-30 дней) - длиннее, а старые (70-90 дней) - короче, также среди них могут появляются и кокковые формы. В старых культурах иногда бывают ветвистые формы микобактерий. M.tuberculosis вырастают на искусственных питательных средах быстрее, чем M.bovis. Добавление к питательным средам 5% глицерина улучшает и ускоряет рост М. tuberculosis. На плотных яичных питательных средах рост колоний отмечается на 20-30-60 день в виде сухих, крошковатых, матовых колоний неправильной формы, иногда напоминающих цветную капусту (Биформа), но могут расти и гладкие, сливающиеся между собой колонии (S-форма). На картофельной среде Павловского с 5%-й сывороткой они вырастают быстрее, с толстыми складчатыми краями колонии (эугонический рост) [155]. Обычно колонии имеют цвет слоновой кости, однако при старении приобретают кремовую или слегка желтоватую окраску. В воде и физиологическом растворе плохо суспензируются. Культуры М. tuberculosis высокоаэробны, посев в жидкую или полужидкую синтетическую

питательную среду наблюдают рост колоний на поверхности среды. Оптимальная температура роста 37°С, но могут расти, хотя значительно хуже, и при 30-34°С с рН 6,4 - 7,0. При комнатной температуре (22°С) и повышенной температуре (45°С) М. tuberculosis не растут [41, 42].

У зараженных культурой М. tuberculosis кроликов, как правило, генерализованый туберкулезный процесс не развивается, а в легких, печени, почках образуются единичные туберкулезные поражения. У зараженных морских свинок через 2-3 недели на месте введения культуры образуется долго не заживляющие язвы, а через 30-40 дней и более они погибают от генерализованой формы туберкулеза. У кур, зараженных культурой М. tuberculosis, в органах и тканях, свойственных туберкулезу поражений не бывает. У крупного рогатого скота, инфицированного М. tuberculosis, отмечают повышенную чувствительность к туберкулину для млекопитающих. В редких случаях в ослабленном организме возбудитель вызывает единичные изменения в региональных лимфатических узлах и в месте проникновения микобактерий [106, 122]. В месте, с тем возможно и бессимптомное течение инфекции, во время которого зараженные животные являются источником возбудителя инфекции и представляют эпизоотическую и эпидемическую опасность[105, 128].

Н. Савов отмечал, что в лабораторных условиях при комнатной температуре М. tuberculosis выживает до 2,6 лет, а в почве - до 3 месяцев [151].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Тарасова, Елена Владимировна, 2012 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Аликаева А.П. Упрощенный метод выделения и выращивания чистых культур туберкулезных бацилл из патологического материала / А.П. Аликаева //Сов. ветеринария. - 1940. - № 11. - С. 47 -50.

2. Байгазанов А.Н. Изменчивость микобактерий на персистенцию L-форм возбудителя туберкулеза в организме животных / А.И. Байгазанов // Основные научные исследования по проблеме туберкулеза и бруцеллеза сельскохозяйственных животных, профилактика и организация мероприятий по ликвидации болезней в регионе Сибири. - Нововосибирск, 1995. - С. 53 -54.

3. Байтерякова Т.Н. Персистирование микобактерий в организме КРС / Т. Н. Байтерякова, И.Н. Рубцова, Ю.А. Макаров // Проблемы туберкулеза. -1982. -№ 11. - С. 59-62.

4. Бакулов И. А. Проблема L форм бактерий в ветеринарии / И. А. Бакулов, Т. Я. Зеленцова // Ветеринария. - 1980. - № 10. - С. 23-27.

5. Балта Ю.Е. Влияние массивности бактериовыделения на индукцию L-форм микобактерий туберкулеза / Ю.Е. Балта // Микробиологическое методы исследования в современной фтизиопульмонологической клинике : сб. тр.-М., 1981.-С. 112-115.

6. Белобородова A.A. Усовершенствование лабораторной диагностики туберкулеза сельскохозяйственных животных// Материалы междунар. науч.-практич. конф. мол. ученых. Молодые ученые - аграрной науке. - Омск, 2006.- С. 122-126.

7. Белобородова A.A. Повышение эффективности лабораторной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота.: автореф. дис. канд. вет. наук 16. 00. 03 / A.A. Белобородова (ФГОУ ВПО «Новосибирский государственный аграрный университет»).: - Новосибирск, 2008 - 17 с.

8. Беспалова Т.А. Влияние туберкулостатиков на персистенцию L-форм возбудителя туберкулеза в организме животных / Т.А. Беспалова // Методы

диагностики и профилактики бруцеллеза и туберкулеза животных : сб. науч. тр.-Омск, 1988.-С. 118-121.

9. Бойко A.A. Туберкулез крупного рогатого скота / A.A. Бойко, Е.П. Сапегина. - М., 1991. - 91 с.

10. БурякЕ.И. Изучение динамики проявления внутрикожных туберкулиновых реакций у коров из неблагополучных по туберкулезу стад / Е.И. Буряк // Инфекц. и инвазион. болезни с.-х. животных. - 1982 - С. 15-20.

11. Быстрорастущие атипичные микобактерии и их значение в патологии крупного рогатого скота / В.Е. Щуревский [и др.] // Ветеринария. - 1984.-№9.-С. 29-30.

12. Вассимирская Т.А. Бактериологическая диагностика туберкулеза крупного рогатого скота с учетом изменчивости свойств возбудителя / Т.А. Вассимирская //Патология сельскохозяйственных животных и пути ее профилактики: материалы 6-й межрегион, науч.-практ. конф., посвящ. 85-летию СибНИВИ-ВНИИБТЖ. - Омск, 2007. - Вып. 2. - С. 40 - 44.

13. Вейсфелер Ю.К. Биология и изменчивость микобактерий туберкулеза и атипичные микобактерии / Ю.К. Вейсфелер пер. с нем. -Будапешт, 1975. - 334 с.

14.. Карачунский М.А. Выделение L-форм микобактерий туберкулеза как дополнительный признак при дифференциальной диагностике туберкулом / М.А. Карачунский [и др.] // Тр. ЦНИИТ МЗ СССР. - М., 1978. -Т. XXVI. - С. 14-16.

15. Выживаемость микобактерий туберкулеза бычьего вида в почве в естественных условиях / Н.И. Овсяников [и др.] // Совершенствование систем и методов в борьбе с бруцеллезом и туберкулезом животных. -ВАСХНИЛСиб. Новосибирск - 1987. - С. 86-92.

16. Галатова Л.В. Свойства L-форм микобактерий / A.B. Галатова, М.И. Гетман, A.A. Петров // Ветеринария. - 1990. - № 2. - С. 32-33.

17. Галатова, JI.В. Изоляция L-форм микобактерий из молока коров неблагополучных и оздоровленных стад от туберкулеза: автореф. дис. канд. вет. наук / Л.В. Галатова.- Омск, 1993.-17 с.

18. Галатова, Л.В. Рекомендации по выделению L-форм микобактерий из патологического материала и молока коров / Л.В. Галатова, М.И. Гертман, A.A. Петров, B.C. Федосеев. Челябинск, 1993.-6с.

19. Галатова, Л.В. Выделение микобактерий из молока коров разные сроки после отела / Л.В. Галатова // Путиповышения породных и продуктивных качеств с/х животных в зоне Южного Урала.- Екатеринбург, 2000. С. 86-88.

20. Гертман М.И. Биологические свойства L-форм Mycobacterium bovis : автореф. дис... канд. вет. наук: 16.00.03 / М.И. Гертман; [Всесоюзный ордена Ленина НИИЭВ имени Я.Р. Коваленко]. - М., 1988. - 20 с.

21. Гертман М.И. Выделение L-формы микобактерий из молока коров / М.И. Гертман //Ветеринария. - 1990. - № 6. - С. 30 - 31.

22. Гизатулин Х.Г. Выделение L-форм микобактерий штамма БЦЖ / Х.Г. Гизатулин, М.В. Сафин, М.В. Харитонов // Ветеринария. - 1980. - № 9. -С. 33-37.

23. Голышевская В.И. Современные методы микробиологической диагностики туберкулёза / В.И. Голышевская, Л.П. Мартынова, Э.В. Севастьянова // Российский медицинский журнал. 2001. - № 4. - С. 15-19.

24. Голышевская, В.И. Патоморфологические реакции, вызванные измененными микобактериями туберкулеза / В.И. Голышевская // Ветеринарная патология, 2004. № 1 - 2. - С. 28 - 30.

25. Голышевская, В.И. Совершенствование микробиологической диагностики туберкулеза с учетом выявления L-форм и ультрамелких бактерий / В.И. Голышевская, Т.Т. Попеску // Проблемы туберкулеза, 1989. № 10.-С. 38-40.

26. Данко Ю.Ю. Эпизоотический надзор при туберкулезе крупного рогатого скота / Ю.Ю. Данко // Автореферат доктора ветеринарных наук. Санкт-Петербург-2000. С. 46

27. Данко Ю.Ю. Эпизоотические особенности туберкулезной инфекции ... -Запада России /Данко Ю.Ю.// Ветеринарный консультант. — СПб, 2006. -№7.-С.16-18.

28. Деменчук Л.Г. Патогенные свойства L-формы микобактерий в эксперименте на сельскохозяйственных животных [опыты на морских синках] / Л.Г. Деменчук //Ветеринария. - 2000. - № 3. - С. 782.

29. Демченко A.B. К вопросу об эффективности внутрикожной туберкулиновой пробы и серологических реакций в диагностике туберкулеза крупного рогатого скота / A.B. Демченко, М.Т. Кондратюк // Профилактика и лечение заболеваний с.-х. животных и птицы. - Одесса, 1988 - С. 3-6.

30. Дзись Е.И. Роль измененных микобактерий в течении туберкулезной инфекции : автореф. дис... д-ра мед. наук : 14.00.26, 03.00.07 : / Е.И. Дзись; [Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза]. - М., 1994.- 40 с.

31. Диагностика туберкулеза при массовых туберкулиновых реакциях у крупного рогатого скота / Л.М. Ходун [и др.] // Ветеринария. - 1991. - № 11 .С. 23-25.

32. Дорожкова И.Р. Выделение L-форм микобактерий туберкулеза из патологического материала / И.Р. Дорожкова, З.Н. Кочемасова, М.М. Дыхно. -М., 1994.-19 с.

33. Донченко A.C. Факторы, влияющие на распространение и стационарное течение туберкулёза животных / Актуальные проблемы туберкулёза и бруцеллёза с-х животных. - Новосибирск, 1989. - С. 19-31.

34. Драбкина P.O. Микробиология туберкулеза / P.O. Драбкина. - М.: Медгиз, 1963.-256 с.

35. Дыхно М.М. Дифиринцирование атипичных микобактерий / М.М. Дыхно, З.Н. Кочемасова, JI.E. Рыбак // Труды 1-го Московского медицинского ин-та. - М., 1963. - Т. 23. - С. 246 - 256.

36. Дяченко Г. Проблема диагностика туберкулеза сельскохозяйственных животных в современных условиях / Г. Дяченко, Н. Кравченко, В. Романенко //Вет. медицина Украины. - 2006. - № 2. -С. 5-7.

37. Земскова З.С. Скрыто протекающая туберкулезная инфекция / З.С. Земскова, И.Р. Дорожкова. - М., 1984. - 221 с.

38. Значение состава внутриклеточных белков в таксономии микобактерий туберкулеза / Н.И. Фадееа [и др.] // Проблемы туберкулеза-1981.-№3.-С. 63-67.

39. Зыкин Л.Ф., L-формы возбудителей зооантропонозов / Васильев Д.А.// Ульяновск, - 2000. - 68 с.

40. Зыков М.П. Микробиология туберкулеза / М.П. Зыков. -Л.: Медицина, 1976. - 160 с.

41. Зыков М.П. Потенциально патогенные микобактерии и лабораторная диагностика микобактериозов / М.П. Зыков, Т.Б. Ильина. - М.: Медицина, 1978. - 145 с.

42. Идентификация L-форм Mycobacterium tuberculosis с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) / Е.В. Вишневская [и др.] // Проблемы туберкулеза. - 2001. - № 4. - С. 38 - 40.

43. Идентификация адаптивных форм возбудителя туберкулеза / В.В. Власенко [и др.] // Научный вестник ЛНУВМ и БТ им. С.З. Гжицького. - 2007. - Т. 9, №3 (34), ч. 1. - С. 11 - 19.

44. Изменчивость возбудителя туберкулеза в организме не свойственного хозяина / В.Ф. Романенко [и др.] // Ветеринария- 1997. -№ 1.-С. 20-24.

45. Изучение природы аллергических реакций на туберкулин у крупного рогатого скота / Ю.Я. Кассич [и др.] - 1991- № 9 - С. 21-23.

46. Ильина T.B. Бактериологическая и биохимическая идентификация микобактерий / Ильина Т.В. : методичекие рекомендации. - Л., 1980 - 19 с.

47. Исачкова Л. М., Жаворонкова А. А. Шубин Ф. Н. L трансформация иерсиний при экспериментальном псевдотуберкул езе//Ж. Микробиол., эпидемиол., иммун. 1993, № 1, с. 11-16.

48. Каган Г.Я. Биологические особенности фильтрующихся и L-форм бактерий / Г.Я. Каган // Материалы XIII Всесоюз. съезда гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов и инфекционистов. - М., 1959. - Т. 2. - С. 183-185.

49. Каграманов А.И. Об атипичных кислотоустойчивых микобактериях / А.И. Каграманов // Проблемы туберкулеза. - 1963. - № 7. - С. 69 - 74.

50. Каграманов А.И Учение о возбудителе туберкулеза / А.И. Каграманов // Проблемы туберкулеза. - 1967. - № 11. - С. 21 - 26.

51. Кадочкин A.M. Атипичные микобактерии и их роль в сенсибилизации животных к туберкулину / A.M. Кадочкин, A.B. Ткочев-Кузьмин // Бюл. ВИЭВ. - М.,1983. - Вып. 51. - С. 50 - 52.

52. Калина Г.П. Изменчивость патогенных микроорганизмов / Т.П. Калина. - К, 1949. - С. 61-98.

53. Калина Г.П. Фильтрующиеся формы бактерий / Г.П. Калина // Труды института микробиологии АН СССР. - М., 1951. - Т. 1. - С. 44 - 62.

54. Каплун В.И. Выживаемость и сохранение исходных свойств микобактерий бычьего вида в почве / Колыванова Г.Е. // Методы диагностики и профилактики бруцеллёза и туберкулёза животных: Сб. науч. тр. ВАСХНИЛ. - Омск, 1988.-С. 127-131.

55. Каримова Л.М. Сохранение жизнеспособности возбудителя туберкулёза крупного рогатого скота и атипичных микобактерий в молоке / С.С. Меркулова // Разработка средств и методов борьбы с туберкулёзом животных. - Новосибирск, 1990. - С. 102-110.

56. Кисленко В.Н. Выживаемость микобактерий туберкулёза бычьего типа в почве пастбищ / В.Н. Кисленко // Ветеринария. - 1972. - № 6. - С. 4851.

57. Керимжанова Б.Ф. Значение L-форм микобактерий в эпизоотологии туберкулеза крупного рогатого скота. // Тезисы докладов научной конференции ЛВИ / Л., 1991. - с. 41-42.

58.. Керимжанова Б.Ф. Роль патогенных, атипичных и L-форм микобактерий в эпизоотологии туберкулеза крупного рогатого скота: Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук. Ленинград, 1993 - 27 с.

59. Керимжанова Б.Ф. Совершенствование бактериологического метод адиагностики на туберкулез животных. // Сборник научных трудов ЛВИ/Л., 1990.-е. 46-50.

60. Кириленко Н.Г. L-формы микобактерий выделенных из организма КРС / Н.Г. Кириленко // Совершенствование вет мероприятий в борьбе с инфекционными болезнями с.-х. животных в Казахстане / Казахский НИВИ. - Алма-Ата, 1981(1982). - С. 30 - 33..

61. Клебанова A.A. Частота выделения атипичных вариантов микобактерий туберкулеза / A.A. Клебанова // Труды 7-го Всесоюзного съезда фтизиатров. - М., 1966. - С. 537 - 540.

62. Коваленко A.M. Диагностика и профилактика туберкулеза животных / Коваленко Л.В. - 2010. - 237с.

63. Коган Б.И. Субмикроскопическая организация микобактерий при воздействии туберкулостатических препаратов: автореф. дис... канд. вет. наук: 16.00.03 / Б.И.Коган; [Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока]. - Новосибирск, 1990. - 19 с.

64. Козлов B.C. Изменчивость и выживаемость М. avium в почве / B.C. Козлов // Пробл. туберкулеза. - 1974.- № 10. - С. 78.

65. Колычев Н.М. О сохранении вирулентности микобактерий во внешней среде / Н.М. Колычев // Ветеринария. - 1987. - № 5. - С. 29-32.

66. Косенко В.И. Влияние обработки патологического материала на высеваемость микобактерий туберкулеза / В.И. Косенко, A.M. Кадочкин, Н.М. Тажгалиев // Ветеринария. 1984. - № 5. - С. 67 - 68.

67. Кочемасова З.Н. L-формы в моче больных туберкулезом почек / З.Н. Кочемасова // Проблемы туберкулеза. - 1975. - № 4. - С. 68-70.

68. Кочемасова 3. Н. L формы микобактерий туберкулеза / 3. Н. Кочемасова. -М.: Медицина, 1980. - 174 с.

69. Кузин А.И. Латентная туберкулезная инфекция и ее значение в эпизоотологии туберкулеза крупного рогатого скота. [Текст] : автореф. дис... канд. вет. наук : 16.00.03 / А.И.Кузин; [Всесоюзная академия сельскохозяйственных наук имени В.И. Ленина (ВАСХНИЛ)]. - М., 1977. -30 с.

70. Кузин Л. И. Туберкулез сельскохозяйственных животных и его профилактика / Л. И. Кузин. - М.: Росагропромиздат, 1992. - С. 131-140.

71. Лабораторная диагностика туберкулеза / под ред. В.И. Литвинова, A.M. Мороза. -М., 2001 г. - 175 с.

72. Лакман Э.Д. Значение анергии в осуществлении противотуберкулезных мероприятий / Э.Д. Лакман // Эффективность мероприятий по борьбе с туберкулезом животных. - К., 1982. - С. 89-91.

73. Левашев B.C. Генетическая характеристика L-форм бактерий, процессов их образования и реверсии: дис... д-ра мед. наук / B.C. Левашев. -М, 1966.-481 с.

74. Лысенко А.П. Антигены M.bovis и атипичные микобактерии, изучение и применение для дифференциальной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота : автореф. дис... д-ра вет. наук : 16.00.03 / А.П. Лысенко ; [БелНИЭВ]. - Минск, 1994. - 33 с.

75. Макаров, Ю.А. L-формы микобактерий туберкулеза / Ю.А. Макаров,- Благовещинск,1997 -131 с.

76. Марта О.В. О роли лабораторной диагностики при ликвидации туберкулеза крупного рогатого скота / О.В. Марта // Актуальные вопросы

профилактики и борьбы с болезнями с.-х. животных в специализированных хозяйствах и комплексах : тез. докл. респ. науч.-практ. конф. - Минск, 1983. - С. 20 - 22.

77. Марта О.В. Современное состояние проблемы атипичных микобактерий в ветеринарии / О.В. Марта // Ветеринария. - 1982. - № 5. -С. 22-24.

78. Мартынова Е.С. L-трансформация микобактерий при лечении экспериментального туберкулеза морских свинок / Е.С. Мартынова, Е.Е. Мироненко, В.И. Околелов // Эпизоотология диагностика и профилактика туберкулеза и бруцеллеза животных: Сб. науч. тр. / СО ВАСХНИЛ. ИЭВСиДВ. - Новосибирск, 1990. - С.70-76.

79. Мельникова H.H. Бактериологическая диагностика туберкулеза внелегочных локализаций с исследованием L-трансформированных вариантов микобактерий.: автореф. дис... канд. вет. наук : 03.00.07 / H.H. Мельникова; [Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии Росздрава]. - СПб., 2007. - 23 с.

80. Методические указания по выявлению возбудителей туберкулеза М. bovis и М. tuberculosis методом полимеразной цепной реакции / А.Н.Панин [и др.] // Методические указания по диагностике заболеваний с.-х. животных методом полимеразной цепной реакции / Под ред. А.А.Гусева и А.Н.Панина. - Владимир, 1998. - С. 438-450.

81. Микобактериозы у крупного рогатого скота / В.П. Урбан [и др.] // Сб. науч. трудов ЛВИ. - Л., 1986.-Вып. 85.-С. 104-110.

82. Мусин А.Ж. L-трансформация микобактерий туберкулеза в организме крупного рогатого скота : автореф. дис... канд. вет. наук : 16.00.03 / А.Ж. Мусин; [Алма-Атинский зооветеринарный институт]. - Алма-Ата, 1985.-22с.

83. Найманов А.Х. Сравнительное изучение гласного и внутрикожного применения ППД - туберкулина для млекопитающих / А.Х. Найманов // Бюллетень ВИЭВ. - М., 1991. - Вып. 43. - С. 12-18.

84. Наставление по диагностике туберкулеза. Департамент ветеринарии МСХ РФ 18.11.2002.

85. О роли латентных, трудно культивируемых и некультивируемых персистентных бактерий в патологии человека / И.В. Елесеева [и др.] //Анали Мечниковського инситуту- 2006. - № 1 .-46 с.

86. О способности рифампицилина и его сочетание с другими препаратами вызывать образования L-формы микобактерий туберкулеза [Текст] / A.B. Волк // Антибиотик. - 1973. - № 8. - С. 706 - 710.

87. Овдиенко Н.П. Профилактика и ликвидация туберкулеза крупного рогатого скота / Н.П. Овдиенко // Ветеринария. - 1986. - № 9. - С. 15-19.

88. Ойвин H.A. Статистическая обработка результатов экспериментальных исследований / И.А. Ойвин // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 1960.-№ 4 - С. 396-401.

89. Определитель бактерий Берги / под ред. Дж. Хоулта [и др.]. - М.: Мир, 1997.-Т. 2.-495 с.

90. Ощепков В.Г. Распространенность, видовой состав и биологические свойства L-формы микобактерий в объектах внешней среды / В.Г. Ощепков [и др.] // Актуальные проблемы бруцеллеза и туберкулеза животных : сб. науч. тр. РАСХН, Сиб. отд-ние ВНИИБТЖ. - Омск, 2000. - С. 119 - 130.

91. Ощепков В.Г. Индукция и культивирования L-форм патогенных и атипичных микобактерий / Ощепков В.Г., Талер JI.A., Секин Е.Ю. // Эпизоотология и профилактика инфекционных болезней КРС: междун. наук.-практ. конф., 14-17 март. 2006 р.: тези докладов. - К., 2006. - С. 67.

92. Ощепков В.Г. L-трансформация микобактерий под действием химических веществ и свойства культур ревертантов / В.Г. Ощепков, Е.Ю. Секин, JI.A. Таллер // Инфекционная патология животных: Сб. науч. тр. юбилейный вып. / СО РАСХН. ВНИИБТЖ. - Омск, 2001. - С. 207-210.

93. Ощепков В.Г. К проблеме индентификации L-форм микобактерий туберкулеза /В.Г. Ощепков, JI.B. Галатова, В.П. Диктовский // Проблемы

инфекционной патологии а регионе Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера: Матер, науч. конф. / СО РАСХН. - Новосибирск, 1998.-192 с.

94. Пастор Е.А. К вопросу о строении и способе развития бугорковой палочки / Е.А. Пастор // Еженедельная клин, газета. - 1988. - № 1- С. 12-13.

95. Патологическая анатомия туберкулеза / под ред. В.В. Ерохина, З.С. Земсковой, М.В. Шиловой. - М., 2000 г. - 149 с.

96. Патологоанатомическая диагностика туберкулеза // Ветеринария. -1980.-№ 10.-С. 31-33.

97. Пешков А.Г. Генетика бактерий // Ветеринарная энциклопедия / [под. ред. К.И. Скрябина]. - М.: Изд-во «Сов. энциклопедия», 1969. - Т. 2. -С. 362-366.

98. Пешков М.А. О так называемых L-формах бактерий / М.А. Пешков // Микробиология. - 1954. - № 5. - С. 607 - 628.

99. Пичугин JI.M. Практикум по патологической анатомии сельскохозяйственных животных / JLM. Пичугин, A.B. Акулов. - М.: Колос, 1980.-288 с.

100. Погуляева Л.В. Выделение атипичных микобактерий в неблагополучных по туберкулёзу хозяйствах / Л.А. Ильиных // Методы диагностики и профилактики бруцеллёза и туберкулёза животных: Сб. науч. тр. / ВАСХНИЛ. - Омск, 1988.-С. 127-131.

101. Прозоровский С.В. L-форм бактерий (механизм образования, структуры, роль и патология) / С.В. Прозоровский, Г.Я. Кац, Г.Я. Каган. - М.: Медицина, 1981.-240 с.

102. ПЦР при диагностике туберкулеза / А. Н. Шаров [и др.] // Ветеринария. - 2000. - № 10. - С. 19-22.

103. Реверсибельность L-форм микобактерий, выделенных от крупного рогатого скота / Л.В. Галатова, М.И. Герман, A.A. Петров, В.Г. Ощепков // Актуальные проблемы бруцеллеза и туберкулеза животных: Сб. науч. тр. / СО РАСХН. ВНИИБТЖ. - Омск, 2000. - С. 81-86.

104. Ротов В.И. Степень опасности M.avium для с.-х.- животных и человека / В.И. Ротов, П.Е. Савченко // Пробл. туберкулеза. - 1975 - № 9. -С. 72-74.

105. Ротов В.И. Туберкулез птиц / В.И. Ротов. - К.: Урожай, 1976. -

150 с.

106. Ротов В.И. Туберкулез сельскохозяйственных животных / В.И. Ротов [и др.]. - К.: Урожай, 1978.-237 с.

107. Рубцова И.Н. Измененные формы микобактерий в организме сельскохозяйственных животных и их значение в бактериологической диагностике туберкулеза / И.Н. Рубцова // Бюл. ВНИИЭВ им. Л.Р. Коваленко. - М., 1983. - Вып. 51. - С. 32.

108. Савченко П.Е. Лабораторная диагностика туберкулеза животных / П.Е. Савченко. - Чернигов, 1998. - 64 с.

109. Савченко П.Е. Экспериментальная и спонтанная индукцил L- форм туберкулеза и других микобактерий / П.Е. Савченко // Проблемы туберкулеза. - 1980. - № 12. - С. 54 - 56.

110. Савченко П.Е. О распространении и размножении микобактерий в воде / Г.А. Соколова // Проблемы туберкулёза. - 1979. - №7 . - С. 63-65.

111. Сафин М.А. Совершенствование диагностики, профилактики и мер ликвидации туберкулеза крупного рогатого скота : автореф. дис... д-ра вет. наук : 16.00.03 / М.А. Сафин ; [Казан, вет. ин-т]. - Казань, 1980. - 32 с.

112. Свириденко Н.А. Совершенствование бактериологической диагностики туберкулеза / Н.С. Боганец, Ю.И. Смолянинов, Л.Т. Аппельганц // сб. науч. тр. СО РАСХН. ВНИИБТЖ. 6-й межрегион, науч.-практ. конф. - Омск, 2006.- С. 29-33.

113. Секин Е.Ю. Сравнительное изучение модификации полужидкой среды Дорожковой для культивирования L-форм микобактерий / Е.Ю. Секин, Л.А. Таллер // Инфекционная патология животных: Сб. науч. тр. юбилейный вып. / СО РАСХН. ВНИИБТЖ. - Омск, 2001. - С. 222-223.

114. Секин Е.Ю. Влияние дезинфектантов на L-трансформацию паторенных и атипичных микобактерий / Е.Ю. Секин // Матер. Всерос. науч. конф. по проблемах хронических инфекций (бруцеллеза, туберкулеза) (16-17 мая 2001 г.): Сб. науч. тр. / СО РАСХН. ВНИИБТЖ. - Омск, 2001. - С. 185187.

115. Середин В.А. Сравнительная оценка методов диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / В.А. Середин // Диагностика и специфическая профилактика бруцеллеза и туберкулеза животных. -Новосибирск, 1988. - С. 43-46.

116. Солонеко A.A. Атипичные микобактерии в окружающей среде / М.М. Григорьев // Ветеринарная наука - производству: Межвед. тематич. сб. -Минск, 1982.-Вып. 19.-С. 14-16.

117. Солодова, И.В. Современное состояние по туберкулезу крупного рогатого скота хозяйств Центрального Федерального округа Российской Федерации / И.В.Солодова // Ветеринарная патология. - 2004. - №1-2(9). - С. 57-61.

118. Способ предпосевной обработки биоматериала для изоляции JI-форм микобактерий / Е.Ю. Секин, JI.A. Таллер, Г.М. Дюсенова В.Г. Ощепков // Эпизоотология, диагностики и профилактики хронических инфекционных болезнях животных: Сб. науч. тр. (Матер, междунар. науч. - прак. конф., посвященной 175-летию аграрной науки Сибири, Омск, 24-26 июня 2003 г.) / СО РАСХН. ВНИИБТЖ. - Омск, 2003. - С. 29-31.

119. Таллер JI.A. Изучение сенсибилизирующих свойств L-форм микобактерий на лабораторных животных / JI.A. Таллер, Е.Ю. Секин // Эпизоотология, диагностики и профилактики хронических инфекционных болезнях животных: Сб. науч. тр. (Матер, междунар. науч. - прак. конф., посвященной 175-летию аграрной науки Сибири, Омск, 24-26 июня 2003 г.) / СО РАСХН. ВНИИБТЖ. - Омск, 2003. - С. 151-153.

120. Тогунова А.И. Значение проблемы так называемых атипичных, или анонимных микобактерий в микробиологии и патологии человека /

А.И. Тогунова // Труды 7-го Всесоюз. съезда фтизиатров. - М., 1966. -С. 521-525.

121. Тогунова А.И. Современное состояние вопроса о фильтрующихся формах возбудителя туберкулеза / А.И. Тогунова // Вопросы туберкулеза. -1926.-№3.-С. 14-16.

122. Туберкулез животных и меры борьбы с ним / Ю.Я. Кассич [и др.]. - К.: Урожай, 1990. - 297 с.

123. Туберкулез сельскохозяйственных животных / О.В. Мартма [и др.]; под ред. В.П.Шишкова, В.П.Урбана. - М.: Агропромиздат, 1991. - 246 с.

124. Туберкулез. Руководство для врачей / под ред. А.Г. Хоменко. - М., 1996.-493 с.

125. Тузова Р.В. Патологоанатомические изменения у крупного рогатого скота туберкулезных изолятов / Р.В. Тузова // Материалы науч.-производ. конф. Белорусского НИВИ. - Минск, 1964. - С. 14-16.

126. Урбан В.П. Оценка туберкулиновой пробы при различных течениях инфекционного и эпизоотического процессов при туберкулезе крупного рогатого скота / В.П. Урбан, Ю.Ю. Данко // Теоретические и практические вопросы ветеринарии - 1993-Т. 2 - С. 8-15.

127. Урбан В.П. О природе рецидивов при туберкулезе крупного рогатого скота / В.П. Урбан // Состояние и перспективы научных исследований по диагностике и профилактике туберкулеза и бруцеллеза и мерам борьбы с этими болезнями сельскохозяйственных животных. - Омск, 1980.-С. 49-51.

128. Урбан В.П. L-трансформация бруцелл и значение ее в эпизоотологии бруцеллеза / В.П. Урбан, B.F. Ощепков /У Тез. докл. 3 Всесоюзной конф. по эпизоотологии. Новосибирск, 1991. - С. 183-185.

129. Федосеев В. С. Биологическая сущность эпизоотического процесса при туберкулезе / В. С. Федосеев // Система мер борьбы с туберкулезом с.-х. животных. - Новосибирск, 1991. - С. 147-151.

130. Федосеев В. С. L трансформация микобактерий / В. С. Федосеер, И. Н.Рубцова, М. Т. Кириленко // Ветеринария. - 1985. - № 2. - С. 30-32.

131. Федосеев B.C. Бактериологический надзор как элемент эпизоотического мониторинга / В. С. Федосеев [и др.] // Система мер борьбы с туберкулезом с.-х. животных. - Новосибирск, 1991. - С. 151.

132. Федосеев В. С. Проблемы изменчивости микобактерий /

B. С. Федосеев, И. Н. Рубцова, А. Н. Байгазанов // Совершенствование системы и методы в борьбе с бруцеллеза и туберкулеза животных / ВНИИ бруцеллеза и туберкулеза животных. - Новосибирск, 1987. - С. 82 - 86.

133. Федосеев B.C. L-формы микобактерий туберкулеза, выделенные от телят, подвергнутых химиопрофилактике изониазидом /B.C. Федосеев, А.Ж. Мусин // Совершенствование ветеринарных мероприятий в борьбе с инфекционными болезнями с.-х. животных в Казахстане. - Алма-Ата, 1981-

C. 67-70.

134. Федосеев B.C. Изменчивость возбудителя туберкулеза и ее связь с эпизоотологическим состоянием / В. С. Федосеев // Бюл. ВНИИЭВ им. Л.Р. Коваленко. -М., 1983. -Вып. 51. - С. 28.

135. Финн Э.Р. Пути повышения высеваемости и ускорения роста микобактерий туберкулеза в современных условиях их изменчивость: автореф. дис... канд. вет. наук : 16.00.03 / Э.Р. Финн. - Кишенев, 1973. -20 с.

136. Хамзин, А.З. Выделение L форм микобактерий от крупного рогатого скота в оздоровленных от этой инфекции хозяйствах / А.З. Хамзин, Г.М. Сафина // Ветеринарный врач. - 2001. - № 3. - С. 56 -57.

137. Ходун Л.М. Выделение атипичных микобактерий от нереагирующих на туберкулин животных / Л.М. Ходун, Л.В. Погуляева, Л.А. Ильиных // Ветеринария. - 1990. - № 6.- С. 29-30.

138. Ходун Л.М. Метод ИФА для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / Л.М. Ходун, Н.И. Цунская // Сб. науч. тр. / ВНИИ бруцеллеза и туберкулеза животных. - Омск, 1989. - С. 31-34.

139. Ходун JI.M. О сезонной зависимости аллергических реакций на туберкулин у крупного рогатого скота / Л.М. Ходун, В.П. Курдюк // Ветеринария. - 1987. -№ 12. - С. 14-16.

140. Частота выявления и клинико-диагностическое значение L-форм возбудителя у больных туберкулезом органов дыхания и внелегочной локализации / А.П. Бобченок [и др.] // Проблемы туберкулеза. - 2002. - № 4. -С. 19-21.

141. Частота и динамика выделения L-форм микобактерий туберкулеза у больных с рецидивами туберкулеза легких / Е.Ф. Чернушенко, М.Т. Клименко, A.A. Журило и др.// Укр. химиотерапевт, журн.- 2000.- № 3.- С. 17 -20

142. Шаров А.Н. Чувствительность кожи при туберкулинизации /

A.Н. Шаров, К.Н. Ауштрова // Ветеринария. - 1990. - № 12. - С. 24-25.

143. Шишков В.П. Патогенез и патоморфология туберкулеза /

B.П.Шишков, H.A. Налетов, О .Я. Якушев. - М.: Агропромиздат, 1991. -116 с.

144. Школьникова Е.А. Глубокий метод посева на туберкулез непосредственно из патологического материала / Е.А. Школьникова // Проблемы туберкулеза - 1948. - № 6. - С. 63 - 69.

145.. 1 Цеткин A.A. Персистирование L-форм микобактерий туберкулеза в организме крупного рогатого скота / A.A. Щеткин // Вопросы взаимосвязи туберкулеза человека и животных : сб. тр. - Алма-Ата, 1981. - С. 134 - 138.

146. Щуревский В.Е. Атипичные микобактерии и их патогенность для сельскохозяйственных животных / В.Е. Щуревский, Н.П. Овдиенко, A.M. Кадочкин // Ветеринария. - 1978. - № 4. - С. 32 - 35.

147. Щуревский В.Е. Быстрорастущие атипичные микобактерии и их значение в патологии крупного рогатого скота / Овдиенко Н.П., Кадочкин A.M. // Ветеринария. - 1984. - № 9. - С. 29 - 30.

148.. Щуревский В.Е. Диагностика и организация борьбы с туберкулезом сельскохозяйственных животных / В.Е. Щуревский //

Проблемы зоогигиены и ветеринарной санитарии на животноводческих фермах : науч. тр. -М.: Колос, 1970. - С. 199-205.

149. Щуревский В.Е. Патологоанатомическая диагностика туберкулеза / В.Е. Щуревский, О.В.Якушева, Н.П. Овдиенко // Ветеринария. - 1980. -№ 10-С. 31 -33.

150. Юдин Г.А. Неспецифическая реакция на туберкулин у крупного рогатого скота и их практическое значение в системе противотуберкулезных мероприятий.: автореф. дис... д-ра вет. наук: 16.00.03 [Текст] / Г.А.Юдин; [Ленинградский ветеринарный институт]. - Л., 1986. - 44 с.

151. Юсковец М.К. Туберкулез сельскохозяйственных животных и птиц / М.К. Юсковец. - Минск: Госсельхозиздат БССР, 1963. - 449 с.

152. Янченко Т.А. Усовершенствование лабораторной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота.: автореф. дис... кан. вет. наук: 16.02.02 / Т.А. Янченко; ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт бруцелеза и туберкулеза животных Россельхозакадемия (ВНИИБТЖ). -Новосибирск., 2011. - 18 с.

153. Ященко Т.М. Руководство по лабораторным исследованиям по туберкулезу / Т.М. Ященко, И.С. Мечева. - М.: Медицина, 1973. - 260 с.

154. Bojalil L.T. Taxonomia analisis if nonpigmented rapidly growing micobacteria / L.T. Bojalil, J. Cerdon //J. Bact. - 1961. - Vol. 81. - P. 24 - 27.

155. Bonike R Identification of micobacteria by biochemical methods / R. Bonike //Bull. Int. Union. Tuberc. - 1962. - Vol. 32, № 1. - P. 13 - 68.

156. Buchanan A.M. Actinomyces hordeovulneris, a canine pathogen that produces L-phase variants spontaneously with coincident calcium deposition / A.M. Buchanan, J.L. Scott // Am. J. Vet. Res. - 1984. - Vol. 45(12). - P. 25522560.

157. Cabezas de Herrera Stable L-forms of Erwinia cartovora induced by ultraviolet irradiation in spheroplasts, protoplasts and L-forms of bacteria / Cabezas de Herrera, E. O. Garcia Jurado // INSERM. - 1977. - Vol. 64. - P. 107118.

158. Centers for Disease Control and Prevention. Human tuberculosis caused by Mycobacterium bovis—New York City, 2001-2004. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2005;54:605-8

159. Dienes L. Apeculiar reprodyktive process in colon bacillus colonies / L. Dienes // Proc. Soc. Exp. Biol. a. Med. - 1939. - Vol. 42. - P. 773-778.

160. Dienes L. L-tup variant forms in cultures of various bacteria / L. Dienes // Proc. Soc. Exp. Biol. a. Med. - 1939. - Vol. 42. - P. 636 - 640.

161. Dienes L. The significance of the large bidies and the development of L-tupe of colonies in bacteriae cultures / L. Dienes // J. Bact. - 1942 - Vol. 44, № 1.-P.37-72.

162. Dienes, L. Morphology and reproductive processes of the L-forms of bacteria.II: comparative study of L-forms and mycoplasma with the electron microscope / L. Dienes, S. Bullivant // J. Bacteriol. - 1968. - Vol. 95. - P.672-682.

163. Domingue G. J. Bacterial Persistence and Expression of Disease / G. J. Domingue, H. B. Woody // Clinical Microbiol. Rev. - 1997. - Vol. 10, № 2. - P.320-344.

164. Domingue G. J. Cell wall-deficient bacteria: basic principles and clinical significance / G. J. Domingue. - Addison-Wesley Publishing Co., Reading, Mass, 1982.

165. Domingue G.J. Bacterial osmoprotection / G.J. Domingue // J. Lab. Clin. Med. 1991. - Vol. 48. -P.53.

166. Domingue GJ. Cell wall-deficient bacteria: basic principles and clinical significance / G.J. Domingue. - Addison-Wesley Publishing Co., Reading, Mass., 1982.

167. Dorward D.W. DNA is packaged within membrane-derived vesicles of gram-negative but not gram-positive bacteria / D.W. Dorward, Garon C.F. // Appl. Environ. Microbiol. - 1990. - Vol. 56. - P. 1960-1962.

168. Enzootic bovine leukosis and bovine leukemia virus / Ed. A. Burny, M. Man-serichx. Boston etc. i Nijhoff, 1987. - 283 p.

169. Enarson DA, Rieder HL, Meslin FX, Cosivi O. The importance of Mycobacterium bovis to the tuberculosis epidemic in humans. In: Thoen CO, Steel JH, editors. Mycobacterium bovis: infection in animals and humans. Ames (IA): Iowa State University Press; 2006. p.

170. Everman J.F. e. a. Bovine leukemia virus pathogenesis and control / J.F. Everman e. a..-J. Cell. Biochem., 1990, Suppl. 14 D, P. 85.

171. Feldman M.H. An investigation to determine the sensitizing agent in cattle tested with mammalian and with avium tuberculins / M.H. Feldman,

H.E. Moses //Am. J. Vet. Res. - 1942. - Vol. 3. - P. 3-9.

172. Fontes A. Bemerkungen über die tuberculose ifection und che virus / A. Fontes //Memor. Inst. Ows. Crus. - 1910.- № 2.- P. 141-143.

173. Formation and cultivation of Borrellia Burgdorferi spheroplast-L-form variants / V. Preasc Mursic [et al.] // Infection. - 1996. - Vol. 24. - P. 218-226.

174. Formation and cultivation of Borrellia Burgdorferi spheroplast-L-form variants / V. Preasc Mursic [et al.] // Infection. - 1996. - Vol. 24. - P. 218-226.

175. Fornes A. Estudos sobre a tubercuiose / A. Fornes // Metorias do Instituto Oswaldo Kruz. - 1910. - F. 2, № 2. - S. 186.

176. Francis I. The diagnosis of tuberculosis in cattle with special reference to bovine PFD tuberculins / I. Francis, C.I. Choi // XXI World. Veter. Congres. -1979.-P. 17.

177. Grouel R. Die Geflugeltuberkulose des Storungsquelle bei der Rindertuberkulose Kampfung / R. Grouel // Deutsch. Tierarzt. Wschr. - 1958. -№ 18.-S. 516.

178. Guerrero R. Spirosymplokos delcaeiberi nov. gen., nov. sp.: variablediameter composite spirochete from microbial mats / R. Guerrero [et al.] // Arch. Microbiol. - 1993. - Vol. 160. -P.461-470.

179. Gumpert J. Phage adsorption and productive lysis in stable protoplast type L-forms of Bacillus subtilis and Streptomyces hygroscopicus / J. Gumpert,

I. Zimmermann, U. Taubeneck // Basic Microbiol. - 1986. - Vol. 26(1). - P. 1525.

180. Harvick, H. Phagocytosis of microbial L-forms / H. Harvick, L. Barajas // Inf. Immun. 1972. - Vol. 5. - P. 976.

181. Hayflick, L. The Mycoplasmatales and L-phase of bacteria / L. Hayflick. New York, 1969.-P. 267.

182. Harvick, H. Phagocytosis of microbial L-forms / H. Harvick, L. Barajas // Inf. Immun. 1972. - Vol. 5. - P. 976.

183. Heilicek K., Chloype K.B. Ldroje a priciny vzmikre novych ohnisck bowinni tuberkulosy akuta v CSR v letech 1977.

184. Hirachi Y. Studies of antigens related to metabolic and growth inhibitions of Staphylococcus aureus L-form / Y. Hirachi, S. Kotani // Osaka Daigaku Shigaku Zasshi. - 1990. - Vol. 35(1). - P. 333-341.

185. Kestle D. Differential identification of mycobacteria II. Subgroups of Group I and III (Ranyon) with different clinical significance / D. Kestle, V. Abolt, G. Kubica // Amer. Rev. Resp. Dis. - 1967 - Vol. 95. - P. 1041 - 1052.

186. Kieburn J.O. Differential indentification of mycobacterium, the tellurite reduction test / J.O. Kieburn, A. Silcox, G. Kubica // Amer. Rev. Resp. Dis. -1969.-Vol. 99.-P.94- 100.

187. Klieneberger E. Further studies on Streptobaccillus monilifornis and its symbiont / E. Klieneberger // J. Pathol. Bact. - 1936. - Vol. 42. - P. 587 - 593.

188. Klieneberger-Nobel E. Streptobaci moniiliformis and the fitrability of its L-form / E. Klieneberger-Nobel // J. Hug. - Vol. 149. - Vol. 47, № 393. - P. 49.

189. Koch R. Die Atiologies der Tubrrculose / R. Koch // Berl. Klin. Wschr. - 1882. - Hd. 19. - S. 221 - 227.

190. Koch R. Fortsetsung der mitteilung uber ein Heimittel gegem Tuberkulose / R. Koch // Dt. Med. Wschr. -1891.-3.

191. Kubica G.P. Differential identification of mycobacteria / G.P. Kubica //Am. Rev. Resp. Dis. - 1973. - Vol. 103. - P.19-21.

192. Lederberg J. Bacterial protoplasts induced by penicillin / J. Lederberg // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1957. - Vol. 42. - P.574.

193. Lepper A.W.D. / A.W.D. Lepper, K.W.Pearson, L.A. Corner //Australian Veterinary Journal. - 1977. - Vol. 53, № 5. - P. 214 - 216.

194. Li G.L. Induction of the L forms of M. tuberculosis in vivo guinea pigs / G. L. Li // Zhonghua Jie He He Hu Xi Za Zhi. - 1990. - Vol. 13(6). - P.351-354, 381.

195. L-variation in mycobacteris / Z.H. Matiman [et al.] // Am. Resp. Dis-1960.- Vol. 82, № 2.- S. 202-204.

196. L-формы Yersinia pestis у грызунов и эктопаразитов / Л.Ф. Зыкин [и др.] // Журн. микробиологии, эпидемиологии, иммунобиологии. - 1989. -№ 2. - С. 36^10.

197. Madoff S. Mycoplasma and the L-forms of bacteria / S. Madoff. - New York: Gordon and Breach, 1971. - p.

198. Madoff S. The bacterial L-forms / S. Madoff. - NewYork: Marcel Dekker, 1986.

199. Mattman L. H. Cell wall-deficient forms. Stealth pathogens / L. H. Mattman. - 2-nd ed. - CRC Press, 1993.

200. Mattman L.H. L-forms isolated from intections / L.H. Mattman // Microbialprotoplasts, spheroplast and L-forms / Ed. by L.B.Guze. - Baltimore, 1968. -P.472^183.

201. Middlebrook G. Isoniazid-resistiver, Tuberculin reactionen bei Rindern mit grobsinlich Tuberculose-freiem Zerlegungesbefund / G. Middlebrook // Berl. Munch. Tierarztl. Wschir. - 1954. - № 7. - S. 105-108.

202. Monies R.G., Cranwell M.P. et al Bovine tuberculosis in domestic cats //Veterinary Record. 2000, 146: 14, 407-408.

203. Much H. Uber die granulare, nach Ziehl nicht farbbare form des Tuberculosevirus / H. Much // Bestr-Z- klin. d. Tuberk. B. - 1907. - № 8. - P. 8586.

204. Mycobacterium Avium. A Bacteriological and epidemiological studi of M. avium isolated from Animals and Man in Denmark / H.C. Engback [et al.] //Acta pathol. microbiol. - 1968. - Vol. 72, № 2. - P. 277-294.

205. Nassan E. The detection of antibodies to M.tuberculosis by microplate ELIZA / E. Nassan, E. Poersons, G. Johson // Tubercle. - 1976. - Vol. 57. - P. 6770.

206. Neberle K. Shediol zur patholoogishen anatómica and Puthj genese der Tuberculose der Hastiere / K. Neberle // Arch. Weiss and prakt Tierheilkunde -1929. - Bd. 6, № 1-2. - |S. 345 - 347.

207. Negre L. Action des extraits acetoniques de Bacilles de Koch sur les propriétés pathogenes des elements filtrables du virus tuberculeux / L. Negre, J. Valtis // C. r. Soc. boil. - 1939.-Vol. 105.-P. 183 - 185.

208. Nelson E.L. The recovery of L-forms of Brucellia and their relation to Brucella phage / E.L. Nelson, M.J. Pickett // J. Infect, dis. - 1951. - Vol. 89. -P. 226.

209. Nieberle K. Studium zur pathologischen Anatomic und Pathogenese der Tuberkulose der Haustiere / K. Nieberle //Arch. Wiss. u. prokt. Tierheilkunde. - 1929. - Bd. 60, № 1-3. - S. 345-348.

210. Rastogi N. Ultrastructural and chemical studies on wall-deficient forms, spheroplasts and membrane vesicles from Mycobacterium aurum / N. Rastogi, H.L. David // J. Gen. Microbiol. - 1981. - Vol. 124(1). - P. 71-79.

211. Rivolta S. Sulla tuberculosis degli uccelli / S. Rivolta // J. Anat. fiaioi. path. Degli Animali gen. - 1889. - 11.

212. Strauss I., Gamaleia N. Recherches experimentales sur la tuberculose. La tuberculose humaine; sa distinction de la tuberculose des oiseaux //Arch, de med. exper. et d'anat. path - 1891- № 3- 457 s.

213. Smith T. Two varieties of the tubercle bacillus from mammals // Tr. A. Am. Physissians.- 1896 - № 11.- 189 p.

214. Wilkins MJ, Bartlett PC, Frawley B, O'Brien DJ, Miller CE, Boulton ML. Mycobacterium bovis (bovine TB) exposure as a recreational risk for hunters: results of a Michigan Hunter Survey, 2001. Int J Tuberc Lung Dis. 2003;7:1001-9.

министерство СЕЛЬСКОГО хозяйства ро< С и'"к кой федераций

федеральное государственное бюджетм) оы аювательное учереждение вышего професионального образования «белгородская государственная сельскохозяйственная академия ни. вл.. горина»

ДЕСТРУКТИВНЫЕ ПО КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКЕ МИКОБАКТЕРИИ: ДИАГНОСТИКА, КУЛЬТИВИРОВАНИЕ, ИДЕНТИФИКАЦИИ

Методические рекомендации

Белгород 2011

УДК 619:616—002.5/—071

ББК 48.73

Д56

Деструктивные по клеточной стенке микобактерии: диагностика, культивирование, морфология, идентификации: методические рекомендуй ¿а самостоятельной работы студентов по специальности 111801,65 -Ветеринария / составители E.B. Тарасова, A.M. Коваленко. - Белгород. БГСХА, 2011. - 34 с.

Рецензент: доктор ветеринарии наук профессор К.В. Мельникова

Данные методические рекомендации могут быть использованы специалистами ветеринарной медицины, аспирантами, научными сотрудниками и яудеетами факультетов веггеринарнои медицины специалистами ветеринарных диагностических лаборатории и эгозоотологами. Рассмотрены особенности лабораторной диагностики при развитии туберкулёзного процесса и детально изучены возоудители туберкулеза и их культуральные, биологические и молекулярно-генегические свойства. В методических рекомендациях освещены способы выделения чистой культур микобактерии туберкулеза и современные методы генотипирсвания микобактерий с помощью ПЦР и реслрикдиош-ю-энзимного анализа продуктов амплификации.

©Тарасова Е.В, 2011г.

2

Укра'шська академ1я аграрних наук Нацюнальний науковий центр «1нститут експериментальноУ 1 клЫчноУ ветеринарией медицине»

Методичш рекомендацп

«ВИД1ЛЕННЯ Ь-ФОРМ М1КОБАКТЕРШ»

Харюв - 2009

Методичш рекомендацп «Видшення Ь-форм мкобактерш» розглянуто та схвалено методичною комю1е. Нацюнального наукового центру «1нститут експериментальноУ \ юпшчноУ ветеринарно'У медицини» УкраУнськоУ акал ем ¡Т аграрних наук (протокол № 5 в\д «23» вересня 2009 р.) та затверджено Науково методичною радою Державного компету ветеринарноУ медицини УкраУни (протокол № 1 вщ « 23» грудня 2009 р.)

АВТОРИ:

Завгороднш АЛ., доктор ветеринарних наук, професор, член - кореспондент УААН, завщувач лабораторп вивчення туберкульозу ННЦ «1ЕКВМ». Шаповалова О.В., кандидат бюлопчних наук, провщний науковий сшвробкник лаборатор1У вивчення туберкульозу ННЦ «1ЕКВМ» Позмогова С.В, кандидат ветеринарних наук, пpoвiдний науковий сшвроб1тник лабораторп вивчення туберкульозу ННЦ «1ЕКВМ» Бшушко В.В., кандидат ветеринарних наук, провщний науковий сшвроб^ник лабораторй' вивчення туберкульозу ННЦ «1ЕКВМ» Тарасова Е.В., апирант лаборатор1У вивчення туберкульозу ННЦ «1ЕКВМ»

РЕЦЕНЗЕНТИ

Обуховська О.В., кандидат ветеринарних наук, завщувач лаборатор1У вивчення бактер!альних хвороб птищ НИЦ «1ЕКВМ».

Пономаренко Г.В., кандидат ветеринарних наук, доцент кафедри ешзоотолоп'У та ветеринарного менеджменту ХДЗВА.

ПЕРЕВОД

Украинская академия аграрных наук Национальный научный центр «Институт экспериментальной и клинической ветеринарной

медицины»

Методические рекомендации

«ВЫДЕЛЕНИЕ Ь-ФОРМ МИКОБАКТЕРИЙ»

Харьков - 2009

Методические рекомендации «Выделение Ь-форм микобактерий» рассмотренные и одобренные методической комиссией Национального научного центра «Институт экспериментальной и клинической ветеринарной медицины» Украинской академии аграрных наук (протокол №5 «23 сентября 2009г.») и утверждены Научно методическим советом Государственного комитета ветеринарной медицины Украины (протокол №1 от «23 декабря 2009 г.»)

АВТОРЫ:

Завгородний А.И., доктор ветеринарных наук, профессор, член -корреспондент УААН, заведующий лаборатории изучения туберкулеза ННЦ «ИЭКВМ»;

Шаповалова О.В., кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории изучения туберкулеза ННЦ «ИЭКВМ»; Позмогова С.А., кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник лаборатории изучения туберкулеза ННЦ «ИЭКВМ»;

Белушко В.В., кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник лаборатории изучения туберкулеза ННЦ «ИЭКВМ»;

Тарасова Е.В., аспирант лаборатории изучения туберкулеза ННЦ «ИЭКВМ».

РЕЦЕНЗЕНТ:

Обуховская О.В., кандидат ветеринарных наук, заведующий лаборатории изучения бактериальных болезней птицы ННЦ «ИЭКВМ»; Пономаренко Г.В., кандидат ветеринарных наук, доцент кафедры эпизоотологии и ветеринарного менеджмента ХГЗВА.

I и^т* л тхгю

НА КОРИСНУ МОДЕЛЬ

№39178

СПОСШ ВИД1ЛЕННЯ Ь-ФОРМ М1КОБАКТЕР1Й 3 ПРОБ ПАТОЛОГ1ЧНОГО МАТЕР1АЛУ

Видано вщповщно до Закону Украгни "Про охорону прав на винаходи [ корисш моделГ'.

Зареестровано в Державному реестр} патентов Укра'ши на корисш модел! 10,02.2009.

Голова Державного департаменту штелектуальноГ власносто

М.В. ПаладШ

Ч-

(19) иА

(11)

39178

(21) Номер заявки: и 2008 10981

(22) Дата подання заявки: 08.09.2008

(24) Дата, з якоТ е чинними права на корисну модель: 10.02.2009

(46) Дата публжаци вщомостей про видачу патенту та номер бюлетеня: 10.02.2009, Бюл. № 3

(51) МПК (2009) 33/50

(72) Винахщники:

Завгородшй Андрш 1ванович (иА), Тарасова Олена Володимир'тна (1)А)

(?3) НАЦЮНАЛЬНИИ НАУКОВИЙ ЦЕНТР "1НСТИТУТ

ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНО! I КЛ1Н1ЧН01 ВЕТЕРИНАРН01 МЕДИЦИНИ",

вул.Пушюнська,83, м.Харюв 61023 УкраЧ'на

(54) Назва корисно! моделг. СПОС1Б ВИД1ЛЕННЯ 1.-ФОРМ

М1КОБАКТЕР1Й 3 ПРОБ ПАТОЛОПЧНОГО МАТЕР1АЛУ

(57) Формула корисноТ моделк

арчаноТ кислоти, триразове в,дмивання, вис,в н щ стерильним шском та додаткового сртьтру

3 ^етром "ор °'45

Стоянка 3 ¡з 4

Пронумеровано, прошито металевими люверсами та скртлено печаткою 2 арк.

СторЫка 4 ¡3 4

ПЕРЕВОД ст. 1.

УКРАИНА

ПАТЕНТ НА ПОЛЕЗНУЮ МОДЕЛЬ №39178

СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ Ь-ФОРМ МИКОБАКТЕРИЙ ИЗ ПРОБ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА

Выдан в соответствии к Закону Украины «Про охрану прав на изобретение и полезной модели».

Зарегистрирован в Государственном реестре патентов Украины на полезную

модель 10.02.2009 года.

Глава Государственного департамента

интеллектуальной собственности Подпись М.В. Паладий

Печать: Министерство образования и науки Украины Государственный департамент интеллектуальной собственности

ПЕРЕВОД ст. 2 (11)39178

(19) ИА (51)МПК (2009)

в0ШЗЗ/50

(21) Номер заявки: и2008 10981

(22) Дата подачи заявки 08.09.2008

(24) Дата, с которой

действительные права

на полезную модель 10.02.2009

(46) Дата публикации

ведомстей о выдаче патента 10.02.2009,

и номере бюллетеня Бюл. №3

(72) Изобретали: Завгородний Андрей Иванович (ИА); Тарасова Елена Владимировна (иА)

(73) Собственник: НАЦИОНАЛЬНЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР «ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ И КЛИНИЧЕСКОЙ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ»

ул. Пушкинская, 83, г. Харьков 61023 Украина

(54) Название полезной модели

СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ Ь-ФОРМ МИКОБАКТЕРИЙ С ПРОБ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА

(57) Формула полезной модели

Способ выделения Ь-форм микобактерий с проб патологического материала, что включает обработку проб 3% раствором серной кислоты, трех кратное отмывание, посев на плотную и полужидкую среду Школьниковой, который отличается тем, что гомонезируют патологический материал из стерильным песком и дополнительно фильтруют надосадочную жидкость через стерильные мембранные фильтры с диаметром пор 0,45 мкм.

УТВЕРЖДАЮ:

Директор ГУ «Курская областная ветеринарная лаборатории

* И.В. Ермилов 2011 г.

АКТ . проведения испытаний

Комиссия в составе зав. отделом бактериологических исследований Курской в.л., ветврача отдела, ассистента кафедры инфекционной и инвазионной патологии, БелГСХА Тарасова Е.В., при участии профессора кафедры инфекционной и инвазионной патологии БелГСХА Коваленко A.M. в период с 3 октября по 7 ноября 2011 года проведено испытание способа предпосевной обработки патологоанатомического материала для выделения L-форм микобактерий (авторы: Тарасова Е.В., Дорофеев А.Ф., Коваленко A.M.).

Для культурального исследования использовали

патологоан атомический материал (бронхиальные и средостенные лимфатические узлы) от крупного рогатого скота реагировавшего на туберкулин, убитого с диагностической целью. Предпосевную обработку патологоанатомического материала л/у проводили: измельчение патологоанатомического материала путем в ступке ножницами, заливали 2 % раствором серной кислоты, выдерживали 15 минут. Затем дважды отмывали физиологическим раствором. Полученную взвесь подвергли фильтрации через мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, «испытуемый метод». Фильтрат высевают на среду Школьниковой и Дорожковой. Этот патологоаиатомический материал л/у (брыжеечные, средостенные, бронхиальные, заглоточные) параллельно обрабатывали по методу Аликаевой. В результате этих исследований было установлено, что при обработке 50 проб патологоанатомического материала л/у (брыжеечные, средостенные, бронхиальные, заглоточные) от реагировавшего крупного скота по методу А.П.Аликаевой было выделено 25 культур в L-форме микобактерий. Первичный рост на среде Школьниковой отмечен на 25±0,5 сутки. При использовании модифицированного метода предпосевной обработки биоматериала на среде Школьниковой первичный рост микобактерий в L-форме отмечали на 14±0 сутки в 52 случаях в виде облакоподобных помутнений в толще среды..

При этом пророст среды посторонней микрофлоры составлял материала обработан по методу А.П.Аликаевой 10,0%, а при высеве использовании модифицированного метода 5,0%.

Таким образом, результаты наших исследований подтверждают, что предложенный способ с использованием фильтров позволяет повысить выделение Ь-форме микобактерий и снизить процент пророста посевов не менее чем в два раза.

Зав. отделом

бактериологических исследований Курской ветеринарной лаборатории.

Вет врач отдела

бактериологических исследований Курской ветеринарной лаборатории^

ж

Ассистент кафедры инфекционной и инвазионной патологии БелГСХА

Профессор кафедры инфекционной и инвазионной патологии БелГСХА

~7~

/УСьСс-

У/Л.

f>3 ^

I

УТВЕРЖДАЮ:

Директор ГУ «К>рскаяо^ластная з^гая/лаборатория ^"/f я Ермилов

УШя/ъ » 2011 г.

АКТ

проведения испытании

Комиссия в составе зав. отделом бактериологических_исследований Курской в.л. ¿'V, ветврача отдела Agt&fiOl "./L, ассистента

кафедры инфекционной и инвазионной патологии, БелГСХА Тарасова Е.В., при участии профессора кафедры инфекционной и инвазионной патологии БелГСХА Коваленко A.M. в период с 3 октября по 7 ноября 2011 года провела бактериологический опыт при изучении элективных свойств испытуемой питательной среды для выделения L-форм микобактерий (авторы: Тарасова Е.В., Дорофеев А.Ф., Коваленко A.M.).

Взвесь каждой культуры высевали на испытуемую и среду Школьниковой по 10 пробирок. Культивирование провели в термостате при температуре 37,5°С±0,5°С. Результаты ростовой активности оценивали визуально, через каждые 3-5 дней.

В результате проведенных исследований установлено, что на среде Школьниковой было выделено из штамма Vallae 4 культуры на 10±1,4 день, M.bovis 7 культур на 17±0,3 сутки, a M.avium L-форм микобактерий 5 культуры 11±0,6 день. Ростовую активность культур на испытуемой питательной среде была следующей: Vallae 6 культур на 7±0,2 день, M.bovis 26 культур на 9±1,8 сутки, a M.avium L-форм микобактерий 7 культуры 6±0,5 день.

Таким образом проведенные исследования подтверждают высокие элективные свойства испытуемой среды.

Зав. отделом

бактериологических исследований Курской ветеринарной лаборатории.

и,*

У/

Вет врач отдела

бактериологических исследований Курской ветеринарной лаборатории^

Ассистент кафедры инфекционной и инвазионной патологии БелГСХА

Профессор кафедры инфекционной и инвазионной патологии БелГСХА

С*

И

f^ifcct г).

С