Цитотоксическая активность естественных киллерных клеток у пациентов с первой стадией рака тела матки и ее взаимосвязь с основными прогностическими критериями заболевания тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.46, кандидат медицинских наук Дмитриева, Ирина Борисовна

• Дмитриева, Ирина Борисовна
• кандидат медицинских наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Дмитриева, Ирина Борисовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Патогенетические пути развития РТМ.

1.2. Классические прогностические критерии РТМ.

1.3. Эффекторная активность естественных киллерных клеток.

1.3.1. Распознавание клеток-мишеней и активация NK-клеток.

1.3.2. Формирование контакта между NK-клеткой и ее мишенью.

1.3.3. Программирование лизиса клеток-мишеней.

1.3.4. Цитокиновая регуляция.

1.4. Взаимоотношения между продукцией цитокинов и опухолевым ростом при РТМ в исследованиях in vivo.

1.5. Дополнительные факторы прогноза течения РТМ: экспрессия проапоптотических и противоапоптотических маркеров опухолевых клеток.

1.6. Взаимосвязь содержания ядерной ДНК в клетках аденокарциномы эндометрия с прогнозом заболевания.

1.7. Механизмы избегания клетками новообразований эффекторной функции NK-клеток.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Характеристика обследованных лиц.

2.2. Материалы и исследования.

2.2.1. Взятие крови на исследования и выделение мононуклеаров периферической крови.

2.2.2. Приготовление суспензии клеток из ткани аденокарцином.

2.3. Иммунофенотипирование.

2.4. Индукция синтеза цитокинов.

2.4.1. Определение цитокинов методом иммуноферментного анализа.

2.5. Определение количества ДНК методом проточной ДНК-цитометрии

2.5.1. Основы метода.

2.5.2. Определение спонтанной цитотоксической активности.

2.5.3. Определение количества ДНК и распределения клеток аденокарцином по клеточному циклу.

2.6. Методы математической обработки полученных результатов.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Характеристика иммунологических параметров группы сравнения

3.2. Цитотоксическая активность NK-клеток пациентов рандомизированных по степени дифференцировки ткани аденокарцином.

3.3. Цитотоксическая активность NK-клеток при рандомизации пациентов по стадиям РТМ.

3.4. Влияние цитокинов на спонтанную цитотоксическую активность и количественные показатели клеток-эффекторов.

3.5 Маркеры апоптоза клеток аденокарцином и спонтанная цитотоксическая активность NK-клеток.

3.6 Индуцированная цитотоксическая активность NK-клеток.

3.7 Взаимосвязь между степенью кариотипической гетерогенности аденокарцином эндометрия первой стадии и спонтанной цитотоксической активности клеток-эффекторов.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Цитотоксическая активность естественных киллерных клеток у пациентов с первой стадией рака тела матки и ее взаимосвязь с основными прогностическими критериями заболевания»

Актуальность темы:

При раке тела матки (РТМ) особый интерес вызывают факторы естественной резистентности организма, в частности эффекторная функция естественных киллерных клеток (NK-клеток). Опухолеассоциированные антигены, являясь продуктами собственного генома, не могут быть распознаны иммунной системой, как чужеродные и не вызывают запуска иммунного ответа [Lanier L.L., 1998]. Особенностью эффекторной активности NK-клеток является отсутствие связи с распознаванием антигенных детерминант. Однако, данная функция рестриктирована многими другими параметрами, как самой NK-клетки, так и ее мишенью.

Статистические данные о распространении РТМ также не являются утешительными. На протяжении последних 20 лет во многих экономически развитых странах отмечается неуклонный рост заболеваемости гормонозависимыми опухолями репродуктивной системы. Такие тенденции не могут быть объяснены только увеличением средней продолжительности жизни, а связаны с нарастанием в популяции таких болезней цивилизации, как ановуляция, синдром хронической гиперэстрогении, бесплодие, миома матки и генитальный эндометриоз. Рак эндометрия занимает первое место в структуре онкогинекологических заболеваний в странах Европы и Северной Америки [Parkin М. et al., 2001]. В настоящее время благодаря повышению качества диагностики в 75% случаев выявляется первая стадия заболевания. Чаще всего производится радикальное хирургическое вмешательство (циторедуктивное). Однако даже в первой стадии заболевания существуют различия как в клиническом течении заболевания, так и в гистопатологических вариантах опухоли.

Основными классическими прогностическими критериям РТМ являются: степень дифференцировки ткани аденокарцииомы, глубина инвазии новообразования в эндометрий и стадия процесса [Бохман Я. В., 2002].

По данным литературы выявлены и другие прогностически значимые критерии течения онкологических заболеваний, как-то уровень экспрессии про- и противоапоптотических белков в клетках опухоли, экспрессия антигенов, свойственных лимфоцитам (CD95), а также степень кариотипической гетерогенности опухолевых клеток. Исследования параметров врожденного и приобретенного иммунитета становятся все более актуальными ввиду доказанных механизмов взаимодействия иммунокомпетентных клеток с клетками опухоли.

В работах, посвященных изучению параметров иммунитета при РТМ, отмечается некоторыми исследователями снижение цитотоксической активности NK-клеток [Бенедиктова М.Г. 2001]. В связи с этим, особый интерес представляет изучение взаимосвязи эффекторной активности NK-клеток, их количественных показателей с ведущими прогностическими критериям изучаемого заболевания, такими как степень дифференцировки ткани аденокарцииомы, глубина инвазии новообразования в эндометрий и стадия процесса.

Цель исследования: оценить взаимосвязь цитотоксической активности NK-клеток и их количественных характеристик с основными прогностическими критериями аденокарцииомы эндометрия, степенью кариотипической гетерогенности, а также уровнем экспрессии клетками аденокарцином проапоптотических и противоапоптотических маркеров.

В соответствии с поставленной целью сформулированы следующие задачи исследования:

1. Изучить экспрессию поверхностных маркеров NK-клеток (CD56+16", CD56"16+, CD56+16+) периферической крови пациентов с I стадией РТМ в сопоставлении с аналогичными параметрами в группе женщин без неопластических заболеваний (группой сравнения).

2. Оценить спонтанную и индуцированную цитотоксическую активность у пациентов с аденокарциномами эндометрия и сопоставить ее с группой сравнения.

3. Определить спонтанный и индуцированный уровни продукции IL 2, IL-6, IL-8, TNFa, IFNy мононуклеарами периферической крови (МНПК) пациентов, обследуемых групп и сопоставить их с цитотоксической активностью NK-клеток.

4. Исследовать влияние фармакопейного препарата IL-2 Ронколейкина на эффекторную функцию NK-клеток in vitro.

5. Выявить взаимосвязь спонтанной и индуцированной цитотоксической активности NK-клеток со стадией процесса, морфологией и гистологией аденокарцином пациентов с I стадией РТМ.

6. Оценить относительное количество клеток аденокарцином, экспрессирующих bcl-2 и CD95 и сопоставить полученные значения с уровнем цитотоксической активности NK-клеток.

Научная новизна:

Разработан метод определения цитотоксической активности NK-клеток с использованием проточной ДНК-цитометрии, обладающий воспроизводимостью, точностью, безопасностью.

Разработанный метод позволил установить достоверное снижение эффекторной активности NK-клеток у пациентов с I стадией РТМ в сопоставлении с группой сравнения.

Снижение цитотоксической активности NK-клеток происходит по мере повышения стадии заболевания, увеличения глубины инвазии опухоли в эндометрий и уменьшения степени дифференцировки аденокарциномы.

Установлено, что снижение эффекторной активности NK-клеток связано с достоверным снижением субпопуляции клеток с фенотипом CD16+CD56~, обладающей высоким цитотоксическим потенциалом и увеличением субпопуляции CD16~56+, чьей основной функцией является регуляторная.

Выявлены достоверные корреляционные связи между уровнями спонтанной цитотоксической активности и спонтанной продукции IL-2 (прямая) и IL-8 (обратная).

Подтверждена эффективность IL-2 (препарата Ронколейкин) в повышении уровня цитотоксической активности NK-клеток in vitro у пациентов с аденокарциномой эндометрия.

Практическая значимость:

Разработанный метод определения цитотоксической активности NK-клеток с использованием проточной ДНК-цитометрии позволяет еще в до-операционном периоде определить предположительный прогноз заболевания и оптимизировать послеоперационный мониторинг пациентов сРТМ.

Определение спонтанной и индуцированной цитотоксической активности NK-клеток позволяет выявить потенциал цитотоксической активности клеток-эффекторов и принять своевременное решение о назначении иммуномодулирующей терапии.

Определение повышенных уровней спонтанной продукции IL-8 и TNFa позволяет предположить наличие инвазии аденокарциномы в эндометрий.

Положения выносимые на защиту:

Снижение спонтанной цитотоксической активности NK-клеток коррелирует с основными прогностическими признаками РТМ: увеличением глубины инвазии, снижением степени дифференцировки и прогрессирование стадии заболевания, что позволяет рассматривать этот параметр, как дополнительный критерий прогноза РТМ.

Снижение спонтанной цитотоксической активности NK-клеток на фоне прогресса РТМ, обусловлено преобладанием субпопуляции клеток-эффекторов с фенотипом CD16"56+.

Прирост клеток-эффекторов с фенотипом CD16+56' в группах пациентов с 1а стадией РТМ и/или высокой степенью дифференцировки ткани аденокарцином обеспечивает поддержание референтных значений спонтанной цитотоксической активности NK-клеток в этих группах. Под воздействием препарата Ронколейкин в условиях in vitro происходит повышение цитотоксической активности NK-клеток у пациентов с I стадией РТМ до референтных значений.

Возрастное перераспределение субпопуляций NK-клеток с преобладанием клеток с фенотипом CD56+16+, выявленное в группе сравнения, является возможной почвой для снижения иммунологического надзора и возникновения неопластических процессов.

Заключение диссертации по теме «Клиническая лабораторная диагностика», Дмитриева, Ирина Борисовна

Выводы:

1. Спонтанная цитотоксическая активность NK-клеток достоверно снижается при I стадии РТМ в сопоставлении с группой сравнения, что связано с перераспределением субпопуляций NK-клеток и преобладанием субпопуляций с регуляторными функциями.

2. Спонтанная цитотоксическая активность NK-клеток пациентов с РТМ прогрессивно достоверно снижалась по мере снижения дифференцировки ткани аденокарцином эндометрия, повышения стадии заболевания и глубины инвазии.

3. Установлен прирост клеток эффекторов с фенотипом CD16+56" в группах пациентов с 1а стадией РТМ и/или высокой степенью дифференцировки ткани аденокарцином, что обеспечивает поддержание референтных значений спонтанной цитотоксической активности NK-клеток в этих группах.

4. Спонтанная продукции IL-8 повышается в 1а стадии РТМ, увеличивается по мере прогрессирования заболевания, находится в обратной корреляционной взаимосвязи со спонтанной цитотоксической активностью клеток-эффекторов.

5. Спонтанная продукции IL-2 повышается в 1а стадии РТМ, снижается по мере прогрессирования заболевания, находится в прямой корреляционной взаимосвязи со спонтанной цитотоксической активностью клеток-эффекторов.

6. Индуцированная цитотоксическая активность NK-клеток была сопоставима между группой пациентов с РТМ и группой сравнения. Индекс стимуляции цитотоксической активности клеток-эффекторов в группе пациентов достоверно превышал параметры группы сравнения.

7. По мере возрастания стадии заболевания происходит снижение инфильтрации тканей аденокарцином лимфоцитами, повышение экспрессии белка bcl-2 в клетках опухоли, увеличение относительного количества аденокарцином с аномальным содержанием ДНК.

Практические рекомендации

1. Определение спонтанной и индуцированной цитотоксической активности NK-клеток методом проточной ДНК-цитометии в дооперационном периоде может быть рекомендовано в качестве дополнительного критерия прогноза и позволяет принять решение о включении иммуномодулирующей терапии в комплексное лечение заболевания.

2. Выявление повышенной спонтанной продукции IL-8 и TNFa в дооперационном периоде позволяет подтвердить наличие процессов инвазии аденокарциномы в эндометрий.

3. Учитывая полученные результаты исследования о возможности индукции спонтанной цитотоксической активности в I стадии РТМ препаратом IL-2 (Ронколейкин) рекомендуется его применение в комплексном лечении данной патологии.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Дмитриева, Ирина Борисовна, 2005 год

1. Адаме Р. Методы культуры клеток для биохимиков: Пер. с англ. М.: Мир. - 1983.-264 с.

2. Бохман Я.В. Руководство по онкогинекологии. СПб.: Фолиант. 2002. - 544 с.

3. Бычкова Н.В. Анеуплоидия и особенности пролиферации клеток рака различного происхождения по данным проточной цитометрии ДНК: Диссертация канд. мед. наук. СПб, 1997. - 40 с.

4. Бенедиктова М.Г. Применение тактивина и иммунофана при лечении больных аденокарциномой эндометрия. // Экспериментальная клиническая фармакология. 2001. - Т. 64. № 5. - С. 46-49.

5. Владимирская Е.Б. Биологические основы противоопухолевой терапии. -М.: Агат-Мед. 2001.- 112 с.

6. Головизнин М.В. Вмешательство раковых клеток в процессы созревания и селекции Т-лимфоцитов как фактор опухолевой прогрессии. // Иммунология. 2001. - № 6. - С. 4-9.

7. Дмитриева И.Б., Бычкова Н.В., Калинина Н.М. Исследование цитотоксической активности методом проточной ДНК-цитометрии. // Медицинская иммунология. 2003. - Т. 5. - № 3-4. - С. 200.

8. Дмитриева И.Б., Бычкова Н.В., Давыдова Н.И. Метод проточной ДНК-цитометрии в оценке функциональной активности иммунокомпетентных клеток.// Медицинская иммунология. 2004. - Т. 6. - N 3-5. - С. 397.

9. Козловская JI.B., Николаев А.Ю. Учебное пособие по клиническим и лабораторным методам исследования: 2-е изд. М.: Медицина. 1984. - 288 с.

10. Ю.Кулаков В.И., Селезнева Н.Д., Краснопольский В.И. Оперативная гинекология. Н. Новгород: Издательство НГМА. 1998. - 504 с.

11. П.Лукьянова Н.Ю., Кулик Г.И., Чехун В.Ф. Роль генов р53 и bcl-2 в апоптозе и лекарственной резистентности опухолей. // Вопросы онкологии. 2000. Т. 46. № 2. - С. 121-128.

12. Максимов С .Я. Минимальный рак эндотелия. СПб.: Гиппократ. 1994. -152 с.

13. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология: Пер. с англ. М.: Мир. -2000.-592 с.

14. М.Ярилин А.А. Основы иммунологии: Учебник. М.: Медицина. 1999. - 608 с.

15. Atasoy P., Bozdogan О., Erekul S. Fas-mediated pathway and apoptosis in nonnal, hyperplastic, and neoplastic endometrium. // Gynecol. Oncol. 2003 Nov.-Vol. 91 (2).-P. 309-317.

16. Bakker А.В., Wu J., Phillips J.H. NK cell activation: distinct stimulatory pathways counterbalancing inhibitory signals. // Hum. Immunol. 2000 Jan. -Vol. 61 (l).-P. 18-27.

17. Barhum M., Stein M., Rosenblatt E. Impaired cytokine production in whole blood cell cultures of patients with gynaecological carcinomas in different clinical stages. //Br. J. Cancer. 1993 Jul. - Vol. 68 (1). - P. 32-36.

18. Barlogie В., Raber M.N., Schumann J. et al. Flow cytometry in cli cancer research // Cancer Res. 1983. - Vol. 43. - P. 3982-3997.

19. Ben-Hur H., Mordechay E., Halperin R. Apoptosis and apoptosis-related proteins (Fas, Fas ligand, Blc-2, p53) in lymphoid elements of human ovarian tumors. // Eur. J. Gynaecol. Oncol. 2000. - Vol. 21 (1). p. 53-57.

20. Ben-Hur H.; Mordechay E., Halperin R. Apoptosis-related proteins (Fas, Fas ligand, Bcl-2 and p53) in different types of human breast tumors. // Oncol. Rep. -2002 Sep-Oct. Vol. 9 (5). - P. 977-980.

21. Berczi C., Bocsi J., Bartha I., Math J., Balazs G. Prognostic value ofDNA ploidy status in patients with rectal cancer. // Anticancer Res. 2002 Nov-Dec. - Vol. 22 (6B).-P. 3737-3741.

22. Blery M., Olcese L., Vivier E. Early signaling via inhibitory and activating NK receptors. // Hum. Immunol. 2000 Jan. - Vol. 61 (1). - P. 51-64.

23. BMDP Statistical Sortware Manual. Vol. 1. Los Angeles. - 1990. - P. 266-273.

24. Borrego F., Kabat J., Kim D.K. Structure and function of major histocompatibility complex (MHC) class I specific receptors expressed on human natural killer (NK) cells. // Immunol. 2002 Feb. Vol. 38 (9). - P. 637-660.

25. Bottino C., Biassoni R., Millo R. The human natural cytotoxicity receptors (NCR) that induce HLA class I-independent NK cell triggering. // Hum. Immunol. 2000 Jan.- Vol. 61 (1).-P. 1-6.

26. Burshtyn D.N., Shin J., Stebbins C. Adhesion to target cells is disrupted by the killer cell inhibitory receptor. // Curr. Biol. 2000 Jun 29. - Vol. 10 (13). - P. 777-780.

27. Cammarota H.E., Yamaguchi B. Analisis del adn celular en el diagnostico citologico de los tumores mediante le citometria de flujo // Prensa med.argent. -1991.-Vol. 78.-P. 84-88.

28. Cantoni C., Ponassi M., Biassoni R. The Three-Dimensional Structure of the Human NK Cell Receptor NKp44, a Triggering Partner in Natural Cytotoxicity Structure. // Hum. Immunol. 2003 June. - vol 11. - P. 725-734.

29. Christine T.N., Pham and Timothy J. Ley. Dipeptidyl peptidase I is required for the processing and activation of granzyines A and В in vivo. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999 July 20. - Vol. 96 (15). - P. 8627-8632.

30. Christine T.N., Pham and Timothy J. Ley. Dipeptidyl peptidase I is required for the processing and activation of granzyines A and В in vivo. // The Journal of Immunology. 2000. - Vol. 164. - P. 6244-6251.

31. Cooper M.A., Fehniger Т.A., Turner S.C. Human natural killer cells: a unique innate immunoregulatory role for the CD56b"8ht subset. // Blood. 2001 May 15. -Vol. 97.-No. 10.-P. 3146-3151.

32. Costello R.T., Sivori S., Marcenaro E. Defective expression and function of natural killer cell-triggering receptors in patients with acute myeloid leukemia. // Blood. -2002 May 15,-Vol. 99.-No. 10.-P. 3661-3667.

33. Danic D., Maruic M., Uzarevic B. Prognostic factors in squamous cell carcinoma of the larynx. // ORL. J. Otorhinolaryngol. Relat. Spec. 2000 May-Jun. - Vol. 62 (3). - P. 143-148.

34. Dirsch V.M., Stuppner H., Vollmar A.M. Helenalin triggers a CD95 death receptor-independent apoptosis that is not affected by overexpression of Bcl-xL or Bcl-2.//Cancer Res.-2001. Aug. 1,-Vol. 61 (15).-P. 5817-5823.

35. Duke R.C., Chervenak R., Cohen J.J. Endogenous endonuclease-inducet DNA fragmentation: An early event in cell- mediate cytolysis. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1983. - Vol. 80. - P. 6361-6365.

36. Elsasser-Beile U., von Kleist S., Sauther W. Clinical implications of expression of interleukin-8 related to myometrial invasion with angiogenesis in uterine endometrial cancers. //Ann. Oncol. 2002 Mar. - Vol. 13 (3). - P. 430-434.

37. Fassett M.S., Davis D.M., Valter M.M. Signaling at the inhibitory natural killer cell immune synapse regulates lipid raft polarization but not class I MHC clustering. // PNAS. 2001 Dec. 4. - Vol. 98. - No. 25. - P. 14547-14552.

38. Friberg L.G., Noren H., Delle U. Prognostic value of DNA ploidy and S-phase fraction in endometrial cancer stage I and II: a prospective 5-year survival study // Gynecol. Oncol. 1994. - Vol. 53. - P. 64-69.

39. Fujimoto J., Aoki I., Khatun S. Serum levels of interleukins, growth factors and angiogenin in patients with endometrial cancer. // J/ Cancer Res. Clin. Oncol. -1997. Vol. 123 (3). - P. 167-172.

40. Garzetti G.G., Ciavattini A., Provinciali M. Influence of neoadjuvant polychemotherapy on natural killer cell activity in patients with locally advanced cervical squamous carcinoma. // Gynecol. Oncol. 1994 Jan. - Vol. 52 (1). - P. 39-43.

41. Genest D.R., Sheets E., Lage J.M. Flow-cytometric analysis of nuclear DNA content in endometrial adenocarcinoma. Atypical mitoses are associated with DNA aneuploidy // Amer.J.Clin.Pathol. 1994. - Vol. 102. - P. 341-348.

42. Heibein J.A., Goping I.S., Barry M. Granzyme B-mediated cytochrome с release is regulated by the Bcl-2 family members bid and Bax. // J. Exp. Med. 2000 Nov 20. - Vol. 192 (10). - P. 1391-1402.

43. Hetzel D.J., Wilson Т.О., Keeney G.L. et al. HER-2/neu expression: a major prognostic factor in endometrial cancer. // Gynecologic Oncology. 2002. - Vol. 47 (2).-P. 179-185.

44. Kaufman D.S., Schoon R.A., Leibson P.J. MHC class I expression on tumor targets inhibits natural killer cell-mediated cytotoxicity without interfering with target recognition. //J. Immunol. 1993 Feb 15. - Vol. 150 (4). - P. 1429-1436.

45. Khurana D., Leibson P.J. Regulation of lymphocyte-mediated killing by GTP-binding proteins. // Journal of Leukocyte Biology. 2003. - Vol. 73. - P. 333338.

46. Kohler U., Krug H., Taubert G. Zytophotometrische Untersuchunger zur Prognose beurhilung bei Endometriumkarzinomen // Zbl. Gynacol. 1991.-Bd.l 13. - S.1371-1379.

47. Kraus E., Lambracht D., Wonigeit K. Negative regulation of rat natural killer cell activity by major histocompatibility complex class I recognition. // Eur. J. Immunol. 1996 Nov. - Vol. 26 (11). - P. 2582-2586.

48. Kysela В., Sirocky J., Redecha M., Bardos A. Flow cytometry (FCM) analysis of endometrial hyperplasia and carcinoma // Neoplasma. -1990. Vol. 37. - P. 489495.

49. Lanier L.L., Corliss B.C., Wu J. Immunoreceptor DAP 12 bearing a tyrosine-based activation motif is involved in activating NK cells. // Nature. 1998 Feb 12. - Vol. 391 (6668). - P. 642-643.

50. Lanier LL. NK cell receptors. // Annu. Rev. Immunol. 1998. - Vol. 16. - P. 359-393.

51. Lee N., Llano M., Carretero M. HLA-E is a major, ligand for the natural killer inhibitory receptor CD94/NKG2A. II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998 April 28.-Vol. 95 (9).-P. 5199.

52. Lindahl В., Gullberg B. Flow cytometrical DNA and clinical parameters in the prediction of prognosis in stage I-II endometrial carcinoma // Anticancer Res. -1991.-Vol. 11.-P. 397-402.

53. Long E.O., Barber D.F., Burshtyn D.N. Inhibition of natural killer cell activation signals by killer cell immunoglobulin-like receptors (CD158). // Immunol. Rev. -2001 Jun. —vol. 181.-P. 223-233.

54. Lukes A.S., Kohler M.F., Pieper C.F. et al. Multivariable analysis of DNA ploidy, p53 and Her-2/neu as prognostic factors in endometrial cancer // Cancer (Philad.) 1994. - Vol. 73. - P. 2380-2385.

55. Luo D., Vanderkerken K., Chen M.C. Rat hepatic natural killer cells (pit cells) express mRNA and protein similar to in vitro interleukin-2 activated spleen natural killer cells. // Cell Immunol. 2001 May 25. - Vol. 210 (1). - P. 41-48.

56. Mandeville R., Sidrac-Ghali S., Ajdukovic I. Early inhibition of natural and interferon-activated killers in endometrial cancer patients treated with local radiotherapy. // Cancer Detect. Prev. 1987. - Vol. 10 (1-2). - P. 129-139.

57. Mellin W. Cytophotometry in tumor pathology. A critical review of methods and applications, and some results of DNA analysis // Pathol.Res.Pract. 1990. -Vol. 186.-P. 37-62.

58. Merkel D.E., McGuire W.L. Ploidy, proliferative activity and prognosis. DNA flow cytometry of solid tumors // Cancer (Philad.). 1990. Vol. 65. - P. 11941205.

59. Meyer J.S., Wittliff J.L. Regional heterogeneity in breast carcinoma: thymidine labelling index, steroid hormone receptors, and ploidy // Int.J.Cancer 1991. -Vol. 47.-P. 213-220.

60. Moberger B. DNA content and prognosis in endometrial carcinoma: a clinical and methodological study // Diss.Abstr.Int.C. 1990. - Vol. 51. - P. 72.

61. Moretta A., Bottino C,, Vitale M., Pende D., Cantoni C., Mingari M.C., Biassoni R., Moretta L. Activating receptors and coreceptors involved in human natural killer cell-mediated cytolysis. // Annu. Rev. Immunol. 2001. - Vol. 19. - P. 197-223.

62. Motyka В., Korbutt G., Pinkoski M.J. Mannose 6-phosphate/insulin-like growth factor II receptor is a death receptor for granzyme В during cytotoxic T cell-induced apoptosis. // Cell. -2000 Oct 27. Vol. 103 (3). - P. 491-500.

63. Mozzetti S., Ferrandina G., Marone M. Expression of bcl-2, bax-xL, and bcl-xS in endometrial and cervical tissues. // Cancer Detect. Prev. 2000. - Vol. 24 (6). -P. 536-541.

64. Mullbacher A., Waring P., Tha Hla R. Granzymes are the essential downstream effector molecules for the control of primary virus infections by cytolytic leukocytes. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999 November 23. - Vol. 96 (24). -P. 13950-13955.

65. Putten V.-D., Hans W.H.M. et al. Prognostic value of quantitative pathologic features and DNA contents in individual patients with stage 1 endometrial adenocarcinoma // Cancer (Philad.). 1989. - Vol. 63. - P. 1378-1387.

66. Radaev S., Sun P.D. Structure and Function of Natural Killer Cell Surface Receptors. // Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 2002 Dec 2. - P. 42-46.

67. Raisova M., Hossini A.M., Eberle J. The Bax/Bcl-2 ratio determines the susceptibility of human melanoma cells to CD95/Fas-mediated apoptosis. // J. Invest. Dermatol. 2001. Aug. - Vol. 117 (2). - P. 333-340.

68. Reiter Z. Interferon-y a major regulator of natural killer cell-mediated cytotoxicity. // J. Interferon Res. 1993 Aug. - Vol. 13 (4). - P. 247-257.

69. Robertson M.J., Caligiuri M.A., Manley T.J. Human natural killer cell adhesion molecules. Differential expression after activation and participation in cytolysis. // J. Immunol. 1990 Nov 15. - Vol. 145 (10). - P. 3194-3201.

70. Russel J.H., Dobos C.B. Mechanism of immune lysis. II. CTL- induced nuklear disintegration of the target begins within minutes of cell contact. // J. Immunol. -1980.-Vol. 125.-P. 1256-1261.

71. Saegusa M., Hashimura M., Okayasu I. CD44 expression in normal, hyperplastic, and malignant endometrium. // J. Pathol. 1998 Mar. - Vol. 184 (3). - P. 297306.

72. Santin A.D., Bellone S., Gokden M. Overexpression of HER-2/neu in uterine serous papillary cancer. // Clin. Cancer Res. 2002 May - 8 (5). - P. 1271-1279.

73. Sasaki K., Murakom T. Clinical application of flow cytometry for DNA analysis of solid tumors // Our Planet 1992. - Vol. 4. - P. 1-14.

74. Shankey T.V. et al. Guidelines for implementation of clinical DNA cytometry. // Cytometry. 1993. - Vol. 14. - P. 472-477.

75. Shresta S., Maclvor D.M., Heusel J.W. Natural killer and lymphokine-activated killer cells require granzyme В for the rapid induction of apoptosis in susceptible target cells. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995 Jun 6. - Vol. 92 (12). - P. 5679-5683.

76. Simon A.K., Gallimore A., Jones E. Fas ligand breaks tolerance to self-antigens and induces tumor immunity mediated by antibodies. // Cancer Cell. 22 Oct. -Vol. 2.-P. 315-322.

77. Smyth M.J., Trapani J.A. The Relative Role of Lymphocyte Granule Exocytosis versus Death Receptor-Mediated Cytotoxicity in Viral Pathophysiology. // J. Virol. 1998 Jan. - Vol. 72, No. 1. - P. 1-9.

78. Smyth M.J., Hayakawa Y. New aspects of natural-killer-cell surveillance and therapy of cancer. // Nature Reviews Cancer. 2002. - Vol. 2. - P. 850-861.

79. Sutton V.R., Davis J.E., Cancilla M. Initiation of apoptosis by granzyme В requires direct cleavage of bid, but not direct granzyme B-mediated caspase activation.//J. Exp. Med. 2000 Nov 20. - Vol. 192(10).-P. 1403-1414.

80. Takahashi Y. DNA ploidy analysis of endometrial adenocarcinoma using a flow cytometry from paraffin-embedded tissue // Nippon. Sanka.Fujinka.Gakkai.Zasshi. 1990. - Vol. 42. -.1339-1344.

81. Takao Kataoka, Schroter M., Hahne M. FLIP Prevents Apoptosis Induced by Death Receptors But Not by Perforin/Granzyme B, Chemotherapeutic Drugs, and Gamma Irradiation. // The Journal of Immunology. 1998. - Vol. 161. - P. 39363942.

82. Thomas D.A., Du C., Xu M. DFF45/ICAD can be directly processed by granzyme В during the induction of apoptosis. // Immunity. 2000 Jun. - Vol. 12 (6).-P. 621-632.

83. Trapani J.A., Davis J., Sutton V.R. Proapoptotic functions of cytotoxic lymphocyte granule constituents in vitro and in vivo. // Curr. Opin. Immunol. -2000 Jun. Vol. 12 (3). - P. 323-329.

84. Tse-Kuan Yu, Caudell E.G., Smid C. IL-2 Activation of NK Cells: Involvement of MKK1/2/ERK But Not p38 Kinase Pathway. // The Journal of Immunology. 2000. - Vol. 164. - P. 6244-6251.

85. Tsou K.-Q, Hong D.N., Varello M.A. et al. Flow cytometric DNA and 5'-Nucleotide phosphodiesterase in endometrium // Cancer (Phylad.). 1985. - Vol. 56.-P. 2340-2347.

86. Ulbrecht M., Hofmeister V., Yuksekdag G. HCMV glycoprotein US6 mediated inhibition of TAP does not affect HLA-E dependent protection of K562 cells from NK cell lysis. // Hum. Immunol. 2003 Feb. - Vol. 64 (2). - P. 231-237.

87. Vaskivuo Т.Е., Stenback F., Tapanainen J.S. Apoptosis and apoptosis-related factors Bcl-2, Bax, tumor necrosis factor-alpha, and NF-kappaB in human endometrial hyperplasia and carcinoma. // Cancer. 2002 Oct 1. - Vol. 95 (7). -P. 1463-1471.

88. Vassilacos P., Albe X. DNA ploidy in the diagnosis and prognosis of cancer :Pap. 9e Symp. Int, Sci. Morphol., 72e Congr. Assoc. Anat., ler langue ft., Nancy, 9-13 Sept., 1990 // Bull. Assoc. Anat. 1990. - Vol. 74. - P. 149.

89. Vecek N., Nola M., Marusic M. et al. Tumor cell cycle in patients with stage I endometrial carcinoma // Gynecol.Oncol. 1994. - Vol. 53. - P. 38-43.

90. Vely F., Olcese L., Blery M. Function of killer cell inhibitoiy receptors for MHC class I molecules. // Immunol. Lett. 1996 Dec. - Vol. 54 (2-3). - P. 14550.

91. Wagenius G., Strong P., Bergstrom R. et al. Prognostic indices in endometrial on clinical, histopathological and flow cytometric variables // Anticancer Res. 1991. - Vol. 11. - P. 2137-2142.

92. Warren H.S., Smyth M.J. NK cell and apoptosis. // Hum. Immunol. 2001 Jan.-Vol. 73(1).-P. 26-37.

93. Wimberger P., Hillemanns P., Kapsner T. Evaluation of prognostic factors following flow-cytometric DNA analysis after cytokeratin labelling: II. Cervical and endometrial cancer. // Anal. Cell. Pathol. 2002. - Vol. 24 (4-5). - P. 147158.

94. Zackon I.L., Goolsby Ch.L. A clinician's guide to flow cytometry // Contemporary Oncology 1994. - Vol. 4. - P. 14-36.

95. Zingoni A., Palmieri P., Morrone C. CD69-triggered ERK activation and functions are negatively regulated by CD94 / NKG2-A inhibitory receptor. // Eur. J. Immunol. 2000 Feb. - Vol. 30 (2). - P. 644-651.

96. Zusman I., Gurevich P., Gurevich E. The immune system, apoptosis and apoptosis-related proteins in human ovarian tumors. // Int. J. Oncol. 2001 May. -Vol. 18(5).-P. 965-972.