Циркулирующие эндотелиальные клетки-предшественники и коллатеральный ангиогенез при хронической ишемической болезни сердца и ишемии нижних конечностей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.05, кандидат медицинских наук Талицкий, Константин Александрович

• Талицкий, Константин Александрович
• кандидат медицинских наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Талицкий, Константин Александрович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Ангиогенез: основные процессы и механизмы.

1.2. Ангиогенные факторы.

1.3. Эндотелиальные клетки-предшественники и их роль в ангиогенезе.

1.4. Ангиогенез и эффективность коллатерального кровообращения: роль ЭКП.

1.5. Терапевтический ангиогенез при хронической ишемии нижних конечностей.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Пациенты.

2.2 Методы и ход исследования.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1.ЭКП и коллатеральное кровообращение у больных ИБС.

3.2.ЭКП и коллатеральное кровообращение у больных ХИНК.

3.3.ЭКП и коллатеральное кровообращение у больных с хронической ишемией нижних конечностей на фоне терапевтического ангиогенеза.

Глава 4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Циркулирующие эндотелиальные клетки-предшественники и коллатеральный ангиогенез при хронической ишемической болезни сердца и ишемии нижних конечностей»

Актуальность проблемы.Ангиогенез является естественной реакцией организма на ишемию, направленной на восстановление кровоснабжения ишемизированной ткани. При ишемических поражениях у человека компенсаторный ангиогенез, как правило, оказывается недостаточным для сохранения адекватной перфузии. Механизмы этого окончательно не выяснены, к числу причин относят, в частности, нарушение продукции ряда ангиогенных факторов роста ишемизированными тканями, снижение численности и функциональной активности эндотелиальных клеток-предшественников (ЭКП). Эндотелиальные клетки - предшественники (ЭКП) представляют собой популяцию прогениторных клеток, выделяемых из крови и костного мозга, которые экспрессируют поверхностные маркеры, специфичные как для незрелых гематопоэтических клеток, так и для эндотелия, и дифференцируются в клетки эндотелиальной линии. В ряде исследований, в том числе выполненных сотрудниками РКНПК, было установлено, что снижение уровня циркулирующих прогениторных клеток коррелирует с уровнем сердечно-сосудистого риска и маркерами эндотелиальной дисфункции (Urbich, Dimmeier, 2005; Руда и др., 2008). Дисфункция системы ЭКП усугубляется по мере увеличения риска сердечнососудистых осложнений: снижается количество ЭКП в периферической крови и их функциональная активность, что в экспериментальных работах ассоциируется с ослаблением компенсаторного ангиогенеза (Urbich, Dimmeier, 2004).

Компенсаторный ангиогенез при ИБС оказывает влияние на прогноз. В клиническом исследовании Choi et al. (2005) была продемонстрирована обратная связь между количеством коронарных коллатералей у больных ИБС, страдающих сахарным диабетом, и риском сердечно-сосудистых осложнений при дальнейшем наблюдении. В когортных исследованиях показано, что плохое развитие коронарных коллатералей наблюдается при повышенном уровне С-реактивного белка (Gulec et al., 2006), гомоцистеина (Yang et al., 2006), оксидативном стрессе (Demirbag et al., 2006), почечной недостаточности (Sezer et al., 2006); при этих состояниях содержание ЭКП в крови также снижено (Callaghan et al., 2005; Chen et al., 2004;vanGrevenynghe et al., 2006; Verma et al., 2004). Увеличение количества коронарных коллатералей наблюдалось на фоне терапии статинами (Dincer et al., 2006). Данный эффект может быть связан с ранее обнаруженной способностью статинов стимулировать дифференцировку CD34+ гематопоэтических предшественников в направлении ЭКП (Vasa et al., 2001). В работе Lev et al. (2005) была показана связь коллатерального индекса с уровнем циркулирующих ЭКП у больных с острым коронарным синдромом.У больных хронической ИБС, ишемией нижних конечностей такая связь не исследовалась, хотя известно, что уровень циркулирующих ЭКП у них снижен (Urbich, Dimmeler, 2004, 2005).Поскольку при остром коронарном синдроме наблюдается усиленный выход ЭКП из костного мозга в кровь, результаты работы Lev и соавт. не могут быть автоматически перенесены на популяцию хронических больных, необходимо проведение специально спланированного исследования, которое позволит выявить взаимосвязь содержания различных фракций циркулирующих ЭКП с коллатеральным ангиогенезом, традиционными факторами риска и клиническим течением заболевания у больных хронической ИБС и хронической ишемией нижних конечностей. Кроме того, остается практически неизученным вопрос о влиянии различных методов реваскуляризации на уровень ЭКП в крови.

Ишемические поражения нижних конечностей занимают важное место в структуре сердечно-сосудистой заболеваемости. Периферический атеросклероз является главной причиной ишемии нижних конечностей и ассоциирован с 3-6-кратным повышением сердечно-сосудистой заболеваемости и смертности. Распространенность ишемии нижних конечностей в популяции старше 50 лет составляет 5-8%, а при наличии таких факторов риска, как гиперлипидемия, курение, артериальная гипертония или сахарный диабет, достигает 30% (Hirsch et al., 2005). Ишемия нижних конечностей представляет серьезную медицинскую и социальную проблему в связи с частой инвалидизацией и высокой смертностью больных, недостаточной эффективностью существующих методов лечения, особенно при распространенном поражении артериального русла нижних конечностей, что делает актуальным поиск новых терапевтических технологий (Rutherford et al., 1997; Clagett et al., 2004).

Терапевтический ангиогенез - лечение, направленное на стимуляцию роста новых сосудов в ишемизированных тканях с помощью ангиогенных факторов роста, их генов или стволовых и прогениторных клеток - рассматривается как перспективный метод лечения пациентов с рефрактерной ишемией нижних конечностей, позволяющий улучшить перфузию конечности, уменьшить ишемические симптомы и в ряде случаев предотвратить ампутацию. В многочисленных экспериментальных и клинических исследованиях, проведенных в ведущих медицинских центрах мира, было показано, что введение в ишемизированные мышцы или в сосуды нижних конечностей факторов роста или их генов стимулирует ангио-артериогенез, улучшает перфузию тканей и уменьшает симптоматику, обусловленную ишемией (Талицкий и др., 2007). Наиболее изученным на сегодняшний день является фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) - основной регулятор ангиогенеза как в эмбриогенезе так и в постнатальном периоде развития организма. Генетические конструкции, содержащие ген YEGF, прошли 2 фазу клинических испытаний в нескольких медицинских центрах США, Европы и Азии, показавших хорошую переносимость, безопасность применения подобных генетических конструкций как при введении в ишемизированные мышцы конечностей, так и при введении в миокард у больных ИБС (Baumgartner et al., 1998; Simovic et al., 2001; Makinen et al., 2002; Rajagopalan et al., 2003; Shyu et al.,

2003; Kim et al., 2004; Kusumanto et al., 2006; Бокерия и соавт., 2006; Швальб и соавт., 2011).

Важнейшим свойством ЭКП является их способность дифференцироваться в клетки эндотелиальной линии. Экспериментальным путем было установлено, что в определенных условиях ЭКП также могут дифференцироваться в гладкомышечные клетки и кардиомиоциты (Badorff et al., 2003; Shoji et al., 2004). Эти сведения открывают перспективы использования ЭКП, выделенных из наиболее доступных источников, например периферической крови, в клеточной терапии и терапевтическом ангиогенезе. Аутотрансплантация циркулирующих прогениторных клеток крови все чаще рассматриваются в качестве перспективного средства при рефрактерной ишемии. В пилотных клинических исследованиях аутотрансплантация мононуклеарной фракции крови при острой и хронической ишемии нижних конечностей приводит к значимой стимуляции коллатерального ангиогенеза, улучшению перфузии конечности и клинического течения заболевания (Kawamura et al., 2005; Lenk et al., 2005; Huang et al., 2005).

Лечебный эффект процедур терапевтического ангиогенеза связывают с СБ34+прогениторными клетками, в том числе эндотелиальными клетками-предшественниками (ЭКП), мобилизуемыми из костного мозга, которые, помимо секреции ангиогенных факторов роста, могут дифференцироваться в эндотелиоциты (Urbich, Dimmeier, 2004). При периферическом атеросклерозе отмечается существенное уменьшение количества циркулирующих ЭКП со снижением их жизнеспособности и функциональной активности (Yamamoto et al., 2004), что может оказывать влияние на эффективность терапевтического ангиогенеза (DeVriese et al., 2008). Вместе с тем, на сегодняшний день остается неясным, какая из популяций прогениторных клеток вносит основной вклад в развитие лечебного эффекта при терапевтическом ангиогенезе (Sieveking, Ng, 2009; Ishida et al., 2005). Учитывая ключевую роль эндотелиальных предшественников и ангиогенных факторов роста в процессах ангиогенеза, их содержание в крови больных может отражать динамику ангиогенной стимуляции и быть одним из доступных для изучения факторов, влияющих на общую эффективность ангиогенной терапии.

В лаборатории молекулярной эндокринологии (рук. - академик В.А. Ткачук) и лаборатории ангиогенеза (рук. - проф. д.м.н. Е.В.Парфенова) ИЭК РКНГЖ был разработан препарат «Корвиан» - плазмидная конструкция, содержащая ген УЕОБ. Результаты проведенных токсикологических и общефармакологических испытаний препарата показали отсутствие токсичности и его безопасность при введении лабораторным животным, а доклинические исследования на моделях ишемии конечностей и инфаркта миокарда продемонстрировали его эффективность в стимуляции ангио-артериогенеза и регенеративных процессов в тканях (ТгакШеу е1 а1., 2007).

Вместе с тем, эффективность процедур терапевтического ангиогенеза в целом остается ограниченной. Принимая во внимание ключевую роль ЭКП в ангиогенезе, представляется актуальным исследовать связь циркулирующих ЭКП с состоянием коллатерального ангиогенеза, показателями ишемии и эффективностью ангиогенных вмешательств.

Цель исследования- исследовать связь уровня циркулирующих эндотелиальных клеток-предшественников с состоянием коллатерального кровообращения, клиническим течением заболевания и процедурами терапевтического ангиогенеза у больных с хронической ИБС и хронической ишемией нижних конечностей.

Для достижения цели исследования были поставлены следующие задачи: 1. Оценить взаимосвязь содержания циркулирующих ЭКП с факторами сердечно-сосудистого риска, состоянием коллатерального кровоснабжения и клиническим течением заболевания в ходе проспективного наблюдения у больных со стабильной стенокардией напряжения и больных с ишемией нижних конечностей атеросклеротического происхождения.

2. У части больных - исследовать динамику уровня ЭКП в крови до и после выполнения реваскуляризации, выяснить взаимосвязь выраженности ишемии и количества ангиографически визуализируемых коллатералей с уровнями циркулирующих ЭКП.

3. У больных с тяжелой ишемией нижних конечностей, которым не планируется выполнение процедур реваскуляризации, оценить эффект местного введения мононуклеарной фракции собственной крови больного, обогащенной эндотелиальными клетками-предшественниками, на функциональный статус, уровни циркулирующих ЭКП, маркеров ангиогенеза, и показатели кровоснабжения нижних конечностей.

4. Провести клиническое исследование безопасности и эффективности внутримышечного введения препарата «Корвиан» (плазмидной конструкции, содержащей ген УЕвР), у пациентов с хронической ишемией нижних конечностей (РоггёатеНб-Ш), которые не являются кандидатами для выполнения процедур реваскуляризации.

5. Изучить связь уровней циркулирующих ЭКП, клинических, лабораторных и инструментальных показателей с результатами терапевтического ангиогенеза.

Научная новизна

1. Впервые установлено, что на фоне клеточной терапии с использованием стимулированной мононуклеарной фракции крови и генной терапии плазмидной конструкцией с кДНК сосудисто-эндотелиального фактора роста наблюдается значимое повышение циркулирующей популяции С034+133+ ЭКП, а после эндоваскулярной реваскуляризации у больных ИБС и больных хронической ишемией нижних конечностей - значимое повышение циркулирующей популяции СОЭ4+ кс!г+ ЭКП.

2. Впервые выявлена связь уровня циркулирующих ЭКП с показателями коллатерального кровотока при хронической ИБС и хронической ишемии нижних конечностей: у больных с хорошо развитыми коллатералями количество циркулирующих ЭКП было в 1,5-5 раз выше, чем у больных с плохо развитыми коллатералями.

3. Впервые продемонстрировано, что добавление к стандартной консервативной терапии генной терапии препаратом «Корвиан» (плазмидной конструкцией с кДНК сосудисто-эндотелиального фактора роста) дает более выраженный лечебный эффект у пациентов с хронической ишемией нижних конечностей, чем стандартная консервативная терапия.

4. Впервые установлена связь уровня циркулирующих эндотелиальных клеток-предшественников с эффективностью генной терапии препаратом «Корвиан», направленной на стимуляцию ангиогенеза у больных хронической ишемией нижних конечностей: у больных, хорошо ответивших на терапию (+2 по Рутерфорду), уровень циркулирующих С034+С0133+ ЭКП был более чем в два раза выше, чем у больных, не ответивших на терапию.

5. Впервые установлены предикторы эффективности терапевтического ангиогенеза препаратом «Корвиан» у больных с хронической ишемией нижних конечностей: проходимый аортоподвздошный артериальный сегмент и меньшая длительность анамнеза перемежающейся хромоты.

Практическая значимость.

В работе было установлены факторы, определяющие эффективность терапевтического ангиогенеза у больных с хронической ишемией нижних конечностей, и предложен подход к определению ожидаемой величины лечебного эффекта. Полученные в работе результаты важны для разработки дизайна клинических испытаний новых препаратов и технологий для терапевтического ангиогенеза, для определения подходов к повышению эффективности новых методов лечения тяжелой хронической ишемии, направленных на стимуляцию ангиогенеза.

Внедрение результатов работы.

Полученные в работе результатыприменются при разработке дизайна и планировании клинических испытаний новых препаратов для терапевтического ангиогенеза, проводимых в отделе ангиологии НИИ кардиологии им. А.Л.Мясникова РКНПК МЗ РФ.

Публикации.

Основные положения работы отражены в 16 печатных работах в центральных медицинских журналах, материалах конференций и съездов (из них 3 статьи и 1 глава в монографии).

Работа изложена на 175страницах, содержит рисунков - 8, таблиц - 16, диаграмм -31.

Заключение диссертации по теме «Кардиология», Талицкий, Константин Александрович

ВЫВОДЫ

1. Содержание циркулирующих эндотелиальных клеток-предшественников в крови больных ИБС и больных ХИНК достоверно снижено по сравнению с лицами без клинических проявлений атеросклероза, величина этого снижения прямо пропорциональна степени тяжести заболевания.

2. У больных ИБС и больных ХИНК имеется прямая зависимость между уровнем циркулирующих ЭКП и степенью развития коронарных и периферических коллатералей по данным ангиографии.

3. Через 6 мес. после выполненной коронарной реваскуляризации содержание ЭКП в крови больных ИБС возрастает на 99%, в аналогичные сроки после реваскуляризации нижних конечностей у больных ХИНК наблюдается рост уровня ЭКП на 35%. Степень прироста уровня ЭКП после реваскуляризации зависит от отягощенности пациента по факторам риска сердечно-сосудистых осложнений, а у больных ХИНК - также от стадии заболевания и объема реваскуляризации.

4. Уровень циркулирующих ЭКП у больных ХИНК значимо повышается на фоне терапевтического ангиогенеза с помощью генной и клеточной терапии и возвращается к исходному уровню в течение 6 мес. Стандартная консервативная терапия при ишемии нижних конечностей не вызывает прироста уровня циркулирующих ЭКП.

5. Использование генной терапии препаратом «Корвиан» (плазмидной конструкции, содержащей ген УЕОБ) у больных с ХИНК безопасно и приводит к значимому улучшению клинического статуса по шкале Рутерфорда, дистанции ходьбы и показателей перфузии конечностей, а также показателей коллатерального кровообращения. Применение генной терапии дает более выраженный лечебный эффект, чем стандартная консервативная терапия.

6. Наилучший эффект терапевтического ангиогенеза препаратом «Корвиан» наблюдается у пациентов с менее длительным анамнезом перемежающейся хромоты, с проходимым подвздошно-бедренным сегментом, имеющих более высокий исходный ЛПИ и меньший стаж курения. Больные с хорошим эффектом ангиогенной терапии имеют более высокий исходный уровень циркулирующих ЭКП по сравнению с больными, не ответившими на терапию.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Определение уровня циркулирующих ЭКП наряду с оценкой проходимости подвздошно-бедренного сегмента, ЛПИ и данных анамнеза (длительности перемежающейся хромоты и стажа курения) рекомендуется проводить при отборе больных ХИНК для участия в клинических испытаниях терапевтического ангиогенеза с помощью генной терапии и прогнозирования эффективности данного метода лечения.

2. Выявленные в работе взаимосвязи позволяют определять больных ХИНК, у которых ожидается низкая эффективность терапевтического ангиогенеза, что следует учитывать при разработке дизайна клинических испытаний новых препаратов и технологий, направленных на стимуляцию ангиогенеза.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Талицкий, Константин Александрович, 2012 год

1. Е.В.Парфенова, В.А.Ткачук.Терапевтический ангиогенез: достижения, проблемы, перспективы. //Кардиологический вестник.2007; 2 (2): 2-10.

2. Лазерная допплеровская флоуметрия микроциркуляции крови. Под ред. Крупаткина А.И., Сидорова В.В. //Москва: Медицина 2005; 254с.

3. Руда М.М., Парфенова Е.В., Карпов Ю.А. Предшественники эндотелиальных клеток: роль в восстановлении функции эндотелия и перспективы терапевтического применения. //Кардиология. 2008; 1: 66-73.

4. Семенова А.Е., Сергиенко И.В., Габрусенко С.А. Объективные методы оценки коронарного ангиогенеза. //Кардиология. 2008; 48(6): 19-23.

5. Талицкий К.А., Карпов Ю.А., Парфенова Е.В. Терапевтический ангиогенез в лечении ишемии нижних конечностей. //Кардиология 2007, №12, с.81-84.

6. Шевченко Е.К., Талицкий А.К., Парфенова Е.В.Перспективы повышения эффективности генной и клеточной терапии сердечно-сосудистых заболеваний: генетически модифицированные клетки. //Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2010: 5(2): 19-28.

7. Aalkaer С. Vasomotion: cellular background for the oscillator and for the synchronization of smooth muscle cell. Br J Pharmacol 2005; 144: 605-616.

8. AkhtarRP. Surgery for chronic total occlusion of the left main stem: a 10-year experience. Asian Cardiovascular and Thoracic Annals, 2009 Oct;17(5):472-6

9. AH MH, Schumacker PT. Endothelial responses to mechanical stress: where is the mechanosensor? //Crit Care Med 2002;30:S 198-206

10. Arras M, Wulf DI, Scholz D, Winkler B, Schaper J, Schaper W. Monocyte activation in angiogenesis and collateral growth in the rabbit hindlimb. //J Clin Invest 1998;101:40-50

11. Barsotti MC, Di Stefano R, Spontoni P, Chimenti D, Balbarini A. Role of endothelial progenitor cell mobilization after percutaneous angioplasty procedure.//Curr Pharm Des. 2009;15(10):1107-22.

12. Baumgartner I. et al. Constitutive expression of phVEGF165 after intramuscular gene transfer promotes collateral vessel development in patients with critical limb ischemia. //Circulation. 1998; 97: 1114-1123.

13. Cai WJ, Kocsis E, Luo X, Schaper W, Schaper J. Expression of endothelial nitric oxide synthase in the vascular wall during arteriogenesis. Mol Cell Biochem 2004;264:193-200.

14. Callaghan MJ, Ceradini DJ, Gurtner GC. Hyperglycemia-induced reactive oxygen species and impaired endothelial progenitor cell function. //Antioxid Redox Signal. 2005 Nov-Dec;7(l l-12):1476-82.

15. Carmeliet P. Mechanisms of angiogenesis and arteriogenesis. //Nat Med 2000;6:389-95

16. Chen H, Gu Y, Wu W et al. Polymorphisms of the vascular endothelial growth factor A gene and susceptibility to sporadic brain arteriovenous malformation in a Chinese population. J Clin Neurosci. 2011 Apr; 18(4):549-53.

17. Chih S, Macdonald PS, McCrohon JA, Ma D, Moore J, Feneley MP, Law M, Kovacic JC, Graham RM. Granulocyte colony stimulating factor in chronic angina to stimulate neovascularisation: a placebo controlled crossover trial. //Heart. 2012 Feb;98(4):282-90.

18. Choi EK et al. Novel Index of Coronary Collateral Development as a Useful Predictor of Clinical Outcome in Type 2 Diabetic Patients With Coronary Artery Disease. //Circ J 2005; 69: 786 -792.

19. Churchill AJ, Carter JG, Lovell HC et al. VEGF polymorphisms are associated with neovascular age-related macular degeneration. Hum Mol Genet. 2006 Oct 1; 15(19):2955-61. Epub 2006 Aug 29

20. Churchill AJ, Carter JG, Ramsden C et al. VEGF polymorphisms are associated with severity of diabetic retinopathy. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2008 Aug;49(8):3611-6. Epub 2008 Apr 25

21. Churdchomjan W, Kheolamai P, Manochantr S, Tapanadechopone P, Tantrawatpan C, U-Pratya Y, Issaragrisil S. Comparison of endothelial progenitor cell function in type 2 diabetes with good and poor glycemic control. //BMC Endocr Disord. 2010; 10:5.

22. Clagett GP et al. Antithrombotic Therapy in Peripheral Arterial Occlusive Disease The Seventh ACCP Conference on Antithrombotic and Thrombolytic Therapy. //Chest 2004; 126: 609S-626S.

23. Clayton JA, Chalothorn D, Faber JE. Vascular endothelial growth factor-A specifies formation of native collaterals and regulates collateral growth in ischemia. Circ Res. 2008 Oct 24;103(9):1027-36. Epub 2008 Sep 18

24. Cohen M, Sherman W, Rentrop KP, Gorlin R. Determinants of collateral filling observed during sudden controlled coronary-artery occlusion in human-subjects. J Am Coll Cardiol 1989;13:297-303

25. Demirbag R, Gur M, Yilmaz R, Kunt AS, Erel O, Andac MH. Influence of oxidative stress on the development of collateral circulation in total coronary occlusions. //Int J Cardiol. 2007 Mar 2; 116(1): 14-19.

26. Dincer I, Ongun A, Turhan S, Ozdol C, Kumbasar D, Erol C. Association between the dosage and duration of statin treatment with coronary collateral development. // Coron Artery Dis. 2006 Sep;17(6):561-565.

27. Dong C, Goldschmidt-Clermont PJ. Endothelial progenitor cells: a promising therapeutic alternative for cardiovascular disease. J Interv Cardiol 2007; 20 (2): 93-9.

28. Doucette JW, Corl PD, Payne HM, Flynn AE, Goto M, Nassi M, Segal J. Validation of a doppler guide wire for intravascular measurement of coronary-artery flow velocity. Circulation 1992;85:1899-1911

29. Drake CJ, Cheresh DA, Little CD. An antagonist of integrin alpha v beta 3 prevents maturation of blood vessels during embryonic neovascularization. J Cel Sci 1995; 108 (Pt7): 2655-2661

30. Endemann DH, Schiffrin EL. Endothelial dysfunction. //J Am Soc Nephrol. 2004 Aug;15(8):1983-92.

31. Ferrara N, Gerber H-P, LeCouter J. The biology of VEGF and its receptors. Nat Med 2003;9: 669-76.

32. Ferrara N. Vascular endothelial growth factor: basic science and clinical progress. EndocrRev 2004;25:581-611

33. Folkman J. Angiogenesis in cancer, vascular, rheumatoid and other disease. Nat Med 1995;1:27-31

34. Friedrich EB, Walenta K, Scharlau J, Nickenig G, Werner N. CD34-/CD133+/VEGFR-2+ endothelial progenitor cell subpopulation with potent vasoregenerative capacities. //Circ Res. 2006 Feb 17;98(3):e20-5.

35. Fulton WF. Chronic generalized myocardial ischaemia with advanced coronary artery disease. Br Heart J. 1956 Jul;18(3):341-54.

36. Fulton WFM. Immersion radiography of injected specimens. Brit J Radiol 1963;36:685-688.

37. Gensini GG, DaCosta BCB. The coronary collateral circulation in living man. J Am Coll Cardiol 1969;24:393-400

38. Grossman PM, Mendelsohn F, Henry TD, Hermiller JB, Litt M, Saucedo JF, Weiss RJ, Kandzari DE, Kleiman N, Anderson RD, Gottlieb D, Karlsberg R, Snell J, Rocha-Singh

39. K. Results from a phase II multicenter, double-blind placebo-controlled study of Del-1 (VLTS-589) for intermittent claudication in subjects with peripheral arterial disease. //Am Heart J. 2007 May; 153(5):874-80.

40. Grundmann S., Piek J.J., Pasterkamp G., Hoefer I.E. Arteriogenesis: basic mechanisms and therapeutic stimulation. //Eur J.Clin. Invest. 2007; 37, 755-766.

41. Gu Y, Zhang J, Qi L. A clinical study on implantation of autologous bone marrow mononuclear cells after bone marrow stimulation for treatment of lower limb ischemia. HZhongguo Xiu Fu Chong Jian Wai Ke Za Zhi. 2006 0ct;20(10): 1017-20.

42. Gulec S, Ozdemir AO, Maradit-Kremers H, Dincer I, Atmaca Y, Erol C. Elevatedlevels of C-reactive protein are associated with impaired coronary collateral development.

43. Eur J Clin Invest. 2006 Jun;36(6):369-75.

44. Hansen E, Fernandes K, Goldspink G, Butterworth P, Umeda PK, Chang KC. Strong expression of foreign genes following direct injection into fish muscle. //FEBS Lett. 1991 Sep 23;290(l-2):73-6.

45. Hansen JF. Coronary collateral circulation: clinical significance and influence on survival in patients with coronary occlusion. Am Heart J 1989; 117:290-295

46. Harris TD, Kalogeropoulos S, Nguyen T et al. Design, synthesis and evaluation of radiolabeled integrin alpha v beta 3 receptor antagonists for tumor imaging and radiotherapy. Cancer Biother Radiopharm 2003; 18: 627-641

47. Heberden W. Commentary on the history and cure of diseases. In: Wilius F, Kays T, editors. Classics of Cardiology. Vol. 1. New York: Dover; 1961: pp 222-4

48. Heiss C, Amabile N, Lee AC, Real WM, Schick SF, Lao D, Wong ML, Jahn S, Angeli FS, Minasi P, Springer ML, Hammond SK, Glantz SA, Grossman W, Balmes JR,

49. Yeghiazarians Y. Brief secondhand smoke exposure depresses endothelial progenitor cells activity and endothelial function: sustained vascular injury and blunted nitric oxide production. //J Am Coll Cardiol. 2008 May 6;51(18):1760-71.

50. Heiss C, Keymel S, Niesler U, Ziemann J, Keim M, Kalka C. Impaired progenitor cell activity in age-related endothelial dysfunction. //J Am Coll Cardiol. 2005 May 3;45(9): 1441-8.

51. Helfant RH, Vokonas PS, Gorlin R. Functional importance of the human coronary collateral circulation. N Engl J Med. 1971 Jun 10;284(23): 1277-81.

52. Helisch A., Schaper W. Arteriogenesis: the development and growth of collateral arteries. Microcirculation (2003) 10, 83-97.

53. Hill JM, Zalos G, Halcox JP, Schenke WH, Waclawiw MA, Quyyumi AA, Finkel T.Circulating endothelial progenitor cells, vascular function, and cardiovascular risk. // N Engl J Med. 2003 Feb 13;348(7):593-600.

54. Hiratsuka S, Kataoka Y, Nakao K, Nakamura K, Morikawa S, Tanaka S, et al. VEGF-A is involved in guidance of VEGF-receptorpositive cells to the anterior portion of early embryos. Mol Cell Biol 2005;25:355-63

55. Hirsch A. et al. ACC/AHA Guidelines for the Management of Patients With Peripheral Arterial Disease. //ACC/AHA Practice Guidelines, 2005.

56. Hsu PC, Juo SH, Su HM, Chen SC, Tsai WC, Lai WT, Sheu SH, Lin TH. Predictor of poor coronary collaterals in chronic kidney disease population with significant coronary artery disease. //BMC Nephrol. 2012 Aug 30; 13:98.

57. Johnson C, Sung HJ, Lessner SM, Fini ME, Galis ZS. Matrix metalloproteinase-9 is required for adequate angiogenic revascularization of ischemic tissues: potential role in capillary branching. Circ Res 2004;94:262-8

58. Kalinina N1, Efimenko AIu, Starostina EE, Parfenova EV, Tkachuk VA. Hypoxia as the main activator of angiogenesis and fatty tissue growth. // Ross Fiziol Zh Im I M Sechenova. 2009 Mar;95(3):283-9.

59. Kawamura A et al. Prevention of limb amputation in patients with limbs ulcers by autologous peripheral blood mononuclear cell implantation. //Ther Apher Dial. 2005;9:59-63.

60. Kvandal P., Stefanovska A., Veber M. et al. Regulation of human cutaneous circulation evaluated by laser Doppler flowmetry, iontophoresis, and spectral analysis: importance of nitric oxide and prostangladines. Microvasc Res 2003; 65: 160-171.

61. Kvernmo H.D., Stefanovska A., Bracic A. et al. Oscillations in the human cutaneous blood perfusion signal modified by endothelium-dependent and endothelium-independent vasodilators. //Microvasc Res 1999; 57: 298-309.

62. Lev EI, Kleiman NS, Birnbaum Y, Harris D, Korbling M, Estrov Z.Circulating endothelial progenitor cells and coronary collaterals in patients with non-ST segment elevation myocardial infarction. //J Vase Res. 2005 Sep-0ct;42(5):408-14.

63. Lin TH, Yen HW, Voon WC, et al. Vascular endothelial growth factor in coronary sinus: Evidence for its association with coronary collaterals. Scand Cardiovasc J Dec 2005;39(6):353-7

64. Lloyd PG, Prior BM, Li H, Yang HT, Terjung RL (2005) VEGF receptor antagonism blocks arteriogenesis, but only partially inhibits angiogenesis, in skeletal muscle of exercise-trained rats. Am J Physiol Heart Circ Physiol288:H759-H768

65. Lu E, Wagner WR, Schellenberger U, et al. Targeted in vivo labeling of receptors for vascular endothelial growth factor: approach to identification of ischemic tissue. Circulation. 2003 Jul 8;108(1):97-103.

66. Meier B, Luethy P, Finci L, Steffenino GD, Rutishauser W. Coronary wedge pressure in relation to spontaneously visible and recruitable collaterals. Circulation 1987;75:906-913

67. Meier P. et al. Beneficial Effect of Recruitable Collaterals A 10-Year Follow-Up Study in Patients With Stable Coronary Artery Disease Undergoing Quantitative Collateral Measurements.//Circulation 2007; 116: 975-983

68. Mohammadi M, Bazrafshani MR, Day PJ, Oilier WE. Vascular endothelial growth factor production is regulated by gene polymorphisms. Iran J Immunol. 2009 Sep;6(3): 119-29

69. Murasawa S, Asahara T. Endothelial progenitor cells for vasculogenesis. //Physiology (Bethesda). 2005 Feb;20:36-42.

70. Nilius B, Droogmans G. Ion channels and their functional role in vascular endothelium. Physiol Rev. 2001;81:1415-1459.

71. Nizankowski R, Petriczek T, Skotnicki A, Szczeklik A. The treatment of advanced chronic lower limb ischaemia with marrow stem cell autotransplantation./ZKardiol Pol. 2005 0ct;63(4):351-60;

72. Ozdemir O, Geyik B, Tosun O, Soylu M, Demir AD, Alyan O, Topaloglu S, Aras D, Sa§maz H, Arda K, Korkmaz S. Does claudication affect the development of coronary collaterals? //Heart Vessels. 2004 May; 19(3): 116-20.

73. Parfenova EV, Plekhanova OS et al. Regulation of growth and remodeling of blood vessels: the unique role of urokinase. //Ross Fiziol Zh Im I M Sechenova. 2009 May;95(5):442-64.

74. Patenaude A., Parker J., Karsan A. Involvement of endothelial progenitor cells in tumor vascularization. //Microvasc.Res. 2010; 79, 217-223.

75. Pepper MS.Transforming growth factor-beta: vasculogenesis, angiogenesis, and vessel wall integrity. //Cytokine Growth Factor Rev. 1997 Mar;8(l):21-43.

76. Persson A.B., Buchmann I.R. Vascular growth in health and disease. //Frontiers in Molecular Neuroscience. 2011; 4: 1-15.

77. Petrovic D. The role of vascular endothelial growth factor gene as the genetic marker of atherothrombotic disorders and in the gene therapy of coronary artery disease. Cardiovasc Hematol Agents Med Chem. 2010 Jan;8(l):47-54

78. Price RJ, Less JR, Van Gieson EJ, Skalak TC. Hemodynamic stresses and structural remodeling of anastomosing arteriolar networks: design principles of collateral arterioles. //Microcirculation. 2002;9:111-124

79. Rentrop KP, Cohen M, Blanke H, Phillips RA. Changes in collateral channel filling immediately after controlled coronary artery occlusion by an angioplasty balloon in human subjects. J Am Coll Cardiol 1985; 5: 587 592

80. Ribatti D. Genetic and epigenetic mechanisms in the early development of the vascular system. J Anat. 2006 Feb;208(2):139-52.

81. Risau W. Mechanisms of angiogenesis. //Nature 1997;386:671-674

82. RisauW.,FlammeI.Yasculogenesis. //Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 1995; 11, 73-91.

83. Rockstroh J, Brown BG. Coronary collateral size, flow capacity, and growth. Estimates from the angiogram in patients with obstructive coronary disease. Circulation 2002;105:168-173

84. Rustemeyer P, Wittkowski W, Jurk K, Koller A. Optimized flow cytometric analysis of endothelial progenitor cells in peripheral blood. //J Immunoassay Immunochem. 2006; 27(1): 77-88.

85. Rutherford RB, Baker JD, Ernst C, et al. Recommended standards for reports dealing with lower extremity ischemia: revised version. //J Vase Surg 1997;26:517-538.

86. Schaper W, Piek JJ, Munoz-Chapuli R, Wolf C, Ito W. Collateral circulation of the heart. In: Ware JA, Simons M, eds. Angiogenesis and Cardiovascular Disease. New York: Oxford University Press; 1999: 159-198

87. Schaper W, Scholz D. Factors regulating arteriogenesis. Arterioscler Thromb Vase Biol 2003;23:1143-51

88. Schierling W, Troidl K, Troidl C, Schmitz-Rixen T, Schaper W, Eitenm?ller IK, The role of angiogenic growth factors in arteriogenesis, J Vase Res. 2009;46(4):365-74. Epub 2009 Jan 10

89. Schmid-Schonbein H., Ziege S., Rutten W., Heidtmann H. Active and passive modulation of cutaneous red cell flux as measured by laser Doppler anemometry. VASA 1992; 34 (Suppl): 38-47.

90. Scholz D, Cai WJ, Schaper W. Arteriogenesis, a new concept of vascular adaptation in occlusive disease. //Angiogenesis. 2001;4:247-257

91. Scholz D, Ito W, Fleming I, et al. Ultrastructure and molecular histology of rabbit hind-limb collateral artery growth (arteriogenesis). //Virchows Arch 2000;436:257-70

92. Secco GG et al. Percutaneous Revascularization of Chronic Total Occlusion of the Left Main Coronary Artery. //Rev Esp Cardiol. 2011;64(5):430^138

93. Seiler C, Billinger M, Fleisch M, Meier B. Washout collaterometry: a new method of assessing collaterals using angiographic contrast clearance during coronary occlusion. //Heart 2001;86:540-6

94. Seiler C, Fleisch M, Garachemani A, Meier B. Coronary collateral quantitation in patients with coronary artery disease using intravascular flow velocity or pressure measurements. J Am Coll Cardiol 1998;32: 1272-1279

95. Seiler C, Pohl T, Lipp E, Hutter D, Meier B. Regional left ventricular function during transient coronary occlusion: relation with coronary collateral flow. //Heart 2002;88:35-42

96. Semenza GL. Regulation of mammalian 02 homeostasis by hypoxia- inducible factor 1. //Annu Rev Cell Dev Biol. 1999; 15:551-578.

97. Shyu KG, Chang H, Wang BW, Kuan P.Intramuscular vascular endothelial growth factor gene therapy in patients with chronic critical leg ischemia.//Am J Med. 2003 Feb l;114(2):85-92.

98. Sieveking DP, Ng MK. Cell therapies for therapeutic angiogenesis: back to the bench. //Vase Med. 2009; 14(2): 153-166.

99. Simovic D, Isner JM, Ropper AH, Pieczek A, Weinberg DH. Improvement in chronic ischemic neuropathy after intramuscular phVEGF165 gene transfer in patients with critical limb ischemia.//Arch Neurol. 2001 May;58(5):761-8.

100. Smadja DM, Cornet A, Emmerich J et al. Endothelial progenitor cells: characterization, in vitro expansion, and prospects for autologous cell therapy. Cell Biol Toxicol. 2007; 23 (4): 223-39.

101. Soydinc S., V. Davutoglu, I. Sari. High serum levels of adiponectin improve coronary collateral development in patients with coronary artery disease. Tohoku J. Exp. Med., 2007,211,347-352

102. Stalmans I, Ng YS, Rohan R, Fruttiger M, Bouche A, Yuce A, et al. Arteriolar and venular patterning in retinas of mice selectively expressing VEGF isoforms. //J Clin Invest 2002;109:327-36.

103. Stefanovska A., Bracic M., Kvernmo H.D. Wavelet analysis of oscillations in peripheral blood circulation measured by Doppler technique. IEEE Trans Biomed Eng 1999; 46: 1230-1239.

104. Talitskiy K., O. Bulkina, T. Arefíeva, A. Samko, Y. Parfyonova, Y. Karpov.Predictors of angiogenic therapy effectiveness in hypertensive patients with chronic limb ischemia. //J. Hypertens. 2011; Vol. 29, e-Supplement A, p. till.

105. Talitskiy K., O. Bulkina, T. Arefieva, Y. Parfyonova, Y. Karpov. Predictors of angiogenic therapy effectiveness inpatients with chronic limb ischemia. //J. Am. Coll. Cardiol. 2012;59;E2062

106. Talitskiy K., O. Stukalova, O. Bulkina, Y. Parfyonova, Y. Karpov. Magnetic resonance imaging is useful for the estimation of therapeutic angiogenesis effect in patients with chronic limb ischemia. //J. Am. Coll. Cardiol. 2012;59;E2069.

107. Tambur AR, Pamboukian S, Costanzo MR et al. Genetic polymorphism in platelet-derived growth factor and vascular endothelial growth factor are significantly associated with cardiac allograft vasculopathy. J Heart Lung Transplant. 2006 Jun;25(6):690-8

108. Tateishi-Yuyama E. et al. Therapeutic angiogenesis for patients with limb ischaemia by autologous transplantation of bone-marrow cells: a pilot study and a randomised controlled trial. //Lancet. 2002 360:427-435.

109. Tath E, Aktoz M, £akar MA, Dogan E, Alkan M, Ozalp B. Survival of patients with well-developed collaterals undergoing CABG or medical treatment: an observational case-controlled study. //Anadolu Kardiyol Derg. 2012 Mar;12(2):97-101.

110. Testa U, Pannitteri G, Condorelli GL. Vascular endothelial growth factors in cardiovascular medicine. //J Cardiovasc Med (Hagerstown). 2008; 9(12): 1190-1221.

111. Tkachuk V, Stepanova V, Little PJ, Bobik A.Regulation and role of urokinase plasminogen activator in vascular remodelling. //Clin Exp Pharmacol Physiol. 1996 Sep; 23(9): 759-65.

112. Toyota E, Warltier DC, Brock T, Ritman E, Kolz C, OMalley P, Rocic P, Focardi M, Chilian WM. Vascular endothelial growth factor is required for coronary collateral growth in the rat. //Circulation 2005; 112: 2108-2113.

113. Tsung-Hsien Lin, Chiao-Ling Wang, Ho-Ming Su. Functional vascular endothelial growth factor gene polymorphisms and diabetes: Effect on coronary collaterals in patients with significant coronary artery disease. Clinica Chimica Acta 411 (2010) 1688-1693

114. Tubau JF, Chaitman BR, Bourassa MG, Lesperrance J, Dupras G. Importance of coronary collateral circulation when interpreting exercise test results. J Am Coll Cardiol 1981;47:27-32

115. Urbich C, Dimmeler S. Endothelial progenitor cells: characterization and role in vascular biology. //Circ Res. 2004; 95(4):343-353.

116. Urbich C, Dimmeler S. Risk factors for coronary artery disease, circulating endothelial progenitor cells, and the role of HMG-CoA reductase inhibitors. //Kidney Int. 2005; 67(5): 1672-1676.

117. Vogel R, Indermuhle A, Seiler C. Determination of the absolute perfusion threshold preventing myocardial ischemia in humans. Heart 2007;93:115—6

118. Vogel R, Zbinden R, Indermuhle A, Windecker S, Meier B, Seiler C. Collateral-flow measurements in humans by myocardial contrast echocardiography: validation of coronary pressure-derived collateral- flow assessment. Eur Heart J 2006;27:157-65

119. Wagner S, Breyholz HJ, Faust A. Molecular imaging of matrix metalloproteinases in vivo using small molecule inhibitors for SPECT and PET. Curr Med Chem. 2006; 13(23):2819-38.

120. Wang HY, Gao PJ, Ji KD, Shen WF, Fan CL, Lu L, Zhu DL.Circulating endothelial progenitor cells, C-reactive protein and severity of coronary stenosis in Chinese patients with coronary artery disease.//Hypertens Res. 2007 Feb;30(2): 133-41.

121. Watson CJ, Webb NJ, Bottomley MJ, Brenchley PE. Identification of polymorphisms within the vascular endothelial growth factor (VEGF) gene: correlation with variation in VEGF protein production. //Cytokine. 2000 Aug; 12(8): 1232-5

122. Watson T, Shantsila E, Karthikeyan VJ, Jessani S, Goon PK, Lip GY. The effects of exercise stress testing, diurnal variation and temporal decline on circulating progenitor cells. //Thromb Haemost. 2010 Feb; 103(2):419-25. Epub 2009 Nov 13.

123. Weinstein BM. What guides early embryonic blood vessel formation? Dev Dyn 1999;215:2-11

124. Wustmann K, Zbinden S, Windecker S et al. Is there functional collateral flow during vascular occlusion in angiographically normal coronary arteries? //Circulation 2003; 107: 2213-20.

125. Xie J, Yi L, Xu ZF, Mo XM et al. VEGF C-634G polymorphism is associated with protection from isolated ventricular septal defect: case-control and TDT studies. Eur J Hum Genet. 2007 Dec; 15(12): 1246-51. Epub 2007 Jul 11

126. Yue WS, Lau KK, Siu CW, Wang M, Yan GH, Yiu KH, Tse HF. Impact of glycemic control on circulating endothelial progenitor cells and arterial stiffness in patients with type 2 diabetes mellitus.//Cardiovasc Diabetol. 2011 Dec 20; 10:113.

127. Yun J, Rocic P, Pung YF, Belmadani S, Carrao AC, Ohanyan V, Chilian WM. Redox-dependent mechanisms in coronary collateral growth: the "redox window" hypothesis. //Antioxid Redox Signal 2009; 11: 1961-1974.