Трансформация оксианионов теллура фосфатаккумулирующей бактерией Acinetobacter calcoaceticus тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Соломенный, Александ Петрович

• Соломенный, Александ Петрович
• кандидат биологических наук
• 1998

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Соломенный, Александ Петрович

ОГЛАВЛЕНИЕ

Стр.

Список принятых сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Биология бактерий рода Асте1оЬас(ег: краткий обзор

Глава 2. Детоксикация оксианионов теллура, осуществляемая

микроорганизмами

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 3. Материалы и методы исследования

3.1. Бактериальные штаммы и условия их выращивания

3.2. Определение микробиологических и гидрохимических характеристик образцов природных и сточных вод

3.3. Определение концентрации теллурита калия (К2Те03)

в среде культивирования

3.4. Определение наличия теллура в биомассе бактерий

3.5 .Определение минимальной ингибирующей концентрации

клетками ацинетобактерий

3.7,Определение содержания общего внутриклеточного

глутатиона

3.8.Определение концентрации клеточного бежа

3.9.Определение внутриклеточного содержания соединений

фосфора

3.10 .Статистическая обработка результатов исследования

3.11. Химические реактивы

Глава 4. Отношение аэробных ацетатокисляющих накопительных

культур к теллурит-оксианионам

4.1. Получение накопительных культур аэробных ацетатокисляющих ацинетобактерий

4.2. Способность накопительных культур к детоксикации теллурит-оксианионов

Глава 5. Характеристика штамма Acinetobacter calcoaceticus IEGM 549 и его способности трансформировать и аккумулировать теллурит-оксианионы

5.1. Морфологические и физиологические свойства штамма

A. calcoaceticus IEGM 549

5.2. Способность A. calcoaceticus IEGM 549 к детоксикации теллурит-ионов

Глава 6. Особенности транспорта теллурита клетками

A calcoaceticus IEGM 549

Глава 7. Участие глутатиона в процессе детоксикации / восстановления теллурита

7.1. Взаимодействие глутатиона и теллурита in vitro

7.2. Роль глутатиона в восстановлении теллурит-оксианионов бактериями A. calcoaceticus IEGM 549

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

Благодарности

ЛИТЕРАТУРА

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АДФ

АТФ

БОС

КОЕ

питательной среде

МПА

МПБ

ПФШ ПФП_1

с.б

ХПК

ЭДТА

FADH2

GSH

GSSG

MIC

NADH

NADPH

восстановленный NEM

ODx

Тег

Те032"

Те042"

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Трансформация оксианионов теллура фосфатаккумулирующей бактерией Acinetobacter calcoaceticus»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. В настоящее время значительно повысился интерес к исследованиям экологического, эпидемиологического и биотехнологического значения бактерий рода Acinetobacter (Bergogne-Berezin et al., 1996). Некоторые представители Acinetobacter являются инфекционными агентами человека и животных, причем большинство изученных штаммов очень быстро приобретают устойчивость к действию известных антибиотиков (Perez-Ramos et al., 1994). В этой связи исследователи выражают опасение, что патогенные штаммы, которые сейчас являются, в основном, возбудителями внутрибольничных инфекций (в отделениях интенсивной терапии и реанимации, трансплантации, ожоговых и других) значительно расширят «сферу деятельности». Показано, что данные бактерии способны населять чрезвычайно загрязненные местообитания, например, участвовать в формировании активного ила биологических очистных сооружений (Васильев, Вавилин, 1992, Harold, 1966; Deinema et al., 1980; Amann et al., 1995). Ацинетобактерии уже используются в биотехнологических схемах удаления из сточных вод соединений фосфора и тяжелых металлов (Levin et al., 1972; Comeau, 1990). На основе лиофилизированных культур штаммов-деструкторов созданы коммерческие препараты, в частности «Экойл», для очистки нефтезагрязненных вод и почв. Применение таких препаратов особенно актуально в местностях с низкими температурами среды, где ацинетобактерии, тем не менее, способны успешно развиваться, используя углеводородные субстраты. На современном уровне развития прикладных исследований не представляет особой сложности ни в материальном, ни в технологическом плане наработка больших количеств биомассы ацинетобактерий. В перспективе предлагается применить некоторые штаммы Acinetobacter spp. для промышленного синтеза полисахаридов (Navonvenezia et al, 1995).

В связи с вышеизложенным все большее значение приобретают фундаментальные исследования в области биологии ацинетобактерий. За период с 1994 года уже проведены три международных симпозиума по указанной проблеме. Констатировано, что на сегодняшний день имеется ограниченное число данных относительно физиологических и биохимических особенностей бактерий рода Асте(оЬас(ег, которые позволяют им осваивать разнообразные экологические ниши. Интенсивные исследования в этой области в течение ряда лет ведутся в группе водной микробиологии Института экологии и генетики микроорганизмов ИЭГМ УрО РАН (Саралов и др., 1995). Тем не менее, практически отсутствуют сведения о воздействии на ацинетобактерии высокотоксичных неорганических ионов, интенсивно выделяющихся в окружающую среду в результате производственной деятельности и геохимических процессов.

Целью настоящего исследования было изучение явлений, происходящих при трансформации оксианионов теллура фосфатаккумулирующей бактерией Асте(оЬас1ег са1соасеНси$.

Основные задачи работы состояли в следующем:

1. Оценить активность накопительных культур, выделенных из различных образцов природных и сточных вод Пермского промышленного узла, по отношению к оксианионам теллура.

2. Изучить особенности поглощения, восстановления и аккумуляции теллурит-анионов бактериями штамма дикого типа Асте^Ьас1ег са1соасейсиз 1ЕОМ 549 в аэробных условиях при различных режимах культивирования.

3. Исследовать биохимический механизм восстановления теллурит-анионов клетками А. сакоасеИсия ПЮМ 549.

Научная новизна и практическая значимость работы. Впервые показано, что грам-отрицательные бактерии А. сакоасеИаля (штаммы 1ЕОМ 549 и 1ЕвМ ВТ 548) обладают способностью осуществлять восстановление

оксианионов теллура в аэробных условиях. Определены основные параметры поглощения теллурита бактериальной культурой АсакоасеНсия 1ЕОМ 549 и выявлены условия, при которых происходит наиболее активное удаление клетками бактерии токсичных ионов из среды. Выявлен вероятный биохимический механизм внутриклеточного восстановления теллурита клетками А.сакоасеИсия 1ЕвМ 549.

Данный штамм может служить основой для последующего генетического конструирования штаммов с улучшенными характеристиками. Штамм А. сакоасеНсия 1ЕОМ 549 перспективен для прогрессивной биотехнологической схемы удаления теллурит-ионов из реальных промышленных сточных вод. Основные положения, выносимые на защиту.

1. Природные штаммы А.сакоасейси$, населяющие водные экосистемы с высоким содержанием органических веществ, фосфора и металлов, при гетеротрофном типе обмена в аэробных условиях обладают способностью эффективно поглощать и восстанавливать токсичные теллурит- и теллурат-анионы с накоплением внутриклеточного теллура и окрашиванием биомассы в черный цвет.

2. Оксианионы теллура проникают в клетки А.сакоасеНст 1ЕОМ 549, конкурируя с ортофосфат-анионами. Наиболее высокая скорость поглощения теллурит-оксианионов отмечается у культуры А. сакоасейст 1ЕОМ 549 во второй половине логарифмической фазы ускоренного роста; стационарная культура, накапливающая внутриклеточные полифосфаты, утрачивает способность поглощать теллурит-ионы из среды.

3. У А.сакоасеИсш 1ЕСМ 549 в детоксикации оксианионов теллура важная роль принадлежит внутриклеточному глутатиону и другим низкомолекулярным тиолам, которые способны к их восстановлению до элементного теллура.

Апробация работы и публикации. Материалы диссертации были представлены на конференциях молодых ученых Института экологии растений и животных УрО РАН (Екатеринбург, 1996; Екатеринбург, 1998), Международной конференции «Перспективы развития естественных наук на Западном Урале» (Пермь, 1996), Международной конференции «Микробное биоразнообразие: состояние, стратегия сохранения, экологические проблемы» (Пермь, 1996), IV Международном симпозиуме по биологии бактерий рода Асте^ЬаЫег (Израиль, Эй лат, 1996), Международной конференции «Проблемы загрязнения окружающей среды-98» (Москва, 1998). По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 115 страницах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы в двух главах, описания объектов и методов исследований, четырех глав экспериментальной части с обсуждением результатов, заключения и выводов. Работа иллюстрирована при помощи 10 таблиц и 13 рисунков. Список использованных литературных источников включает 163 наименования.

Диссертационная работа выполнена в лаборатории промышленной экологии и водной микробиологии ИЭГМ УрО РАН и является частью исследований, проводимых по биологии фосфатаккумулирующих бактерий рода Асте1оЪас1ег. Представленный экспериментальный материал был получен в рамках работ по бюджетной теме "Изучение гидрохимических и биологических процессов биогеохимических циклов биогенных элементов в водных экосистемах7' ( № Государственной регистрации 01. 9. 70 005278) и в рамках проекта РФФИ "Микробиологическое и гидрохимическое исследование процессов вторичного загрязнения природных и сточных вод Пермского промузла" ( грант № 96-04-51043) на 1996-1998 гг.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. БИОЛОГИЯ БАКТЕРИЙ РОДА ACINETOBACTER. КРАТКИЙ ОБЗОР

Со времени переописания рода аэробных, грам-отрицательных, неподвижных, неферментирующих коккобацилл Acinetobacter Brisou and Prevot (Baumann et al, 1968) прошло 30 лет. Род Acinetobacter, в соответствии с современной систематикой, представлен шестью видами (Bouvet, Grimont, 1986): Acinetobacter baumannii, A.haemoiyticus, A.johnsonii, A.junnii, A.lwoffti и A.calcoaceticus. Согласно "Одобренным спискам названий бактерий" (Тер-Казарьян, 1989) был добавлен еще один вид -A.radioresistens. Тем не менее, число установленных на сегодняшний день геномных видов составляет уже 17, из которых 11 предлагается дифференцировать на фенотипическом уровне (Baginski et al, 1994).

Целенаправленные и разносторонние исследования биологии ацинетобактерий позволили выделить три основных особенности, присущие данному роду бактерий (Bergogne-Berezin et al., 1996), а именно:

- способность обитать в чрезвычайно разнообразных экологических нишах, от организмов высших животных до грунтовых вод;

- способность использовать для питания большое число субстратов, среди бактерий сравнимое только с псевдомонадами;

- способность быть толерантными к различным химическим токсикантам и антибиотикам.

Ацинетобактерии повсеместно распространены в водных и почвенных экосистемах (Baginski et al, 1994). Исследования 44 водных объектов (пруды, озера, реки) и 47 различных образцов почв показали, что представители p. Acinetobacter присутствуют в 43% водных и 40% почвенных объектах. Большинство из изолятов относится к комплексу A.calcoaceticus- A.baumannii, вторым по частоте встречаемости видом оказался A.haemoiyticus.

В отличие от А. Ьаитаппп, который наиболее часто выделяется из клинического материала (Seifert et al, 1996, Humphreys et al, 1996) A.calcoaceticus является типичным представителем естественной микрофлоры пресноводных экосистем, особенно загрязненных по фосфору (Mueller et al, 1994). Тем не менее, первоначальные представления о необычайно высокой численности ацинетобактерий несколько корректируются. В связи с этим была исследована структура бактериального сообщества активного ила аэробных и анаэробных реакторов биологических очистных сооружений (Kampfer et al, 1994а). Образцы анализировались при помощи олигонуклеотидных проб, комплементарных к консервативным участкам рибосомальной РНК бактерий a-, ß- и у-подклассов Proteobacteria, грам(+) бактерий с высоким содержанием G+C и группе флавобактерий/цитофагов. Во всех пробах доминировали представители ß-подкласса и грам(+) бактерии. Ацинетобактерии составляли лишь менее 2% от численности всех бактерий и в видовом отношении были определены как A.johnsonii, A.junnii и A.lwqffii. Гибридизация in situ выявила, однако, высокие ростовые характеристики большинства клеток ацинетобактерий в активном иле (Amann et al., 1995). В силу этого регистрируется и повышенный показатель (более 15%) отношения числа колониеобразующих единиц к общему числу бактерий в пробах рециркулируемого ила. Среди таких колоний, изолированных на богатой среде, 30-60% относится к Acinetobacter spp. Сходные данные были получены в лабораторной установке по удалению фосфора с помощью активного ила в течение 12-суточнош периода времени (Christensson et al, 1998). В посевах на плотную среду доминировал Acinetobacter, хотя анализ проб с помощью 16S РНК-гибридизации выявил, что только 9,8% бактерий относятся к грам(-) представителям у-подкласса Proteobacteria, а преобладают (31%) грам(+) бактерии с высоким содержанием G+C%. Напротив, из 149 бактериальных

изолятов, выделенных из активного ила и сточных вод на минеральной среде с ацетатом, 87 (или 58%) были идентифицированы с использованием системы тестов API 20NE как Acinetobacter (Jorgensen, Pauli, 1995).

Экология бактерий рода Acinetobacter тесно связана с особенностями прохождения жизненного цикла, продолжительность стадий которого, в свою очередь, зависит от физико-химических условий и состава среды обитания (James et al, 1995). Голодающие клетки ацинетобактерий и клетки стационарной культуры представляют собой небольшие по размерам кокки. Они характеризуются повышенной способностью прикрепляться к различным поверхностям, гидрофобным субстратам и аггрегироваться друг с другом с образованием биопленки, состоящей из плотных микроколоний (Nelson et al, 1985). Если среда обогащается органическим веществом, соединениями фосфора, серы и азота происходит быстрый переход к бациллярной морфологии клеток. При этом ацинетобактерии открепляются от субстрата или формируют диспергированную слабосвязанную биопленку. Наблюдаемый эффект отличается от выявленной ранее у ряда представителей Pseudomonas способности аггрегироваться, напротив, только при благоприятных для роста условиях среды и открепляться от субстрата в случае исчерпания питательных веществ (Lawrence, Korber, 1993). Такое поведение позволяет подвижным клеткам псевдомонад перемещаться по направлению к более предпочтительным условиям. В отличие от них не обладающие подвижностью ацинетобактерии свою стратегию выживания в неблагоприятной среде направляют на максимальное снижение активности.

Ацинетобактерии играют важную роль в биологическом удалении фосфатов из природных и сточных вод вследствие способности синтезировать повышенное количество внутриклеточных полифосфатов (Кулаев, 1975, Несбитг, 1977, Kulaev, Vagabov, 1983, Kulaev, 1990). Так, штаммы Acinetobacter sp., выделенные из аэробных систем очистки сточных вод могли аккумулировать до 25 мг фосфора на грамм клеточной биомассы

(Kampfer et al, 1994b). Штамм A.calcoaceticus IFO 12552 удалял фосфат из среды на уровне 38 мг фосфора на г биомассы (Qin Ye et al, 1988). В результате такой активности ацинетобактерий до 60% фосфора в аэробных условиях может быть переведено в высокомолекулярные полифосфаты, причем их гранулы в клетках достигают крупных размеров, до 0,4 мкм в диаметре (Bonting et al, 1993). Из сообщества микроорганизмов активного ила коммунальных очистных сооружений пос. Висагинас (Литва) был выделен штамм A.calcoaceticus IEGM 549 (Саралов и др., 1995). Оказалось, что в период удлиненной лаг-фазы и после прекращения роста эта бактерия интенсивно накапливала внутриклеточные полифосфаты (15-17% от с.б. в начальной фазе и 1-2% от с.б. в стационарной фазе) на средах, лимитированных по азоту и сере. Последовательное внесение экзогенных добавок глюкозы и Са2+ -ионов с позволяет клеткам аккумулировать до 6068% фосфора в виде полифосфатов в расчете на сухую бактериальную биомассу при конечной ее продукции не более 2 г • л"1. В цитируемой работе подтверждено, что "сверхнакопление" полифосфатов отмечается при переносе клеток из среды, лимитированной по фосфору. Одновременно показано, в отличие от результатов Qin Ye et al (1988), что такой же эффект может быть достигнут предварительным выдерживанием бактериальной культуры в анаэробных условиях. Показано, что старые клетки A.calcoaceticus при исключении доступа воздуха используют резервные полифосфаты, накапливают восстановленные эквиваленты и увеличивают свои размеры до 2-4 х 6-10 мкм. В анаэробных условиях ацинетобактерии, напротив, аккумулируют поли-р-гидроксибутират (Zhou et al, 1993), хотя у некоторых штаммов последний может синтезироваться и одновременно с полифосфатами (Knight et al, 1994) или вообще не синтезироваться (Stanier etal, 1966).

У ацинетобактерий (A.johnsonii 21 OA) обнаружены две фосфат-транспортиру ющие, т.н. Pit и Pst- системы (Yashphe et al, 1992, Van Veen et

a/., 1993a,b, 1994a,b). Первая из них является переносчиком неорганического фосфата в виде комплекса с двухвалентными катионами металлов (в т.ч. Са2+, Mg2+, Мп2+ ) и играет, согласно полученным данным, ведущую роль. Эта же транспортная система задействована и в поступлении в клетки арсенат-анионов.

Выявлена способность бактерий рода Acinetobacter активно растворять фосфаты кальция при помощи органических кислот, образуемых из глюкозы и других моносахаридов (Goldstein, 1986, Goldstein et al, 1993). При этом углеводный субстрат может использоваться в качестве дополнительного источника энергии.

Еще одной важной особенностью ацинетобактерий является использование ими для роста углеводородов нефти. Критический взгляд на возможность использования штаммов Acinetobacter для борьбы с нефтяным загрязнением окружающей среды представлен в работах Коронелли и др. (1987, 1988, 1994, 1996). Сравнение метаболических характеристик углеводородокисляющих бактерий родов Rhodococcus, Arthrobacter, Acinetobacter и Pseudomonas показало, что родококки и артробактерии имеют преимущество в окисляющей активности и скорости роста на гидрофобном субстрате. В условиях, когда отсутствие ростового субстрата сочетается с низкой температурой среды (т.е. в водных экосистемах Арктики) наибольшей выживаемостью обладали бактерии Arthrobacter ceroformans и Rhodococcus erythropolis, тогда как численность ацинетобактерий и псевдомонад падала на 80%, что, по мнению авторов затрудняло их использование для биодеградации нефти. С другой стороны, аргентинские исследователи (MacCormack, Fraile, 1997) сообщили об изолировании из загрязненных почв Антарктики нескольких штаммов Acinetobacter sp., один из которых, ADH-1 эффективно поддерживал рост на я-додекане и при 4°С. Напротив, Морщакова и др. (1994) сообщили о выделении из загрязненных почв грозненского и мангышлакского месторождений термотолерантных

коккобацилл (оптимальная температура для роста 40-42°С), способных использовать в качестве субстратов не только я-алканы с длиной цепи С8 -С40, но и нефтяные дистилляты фракций 220-375° (дизельное топливо), рафинаты фракций 350-500°, сырую нефть и ароматические углеводороды, включая фенол, бензол и толуол. Поскольку ДНК-ДНК гибридизация выявила невысокую степень гомологии с типовым штаммом А.сакоасеИсш 6915 ССМ (44-50%) и на основании некоторых таксономически значимых признаков (например, отсутствие образования кислоты из моносахаридов) представленные штаммы были выделены в отдельный вид Асте(оЬас(ег оЫоуогит. Наконец, из почвенного образца был изолирован штамм Асте1оЬас1ег яр. М-1, который способен использовать для роста длинноцепочечные н-алканы С в - С44 в качестве единственных источников углерода даже без наличия детергентов в случае твердых парафинов (Бака! е1 ей., 1994). ГосНИИ прикладной микробиологии (Московская область, Оболенск) рекомендовал для биодеградации нефтяных загрязнений вод и почв бактериальный препарат "Экойл", в состав которого входит активная культура Ас\пе1оЬас1ег Бр. НБ-1.

Штамм Асте1оЬас1ег ер. был выделен из лесных почв, богатых гниющей древесиной, с использованием накопительной культуры на индулине (крафт-лигнине). Данный штамм обладал способностью расщеплять не только крафт-лигнин, но и дегидрополимерный лигнин, высвобождая при этом катехин, сиреневую, ванилиновую и п-гидроксибензойную кислоты (Уаэиёеуап, МаЬаёеуап, 1993). Асте1оЬас1ег ярр. были обычными обитателями биореакторов обработки сточных вод фабрики по производству беленой крафт-целлюлозы (РиШюгре е/ а1, 1993). Понятно, что использование ацинетобактерий для деградации лигнина и лигноцеллюлозы сулит немалые выгоды.

В равной степени, исследования в области экологии и физиологии ацинетобактерий активно стимулирует факт образования ими капсулы,

состоящей из анионных высокомолекулярных гетерополисахаридов (Гринберг и др., 1987, 1990). Ассоциированный с клетками полисахарид эмульсан обуславливает, по мнению Пирог и др. (1997), устойчивость штамма А. ссйсоасеИст Б!АО-1 к фагам, выделяемым из сточных вод из-за того, что фаги не могут адсорбироваться на поверхности клеток. Экзополисахаридная капсула, весьма вероятно, обуславливает резистентность штамма Асте1оЬас1ег ер. Т2 (термотолерантный штамм) к действию у-излучения по сравнению с Е.соН (Нагаёа еЛ а1, 1993). Ацинетобактерии синтезируют несколько полисахаридов, различающихся по химическому составу. Этаполан состоит из нейтрального и двух кислых полисахаридов, один из которых ацилирован (Пирог и др., 1994). Углеводная цепь этаполана этерифицирована жирными кислотами (С10 - С18) (СгппЬегд, БепсЬепкоуа, 1996). Свойства растворов этаполана (эмульгирующая способность, увеличение вязкости в присутствии катионов и при низком рН) зависят от соотношения компонентов. Подобраны условия культивирования ацинетобактерий, при которых количество синтезированного экзополисахарида резко возрастает (до 7 г*л"1) и достигается оптимальный состав конечного продукта (Малашенко и др., 1993, Гринберг и др., 1994). Препараты этаполана стабильны при хранении и нетоксичны. Они могут добавляться в косметические и моющие средства, в различные эмульсии и пищевые продукты, а также использоваться в качестве поверхностно-активных веществ (биосурфактантов) для борьбы с нефтяными загрязнениями (ОппЬег§ е/ а/., 1996). Другой эмульгирующий агент - алазан - продуцируется культурой Агас/шгеда/т? КА53 и представляет собой комплекс аланин-содержащего гетерополисахарида и бежа (Иауопуепег1а е1 а!., 1995). Твердый остаток вещества концентрируется из культуральной жидкости в количестве до 2,2 г «л'1. Алазан стабилизирует эмульсии н-алканов с длиной цепи 10 атомов углерода и выше, жидкого парафина, растительных масел и сырой нефти. Эмульгирующая активность алазана

максимальна при рН 5.0, ионы магния стимулировали ее при всех значениях рН (3.3-9.3).

Способность ряда штаммов использовать в качестве ростового субстрата компоненты крови ставит вопрос о патогенности бактерий рода Acinetobacter. Эта проблема становится все более серьезной (Bergogne-Berezin et al, 1996). В частности, в ряде крупных клинических больниц бактериеносительство A. baumannii выявляется примерно у 40% пациентов отделений интенсивной терапии и реанимации, у 20% пациентов травматологических и ожоговых отделений (Crewe-Brown et al., 1996). Наиболее часто ацинетобактерии выделялись из трахеального аспирата (5768% случаев) и с раневых поверхностей (40-75% случаев) (Seifert et al, 1996). Интересно отметить, что в отличие от других видов (A.johnsonii, A.lwoffii и A.radioresistens) A. baumannii и другой клинически важный Acinetobacter genosp. 13 практически никогда не выделяются с поверхности неповрежденных кожных покровов человека (Seifert et al, 1996).

Борьба с инфекциями, которые вызывает Acinetobacter, крайне затруднена вследствие неизбежного и постоянного присутствия этих бактерий во внешней среде и внутренних пространствах помещений (Humphreys et al, 1996). Ацинетобактерии легко контаминируют пищевые продукты, медицинский инструментарий (системы вентиляции легких, катетеры), препараты крови и парентерального питания (Garcia Arata et al, 1996).

Важность изучения биологии как клинически значимых, так и природных штаммов ацинетобактерий связана и с их способностью быстро приобретать устойчивость к действию антибиотиков и дезинфектантов. Perez-Ramos et al (1994) исследовали чувствительность 72 штаммов A.calcoaceticus и A.lwoffii, выделенных от первичных больных и прошедших курс лечения антибиотиками в течение 1992-1993 г. Все штаммы, полученные от контрольной группы, были чувствительны к тетрациклину и цефотаксиму.

Однако уже 10% штаммов, выделенных в условиях стационара после антибиотикотерапии, приобрели устойчивость к этим препаратам. Ауа1з et а1. (1996) изучали чувствительность к десяти часто используемым антибиотикам у 966 штаммов А. Ьаитаппп, выделенных в течение 1992-1996 гг. от пациентов госпиталя Университета Барселоны. В качестве значимого критерия использовался паттерн приобретения множественной резистентности, определяемый во времени. Уровень резистентности к пяти антибиотикам (гентамицину, тобрамицину, амикалину, ципрофлоксацину и тетрациклину) за исследуемый период достоверно возрастал (от 29.9% до 82.2%), уровень резистентности к четырем антибиотикам (за исключением амикалина) увеличивался за время наблюдения от 0.5% до 8.5%. В связи с этим ставится вопрос о предельной осторожности при проведении экспериментов по изучению устойчивости к антибиотикам у ацинетобактерий.

Одним из наименее изученных вопросов в области биологии бактерий рода Асте1оЬас1ег является исследование воздействия на них со стороны высокотоксичных неорганических ионов - загрязнителей окружающей среды. Тем не менее, ряд важных результатов уже получен. РиМюгре а1. (1993) сообщили, что изоляты Асте^ЬаЫег ер., выделенные из реки, снабжающей водой фабрику по производству беленой целлюлозы, обладали устойчивостью к кадмию. Данная резистентность была ассоциирована с плазмидами. Среди 600 бактериальных штаммов из коллекции Института молекулярной генетики РАН, несущих детерминанты устойчивости к ионам ртути, шег-опероны и 1826-подобные вставки выявлены и у ацинетобактерий (Уипеуа et ей., 1994). Были открыты новые типы /иег-транспозонов, в частности Тп5053, относящийся к ранее неизвестному виду мобильных элементов и Тп5041, близкий к толуольному транспозону. Юпошникова и др.(1994) впервые описали новый вид Асте(оЬас1ег &егтоШегапИси$, который способен восстанавливать хлорат- и перхлорат-ионы в процессе т.н.

"хлоратного" дыхания. Культура данного штамма могла использовать в качестве конечного акцептора электронов и хроматы.

В рамках работ по поиску микроорганизмов-деструкторов боевых отравляющих веществ (в частности, люизита) была исследована устойчивость к соединениям мышьяка у 140 штаммов бактерий, выделенных в основном на территории Кировской области. По результатам скрининга были отобраны 12 штаммов, демонстрирующих повышенную резистентность к анионам As(V) и As(III), среди которых A.calcoaceticus 3140 (Пименов и др., 1996). У данного штамма значение минимальной ингибирующей концентрации (MIC) для As(V) составляло 29 мг-мл"1, а для As(III) - 36 мг^мл"1 в пересчете на чистый мышьяк. Одновременно штамм обладал устойчивостью к антибиотикам ампициллину (100 мкг*мл-1), тетрациклину и канамицину (оба-10 мкг*мл-1). Было определено наличие двух плазмид с молекулярной массой 3,6 и 4,3 МДа, однако после 10 пересевов в полноценной питательной среде без добавления соединений мышьяка культура своей резистентности не утрачивала. Полученные результаты могли свидетельствовать о хромосомной локализации ars-оперонов или о высокой стабильности содержащихся в клетках плазмид.

Таким образом, исследования биологии бактерий рода Acinetobacter стимулируются как их важным санитарно-эпидемическим значением, так и перспективами биотехнологического использования непатогенных штаммов. К сожалению, очень мало известно о геохимической деятельности широкораспространенных в водах и почвах видах ацинетобактерий, включая Acinetobacter calcoaceticus. Практически не изучено действие на ацинетобактерии со стороны соединений (особенно неорганических), загрязняющих окружающую среду и способность представителей Acinetobacter участвовать в их детоксикации. Тем не менее, работы, проводимые в данной области имеют важное теоретическое и прикладное значение.

ГЛАВА2. ДЕТОКСИКАЦИЯ ОКСИАНИОНОВ ТЕЛЛУРА, ОСУЩЕСТВЛЯЕМАЯ МИКРООРГАНИЗМАМИ

Известно, что очень выраженное токсическое воздействие на живые системы оказывают мышьяк, селен и теллур (Wood, 1974). Особую опасность для биоты представляют их оксианионы, как правило, легко проникающие в живые клетки (Baldi, 1994). При этом анионы мышьяка (арсениты и арсенаты) проявляют себя фосфатными аналогами, а селена (селениты и селенаты) - аналогами серы (Илялетдинов, 1984). Токсический эффект оксианионов мышьяка и селена в основном обусловлен их взаимодействием с сульфгидрильными группами и в меньшей степени - с амино-, фосфат- и гидроксильными радикалами ферментов и других важнейших белков. К веществам, снижающим их действие, относятся соединения, содержащие сульфгидрильные группы - тиогликолевая кислота, цистеин, глутатион, а также сероводород (Илялетдинов, 1984). Микроорганизмы обладают механизмами для детоксикации анионов мышьяка, селена и теллура путем их восстановления, окисления или метилирования (Cullen, Reimer, 1989, Lovley, 1993, Bachofen, 1994). Причем, если в результате восстановления образуются, как правило, действительно менее токсичные продукты, окисление и метилирование зачастую приводят к образованию соединений, хотя и не токсичных для самих микроорганизмов, но чрезвычайно опасных для других живых существ (Wood, 1983). Физиологическое значение восстановления оксианионов мышьяка, селена и теллура, возможно, связано не только с их детоксикацией. Известно, что бактерия Thauera selenatis способна осуществлять диссимиляционную редукцию селената до селенита посредством анаэробного дыхания (Oremland, 1994, Buchanan et al, 1995). Выделен и изучен бактериальный штамм SES-3, предварительно идентифицированный как Desulfovibrio sp., использующий в качестве акцепторов электронов арсенат и селенат (Laverman et al, 1995).

Восстановление оксианионов мышьяка и селена осуществляется внутриклеточно. Однако в случае арсената процесс идет только лишь до образования иона трехвалентного мышьяка - арсенита, который мигрирует из бактериальной клетки (ВоууШе е1 а1, 1996). Восстановление же селената и селенита проходит до образования элементного селена, гранулы которого или аккумулируются внутри клеток (Огет1апс1, 1994) или выделяются в среду культивирования (Ьоэ^ БгапкепЬегдег, 1997).

Высокотоксичные растворимые подвижные соединения теллура, аналогично соединениям мышьяка и селена, загрязняют окружающую среду как в результате естественной геохимической активности, так и в процессе современной производственной деятельности. По расчетным данным, в крупном промышленном районе (Подмосковье) поступление теллура (Те) с атмосферными осадками составляет 1,26 тонны в год; вынос с речным стоком - 0,68 тонны (Петрухин, 1982). Исходя из разницы в полученных цифрах автором сделан вывод об аккумулирования соединений Те в ландшафте. В верхнем горизонте почв (0-5 см) в долинах р. Москва теллур накапливается до концентрации 0,35 мкг*г-1 сухого остатка (Петрухин, 1982). Среднее содержание Те в воде р. Москва определяется в 0,6 мкг*л"\ в речной взвеси р. Москва - 10,0 мкг*гсухой массы, в илах рек московского бассейна - 0,9 мкг*г сухой массы (Петрухин, 1982). В подземных водах, по данным одних авторов, содержание теллура составляет в среднем 0,7 мкг'л"1 (Петрухин, 1982; Хендерсон, 1985). Другие авторы (Овчинников, 1970) не обнаружили теллур в подземных водах.

Геохимическая аномалия по теллуру исследована в лесостепной зоне Омской области (Вредные химические..., 1989). Выявлено повышенное содержание Те в воде (1,18 • 10"2%) и почве (1,52 • 10"3 %). Вследствие этого соединения теллура интенсивно накапливаются в растениях, их содержание в сухой растительной биомассе достигало 4,5-5 г*кгл.

Значительный вклад в загрязнение среды соединениями теллура вносят промышленные предприятия (Klevay, 1976). Среди них - металлургические и нефтеперерабатывающие заводы, комбинаты по производству минеральных удобрений и целлюлозы, предприятия по выпуску резины и стекла. Так, шламы электролиза меди содержат до 2 % Те, а целлюлозно-бумажные шламы - 5-10 % Те (Вредные химические..., 1989). В течение многих лет теллур широко используется в процессах получения фотографических и фотоэлектронных материалов, а также в производстве полупроводников. Естественно, эта сфера также является источником загрязнения вод и почв (Cooper, 1971).

Адсорбция ионных форм теллура гидратированными гидроксидами железа, марганца и коллоидными минералами глин может приводить к их локальному концентрированию (Wood, 1974, 1983). Напротив, при высыхании грунтов гидрооксиды, адсорбирующие ионы, теряют воду и соединения теллура, высвобождаясь в среду, могут стать причиной ее вторичного загрязнения.

Главными формами теллура в пресных водах являются его оксианионы теллурит- (Те032") и теллурат- (Те042"), а в морской воде - ион НТеОэ" (Ахметов, 1967). Вследствие высокой реакционной способности оксианионы теллура представляют опасность для живых организмов, присутствуя в среде их обитания даже в очень малых концентрациях. Так, теллурит-ионы уже в концентрации 0,5 мкг-мл"1 задерживают процессы самоочищения водоемов из-за бактерицидного действия на микрофлору (Грушко, 1979). Растворимые в биологических жидкостях теллуриты и теллураты обладают более выраженными токсическими свойствами, чем элементный теллур (Те0) или оксид теллура (IV) и их повреждающий эффект на несколько порядков выше (Израэльсон, 1973). Механизм токсичности оксианионов теллура в настоящее время окончательно не выявлен, но полагают, что он связан с их сильной окисляющей способностью (Summers, Jacoby, 1977, Taylor, 1994). В

частности, при экспозиции бактерий к ионам Те032" свободные восстановленные внутриклеточные тиолы (RSH) подвергаются быстрому окислению (RSSR) (Taylor et al., 1994а). Тем не менее, объяснение токсичности теллура вследствие замещения им серы в различных биохимических реакциях также не исключается (Taylor, 1994).

В организме соединения теллура быстро восстанавливаются до

гр U

элементарного Те, который затем медленно выделяется в виде постепенно образующихся органических производных, обладающих сильнейшим чесночным запахом (Некрасов, 1974). Показано, что все соединения теллура подвергаются в организме человека восстановлению до элементарного теллура (наиболее выраженной восстановительной способностью обладает ткань почек), восстановленный теллур частично метилируется с образованием диметилтеллурида, по-видимому в печени (Вредные химические ..., 1989).

Различные группы микроорганизмов проявляют неодинаковую чувствительность, в частности, к теллурит-оксианионам. В практической деятельности микробиологи довольно давно начали добавлять теллурит калия (К2Те03) к культуральным средам с целью селективно выделять некоторые грам-положительные патогенные бактерии. Для селекции некоторых стрептококков {Streptococcus mitis, S. salivarius, S. faecalis) и энтерококков используется К2Те03 в концентрации 0,001% (Методы общей..., 1983). Для изолирования коринебактерий, в частности Сoririebacterium diphtheriae, к кровяному агару прибавляют К2ТеОэ в концентрации 0,01 - 0,0375% (Atlas, 1993). Теллурит-глициновый агар, содержащий до 0,02% К2ТеОэ применяется для выделения, количественного учета и культивирования коагулазо-позитивных стафилококков (Atlas, 1993). Подавляющее большинство грам-отрицательных бактерий обычно чувствительны к теллуриту даже при его концентрациях менее 4 мкг*млл (Summers, Silver, 1978, Taylor et al., 1994a).

Высокая токсичность теллурита сильно ограничивает возможность использования бактерий (и других микроорганизмов) для очистки загрязненных вод и почв (Turner et al, 1994а). Создание работающих биотехнологических схем удаления из окружающей среды ионов подобного типа является первоочередной задачей (Gadd, White, 1993, Yurkov et al, 1996).

Тем не менее, устойчивость к теллуриту демонстрируют и некоторые грам-отрицательные бактерии. Примеры включают представителей Alcaligenes spp. (Jobling, Ritchie, 1987), Klebsiella aerogenes (Taylor, Summers, 1979), Pseudomonas aeruginosa (Bradley, 1985) и Proteus spp. (Turner et al., 1992a).

Детерминанты резистентности к теллуриту (Тег) имеют как плазмидную, так и неплазмидную локализацию. Тег была идентифицирована на хромосоме Escherichia coli как мутация в фосфат-транспортирующей системе при помощи которой теллурит проникает в клетку (Tomas, Kay, 1986). Резистентность к теллуриту (на уровне 128-256 мкг*мл_1) опосредуется через экспрессию tehAB оперона, который локализуется на терминальном участке хромосомы Е. coli (Walter et al, 1991a; Taylor et al, 1994a ). Гены tehA и tehB кодируют белки в 36 kDa и 23 kDa, сответственно. Первый из них представляет собой белок цитоплазматической мембраны, а второй является растворимым. Указанные гены у Е. coli фенотипически, как правило, не проявляются (MIC К2Те03 для большинства штаммов всего 1-2 мкг'мл"1). Способность TehA и TehB белков, в том случае когда соответствующие гены экспрессируются в штаммах-реципиентах, опосредовать резистентность к теллуриту проявляется только на богатых, но не на минимальных, средах (Turner et al, 1995). Интересно отметить, что данная детерминанта не представлена в таксономически близких к Е. сой видах бактериальных родов Shigella и Salmonella.

Три плазмидных Тег детерминанты на сегодняшний день клонированы и секвенированы. Первая из них была обнаружена на плазмиде pMER610

группы несовместимости HI2 (Jobling, Ritchie, 1987, 1988) и кодирует высокую степень резистентности с MIC для К2ТеОз более 1024 мкг*млЛ Четыре цитоплазматических белка кодируются генами terA, terB, terD и terE наряду с интегральным мембранным белком, кодируемым геном íerC. Представленные гены составляют единый оперон (Hill et al, 1993). Эта детерминанта является наиболее распространенной среди грам-отрицательных бактерий и, по-видимому, представлена на почти всех IncHI2, IncHI3 и IncHII плазмидах (Walter, Taylor, 1989, 1992).

IncPa плазмидная детерминанта RK2Ter сообщает резистентность к теллуриту на уровне 256 мкг*мл-1 и кодируется тремя генами, два из которых kilA и telA кодируют белки, которые по всей видимости ассоциированы с цитоплазматической мембраной, а третий - telB - кодирует интегральный белок цитоплазматической мембраны (Walter et al, 1991b, Turner et al, 1994b). Способность JcilA детерминанты опосредовать устойчивость к теллуриту не зависит от состава среды, на которой культивируются бактерии (Turner et al, 1995).

IncFl плазмида R773 несет оперон arsRDABC, который первоначально был идентифицирован как детерминанта устойчивости к арсениту, арсенату и антимониту (Chen et al, 1986, Rosen et al, 1988). Впоследствие оказалось, что благодаря продуктам этого комплекса, которые представляют собой анион-транслоцирующую АТФазу, обеспечивается резистентность и к К2Те03 на уровне 64 мкг'мл"1. Механизм функционирования данной системы известен в деталях (Kaur, Rosen, 1992, Rosen et al, 1994, Silver, Phung Le, 1996). Белок ArsA является собственно АТФазой, а белок ArsB представляет собой мембранный "якорь" для ArsA. ArsC белок модифицирует субстрат таким образом, чтобы сайт связывания АТФазы акцептировал теллурит-анионы в дополнение к арсенату. Гены arsR и arsD кодируют регуляторные белки.

Из выявленных в самое последнее время генетических детерминант резистентности к теллуриту у грам-отрицательных бактерий следует отметить 1,65 kb вставку, кодирующую белок в 24,445 Da в клетках фитопатогенного штамма Pseudomonas syringae pathovar pisi (Cournoyer et al, 1998). Этот белок является тиопурин-метшггрансферазой с высокой степенью гомологии к аналогичным ферментам из Synechocystis и Bordetella pertussis. Наличие данного гена подтверждено у большинства Ps. syringae. Показано, что культуры Rhizobium meliloti и Rhizobium fredii резистентны к теллуриту калия в концентрации 500-2000 мкг*мл"\ причем фрагменты ДНК, несущие вставки, которые кодируют фенотип устойчивости, не гибридизуются с другими известными детерминантами (Kinkle et al., 1994).

Ни одна из известных на сегодняшний день Тег детерминант не имеет никакой гомологии ни на уровне ДНК, ни на белковом уровне с любой из других (Jobling, Ritchie, 1988, Walter, Taylor, 1989, 1992). Ни одна из них, за исключением обнаруженной у Rhizobium, не придает перекрестной

гу

резистентности к селенит-оксианионам (Se03 ")> которые по химическим и биохимическим свойствам наиболее близки к теллуриту. Тем не менее одно общее свойство у них выявляется (Taylor et al., 1994). Все они кодируют интегральный белок (белки), который связан с внутренней стороной цитоплазматической мембраны. Не интегральные и не регуляторные белки -продукты генов arsRDABC, tehAB kiltelAB - так или иначе, но ассоциированы с мембранной фракцией. Подтверждения важной роли вышеозначенного свойства продолжают поступать (O'Gara et al, 1997). Показано, что гены trgAB, сообщающие резистентность к теллуриту у Rhodobacter sphaeroides 2.4.1., кодируют именно мембран-ассоциированные бежи.

гу

В ряде случаев детерминанты резистентности к анионам ТеОэ" одновременно кодируют устойчивость и к другим неблагоприятным воздействиям. Так, участок IncHI2 плазмиды R478, который обеспечивает защиту Е. coli от токсического действия теллурита, представляет собой

кластер множественной резистентности к бактериофагам и колицинам (Wheian et al, 1997). Клонирован регион плазмиды Mip 233, кодирующий фенотипы устойчивости к канал-формирукмцим колицинам и К2Те03 (MIC более 1000 мкг'мл"1) у Е. coli (Vilchez et al, 1997). Усиленная продукция бежа TehA придает клеткам резистентность к хлориду тетрафениларсония, этидиум бромиду, кристаллическому фиолетовому и профлавину (Turner et al, 1997).

При исследовании скорости поглощения теллурит-анионов культурами бактерий, несущими различные Тег детерминанты, было выявлено следующее (Turner et al, 1994а). Культуры, содержащие гены arsABC, показывали низкий уровень поглощения теллурита, которые составлял 2-3 мкг К2Те03 на мг клеточного белка в течение 30 час. Скорость поглощения теллурита в других Тег культурах возрастала до 15 мкг К2Те03 на мг белка на протяжении 5 час, а затем достигала плато. Только культуры, несущие клонированные гены tehAB, поддерживали скорость поглощения теллурит-анионов на уровне 32 мкг К2Те03 на мг бежа. Все культуры, имеющие детерминанты резистентности к теллуриту, полностью сохраняли жизнеспособность в течение 40-часовой экспозиции К2Те03.

Из всех изученных на сегодняшний день Тег детерминант только одна -ars система - характеризуется быстрым обратным выбросом ионов Те032~, поступивших в клетку (при этом скорость поглощения ингибируется на 55%) (Taylor, 1994). Другие детерминанты так или иначе способны обеспечивать внутриклеточную модификацию теллурит-оксианионов, поглощенных микроорганизмами из среды (Turner et al, 1995).

В принципе, механизмы обеспечения резистентности к поступившим в клетку теллурит-оксианионам могут иметь самую различную природу. В их число включают (Taylor et al, 1994): модификацию мишеней токсического действия, синтез компенсирующих и репарирующих ферментов, регуляцию клеточного метаболизма, обеспечение продукции хелатирующих соединений,

детоксикацию посредством биохимического восстановления и другие. Вероятно, что все перечисленные механизмы действуют в комплексе и доминирование какого-либо одного из них может определяться конкретными условиями среды (Wackett et ah, 1989).

Наибольший интерес у исследователей вызывает восстановление теллурит-оксианионов клетками микроорганизмов, приводящее к образованию элементного, т.н. "металлического" теллура (Те0). Геохимическое, экологическое и биотехнологическое значение такого процесса представляется весьма интересным (Илялетдинов, 1984; Илялетдинов, Алиева, 1990). В ряде случаев биохимические механизмы детоксикации теллурита посредством его восстановления достаточно полно изучены.

Для некоторых бактерий описана редукция неорганических ионов в атмосфере, содержащей водород (Woolfolk et ah, 1959, 1961, 1962). В частности, клетки и бесклеточные экстракты Micrococcus lactilyticus окисляют молекулярный водород за счет восстановления ионов теллура в реакции, катализируемой растворимой гидрогеназой: Те032" + 2Н2 Те0 + 20Н" + Н20. Наряду с гидрогеназой проявляется активность и дополнительной редуктазы. Поскольку М. lactilyticus не обладает цитохромной системой, изучение роли белков в переносе электронов при восстановительных реакциях с участием этой бактерии требует дополнительного изучения. Процесс восстановления согласно вышеупомянутой реакции заметно стимулируется ионами К+ и NH4+, но тормозится фосфатом.

Гидрогеназа I, синтезируемая бактерией Clostridium pasteurianum также функционирует и как теллурит-редуктаза (Yanke et ah, 1996). Из переносчиков электронов, требуемых для ее активности, наиболее эффективным оказался ферредоксин. Активность гидрогеназы I полностью ингибируется молекулярным кислородом и сульфатом меди.

Была выделена и очищена белковая фракция бактерий Thermus thermophilus, которая демонстрирует NADH/NADPH - зависимую теллурит-редуктазную активность (Chiong et al, 1988). Terai et al (1958) показали восстановление Те032" в клеточных экстрактах Mycobacterium avium. Восстановление теллурита наблюдали у Alcaligenes sp. (Jobling, Ritchie, 1988). Avazeri et al. (1997) показали, что теллурит-редуктазной активностью обладают мембран-связанные нитратредуктазы А и Z (диссимиляционные нитратредуктазы) у E.coli. Мутанты по соответствующим генам в аэробных условиях становятся гиперчувствительными к теллуриту - MIC К2Те03 падает до 0.015 мкг-мл"1 (Turner et al, 1995).

Оксианионы теллура способны восстанавливать некоторые виды дрожжей и микромицетов. Восстановление Na2TeC>4 и Na2Te03 осуществляют клетки дрожжей Schizosaccharomyces pombe и Cryptococcus albidus при выращивании их на глюкозной среде (Smith, 1974, Brown, Smith, 1978). Теллурит-редуктазная активность наблюдалась в цитозоле клеток Saccharomyces cerevisiae (Gharieb, Gadd, 1998). Эксперименты с мутантами S. cerevisiae, характеризующимися отсутствием вакуолярных структур или с дефектами вакуолярной АТФазы, показали важную роль активных вакуолей в регулировании восстановительной активности. Наконец, штамм микромицета Aspergillus parasiticus var. globosus был способен расти в присутствии до 2% К2Те03 и восстанавливать при этом теллурит-оксианионы. В условиях эксперимента резко ингибировалось образование афлатоксина (Zohri et al, 1997).

На сегодняшний день основные исследования в области биохимии восстановления теллурит-оксианионов выполнены на фотосинтезирующих бактериях (Moore, Kaplan, 1992, 1994, Yurkov et al, 1996). Семь видов фотосинтезирующих бактерий: Erythrobacter litoralis Т4, Roseococcus thiosulfatophilus RB3, Erythromicrobium ramosum E5, Erythromicrobium

sibiricum RBI6-17, Erythromicrobium ursincola KR99, Erythromicrobium ezovicum El и Erythromicrobium hydroliticum E4 обладают способностью восстанавливать теллурит в процессе роста на богатой органической среде или минеральной среде с дрожжевым экстрактом (Yurkov et al, 1996). В этих условиях все они, за исключением Erythromicrobium ezovicum,, демонстрируют высокую степень резистентности к теллуриту калия (MIC для КгТе03 в пределах 500-2000 мкг'мл"1). Тем не менее, наличие восстановления и уровень устойчивости к теллуриту достоверно зависят от природы источника углерода, обеспечивающего ростовые потребности бактерий. Наивысший уровень резистентности (MIC для К2Те03 в пределах 2300 - 2700 мкг*мл-1) наблюдался у видов Erythromicrobiwn hydroliticum, Erythromicrobium ursincola и Erythromicrobium ramosum при росте на минеральной среде в присутствии ацетата. Это самые высокие показатели MIC теллурита калия из известных на сегодняшний день. Виды Roseococcus thiosulfatophilus и Erythromicrobium ezovicum., выращенные на минеральной среде с ацетатом, также демонстрируют повышенную устойчивость к ионам Te032" (MIC К2Те03 до 1200 мкг-мл"1), но теряют способность восстанавливать теллурит. Таким образом, для аэробных фотосинтезирующих бактерий в целом не получено строго доказательства связи между восстановлением теллурит-оксианионов и окислительным состоянием источника углерода. Исключение составляет Roseococcus thiosulfatophilus, который обладает теллурит-редуктазной активностью только на богатых средах. Этот результат находится в согласии с предположением, что в дополнение к детоксикации, восстановление оксианионов металлов может являться средством удаления избытка электронов (восстановительных эквивалентов) посредством окисления переносчиков электронов (NADH, FADH2 или хинонов), когда теллурит выступает в качестве конечного акцептора е. В результате, in vivo

поддерживается в равновесном состоянии окислительно-восстановительный баланс.

Moore и Kaplan (1992, 1994) проводили исследование несерных пурпурных бактерий сем. Rhodospirillaceae, которые способны к восстановлению теллурита при хемо- и фотогетеротрофном росте. В целом, представленные бактерии демонстрируют высокий уровень резистентности к ионам ТеОз2". Тем не менее, устойчивость к теллуриту различается у разных видов и штаммов (до 2-3 раз и даже более) и зависит от условий выращивания. Интересно, что на резистентность не влияла концентрация фосфат-ионов в среде. Штамм Rhodobacter sphaeroides 2.4.1. имел при росте на минимальной среде с сукцинатом следующие показатели MIC для К2Те03: в аэробных условиях - 900 мкг*мл_1, в фотосинтетических условиях (при оптимальной интенсивности света) - 600 мкг*мл_1. Устойчивость к теллуриту у данного штамма выше при хемогетеротрофном росте, чем при фотогетеротрофном, безотносительно к природе источника углерода (за очень редким исключением). Установлено, что при всех условиях выращивания (аэробные, фотосинтетические или анаэробные в темноте) MIC К2Те03 всегда заметно выше (в 10-50 раз) при использовании минеральных сред по сравнению с обогащенными. MIC теллурита калия в фотосинтезирующих культурах прямо пропорциональна интенсивности их освещения в процессе роста. Важным представляется тот факт, что на уровень МГС К2Те03 значительно влияет окислительное состояние источника углерода. Так, при переходе от менее восстановленного субстрата (этанол) к более восстановленному (бутират) величина MIC возрастает в 30-40 раз независимо от ростовых условий.

Анализ, проведенный с использованием мутантов Rhodobacter sphaeroides 2.4.1. выявил, что для восстановления клетками теллурита требуются фиксация С02, интактные фотосинтезирующие реакционные центры и функциональная цепь переноса электронов. Не способные к фотосинтезу

мутанты не восстанавливают Tew до Те0 при любых условиях роста. Восстановление ТеОз2" не наблюдается при отсутствии FADH2- окисляющей активности, при этом резко падает и уровень резистентности к теллуриту. Авторы предположили существование двухэталного процесса превращения Те032" в Те0. Первоначально при участии FADH2 образуется нетоксичный +11 валентный промежуточный продукт, а затем в результате двухэлектронного восстановления - элементный теллур. Похожий механизм вовлечен в биокаталитическую детоксикацию ртути (Summers, Silver, 1978).

У пурпурных несерных бактерий в аэробных условиях в результате оттока электронов на кислород и в анаэробных условиях в присутствии доноров электронов наблюдается ингибирование генерации мембранного потенциала, которое устраняется в первом случае при добавлении субстратов окисления фотооксидазной реакции, а во втором - акцепторов электронов, устраняющих чрезмерное восстановление компонентов циклической редокс-цепи (Ременников, Самуилов, 1979аб, 1980). Полученные данные позволили сделать вывод о том, что способность восстанавливать теллурит-оксианионы позволяет бактериальным клеткам поддерживать оптимальный баланс окислительно-восстановительных реакций, поскольку для превращения 1 моля Те™ до Те0 требуется 50 молей электронов. Эффективное удаление их избытка позволяет родоспириллам получать определенные экологические преимущества в загрязненных местообитаниях (Moore, Kaplan, 1994).

Было показано, что продукт гена cysK (цистеинсинтаза) у Rhodobacter sphaeroides 2.4.1. также требуется для наличия устойчивости к теллуриту (O'Gara et al, 1997). С другой стороны, добавление 1 мМ L-цистеина к минимальной среде резко снижает величину MIC для К2ТеЮ3 ( в 15-45 раз в зависимости от условий культивирования). Другой тиол, присутствующий в грам-отрицательных бактериях, глутатион (у-глутамилцистеинилглицин), практически не оказывает влияние на МЮ теллурита калия при фотогетеротрофном росте, но снижает ее примерно вдвое в аэробных

условиях (Moore, Kaplan, 1992). Turner et cd. (1995) получили данные о том, что нормальный синтез глутатиона и глутатионредуктазы необходим для обеспечения устойчивости к теллуриту у Е. coli. Мутанты в генах gor-1, gshA и gshB оказались крайне чувствительными к К2ТеОз (MIC составила всего 0.25 мкг*мл-1). Даже в присутствии детерминанты резистентности к теллуриту tehAtehB величина MIC для этих мутантов составляет только 4 мкг*мл"1 по сравнению с 256 мкг*мл-1 у родительского штамма Е. coli JF1070. Бутионин сульфоксимин - ингибитор у-глутамилцистеинсинтетазы, которая является продуктом гена gshA - при добавлении к культуре в концентрации 10 мМ (при этом синтез глутатиона прекращался) вдвое снижал устойчивость штаммов, несущих детерминанты Тег, к теллуриту. Еще более выраженное влияние оказывал связывающий тиоловые группы реагент диэтилмалеат, при добавлении которого к резистентным культурам MIC для К2Те03 падала до 1 мкг'мл"1, т.е. на два порядка. Добавление индуктора синтеза внутриклеточного глутатиона (2-оксотиазолидин) к минимальной среде, содержащей теллурит в концентрации 25 мкг^мл"1, позволил штаммам Е. coli с детерминантой tehAtehB иметь некоторый рост, хотя без индуктора никакого роста не наблюдалось. При непосредственном внесении восстановленных тиолов (цистеина или глутатиона-SH) в такую среду отмечалось прямое образование элементного теллура. Окисленные формы тиолов (цистин или глутатион-8-8-глутатион) очень слабо восстанавливали теллурит. На важную роль глутатиона в детоксикации большого числа химических соединений, осуществляемой бактериями, обращено внимание в обзорах Penninckx, Jaspers (1982) и Penninckx, Eiskens (1993). Восстановление проникающих в клетки оксидантов сопровождается снижением уровня внутриклеточных низкомолекулярных тиолов, в том числе глутатиона (Смирнова и др., 1997). Количество SH-соединений в бактериальных культурах зависит от стадии роста (Смирнова, Октябрьский, 1990).

Во всех известных случаях восстановление теллурита до элементного теллура сопровождается внутриклеточным аккумулированием последнего. Включения теллура хорошо видны под электронным микроскопом как электронно-плотные, напоминающие кристаллы, структуры. Подобные включения так или иначе связаны с цитоплазматической мембраной (Taylor et al, 1988, Lloyd-Jones et al, 1991, 1994, Moore, Kaplan, 1992, 1994, Suzina et al, 1995). Для подтверждения химического состава депозитов используется рентгеновский дисперсионный микроанализ (Moore, Kaplan, 1992, 1994). Количество и размер включений теллура различается у разных видов и при различных условиях культивирования. Самое большое число и наиболее крупные размеры кристаллов теллура отмечены у аэробных фотосинтезирующих бактерий (Yurkov et al, 1996). Так у Erythromicrobium ursincola они могут занимать до 20-30% объема клеток и насчитывать в длину 100-200 нм.

Восстановление оксианионов Те04 и ТеОз2" микробными клетками может не ограничиваться образованием Те0, а проходить и далее. Известно, что культуры Corynebacterium способны выделять летучие метилированные соединения теллура и селена (Alexander, 1972, Doran, Alexander, 1977). Аналогичную способность при культивировании на средах с теллуритом калия проявляют клетки дрожжей Candida humeóla (Сох, 1975) и микромицетов Scopulariopsis brevicaulis и Pénicillium notatum (Wainwright, 1981). Конечным продуктом таких реакций является, в основном, диметилтеллурид (Bachofen, 1994). Восстановление теллурита культурами пурпурных несерных бактерий сопровождается выделением молекулярного водорода (Moore, Kaplan, 1992).

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Соломенный, Александ Петрович

выводы

1. В загрязненных водных экосистемах Пермского промузла с повышенным содержанием органических и минеральных веществ, где в сообществе микроорганизмов 7-40% клеток имеют внутриклеточные гранулы полифосфатов, обнаружены ацинетобактерии, обладающие способностью к детоксикации оксианионов теллура.

2. Два изученных штамма грам-отрицательной бактерии Acinetobacter calcoaceticus в аэробных условиях восстанавливают теллурит (ТеОз2")- и теллурат (Те042")-оксианионы, по-видимому, в основном до элементного теллура и аккумулируют его в виде внутриклеточных включений с окрашиванием биомассы в черный цвет.

3. Способность восстанавливать теллурит является конститутивным признаком штамма A. calcoaceticus IEGM 549. Для данного штамма минимальная ингибирующая концентрация (MIC) по теллуриту калия составляет 8 мкг К2ТеОз-мл"\ Максимальная же аккумуляция внутриклеточного теллура достигается при повышении концентрации оксианиона в среде (~ 100 мкг КгТеОз Мл"1 или 12.5х MIC) . Посредством восстановления теллурита штамм A. calcoaceticus IEGM 549 проводит его эффективную детоксикацию, что дает возможность бактериальной культуре поддерживать жизнеспособность (на 80 %) в присутствии очень высоких концентраций К2Те03 (до 20 х MIC).

4. Максимальная скорость поглощения ионов Те032" регистрируется при их внесении в культуру A. calcoaceticus IEGM 549 в последнюю треть логарифмической фазы роста (до 35-40 мкг ТеОз2" -мг1 бежа за 24 часа). Переход культуры в фазу замедленного роста сопровождается падением скорости поглощения теллурита. Культура в стационарной фазе, когда она представлена в основном кокковидными клетками с гранулами полифосфатов, почти полностью утрачивает способность к его поглощению.

5. Двухвалентные ионы ТеОз2' проникают в клетки АсакоасеИсия ПЮМ 549, конкурируя с анионами ортофосфата (даже при высоких концентрациях последних). Интенсивное поглощение фосфат-ионов, сопровождаемое активным биосинтезом полифосфатов (в частности, при внесении в культуральную среду неростового субстрата - 10 мкг С- глюкозы • мл"1), практически полностью препятствует транспорту анионов теллурита клетками. Ацинетобактерии в логарифмической фазе роста способны расходовать накопленные ранее внутриклеточные полифосфаты даже при высокой скорости поглощения теллурита.

6. В детоксикации/восстановлении теллурита представляется важной роль внутриклеточного глутатиона и других низкомолекулярных тиолов, которые взаимодействуют с ионами Те032*; восстановление теллурита в аэробных условиях ингибируется лишь высокими концентрациями сульфгидрильного реагента И-этилмалеимида. При поглощении теллурита клетками Асакоасейсия ПЮМ 549 происходит достоверное пропорциональное снижение содержания глутатиона.

БЛАГОДАРНОСТИ

Ряд экспериментальных данных, представленных в диссертационной работе, получены в совместных исследованиях с сотрудниками лаборатории промышленной экологии и водной микробиологии ИЭГМ УрО РАН: к.х.н. Козловой Г.А., с.н.с. Банниковой О.М., н.с. Чикиным С.М. и технологом Чураковой Г.А.

Определение содержания глутатиона проводилось в лаборатории физиологии микроорганизмов ИЭГМ УрО РАН (зав. д.б.н. Октябрьский О.Н.) совместно с м.н.с. Музыка Н.Г.

Автор искренне благодарит всех вышеупомянутых лиц.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Фундаментальные работы по трансформации теллурит-ионов были выполнены на грам-отрицательных несерных пурпурных бактериях сем. Rhodospirillaceae, относящихся кайр филогенетическим подгруппам Proteobacteria (Moore, Kaplan, 1992; 1994). Показано, что некоторые представители фотосинтезирующих родоспирилл демонстрируют высокий уровень резистентности к теллуриту (MIC К2Те03 вплоть до 1000 мкг-мл"1). Значение MIC К2Те03 для фотогетеротрофно растущих Rhodobacter sphaeroides повышается примерно в 50 раз при замене менее восстановленного субстрата (ацетат) на более восстановленные (бутират, капроат). При анаэробном фотогетеротрофном росте MIC К2Те03 увеличивается в 2-5 раз, если снижается интенсивность освещения и, как следствие, падает метаболическая активность клеток. Детоксикация поглощенных ионов Те032" бактериями R. sphaeroides происходит посредством их восстановления до элементного "металлического" теллура, который аккумулируется в виде внутриклеточных включений, локализованных либо в цитоплазме, либо на внутренней поверхности цитоплазматической мембраны. Благодаря этому обеспечивается удаление избыточного количества восстановительных эквивалентов, которое особенно обильно образуется при фотогетеротрофном типе обмена.

Основные задачи данного исследования - изучение процессов поглощения, восстановления и аккумулирования теллурит-ионов грам-отрицательными бактериями Acinetobacter calcoaceticus в ходе гетеротрофного роста в аэробных условиях. В отличие от пурпурных несерных бактерий ацинетобактерии относятся к у-подгруппе Proteobacteria. При проведении экспериментальных работ учитывались и известные из научной литературы данные о том, что ряд неорганических оксианионов (например, арсенаты) могут являться фосфатными аналогами, а их токсичность связана с воздействием на сульфгидрильные группы ферментов, важнейших клеточных белков и глутатиона (Илялетдинов, 1984).

В экологическом плане представители рода Acinetobacter характеризуются крайне широким диапазоном сред обитания - от организма животных и человека до олиготрофных грунтовых вод (Bergogne-Berezin et ah, 1994). Оказалось, что из большинства природных и сточных вод Пермского промузла их удобно выделять в накопительные культуры с использованием ацетатсодержащих питательных сред, имеющих слабощелочную реакцию. Предложенный нами метод с внесением К2Те03 в накопительные культуры позволил установить, что способные к детоксикации теллурита ацинетобактерии широко распространены, в частности, на ранних стадиях биологической очистки сточных вод. Поэтому для подробного изучения трансформации ионов ТеОз2" был отобран штамм A.calcoaceticus IEGM 549, выделенный нами из аэротенка БОС г.Перми и депонированный в Региональной профилированной коллекции алканотрофных микроорганизмов ИЭГМ УрО РАН. Хотя данный штамм не показывает высокой резистентности к К2ТеОз (МГС равна 8 мкг мл"1), но величина MIC не зависит от того, выращивались ацинетобактерии на богатой питательной среде (МПА) или на минимальной среде с ацетатом, что принципиально отличает их от R. sphaeroides. В силу этого большинство лабораторных опытов с A.calcoaceticus IEGM 549 было проведено при его культивировании на минеральной среде с ацетатом.

Анализ экспериментального материала показал, что в присутствии теллурит-ионов бактериальные клетки Acalcoaceticus IEGM 549 поглощают их с неожиданно высокой скоростью, характерной лишь для мутантных Те-резистентных штаммов других бактерий. При этом культура не утрачивает своей жизнеспособности и детоксикация поглощаемого теллурита осуществляляется, как и у родоспирилл, в основном посредством восстановления до теллура, аккумулируемого внутри клеток; при контакте с теллуритом биомасса также окрашивается в черный цвет.

Восстановление теллурита клетками A.calcoaceticus IEGM 549 наблюдается также и при низких его концентрациях (« MIC), при концентрациях около MIC этот процесс регистрируется уже через 20-30 мин после внесения ТеОз2" в среду и культура не утрачивает способность к детоксикации оксианиона после многократных пересевов на МПА без теллурита в течение трех лет хранения. Эти данные позволяют полагать, что процесс восстановления Те032~ данным штаммом является конститутивным признаком.

Аэробные хемоорганогетеротрофные культуры A.calcoaceticus с одной стороны, увеличивают эффективность поглощения теллурита только при повышении метаболической активности в период усиления роста. С другой стороны, неростовые субстраты типа глюкозы, окисляемые до органических кислот, препятствуют поглощению клетками теллурит-оксианионов, хотя стимулируют потребление фосфат-анионов и биосинтез внутриклеточных полифосфатов. Этим ацинетобактерии принципиально отличаются от фотогетеротрофов, для которых характерно рекордно высокое значение MIC по теллуриту и очень сильная ее зависимость от степени окисленности/воссгановленности источника углерода: максимальные значения MIC (до 1000 мкг К2ТеОз мл"1) достигаются у них при падении метаболической активности.

Уровень активности поглощения теллурит-ионов и накопления внутриклеточного теллура, кроме существенного влияния концентрации Те032", сильно зависит от стадии роста и возраста культуры, но не зависит от температурных условий в интервале 10-37°С.

Максимальная скорость поглощения теллурита Acalcoaceticus IEGM 549 зарегистрирована при его внесении в культуру в конце логарифмической фазы роста до момента увеличения в популяции доли кокковидных клеток и накопления в них полифосфатов. Переход культуры A.calcoacetícus в стационарную фазу сопровождается замедлением роста в истощаемой среде, при этом начинают интенсивно запасаться внутриклеточные полифосфаты металлов в форме волютиновых гранул (Саралов и др., 1995). При этом снижается способность культуры к поглощению оксианионов теллура, хотя анионы ТеОз2" конкурируют за проникновение в клетку с анионами НРО42", даже при значительном избытке последних в среде. При внесении теллурита в стационарную фазу культура через 1,5-2 ч вообще утрачивает способность к его поглощению при концентрации > MIC.

Зафиксировано достоверное ингибирование транспорта теллурита близкородственными по химической природе теллурат-ионами (Те042), но начиная лишь с 50-кратного молярного их избытка. Не выявлено значимого подавления процесса поглощения Те032" клетками со стороны ингибитора субстратного фосфорилирования.

Достоверный ингибирующий эффект на транспорт теллурита проявляет испытанный нами сульфгидрильный реагент N-этилмалеимид (NEM), причем в сравнительно низких концентрациях (0.1 мМ). Серия проведенных опытов с бактериальной суспензией и гомогенатами клеток Acalcoaceticus IEGM 549, подвергнутых обработке NEM, позволила обратить внимание на важную роль внутриклеточного глутатиона и других низкомолекулярных тиолов в восстановлении теллурита.

В логарифмической фазе культуры A. calcoaceticus значительно повышается уровень внутриклеточного глутатиона и его наибольшее содержание, включая восстановленную форму (GSH), достигается в последнюю треть фазы ускоренного роста и совпадает с максимальной скоростью поглощения и детоксикации оксианионов теллура. Полученные нами данные в экспериментах in vivo и in vitro свидетельствуют в пользу того, что GSH и другие низкомолекулярные тиолы могут принимать непосредственное участие в детоксикации/восстановлении ионов ТеОз2".

Этот и аналогичные процессы детоксикации оксианионов ТеОэ2", Те042", БеОз2" и 8е042", по-видимому, позволяют ацинетобактериям поддерживать жизнеспособность в условиях, токсичных для многих других гетеротрофных прокариот, когда сообщество микроорганизмов в целом подвергается стрессовому воздействию. В итоге, как растущие, так и переживающие культуры А.сакоасеНсиБ способны существовать в геохимических аномалиях или в содержащих теллурит сточных водах промышленных производств, что позволяет считать их перспективными для создания прогрессивных биотехнологических схем совместного удаления органических и минеральных загрязняющих веществ на БОС.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Соломенный, Александ Петрович, 1998 год

ЛИТЕРАТУРА

Ахметов Н.С. Неорганическая химия. КазаньгКХТИ. 1967. С.339-349.

Васильев В.Б., Вавилин В.А. Сбалансированный рост популяции бактериальных клеток на сложном субстрате и формирование бактериального сообщества активного ила //Изв. РАН. Сер. биол. 1992. N 2. С.184-196.

Вредные химические вещества. Неорганические соединения элементов V-VIII групп. Справочник (под общ. ред. В.А.Филова). Л:Химия. 1989. С. 284-297.

Гринберг Т.А., Дерябин В.В., Краснопевцева Н.В. и др. Некоторые свойства полисахарида, синтезируемого культурой Acinetobacter species //Микробиол. журнал. 1987. Т.49. N.4. С.24-30.

Гринберг Т.А., Пирог Т.П., Буклова В.Н., Малашенко Ю.Р. Взаимоотношения микроорганизмов в экзополисахаридобразующей смешанной культуре //Микробиология. 1990. Т.59. N.5. С.797-805.

Гринберг Т.А., Пирог Т.П., Пинчук Г.Э., Буклова В.Н., Малашенко Ю.Р. Изменение состава и свойств экзополисахаридов, синтезируемых Acinetobacter sp. в процессе периодического культивирования //Микробиология. 1994. Т.63. N.6. С.1015-1019.

Грушко Я.М. Вредные неорганические соединения в промышленных сточных водах. Л:Химия. 1979. 160 С.

Жильцова Т.С., Исакова Е.П., Шерова Т.Л. Влияние селена на рост дрожжей рода Candida // Биотехнология. 1993. N. 8. С.13-16.

Израэльсон З.И. Вопросы гигиены труда и профилактики при работе с редкими металлами. М:Медицина. 1973. 304 С.

Илялетдинов А.Н. Микробиологические превращения металлов. А-Ата: Наука. 1984.268 С.

Илялетдинов А.Н., Алиева P.M. Микробиология и биотехнология очистки промышленных сточных вод. А-Ата:Гылым. 1990.224 С.

Юпошникова Т.М., Смирнова Г.Ф., Касаткина Т.П. Бактерии, восстанавливающие соединения хлора //Микробиол. журнал. 1994.Т.56. N. 1. С.64.

Коронелли Т.В., Ильинский В.В., Янушка В.А., Красникова Т.И. Углеводородокисляющая микрофлора акваторий Балтийского моря и Куршского залива, загрязненных при разливе мазута //Микробиология. 1987. Т.56. N. 3. С.472-478.

Коронелли Т.В., Дермичева С.Г., Коротаева Е.В. Выживаемость углеводородокисляющих бактерий в условиях полного голодания //Микробиология. 1988. Т.57. N. 2. С.298-302.

Коронелли Т.В., Дермичева С.Г., Ильинский В.В., Комарова Т.И., Поршнева О.В. Видовая структура углеводородокисляющих бактерио-ценозов водных экосистем разных климатических зон //Микробиология. 1994. T.63.N. 5. С.917-923.

Коронелли Т.В. Принципы и методы интенсификации биологического разрушения углеводородов в окружающей среде (Обзор) //Приклад, биохим. микробиол. 1996. Т.32. N. 6. С.579-585.

Кудрявцев A.A. Химия и технология селена и теллура. М:Металлургия. 1968. 340 С.

Кулаев И.С. Биохимия высокомолекулярных полифосфатов. М: МГУ. 1975. 247 С.

Лурье Ю.Ю. Аналитическая химия промышленных сточных вод. МгХимия. 1984.447 С.

Малашенко Ю.Р., Пирог Т.П., Гринберг Т.А., Пинчук Г.Э. Регуляция синтеза экзополисахаридов Acinetobacter sp. на среде с этанолом //Микробиол. журнал. 1993. Т.55. N. 2. С. 35-41.

Методы общей микробиологии. Т.1. М.Мир. 1983. С.297-298.

Морщакова Г.Н., Биттеева М.Б., Тюрин B.C., Капотина Л.Н., Лысенко А.М., Никитин Д.И., Мурзаков Б.Г. Аэробные коккобациллы, выделенные из почв нефтеносных районов //Микробиология. 1994. Т.63. N. 1. С.90-99.

Назаренко И.И., Ермаков А.Н. Аналитическая химия селена и теллура. М:Наука. 1971.252 С.

Некрасов Б.В. Основы общей химии. М:Химия. 1974. С. 357-358.

Несбитт Д.Б. Фосфор и обработка сточных вод If Фосфор в окружающей среде. М: Мир. 1977. С.706-727.

Овчинников А.М. Гидрогеохимия. М:Недра. 1970.200 С.

Петрухин В.А. Мониторинг фонового загрязнения природных сред (вып. 1). Л:ЛГУ. 1982. С.147-165.

Пименов Е.В., Дармов И.В., Погорельский И.П., Янов С.Н., Куликов O.A., Калиниченко В.Б. Выделение и характеристика штаммов бактерий, резистентных к соединениям мышьяка //Микробиология. 1996. Т.65. N. 2. С.214-218.

Пирог Т.П., Гринберг Т.А., Пинчук Г.Э., Сенченкова С.Н., Малашенко Ю.Р. Разделение экзополисахаридов, синтезируемых Acinetobacter sp. на ацилированный и неацилированный компоненты //Микробиология. 1994. Т.63. N. 5. С.840-846.

Пирог Т.П., Гринберг Т. А., Малашенко Ю.Р. Выделение микроорганизмов-продуцентов ферментов, деградирующих экзополи-сахарид Acinetobacter sp. //Приклад, биохим. микробиол. 1997. Т.ЗЗ. N. 5. С.550-555.

Практикум по микробиологии (Под ред. проф. Н.С.Егорова). М: МГУ. 1976. 308 С.

Ременников В.Г., Самуилов В.Д. Нециклический перенос электронов и генерация мембранного потенциала в хроматофорах Rhodospirillum rubrum // Биол. науки. 1979а. N. 5. С.45-52.

Ременников В.Г., Самуилов В.Д. Генерация мембранного потенциала при функционировании полной и сокращенной систем циклического

переноса электронов в хроматофорах Rhodospirillum rubrum // Биол. науки. 19796. N. 10. С. 24-29.

Ременников В.Г., Самуилов В.Д. Циклический перенос электронов и образование мембранного потенциала в хроматофорах несерной пурпурной бактерии Rhodospirillum rubrum //Биохимия. 1980. Т.45. С.1298-1304.

СараловАЛ, Бердичевская М.В., Банникова О.М., ЧикинС.М. Накопление полифосфатов в начальной фазе роста Acinetobacter calcoaceticus и Rhodococcus maris // Микробиология. 1995. Т.64. N. 5. С.446-452.

Смирнова Г.В., Октябрьский О.Н. Изменение количества SH-соединений в культурахЕ.coli при переходе в стационарную фазу //Микробиология. 1990. T.59.N3. С.387-393.

Смирнова Г.В., Музыка Н.Г., Глуховченко М.Н., Октябрьский О.Н. Отклик Escherichia coli на действие проникающего и непроникающего оксидантов //Биохимия. 1997. Т.62. N 5. С. 563-568.

Тер-Казарьян С.Ш. Словарь-справочник современных научных названий бактерий (по состоянию на 1 января 1989 г.). 4.1. Ереван: Айастан. 1989.

Хендерсон П. Неорганическая геохимия. М:Недра. 1985. 339 С. Alexander М. Microbial degradation of pesticides //Environmental Toxicology of Pesticides. New York:Acad.Press. 1972. P.365-384.

Amann R.J., Ludwig W., Schleifer K.-H. Phylogenetic identification and in situ detection of individual microbial cells without cultivation //Microbiol. Rev. V.59.N 1. P.143-169.

Atlas R.M. Handbook of microbiological media (Ed. L.C.Parks). CRC Press. 1993.1080 P.

Avazeri C., Turner R.J., Pommier J., Weiner J.H., Giordano G., Vermeglio A. Tellurite reductase activity of nitrate reductase is responsible for the basal

resistance oí Escherichia coli to tellurite //Microbiology. 1997. V.143. P.1181-1189.

Ayats J., Domínguez M.A., Ardanuy C., Tubau F., Corbella X., Perez P., Ariza J., Linares J. Molecular characterization of multiresistant Acinetobacter baumannii strains isolated in a spanish hospital (1992-1996) II Proc. 4th Int. Symp. on the Biology of Acinetobacter. Eilat. 1996. N 5.

Bachofen R. Biogeochemische Zyklen, Mikroorganismen und atmosphärische Spurengase //Vierteljahresschr. Naturforsch. Ges. Zurich. 1994. V. 139. N 1. S.15-22.

Baginski R., Seifert H., Pulverer G. Distribution oi Acinetobacter species in soil and water samples //Proc. 3rd Int. Symp. on the Biology of Acinetobacter. Edinburgh. 1994. N43.

Baldi F. Microbial transformation of metals in relation to the biogeochemical cycle // Chemistry of Aquatic Systems: Local and Global Perspectives (Eds. G. Bidoglio, W.Stumm). ECSC, EEC, EAEC: Brussels and Luxemburg. 1994. P.121-152.

Baumann P., Doudoroff M., Starrier R.Y. A study of the Moraxella Group. II. Oxidative-negative Species (Genus Acinetobacter). II J.Bacteriol. 1968. V.95. P.1520-1541.

Bergogne-Berezin E., Joly-Guillou M.L., Towner K.J. Acinetobacter. Microbiology, Epidemiology, Infections, Management. London.CRC Press. 1996. 288 P.

Bonting C.F.C., Kortstee C.-J. J., Bockstein A., Zehnder A.J.B. The elemental composition dynamics of large polyphosphate granules in Acinetobacter strain 21 OA//Arch. Microbiol. 1993. V.159. N 5. P. 428-434.

Bouvet P.J.M., Grimont P.A.D. Taxonomy of the genus Acinetobacter with recognition of Acinetobacter baumannii sp.nov., Acinetobacter haemolyticus sp.nov., Acinetobacter johnsonii sp.nov. and Acinetobacter Junnii sp.nov.

Emended descriptions of Acinetobacter calcoaceticus and Acinetobacter Iwoffîi // Intern. J. SystBacteriol. 1986. V.36. P.228-240.

Bradley D.E. Detection of tellurite-resistance determinants in IncP plasmids //J.Gen.Microbiol. 1985. V.131. P.3135-3137.

Brown T.A., Smith D.G. The reduction of tellurate and tellurite by Cryptococcus albidus //Microbios Lett. 1978. V.7. N 27-28. P.121-125.

Bryan R., Laisley E J. Evidence for two transporters for sulfur and selenium oxydations in Clostridium pasteurianum //Can.J.Microbiol. 1988. V.34. P.700-703.

Buchanan B.B., Bucher J.J., Carlson D.E., Edelstein N.M., Hudson E.A., Kaltsoyannis N. et al A XANES and EXAFS investigation of the speciation of selenite following bacterial metabolization //Forschungszent. Rossendorf-Berlin. 1995. N94. P.79-80.

Carlin A., Shi W., Dey S., Rosen B.P. The ars operon of Escherichia coli confers arsenical and antimonial resistance //J.Bacteriol. 1995. V.177. P.981-986.

Challenger F. Biological methylation //Adv. Enzymol. 1951. V.7. N 12. P.429-491.

Chen C.-M., Misra T.K., Silver S., Rosen B.P. Nucleotide sequence of the structural genes for an anion pump. The plasmid-encoded arsenical resistance operon//J.Biol.Chem. 1986. V.261. P. 15030-15038.

Chiong M., Gonzalez E., Barra R., Vasquez C. Purification and biochemical characterization of tellurite-reducing activities from Thermus thermophilus HB8 //J.Bacteriol. 1988. V.170. P.3269-3273.

Christensson M., Blackall L.L., Welander T. Metabolic transformation and characterisation of the sludge community in an enhanced biological phosphorus removal system //Appl.Microbiol.Biotechnol. V.49. P.226-234.

Comeau Y. La dephosphatation biologique metabolisme microbien //Sei. et Techn. EAU. 1990. V.23. N 1. P.47-60.

Cooper W.C. Tellurium. New York:Van Nostrand Reinhold Co. 1971.

Cournoyer B., Watanabe S., Vivian A. A tellurite-resistance genetic determinant from phytopathogenic pseudomonads encodes a thiopurine methyltransferase: evidence of a widely-conserved family of methyltransferases //Biochim. Biophys. Acta. 1998. V.1397. P.161-168.

Cox D.P. Microbial methylation of arsenic //Arsenical Pesticides. (Ed. E.A.Woolson). Washington:ASM Press. 1975. P.81-96.

Crewe-Brown H.H., Saunders G.L., Lipman J., Klugman K.P. Invasive Acinetobacter baumannii infection at Baragwanath hospital, Soweto, South Africa // Proc. 4th Int. Symp. on the Biology of Acinetobacter. Eilat. 1996. N 16.

Cullen W.R., Reimer K.J. Arsenic speciation in tne environment //Chem. Rev. 1989. V.89. P.713-764.

Czauderna M., Turska M., Sierakowska S., Smolinski S. Use of INAA to study the interaction between Se and Te in cells of Saccharomyces serevisiae //Appl. Radiat. Isotop. 1996. V.47. N 2. P.153-157.

Deinema M.H., Van Loosdrecht M., Scholten A. Some physiological characteristics of Acinetobacter spp. accumulating large amounts of phosphate //Water Sci. Technol. 1985. V. 17. P.l 19-125.

Doran J.W., Alexander M. Microbial transformations of selenium //Appl.Environ.Microbiol. 1977. V.33. P.31-37.

Dowdle P.R., Laverman A.M., Gremland R.S. Bacterial dissimilatory reduction of arsenic (V) to arsenic (III) in anoxic sediments //Appl. Environ. Microbiol. 1996. V.62. P.1664-1669.

Fahey R.C., Brown W.C., Adams W.B., Worham M.B. Occurence of glutathione in bacteria//J.Bacteriol. 1978. V.133. P.l 126-1129.

Fulthorpe R.R., Liss S.N., Allen D.G. Characterization of bacteria isolated from a bleched kraft pulp mill wastewater treatment system //Can. J. Microbiol. 1993. V. 39. P. 13-24.

Gadd G.M., White C. Microbial treatment of metal pollution - a working biotechnology? //Trends Biotechnol. V.l 1. P.353-359.

Garcia Arata MX, Gerner-Smidt P., Jimenez M.L., Rodriguez-Salvanes F., Sobrino P., Lopez-Brea M. Risk factors for nosocomial Acinetobacter calcoaceticus-A. baumannii complex colonization/infection // Proc. 4th Int. Symp. on the Biology of Acinetobacter. Eilat. 1996. N 13.

Gharieb M.M., Gadd G.M. Evidence for the involvement of vacuolar activity in metal(loid) tolerance: vacuolar-lacking and -defective mutants of Saccharomyces cerevisiae display higher sensitivity to chromate, tellurite and selenite //Biometals. 1998. V.11.N2. P.101-106.

Goldstein A.H. Bacterial mineral phosphate solubilization: historical perspectives and future prospects //Am. J. Alternat. Agric. 1986. V.l. P.57-65.

Goldstein A.H., Rogers R.D., Mead G. Mining by microbe //Bio/Technology. 1993. V.ll.P.1250-1254.

Goldstein A.H. Involvement of the quinoprotein glucose dehydrogenase in the solubilization of exogenous mineral phosphates by gram-negative bacteria // Phosphate in Microorganisms. (Eds. A. Torriani-Gorini, E.Yagil and S.Silver). Washington:ASM Press. 1994. P.197-203.

Gottschal J.C., Dijkuhuizen I. The place of continuous culture in ecological research // CRC Handbook of laboratory model systems for microbial ecosystems (Ed. W.T.Wimpenny). Boca Raton:CRC Press. 1988. P.19-49.

Grinberg T.A., Senchenkova S.N. A new species of the genus Acinetobacter producing exopolysaccharide ethapolan from ethanol I I Proc. 4th Int. Symp. on the Biology of Acinetobacter. Eilat. 1996. N 26.

Grinberg T.A., Pirog T.P., Malashenko Y.R. Ethapolan produced by Acinetobacter sp. nov. As a perspective exopolysaccharide for industrial application // Proc. 4th Int. Symp. on the Biology of Acinetobacter. Eilat. 1996. N 27.

Harada K., Kimura R., Iwami M. Studies on the synergistic killing effect of high LET radiation and hyperthermia in Deinococcus radiodurans //KURRI Progr. Rept. (1991). Osaka. 1993. P.230-231.

Harold F.M. Inorganic polyphosphates in biology: structure, metabolism and function //Bacterid. Rev. 1966. V.30. P.772-794.

Hill S.M., Jobling M.G., Lloyd B.H., Strike P., Ritchie D.A. Functional expression of the tellurite resistance determinant from the IncHI-2 plasmid pMER610 //Mol. Gen. Genet. 1993. V.241. P.203-212.

Humphreys H., Webster C., Towner K.J. The survival of Acinetobacter on clinical surfaces //Proc. 4th Int. Symp. on the Biology of Acinetobacter. Eilat. 1996. N17.

James G.A., Korber D.R., Caldwell D.E., Costerton J.W. Digital image analysis of growth and starvation responses of a surface-colonizing Acinetobacter sp. //¿Bacterid. 1995. V.177. N4. P.907-915.

Jobling M.G., Ritchie D.A. Genetic and physical analysis of plasmid genes expressing inducible resistance to tellurite in Escherichia coli //Mol. Gen. Genet. 1987. V.208. P.288-293.

Jobling M.G., Ritchie D.A. The nucleotide sequence of a plasmid determinant for resistance to tellurium anions //Gene. 1988. V.66. P.245-258.

Jones C.W. Bioenergetics of aerobic bacteria //Proc. 8th Int. Biotechnol. Symp. Paris. 1988. P.43-55.

Jorgensen K.S., Pauli A.S.L. Polyphosphate accumulation among denitrifying bacteria in activated sludge //Anaerobe. 1995. V.l. P. 161-168.

Kampfer P., Wagner M., Amann R. Characterization of bacterial communities in wastewater from a treatment plant showing enchanced phosphorus removal with emphasis on the genus Acinetobacter - numerical identification (culture-dependent) versus in-situ detection ///Proc. 3rd Int. Symp. on the Biology of Acinetobacter. Edinburgh. 1994a. N35.

Kampfer P., Weltin-Sadigh D., Hoffineister D., Dott W. Phosphorus uptake and release ahd poly-hydroxy fatty acid (PHF) storage by Acinetobacter isolates from a treatment plant showing enchanced phosphorus removal ///Proc. 3rd Int. Symp. on the Biology of Acinetobacter. Edinburgh. 1994b. N 36.

Kaur P., Rosen B.P. Piasmid-encoded resistance to arsenic and antimony //Plasmid. 1992. V.27. P.2940.

Kinkle B.K., Sadowsky M.J., Johnstone K., Koskinen W.C. Tellurium and selenium resistance in rhizobia and its potential use for direct isolation of Rhizobium meliloti from soil //Appl.Environ.Microbiol. 1994. V.60. P.1674-1677.

Klevay L.M. Pharmacology and toxicology of heavy metals: tellurium //Pharmacol.Ther. 1976. V.l. P.223-229.

Knight G.C., Seviour R.J., Soddell J.A., McDonnell S.M., Bayly R.C. Production of polyphosphate and poly-p-hydroxybutyrate by Acinetobacter isolates from activated sludge

//Proc. 3rd Int. Symp. on the Biology of Acinetobacter. Edinburgh. 1994. N 34.

Kulaev I.S. The physiological role of inorganic polyphosphates in microorganisms: some evolutionary aspects //Novel Biodegradable Microbial Polymers (Ed. E.A.Dawes). Dordrecht:Kluywer Acad.Publ. 1990. P.223-233.

Kulaev I.S., Vagabov V.M. Polyphosphate metabolism in microorganisms //Adv. Microbiol. Physiol. 1983. V.24. P.81-171.

Laverman A.M., Blum J.S., Schaefer J.K., Phillips E.J.P., Lovley D.R., Oremland R.S. Growth of strain SES-3 with arsenate and other diverse electron acceptors//Appl. Environ. Microbiol. 1995. V.61. P.3556-3561.

Lawrence J.R., Korber D.R. Aspects of microbial surface colonization behavior //Trends in microbial ecology (Eds. R.Guerrero and C.Pedros-Alio). Spanish Soc. Microbiol. Barcelona. 1993. P. 113-118.

Levin G.V., Topol G.J., Tarnay A.G., Samworth R.R. Pilot plant tests of a phosphate removal process //J.Water. Pollut. Control. Fed. 1972. V.44. P. 19401954.

Lloid-Jones G.D., Ritchie D.A., Strike P. Biochemical and biophysical analysis of plasmid pMJ600-encoded tellurite (Te032") resistance //FEMS Microbiol.Lett. 1991. V.81. P.19-24.

Lloid-Jones G.D., Osborn A.M., Ritchie D.A., Strike P., Hobman J.L., Brown N.I., Rouch D.A. Accumulation and intracellular fate of tellurite in tellurite-resistant Escherichia colt a model for the mechanism of resistance //FEMS Microbiol.Lett 1994. V.118. P.l 13-120.

Losi M.E., Frankenberger W.T. reduction of selenium oxyanions by Enterobacter cloacae SLDla-1: isolation and growth of the bacterium and its expulsion of selenium particles //Appl.Environ.Microbiol. 1997. V.63. P.3079-3084.

Lovley D.R. Dissimilatory metal reduction //Annu. Rev. Microbiol. 1993. V.47. P.263-290.

Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.R., Randall R. Protein measurement with the Folin-Phenol reagent //Biol. Chem. 1951. V.193. P.263-275.

MacCormack W.P., Fraile E.R. Characterization of a hydrocarbon degrading psychrotrophic Antarctic bacterium //Antarct.Sci. 1997. V.9. N 2. P. 150-155.

Moore M.D., Kaplan S. Identification of intrinsic high-level resistance to rare-earth oxides and oxyanions in members of the class Proteobacteria: characterization of tellurite, selenite, and rhodium sesquioxide reduction in Rhodobacter sphaeroides //J.Bacteriol. 1992. V.174. P. 1505-1514.

Moore M.D., Kaplan S. Members of the family Rhodospirillaceae reduce heavy-metal oxyanions to maintain redox poise during photosynthetic growth //ASM News. 1994. V.60. N 1. P.17-23.

Mueller S., Loeshe A., Bley Th., Babel W. Flow cytometric characterization of Acinetobacter calcoaceticus cell cycle and an approach for measuring membrane potential changes //Proc. 3rd Int. Symp. on the Biology of Acinetobacter. Edinburgh. 1994. N 39.

Navonvenezia S., Zosim Z., Gottlieb A., Legmann R., Carmeli S., Ron E.Z., Rosenberg E. Alasan, a new bioemulsifier from Acinetobacter radioresistens //Appl. Environ.Microbiol. 1995. V.61. P.3240-3244.

Nelson C.H., Robinson J.A., Characklis W.G. Bacterial adsorption to smooth surfaces: rate, extent and spatial pattern //Biotechnol.Bioeng. V.27. P. 1662-1667.

O Gara J.P., Gomelsky M., Kaplan S. Identification and molecular genetic analysis of multiple loci contributing to high-level resistance to tellurite in Rhodobacter sphaeroides 2.4.1. //Appl.Environ.Microbiol. 1997. V.63. P.4713-4720.

Oremland R.S. Biogeochemical transformations of selenium in anoxic environments //Selenium in the Environment (Eds. W.T.Frankenberger, Jr., S.Benson). New York:Marcel Dekker Inc. 1994. P.389-419.

Penninckx M.J., Jaspers C.J. On the role of glutathione in microorganisms //Bull. Inst. Pasteur. 1982. V.80. P.291-301.

Penninckx M.J., Elskens M.T. Metabolism and functions of glutathione in micro-organisms //Adv. Microb. Physiol. 1993. V.34. P.239-301.

Perez-Ramos S., Jesus de la Calle I., Rodríguez-Iglesias M.A., Roldan C., Torreira B. Antimicrobial susceptibility of Acmetobacter sp. isolated from hospitalized and community patients in a Spanisn university hospital //Proc. 3rd Int. Symp. on the Biology oí Acmetobacter. Edinburgh. 1994. N 14.

Qin Ye, Hisao O., Kiyoshi T. Phosphorus removal by pure and mixed cultures of microorganisms //J.Ferment.Technol. 1988. V.66. N 2. P.207-212.

Rosen B.P., Weigel U., Karkaria C., Gangola P. Molecular characterization of an anion pump. The arsA gene product is an arsenite (antimonite)-stimulated ATPase //J.Biol.Chem. 1988. V.263. P.3067-3070.

Rosen B.P., Silver S., Gladysheva T.B., Ji G., Oden C.L., Jagannathan S., Shi W., Chen Y., Wu J. The arsenite oxyanion-translocating ATPase: bioenergetics, functions, and regulation //Phosphate in Microorganisms. (Eds. A. Torriani-Gorini, E.Yagil and S.Silver). Washington:ASM Press. 1994. P.97-108.

Sakai Y., Maeng Jun Ho, Tani Y., Kato N. Use of long-chain n-alkanes (CI3-C44) by an isolate, Acinetobacter sp. M-l //Biosci. Biotechnol. Biochem. 1994. V.58. N 11. P.2128-2130.

Seifert H., Pelzer N., Dijkshoorn L., Geraer-Smidt P., Tjernberg I., Vaneechoutte The distribution of Acinetobacter species on human skin: comparison of phenotypic and genotypic identification methods // Proc. 4th Int. Symp. on the Biology of Acinetobacter. Eilat. 1996. N 1.

Silver S., Phung Le T. Bacterial heavy metal resistance: new surprises //Annu. Rev. Microbiol. 1996. V.50. P.753-789.

Smith D.G. Tellurite reduction in Schizosaccharomyces pombe //J.Gen.Microbiol. 1974. V.83. N 2. P.389-392.

Stanier R.Y., Palleroni N.J., Doudoroff M. The aerobic pseudomonads: a taxonomic study//J.Gen.Microbiol. 1966. V.43. P. 159-271.

Summers A.O., Silver S. Microbial transformation of metals //Annu. Rev. Microbiol. 1978. V.32. P.637-672.

Summers A.O., Jacoby G.A. Plasmid-determined resistance to tellurium compounds//J.Bacteriol. 1977. V.129. P. 276-281.

Suzina N.E., Duda V.I., Anisimova L.A., Dmitriev V.V., Borovin A.M. Cytological aspects of resistance to potassium tellurite confirmed on Pseudomonas cells by plasmids //Arch.Microbiol. 1995. V.163. P.282-285.

Taylor D.E., Summers A.O. Association of tellurium resistance and bacteriophage inhibition conferred by R plasmids //J.Bacteriol. 1979. V.139. P. 1430-1433.

Taylor D.E., Walter E.G., Sherburne R., Bazett-Jones D.P. Structure and location of tellurium deposited in Escherichia coli cells harboring tellurite resistance plasmids //J.Ultrastruct. Mol. Struct. Res. 1988. V.99. P.18-26.

Taylor D.E. Bacterial resistance to tellurium compounds //Proc. 5th Int. Symp. on Uses of Selenium and Tellurium. Brussels. 1994. P.331-334.

Taylor D.E., Turner R.J., Weiner J.H. Plasmid-mediated resistance to potassium tellurite in gram-negative bacteria // Proc. 5th Int. Symp. on Uses of Selenium and Tellurium. Brussels. 1994a. P.329-330.

Terai T., Kamahora T., Yamamura Y. Tellurite reductase from Mycobacterium avium //J.Bacteriol. 1958. V.75. P.535-539.

Tietze F. Enzymic method for quantitative determination of nanogram amounts of total and oxidized glutathione. Application to mammalian blood and other tissues//Anal.Biochem. 1969. V.27. P.502-522.

Tomas J.M., Kay W.W. Tellurite susceptibility and non-plasmid-mediated resistance in Escherichia coli //Antimicrob. Agents Chemother. 1986. V.30. P. 127131.

Turner R.J., Hou Y., Weiner J.H., Taylor D.E. The arsenical ATPase efflux pump mediates tellurite resistance//J.Bacteriol. 1992a. V.174. P.3092-3094.

Turner R.J., Weiner J.H., Taylor D.E. Use of diethyldithiocarbamate for quantitative determination of tellurite uptake by bacteria //Anal. Biochem. 1992b. V.204. P.292-295.

Turner R.J., Weiner J.H., Taylor D.E. Utility of plasmid borne tellurite resistance determinants for the bio-recovery of tellurium //Biorecovery. 1994a. V.2. P.221-225.

Turner R.J., Weiner J.H., Taylor D.E. In vivo complementation and site-specific mutagenesis of the tellurite resistance determinant kilAtelAB from IncPa plasmid RK2Ter//Microbiology. 1994b. V.140. P.1319-1326.

Turner R.J., Weiner J.H., Taylor D.E. The tellurite-resistance determinants tehAtehB and klaAklaBtelB have different biochemical requirements //Microbiology. 1995. V.141. P.3133-3140.

Turner R.J., Taylor D.E., Weiner J.H. Expression of E.coli tehA gives resistance to antiseptics and desinfectants similar to that conferred by multidrug resistance efflux pumps //Antimicrob. Agents Chemother. 1997. V.41. P.440-444.

Van Veen H.W., Abee T., Kortstee G.J.J., Konings W.N., Zehnder A.J.B. Characterization of two phosphate systems in Acinetobacter johnsonii 21 OA //J.Bacteriol. 1993a. V.175. P.200-206.

Van Veen H.W., Abee T„ Kortstee G.J.J., Konings W.N., Zehnder A.J.B. Mechanism and energetics of the secondary phosphate transport system of Acinetobacter johnsonii 21 OA //J.Biol.Chem. 1993b. V.268. P. 19377-19383.

Van Veen H.W., Abee T., Kortstee G.J.J., Zehnder A.J.B. Phosphate inorganic transport (Pit) system in Escherichia coli and Acinetobacter johnsonii I I Phosphate in Microorganisms. (Eds. A. Torriani-Gorini, E.Yagil and S.Silver). Washington:ASM Press. 1994a. P.43-49.

Van Veen H.W., Abee T., Kortstee G.J.J., Konings W.N., Zehnder A.J.B. Substrate specificity of the two phosphate transport systems of Acinetobacter johnsonii 21 OA in relation to Pi speciation in its aquatic environment //J.Biol.Chem. 1994b. V.269. P.16212-16216.

Vasudevan N., Mahadevan A. Degradation of indulin by Acinetobacter sp. /¡Ind. J. Exp. Biol. V.31.N 3. P.252-255.

Vilchez G., Alonso G., Lemoine V.R. Cloning of the PacB-Te-r region from plasmid Mip233 (IncHI3) and their expression in E.coli ton, tol mutants //Zentralbl. Bacteriol. 1997. V.286. P.l-8

Wackett L.P., Horme-Johnson W.H., Walsh C.T. Transition metal enzymes in bacterial metabolism // Metal ions and bacteria (Eds. T.J.Beveridge, R.J.Doyle). New York:Wiley Interscience. 1989. P. 165-206.

Wainwright M. Mineral transformations by fungi in culture and in soils HZ. Pflanzen. Boden. 1981. V.144. P.41-63.

Walter E.G., Taylor D.E. Comparison of tellurite resistance determinants from the IncPa plasmid RP4Ter and the IncHII plasmid r HH1508a //J.Bacteriol. 1989. V.171. P.2160-2165.

Walter E.G., Weiner J.H., Taylor D.E. Nucleotide sequence and overexpression of the tellurite resistance determinant from the IncHII plasmid pHHl508a//Gene. 1991a. V.101. P.l-7.

Walter E.G., Thomas C.M., Ibbotson J.P., Taylor D.E. Transcriptional analysis, translational analysis and sequence of the kilA-tellurite resistance region of plasmid RK2TeR//¿Bacterid. 1991b. V.173. P.l 111-1119.

Walter E.G., Taylor D.E. Plasmid-mediated resistance to tellurite: expressed and cryptic //Plasmid. 1992. V.27. P.52-64.

Whelan K.F., Sherburne R.K., Taylor D.E. Characterization of a region of the IncHI2 plasmid R478 which protect E.coli from toxic effects specified by components of the tellurite, phage and colicin resistance cluster //J.Bacteriol. 1997. V.179. P.63-71.

Wood J.M. Biological cycles for toxic elements in the environment //Science. 1974. V.4129. P. 1049-1052.

Wood J.M. Selected biochemical reactions of environmental significance //Chemica Scripta. 1983. V.21. P.155-160.

Woolfolk C.A., Ordal E.J., Whiteley H.R. The reduction of arsenate and other inorganic compounds by Micrococcus lactilyticus //Bacteriol.Proc. 1959. P.l 16.

Woolfolk C.A., Whiteley H.R. Further studies on the reduction of inorganic compounds by Micrococcus lactilyticus //Bacteriol.Proc. 1961. P. 173.

Woolfolk C.A., Whiteley H.R. Reduction of inorganic compounds with molecular hydrogen by Micrococcus lactilyticus //J.Bacteriol. 1962. V.84. P.647-650.

Yanke L.J., Bryant R.D., Laishley E.J. Hydrogenase I of Clostridium pasterianum functions as a novel selenite reductase //Anaerobe. 1995. V.l. P.61-67.

Yashpe J., Chikarmane H., Iranzo M., Halvorson H.O. Inorganic phosphate transport in Acinetobacter Iwoffi //Curr. Microbiol. 1992. V.24. P. 275-280.

Yurieva O.V., Kholodii G.Ya., Gorlenko Zh.M., Mindlin S.Z., Nikiforov V.G. Mer operons and IS26-like insertion sequences in environmental

Acinetobacter strains //Proc. 3rd Int. Symp. on the Biology of Acinetobacter. Edinburgh. 1994. N42.

Yurkov V., Jappe J., Vermeglio A. Tellurite resistance and reduction by obligately aerobic photosynthtetic bacteria //Appl. Environ. Microbiol. 1996. V.62. P.4195-4198.

Zhou Y., Qian Yi, Gu X. The investigation of the mechanism of biological phosphorus removal from waste-waters // China Environ. Sci. 1993. V.13. N 3. P. 180-184.

Zohri A.A., Saber S.M., Mostafa M.E. Effect of selenite and tellurite on the morphological growth and toxin production of Aspergillus parasiticus var. globosus JMJ120920 //Mycopathologia. 1997. V.139. P.51-57.