Трансформация картофеля и табака генами дефензинов и ингибитора протеиназ BWI-1a тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Чередниченко, Михаил Юрьевич

• Чередниченко, Михаил Юрьевич
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Чередниченко, Михаил Юрьевич

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Ингибиторы протеиназ растений

1.1.1. Протеолитические ферменты

1.1.2. Ингибиторы протеиназ растений

1.1.2.1. Локализация и индукция действия ингибиторов протеиназ растений

1.1.2.2. Участие ингибиторов протеиназ в регуляции активности внутриклеточных ферментов растений

1.1.3. Ингибиторы протеиназ в системе защиты растений от биотических стрессов

1.1.3.1. Ингибиторы протеиназ в системе защиты растений от насекомых

1.1.3.2. Ингибиторы протеиназ в системе защиты растений от патогенных микроорганизмов

1.2. Дефензины растений

1.2.1. Структура дефензинов растений

1.2.2. Локализация и предполагаемый механизм действия дефензинов растений

1.2.3. Классификация дефензинов растений

1.2.4. Фунгицидная активность дефензинов растений

1.2.5. Бактерицидная активность дефензинов растений

1.2.6. Вклад дефензинов в защиту растения-хозяина

1.3. Болезни картофеля

1.4. Генетическая инженерия картофеля

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Растительный материал

2.2. Векторные конструкции

2.3. Культивирование эксплантов in vitro

2.4. Методика проведения трансформации растений картофеля и табака

2.5. Молекулярный анализ полученных трансформированных линий картофеля и табака

2.6. Определение суммы растворимых фенольных соединений, накопления флавоноидов и лигнина

2.7. Статистическая обработка данных

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Зависимость эффективности регенерации от генотипа выбранных сортов картофеля и условий проведения трансформации

3.1.1. Морфогенетическая способность in vitro различных сортов картофеля

3.1.2. Определение оптимальной концентрации антибиотиков при проведении агробактериальной трансформации картофеля и табака

3.1.3. Влияние условий проведения трансформации картофеля и табака на эффективность последующей регенерации

3.2. Трансформация картофеля и табака конструкциями, содержащими гены фунгицидных белков

3.3. Молекулярно-биологический анализ полученных трансформированных линий картофеля и табака

3.3.1. ПЦР-анализ трансформированных линий картофеля и табака

3.3.2. Блот-гибридизация по Саузерну

3.3.3. Проверка фунгицидной и бактерицидной активности клеток полученных трансгенных линий картофеля и табака

3.3.4. Анализ экспрессии функциональных генов rs и 1р в клетках трансгенных линий (уровень мРНК)

3.3.5. Анализ содержания фенольных соединений в трансгенных растениях картофеля

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Трансформация картофеля и табака генами дефензинов и ингибитора протеиназ BWI-1a»

Картофель (Solarium tuberosum L.) является одной из ведущих сельскохозяйственных культур как в нашей стране, так и во всем мире. Пищевая и кормовая ценность картофеля определяется тем, что его клубни содержат около 25 % сухих веществ (крахмала 14-22 %, белков 1,5-3 %). Картофель служит сырьем для спиртокуренной, крахмалопаточной, декстриновой, глюкозной и других отраслей промышленности. Эта культура — хороший предшественник для зерновых, кукурузы и зернобобовых. Однако многие из районированных сортов не обладают устойчивостью к вирусным, бактериальным и грибным патогенам (Анисимов, 1999, 2000, 2001). Потери урожая от болезней в период вегетации и хранения составляют 25-30 %, а в годы эпифитотий - до 90 %.

Требования сельскохозяйственного производства к продуктивности и качеству сортов различных культур, в том числе картофеля, устойчивости их к болезням и вредителям постоянно растут. У картофеля, как вегетативно размножаемой культуры, вводимые тем или иным способом признаки закрепляются в репродукциях из-за отсутствия мейоза, который отсекает значительную долю индуцированной вариабельности на культурах, размножаемых половым путем. Тем не менее селекция картофеля на устойчивость к биотическому стрессу — трудная задача из-за тетраплоидной природы культурного картофеля и его сильной гетерозиготности.

Создание растений картофеля, устойчивых к биотическим стрессам, постоянно остается актуальной проблемой. Однако традиционными селекционными методами не всегда возможно в достаточно короткие сроки решить такую задачу. Эффективным способом ускорения селекционного процесса может служить использование возможностей биотехнологии, в частности клеточной и генетической инженерии, для создания устойчивых к болезням и вредителям сортов. Линии, полученные с помощью клеточной селекции или клеточной инженерии, а также трансгенные линии важных сельскохозяйственных культур, обладающие хозяйственно-ценными признаками, в том числе устойчивостью к абиотическим и биотическим стрессам, могут служить исходным материалом для дальнейшей селекционной работы и вовлекаться в скрещивания в качестве доноров соответствующих признаков.

К настоящему времени изучено и выделено большое количество защитных генов растений, большинство из которых кодируют устойчивость лишь к ограниченному кругу патогенов или даже расам патогенов и являются неэффективными против других возбудителей болезней. Несмотря на высокую степень защиты, достигаемую с помощью таких генов и их стабильностью в разных условиях окружающей среды (Попкова, 1992), приоритет в последнее время отдается использованию генов общей устойчивости, обеспечивающим защиту одновременно против нескольких видов фитопатогенов. В связи с этим представляют интерес гены таких защитных растительных белков, как дефензины и ингибиторы протеолитических ферментов, обладающие широким спектром действия.

Дефензины растений - это семейство небольших (около 5 kD), обычно основных, пептидов, богатых цистеиновыми остатками, связанными дисульфидными мостиками (Bruix et al., 1993). Они экспрессируются почти в каждом органе растения, включая листья, корни, клубни, органы цветения, плоды и семена (Kragh et al., 1995). Основываясь на антимикробном действии, наблюдаемом на грибах, дефензины могут быть разделены, по крайней мере, две группы - морфогенные и неморфогенные. Морфогенные дефензины растений приводят к редукции роста гифов и одновременным увеличением числа ветвей, тогда как неморфогенные дефензины растений только замедляют рост гифов, но не индуцируют заметных морфологических изменений (Osborn et al., 1995).

Белковые ингибиторы протеолитических ферментов, локализованные в межклеточном пространстве и клеточной стенке, являются регуляторами эндогенных протеаз и широко представлены в различных тканях животных, растений и микроорганизмов, контролируя, таким образом, множество внутриклеточных метаболических процессов (Van Loon, 1987, Guevara et al.,

1999, Глинка и др., 2000). Кроме того, обнаружены растительные ингибиторы протеиназ, активно действующие на экзогенные ферменты насекомых и патогенных микроорганизмов (Eckelkamp et al., 1993, Дунаевский Я.Е. и др.,

2000, Мосолов В.В. и др., 2001). Большинство известных и исследованных в настоящее время ингибиторов протеиназ из растений взаимодействуют с сериновыми протеиназами (трипсином, химотрипсином, субтилизином), которые широко распространены в растениях и к настоящему времени получены из многих источников (Мосолов и др., 1993, Antcheva et al., 1996, Цыбина, 2002).

Целью наших исследований явилось получение трансгенных растений картофеля, экспрессирующих ген rs дефензина редьки R.S-AFP2, ген ас дефензина амаранта Ac-AFP2, ген 1р ингибитора протеиназ гречихи BWI-la.

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

1. Изучить на различных вариантах питательных сред регенерационную способность различных типов эксплантов 20 сортов картофеля, отличающихся по своей устойчивости к основным фитопатогенам.

2. Оптимизировать методику трансформации картофеля и табака с целью повышения ее эффективности. Получить трансгенные растения картофеля с генами rs дефензина редьки и ас дефензина амаранта, а также трансгенные растения табака и картофеля с геном 1р ингибитора протеиназ гречихи.

3. Определить у трансформированных линий картофеля и табака наличие генетической вставки, ее копийность и уровень экспрессии.

4. Выявить возможные изменения у трансгенных растений в уровне накопления растворимых фенольных соединений и лигнина.

Научная новизна и практическая ценность работы. Выявлены условия для эффективной регенерации и генетической трансформации 20 сортов картофеля отечественной и зарубежной селекции, различающихся по степени устойчивости к основным грибным и бактериальным патогенам. Впервые получены растения табака и картофеля, экспрессирующие ген ингибитора протеиназ гречихи, проявляющие повышенную устойчивость к ряду патогенов. Полученные в работе результаты и разработанные методики могут быть использованы при размножении в культуре in vitro различных сортов картофеля и табака, при создании трансгенных линий и их оценке на устойчивость к различным заболеваниям. Созданные трансгенные линии картофеля с геном rs дефензина редьки, геном ас дефензина амаранта и геном 1р ингибитора протеиназ гречихи, отличающиеся повышенной устойчивостью к ряду фитопатогенных грибов, могут быть использованы в качестве исходного материала в дальнейшей селекционной работе.

Апробация работы. Результаты работы были представлены на Международной научно-практической конференции «Селекция и семеноводство овощных культур в XXI веке», 2000 г.; Международной научно-практической конференции молодых ученых «Молодые ученые -возрождению сельского хозяйства России в XXI веке», Брянск, 2000 г.; II Международной конференции «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии». Москва, 2000 г.; научной конференции памяти Грегора Менделя, Москва, 2001 г.; Международной научно-практической конференции молодых ученых «Биотехнология - возрождению сельского хозяйства России в XXI веке». Санкт-Петербург, 2001 г.; научной генетической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения А.Р.

Жебрака и 70-летию образования кафедр генетики в Московской сельскохозяйственной академии им. К.А. Тимирязева. Москва, 2002 г.; 2-ой конференции МОГиС им. Н.И. Вавилова, Москва, 2003 г.; IV Молодежной научной конференции «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии». Москва, 2004 г.; Международном симпозиуме «Физиология трансгенных растений и проблемы безопасности», Москва, 2004 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Чередниченко, Михаил Юрьевич

ВЫВОДЫ

1. Изучена морфогенетическая способность эксплантов различных тканей 20 сортов картофеля, различающихся по устойчивости к основным фитопатогенам, на различных вариантах питательных сред. Установлено, что наибольшей регенерационной способностью обладали стеблевые экспланты сортов Петербургский, Янтарный, Раменский, Резерв и Брянский ранний на среде, содержащей 3 мг/л 6-БАП. Предложены условия проведения трансформации сортов картофеля, начиная с этапа прекультивации и заканчивая этапом регенерации.

2. Получены трансгенные растения картофеля, трансформированные конструкциями с генами дефензина редьки rs и амаранта ас, а также трансгенные растения табака и картофеля, трансформированные геном ингибитора протеиназ гречихи 1р.

3. Методом ПЦР и Саузерн блот-гибридизации показана трансгенная природа полученных трансформированных линий табака и картофеля Определено, что вставки в основном были монокопийны.

4. С помощью биотеста показано, что растения полученных трансгенных линий табака сорта Самсун и картофеля сортов Резерв, Дезире, Десница демонстрируют повышенную устойчивость к грибным и бактериальным патогенам.

5. На уровне мРНК показана экспрессия гена 1р в трансгенных растениях картофеля и табака.

6. Показано, что у трансгенных растений различных сортов картофеля изменяется уровень фенольных соединений, а также накопления лигнина.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время в генноинженерных программах по селекции сельскохозяйственных растений на устойчивость к биотическим стрессам приоритет отдается использованию генов общей устойчивости, обеспечивающих защиту одновременно против нескольких видов фитопатогенов (Ryan, 1990, Michaud, 1997, Мосолов и др., 2001, Парашина и др., 2000, Ляпкова и др., 2001). В связи с этим представляют интерес гены таких защитных растительных белков, как дефензины и ингибиторы протеолитических ферментов, обладающие широким спектром действия (Conceifao, Broekaert, 1998, Penninckx et al., 1996, Дунаевский и др., 2000).

В наших исследованиях мы проводили трансформацию растений 20 сортов картофеля отечественной и зарубежной селекции, различающихся по степени устойчивости к основным фитопатогенам, геном rs дефензина редьки Rs-AFP2, геном ас дефензина амаранта Ac-AFP2, а также растений картофеля различных сортов и табака сорта Самсун геном 1р анионного ингибитора сериновых протеиназ гречихи BWI-la.

Была изучена морфогенетическая способность эксплантов различных тканей 20 сортов картофеля отечественной и зарубежной селекции, различающихся по устойчивости к основным фитопатогенам, на различных вариантах питательных сред. Установлено, что наибольшей регенерационной способностью обладали стеблевые экспланты сортов Петербургский, Янтарный, Раменский, Резерв и Брянский ранний на среде, содержащей 3 мг/л 6-БАП. Предложены условия проведения трансформации сортов картофеля и табака, начиная с этапа прекультивации и заканчивая этапом регенерации.

Было получено 98 линий картофеля, трансформированных геном rs дефензина редьки: 2 линии сорта Осень, 6 линий сорта Брянский ранний, л* 9 линий сорта Дезире, 16 линий сорта Янтарный, 7 линий сорта Альянс,

8 линий сорта Десница, 6 линий сорта Сотка, 11 линий сорта Лорх, 12 линий сорта Сказка, 11 линий сорта Синецвет, 6 линий сорта Эффект, 4 линий сорта Жуковский ранний. Было получено 10 линий картофеля, трансформированных геном ас дефензина амаранта: 3 линии сорта Осень, 3 линии сорта Брянский ранний, 3 линии сорта Раменский, 1 линия сорта Бинтье.

Впервые были получены линии картофеля и табака, трансформированные геном 1р ингибитора протеиназ гречихи: 5 линий картофеля сорта Резерв, 2 линии картофеля сорта Удача и 138 линий табака сорта Самсун.

В результате проведенного ПЦР-анализа была подтверждена трансгенная природа 21 линии 4 сортов картофеля (Альянс, Дезире, Десница и Янтарный), трансформированной геном rs дефензина редьки, 1 линии сорта Раменский, трансформированной векторной конструкцией, несущей ген ас дефензина амаранта, и 3 линий сорта Резерв, трансформированных геном 1р ингибитора протеиназ гречихи. Методом Саузерн блот-гибридизации была показана трансгенная природа полученных трансформированных линий табака и картофеля. Определено, что вставки в основном были монокопийны.

С помощью биотеста было показано, что растения полученных трансгенных линий табака сорта Самсун и картофеля сортов Резерв, Дезире, Десница демонстрируют повышенную по сравнению с исходными растениями сорта устойчивость к грибным (Fusarium sp.) и бактериальным (Escherichia coli) патогенам. На уровне мРНК (Нозерн-блот-анализ) была показана экспрессия гена 1р ингибитора протеиназ гречихи в трансгенных растениях картофеля сорта Резерв и табака сорта Самсун.

Было показано, что процесс трансгеноза влияет на накопление растворимых фенольных соединений, особенно на уровень флавоноидов, у полученных форм. Также в некоторых вариантах было показано изменение накопления в клетках трансгенных растений фенольного полимера лигнина.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Чередниченко, Михаил Юрьевич, 2004 год

1. Аветисов В А. Биотехнологические основы расширения генетического разнообразия картофеля // Автореф. дис. д-ра биол. наук. -М., 1997. 46 с.

2. Аветисов В.А., Соболькова Г.И., Гартель А.Л. и др. Эффективная система трансформации картофеля при использовании срезов клубней // Новые направления биотехнологии. Пущино, 1988. с.62.

3. Авсенева Т.В., Федуркина Н.В., Мосолов В.В. Изменение активности протеиназы и ее ингибитора при прорастании семян кукурузы // Физиология растений, 1988. Т.35. Вып.1. с. 106-112.

4. Анисимов Б.В. Картофель 2000-2005: итоги, прогнозы, приоритеты // Картофель и овощи, 2001. №1. — с. 5-7.

5. Анисимов Б.В. Сорта картофеля, возделываемые в Российской Федерации. М.: Информагротех, 1999. — 116 с.

6. Анисимов Б.В. Сортовые ресурсы и передовой опыт семеноводства картофеля. М.: ФГНУ «Росинформагротех», 2000. — 152 с.

7. Белозерский М.А., Дунаевский Я.Е. Протеолитические ферменты и их ингибиторы в семенах гречихи // Физиология растений. 1999. Т.46. №3. -с.388-399.

8. Белозерский М.А., Дунаевский Я.Е., Мусалямов А.Х., Егоров Ц.А. Аминокислотные последовательности анионных ингибиторов протеаз из семян гречихи //Биохимия. 1996. Т.61. Вып.10. с.1743-1750.

9. Беляев А.В., Войтович А.В., Чернышева Т.Н. Фенольные соединения корнеплодов свеклы при поражении корневыми гнилями //

10. Физиолого-биохимические основы повышения продуктивности и устойчивости к болезням сахарной свеклы в условиях орошения. Фрунзе, 1989.-с. 40-51.

11. Бенкен И.И., Мосолов В.В., Федуркина Н.В. Влияние ингибитора протеиназ из фасоли на фитопатогенные грибы // Микология и фитопатология, 1976. Т. 10. Вып.З. с.198-201.

12. Богачева A.M. Субтилизины растений (обзор) // Биохимия, 1999. Т.64. Вып.З. с.347-353.

13. Валуева Т.А., Кладницкая Г.В., Ильинская Л.И., Герасимова Н.Г., Озерецковская О.Л., Мосолов В.В. Ингибиторы химотрипсина в клубнях картофеля, инфицированных возбудителем фитофтороза // Биоорганическая химия, 1998. Т.24. №5. с.346-349.

14. Валуева Т.А., Мосолов В.В. Белки-ингибиторы протеолитических ферментов у растений (обзор) // Прикладная биохимия и микробиология, 1995. Т.31. №6. с.579-589.

15. Валуева Т.А., Ревина Т.А., Кладницкая Г.В., Мосолов В.В., Ментеле Р. Первичная структура 21 кДа-белка из клубней картофеля // Биохимия, 1999. Т.64. Вып.11. с.1489-1498.

16. Валуева Т.А., Ревина Т.А., Мосолов В.В. Белки-ингибиторы протеиназ из клубней картофеля, относящиеся к семейству соевого ингибитора Кунитца // Биохимия, 1997. Т.62. Вып. 12. с. 1600-1608.

17. Валуева Т.А., Ревина Т.А., Мосолов В.В. Реактивные центры 21 кДа-белка-ингибитора сериновых протеиназ из клубней картофеля // Биохимия, 1999. Т.64. Вып.9. с. 1274-1279.

18. Вальдеррама Ромеро А.С. Изучение процессов регенерации и клонирования некоторых перуанских видов картофеля в культуре in vitro. Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 2002. 24 с.

19. Воскобойникова H.E., Дунаевский Я.Е., Белозерский М.А. Ингибитор металлопротеиназы из покоящихся семян гречихи // Биохимия, 1990. Т.55. №5. с.839-847.

20. Глагоцкая Т.Ц., Шульга О.А., Сидоров В.А., Захарьев В.М., Скрябин К.Г, Глеба Ю.Ю. Трансгенные растения картофеля с чужеродным геном белка оболочки Х-вируса картофеля // Доклады АН СССР, 1990. Т.314. №5.-с. 1240-1242.

21. Глагоцкая Т.Ц., Щербатенко И.С., Сидоров В.А., Шульга О.А., Захарьев В.М., Скрябин К.Г., Глеба Ю.Ю. Трансгенные растения картофеля, обладающие устойчивостью к вирусным инфекциям // Доклады АН УССР, 1990. Т. 10, серия Б. с.57-59.

22. Глез В.М. Вредители картофеля и борьба с ними // Агро XXI, приложение «Эффективные технологии производства картофеля», 1999. -с.16-17.

23. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. -М.: Мир, 2002.-е. 371-403.

24. Глинка Е.М., Проценко М.А. Активность белкового ингибитора полигалактуроназы в растениях картофеля // Прикладная биохимия и микробиология, 2000. Т.36. №2. с.225-228.

25. Глинка Е.М., Проценко М.А. Функции белкового ингибитора полигалактуроназы в растении (обзор) // Прикладная биохимия и микробиология, 1999. Т.35. №1. с.3-9.

26. Глинка Е.М., Проценко М.А., Буланцева Е.А., Салькова Е.Г. Действие белкового ингибитора полигалактуроназы из тканей плодов яблони на фермент, выделяемый фитопатогенными грибами // Прикладная биохимия и микробиология, 2001. Т.37. №5. с.607-611.

27. Данилова С.А. Оптимизация агробактериального метода трансформации кукурузы. Автореферат дис. канд. биол. наук. М., 2001. — 20 с.

28. Дмитриева С. А. Генетическая трансформация картофеля с помощью Agrobacterium tumefaciens: Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 1990.-20 с.

29. Домаш В.И. Протеиназно-ингибиторная система высших растений: свойства и биологические функции. Автореферат дис.д-ра биол. наук. -Минск, 1995.-38 с.

30. Домаш В.И., Забрейко С.А. Белки из семян люпина многолетнего (.Lupinus polyphyllus L.), ингибирующие активность эндогенных и экзогенных протеиназ // Доклады АН Беларуси. 1995. Т.39. №2. с.70-73.

31. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта (с основами статистической обработки результатов исследований). М.: Колос, 1979. -416 с.

32. Дунаевский Я.Е., Белозерский М.А. Эндогенные ингибиторы протеаз как фактор устойчивости растений // Молекулярная биология, 1995. Т. 29. №6. с.1258-1264.

33. Дунаевский Я.Е., Грубань Т.Н., Белякова Г.А., Белозерский М.А. Влияние состава среды на количественный и качественный состав внеклеточных протеаз микромицетов // Микробиология, 1999. Т.68. №3. -с.З 24-329.

34. Дунаевский Я.Е., Павлюкова Е.Б., Белозерский М.А. Свойства ингибиторов трипсина и сериновых протеиназ микромицетов, выделенных из семян гречихи // Биоорганическая химия, 1994. Т.20. №3. с.297-301.

35. Дунаевский Я.Е., Павлюкова Е.Б., Белякова Г.А., Белозерский М.А. Анионные ингибиторы трипсина из покоящихся семян гречихи: выделение, специфичность действия и влияние на рост микромицетов // Биохимия, 1994. Т.59. Вып.7. с.990-996.

36. Дунаевский Я.Е., Павлюкова Е.Б., Белякова Г.А., Белозерский М.А. О физиологической роли ингибиторов протеаз растений: две группы функционально активных ингибиторов в семенах гречихи // Молекулярнаябиология, 1995. Т.29. Вып.6. с.1258-1264.

37. Дунаевский Я.Е., Павлюкова Е.Б., Грубань Т.Н., Белякова Г.А., Белозерский М.А. Внеклеточная протеаза микромицета Alternaria alternata И Биохимия, 1996. Т.61. Вып.10. с.1904-1910.

38. Дунаевский Я.Е., Цыбина Т.А., Белозерский М.А. Ингибиторы протеаз из семян высших растений как фактор устойчивости к патогенной микрофлоре // Агрохимия, 2000. №10. с.56-61.

39. Ефремова Н.Н., Крашенинникова JI.B. Получение трансгенных растений картофеля, экспрессирующих человеческий альфа-интерферон и двунитевую РНК // Вопросы картофелеводства: научные труды. М., 1994. — с.74-78.

40. Загоскина Н. В., Фернандо С.Ч., Федосеева В.Г., Азаренкова Н.Д., Запрометов М.Н. К вопросу о способности диплоидных и полиплоидных сортов чайного растения к образованию фенольных соединений // Сельскохозяйственная биология, 1994. №5. с. 117-119.

41. Запрометов М.Н. Фенольные соединения и их роль в жизни растения // LVI Тимирязевские чтения. М.: Наука, 1996. - 45 с.

42. Запрометов М.Н. Фенольные соединения: распространение, метаболизм и функции в растениях. М.: Наука, 1993. - 272 с.

43. Ибрагимов Р.И. Подавление активности внеклеточных протеиназ патогенного гриба Fusarium sp. ингибиторами из семян и вегетативных органов растений // Доклады РАСХН. 1997. №2. с. 15-17.

44. Ибрагимов Р.И., Ахметов P.P. Активность протеолитических ферментов и их белковых ингибиторов в семенах и проростках злаков // Итоги научных исследований биологического факультета Башкирского госуниверситета за 1994 год: Тез. докл. Уфа, 1995. с.84-87.

45. Калашникова Е.А. Влияние метаболитов гриба Rhizoctonia solani на рост пробирочных растений, каллусной ткани и суспензионной культуры картофеля. // Биотехнология, 2003, № 3. — с.27-35.

46. Калашникова Е.А. Клеточная селекция растений на устойчивость к грибным болезням. Автореферат дис.д-ра биол. наук. М., 2003. — 53 с.

47. Калинин Ф.Л., Сарнацкая В.В., Полищук В.Е. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений. — Киев.: Наукова думка, 1980. -488 с.

48. Картель Н.А., Курочкина С.Д., Забенькова К.И. Эффективность агробактериальной трансформации у разных генотипов картофеля (Solarium tuberosum L.) // Доклады Академии наук Беларуси, 1994. Т.38. №2. с.67-71.

49. Кладницкая Г.В., Валуева Т.А., Домаш В.И., Новикова JI.M., Мосолов В.В. Экзопротеиназы гриба Fusarium sambucinum Fuck и их взаимодействие с ингибиторами // Прикладная биохимия и микробиология, 1994. Т.ЗО. Вып.1. с.21-28.

50. Кладницкая Г.В., Валуева Т.А., Ермолова Н.В., Ильинская Л.И., Герасимова Н.Г., Мосолов В.В. Накопление ингибиторов протеиназ в диффузатах клубней картофеля при инфицировании возбудителем фитофтороза // Физиология растений, 1996. Т.43. №5. с.701-706.

51. Конов АЛ., Стародубцева A.M., Шульга О.А., Скрябин К.Г. Генетическая инженерия картофеля: от лаборатории до поля // Современные системы защиты и новые направления в повышении устойчивости картофеля к колорадскому жуку. М.: Наука, 2000. - с. 110-119.

52. Контроль качества и сертификация семенного картофеля (практическое руководство). — М.: ФГНУ «Росинформагротех», 2003. — 316 с.

53. Коршунов А.В. Современные технологии возделывания картофеля // Агро XXI, приложение «Эффективные технологии производства картофеля», 1999. с.9-10.

54. Кравец О.А., Погребняк Н.Я., Шиша Е.Н., Лопато С.В., Глеба Ю.Ю. Трансформация различных сортов картофеля и анализ полученных трансгенных растений // Биополимеры и клетка, 1992. Т.8. №6. с.44-49.

55. Курбанова И.В., Соловова Г.К. Агробактериальная трансформация однодольных // Изучение генома и генетическая трансформация растений. -Новосибирск, 2001. — с.163-173.

56. Курочкина С.Д. Получение трансгенных растений картофеля и их молекулярно-генетический анализ. Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 1995.-21 с.

57. Методические указания по получению трансформированных растений картофеля / Рассадина Г.В., Юрьева Н.О., Ефремова Н.Н. М., 1995. -13 с.

58. Мосолов В.В. Белковые ингибиторы протеолитических ферментов. Автореферат дис. докт. биол. наук. М., 1979. — 54 с.

59. Мосолов В.В., Валуева Т.А. Растительные белковые ингибиторы протеолитических ферментов. М., 1993. - 207 с.

60. Мосолов В.В., Григорьева Л.И., Валуева Т.А. Участие протеолитических ферментов и их ингибиторов в защите растений (обзор) // Прикладная биохимия и микробиология, 2001. Т.37. № 2. с. 131-140.

61. Мосолов В.В., Хлуднев Д.В. Поведение белка ингибитора эндогенной альфа-амилазы в прорастающем зерне пшеницы // III съезд Всероссийского общетсва физиологов растений: Тез.докл. — С.-Пб., 1993. №2. -с. 167.

62. Падегимас Л.С., Шульга О.А., Скрябин К.Г. Создание трансгенных растений Nicotiana tabacum и Solatium tuberosum, устойчивых к гербициду фосфинотрицину//Молекулярная биология, 1994. Т.28. с.437-443.

63. Парашина Е.В. Создание и характеристика трансгенных форм томатов (Lycopersicon esculentum L.), экспрессирующих ген дефензина редьки Rs-AFP2. Автореферат дис. канд. биол. наук. — М., 1999. — 18 с.

64. Парашина Ё.В., Сердобинский Л.А., Калле Е.Г., Лаврова Н.В., Аветисов В.А., Лунин В.Г. Народицкий Б.С. Получение трансгенных растений рапса и томата, экспрессирующих ген дефензина редьки // Физиология растений, 2000. Т. 47. №3. с.471-478.

65. Парашина Е.В., Шаденков А.А., Лаврова Н.В. Аветисов В.А. Использование гена защитного пептида (дефензина) из семян редьки для повышения устойчивости томатов к заболеваниям, вызываемым грибами // Биотехнология, 1999. № 6. с.35-41.

66. Попкова К.В. Учение об иммунитете растений. М., 1992. — 288 с.

67. Ралдугина Г.Н. Получение и исследование трансгенных растений рапса (Brassica napus L.). Автореферат дис.доктор биол. наук. М., 1997. — 26 с.

68. Растениеводство / Г.С. Посыпанов, В.Е. Долгодворов, Г.В. Коренев и др.; Под ред. Г.С. Посыпанова. — М.: Колос, 1997. — с.267-301.

69. Ревина Т.А., Валуева Т.А., Ермолова Н.В., Кладницкая Г.В., Мосолов В.В. Выделение и характеристика нового ингибитора трипсина ихимотрипсина из клубней картофеля // Биохимия, 1995. Т.60. Вып.11. -с. 1844-1851.

70. Ревина Т.А., Валуева Т.А., Ермолова Н.В., Мосолов В.В. Характеристика реактивных центров нового ингибитора трипсина и химотрипсина из клубней картофеля // Биохимия, 1996. Т.61. Вып.1. с.126-130.

71. Соколова М.А., Пугин М.М., Шульга О.А., Скрябин К.Г. Получение трансгенных растений картофеля, устойчивых к Y-вирусу картофеля // Молекулярная биология, 1994. Т.28. с. 1002-1008.

72. Федуркина Н.В., Авсенева Т.В., Мосолов В.В. Активация протеолитических ферментов в прорастающих семенах кукурузы // Физиология семян: формирование, прорастание, прикл. аспекты. Душанбе, 1990.-с. 212-214.

73. Цыбина Т.А. Катионные ингибиторы сериновых протеиназ из семян гречихи (Fagopyrum esculentum Moench.). Автореферат дис. канд.биол.наук. М., 2002. - 22 с.

74. Цыбина Т.А., Дунаевский Я.В. Катионные ингибиторы сериновых протеиназ из семян гречихи // Биохимия, 2001. Т. 66. № 9. с. 1160-1165.

75. Abe М., Abe К., Kuroda М., Arai S. Corn kernel cysteine proteinase inhibitor as a novel cystatin superfamily member of plant origin. Molecular cloning and expression studies. // Eur. J. Biochem. 1992 V. 209. №3. pp.933937.

76. An G., Watson B.D., Chiang C.C. Transformation of tobacco, tomato, potato and Arabidopsis thaliana using a binary Ti vector system. // Plant Physiology, 1986. V.81. p.301-305.

77. Antcheva N., Patthy A., Athanasiadis A., Tchorbanov В., Zakhariev S., Pongor S. Primary structure and specificity of a serine proteinase inhibitor from paprika (Capsicum annuum) seeds. // Biochim. Biophys. Acta. 1996. V.1298. -pp.95-101.

78. Birch R.G. Plant transformation: problems and strategies for practical application. // Annual reviews in Plant physiology and plant molecular biology,1997. V.48. p.297-326.

79. Birk Y., Gertler A., Khalef S. Separation of a Tribolium-protease inhibitor from soybeans on a calcium phosphate column. // Biochim. Biophys. Acta. 1963. V. 67. № 3. pp.326-328.

80. Bradshaw H.D., Hollick J.B., Parsons T.J., Clarke H.R.G., Gordon M.P. Systemically wound-responsive genes in poplar trees encode proteins similar to sweet potato sporamins and legume Kunitz trypsin inhibitors. // Plant Mol. Biol. 1989. V.14.-pp.51-59.

81. Brandstadter J., Ropiach C., Theres K. Expression of genes for a defensin and a proteinase inhibitor in specific areas of the shoot apex and the developing flower in tomato // Mol. Gen. Genet. 1996. V.252. pp.146

82. Brown W.E., Takio K., Titani K., Ryan C.A. Wound-induced trypsin inhibitor in alfalfa leaves: identity as a member of the Bowman-Birk inhibitor family. // Biochemistry. 1985. V.24. pp.2105-2108.

83. Bruemmer J.H., White J.M. Base of phytoalexin production in carrot cell cultures to evaluate leaf blight susceptibility // Proc. Florida State Hortic. So hake Afred, Fia, 1987. V.59. pp. 156-157.

84. Bruix M., Gonzalez C., Santoro J., Soriano F., Rocher A., Mendez E., Rico M. 'H-NMR studies on the structure of a new thionin from barley endosperm // Biopolymers. 1995. V.36. №6. pp.751-763

85. Bryant J., Green T.R., Gurusaddaiah Т., Ryan C.A. Proteinase inhibitor II from potatoes: isolation and characterization of its protomer components. // Biochemistry. 1976. V.15. pp.3418-3424.

86. Caaveiro J.M.M., Molina A., Gonzales-Manas J.M., Rodriguez-Palenzuela P., Garcia-Olmedo F., Goni F.M. Differential effects of five types of antipathogenic plant peptides on model membranes // FEBS Lett. 1997. V.410. -pp.338

87. Chen P., Rose J., Love R., Wei C.H., Wang B.C. Reactive sites of an anticarcinogenic Bowman-Birk proteinase inhibitor are similar to other trypsin inhibitors. // J. Biol. Chem. 1992. V.267. pp. 1990-1994.

88. Chiang C.C., Hadwiger L.A. The Fusarium solani-induced expression of a pea gene family encoding high cysteine content proteins // Mol. Plant-Microbe Interact. 1991. V.4. pp.324-331

89. Conceigao A. de Silva, Broekaert W.F. Plant Defensins // Pathogenesis-related proteins in plants. Datta S.K., Muthukrishnan S. (eds.). 1998. pp. 247-260.

90. Cordero M.J., Raventos D., San Segundo B. Expression of a maize proteinase inhibitor gene is induced in response to wounding and fungal infection: systemic wound-response of a monocot gene. // Plant J. 1994. V.6. pp. 141-150.

91. Cornet В., Bonmatin J.-M., Hetru C., Hoffmann J.A., Ptak M., Vovelle F. Refined three-dimensional solution structure of insect defensin A // Structure. 1995. V.3. pp.435-441.

92. Coxon D.T., Heill T.M., Mansfield J.M. et. al. Identification of three hydroxyflavan phytoalexins from daffodil bulbs // Phytochemistry, 1980. V.19. -3p.889-892.

93. Davies H.V. Recent development in our knowledge of potato transgenic biology. // Potato research, 1996. V.39. p.411-427.

94. Davis D. Fusaric acid in selective pathogenecity of Fusarium oxysporum. //Phytopathology, 1969. V.59. №10. -pp.1391-1395.

95. Dempsey D.A., Silva H., Klessig D.F. Engineering disease and pest resistance in plants. // Trends in Microbiology, 1998. V.6. No.2. p. 54-61.

96. Doares S.H., Narvaaez-Vasquez J., Conconi A., Ryan C.A. Salicylic Acid Inhibits Synthesis of Proteinase Inhibitors in Tomato Leaves Induced by Systemin and Jasmonic Acid // Plant Physiology. 1995. V.108. №4. pp. 1741-1746.

97. Dobinson K.F., Lecomte N., Lazarovits G. Production of an extracellular trypsin-like protease by the fungal plant pathogen Verticillium dahliae. // Can. J. Microbiol. 1997. V. 43. № 3. pp.227-233.

98. Dow J.M., Davies H.A., Daniels MJ. A metalloprotease from Xanthomonas campestris that specifically degrades proline/hydroxyproline-rich glycoproteins of the plant extracellular matrix. // Mol. Plant-Microbe Interact. 1998. V. 11. № 11. pp.1085-1093.

99. D'Silva I., Poirier G.G., Heath M.C. Activation of cysteine proteases in cowpea plants during the hypersensitive response—a form of programmed cell death. // Exp. Cell. Res. 1998. V. 245. №2. pp.389-399.

100. Dunwell J.M. Novel food products from genetically modified crop plant: methods and future prospects. // International Journal of Food Science&Technology, 1998. V.33. No.3. p.205-213.

101. Eckelkamp C., Ehmann В., Schopfer P. Wound-induced systemicaccumulation of a transcript coding for a Bowman-Birk trypsin inhibitor-related protein in maize (Zea mays L.) seedlings. // FEBS Lett. 1993. V.323. pp.73-76.

102. Edwards S.K., Johanson S., Thompson S.A. A simple and rapid method for the preparation of plant genomic DNA for PCR analysis // Nucleic Acid Res., 1991. V. 19.-pp. 13-49.

103. Enari T.M., Mikola J. Peptidases in germinating barley grain: properties, localization and possible functions. // Ciba Found Symp. 1977. V.50. -pp.335-352.

104. Epple P., Apel K., Bohlmann H. ESTs reveal a multigene family for plant defensins in Arabidopsis thaliana // FEBS Lett. 1997. V.400. pp.168-174.

105. Evers D., Overney S., Simon P., Greppin H., Hausman J.F. Salt tolerance of Solanum tuberosum L-overexpressing an heterologous osmotin-like protein. //Biologia Plantarum, 1999. V.42. No.l. p. 105-112.

106. Fant F., Vranken W., Broekaert W.F., Borremans F. Determination of the three-dimensional solution structure of Raphanus sativus antifungal protein 1 by 'H-NMR// J. Mol. Biol. 1998. V.279. №1. pp.257-270.

107. Fritig В., Heitz Т., Legrand M. Antimicrobial proteins in induced plant defense. // Curr. Opin. Immunol. 1998. V.10. №1. pp. 16-22

108. Garcia-Olmedo F., Salcedo G., Sanchez-Monge R., Gomez L., Royo J., Carbonero P. Plant proteinaceous inhibitors of proteinases and alpha-amylases. // Oxf. Surv. Plant Mol. Cell. Biol. 1987. V.4. pp.275-334.

109. Giudici A.M., Regente M.C., Villalain J., Pfuller K., Pfuller U., De La Canal L. Mistletoe viscotoxins induce membrane permeabilization and spore death in phytopathogenic fungi. // Physiol Plant. 2004. V.121. №1. pp.2-7.

110. Goddijn J.M., Pen J. Plants as bioreactors. // Trends in Biotechnology, 1995. V.13. p. 379-387.

111. Graham J.S., Pearce G., Merryweather J., Titani K., Ericsson L.H., Ryan C.A. Wound-induced protease inhibitors from tomato leaves. II. The cDNA-deduced primary structure of pre-inhibitor II. // J. Biol. Chem. 1985. V.260. -pp.6561-6564.

112. Green T.R., Ryan C.A. Wound-induced proteinase inhibitor in plant leaves: a possible defense mechanism against insects. // Science. 1972. V.175. -pp.776-777.

113. Greiner S., Rausch Т., Sonnewald U., Herbers K. Ectopic expression of a tobacco invertase inhibitor homolog prevents cold-induced sweetening of potato tubers. // Nature Biotechnology, 1999. V.17. No.7. p.708-711.

114. Gu Q., Kamata E.E., Morse M.J., Wu H.M., Cheung A.Y. A flower-specific cDNA encoding a novel thionin in tobacco // Mol. Gen. Genet. 1992. V.234. pp.89-96

115. Guevara M.G., Oliva C.R., Machinandiarena M., Daleo G.R. Purification and properties of an aspartic protease from potato tuber that is inhibited by a basic chitinase // Physiologia Plantarum. 1999. V.106. №2. -pp. 164-169.

116. Gutierrez-Campos R., Torres-Acosta J.A. Saucedo-Arias L.J., Gomez-Lim M.A. The use of cysteine proteinase inhibitors to engineer resistance against potyviruses in transgenic tobacco plants. // Nat. Biotechnol. 1999. V. 17. №12. -pp.1223-1226.

117. Heyer A.G., Lloyd J.R., Kossmann J. Production of modified polymeric carbohydrates.//Current Opinion in Biotechnology, 1999. V.10. No.2. pp.169174.

118. Hilder V.A., Gatehouse A.M.R., Sheerman S.B., Barker R.F., Boulter D. A novel mechanism of insect resistance engineered into tobacco. // Nature. 1987. V.330. pp.160-163.

119. Hildmann Т., Ebneth M., Pena-Cortez H., Sanchez-Serrano J.J., Willmitzer L., Prat S. General roles of abscisic and jasmonic acids in gene activation as a result of mechanical wounding. // Plant Cell. 1992. V. 4. №9. -pp.1157-1170

120. Horisberger M, Tacchini-Vonlanthen M. Ultrastructural localization of Bowman-Birk inhibitor on thin sections of Glycine max (soybean) cv. Maple Arrow by the gold method. // Histochemistry. 1983. V.77. №3. pp.313-21.

121. Horsch R.B., Fry Т., Hoffmann N.Z. A simple and general method for transferring genes into plants // Science, 1995. V.227. №4691. pp.1229.

122. Hwang D.L., Yang W.-K., Foard D.E. Rapid Release of Protease Inhibitors from Soybeans // Plant Physiology. 1978. V.61. №1. pp.30-34.

123. Ishida B.K., Snyder G.W., Belknap W.R. The use of in vitro-grown microtuber discs in Agrobacterium-mediated transformation of Russet Burbank and Lemhi Russet potatoes. // Plant Cell Reports, 1989. V.8. p.325-328.

124. Iwasaki Т., Kiyochara Т., Yoshikawa M. Chemical and physicochemical characterization of two different types of proteinase inhibitors (inhibitors II-а and Il-b) from potatoes. // J. Biochem. 1972. V.72. №4. pp. 10291035.

125. Johnson R., Narvaez J., An G., Ryan C. Expression of Proteinase Inhibitor Genes from Potato and Tomato in Transgenic Plants Enhances Defense against an Insect Predator // Biotechnology in Agriculture Series. Wallingford. 1990. №3.-pp.97-102.

126. Jorda L., Coego A., Conejero.V., Vera P. A genomic cluster containingfour differentially regulated subtilisin-like processing protease genes is in tomato plants. // J. Biol. Chem. 1999. V.274. №4. pp.2360-2365.

127. Joshi B.N., Sainani M.N., Bastawade K.B., Gupta V.S., Ranjekar P.K. Cysteine protease inhibitor from pearl millet: a new class of antifungal protein. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. V.246. pp.382-387.

128. Kapur R., Tan-Wilson A.L., Wilson K.A. Isolation and Partial Characterization of a Subtilisin Inhibitor from the Mung Bean (Vigna radiata) // Plant Physiology. 1989. V.91. pp. 106-112.

129. Katayama H., Soezima Y., Fujimura S., Terada S., Kimoto E. Property and amino acid sequence of a subtilisin inhibitor from seeds of beach canavalia (Canavalia lineata). // Biosci. Biotechnol. Biochem. 1994. V.58. pp.2004-2008.

130. Keil M., Sanchez-Serrano J., Schell J., Willmitzer L. Primary structure of a proteinase inhibitor II gene from potato (Solarium tuberosum). II Nucleic Acids Res. 1986. V.14. pp.5641-5650.

131. Kembhavi A.A., Buttle D.J., Rauber P., Barren A.J. Clostripain: characterization of the active site. IIFEBS Lett. 1991. V. 283. № 2. pp.277-280.

132. Kragh K.M., Nielsen J.E., Nielsen K.K., Dreboldt S., Mikkelsen J.D. Characterization and localization of new antifungal cysteine-rich proteins from Beta vulgaris // Mol. Plant-Microbe Interact. 1995. V.8. №3. pp.424-434.

133. Kurusaki P., Amin M., Nishi A. Induction of phytoalexin production and accumulation of phenolic compounds in cultured carrot cells // Physiol. Molec. Plant. Pathol., 1986. V.28. №3. pp.359-370.

134. Lee M.C., Scanlon M.J., Craik D.J., Anderson M.A. A novel two-chain proteinase inhibitor generated by circularization of a multidomain precursor protein. // Nat. Struc. Biol. 1999. V.6. pp.526-530.

135. Lee S., Jung K.H., An G., Chung Y.Y. Isolation and characterization of a rice cysteine protease gene, OsCPl, using T-DNA gene-trap system. // Plant Mol Biol. 2004 V.54 №5. pp.755-765.

136. Li W., Zarka K.A., Douches D.S., Coombs J.J., Pett W.L., Grafius E.J. Coexpression of potato PVYo Coat Protein and cryV-Bt genes in potato. // J. Amer. Soc. Hort. Sci., 1999. V.124. No.3. p.218-223.

137. Linthorst H J., van der Does C., Brederode F.T., Bol J.F. Circadian expression and induction by wounding of tobacco genes for cysteine proteinase. // Plant Mol. Biol. 1993. V. 21. № 4. pp.685-694.

138. Lynn D.G., Chang M. Phenolic signalis cohabitation: Implications for plant development.// Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol., 1990. V.41. -pp.497-503.

139. Mackay G.R. An agenda for future potato research. // Potato research, 1996. V.39. pp. 387-394.

140. Maeda K., Kakabayashi S., Matsubara H. Complete amino acid sequence of an alpha-amylase inhibitor in wheat kernel (0.19-inhibitor). // Biochim Biophys Acta. 1985. V.828. №3. -pp.213-21.

141. Meyer В., Houlne G., Pozueta-Romero J., Schantz M.L., Schantz R. Fruit-specific expression of a defensin-type gene family in bell pepper. Upregulation during ripening and upon wounding // Plant Physiol. 1996. V.112. №2. -pp.615-622.

142. Mikola J., Suollina E.-M. Purification and Properties of an Inhibitor of Microbial Alkaline Proteinase from Barley // Archives of Biochemistry and Biophysics. 1971. V.144. №2. pp.566-575.

143. Moreno M., Segura A., Garcia-Olmedo F. Pseudothionin, a potato peptide active against potato pathogens // Eur. J. Biochem. 1994. V.223. pp. 135139

144. Mosolov V.V., Loginova M.D., Fedurkina N.V., Benken I.I. The biological significance of proteinase inhibitors in plants // Plant Science Letters. 1976. V.7. pp.77-80.

145. Murashige Т., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassaya with tobacco tissue cultures // Physiologia Plantarum, 1962. V.15. — pp.473-497.

146. Narvaaez-Vasquez J., Franceschi V.R., Ryan C.A. Proteinase-inhibitor synthesis in tomato plants: Evidence for extracellular deposition in roots through the secretory pathway // Planta. 1993. V.189. №2. pp.257-266.

147. Nozawa H., Yamagata H., Aizono Y., Yoshikawa M., Iwasaki T. The complete amino acid sequence of a subtilisin inhibitor from adzuki beans (Vigna angularis). // J. Biochem. 1989. V. 106. № 6. pp. 1003-1008.

148. Ohtsubo K., Richardson M. The amino acid sequence of a 20 kDa bifunctional subtilisin/alpha-amylase inhibitor from bran of rice {Oryza sativa L.) seeds. // FEBS Lett. 1992. V.309. №1. pp.68-72.

149. Ojima A., Shiota H., Higashi K. et al. An extracellular insoluble inhibitor of cysteine proteinases in cell cultures and seeds of carrot. // Plant Mol. Biol. 1997. V.34. pp.99-109.

150. Ooms G, Hooykaas P.J.J., van Veen R.J.M., van Bellen P., Regensburg-Tuink T.J.G., Schilperoort R.A. Octopine Ti-plasmid deletion mutants of Agrobacterium tumefaciens with emphasis on the right side of the T-region. // Plasmid, 1983. V.7. p.15-29.

151. Ooms G., Karp A., Burrell M.M., Twell d., Roberts J. Genetic modification of potato development using Ri T-DNA. // Theor. Appl. Genetic, 1985. V.70.-p.44-446.

152. Pautot V., Holzer F.M., Reisch R., Walling L.L. Leucine aminopeptidase: an inducible component of the defense response in Lycopersicon esculentum (tomato).// Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1993. V.90. №21. pp.99069910.

153. Pautot V., Holzer F.M., Walling L.L. Differential Expression of Tomato Proteinase Inhibitor I and II Genes During Bacterial Pathogen Invasion and Wounding // Molecular Plant-Microbe Interactions. 1991. V.4. №3. pp. 284292.

154. Pearce G., Johnson S., Ryan C.A. Purification and characterization from tobacco (Nicotiana tabacum) leaves of six small, wound-inducible, proteinase isoinhibitors of the potato inhibitor II family. // Plant Physiol. 1993. V.102. pp.639-644.

155. Pearce G., Strydom D., Johnson S., Ryan C.A. A polypeptide from tomato leaves induces wound-inducible proteinase inhibitor proteins. // Science. 1991. V.253. pp.895-898.

156. Pehu E. The current status of knowledge on the cellular biology of potato. // Potato research, 1996. V.39. p.429-435.

157. Pen J., Sijmons P.C., Ooijen A.J.J., Hoekema A. Protein production in transgenic crops: analysis of plant molecular farming. // Trangenic Plants: Fundamentals and Applications, 1993. p.239-251.

158. Pernas M., Sanchez-Monge R., Gomez L., Salcedo G. A chestnut seed cystatin differentially effective against cysteine proteinases from closely related pests. // Plant Mol Biol. 1998. V.38. №6. pp. 1235-42.

159. Plunkett, Senear, Zuroske et al., 1982 Plunkett G., Senear D.F., Zuroske G., Ryan C.A. Proteinase inhibitors I and II from leaves of wounded tomato plants: purification and properties. // Arch. Biochem. Biophys. 1982. V.213. -pp.463-472.

160. Ries S.M., Albersheim P. Purification of a Protease Secreted by Colletotrichum lindemuthianum II Phytopathology. 1972. V.63. pp.625-629.

161. Rodrigo I, Vera P, Conejero V. Degradation of tomato pathogenesis-related proteins by an endogenous 37-kDa aspartyl endoproteinase. // Eur J Biochem. 1989. V.184. №3. -pp.663-669.

162. Ryan C.A. Protease inhibitors in plants: genes for improving defenses against insects and pathogens. // Annu. Rev. Phytopathol. 1990. V.28. №2. -pp.425-449.

163. Ryan C.A. The search for the proteinase inhibitor-inducing factor, PIIF. // Plant Mol. Biol. 1992. V.19. pp.123-133.

164. Ryan C.A., Pearce G. Systemins: a functionally defined family of peptide signals that regulate defensive genes in Solanaceae species. // Proc Natl

165. V. Acad Sci USA. 2003. V.100 Suppl 2. pp.14577-14580.

166. Schaller A., Bergey D.R., Ryan C.A. Induction of Wound Response Genes in Tomato Leaves by Bestatin, an Inhibitor of Aminopeptidases // The Plant Cell. 1995. V.7. №11. pp.1893-1898.

167. Schaller A. Action of proteolysis-resistant systemin analogues in wound signalling. // Phytochemistiy. 1998. V. 47. № 4. pp.605-612.

168. Sheerman S., Bewan M.W. A rapid transformation method for Solarium tuberosum using binary Agrobacterium tumefaciens vectors. // Plant Cell Reports, 1998. V.7. p.13-16.

169. Shivaraj В., Pattabiraman T.N. Natural plant enzyme inhibitors. Characterization of an unusual alpha-amylase/tiypsin inhibitor from ragi (Eleusine coracana Geartn.). //Biochem. J. 1981. V. 193. № 1. pp.29-36.

170. Siffert O., Emod I., Keil B. Interaction of clostripain with natural trypsin inhibitors and its affinity labeling by Nalpha-p-nitrobenzyloxycarbonyl arginine chlormethyl ketone.// FEBS Lett. 1976. V. 66. № 1. pp.114-119.

171. Solomon M., Belenghi В., Delledone M., Menachcn E., Levine A. The involvement of cysteine proteases and protease inhibitor genes in the regulation of programmed cell death in plants.// Plant Cell. 1999. V.l 1. №3. pp.431-444

172. Sreedhar L., Kobayashi D.Y., Bunting Т.Е., Hillman B.I., Belanger F.C. Fungal proteinase expression in the interaction of the plant pathogen Magnaporthe poae with its host. // Gene. 1999. V. 235. № 1-2. pp.121-129.

173. Srivastava O.L., Van Huystee R.B. Interections among phenolic oxidase activities of peanut peroxidase isozymes .// Phytochem., 1997., v. 16. N. 10. pp. 1527-1530.

174. Stotz H.U., Contos J.J.A., Powell A.L.T., Bennet A.B., Labavitch J.M. Structure and expression of an inhibitor of fungal polygalacturonases from tomato. // Plant Mol. Biol. 1994. V.25. №4. pp.607-617

175. Stotz H.U., Kroymann J., Mitchell-Olds T. Plant-insect interactions. // Curr. Opin. Plant Biol. 1999. V.2. №4. pp.268-272.

176. Svendsen I., Hejgaard J., Mundy J. Complete amino acid sequence of the alpha-amylase/subtilisin inhibitor from barley. // Carlsberg Research Communications. 1986. V.51. №1. pp.43-50.

177. Tavazza R., Tavazza M., Ordas R.J., Ancora G., Benvenuto E. Genetic transformation of potato (Solarium tuberosum): an efficient method to obtain transgenic plants. // Plant Science, 1988. V.59. pp. 175-181.

178. Terras F.R.G., Torrekens S., Van Leuven F., Osborn R.W., Vanderleyden J., Cammue B.P.A., Broekaert W.F. A new family of basic cysteine-rich plant antifungal proteins from Brassicaceae species // FEBS Lett. 1993. V.316. pp.233-240

179. Thevissen К., Ghazi A., De Samblanx G.W., Brownlee C., Osborn R.W., Broekaert W.F. Fungal membrane responses induced by plant defensins and thionins //J. Biol. Chem. 1996. V.271. №25. pp. 15018-15025.

180. Thevissen K., Osborn R.W., Acland D.P., Broekaert W.F. Specific high affinity binding sites for an antifungal plant defensin on Neurospora crassa hyphae and microsomal membranes // J. Biol. Chem. 1997. V.272. № 32176. pp. 311318.

181. Tornero P., Conejero V., Vera P. Identification of a new pathogen-induced member of the subtilisin-like processing protease family from plants. // J. Biol. Chem. 1997. V.272. №22. pp. 14412-14419.

182. Tornero P., Conejero V., Vera P. Primary structure and expression of a pathogen-induced protease (PR-P69) in tomato plants: Similarity of functional domains to subtilisin-like endoproteases // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. V.93. №13. pp.6332-6337.

183. Urbanek H. Fusarium: Mycotoxins, Taxonomy, and Pathogenecity / Ed. Chelkowski J. Amsterdam: Elsevier. 1989. pp.243-256.

184. Urbanek H., Kaszmarek A. Extracellular proteinases of the isolate of Botrytis cinerea virulent to apple tissues. // Acta Biochem. Pol. 1985. V.32. №2. -pp.101-109.

185. Walker-Simmons M., Ryan C.A. Isolation and Properties of carboxypeptidase from leaves of wounded tomato plants // Phytochemistry. 1980. V.19. №1. pp.43-47.

186. Walker-Simmons M., Ryan C.A. Wound-induced peptidase activity in tomato leaves. // Biochem Biophys Res Commun. 1977. V.74. №2. pp.411-416.

187. Wenzler H., Mignery G., May G., Park W. A rapid and efficient transformation method for the production of large numbers of transgenic potato plants. // Plant Science, 1989. V.63. pp.79-85.

188. Wilson K.A. The Release of Proteinase Inhibitors from Legume Seeds during Germination // Phytochemistry. 1980. V.19. №12. pp.2517-2519.

189. Wordragen M.E., Dons H.J.M. Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of recalcitrant crops. // Plant Molecular Biology Reporter, 1992. V.lO.No.l. -pp.12-36.

190. Wyatt S.D., Shepherd R.J. Isolation and characterization of a virus inhibitor from Phytolacca americana. // Phytopathology. 1969. V.59. № 12. -pp.1787- 1794

191. Yamada K., Shimada Т., Kondo M., Nishimura M., Hara-Nishimura I. Multiple functional proteins are produced by cleaving Asn-Gln bonds of a single precursor by vacuolar processing enzyme. // J. Biol. Chem. 1999. V. 274. № 4. -pp.2563-2570

192. Zhu Y., Huang Q., Qian M., Jia Y., Tang Y. Crystal structure of the complex formed between bovine beta-trypsin and MCTI-A, a trypsin inhibitor of squash family, at 1.8 A resolution. // J. Protein. Chem. 1999. V.18. pp.505-509.