Токсиколого-гигиеническая оценка новых гербицидов из класса сульфонилмочевин и их риск для работающих тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.07, кандидат биологических наук Мацевич, Анна Брониславовна

• Мацевич, Анна Брониславовна
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Мацевич, Анна Брониславовна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА

АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР

1.1. Токсические свойства сульфонилмочевинных препаратов

1.2. Побочные и отдаленные последствия поступления сульфонилмочевин в организм

1.3. Метаболизм сульфонилмочевин

1.4. Поведение сульфонилмочевин в объектах окружающей среды

1.5. Резюме

ГЛАВА

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА

ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА НОВЫХ СУЛЬФОНИЛМОЧЕВИННЫХ ПРЕПАРАТОВ

3.1. Изучение острой токсичности новых комбинированных препаратов

3.2. Изучение кумулятивных свойств сульфонилмочевинных гербицидов

3.3. Изучение токсичности сульфонилмочевин в хроническом эксперименте

ГЛАВА

ОЦЕНКА РИСКА ДЛЯ РАБОТАЮЩИХ ПРИ ПРИМЕНЕНИИ НОВЫХ

СУЛЬФОНИЛМОЧЕВИННЫХ ПРЕПАРАТОВ

ГЛАВА

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Токсиколого-гигиеническая оценка новых гербицидов из класса сульфонилмочевин и их риск для работающих»

ВВЕДЕНИЕ

Во всем мире переход к интенсивным технологиям выращивания растений ведет к увеличению использования агрохимикатов в сельском хозяйстве. Среди них особое место занимают пестициды, которые широко применяются в качестве химических средств защиты растений в борьбе с вредителями, сорняками и возбудителями болезней в целях повышения урожайности сельскохозяйственных культур.

В настоящее время в качестве инсектицидов, гербицидов, фунгицидов и регуляторов роста растений предлагаются к внедрению около 900 активных соединений, входящих в состав более 60000 препаратов (98). Однако ассортимент пестицидов развивается не столько за счет синтезирования новых соединений, а, главным образом, за счет внедрения различных комбинаций уже существующих действующих веществ пестицидов, что позволяет повысить эффективность и снизить нормы потребления препаратов.

Наряду с достижением большого экономического эффекта (доходы от применения пестицидов превышают расходы в среднем в 4 раза) (171) применение пестицидов не безразлично для здоровья животных и человека. Поступая в организм с воздухом, водой и пищей, они способны изменять ход биологических процессов в организме и приводить в отдельных случаях к нарушению функций организма человека (172).

Учитывая специфические особенности применения пестицидов (высокая биологическая активность, преднамеренность внесения в окружающую среду, способность циркуляции в ней и как следствие возможность контакта с пестицидами широких масс населения) требования к их токсиколого-гигиенической оценке из года в год возрастают. Это касается как оценки их потенциальной, так и реальной опасности. В частности, в качестве нового приема оценки потенциальной опасности предложено изучение характера кумулятивного действия пестицидов в интервале несмертельных уровней воздействия (Ракитский В.Н., 1985). Данный подход особенно актуален для гербицидов, которые, как правило, при однократном воздействии являются малотоксичными веществами, а при многократном воздействии вызывают эффект на несравнимо более низких уровнях, т.е. имеют очень широкую зону биологического действия (Ракитский В.Н., 1984).

В целях охраны здоровья работающих и населения, а также качества окружающей среды постоянно ведется поиск и отбор наиболее эффективных и одновременно максимально безвредных препаратов на основе предварительно проведенных токсиколого-гигиенических исследований по оценке степени их опасности и характера биологического действия на организм каждого вновь синтезированного пестицида, с целью разработки регламентов его безопасного применения (150).

Одним из крупных достижений в разработке новых химических средств защиты растений является создание пестицидов на основе сульфонилмочевинных препаратов,которые обладают высокой

гербицидной активностью, эффективны при низких нормах расхода (г/га) и одновременно являются малоопасными веществами для теплокровных как по токсичности, так и по выраженности отдаленных эффектов. Это в значительной степени позволяет снизить химический пресс на окружающую среду. Применение их в комбинациях с хорошо изученными с токсиколого-гигиенических позиций гербицидами базаграном (бентазон) и дикамбой (банвел) за счет синергического действия на растения позволяет существенно расширить спектр их гербицидного действия с одновременным существенным снижением (в несколько раз) норм расхода обоих компонентов.

К числу перспективных препаратов, предлагаемых для борьбы с однолетними и некоторыми многолетними двудольными сорняками при выращивании зерновых культур относятся новые отечественные комбинированные препараты Ковбой 40% в.г.р. (хлорсульфурон + дикамба), Кросс 16,4% в.г.р. (хлорсульфурон + хлорсульфоксим), Фарисей 1В (хлорсульфурон + бентазон), Земляк С (хлорсульфурон + бентазон + хлорсульфоксим), Прочный А (бентазон + хлорсульфоксим). В составе указанных препаратов в качестве основных действующих веществ используются соединения отечественного синтеза хлорсульфурон и хлорсульфоксим, которые являются производными класса арилсульфонилгетерилмочевин.

Изложенное позволяет рассматривать указанные комбинированные препараты в качестве наиболее перспективных гербицидов как с токсиколого-гигиенических, так и с сельскохозяйственных позиций.

В то же время для препаратов Фарисей 1В, Земляк С и Прочный А в настоящее время отсутствует токсиколого-гигиеническая информация, по Ковбою 40% в.г.р. и Кроссу 16,4% в.г.р. не изучено ингаляционное, местно-раздражающее и сенсибилизирующее действия, не оценены условия труда работающих. Отсутствуют сведения о характере кумулятивного действия и особенностях токсикодинамики в интервале несмертельных доз хлорсульфурона и хлорсульфоксима. Кроме того, отсутствуют сведения о реальной опасности данных комбинированных гербицидов для работающих. Решение этих вопросов определило актуальность и необходимость выполнения настоящей работы.

Целью настоящей работы является токсиколого-гигиеническая оценка опасности новых комбинированных гербицидов производных сульфонилмочевин Фарисея 1В, Земляка С, Прочного А, Ковбоя 40% в.г.р. и Кросса 16,4% в.г.р. и разработка на ее основе и профилактических мероприятий, предотвращающих вредное влияние на здоровье людей при их применении.

Достижение поставленной цели осуществлялось путем решения следующих задач:

В рамках оценки потенциальной опасности

- установить токсикопараметры сульфонилмочевинных гербицидов при однократном воздействии;

- изучить кумулятивные свойства новых гербицидов;

исследовать дозо-время-эффективные токсикодииамические зависимости биологического действия действующих веществ новых гербицидов.

В рамках оценки реальной опасности для работающих

- провести гигиеническую оценку условий труда при применении гербицидных препаратов Ковбоя 40% в.г.р., Кросса 16,4% в.г.р., Фарисея 1В, Земляка С и Прочного А;

- разработать комплекс профилактических мероприятий при применении сульфонилмочевинных препаратов.

Научная новизна полученных результатов состоит в том, что впервые:

- установлены основные параметры токсичности при различных путях поступления в организм новых сульфонилмочевинных гербицидов, оценены их кумулятивные свойства, характер местно-раздражающего и сенсибилизирующего действия, а также видовая чувствительность;

определены дозо-временные зависимости токсикодинамики основных действующих веществ гербицидов хлорсульфурона и хлорсульфоксима в зоне первичной декомпенсации, что послужило научной основой обоснования и прогноза пороговых и недействующих доз в условиях подострых опытов;

- изучены условия труда при применении новых гербицидов и проведена оценка степени риска изучаемых препаратов на организм работающих в реальных условиях их применения;

научно обоснованы ориентировочно допустимые уровни загрязнения кожных покровов работающих действующими веществами новых комбинированных гербицидов;

- разработаны нормативно-инструктивно-методические документы, необходимые для осуществления предупредительного и текущего санитарного надзора при применении этой перспективной группы пестицидов.

Практическая значимость работы состоит в том, что в результате проведенных комплексных токсиколого-гигиенических исследований разработаны нормативно-инструктивно-методические документы, необходимые для проведения предупредительного и текущего санитарного надзора при применении пестицидов, включая перспективную группу комбинированных гербицидов из класса сульфонилмочевин:

1. "Методические рекомендации по изучению и гигиенической оценке условий труда при применении пестицидов" (утверждено Госкомсанэпиднадзор России № 01/19-114-95 г.);

2. Санитарные правила по применению, транспортированию и хранению пестицидов (находятся на утверждении);

3. Технические условия Ковбой 40% в.г.р. ТУ 6-00-046-91277-11-97 (согласовано Департаментом Госсанэпиднадзора МЗ РФ 4.02.97. и Госхимкомиссией РФ 5.02.97.);

4. Технические условия Кросс 16,4% в.г.р. ТУ 6-00-046-91277-12-97 (согласовано Департаментом Госсанэпиднадзора МЗ РФ 4.02.97. и Госхимкомиссией РФ 5.02.97.);

5. Научно обоснованы величины ориентировочно допустимых уровней загрязнения кожных покровов работающих хлорсульфоксимом, хлорсульфуроном, бентазоном и дикамбой.

Положения выносимые на защиту:

1. Новые отечественные сульфонилмочевинные комбинированные гербициды и их основные действующие вещества при различных путях поступления в организм теплокровных являются мало и умеренно опасными веществами (3-4 класс опасности согласно гигиенической классификации пестицидов), обладающими слабо выраженным кожно-резорбтивным, местно-раздражающим, кумулятивным и сенсибилизирующим действиями. Характер биологического действия на организм характеризуется политропностью, что выражается в нарушении функционального состояния печени, нервной системы, системы крови, а также изменением основного интегрального показателя - массы тела.

2. Оценка риска для работающих при применении сульфонилмочевинных гербицидов, проведенная путем определения соотношений максимальных фактических уровней загрязнения воздуха рабочей зоны и кожных покровов операторов с соответсвующими величинами гигиенических нормативов в воздухе рабочей зоны и на кожных покровах, позволила оценить условия труда при использовании препаратов Ковбой 40% в.г.р., Кросс 16,4% в.г.р. и Фарисей 1В как отвечающих гигиеническим требованиям, а Земляк С и Прочный А, соответственно, как не отвечающих таковым и требующих пересмотра регламентов испытаний.

3. Оценка степени потенциальной и реальной опасности для работающих высокоизбирательных сульфонилмочевинных гербицидов и их действующих веществ явилась научной основой разработки нормативно-инструктивно-методических документов для проведения предупредительного и текущего санитарного надзора при их использовании.

ГЛАВА I АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР 1.1. Токсические свойства сульфонилмочевинных препаратов

Гербициды класса арилсульфонилгетерилмочевин (сульфоиил-мочевииы) синтезированы в конце 70-х годов фирмой Du Pont (США) (100). С момента открытия первого соединения (хлорсульфурона), проявляющего гербицидную активность, разработано и предложено более 500 пестицидов, относящихся к этому классу (37). Все они характеризуются низкими нормами расхода, высокой активностью и различаются по уровню остаточного действия в почве (112).

В общей структуре гербицидов - производных сульфонилмочевин можно условно выделить три части: арильную, сульфонилмочевинную и гетероцикл (рис 1). . j

!

Рис. 1. Структура сульфонилмочевинных пестицидов.

При изучении большого количества радикалов установлено, что наиболее активными в качестве гербицидов являются соединения, содержащие бензольное кольцо с заместителями в ортоположении, незамещенный сульфонилуреидный мостик и пиримидиновый или триазиновый гетероцикл с активными группировками в 4-м и 6-м

положениях. Наиболее эффективные заместители: в бензольном кольце -хлор, в гетероцикле - метильные и метоксигруппы (100).

По литературным данным соединения класса сульфонилмочевин относятся к умеренно- и малотоксичным соединениям: ЛД50 производных сульфонилмочевин (хлорсульфурон, хлорсульфоксим, амидосульфурон, флазасульфурон, хлоримурон, трибенурон-метил и другие) колеблется в пределах от 2000 до 5500 мг/кг (39,68).

Так для хлорсульфурона ЛД50 при оральном поступлении для крыс, мышей, морских свинок - 6548, 6777,8, 8015 мг/кг, соответственно; нанесении на кожу > 2000 мг/кг; ЛК50 - 9550 мг/кг (крысы), 8760 мг/кг (морские свинки). Не обладает раздражающим действием на кожу и слизистые оболочки; установлено слабо выраженное аллергенное действие. Порог острого действия для крыс при ингаляционном воздействии - 29 мг/м3 (по изменению состава периферической крови).

Для хлорсульфоксима по результатам исследований при однократном внутрижелдудочном ведении препарата установлена среднесмертельная доза для трех видов животных ЛД 50 для крыс - 1358,56 + 126,73 мг/кг, ЛД50 для мышей - 1211,31 + 150,38 мг/кг, ЛД50 для кроликов - 560,98 + 132,18 мг/кг.

Препарат не обладает раздражающим действием на кожу и обладает слабовыраженными раздражающими свойствами для слизистых оболочек.

Установлен порог острого действия при однократном ингаляционном воздействии = 19,9 мг/м3. Клиническая картина интоксикации - угнетение, петехии на ушных раковинах. Регистрировались изменения состава

периферической крови , перекисиого окисления липидов, активности ферментов, содержание мочевины.

В клинической картине острой интоксикации отмечался отказ от пищи, снижение массы тела, жидкий стул со слизью (явления энтероколита), снижение температуры тела. Шерсть животных становилась взъерошенной и внешний вид неопрятным. Выявлены: общая заторможенность животных, гиподинамия, статическая и динамическая атаксия. Животные слабо реагировали на звуковые, тактильные и болевые раздражители. Характерны "семенящая" походка, "горбовидная" спина. Проявления интоксикации у всех опытных животных были сходными и отмечались у мышей в 1-е сутки, у крыс и кроликов - на 2-3 сутки после введения препаратов. На высоте интоксикации (у мышей на 12 сутки, у крыс и кроликов 3-4 сутки после введения вещества) у некоторых животных появлялись сукровичные выделения из носа и глаз. Животные погибали в положении лежа на боку или животе после длительной агонии. Сроки наступления смерти животных зависели от дозы вводимого препарата. Через 4-5 суток у мышей, 5-6 суток у крыс и кроликов симптомы интоксикации исчезали.

Одной из важных проблем в эколого-гигиеническом аспекте при оценке опасности фитотоксикантов является проблема межвидовых, видовых и внутривидовых различий. Согласно классификации предложенной И.В.Саноцким по величине КВЧ (коэффициент видовой чувствительности) на уровне ЛД50 (1975) сульфонилмочевинные препараты можно отнести к соединениям, в которых видовые различия не

выражены (КВЧ < 3), что подтверждается данными таблицы 1. Также согласно литературным данным при расчете коэффициента половой чувствительности (КПЧ), как отношения среднесмертельной дозы для наименее чувствительного пола к таковой для наиболее чувствительного пола того же вида, выявлено, что для сульфонилмочевинных препаратов КПЧ < 2, т.е. половая чувствительность слабо выражена. Исходя из этого оценку токсичности препаратов, производных сульфонилмочевин, можно проводить на животных одного пола.

Таблица 1

Параметры видовой чувствительности соединений класса сульфонилмочевин

Название ЛД50 (крысы), ЛД5о (мыши), КВЧ Класс

препарата мг/кг мг/кг опасности

Бенсульфурон- 5000 10985 2,197 4

метил

Хлорсульфоксим 1358 1211 1,121 3

Хлорсульфурон 5545 2200 2,52 4

Этидимурон 5000 2500 2,0 4

Грамекс 10524 4674 2,25 4

Эллипс 688,24 482,5 1,43 3

Сульфонилмочевины обладают слабовыраженным кумулятивным эффектом по критерию "гибель животных" (ККум > 5), однако, учитывая изменения в динамике ряда показателей, характеризующих функциональную активность печени, системы гемоцитопоэза, основного обмена и массы тела, а также результаты патоморфологического

исследования внутренних органов экспериментальных животных, можно говорить о том, что эти соединения обладают функциональной кумуляцией (12,100). При длительном поступлении в организм в небольших количествах многие препараты этого класса оказывают политропное действие.

Показано, что сульфонилмочевины (хлорсульфурон, сульфометурон) действуют на растительные ткани, блокируя биосинтез аминокислот валина и изолейцина, путем ингибирования ацетолактатсинтетазы, которая катализирует первую стадию биосинтеза этих аминокислот (87). Этот механизм не характерен для теплокровных, вследствие чего сульфонилмочевинные препараты являются высокоизбирательными гербицидами.

Одной из особенностей токсического действия является способность снижать концентрацию глюкозы в крови (35,75). Впервые гипогликемический эффект сульфонилмочевинных препаратов был обнаружен в 1942 году (38), что при дополнительных исследованиях позволило синтезировать перспективные препараты гипогликемизи-рующего действия. Уже более 40 лет в клинической диабетологии широко применяются производные сульфонилмочевин. Некоторые из них используются в качестве самостоятельного метода лечения 20-40% больных сахарным диабетом (112).

Стимулирующее влияние сахароснижающих средств на секрецию инсулина зависит от длительности их введения. При остром внутрижелудочном введении препаратов увеличивается выделение

инсулина (11), достигающего максимального уровня в крови через 1 час после введения препарата (19). После повторного кратковременного применения увеличивается секреция инсулина, повышается толерантность к глюкозе (58,90). Повышение толерантности к глюкозе, часто наблюдаемое при лечении этими препаратами в течение нескольких месяцев при отсутствии заметного увеличения уровня инсулина в плазме или даже его снижение относят к их "экстрапанкреатическому" действию, в первую очередь, на скелетные мышцы, печень, жировую ткань (17,11).

Феномен "экстрапанкреатического" действия сульфонилмочевин объясняют изменением рецепторного звена биологического эффекта инсулина (67, 1, 51). Е.Р. Reaven, G. Gold, С.М. Reaven (108) обнаружили увеличение числа рецепторов к инсулину в моноцитах больных с инсулиннезависимым сахарным диабетом после лечения хлорпропамидом в течение 1-3 месяцев. F. Fallucca, G. Menzinger, S. Gambardella et al. (88, 82) уже через 10 дней после введения глипизида мышам обнаружили увеличение в 2,5 раза числа инсулиновых рецепторов в плазматических мембранах печени.

Антидиабетическое действие сульфонилмочевинных препаратов обусловлено также освобождением инсулина из связи с белками плазмы, стабилизацией эндогенного инсулина (67), торможением активности инсулиназы и глюкозо-6-фосфатазы, влиянием на тонус симпатоадреналовой системы (9, 2267 торможением липолиза в жировой ткани (67). Опосредованное через адренергическую иннервацию действие препаратов на уровень глюкозы в крови связано с тем, что только

адреналин способен подавлять и стимулировать секрецию инсулина в поджелудочной железе. Через альфа-адренорецепторы адреналин подавляет, а через бета-адренорецепторы - инициирует секрецию инсулина (102).

A.C. Славина и А.Г. Мазовецкий (67), а также М.Г. Дундуа и Т.А. Джалиашвилли (22) пришли к выводу, что основными эффектами при длительном поступлении сульфонилмочевинных препаратов в организм являются экстрапанкреатические; что при длительном применении антидиабетическое действие сульфонилмочевин проявляется вначале благодаря действию на рецепторы бета-клеток, а затем экстрапанкреатически, скорее всего нейрохимически на уровне хеморецепторов. В пользу этого положения свидетельствует их аддитивный эффект с ингибиторами пресинаптической моноаминооксидазы, что связано с опасностью развития гипогликемии (22). В.П. Черных (75) предполагает, что механизм действия препаратов, содержащих серу, сводится к увеличению количества глютатиона и меркаптогрупп, а это с одной стороны способствует усилению образования инсулина, с другой, стимулирует окислительные процессы в периферических тканях.

И.М. Беловалова, Г.Д. Гамбурцева и А.П. Князева (11) установили, что при длительном пероральном введении препаратов сульфонилмочевины только в 3% больных сохраняется их инсулинотропный эффект, у 97% положительный гипогликемизирующий эффект обеспечивается внепанкреатическим действием. Предполагают,

что резистентность к препаратам возникает вследствие "истощения" бета-клеток поджелудочной железы (21, 76) или изменения инсулиновых рецепторов клеток, быстрого расщепления инсулина в тканях (9). При этом возможно повышение титра антител к клеткам, вырабатывающим инсулин, что свидетельствует о деструктивном процессе в них (21, 59). Гистологическими исследованиями при этом не обнаружено повреждающего действия на поджелудочную железу.

Проанализировав клинические данные, В.В. Полторак и А.И. Гладких (58) пришли к выводу, что нет бесспорных доказательств, позволяющих считать сниженный секреторный ответ бета-клеток при длительной терапии сульфонилмочевинными препаратами результатом их истощающего влияния на инсулинопродуцирующий аппарат. Однако, в последующем В.В. Полторак, А.И. Гладких, К.О. Блох и др. (59) обнаружили развитие органоспецифических аутоиммунных реакций на антигены панкреатических островков при длительном пероральном введении мышам глибенкламида, а также усиление бета-цитотоксического эффекта сыворотки крови.

Таким образом, препараты сульфонилмочевины имеют сложный механизм действия, связанный с их гипогликемическими свойствами и в котором можно выделить два основных эффекта: секреторный (повышение секреции инсулина) и клеточный, который проявляется на стадии пострецепторного действия инсулина. Этот эффект обусловлен увеличением трансмембранного перемещения глюкозы и регуляцией процессов, контролируемых инсулином (82).

1.2. Побочные и отдаленные последствия поступления сульфонилмочевин в организм

Побочные явления при длительном поступлении препаратов в организм наблюдаются сравнительно редко (25, 52, 66) по даным одних исследователей в 3-4% случаев (25), в других - в 3-16% наблюдений (76). Суммарная частота осложнений не превышает 5% (26). Среди них можно выделить следующие группы: токсиколого-аллергические, диспептические реакции, осложнения, обусловленные фармакологическим эффектом и другие (76).

Я.Б. Максимович, А.М. Гайденко (38) отмечает аллергические реакции у 13% больных, леченных сульфонилмочевинными препаратами, диспептические явления - у 8%, гипогликемические реакции - у 7% больных.

В настоящее время описан целый ряд побочных реакций со стороны различных органов и систем.

Со стороны кроветворной системы осложнения, вызываемые препаратами сульфонилмочевины проявляются ятрогенной гемолитической анемией (по механизму образования иммунных комплексов) (92), различными формами гранулоцитопении (76, 27, 67) в редких случаях достигающих степени агранулоцитоза (52,113).

При длительном лечении антидиабетическими препаратами наблюдали апластическую анемию, сопровождающуюся костномозговой

плазмоцитарной реакцией с гипергаммаглобулинемией, которая исчезала после их отмены (33).

Университетской группой США по проблемме сахарного диабета (116) впервые сделано сообщение о связи между применением толбутамида и увеличением смертности от заболеваний сердечно-сосудистой системы и, в частности, от ишемической болезни сердца. Среди больных, получавших толбутамид, за исследованный промежуток времени, умерших по сравнению с больными находящимися на лечении одной диетой с применением placebo или инсулином в 2 раза больше. Повышенную смертность больных, получавших сульфонилмочевинные препараты, по крайней мере, частично объясняют более частой первичной фибрилляцией желудочков сердца. Сульфонилмочевины оказывают положительный инотропный эффект на миокард, усиливают автоматическую функцию волокон Пуркинье (44), что способствует увеличению размеров ишемического повреждения миокарда, возникновению аритмии.

Показано, что антидиабетические препараты не влияют на холинорецепторы. В тоже время они могут изменять сродство субпопуляции адренорецепторов, и, таким образом, активность соматических клеток (22,102).

Сообщение Университетской группы явилось основанием для рекомендации более ограниченного использования гипогликемических сульфамидов при сахарном диабете, хотя вопрос о токсичном влиянии этих препаратов на сердечно-сосудистую систему не решен. В ряде публикаций не подтверждаются (98, 99) или подвергаются сомнению (8, 25) выводы,

сделанные в работе. Исследователи не обнаружили различий в частоте поражения венечных сосудов, возникновения ретино- и нефропатий (24). Сделан вывод, что сульфанилмочевины не влияют на частоту и тяжесть диабетической ангиопатии.

Некоторые исследователи (8) ставят под сомнение корректность использованного группой по проблеме сахарного диабета (США) методического подхода: применение фиксированной для всех больных дозы толбутамида (1,5 г/сут) независимо от стадии сахарного диабета, наличия или отсутствия терапевтического эффекта; включение в одну группу больных с различными стадиями заболевания; преобладание женщин в группе, получавшей placebo. Сделана попытка распространения выводов, полученных при исследовании толбутамида на всю группу гипогликемизирующих сульфамидов.

При исследовании сердечно-сосудистой системы путем регистрации и анализа ЭКГ выявлены изменения, свидетельствующие о повышенном влиянии на сердце блуждающего нерва (82) (снижение частоты сердечных сокращений, удлинение интервалов P-Q и Q-T, снижение сегментов S-T и экстрасистолия). Кроме того, описываются случаи развития аллергического миокардита, интерстициального инфильтрата, микрогранулемы в субэпикарде и субэндокарде.

При наблюдении больших групп больных, принимавших сахароснижающие препараты в терапевтических дозах, не обнаружено изменения показателей функциональных печеночных проб: активности щелочной фосфатазы, трансаминаз, соотношения белковых фракций.

Вместе с тем приводятся данные о том, что под влиянием глибенкламида в печени нарушается обмен липидов (35).

По данным Максимович Я.Б., Гайденко А.И. (38), нарушения функции печени относятся к замедленным аллергическим реакциям: они проявляются не ранее чем на 3-5 неделе лечения и сопровождаются билиарным стазом и желтухой.

Описаны побочные реакции при лечении гипогликемизирующими сульфонилмочевинами в виде токсического холестатического гепатита (2), проявляющегося холестазом и желтухой (77, 4, 83), повышением активности трансаминаз, аномальной бромсульфофталеиновой реакцией (103,118).

В ряде работ (56, 91) показано повреждение почек химиотерапевтическими препаратами или продуктами их метаболизма как при непосредственном воздействии, так и гематологическим путем; отмечено, что в основном поражается эпителий главного отдела нефрона, повреждения клубочков очень редки.

Препараты сульфонилмочевины оказывают нефротоксическое действие, влияя как на гломерулярную, так и на тубулярную систему. Кроме того, описан случай развития сульфамидной токсической почки при сахарном диабете после сочетанного применения орабета и норсульфазола, где прием орабета сыграл сенсибилизирующую роль (76).

Прямое токсическое влияние на нервную систему при лечении сульфонилмочевинами, как правило, не отмечается (76). Наблюдаемые в начале лечения чувство давления в голове, раздражительность,

слезливость (38), шум в ушах, угнетение психики обусловлены регуляторными сдвигами (18) и исчезают самостоятельно даже при продолжении терапии (76). Наряду с этим вследствие токсического воздействия при длительном лечении у больных сахарным диабетом возможно развитие неврита лицевого нерва, который характеризуется быстрым (в течение нескольких дней) развитием без болей или вегетативных нарушений и восстановлением функции нерва через 2-4 недели без образования контрактуры мимических мышц после прекращения лечения. Отмечено поражение периферического отдела нервной системы при приеме сульфонилмочевинных препаратов (76). Описан случай нарушения функции зрительного нерва во время лечения хлорпропамидом (2).

А.А.Сохин, А.П. Лебединский, Г.М. Бутенко и соавт. (1984) отмечают, что пестициды оказывают угнетающее действие на неспецифические факторы защиты: фагоцитоз, комплемент, лизоцим и др. Воздействие различных пестицидов, по данным авторов, на специфическую иммунологическую реактивность носит фазовый характер: вначале они стимулируют синтез антител, затем подавляют его (61).

Аллергия к сульфонилмочевинным препаратам встречается относительно редко (119) и проявляется в виде как кожных симптомов, так и общих аллергических реакций (77, 38).

Выделение диспептических реакций в отдельную группу обусловлено тем, что они наблюдаются относительно чаще, чем другие побочные реакции (76, 82). Проявляются они в виде анорексии, тошноты, рвоты,

метеоризма, неприятных ощущений в области желудка, диареи (27) и могут быть обусловлены местным раздражением слизистой оболочки желудка сульфонилмочевинами или рефлекторным повышением кислотности желудочного сока (75).

По данным J.E. Jackson, R. Bressler (95) осложнения, связанные с фармакологическим эффектом препаратов сульфонилмочевины, обусловлены усилением гипогликемизирующего действия вследствие уменьшения связывания с белками плазмы, угнетения печеночного метаболизма и почечной экскреции, уменьшения глюконеогенеза, усиления секреции инсулина.

Описано неблагоприятное воздействие на микрофлору кишечника карбутамида и нарушение при этом функции пищеварения. В кишечнике уменьшалось количество представителей соН-флоры и увеличивался рост грибов (76, 82, 4). Под влиянием карбутамида прекращается рост возбудителей дизентерии Круузе-Зонне, препарат оказывает бактериостатическое действие на Е. coli, Salmonella и Shigella, установлена чувствительность к нему некоторых штаммов пневмококков.

В опытах с бактериальными культурами обнаружено, что хлорсульфурон ингибирует рост Е. coli и S. typhimurium (111). Причем этот процесс прекращается добавлением изолейцина и валина. Ими установлено так же, что хлорсульфурон вызывает ингибирование роста Е. coli в концентрации 100 мкг/л.

Выявлено, что некоторые заместители в бензольном кольце в пара-положении могут значительно влиять на тератогенную активность,

например хлор усиливает тератогенное действие, а метильная группировка - снижает. Тератогенный эффект проявляется в развитии грубых аномалий плодов: анофтальмии, микрофтальмии, мозговой грыжи, гидроцефалии. Наибольшей тератогенной активностью обладают надизан и метагексамид, наименьшей - бутамид, хлорпропамид и цикламид (75). В связи с этим рекомендуется во время беременности заменять антидиабетические оральные средства - инсулином (75). При этом обнаружено, что эмбриотоксическое и тератогенное действия сульфамидов не связаны с их гипогликемизирующими, антитиреоидными и антифолиевыми свойствами.

Возникающая гипонатриемия при применении сульфонилмочевин (R. A. Champion, D.S. Bell) (84) обусловлена их способностью усиливать действие антидиуретического гормона (18, 66). Кроме того, стимуляция секреции антидиуретического гормона может быть стимулирована острой гипогликемической реакцией вызываемой передозировкой сульфонилмочевин (5).

Сульфонамидные диуретические средства влияют также на процессы экскреции почками Са за счет уменьшения его клубочковой фильтрации и увеличения реабсорбции. Кроме того, предполагают, что эти препараты способны увеличивать всасывание ионов Са в кишечнике, в результате чего в организме устанавливается положительный баланс Са (75).

Сульфамидные диуретические средства влияют на показатели азотистого обмена. Так, фуросемид у больных с почечной

недостаточностью спосбствует повышению экскреции мочевины и уменьшению азотемии.

Действие препаратов сульфонилмочевины на показатели свертывающей и противосвертывающей системы крови неоднозначно. Диакарб и дихлотиазид через 1 час после введения замедляют свертывание крови, цикломезид начиная с 30-й минуты ускоряет ее (75).

Дихлотиазид и диакарб действуют на корковое вещество надпочечников лабораторных животных. Через 6 часов после введения в нем снижалось содержание аскорбиновой кислоты и холестерина (75). Этот эффект обусловлен усилением секреции альдостерона и глюкокортикоидов. При приеме диакарба возможно возникновение слабости, адинамии, сонливости, тахикардии, головокружения, тошноты, рвоты, шума в ушах (7), связанных со снижением внутричерепного и внутрилабиринтного давления, содержания ионов К в эндолимфе (75).

Данные о влиянии диуретических препаратов на эмбриогенез в литературе немногочисленны и поэтому их нельзя считать окончательными. Под влиянием дихлотиазида в дозе 20 мг/кг отмечена гибель 100% зародышей, диакарба - задержка развития почек у плода (75). По данным В.А. Макарова, А.Н. Кудрина, В.П. Черных и соавт. (35) эти препараты у беременных крыс вызывали деструкцию и набухание эпителия нефронов, расширение канальцев и вакуолизацию базальных частей клеток.

1.3. Метаболизм сульфонилмочевин

Производные сульфонилмочевин быстро всасываются в желудочно-кишечном тракте (66), проявляются в крови через 1-2 часа и достигают максимальной концентрации через 4-6 часов. Большинство препаратов сульфонилмочевины полностью переходя из кишечника в кровь менее чем за 4 часа, оказывают гипогликемическое действие уже через 30 минут. Наиболее интенсивно они всасываются в проксимальной части пищеварительного канала (75). Частичное связывание с белками способствует увеличению продолжительности их циркуляции в крови. М. Ruprah, Е. Perucca, A. Richens (109) считают, что интенсивность фармакологического действия лекарственных веществ определяется их свободной концентрацией, то есть количеством препарата, не связанного с белками.

Сульфонилмочевинная часть молекулы относительно устойчива in vivo, и метаболизм препаратов осуществляется в основном за счет биопревращения заместителей ароматического кольца в печени (55, 70).

Например, представитель изучаемого класса букарбан в организме ацетилируется и выделяется с мочой только в ацетилированной форме. Неацетилированная часть из почечных канальцев всасывается обратно в кровь (35). Бутамид (1Ч-(пара-толилсульфонил)-]Ч'-бутилмочевина) метаболизируется у человека, крыс и кроликов путем окисления

параметиловой группы и выделяется с мочой в виде параоксиметил - и паракарбокси- производных (соответственно 30 и 60% дозы) (55).

В моче больных, принимавших манинил (глибенкламид), содержатся его гидроксилированные производные и конъюгаты (35).

Под действием адебита, букарбана и глибенкламида усиливаются процессы гидроксилирования амидопирина (70). Ацетилирование и гидроксилирование являются основными путями биотрансформации многих ксенобиотиков (34).

Инсулин, введенный здоровым животным, также усиливает процессы гидроксилирования амидопирина. Видимо это обусловлено дефосфорилированием микросомальных цитохромов, что является непосредственной причиной повышения активности монооксигеназ (70). Введение интактным животным адебита и букарбана приводило к увеличению активности монооксигеназ (Е.А. Строев, З.В. Белкина) (70). По мнению авторов, эти препараты являются индукторами микросомального окисления.

Препараты сульфонилмочевины выводятся в основном через почки в неизмененном виде или в виде метаболитов. Карбутамид (букарбан) и хлорпропамид полностью выводятся через почки, 80-85% бутамида выводится через почки, 9% - через кишечник, 50% глибенкламида выводится через кишечник (64); 95% глюренорма выделяется через пищеварительный канал, 5% - через почки (6, 35).

1.4. Поведение сульфонилмочевин в объектах окружающей среды

Особенностью гербицидов на основе хлорсульфурона среди препаратов класса сульфонилмочевин является их значительное последействие на культуры севооборота, что ограничивает возможности их широкого применения в чистом виде на посевах зерновых культур. Для уменьшения их отрицательного действия на культуры севооборота и расширения спектра действия пестицидов А. Р. Selley, P.J. Haney, J.R. Ausiin (1985) рекомендуют применять смесевые препараты (112). При этом в смесях используются как соединения класса сульфонилмочевин, так и соединения других классов, например бентазон (базагран) и дикамба (банвел).

Для бентазона ЛД50 при оральном поступлении для крыс, кроликов, кошек - 1220, 750, 500 мг/кг соответственно; нанесении на кожу 2500 мг/кг; ингаляционном поступлении ЛС50 для крыс - 5,1 мг/л (экспозиция 4 часа). Оказывает слабо раздражающее действие на кожу и выраженное раздражающее действие на слизистые оболочки; обладает сенсибилизирующими свойствами.

Кумулятивного эффекта не выявлено на собаках. У крыс наблюдалось повышение времени свертываемости крови, содержания холестерина, увеличение объема мочи с малым удельным весом, замедление прироста массы тела. NOEL = 400 ppm (27 мг/кг массы тела).

Хроническая токсичность: в течение 2-х лет на мышах B6C3F1 испытывали дозы 100, 400, 2000 ppm, на крысах - Spraque Dawley - дозы

200, 400, 800, 1600 ppm. При обследовании мышей в дозах 400 и 2000 ррт у самцов и самок отмечено возрастание количества серых узелков печени. Кроме того, у самцов регистрировалось объизвествление стенок сперматогенного эпителия, не связанное с повреждением сперматогенеза. У крыс, подвергавшихся воздействию в дозах 400, 800 и 1600 ррт наблюдалось снижение удельного веса мочи, времен свертываемости крови, увеличение относительной массы печени и надпочечников. Патологических изменений не выявлено. NOEL для мышей - 100 ррт (12 мг/кг массы тела); NOEL для крыс - 200 ррт.

Канцерогенный эффект у мышей и крыс не наблюдался. Бентазон не оказывает повреждающего действия на репродуктивную функцию животных. Препарат является среднетоксичным по гигиенической классификации пестицидов и умеренно стойким (полное разложение в почве протекает в течение 3-4 месяцев). 3 класс опасности по гигиенической классификации.

Для дикамбы ЛД50 при оральном поступлении - 1707 мг/кг (крысы) и 4640 мг/кг (мыши), при нанесении на кожу - 200 мг/кг (крысы), 2000 мг/кг (кролики); JIK50 - 9600 мг/м3. Оказывает слабо раздражающее действие на кожу, раздражает слизистые оболочек глаз, является аллергеном средней силы, не обладает кумулятивным действием.

Сульфонилмочевины значительно различаются между собой по скорости деструкции в объектах окружающей среды. Основным путем трансформации хлорсульфурона, сульфометуронметила и метсульфуронметила в водоемах является гидролиз по -C-N-связям

сульфоиилмочевинного фрагмента молекулы (73). Скорость гидролиза снижается с увеличением рН и уменьшением температуры среды. Период полураспада указанных гербицидов варьирует от 2 недель в кислой среде (рН 5,0) до 1 года и более в щелочной - (рН 8,0). Гидролитическая устойчивость соединений снижается в ряду: хлорсульфурон метсульфуронметил - сульфуронметуронметил. Метсульфуронметил и сульфометуронметил в отличие от хлорсульфурона не подвергаются микробиологической трансформации, они обладают небольшой бактериостатической активностью (73, 72).

По уровню персистентности в почве препараты можно расположить в следующий ряд: хлорсульфурон > сульфуронметуронметил = метсульфуронметил = трисульфуронметил = хлоримуронэтил > тиаметурон > гранстар (37).

В натурных условиях, когда гербициды исчезают из почвы вследствие как разложения, так и вымывания, в летнее время, средний период полуисчезновения хлорсульфурона составляет 1-2 месяца (100, 79). Зимой, особенно при температуре ниже 00С скорость разложения их резко снижается (37). Аналогичные данные получены в модельных опытах с сульфометуронметилом (81).

В водных растворах происходит фотолитическое разложение сульфанилмочевин, однако в полевых условиях оно не играет существенной роли в деструкции этих гербицидов (106, 93). Летучесть этих соединений также можно не принимать во внимание при рассмотрении вопроса об исчезновении их из почвы, так как давление пара этих

гербицидов при 20-250С довольно низкое: в пределах 1,0 х 10-Ю _ 7,7 х ю-3 Па (37,114, 86).

Основной путь распада сульфонилмочевинных препаратов в почве -гидролиз до нетоксичных веществ (114, 79). Гидролиз сопровождается микробиологическим разложением до низкомолекулярных соединений (81, 106).

При химическом гидролизе препаратов сульфонилмочевины в почве происходит расщепление сульфонилмочевинного мостика с образованием соответствующих сульфонамида и гетероциклического амина, при микробиологическом разложении метильная группировка гидроксилируется, осуществляется ферментный гидролиз сульфонамидной связи, аналогичный химическому, а также возможна деэтерификация метоксигруппы до гидроксильной (37).

Соотношение путей детоксикации сульфонилмочевинных препаратов зависит от свойств среды. Так, в кислых почвах микроорганизмы не играют существенной роли в их начальной деградации (36), преобладает неферментный гидролиз гербицидов до нетоксичных продуктов. Химический гидролиз сопровождается микробиологическим разложением до низкомолекулярных соединений. При повышении рН почвы скорость неферментного гидролиза снижается, возрастает роль микробиологического разложения исходных соединений (106, 85). Идентифицированы почвенные микроорганизмы, активно метаболизирующие сульфонилмочевины (96). Среди них оказались грибы Aspergillus niger и Pénicillium spp., актиномицет Streptomyces griseolus.

Скорость разложения препаратов зависит также от температуры и влажности почвы (85, 114, 96, 80, 115), с повышением которых увеличивается скорость гидролиза, что способствует активизации микробиологических процессов. При повышении температуры на ЮОС скорость разложения хлорсульфурона увеличивалась в 2-3 раза (117), при увеличении влажности почвы с 37,5 до 75% скорость разложения увеличивалась в 2 раза.

Сульфонилмочевинные препараты умеренно подвижны. Большая часть внесенного агрохимиката остается в пахотном слое почвы, однако при определенных условиях миграционная способность препаратов может значительно возрастать (71, 104, 105). Изучая процессы вымывания сульфометурона и хлорсульфурона в полевых условиях препараты находили на глубине 30 см (81). По данным Ph.C. Kearney в грунтовые воды попадает менее 0,5% внесенных гербицидов.

В модельных опытах W. Mersie и C.L. Foy (101) установили, что наибольшее количество хлорсульфурона сорбировалось в почве при рН 4,2. С увеличением рН до 7,8 сорбция снижалась в 30 раз. Более низкая сорбция хлорсульфурона в щелочной среде обусловлена увеличением растворимости препарата при увеличении рН (100).

А.Д. Фокин, В.Ф. Ладонин, В.К. Кукушкин и др. (71) показали, что под влиянием средств химизации, увеличивающих рН почвы в пределах 2 единиц сорбируемость и миграционная способность хлорсульфурона в дерново-подзолистой почве и черноземе снижается в 1,5-2 раза. Снижение

кислотности обусловливало снижение сорбируемости и увеличение миграционной способности пестицида.

Сорбция препаратов сульфонилмочевины возрастает при увеличении содержания в почве гумуса. Так, при добавлении к почве 4% органического вещества сорбция хлорсульфурона возрастала в 3 раза по сравнению с таковой в нативной почве (104).

Сорбция хлорсульфурона почвой происходит также вследствие образования водородных связей и сил электростатического взаимодействия между электролитами и гетерополярной формой гербицида, образовавшейся в результате переноса заряда (86).

Скорость вымывания сульфонилмочевин связана с движением почвенной влаги, ионизацией соединений и соответствующим увеличением подвижности (37).

Результаты опытов Н. Nillson свидетельствуют о том, что хлорсульфурон поднимается вверх с капиллярной водой (104, 105). Изучение влияния свойств почвы на гербицидную активность хлорсульфурона показало, что она зависит, в первую очередь, от содержания органического вещества в почве: коэффициент корреляции между ЕД50 и содержанием органического вещества равен 0,9 (101).

1.5. Резюме

Анализ литературных данных свидетельствует о перспективности применения в сельском хозяйстве нового поколения гербицидов из класса сульфонилмочевин и смесей на их основе. В силу различий в механизме действия этой группы соединений на растения и организм теплокровных,

указанные гербициды являются высокоизбирательными веществами. Это означает, что блокирование ацетолактатсинтетазы в растениях и отсутствие данного механизма в организме теплокровных приводит к появлению высокой эффективности (токсичности) для сорных растений и низкой токсичности и опасности для теплокровных. Как правило сульфонилмочевинные пестициды являются малотоксичными веществами, не обладают кумулятивными свойствами по критерию "гибель", не обладают отдаленными эффектами действия. В то же время, данные литературы свидетельствуют о способности

сульфонилмочевинных препаратов вызывать изменения функционального состояния различных органов и систем организма (масса тела, печень, система крови, почки, нервная система и др.) в зависимости от особенностей их химической структуры. Это диктует необходимость дальнейших исследований характера их биологического действия на организм теплокровных, особенно в интервале несмертельных доз. Отсутствие сведений о степени токсичности, выраженности кумулятивных свойств для смесевых гербицидов на основе сульфонилмочевинных соединений, также о степени их риска для работающих, диктует необходимость проведения исследований по оценке степени их потенциальной опасности для теплокровных и реальной опасности для работающих с указанными препаратами. Проведение указанных исследований является научной основой для разработки профилактических мероприятий, предотвращающих вредное влияние их на здоровье людей в процессе их применения.

Заключение диссертации по теме «Гигиена», Мацевич, Анна Брониславовна

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что новые сульфонилмочевннные гербициды Фарисей 1В, Земляк С, Прочный А, Ковбой 40% в.г.р. и Кросс 16,4% в.г.р. согласно Российской гигиенической классификации пестицидов (№ 0119/126-17 от 15.08.96.) при однократном пероральном, дермальном и ингаляционном воздействии относятся к 3 и 4 классам опасности (умеренно и малоопасные соединения), обладают слабо выраженным кожно-резорбтивным, местно-раздражающим и сенсибилизирующим действием. Видовая чувствительность слабо выражена.

2. Показано, что при многократном 2-х месячном пероральном введении все изученные гербициды обладают слабо выраженными кумулятивными свойствами по критерию "летальность" (коэффициент кумуляции во всех сериях опытов > 5). Отсутствие в динамике наблюдения выраженных прогрессирующих изменений регистрируемых показателей свидетельствует о том, что для изучаемых препаратов не характерна функциональная кумуляция.

3. Установлено, что при длительном 6-ти месячном пероральном введении экспериментальным животным хлорсульфурон и хлорсульфоксим вызывают изменение массы тела, функционального состояния печени, нервной системы, системы крови, что определяет политропный характер их биологического действия на организм.

4. Выявлены наиболее чувствительные показатели интоксикации сульфонилмочевинными действующими веществами, явившиеся научной основой для обоснования пороговых (Lim ch) и недействующих (NOELch) доз. Пороговая и недействующая дозы для хлорсульфурона - X и 0,2 мг/кг м.т. (масса тела, количество лейкоцитов в крови), соответственно для хлорсульфоксима - 0,02 и 0,004 мг/кг массы тела (поведенческие реакции, СПП, количество эритроцитов в крови).

5. На основании установленных дозо-временных зависимостей токсикодинамики хлорсульфурона и хлорсульфоксима в интервале несмертельных доз показана возможность прогнозирования их пороговых и недействующих доз при хроническом воздействии в условиях подострого эксперимента. Достоверность прогноза подтверждена результатами хронических опытов.

6. Использование разработанной модели оценки риска пестицидов для работающих позволило оценить условия труда при применении гербицидов Ковбой 40% в.г.р., Кросс 16,4% в.г.р. и Фарисей 1В как отвечающих гигиеническим требованиям, Прочный А и Земляк С соответственно как не отвечающих таковым и требующие пересмотра регламентов испытаний.

7. Проведенные комплексные натурно-экспериментальные токсиколого-гигиенические исследования сульфонилмочевинных препаратов и их действующих веществ позволили разработать нормативно-инструктивно-методическйе документы, необходимые для проведения предупредительного; и текущего санитарного надзора при применении новой группы гербицидов в сельском хозяйстве.

ГЛАВА V ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Выполнение настоящей работы позволило оценить опасность новых комбинированных гербицидов из класса сульфонилмочевин и разработать профилактические мероприятия, предотвращающие вредное влияние изучаемых агротоксикантов на здоровье людей и окружающую среду. Проведенные исследования были направлены на выявление степени потенциальной опасности и характера биологического действия новой группы сульфонилмочевинных гербицидов на организм теплокровных, оценки степени их реальной опасности (риска) для работающих и разработку профилактических мероприятий, предупреждающих их вредное влияние на организм человека.

Сравнительный анализ литературных данных по токсичности сульфонилмочевинных препаратов и результатов собственных исследований по изучению биологического действия новых комбинированных гербицидов Фарисей 1В, Земляк С, Прочный А, Ковбой 40% в.г.р. и Кросс 16,4% в.г.р. показал, что для препарата Фарисей 1В ЛД50 составило 3154 мг/кг, для Земляка С - 2226,26 мг/кг, для Прочного -3202,5 мг/кг, для Ковбоя 40% в.г.р. - 2738 мг/кг и для Кросса 16,4% в.г.р. -5487 мг/кг. На основании этих данных изученные соединения можно отнести к малотоксичным веществам при пероральном введении (4 класс опасности согласно «Методическим рекомендациям по оценке степени опасности пестицидов (гигиеническая классификация)»(40) ЛД50 > 1000 мг/кг). Механизм действия пестицидов на основе сульфонилмочевин заключается, по мнению Джорджа Левитта (100), в подавлении энзима, имеющегося только у растений (ацетолактатсинтетазы), что является основной причиной высокой избирательности их действия и может в определенной степени объяснить их безопасность для всех нерастительных организмов, включая теплокровных.

Проявления клинических признаков интоксикации при изучении сульфонилмочевинных гербицидов, согласно данным литературы, характерны для препаратов данного класса и выражаются: в неопрятном виде животных, «горбовидной» спине, «семенящей» походке, отказе от пищи, замедленном дыхании и слабой реакции на тактильные, звуковые и болевые раздражители.

На основании собственных исследований рассчитаны коэффициенты видовой чувствительности (КВЧ) для изучаемых пестицидов. Это является важным при оценке новых фитотоксикантов, так как при значительной выраженности межвидовых различий имеется значительный риск исчезновения отдельных видов и нарушения биологического равновесия в биоценозах, что косвенно может повлиять на ухудшение условий жизни человека (В.Н.Ракитский, 1998).

Изучение ингаляционной токсичности данных препаратов указало на возможность действия соединений через дыхательные пути. При проведении опытов смертельных концентраций достигнуто не было. Однако из ряда источников известно, что соединения класса сульфонилмочевин относятся в основном к умеренно опасным веществам по ингаляционному действию (3 класс опасности по «Методическим рекомендациям по оценке степени опасности пестицидов (гигиеническая классификация)» 40) JIK5o - 2001 - 20000 мг/м3). Проведенные нами исследования показали, что ЛК50 для изучаемых сульфонилмочевинных препаратов больше 2000 мг/м3, что согласуется с данными литературы (А.В.Болотный, В.Н.Ракитский, 1991).

Также установлено, что новые комбинированные препараты практически не обладают аллергенной активностью, о чем свидетельствуют отрицательные результаты специфических аллерготестов: кожного теста и тестов «in vitro». Это согласуется с литературными клиническими данными. Так Я.Б.Максимович и А.М.Гайденко отмечали слабо выраженные аллергические реакции только у 13% больных в процессе леченния сульфонилмочевинными препаратами (38).

Проведение подострого эксперимента с изучаемыми гербицидами по методу Ю.С.Кагана не вызвало гибели животных при введении 1/10 ЛД50 в течение 2-х месяцев. Данное обстоятельство не позволило установить тип кумулятивного действия по критерию «гибель животных». В то же время отмечались достоверные изменения массы тела подопытных животных, способности суммировать подпороговые импульсы, достоверное увеличение числа эритроцитов и снижение концентрации гемоглобина, выявлены также изменения массы внутренних органов (легкие и надпочечники). Однако, отсутствие нарастания динамики указывающих эфектов свидетельствует об отсутствии функциональной кумуляции изучаемых веществ, что согласуется с данными литературы по другим препаратам, производным класса сульфонилмочевин Эллипсу, Грамексу и другим (12, 13, 100).

При острой и подострой интоксикации изученные комбинированные препараты оказывали преимущественное действие на функциональное состояние центральной нервной системы, печени и системы крови и интегрального показателя - массы тела, что характерно и для действующих веществ данных соединений хлорсульфурона и хлорсульфоксима.

Во время проведения хронических опытов с действующими веществами хлорсульфуроном и хлорсульфоксимом отмечены достоверные изменения ряда физиологических показателей: изменения массы тела подопытных животных, способности к суммации подпороговых импульсов, а также изменения в поведенческих реакциях животных, что в первую очередь указывает на влияние данных соединений на центральную нервную систему, особенно хлорсульфоксима. По данным ряда авторов (12, 13, 120), для хлорсульфурона чувствительными показателями являются изменения двигательной и ориентировочной (норковый рефлекс) активностей.

Выявленные у экспериментальных животных увеличение количества лейкоцитов и уменьшение числа эритроцитов и концентрации гемоглобина при введении хлорсульфурона и хлорсульфоксима также согласуются с данными литературы (12,100,101).

Известно, что печень принимает непосредственное участие в обезвреживании токсических соединений и регуляции гомеостаза организма. Результаты исследований показали, что изученные препараты и их действующие вещества при длительном введении в организм приводят к изменению относительной массы печени, а также напряжению ряда функций органа, о чем свидетельствует снижение числа двуядерных гепатоцитов. При введении действующих веществ в течение 6-ти месяцев наблюдалось не только снижение числа двуядерных гепатоцитов, но и дистрофические изменения в клетках; на этом фоне происходило увеличение количества и размеров ядрышек в других гепатоцитах у животных, получавших хлорсульфоксим в дозах 0,5 и 0,1 мг/кг и 5 мг/кг -при введении хлорсульфурона.

По мере снижения доз действующих веществ морфоструктурные изменения были менее выражены и зависили от дозы введенного препарата. Так у животных, получавших хлорсульфоксим в дозе 0,5 мг/кг выявлены достоверные изменения относительной массы надпочечников, тимуса, легких и печени, отмечены морфоструктурные изменения в этих органах. При введении вещества в дозах 0,1 и 0,02 мг/кг отмечены только изменения в печени. В дозе 0,004 мг/кг морфофункциональное состояние органов подопытных животных не отличалось от контрольных. При введении хлорсульфурона морфоструктурные изменения были также дозозависимы и проявлялись в дозе 5 мг/кг в виде нарушений в селезенке, надпочечниках и печени, а в дозе 1 мг/кг в виде изменений только в печени. В дозе 0,2 мг/кг существенных изменений во внутренних органах отмечено не было.

Согласно данным литературы большая часть препаратов выделяется с мочой, следовательно, ведущая роль в экскреции продуктов метаболизма принадлежит почкам.

При гистологическом изучении почек после длительного введения хлорсульфурона и хлорсульфоксима отмечено увеличение числа эпителиальных клеток со светлой пенистой цитоплазмой, что может указывать на усиление функции извитых канальцев.

В результате хронических экспериментов установлено, что доза для хлорсульфурона - 5 мг/кг (1/1300 ЛД50) является действующей (стойкие изменения показателей, возникновение ряда патоморфологических изменений во внутренних органах и изменения относительного коэффициента массы печени, надпочечников, селезенки).

Уровень воздействия 1 мг/кг (1/6500 ЛД50) - пороговый. На это указывает наличие нестойких изменений некоторых показателей: изменение массы тела крыс, общего белка в сыворотке крови, количество лейкоцитов в крови, фазовый характер изменений СПП, а также слабо выраженные морфологические изменения состояния внутренних органов, и в первую очередь, - печени.

0,2 мг/кг (1/32500 ЛД5о) - недействующая доза. При воздействии этой дозы значимых изменений регистрируемых показателей не отмечалось.

Для хлорсульфоксима дозу 0,5 мг/кг (1/1,1х104 ЛД5о) - считаем действующей. На это указывает количество и стойкость изменений регистрируемых показателей.

0,1 мг/кг (1/5,5х104 ЛД50) - также величина действующая, так как у подопытных животных отмечалось снижение возбудимости нервной системы, массы тела, изменение биохимических показателей (АЛТ, общий белок), а также морфофункциональные сдвиги: возрастание количества двуядерных гепатоцитов и размера ядрышек в ядрах гепатоцитов, свидетельствующих о повышении их функциональной активности и, в первую очередь, об активизации белковосинтетической функции; увеличении количества гемосидерина в селезенке, что можно связать с усилением распада эритроцитов.

Уровень воздействия 0,02 мг/кг - можно считать пороговым, а 0,004 мг/кг - недействующим. Это объясняется тем, что хлорсульфоксим в дозе 0,02 мг/кг вызывает нестойкие фазовые изменения массы тела, а также показателей, характеризующих состояние нервной системы. При самой низкой дозе хлорсульфоксима (0,004 мг/кг) изменения регистрируемых показателей отмечено не было.

В связи с выше изложенным наиболее чувствительными для хлорсульфурона являются следующие показатели - в первую очередь, изменение массы тела и количества лейкоцитов в крови животных, что согласуется с литературными данными (12,100). Для хлорсульфоксима характерной особенностью является действие его на центральную нервную систему и систему крови. К наиболее чувствительным показателям относятся изменения вертикальной и горизонтальной двигательной активности, способность к суммации подпороговых импульсов (СПП), а также изменения содержания эритроцитов в крови подопытных животных, что характерно для большинства представителей этого класса (12, 93, 100).

Внедрение новых химических средств защиты растений в практику сельского хозяйства требует ускоренного проведения токсиколого-гигиенической оценки опасности фитотоксикантов и, в первую очередь, установления их пороговых и недействующих доз при длительном воздействии.

Применение гипотезы профессора В.Н.Ракитского (1997 г.) о возможности прогнозирования не только параметров подострой, но и хронической токсичности на основании краткосрочных экспериментов с подробным изучением изменений чувствительных показателей в стадии первичной декомпенсации позволило получить результаты, сравнимые с результатами хронических опытов. По мнению В.Н.Ракитского, теоретической основой указанной закономерности является тот факт, что в первой фазе интоксикации первичное нарушение компенсаторных свойств организма вызывают все действующие, в том числе и пороговые, дозы фитотоксикантов.

Наиболее чувствительными в фазе первичной декомпенсации являются те же тесты, что и при хроническом воздействии. Анализ чувствительных показателей в стадии первичной декомпенсации выявляет в первые недели эксперимента эффективные и недействующие дозы, соответствующие таковым при хроническом воздействии, что было подтверждено результатами наших исследований. Наименьшие из исследованных доз в краткосрочном опыте (хлорсульфурон - 0,2 мг/кг, а хлорсульфоксим - 0,004 мг/кг) соответствовали недействующим дозам, полученным при длительном 6-месячном воздействии. Пороговыми дозами в краткосрочных опытах считались дозы для хлорсульфурона 1 мг/кг и для хлорсульфоксима - 0,02 мг/кг, что также соответствует данным, полученным в хроническом эксперименте. Полученные результаты позволяют рекомендовать данную методику в качестве надежного экспресс-метода для установления основных токсикометрических параметров, подтвержденную нами на примере нового класса сульфонилмочевинных гербицидов.

Производство и применение пестицидов требует их подробного изучения с позиций условий труда для предотвращения вредного влияния на здоровье работающих и населения. При этом, в первую очередь, необходим контроль за содержанием препаратов в воздухе рабочей зоны, на кожных покровах и одежде работающих. Согласно действующим «Методическим указаниям по гигиенической оценке новых пестицидов» (К., 1988) обнаружение веществ на коже в любых количествах рассматривается как показатель неблагоприятных условий труда. По нашему мнению, указанное положение почти не выполнимо в практических условиях и противоречит международной практике.

В настоящее время в мире получили наибольшее распространение немецкая и английская модели оценки риска пестицидов для операторов

German Model Labelling of pesticides-Health Protection /March 1993/; Martin AD Apredidive Model for the Assessment of Dermal Exposure to Peaticides, Proceeding of Prediction of Percutaneous Penetration, Ed Scott RC, Guy R, and Hadgraft J, pub ШС Technical Serviees London, 1990).

Суть этих моделей заключается в определении соотношений между прогнозируемой величиной суммы ингаляционной, дермальной и пероральной экспозиций и недействующим уровнем, установленным в подостром токсикологическом эксперименте на лабораторных животных. Однако, результаты проведенных нами подострых опытов в зоне первичной декомпенсации ставит под сомнение данный критерий допустимости риска при условии правильной постановки подострого опыта.

Нами была проведена оценка степени реальной опасности новых комбинированных гербицидов Фарисей 1В, Земляк С, Прочный А, Ковбой 40% в.г.р. и Кросс 16,4% в.г.р. по отечественной модели, разработанной совместно Московским НИИ гигиены им. Ф.Ф.Эрисмана и НИИ гигиены и профпатологии МЗМП РФ (г. Санкт-Петербург) с нашим участием. г

Сущность предлагаемой модели оценки риска вредного воздействия для операторов заключается в следующем. Реальная опасность ингаляционного воздействия определяется соотношением фактического содержания пестицида в воздухе рабочей зоны к ПДК или ОБУВ в воздухе рабочей зоны. Реальная опасность дермального воздействия определяется соответственно путем определения соотношения между фактическим содержанием пестицида на кожных покровах оператора (Дф) и ОДУ загрязнения кожных покровов. Опасность суммарного воздействия пестицида (ингаляционного и дермального) определяется по формуле суммационной токсичности:

1ф ДФ

--------------------------+--------------------------< 1

ПДК (ОБУВ) в.р.з. ПДК (ОДУ) з.к.п.

Коэффициенты безопасности при этом не должны превышать 1. Указанные соотношения определяются при максимальных нормах расхода препаратов.

Нашими исследованиями показано, что содержание действующих веществ, изученных гербицидов, в воздухе рабочей зоны нигде не превышало существующих гигиенических нормативов. Загрязнения кожных покровов носили только локальный характер (особенно на ладонных поверхностях). Обнаружение небольших количеств действующих веществ на закрытых участках тела указывало на несовершенство защитных качеств спецодежды.

Расчет степени реальной опасности (риска) для оператора при обработке площади не менее 5 га показал, что применение изученных комбинированных препаратов, производных класса сульфонилмочевин, не представляет опасности для организма человека. Кроме того наши исследования указывают, что для правильной оценки степени риска необходимо использование стандартной площади (не менее 5 га) для проведения обработки. При использовании различных площадей обработки ряд перспективных препаратов может не пройти по риску из-за небольшой величины данного параметра, как это было в нашем случае с препаратами Прочный А и Земляк С, что требует пересмотра регламентов их испытаний.

Таким образом в результате проведенных комплексных токсиколого-гигиенических исследований были установлены в плане оценки потенциальной опасности: основные токсикометрические параметры новых сульфонилмочевинных препаратов, производящихся на территории России, оценен характер их биологического действия на организм теплокровных и установлены дозо-время-эффективные зависимости токсикодинамики действующих веществ, производных сульфонилмочевин, что послужило научной основой обоснования и прогноза величин их пороговых и недействующих уровней воздействия. Оценена степень риска изученных препаратов для операторов в реальных условиях их применения. Это позволило разработать комплекс профилактических мероприятий, обеспечивающих безопасное применение этой перспективной группы гербицидов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Мацевич, Анна Брониславовна, 1999 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Анциферов М.Б., Любарская С.Г. Сравнение специфического связывания инсулина рецепторами эритроцитов и мононуклеарных клеток крови у больных сахарным диабетом П типа. // Сб. науч. тр. Саратовского мед. инст. Т. СХХШ. / Под ред. Н.Р. Иванова. - Саратов, 1985, с. 11-13.

2. Балаболкин М.И., Гаврилюк Л.И. Сахарный диабет: патогенез, клиника, лечение. - Кишинев, Штиинца, 1983, 198 с.

3. Балаболкин М.И. Новое в патогенезе и лечении сахарного диабета. // Сахарный диабет ( новое в патогенезе, диагностике, лечении). Межвуз. сб. науч. тр.: Под ред. В.В. Турусова, Горький, ГМИ, 1987, с. 9-14.

4. Балаболкин М.И. Эндокринология. Учебное пособие. М., Медицина, 1989, 416 с.

5. Балаболкин М.И., З.И.Левитская Гаромнальная регуляция водно-электролитного обмена (лекция) //Тер. архив 1989 № 10 т. LX1 — С.83-87.

6. Балаболкин М.И. Новое в потогенезе и лечении сахарного диабета // Сахарный диабет (новое в потогенезе, диагностика, лечение) Межвуз. сб. научных трудов. Под ред. В.В.Турусова - Горький, ГМИ, 1987, с.9-14.

7. Баранов В.Г., Соколоверова И.М., Гаспарян Э.Г. и др. Экспериментальный сахарнй диабет. Роль в химической диабетологии. -Л./Наука, 1983. 240 с.

8. Баранов В.Г., Гаспарян Э.Г. Спорные вопросы об эффекте производных сул^фонилмочевин у больных сахарным диабетом и

перспективы их применения. // Пробл. эндокринол. 1983, Т. XXIX, № 1, с. 3-7.

9. Батрак Г.Е. Фармакология: учебник для медицинских институтов. К.: Вища школа, 1980, 456 с.

10. Беленький МЛ. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. JL, 1963,149 с.

11. Беловалова И.М., Гамбурцева Т.Д., Князева А.П. и др. Изучение характера секреции гормонов поджелудочной железы и некоторых метаболических показателей при остром и хроническом введении пероральных сахароснижающих препаратов. // Пробл. эндокринол. - 1990. Т. XXXVI., № 1, с.14-20

12. Болотный A.B., Ракитский В.Н. Разработка ПДК в воде водоемов трех регуляторов роста растений (Круг, Эллипс, Грамекс) // Отчет. - Киев, 1991, 125 с.

13. Болотный A.B., Ракитский В.Н., Повякиль Л.И. Токсиколого-гигиеническая оценка новых химических веществ и перспективных пестицидов.//ВНИИГИНТОКС, Киев, 1989, 86 с.

14. Буслович С.Ю., Дубенецкая М.М. Вопросы гигиены применения гербицидов.// Гигиена применения, токсикология пестицидов и полимерных материалов: Сб. науч. тр./ ВНИИГИНТОКС. - Киев, 1983, с. 57-60.

15. Временные методические указания по определению остаточных количеств хлорсульфурона в воде и почве методом газожидкостной хроматографии с детектором по захвату электронов № 5334-91 от 22.08.91

г.// Сб. МУ по определению микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде № 20, т. 2, М., 1993, с. 284.

16. Временные методические указания по определению остатков Глина 9хлорсульфурона) в зерне и соломе зерновых колосовых культур, в семенах и полове льна джолгунца методом ВЭЖХ № 5018-89 от 8.06.89 г.// Сб. МУ по определению микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде ч. 19 (кн.2), М., 1993, с. 200.

17. Врочинский К.К., Маковский В.Н. Применение пестицидов и охрана окружающей среды. - Киев: Вища школа, 1979, 208 с.

18. Галлер Г., Штрауценберг С.Эр. Пероральная терапия диабета.: Пер. с нем. - М., Медицина,1973, 343 с.

19. Гаспарян Э.Г. Лечение ранних стадий сахарного диабета у больных ожирением. // Сахарный диабет. Вопросы патогенеза и лечения. Сб. науч. труд. Ленингр. инст. усовер. врачей. - Л.: 1986, с. 32-49.

20. Генес С.Г. О некоторых вопросах профилактики и лечения панкреатического сахарного диабета. // Клин. мед. 1978, № 7, с. 87-95.

21. Гус М.И., Круузе Ы.П., Хийр В.Э. Динамика иммунореактивного инсулина в ответ на аргинин у больных инсулиннезависимым сахарным диабетом, резистентных к препаратам сульфонилмочевины. // Сб. науч. тр. Саратовского мед. инст. № СХХШ // Под ред. Н.Р. Иванова, Саратов, 1985, с. 98-100.

22. Дундуа М.Г., Джалиашвилли Т.А. Экстрапанкреатические, нейрохимические механизмы действия предиана, глибенкламида и инсулина. // Сахарный диабет (новое в патогенезе, диагностике и лечении).

Межвуз. сб. науч. тр. / Под ред. В.В. Турусова. - Горький, ГМИ, 1987, с.110-114.

23. Дыбан А.П., Тиходеева И.И., Хромов-Борисов Н.В. Связь тератогенной активности с химической структурой молекул лекарственных веществ. // М., "Медицина", Вестник АМН СССР, 1975, № 12, с. 78-88.

24. Ефимов A.C., Тихонова Е.П., Литвиненко А.Ф. и др. Частота поражений сердечно-сосудистой системы у больных сахарным диабетом при различных видах лечения. // Пробл. эндокринол. 1975, Т. XXI, № 3, с. 710.

25. Ефимов A.C., Боднар П.Н., Зелинский Б.А. Эндокринология. - К.: Вища школа,1983, 328 с.

26. Ефимов A.C., Скробонская H.A., Карабун П.М. и др. Состояние и перспективы лечения сахарного диабета. // Клин, мед., 1990, № 10, с. 17-23.

27. Златкина А.Р., Сидельникова М.В. Комплексное лечение сахарного диабета. // Клин. мед. 1984, Т. LXH, № 8, с. 138-142.

28. Каган Ю.С. Общая токсикология пестицидов. - Киев: Здоров'я, 1981 - 174 с.

29. Каган Ю.С. Процесс адаптации и кумуляции в организме при воздействии химических соединений.// Профилактическая токсикология, Сб. уч.-метод. материалов. М., 1984, с. 256-267.

30. Каган Ю.С. Основные результаты и задачи исследований по токсикологии пестицидов.// Гигиена труда и профессиональные заболевания. - 1986, № 8, с 1-5.

31. Казанбиев Н.К., Солтаханов P.M. Современная тактика терапии сахарного диабета. // Сов. мед. - 1984, № 11, с. 48-51.

32. Красовский Г.Н. Возрастная, половая и видовая чувствительность к химическим веществам.// Профилактическая токсикология: Сб. учебно-методич. материалов. ЦМП ГКНТ, 1984 - т. 1, с. 268-281.

33. Крылов A.A., Гордиенко Е.А. К вопросу о гематологических осложнениях при длительном применении пероральных антидиабетических препаратов. // Пробл. эндокринол. 1970, Т. XVI, № 1, с. 36-37.

34. Лакин K.M., Крылов Ю.Ф. Биотрансформация лекарственных веществ. - М., Медицина, 1981, 344 с.

35. Макаров В.А., Кудрин А.Н., Черных В.П. и др. Фармакология сульфаниламидных сульфамидных препаратов: фармакокинетика, фармакодинамика, фармакотерапия. К.: Здоров'я. 1982. 143 с.

36. Макеева-Гурьянова Л.Т., Спиридонова Ю.Я., Шестаков В.Г. Сульфонилмочевины - новые перспективные гербициды.//Агрохимия, 1987. № 2 с. 115-128.

37. Макеева-Гурьянова Л.Т., Спиридонова Ю.Я., Шестаков В.Г. Сульфонилмочевины - новые перспективные гербициды. - М.: ВНИИТЭИагропром, 1989. - 57 с.

38. Максимович Я.В., Гайденко А.И. Прописывание, несовместимость и побочное действие лекарственных средств. 4-е изд., перераб. и доп. - К.: Здоров'я, 1987,144 с.

39. Мельников H.H., Новожилов К.В., Белан С.Р. Пестициды и регуляторы роста растений // Справочник. - М., "Химия", 1995, 575 с.

40. Методические рекомендации по оценке степени опасности пестицидов (гигиеническая классификация).// М., 1996,11 с.

41. Методические указания к постановке экспериментальных исследований по обоснованию предельно допустимых концентраций промышленных химических аллергенов в воздушной среде.// М., 1992.

42. Методические указания по гигиенической оценке новых пестицидов.// ВНИИГИНТОКС, Сост.: Медведь Л.И. и др. - Киев, 1969, 160 с.

43. Методические рекомендации по изучению и гигиенической оценке условий труда при применении пестицидов.// Госсанэпиднадзор России, М., 1995, 10 с.

44. Методические рекомендации по использованию поведенческих реакций животных в токсикологических исследованиях для целей гигиенического нормирования.// Киевский НИИ ГТ и ПЗ, Сост.: Буркацкая E.H. и др. - Киев, 1980, 43 с.

45. Методические рекомендации. Экспрессное определение параметров токсикометрии новых химических агентов на изолированных митохондриях печени.// М., 1977, 38 с.

46. Методические рекомендации.' Установление ориентировочных пороговых уровней веществ - неэлектролитов при разных путях поступления в организм.//М., 1978, 23 с.

47. Методические указания по измерению концентраций хлорсульфурона и его калиевой соли в воде методом газожидкостной хроматографии № 6167-91 от 29.07.91 г.// Сб. МУ по определению микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде, № 25, М., 1997 г.

48. Методические указания по определению хлорсульфоксима в почве и зерне пшеницы методом газожидкостной и тонкослойной хроматографии № 6194-91 от 29. 07 91 г.// Сб. МУ по определению микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде. № 24, М., 1996, с. 96.

49. Методика 12/98 количественного измерения концентрации хлорсульфоксима в воздухе рабочей зоны (действующее вещество гербицидных препаратов Круг, Кросс, Кронос) (разработаны ОАО "Химпром", Новочебоксарск 1998 г.

50. Методические указания по хроматографическому измерению Глина в воздухе рабочей зоны № 6134-91 от 29.07.91 г.// Сб. МУ по определению микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде. № 21, ч. 2, М., 1994, с. 281.

51. Микаелян Н.Т., Князев Ю.А., Беспалова В.А. и др. Состояние инсулиновых рецепторов мононуклеаров у беременных женщин, больных сахарным диабетом. // Пробл. эндокринол. - 1990, Т. XXXVI. № 2, с. 28-31.

52. Мокроусов В.М. Агранулоцитарная реакция на букарбан. // Клин. мед. 1984, № Д, с. 134-135.

53. Ошерович А.М., Мильнер Б.Й. К методике определения трансаминаз в сыворотке крови.// Лабораторное дело, 1965, № 11, с. 662665.

54. Павленко С.М. Применение "суммационно-порогового показателя" в токсикологическом эксперименте на белых крысах.// Методики санитарно-токсикологического эксперимента: Сб. науч. тр../МНИИГ им. Ф.Ф.Эрисмана, М., 1975, с. 5-7.

55. Парк Деннис Биохимия чужеродных соединений: Пер. с англ. -М., Медицина, 1973, 286 с.

56. Пашинцева Л.П. Джумбаева Ф.Т., Бассалык Л.С. и др. Биохимические тесты в диагностике нефротоксичности: оценка значимости. // Тер. арх. 1989, Т. ЬХ1, № 4, с. 124-127.

57. Покровский А.А. Биохимические методы исследования в клинике.// Справочник, М., 1969, 652 с.

58. Полторак В.В., Гладких А.И. Современные представления о панкреатических и внепанкреатических механизмах действия пероральных сахаропонижающих препаратов сульфонилмочевин. // Пробл. эндокринол., 1985, Т. ХХХь № 2, с. 76-85.

59. Полторак В.В., Гладких Л.И., Блох К.О. Влияние глибенкламида на спонтанную эволюцию генетически детерминированного сахарного диабета у мышей линии С 57 ВЬ/К^ХУ с!В/(1Ь/. // Фарм. и токсикол., 1991, Т. ЫХ, № 1, с. 34-37.

60. Потапов А.И., Ракитский В.Н., Ильницкая A.B., Липкина Л.И., Кондратов В.А. Методические подходы к оценке реальной опасности пестицидов для операторов.// с. 13-14.

61. Прикладная иммунология. / Г.М. Бутенко, Ю.Е. Вельтищев, М.Ш. Вербицкий и др.; Под ред. A.A. Сохина, Е.Ф. Чернушенко. К., Здоров'я, 1984, 320 с.

62. Прозоровский В.Б. Использование метода наименьших квадратов для пробит-анализа кривых летальности.// Фармакология и токсикология, 1962, № 1, с. 111-119.

63. Рекомендации для предварительной оценки токсичности химических веществ ускоренным методом.// Методическое письмо. Л., 1971, 51 с.

64. Саноцкий И.В., Уланова И.П. Критерии вредности в гигиене и токсикологии при оценке опасности химических веществ. - М.: Медицина, 1975 - 328 с.

65. Саноцкий И.В., Фоменко В.Н. Отдаленные последствия влияния химических соединений на организм., М., 1979, 250 с.

66. Сатоскар P.C., Бандаркар С.Д. Фармакология и фармакотерапия: Пер. с англ. - М., Медицина, 1986, Т. 1, 528 с.

67. Славина Л.С., Мазовецкий А.Г. Современное лечение сахарного диабета. // Сов. мед., 1983, № 8, с. 40-44. '

68. Справочник по пестицидам./ Под ред. П.И. Медведь - Киев: урожай, 1977, 375 с.

69. Спыну Е.И., Сова P.E. Пути интенсификации в гигиене применена пестицидов.// Гигиена и санитария, 1988, № 1, с. 69-71.

70. Строев Е.А., Белкина З.В. Влияние некоторых противодиабетических препаратов на процессы метаболизма ксенобиотиков. // Фарм. и токсикол., 1989, Т. LII, № 2, с. 74-77.

71. Фокин А.Д., Ладонин В.Ф., Кукушкин В.К. и др. Влияние средстве химизации сельского хозяйства на сорбцию и миграцию хлорсульфурона в почвах.// Агрохимия 1990., № 4, с. 111-118.

72. Халиков И.С., Вишенкова Е.М., Савин Ю.И. Поведение сульфометурона в природной воде.//Агрохимия - 1990., № 10, с.113-116.

73. Халиков И.С., Савин Ю.И. Физико-химические свойства и биологические процессы трансформации загрязняющих веществ в прогнозировании загрязнения водных объектов. //Рациональное использование и охрана водных ресурсов от загрязнения: Тезисы доклада всесоюзного Симпозиума молодых ученых 9-13 июля 1990г., Харьков, 1990, с. 164-165.

74. Химическая промышленность за рубежом. 1986. №7, с. 65.

75. Черних В.П. Перорольш цукрознижувальш сульфамщи // Фармацевтичний журнал. - 1980, № 1, с. 13-18.

76. Щербак A.B. Осложнения при лечении пероральными противодиабетическими препаратами. // Пробл. эндокринол. - 1988, Т. XXXIV. № 3, с. 46-54.

77. Эндокринология и метаболизм.: Под ред. Ф. Фелига, Дж. Д. Бакстера, А.Е. Бродуса, JI.A. Фромена: Пер. с англ. - М., Медицина, 1985, Т. 2, 416 с.

78. Aldrige W.N. The rôle of biochemical studies in morden toxicological assessment of pesticides.// Pestic. Chem.: Hum. Welfare and Environ Proc. 5 th Int. Congr., Kyoto, 1982., vol. 3., p. 409-418.

79. Allison D.A. DPX-4189// Technical Information Du Pont de Nemours. 1980, 9 p.

80. Amrein Y., Gerber H.R. CGA 131036: a new herbicide for broadleaved weed control in cereals// Pr. Brit. Crop. Prot. Conf. - Weeds. 1985, Vol. 1, P. 55-62.

81. Anderson Y.Y., Dulka Y.Y. Environmental fate of sulfometuron methyl in aerobic soils// Y. Agr. Fd. Chem. 1985, Vol. 33, № 4, P. 596-602.

82. Bonora E., Moghetti P., Qerena M. et al. Effecti postreceptoriali delle sulfonilurea. // 12 Cong. Soc. Ital. diabetol., Venezia Lido, 22-25 vagg., 1988, Roma, H. 59-62.

83. Calmus Y. Criteres actuels orientant vers l'origine médicamenteuse d'une hepatite. // Therapie, 1984, Vol. 39, № 5, P. 477-485.

84. Champion R.A., Bell D.S. Attitudes toward drug use: trends and correlations with actual use.// Int. Y. Addict 1980, Vol. 15, № 4 - p. 551-567.

85. Craus Y.S. Clorimuron-ethyl (classic): a new broadleaf postemergence

>

herbicide in soybean// Weed Technol. 1987- Vol. 1, № 1, P.114-115.

86. Doig R.I. Carraro C.A. DPX-T6376 a new broad spectrum cereal herbicide.// 10 Int. Congr. Plant. Prot. - Geneva, 1983, Vol. 1, p. 324-331.

87. Ducroix J.P., Vovan A.T., Barbuat C. et al. Les agranulocytoses aiguës médicamenteuses immunoallergiques. // Rev. Med. Int. 1984, Vol. 5, № 4, P. 342-350.

88. Fallucca F., Menzinger G., Gambardella S. et al. Glucagon, insulin and growth hormone response in obese women. // Acta Diabetol Lat. , 1975, Vol. 12, № 3, P. 239-243.

89. Fallucca F. Oral glucose tolerace test (OGTT) during epinephrine infusion in three patients with insulomas. // Horm. Metab. Res., 1976, Suppl.6, P. 67-68.

90. Fukumoto L., Khihara K., Nonaka K. et al. Comparison of diurinal serum insulin levels during shirt from treatment with sulfonilurea and witli insulin in noninsulin dependent diabetes. // Horm. Metabol. Res., 1982, Vol. 14, № l, p. 1-4.

91. Grundmann E., von Bassewitz D.B., Roessner A. et al. Struktur proteine der knochenmarks fibrozen. // Verh. Dtsch. Ges. Pathol. 1983, Vol. 67, № 7, S. 72-79.

92. Habibi B. Anémiés Hemolitiques immunologiques induites par les medikaments. // Sem. Hop., 1989, Vol. 65, № 42, P. 2599-2607.

93. Harvey Y., Dulka Y.Y., Anderson Y.Y. Properties of sulfometuron

methyl affecting its environmental fate: aqueous hydrolysis and photolisis,

: »

mobility and adsorption on soils, and bioaccumulation potencial// Y. Agr. Fd. Chem. -1985, Vol. 33, № 4, P. 590-596.

94. Heywood R. Target organ toxicity/|| Toxicol. Lett., 1983, 18, № 1-2, p.

83-88.

95. Jackson J.E., Bressler R. Clinical Pharmacology of sulphonylurea hypoglyceaemic agents.// Drugs. - 1981. Vol. 22, # 4 - Hart 2, p. 295 - 320.

96. Joshi M.M., Brown H.M. Degration of sulfonilurea herbicides by soil microorganisms// Weed Sci. Soc. Am. Abstr. - New-York, 1985, Vol. 25, P. 93-94.

97. Junnila S. Persistence and movement of chlorsulfuron in soil // Weeds and Weed Contr. 24 Swed. Weed Conf.-Stockholm. 1983. Vol. l.P. 296-301.

98. Kilo C., Miller J.P., Williamson J.R. The achilles of the University Group Diabetes Program. // JAMA, 1980, Vol. 243, № 5, P.450-457.

99. Kilo C., Williamson J.R., Choi et al. Refuting the UGDP conclusion that insulin treatment does not prevent vascular complication in diabetes. // Adv. Exp. Med. Biol. Vol. 119, № 22, P. 307-311.

100. Levitt G. Sulfonilureas: new high potency herbicides // Pesticides Chemistry: Human Welfare and the Environment. Oxford. 1983. Vol. 1. P. 243250.

101. Mersie W., Foy C.L. Phytotoxicity and adsorpton of chlorsulfuron as affeted by soil properties// Weed Sci. - 1985.- Vol. 33.- N4.-P.564-568.

102. Nakaki N., Nakadate T., Kato. Alpha 2 - Adrenoreceptors modularing insulin relesse from isolated pancreatic islets. // Naunun-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology,-1980, Vol. 313, P. 151-153.

103. Nalpas B. Berthelot P. Foie et alcol: aspects metaboliques. // Gastroenterol. Clin. Biol. 1982, Vol. 6, № i, p. 85-92.

104. Nisson H. Capillary transport of a mobile herbicide. A column experiment with chlorsulfuron // Weeds and Weed Control. 26 Swed Conf.-Stockholm. 1985.Vol.l.P. 209-216.

105. Nisson H. Persistence and mobility of chlorsulfurn in arable soils. Inestigations 1982-1983// Weeds and Weed Control. 25 Swed Conf.-Stockholm. 1984. Vol.l.P. 76-81.

106. Park R.H.N. Today's herbicide: Oust - a new noncropland herbicide// Weeds Todey - 1983, Vol. 14, № 3, p. 7-8.

107. Ray T.B. The mode of action of chlorsulfuron, a new herbicide for cereals// Pest. Biochem. Phys.-1982.-Vol.17.-Nl.-P. 10-17.

108. Reaven E.P., Gold G., Reaven C.M. Effekt of age on glucosestimulated insulinrelease by the beta-cell of the rat. // J. Clin. Invest., 1979, Vol. 64, № 2, P. 591-599.

109. Ruprah M., Perucca E., Richens A. Decreased serum protein binding of phenytoin in late pregnancy. // Lancet., 1980, Vol. 2, № 8189, P. 316-317.

110. Rumboldt Z., Bota, Favorable efTerts of glibenclamid in a patient exgibiting idiosyncratic hepatotoxic reactions to both chlorpropamide and tolbutamide// Acta Diabetol. Lat.-1984 Vol. 21 № 4 p. 387-391.

111. Schcel D., Casida Y.E. Sulfonilurea herbicides: growth inhibition in soubeancell suspension cultures and in dacteria correlated with block in biosynthesis of valine, leucine or isolecine // Plant. Biochem Plus. 1985 Vol. 23 № 3 p. 398-412. «

112. Selley A. P., Haney P.J., Ausiin J.R. The use of metsulfuronmethyl alone and in mixture with chlorsulfuron for weed control in cereals in the United Kingdom // Proc. Brit. Crop Prot. Conf. - Weeds. 1985. Vol. 3. P. 931-938.

113. Solal-Celigny Ph. Agranulocytoses iatrogenes. Etiologie, diagnostic, traitment. // Rev. Prat. (Paris), 1989, Vol. 39, № 15, P. 1343-1345.

114. Sweetser P.B., Schow C.L. Hutchison Y.M. Metabolism of chlorsulfuron by plants: biological basis for selectivity of a new herbicide for cereals// Pest. Biochem. Phys. 1982, Vol. 17, № 1, P. 18-23.

115. Thirunarayanan K., Zimdahl R.L., Smika D.E. Chlorsulfuron adsorption and degradation in soil// Weed Sci.- 1985, Vol. 33, № 4, P. 558-563.

116. The University Groop Diabetes Programm. A study of the Effects in Patients with Adult - Onset Diabetes // Diabetes. 1970, Vol. 19, Suppl. 2, P. 747830.

117. Walker A., Brown P.A. Measurement and prediction of chlorsulfuron persistence in soil// Bull. Env. Conf. Tox. 1983. Vol. 30, № 3, P. 365-372.

118. Wongpaitoon V., Mills P.R., Russel P.I. Intrahepatic cholestasis and cutaneous bullae associated with glibenclamid therapy. // Pjstgrad. Med. J. 1981, Vol. 57, № 666, P. 244-246.

119. Verlohren H.J. Arneimittel - sehaden durch antidiabetika // Z.Gesamte Inn. Med. 1984., Vol. 39- № 1. P-24-89.