Тест-система на основе мутантных форм цитохрома c для количественного определения супероксидного анион-радикала тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.03, кандидат биологических наук Пепелина, Татьяна Юрьевна

• Пепелина, Татьяна Юрьевна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Пепелина, Татьяна Юрьевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Цитохром с как переносчик электронов и антиоксидант.

1.1. Дыхательная цепь митохондрий.

1.1.1. Организация дыхательной цепи митохондрий.

1.1.2. Мультисубъединичные дыхательные комплексы.

1.1.2.1. Комплекс I (ЫАОН: убихинон - оксидоредуктаза).

1.1.2.2. Комплекс III (убихинол: цитохром с - оксидоредуктаза).

1.1.2.3. Комплекс IV (цитохром с - оксидаза).

1.2. Цитохром

1.2.1. Структура и функции цитохрома

1.2.1.1. Структура цитохрома

1.2.1.2. Функции цитохрома

1.2.2. Взаимодействие цитохрома с с белками-партнерами.

1.2.2.1. Взаимодействие цитохрома с с убихинол: цитохром с-оксидоредуктазой.

1.2.2.2. Взаимодействие цитохрома с с цитохром с - оксидазой.

1.2.2.3. Взаимодействие цитохрома с с цитохромом 65.

1.2.2.4. Взаимодействие цитохрома с с фактором Ара1>1.

1.2.2.5. Взаимодействие цитохрома с с цитохром с - пероксидазой.

1.3. Супероксидный анион-радикал.

1.3.1. Образование супероксидного анион-радикала.

1.3.2. Методы регистрации супероксидного анион-радикала.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Материалы.

2.1.1. Реактивы и наборы реактивов.

2.1.2. Ферментные препараты.

2.1.3. Штаммы Escherichia coli.

2.1.4. Плазмидный вектор.

2.1.5. Олигонуклеотидные праймеры.

2.1.6. Буферные растворы.

2.1.7. Питательные среды.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Трансформация клеток Escherichia coli.

2.2.1.1. Приготовление компетентных клеток E.coli.

2.2.1.2. Трансформация бактериальных клеток плазмидной ДНК.

2.2.1.3. Наработка клеточной биомассы для выделения плазмидной ДНК.

2.2.1.4. Выделение и очистка плазмидной ДНК.

2.2.2. Сайт-направленный мутагенез.

2.2.3. Субклонирование мутантных генов.

2.2.4. Рестрикционный анализ.

2.2.5. Секвенирование ДНК.

2.2.6. Биосинтез и выделение белка.

2.2.6.1. Экспрессия генов рекомбинантных белков.

2.2.6.2. Выделение и очистка рекомбинантных белков.

2.2.6.3. Окисление и восстановление мутантных вариантов цитохрома

2.2.7. Функциональные исследования.

2.2.7.1. Измерение окислительно-восстановительного потенциала.

2.2.7.2. Выделение митохондрий печени крысы.

2.2.13. Получение препарата митопластов, лишенных цитохрома с, из митохондрий печени крысы.

2.2.7.4. Получение препарата митохондрий из сердца быка.

2.2.7.5. Получение препарата СМЧ из митохондрий сердца быка.

2.2.7.6. Сопряжение и активация СМЧ.

2.2.7.7. Определение сукцинат: цитохром с - редуктазной активности митопластов спектрофотометрическим методом.

2.2.1 Я. Определение цитохром с - оксидазной активности митопластов полярографическим методом.

2.2.7.9. Расчет кинетических параметров реакций.

2.2.7.10. Измерение генерации супероксида в СМЧ сердца быка в реакции прямого и обратного переноса электронов.

2.2.7.11. Измерение скорости образования перекиси водорода в СМЧ сердца быка в реакции прямого и обратного переноса электронов.

2.2.8. Аналитические методы.

2.2.8.1. Электрофоретический анализ ДНК в агарозном геле.

2.2.8.2. Количественное определение препаратов ДНК.

2.2.8.3. Электрофоретический анализ белков в БОБ-НАЛГ.

2.2.8.4. Количественный анализ белковых препаратов.

2.2.8.5. Определение концентрации белка биуретовым реактивом.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Исследование роли индивидуальных лизиновых остатков цитохрома с лошади в формировании реакционноспособных комплексов с компонентами дыхательной цепи.

3.1.1. Получение мутантных вариантов цитохрома с, содержащих единичные и двойные замены.

3.1.2. Исследование мутантных вариантов цитохрома с, содержащих единичные и двойные замены.

3.1.2.1. Сукцинат: цитохром с - редуктазная активность митопластов.

3.1.2.2. Цитохром с - оксидазная активность митопластов.

3.2. Конструирование, получение и исследование вариантов цитохрома с лошади, содержащих множественные мутации, направленные на снижение электрон-транспортной активности по отношению к комплексу III и комплексу IV дыхательной цепи.

3.2.1. Получение вариантов цитохрома с лошади, содержащих множественные мутации.

3.2.2. Исследование вариантов цитохрома с лошади, содержащих множественные мутации.

3.2.2.1. Спектральные свойства.

3.2.2.2. Окислительно-восстановительный потенциал.

3.2.2.3. Сукцинат: цитохром с - редуктазная и цитохром с - оксидазная активность митопластов.

3.3. Тестирование мутантных вариантов цитохрома с, обладающих наиболее сниженной электрон-транспортной активностью, в качестве детектора супероксидного анион-радикала в СМЧ сердца быка.

3.3.1. Измерение скорости генерации супероксида в СМЧ с помощью ацетилированного цитохрома с в реакции обратного переноса электронов.

3.3.2. Измерение скорости генерации супероксида в СМЧ с помощью мутантного варианта цитохрома с К27Е/Е69К/К72Е/К86Е/К87Е/Е90К или К8Е/Е62КУЕ69КУК72Е/К86Е/К87Е в реакции обратного переноса электронов.

3.3.3. Измерение скорости генерации супероксида в СМЧ с помощью мутантного варианта цитохрома с К8Е/К27Е/Е62К/Е69К/К72Е/К86Е/К87Е/Е90К в реакции обратного переноса электоронов.

3.3.4. Измерение скорости генерации супероксида в СМЧ в реакции прямого переноса электронов.

3.3.5. Измерение скорости образования перекиси водорода в СМЧ в реакции прямого и обратного переноса электронов.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Тест-система на основе мутантных форм цитохрома c для количественного определения супероксидного анион-радикала»

Актуальность темы. Цитохром с млекопитающих - низкомолекулярный гем-содержащий белок, обладающий целым рядом биологических активностей. Основной функцией цитохрома с является перенос электрона от убихинол: цитохром с - редуктазы (комплекс III) на цитохром с - оксидазу (комплекс IV) дыхательной цепи митохондрий. В условиях высокой ионной силы цитохром с служит переносчиком электронов от цитохрома Ъ5 наружной мембраны к комплексу IV внутренней мембраны митохондрий [1]. При этом происходит перенос электронов по дыхательной цепи в обход ее начальных участков (участков генерации активных форм кислорода (АФК)). Значительная часть цитохрома с находится в митохондриях в довольно прочной связи с кардиолипином, входящим в состав внутренней митохондриальной мембраны и осуществляет пероксидазную функцию, которая может играть важную роль в инициировании выхода цитохрома с из митохондрий [2, 3]. После выхода в цитозоль цитохром с взаимодействует с фактором Apaf-1, что является ключевым этапом для образования апоптосом и запуска цитохром с - зависимого апоптоза [4, 5]. И, наконец, цитохром с обладает специфической антиоксидантной активностью, заключающейся в эффективном ингибировании продукции супероксидных радикалов (Ог' ) [6, 7].

Супероксидные радикалы - нормальные метаболиты всех живых организмов, утилизирующих кислород в процессах обмена, но в избыточных концентрациях они токсичны, в первую очередь, как источник гидроксильных радикалов (ОН'). Гидроксильные радикалы обладают очень высокой реакционной способностью, вызывают окислительное повреждение липидов, белков, ДНК и других компонентов клетки. Общепринято, что продукция супероксида является неотъемлемым свойством дыхательной цепи митохондрий эукариотических клеток. Образование активных форм кислорода, таких как супероксид, в митохондриях является главной причиной окислительного стресса, ведущего к различным патологическим состояниям: нейродегенеративным заболеваниям, атеросклерозу и старению [8].

Цитохром с широко используется для измерения скорости генерации супероксидного анион-радикала. Однако, восстановление цитохрома с неспецифично для супероксида. Аскорбиновая кислота, глутатион и клеточные редуктазы могут восстанавливать цитохром с, который может быть реокислен цитохром с - оксидазой и пероксидазой. Эти неспецифичные реакции восстановления и окисления цитохрома с искажают истинные значения скоростей образования супероксида.

Чтобы увеличить специфичность измерения супероксида, цитохром с частично ацетилируют (~60% лизиновых остатков ацетилировано) [9]. Ацетилирование лизиновых остатков цитохрома с снижает скорости его восстановления митохондриальной и микросомальной редуктазами и скорости его окисления цитохром с - оксидазой, при этом способность цитохрома с к восстановлению супероксидом сохраняется. При ацетилировании цитохрома с уксусным ангидридом образуется достаточно гетерогенная смесь молекул цитохрома с с различным числом модифицированных лизиновых остатков. Реакционная способность цитохрома с по отношению к природному восстановителю и окислителю (убихинол: цитохром с - редуктазе и цитохром с - оксидазе) зависит от степени ацетилирования. При ацетилировании снижается общий положительный заряд цитохрома с, что ведет к снижению сродства к супероксиду. Неспецифическое взаимодействие частично ацетилированного цитохрома с (АсС) с компонентами дыхательной цепи уменьшают добавлением фосфата калия в сравнительно высоких концентрациях (до 100 мМ). С другой стороны, высокие концентрации фосфата калия вызывают частичное разобщение дыхательной цепи, что искажает картину генерации супероксида.

Все вышесказанное определяет актуальность задачи получения и подробного исследования рекомбинантных мутантных цитохромов с, несущих замены, направленные на снижение реакционной способности по отношению к компонентам дыхательной цепи, и разработки на их основе тест-системы для измерения скорости генерации супероксидного анион-радикала в митохондриальных препаратах, представляющей прикладной биохимический интерес.

Цель исследования. Целью настоящей диссертационной работы являлось: конструирование, получение и исследование ряда вариантов цитохрома с, содержащих замены лизиновых остатков в окружении гемовой впадины, направленные на снижение электрон-транспортной активности цитохрома с по отношению к белкам-партнерам дыхательной цепи, с последующей разработкой на их основе тест-системы для измерения скорости генерации супероксидного анион-радикала в митохондриальных препаратах, обладающих цитохром с - редуктазной и цитохром с - оксидазной активностью.

Основные задачи исследования.

1. Путем введения одиночных и двойных замен в ген цитохрома с лошади исследовать роль индивидуальных лизиновых остатков в формировании реакционноспособных комплексов с комплексом III и комплексом IV дыхательной цепи.

2. На основе полученных данных о роли индивидуальных лизиновых остатков осуществить конструирование мутантных вариантов цитохрома с, обладающих сниженной электрон-транспортной активностью по отношению к комплексу III и комплексу IV дыхательной цепи.

3. Получить в препаративных количествах мутантные варианты цитохрома с, обладающие сниженной электрон-транспортной активностью по отношению к комплексу III и комплексу IV дыхательной цепи.

4. Провести детальное исследование мутантных вариантов цитохрома с лошади.

5. На основе отобранных на предыдущих этапах работы мутантных вариантов цитохрома с, обладающих наиболее сниженной электрон-транспортной активностью, разработать тест-систему для количественного определения супероксидного анион-радикала в митохондриальном препарате (прочносопряженных инвертированных субмитохондриальных частицах (СМЧ) сердца быка). Сравнить скорости генерации супероксида комплексом I в СМЧ сердца быка, измеренные с помощью полученных мутантных вариантов цитохрома с, и скорости генерации перекиси водорода, измеренные с помощью Amplex Red.

Научная новизна и практическая значимость работы.

Все результаты, изложенные в настоящей диссертационной работе, получены впервые.

1. Путем специфического сайт-направленного мутагенеза получены мутантные варианты цитохрома с лошади с единичными и двойными заменами лизиновых остатков в окружении гемовой впадины, обеспечивающих взаимодействие цитохрома с с митохондриальными убихинол: цитохром с - редуктазой и цитохром с -оксидазой, на глутаминовую кислоту и незаряженные остатки.

2. С помощью методов генной инженерии показано, что преимущественный вклад в формирование реакционноспособного комплекса с убихинол: цитохром с -редуктазой дыхательной цепи вносят остатки Lys цитохрома с в положениях 8, 27, 72, 86, 87, а в формирование комплекса с цитохром с - оксидазой - остатки Lys в положениях 13, 79, 86, 87.

3. Получены мутантные варианты цитохрома с лошади, несущие разные комбинации замен К/Е (в положениях 8, 27, 72, 86, 87) в окружении гемовой впадины и Е/К (в положениях 62, 69, 90) на противоположной гемовой впадине стороне молекулы, обладающие сниженной реакционной способностью по отношению к комплексу III и комплексу IV дыхательной цепи.

4. Показано, что мутантные варианты цитохрома с лошади с шестью (К27Е/Е69КУК72Е/К86Е/К87Е/Е90К, К8Е/Е62К/Е69К/К72Е/К86Е/К87Е) и восемью (К8Е/К27Е/Е62К/Е69К/К72Е/К86Е/К87Е/Е90К) заменами, обладают сниженной электрон-транспортной активностью по отношению к комплексу III и комплексу IV дыхательной цепи по сравнению с АсС.

5. Разработана новая эффективная тест-система количественного определения супероксидного анион-радикала в митохондриальных препаратах (в частности, СМЧ сердца быка), основанная на восстановлении мутантных вариантов цитохрома с лошади, обладающих сниженной по сравнению с АсС электрон-транспортной активностью по отношению к компонентам дыхательной цепи. Специфичность разработанной тест-системы к супероксиду в 2-4 раза превышает специфичность АсС (в реакциях обратного переноса электронов).

6. При сравнении скоростей генерации супероксида комплексом I в СМЧ сердца быка, измеренных с помощью разработанной тест-системы, и скоростей генерации перекиси водорода, измеренных с помощью Amplex Red, показано что только -50% перекиси водорода образуется в результате дисмутации супероксида. Разработанная в ходе данной работы тест-система количественного определения супероксидного анион-радикала, основанная на восстановлении мутантных вариантов цитохрома с лошади, может быть использована для измерения скорости генерации супероксида в митохондриальных препаратах, обладающих цитохром с - редуктазной и цитохром с - оксидазной активностью, как инструмент для дальнейшего изучения окислительных процессов в митохондриях.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Цитохром с как переносчик электронов и антиоксидант

В настоящее время вопросы окислительного стресса, апоптоза и старения являются, пожалуй, одними из наиболее актуальных. Постоянно открываются и исследуются новые антиоксиданты и прооксиданты. Однако, существует известный уже с 1920х годов низкомолекулярный белок - цитохром с - который обладает очень важными для жизни клетки свойствами, в том числе и антиоксидантыми, которые можно использовать для профилактики и лечения различных заболеваний, а также для количественной детекции супероксидного анион-радикала. Настоящий обзор посвящен роли цитохрома с в функционировании дыхательной цепи митохондрий и окислительных процессах. Рассмотрены структурно-функциональные особенности дыхательных комплексов митохондрий, а также особенности взаимодействия цитохрома с с белками-партнерами: комплексом III и комплексом IV дыхательной цепи, цитохромом Ь5 наружной митохондриальной мембраны и мембраны ЭПР, цитохром с - пероксидазой дрожжей и апаптотическим фактором Apaf-1, находящимся в цитозоле. Также рассмотрены методы определения супероксида в биологических системах, основанные на использовании редокс-реагентов (в том числе цитохрома с и АсС), быстро взаимодействующих с супероксид-радикалом и превращающихся в продукты, детектируемые спектрофотометрически или с помощью ЭПР-спектроскопии.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Пепелина, Татьяна Юрьевна

выводы

1. Впервые сконструирован и получен ряд мутантных вариантов цитохрома с лошади, содержащих единичные и двойные замены положительно заряженных остатков лизина в окружении гемовой впадины, обеспечивающих взаимодействие цитохрома с с комплексом III и комплексом IV дыхательной цепи.

2. Показано, что консервативные остатки Lys 86 и 87 примерно в одинаковой степени важны для формирования комплексов цитохрома с с убихинол: цитохром с -редуктазой и цитохром с - оксидазой дыхательной цепи. Остатки Lys цитохрома с в положениях 8, 27, 72 вносят преимущественный вклад в формирование реакционноспособного комплекса с комплексом III, а остатки Lys в положениях 13, 79 - с комплексом IV дыхательной цепи.

3. Впервые сконструирован и получен ряд мутантных вариантов цитохрома с лошади, несущих разные комбинации замен КУЕ (в положениях 8, 27, 72, 86, 87) в окружении гемовой впадины и Е/К (в положениях 62, 69, 90) на противоположной гемовой впадине стороне молекулы, обладающих сниженной реакционной способностью по отношению к комплексу III и комплексу IV дыхательной цепи.

4. Показано, что мутантные варианты цитохрома с лошади с шестью (К27Е/Е69КУК72Е/К86Е/К87Е/Е90К, К8Е/Е62К/Е69К/К72Е/К86Е/К87Е) и восемью (К8Е/К27Е/Е62К/Е69К/К72Е/К86Е/К87Е/Е90К) заменами обладают сниженной по сравнению с АсС электрон-транспортной активностью по отношению к комплексу III и комплексу IV дыхательной цепи.

5. Впервые разработана тест-система количественного определения супероксидного анион-радикала в митохондриальных препаратах, основанная на восстановлении мутантных вариантов цитохрома с лошади с шестью (К27Е/Е69К/К72Е/К86Е/К87Е/Е90К, К8Е/К27Е/Е62К/Е69К/К72Е/К86Е/К87Е/Е90К) и восемью (К8Е/К27Е/Е62К/Е69К/К72Е/К86Е/К87Е/Е90К) заменами. Показано, что: а) специфичность разработанной тест-системы к супероксиду в 2-4 раза превышает специфичность АсС (в реакциях обратного переноса электронов). б) при сравнении скоростей генерации супероксида комплексом I в СМЧ сердца быка, измеренных с помощью разработанной тест-системы, и скоростей генерации перекиси водорода, измеренных с помощью Amplex Red, только -50% перекиси водорода образуется в результате дисмутации супероксида.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящей работе получены мутантные варианты цитохрома с лошади, несущие единичные, двойные и множественные замены положительно заряженных остатков лизина в окружении гемовой впадины, обеспечивающих его взаимодействие с митохондриальными убихинол: цитохром с - редуктазой и цитохром с - оксидазой. Преимущественный вклад в формирование реакционноспособного комплекса с убихинол: цитохром с - редуктазой дыхательной цепи вносят остатки Lys цитохрома с в положениях 8, 27, 72, 86, 87, а в формирование комплекса с цитохром с - оксидазой - остатки Lys в положениях 13, 79, 86, 87. Разработанная в результате диссертационной работы тест-система количественного определения супероксидного анион-радикала на основе мутантных вариантов цитохрома с, обладающих сниженной электрон-транспортной активностью по отношению к комплексу III и комплексу IV дыхательной цепи, дает возможность измерять скорость генерации супероксида в мембранных препаратах (в частности, СМЧ). Специфичность тест-системы к супероксиду до четырех раз превышает специфичность АсС. Тест-система может быть использована в фундаментальной биохимии для измерения скорости генерации супероксида в мембранных препаратах митохондрий и микросом, обладающих цитохром с - редуктазной и цитохром с - оксидазной активностью, а также в медицинской биохимии для исследования роли супероксида в патогенезе нейродегенеративных заболеваний.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Пепелина, Татьяна Юрьевна, 2010 год

1. Bernardi P., Azzone G.F. (1981) Cytochrome с as an electron shuttle between the outer and inner mitochondrial membranes // J. Biol.Chem. Vol. 256, pp. 7187-7192.

2. Zou H., Li Y., Liu X., Wang X. (1999) An APAF-1 cytochrome с multimeric complex is a functional apoptosome that activates procaspase-9 // J. Biol. Chem. Vol. 274, pp. 1154911556.

3. Hu Y., Benedict M.A., Ding L., Nünez G. (1999) Role of cytochrome с and dATP/ATP hydrolysis in Apaf-1 -mediated caspase-9 activation and apoptosis // EMBO J. Vol. 18, pp. 3586-3595.

4. Skulachev V.P. (1998) Cytochrome с in the apoptotic and antioxidant cascades // FEBS Lett. Vol. 423, pp. 275-280.

5. Korshunov S.S., Skulachev V.P., Starkov A.A. (1997) High protonic potential actuates a mechanism of production of reactive oxygen species in mitochondria // FEBS Lett. Vol. 416, pp. 15-18.

6. Balaban RS, Nemoto S, Finkel T. (2005) Mitochondria, oxidants, and aging // Cell. Vol. 120, pp. 483-495.

7. Azzi A., Montecucco C., Richter C. (1975) The use of acetylated ferricytochrome c for the detection of superoxide radicals produced in biological membranes // Biochem. Biophys. Res. Commun. Vol. 22, pp. 597-603.

8. Saraste M. (1999) Oxidative phosphorylation at the fin de siècle // Science. Vol. 283, pp. 1488-1493.

9. Schultz B.E., Chan S.I. (2001) Structures and proton-pumping strategies of mitochondrial respiratory enzymes // Annu Rev. Biophys. Biomol. Struct. Vol. 30, pp. 23-65.

10. Grigorieff N. (1998) Three-dimensional structure of bovine NADH:ubiquinone oxidoreductase (complex I) at 22 Â in ice // J. Mol. Biol. Vol. 277, pp. 1033-1046.

11. Walker J.E. (1992) The NADH: ubiquinone oxidoreductase (complex I) of respiratory chains // Q. Rev. Biophys. Vol. 25, pp. 253-324.

12. Carroll J., Fearnley I.M., Skehel J.M., Shannon R.J., Hirst J., Walker J.E. (2006) Bovine complex I is a complex of 45 different subunits // J. Biol. Chem. Vol. 281, pp. 32724-32727.

13. Galante Y.M., Hatefi Y. (1978) Resolution of complex I and isolation of NADH dehydrogenase and an iron-sulfur protein // Meth. Enzymol. Vol. 53, pp. 15-21.

14. Fearnley I.M, Runswick M.J, Walker J.E. (1989) A homologue of the nuclear coded 49 kd subunit of bovine mitochondrial NADH-ubiquinone reductase is coded in chloroplast DNA // EMBO J. Vol. 8, pp. 665-672.

15. Sazanov L.A., Peak-Chew S.Y., Fearnley I.M., Walker J.E. (2000) Resolution of the membrane domain of bovine complex I into subcomplexes: implications for the structural organization of the enzyme // Biochemistry. Vol 39, pp. 7229-7235.

16. Carroll J., Fearnley I.M., Shannon R.J., Hirst J., Walker J.E. (2003) Analysis of the subunit composition of complex I from bovine heart mitochondria // Mol. Cell. Proteomics. Vol. 2, pp. 117-126.

17. Brandt U. (1997) Proton-translocation by membrane-bound NADH:ubiquinone-oxidoreductase (complex I) through redox-gated ligand conduction // Biochim. Biophys. Acta. Vol. 1318, pp. 79-91.

18. Dutton P.L., Moser C.C., Sled V.D., Daldal F., Ohnishi T. (1998) A reductant-induced oxidation mechanism for complex I // Biochim. Biophys. Acta. Vol. 1364, pp. 245-257.

19. Belogrudov G., Hatefi Y. (1994) Catalytic sector of complex I (NADH:ubiquinone oxidoreductase): subunit stoichiometry and substrate-induced conformation changes // Biochemistry. Vol. 33, pp. 4571-4576.

20. Yagi Т., Yano Т., Di Bernardo S., Matsuno-Yagi A. (1998) Procaryotic complex I (NADH-1), an overview // Biochim. Biophys. Acta. Vol. 1364, pp. 125-133.

21. Hirst J., Carroll J., Fearnley I.M., Shannon R.J., Walker J.E. (2003) The nuclear encoded subunits of complex I from bovine heart mitochondria // Biochim. Biophys. Acta. Vol. 1604, pp. 135-150.

22. Виноградов А.Д. (2001) Комплекс I дыхательной цепи: структура, редокс компоненты и возможные механизмы трансформации энергии // Биохимия. Т.66, вып. 10, с. 13461360.

23. Brody S., Mikolajczyk S. (1988) Neurospora mitochondria contain an acyl-carrier protein // Eur. J. Biochem. Vol. 173, pp. 353-359.

24. Papa S. (2002) The NDUFS4 nuclear gene of complex I of mitochondria and the cAMP cascade // Biochim. Biophys. Acta. Vol. 1555, pp. 147-153.

25. Carroll J., Shannon R.J., Fearnley I.M., Walker J.E., Hirst J. (2002) Definition of the nuclear encoded protein composition of bovine heart mitochondrial complex I. Identification of two new subunits // J. Biol. Chem. Vol. 277, pp. 50311-50317.

26. Krishnamoorthy G., Hinkle P.C. (1988) Studies on the electron transfer pathway, topography of iron-sulfur centers, and site of coupling in NADH-Q oxidoreductase // J. Biol. Chem. Vol. 263, pp. 17566-17575.

27. Suzuki H., King T.E. (1983) Evidence of an ubisemiquinone radical from the NADH-.ubiquinone reductase of the mitochondrial respiratory chain // J. Biol. Chem. Vol. 258, pp.352-358.

28. Mitchell P., Moyle J. (1967) Respiration-driven proton translocation in rat liver mitochondria.// Biochem J. Vol. 105, pp. 1147-1162.

29. Lawford H.G., Garland P.B. (1972) Proton translocation coupled to quinone reduction by reduced nicotinamide-adenine dinucleotide in rat liver and ox heart mitochondria // Biochem J. Vol. 130, pp. 1029-1044.

30. Brown G.C., Brand M.D. (1988) Proton/electron stoichiometry of mitochondrial complex I estimated from the equilibrium thermodynamic force ratio // Biochem J. Vol. 252, pp. 473479.

31. Galkin A.S., Grivennikova V.G., Vinogradov A.D. (1999) ^H+/2e stoichiometry in NADH-quinone reductase reactions catalyzed by bovine heart submitochondrial particles // FEBS Lett. Vol. 451, pp. 157-161

32. Xia D., Yu C.-A., Kim H., Xia J.-Z., Anatily M., Kachurin A.M., Zhang L., Yu L., Deisenhofer J. (1997) Crystal structure of the cytochrome 6c/ complex from bovine heart mitochondria // Science. Vol. 287, pp. 60-66.

33. Zhang Z„ Huang L.-S., Shulmeister V.M., Chi Y.-I., Kim K.K., Hung L.-W., Crofts A.R., Berry E.A., Kim S.-H. (1998) Electron transfer by domain movement in cytochrome bcj II Nature. Vol. 392, pp. 677-684.

34. Iwata S., Lee J.W., Okada K., Lee J.K., Iwata M., Rasmussen B., Link Th.A., Ramaswamy S., Jap B.K. (1998) Complete structure of the 11-subunit bovine mitochondrial cytochrome bci complex // Science. Vol. 291, pp. 64-71.

35. Gong X., Yu L., Xia D., Yu C-A. (2004) Evidence for electron equilibrium between the two hemes in the dimeric cytochrome bcj complex // J. Biol. Chem. Vol. 280, pp. 9251-9257.

36. Izrailev S., Crofts A.R., Berry E.A., Schulten K. (1999) Steered molecular dynamics of the rieske subunit motion in the cytochrom bcj complex // Biophys. J. Vol. 77, pp. 1753-1768.

37. Mitchell P. (1975) Protonmotive redox mechanism of the cytochrome bci complex in the respiratory chain: protonmotive ubiquinone cycle // FEBS Lett. Vol. 56, pp. 1-6.

38. Trumpower B.L. (1990) The protonmotive Q cycle. Energy transduction by coupling of proton translocation to electron transfer by the cytochrome be/ complex // J. Biol. Chem. Vol. 265, pp. 11409-11412.

39. Rolling D.R., Samoilova R.I., Holland J.T., Berry E.A., Dikanov S.A., Crofts A.R. (2003) Exploration of ligands to the Q; site semiquinone in the bcj complex using high-resolution EPR // J. Biol. Chem. Vol. 278, pp. 39747-39754.

40. Yu C.A., Nagaoka S., Yu L., King T.E. (1978) Evidence for the existence of a ubiquinone protein and its radical in the cytochromes b and cj region in the mitochondrial electron transport chain // Biochem. Biophys. Res. Commun. Vol. 82, pp. 1070-1078.

41. Ohnishi T., Trumpower B.L. (1980) Differential effects of antimycin on ubisemiquinone bound in different environments in isolated succinate/cytochrome c reductase complex // J. Biol. Chem. Vol. 255, pp. 3278-3284.

42. Esser L., Quinn B., Li Y.F., Zhang M., Elberry M., Yu L„ Yu C.A., Xia D. (2004) Crystallographic studies of quinol oxidation site inhibitors: a modified classification of inhibitors for the cytochrome bcj complex // J. Mol. Biol. Vol. 341, pp. 281-302.

43. Crofts A.R. (2004) The cytochrome bej complex: function in the context of structure // Annu Rev. Physiol. Vol. 66, pp. 689-733.

44. Hong S., Ugulava N., Guergova-Kuras M., Crofts A.R. (1999) The energy landscape for ubihydroquinone oxidation at the Q0 site of the bcj complex in Rhodobacter sphaeroides II J. Biol. Chem. Vol. 274, pp. 33931 33944.

45. Yu C-A., Wen X., Xiao K., Xia D., Yu L. (2002) Inter- and intra-molecular electron transfer in the cytochrome bci complex // Biochim. Biophys. Acta. Vol. 1555, pp. 65-70.

46. Junemann S., Heathcote P., Rich P.R. (1998) On the mechanism of quinol oxidation in the bei complex // J. Biol. Chem. Vol. 273, pp. 21603-21607.

47. Ramirez E., Malmstrom B.G., Winkler J.R., Gray H.B. (1995) The currents of life: the terminal electron-transfer complex of respiration // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol. 92, pp. 11949-11951.

48. Iwata S., Ostermeier C., Ludwig B., Michel H. (1995) Structure at 2.8 Â resolution of cytochrome c oxidase from Paracoccus denitrificans II Nature. Vol. 376, pp. 660-669.

49. Svensson-Ek M., Abramson J., Larsson G., Tôrnroth S., Brzezinski P., Iwata S. (2002) The X-ray crystal structures of wild-type and EQ(I-286) mutant cytochrome c oxidases from Rhodobacter sphaeroides II J. Mol. Biol. Vol. 321, pp. 329-339.

50. Soulimane T., Buse G., Bourenkov G.B., Bartunik H.D., Huber R., Than M.E. (2000) Structure and mechanism of the aberrant ba.3 cytochrome c oxidase from Thermus thermophilics IIEMBO J. Vol. 19, pp. 1766-1776.

51. Taanman J.W., Capaldi R.A. (1992) Purification of yeast cytochrome c oxidase with a subunit composition resembling the mammalian enzyme // J. Biol. Chem. Vol. 267, pp. 22481-22485.

52. Tsukihara T., Aoyama H., Yamashita E., Tomizaki T., Yamaguchi H., Shinzawa-Itoh K., Nakashima R., Yaono R., Yoshikawa S. (1996) The whole structure of the 13-subunit oxidized cytochrome c oxidase at 2.8 Â // Science. Vol. 272, pp. 1136-1144.

53. Tsukihara T., Shimokata K., Katayama Y., Shimada H., Muramoto K., Aoyama H., Mochizuki M., Shinzawa-Itoh K., Yamashita E., Yao M., Ishimura Y., Yoshikawa S. (2003)

54. The low-spin heme of cytochrome c oxidase as the driving element of the proton-pumping process // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol. 100, pp. 15304-15309.

55. Ostermeier C., Harrenga A., Ermler U., Michel H. (1997) Structure at 2.7 Â resolution of the Paracoccus denitrificans two-subunit cytochrome c oxidase complexed with an antibody FV fragment // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol. 94, pp. 10547-10553.

56. Gennis R.B. (1998) Multiple proton-conducting pathways in cytochrome oxidase and a proposed role for the active-site tyrosine // Biochim. Biophiys. Acta. Vol. 1356, pp. 241-248.

57. Michel H. (1998) The mechanism of proton pumping by cytochrome c oxidase // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol. 95, pp. 12819-12824.

58. Banci L., Bertini I., Huber J.G., Spyroulias G.A., Turano P. (1999) Solution structure of reduced horse heart cytochrome c II J. Biol. Inorg. Chem. Vol. 4, pp. 21-31.

59. Bushnell G.W., Louie G.V., Brayer G.D. (1990) High-resolution three-dimensional structure of horse heart cytochrome c II J. Mol. Biol. Vol. 214, pp. 585-595.

60. Stuart R.A., Neupert K. (1990) Apocytochrome c: an axceptional mitochondrial precursor protein using an exceptional import pathway // Biochemie. Vol.72, pp.115-121.

61. Heinning B., Neupert K. (1983) Receptor sites involved in posttranslational transport of apocytochrome c into mitochondria: specificity, affinity, and number of sites // Proc. Natl. Sci. USA. Vol.80, pp. 4963-4967.

62. Takano T., Dickerson R.E. (1980) Redox conformation changes in refined tuna cytochrome c II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol. 77, pp. 6371-6375

63. Liu X., Kim C.N., Yang J., Jemmerson J. Wang X. (1996) Induction of apoptotic programm in cell free extract: requirement for ATP and cytochrome c // Cell. Vol. 86, pp. 147-157.

64. Kluck R.M., Martin S.J., Hoffman B.M., Zhou J.S., Green D.R., Newmayer D.D. (1997) Cytochrome c activation of CPP32-like proteolysis plays a critical role in a Xenopus cell-free apoptosis system // The EMBO J., Vol.16, pp. 4639-4649.

65. Hengartner M.O. (1998) Death cycle and Swiss army Knives // Nature. Vol. 391, pp. 441442.

66. Reed J.C. (1997) Cytochrome c: can't live with it- can't live without it // Cell. Vol. 91, pp. 559-562.

67. Zhivotovsky B., Orrenius S., Brustugun O.T., Doskeland S.O. (1998) Injected cytochrome c induces apoptosis // Nature. Vol. 391, pp. 449-450.

68. Li P., Nijhawan D., Budihardjo I., Srinivasula S.M., Ahmad M., Alnemri E.S., Wang X. (1997) Cytochrome c and dATP-dependent formation of Apaf-l/caspase-9 complex initiates an apoptotic protease cascade // Cell. Vol. 91, pp. 479-489.

69. Zou H., Henzel W.J., Liu X., Lutschg A., and Wang X. (1997) Apaf-1, a human protein homologous to C. elegans CED-4, participates in cytochrome c-dependent activation of caspase-3. // Cell. Vol. 90, pp. 405-413.

70. Smith T.F., Gaitatzes C., Saxena K., Neer E.J. (1999) The WD repeat: a common architecture for diverse functions // Trends Biochem. Sci. Vol. 24, pp. 181-185.

71. Adrain C., Slee E.A., Harte M.T., Martin S.J. (1999) Regulation of apoptotic protease activating factor-1 oligomerization and apoptosis by the WD-40 repeat region // J. Biol. Chem. Vol. 274, pp. 20855-20860.

72. Yu X., Acehan D., Menetret J.F., Booth C.R., Ludtke S J., Riedl S.J., Shi Y., Wang X., Akey C.W. (2005) A structure of the human apoptosome at 12.8 A resolution provides insights into this cell death platform // Structure. Vol. 13, pp. 1725-1735.

73. Kidd V.J. (1998) Proteolitic activities mediate apoptosis // Annu. Rev. Physiol. Vol. 60, pp. 533-573.

74. Adams J.M., Cory S. (1998) The Bgl-2 protein family: arbiters of cell survival // Science. Vol. 281, pp. 1322-1326.

75. Rytomaa M., Kinnunen P.K.J. (1995) Reversibility of the binding of cytochrome c to liposomes // J. Biol. Chem. Vol. 270, pp. 3197 3202.

76. Tuominen E.K.J., Wallace C.J.A., Kinnunen P.K.J. (2002) Phospholipid-cytochrome c interaction. Evidence for the extended lipid anchorage // J. Biol. Chem. Vol. 277, pp. 88228826.

77. Prasad S., Maiti N.C., Mazumdar S., Mitra S. (2002) Reaction of hydrogen peroxide and peroxidase activity in carboxymethylated cytochrome c: spectroscopic and kinetic studies // Biochim. Biophys. Acta. Vol. 1596, pp. 63-75.

78. Cassina A.M., Hodara R., Souza J.M., Thomson L., Castro L., Ischiropoulos H., Freeman B.A., Radi R. (2000) Cytochrome c nitration by peroxynitrite // J. Biol. Chem. Vol. 275, pp. 21409-21415.

79. Chen Y.R., Deterding L.J., Sturgeon B.E., Tomer K.B., Mason R.P. (2002) Protein oxidation of cytochrome c by reactive halogen species enhances its peroxidase activity // J. Biol. Chem. Vol. 277, pp. 29781-29791.

80. Korshunov S.S., Krasnikov B.F., Pereverzev M.O., Skulachev V.P. (1999) The antioxidant functions of cytochrome c//FEBS Lett. Vol. 462, pp. 192-198.

81. Smith H.T., Staudenmayer N., Millett F. (1977) Use of specific lysine modifications to locate the reaction site of cytochrome c with cytochrome oxidase // Biochemistry. Vol. 16, pp. 4971-4974.

82. Ahmed A.J., Smith H.T., Smith M.B., Millett F.S. (1978) Effect of specific lysine modification on the reduction of cytochrome c by succinate cytochrome c reductase // Biochemistry. Vol. 17, pp. 2479-2483.

83. Ng S, Smith M.B., Smith H.T., Millett F. (1977) Effect of modification of individual cytochrome c lysines on the reaction with cytochrome ¿5 // Biochemistry. Vol. 16, pp. 49754978.

84. Rieder R., Bosshard H.R. (1978) Cytochrome bci and cytochrome oxidase can bind to the same surface domain of the cytochrome c molecule // FEBS Lett. Vol. 92, pp. 223-226.

85. Bosshard H.R., Zurrer M., Schagger H., von Jagow G. (1979) Binding of cytochrome c to the cytochrome be; complex (complex III) and its subunits cytochrome cj and bi II Biochem. Biophys. Res. Commun. Vol. 89, pp. 250-258.

86. Pettigrew G. (1978) Mapping an electron transfer site on cytochrome c // FEBS Lett. Vol. 86, pp. 14-16.

87. Rieder R., Bosshard H.R. (1980) Comparison of the binding sites on cytochrome c for cytochrome c oxidase, cytochrome bcj, and cytochrome cy // J. Biol. Chem. Vol.255, pp. 4732-4739.

88. Kim C.H., King T.E. (1983) A mitochondrial protein essential for the formation of the cytochrome cj-c complex. Isolation, purification, and properties // J. Biol. Chem. Vol. 25, pp. 13543-51

89. Lange K., Hunte C. (2002) Crystal structure of the yeast cytochrome bcj complex with its bound substrate cytochrome c // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol. 99, pp. 2800-2805.

90. Solmaz S.R., Hunte C. (2008) Structure of complex III with bound cytochrome c in reduced state and definition of a minimal core interface for electron transfer // J. Biol. Chem. Vol. 283, pp. 17542-17549.

91. Selzer T., Schreiber G. (2001) New insights into the mechanism of protein-protein association // Proteins. Vol. 45, pp.190-198

92. Pelletier H., Kraut J. (1992) Crystal structure of a complex between electron transfer partners, cytochrome c peroxidase and cytochrome c II Science. Vol. 258, pp. 1748-1755.

93. Axelrod H.L., Abresch E.C., Okamura M.Y., Yeh A.P., Rees D.C., Feher G. (2002) X-ray structure determination of the cytochrome cf. reaction center electron transfer complex from Rhodobacter sphaeroides II J. Mol. Biol. Vol. 319, pp. 501-515

94. Gray H.B., Winkler J.R. (1996) Electron transfer in proteins // Annu Rev. Biochem. Vol. 65, pp.537-561

95. Stonehuerner J., O'Brien P., Geren L., Millett F., Steidl J., Yu L., Yu C.A.(1985) Identification of the binding site on cytochrome c/ for cytochrome c II J. Biol. Chem. Vol. 260, pp. 5392-5398.

96. Broger C., Salardi S., Azzi A. (1983) Interaction between isolated cytochrome cj and cytochrome c II Eur. J. Biochem. Vol. 131, pp. 349-352.

97. Wang K., Zhen Y., Sadoski R., Grinnell S., Geren L., Ferguson-Miller S. and Millett F. (1999). Definition of the interaction domain for cytochrome c on cytochrome c oxidase // J. Biol. Chem. Vol. 74, pp.38042-38050.

98. Roberts V.A., and Pique M.E. (1999) Definition of the interaction doman for cytochrome c on cytochrome c oxidase 11 J. Biol. Chem. Vol. 274, pp.38051-38060.

99. Sampson V, Alleyne T. (2001) Cytochrome c/cytochrome с oxidase interaction. Direct structural evidence for conformational changes during enzyme turnover // Eur. J. Biochem. Vol. 268, pp.6534-6544.

100. Кржечковская B.B. Мембраносвязанный цитохром bs. Роль цитохрома bs в регуляции активности изоформ цитохрома Р-450 (2005) // Мембраны. Серия Критические технологии. №2 (26), стр. 10-22.

101. Davydov D.R. (2001) Microsomal monooxygenase in apoptosis: another target for cytochrome с signaling? // Trends Biochem. Sci. Vol. 26, pp. 155-160

102. Swanson R., Trus B.L., Mandel N., Mandel G., Kallai O.B., Dickerson R.E. (1977) Tuna cytochrome с at 2.0 Â resolution. I. Ferricytochrome structure analysis // J. Biol. Chem. Vol. 252, pp. 759-775.

103. Argos P., Mathews F.S. (1975) The structure of ferrocytochrome b5 at 2.8 Â resolution // J. Biol. Chem. Vol. 250, pp. 747-751.

104. Salemme F.R. (1976) An hypothetical structure for an intermolecular electron transfer complex of cytochromes с and bs II J. Mol. Biol. Vol. 102, pp. 563-568

105. Deep S., Im S.C., Zuiderweg E.R., Waskell L. (2005) Characterization and calculation of a cytochrome c-cytochrome b5 complex using NMR data // Biochemistry. Vol. 44, pp. 1065410668.

106. Yu Т., Wang X., Purring-Koch С., Wei Y., McLendon G.L. (2001) A mutational epitope for cytochrome с binding to the apoptosis protease activation factor-1 // J. Biol. Chem. Vol. 276, pp. 13034- 13038.

107. Miller M.A., Han G.W., Kraut J. (1994) A cation binding motif stabilizes the compound I radical of cytochrome с peroxidase // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol. 91, pp. 11118-11122.

108. Worrall J.A., Kolczak U., Canters G.W., Ubbink M. (2001) Interaction of yeast iso-1-cytochrome с with cytochrome с peroxidase investigated by 15N, 1H. heteronuclear NMR spectroscopy // Biochemistry. Vol. 40, pp. 7069-7076.

109. Меньшикова Е.Б., Зенков H.K. (1993) Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов // Успехи современной биологии. Т. 113, вып. 4, с. 422-455.

110. Fridovich I. (1974) Superoxide Dismutases // Adv. Enzymol. Vol. 41, pp. 35-98.

111. Halliwell B. Gutteridge J.M.C. Free radicals in biology and medicine. Oxford University Press, London. 1985.

112. Boveris A. (1984) Determination of the production of superoxide radicals and hydrogen peroxide in mitochondria // Methods Ensymol. Vol. 105, pp. 429-435.

113. Asada K. (1984) Chloroplasts: formation of active oxygen and its scavenging // Methods Ensymol. Vol. 105, pp. 422-429.

114. Mehdy M.C. (1994) Active oxygen species in plant defense against pathogens // Plant Physiol. Vol. 105, pp. 467-472.

115. Kuthan H., Ullrich V. (1982) Oxidase and oxygenase function of the microsomal cytochrome P450 // Eur. J. Biochem. Vol. 126. pp. 583-588.

116. Del Rio L.A., Sandalio L.M., Corpas F.J., Palma J.M., Barroso J.B. (2006) Reactive oxygen species and reactive nitrogen species in peroxisomes. Production, scavenging and role in cell signaling // Plant Physiol. Vol. 141, pp. 330-335.

117. Patton S.E., Rosen G.M., Rauckman E.J. (1980) Superoxide production in purified hamster nuclei // Mol. Pharmacol. Vol. 18, pp. 588-593.

118. Andreyev A.Yu., Kushnareva Y.E., Starkov A.A. (2005) Mitochondrial metabolism of reactive oxygen species // Biochemistry (Moscow). Vol. 70(2), pp. 200-214.

119. Raha S., McEachern G.E., Myint A.T., Robinson B.H. (2000) Superoxides from mitochondrial complex III: the role of manganese superoxide dismutase // Free Radic. Biol. Med. Vol. 29, pp. 170-180.

120. Sun J., Trumpower B.L. (2003) Superoxide anion generation by the cytochrome bcj complex //Arch. Biochem. Biophys. Vol. 419, pp. 198-206.

121. Kramer D.M., Roberts A.G., Muller F., Cape J., Bowman M.K. (2004) Q-cycle bypass reactions at the Q0 site of the cytochrome bci (and related) complexes // Methods Enzymol. Vol. 382, pp. 21-45.

122. Muller F., Crofts A.R., Kramer D.M. (2002) Multiple Q-cycle bypass reactions at the Q0 site of the cytochrome bcj complex // Biochemistry. Vol. 41, pp. 7866-7874.

123. Galkin A., Brandt U. (2005) Superoxide radical formation by pure complex I (NADH:ubiquinone oxidoreductase) from Yarrowia lipolytica 11 J. Biol. Chem. Vol. 280, pp. 30129-30135.

124. Kussmaul L., Hirst J. (2006) The mechanism of superoxide production by NADH:ubiquinone oxidoreductase (complex I) from bovine heart mitochondria // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol. 103, pp. 7607-7612.

125. Tarpey M.M., Fridovich I. (2001) Methods of detection of vascular reactive species: nitric oxide, superoxide, hydrogen peroxide, and peroxynitrite // Circ. Res. Vol. 89. pp. 224-236.

126. Tarpey M.M., White C.R., Suarez E., Ricardson G., Radi R., Freeman B.A. (1999) Chemiluminescent detection of oxidants in vascular tissue: lucigenin but not coelenterazin enhances superoxide formation // Circ. Res. Vol. 84, pp. 1203-1211.

127. Benov L., Sztejnberg L., Fridovich I. (1998) Critical evaluation of use of hydroethidine as a measure of superoxide anion radical // Free Radic Biol Med. Vol. 25, pp. 826-831.

128. Budd S.L., Castilho R.F., Nicholls D.G. (1997) Mitochondrial membrane potential and hydroethidine-monitored superoxide generation in cultured cerebellar granule cells // FEBS Lett. Vol. 415, pp. 21-24.

129. Misra H.P., Fridovich I. (1972) The role of superoxide anion in the autoxidation of epinephrine and a simple assay for superoxide dismutase // J. Biol. Chem. Vol. 247, pp. 3170 -3175.

130. Wakeyama H., Takeshige K., Takayanagi R., Minakami S. (1982) Superoxide-forming NADPH oxidase preparation of pig polymorphonuclear leucocyte // Biochem J. Vol. 205, pp. 593-601.

131. Quintanilha A.T., Packer L. (1977) Surface localization of sites of reduction of nitroxide spin-labeled molecules in mitochondria // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. Vol. 74, pp. 570-574.

132. Rosen G.M., Finkelstein E.J., Rauckman J. (1982) A method for the detection of superoxide in biological systems // Arch. Biochem. Biophys. Vol. 215, pp. 367-378.

133. Roubaud V., Sankarapandi S., Kuppusamy P., Tordo P., Zweier J.L. (1997) Quantitative measurement of superoxide generation using the spin trap 5-(diethoxyphosphoryl)-5-methyl-1-pyrroline-N-oxide// Anal. Biochem. Vol. 247. pp. 404-411.

134. Grivennikova V.G., Vinogradov A.D. (2006) Generation of superoxide by mitochondrial Complex I // Biochim. Biophys. Acta. Vol. 1757, pp.553-561.

135. Lee C.P., Ernster L. (1967) Energy-coupling in nonphoshorylating submitochondrial particles // Methods Enzymol. Vol. 10. pp. 543-548.

136. Kotlyar A.B., Vinogradov A.D. (1990) Slow active/inactive transition of the mitochondrial NADH-ubiquinone reductase // Biochim. Biophys. Acta Vol. 1019, pp. 151-158.

137. Yanisch-Perron C., Vieira J., Messing J. (1985) Improved M13 phage cloning vectors and host strains: nucleotide sequences of the M13mpl8 and pUC19 vectors // Gene. Vol. 33, pp. 103-19.

138. Bullock W.O., Fernandez J. M., Short J. M. (1987) XLl-Blue: a high-efficiency plasmid transforming recA Escherichia coli strain with beta-galactosidase selection // BioTechniques. Vol. 5, pp. 376-378.

139. Долгих Д.А., Латыпов Р.Ф., Абдуллаев 3.X., Колон В., Родер X., Кирпичников М.П. (1998) Экспрессия мутантных генов цитохрома с лошади в Escherichia coli II Биоорганическая химия. Т.24, №10, С. 756-759.

140. Гловер Д.М. Клонирование ДНК. М.: Мир,1988.

141. QuikChangeTM Site-Directed Mutagenesis Kit (Stratagene, США).

142. Johnson, D., Lardy, H. (1967) Isolation of liver or kidney mitochondria // Meth. Enzymol. Vol. 10, pp. 94-96.

143. Jacobs E.E., Sanadi D.R. (1960) The reversible removal of cytochrome с from mitochondria // J. Biol. Chem. Vol. 235, pp. 531-534.

144. Crane F.L., Glenn J.L., Green D. (1956) Studies on the electron transfer system. IV. The electron transfer particle // Biochim. Biophys. Acta. Vol. 22, pp. 475-487.

145. Burbaev D.Sh., Moroz I.A., Kotlyar A.B., Sled V.D., Vinogradov A.D. (1989) Ubisemiquinone in the NADH-ubiquinone reductase region of the mitochondrial respiratory chain // FEBS Lett. Vol. 254, pp. 47-51.

146. Виноградов А.Д., Лейкин Ю.Н., Липская Т.Ю. Биохимия митохондрий. Биоэнергетика. Руководство к практическим занятиям по биохимии животных. М.: Изд-во Моск. унта, 1977, с. 19-22.

147. Ferguson-Miller S., Brautigan D.L., Margoliash Е. (1976) Correlation of the kinetics of electron transfer activity of various eukaryotic cytochromes с with binding to mitochondrial cytochrome с oxidase // J. Biol. Chem. Vol. 251, pp. 1104-1115.

148. Schagger H., Jagow G. (1987) Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa // Anal. Biochem. Vol. 166, pp. 368-379.

149. Babul J., Stellwagen E. (1972) Participation of the protein ligands in the folding of cytochrome с II Biochemistry. Vol. 11, pp.1195-1200.

150. Gornal A.G., Bardawill C.J., David M.M. (1949) Determination of serum proteins by means of the biuret reaction // J. Biol. Chem. Vol. 177, pp. 751-766.

151. Dutton P.L., Wilson D.F., Lee C-P. (1970) Oxidation-reduction potentials of cytochromes in mitochondria // Biochemistry. Vol. 9, pp. 5077-5082.

152. Brand M.D., Affourtit C., Esteves T.C., Green K., Lambert A.J., Miwa S., Pakay J.L., Parker N. (2004) Mitochondrial superoxide: production, biolodical effects, and activation of uncoupling proteins // Free Radical Biol. Med. Vol. 37, pp. 755-767.

153. Hirst J., King M.S., Pryde K.R. (2008) The production of reactive oxygen species by complex I // Biochem. Soc. Trans. Vol. 36, pp. 976-980.

154. Виноградов А.Д., Гривенникова В.Г. (2005) Генерация супероксид-радикала NADH: убихинон оксидоредуктазой митохондрий сердца // Биохимия. Т. 70, с. 150-159.

155. Sun J., Trumpower В. (2003) Superoxide anion generation by the cytochrome bci complex // Arch. Biochem. Biophys. Vol. 419, pp. 198-206.

156. Chen Q., Vazquez E.J., Moghaddas S., Hoppel C.L., Lesnefsky E.J. (2003) Production of reactive oxygen species by mitochondria: central role of complex III // J. Biol. Chem. Vol. 278, pp. 36027-36031.

157. Massey, V., Palmer, G., and Ballou, D. (1973) in Oxidases and Related Redox Systems (King, Т.Е., Mason, H.S., and Morrison, M., eds.) University Park Press, Baltimore, London, Tokyo, pp. 25-49.

158. Esterhazy D., King M.S., Yakovlev G., Hirst, J. (2008) Production of reactive oxygen species by complex I (NADH:ubiquinone oxidoreductase) from Escherichia coli and comparison to the enzyme from mitochondria // Biochemistry. Vol. 47, pp. 3964-3971.