Термохимия взаимодействий в системе белок - органический растворитель - вода тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.04, кандидат химических наук Зинатуллин, Альберт Наилевич

• Зинатуллин, Альберт Наилевич
• кандидат химических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат химических наук Зинатуллин, Альберт Наилевич

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Свойства белков в органических растворителях с 10 низким содержанием воды

1.1.1. Ферментативная активность в безводных 10 органических растворителях

1.1.2. Термостабильность белков в органических 12 растворителях

1.1.3. Регио и энантиоселективность белков, 17 суспендированных в органических средах

1.1.4. Субстратная специфичность

1.1.5. Связывание лигандов и явление «молекулярной 20 памяти»

1.2. Исследования влияния природы органического 23 растворителя и его влагосодержания на свойства белков

1.3. Изучение состояния белков в органических средах с 31 использованием структурных методов

1.4. Термодинамические исследования межмолекулярных 35 взаимодействий, определяющих поведение белков в органических средах

1.4.1. Адсорбция воды на белках в органических средах

1.4.2. Адсорбция паров органических растворителей на 36 белках

1.4.3. Теплоемкость и термодинамические характеристики 37 сухих белков

1.4.4. Влияние влажности белка на его теплоемкость

1.4.5. Калориметрические исследования

ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1 Постановка задачи, выбор объектов исследования, 48 экспериментальных методов, программа исследования

2.2. Реактивы и материалы

2.2.1. Подготовка растворителей

2.2.2. Сывороточный альбумин человека. Характеристики 52 препарата и свойства белка

2.1.4. Бычий панкреатический а-химотрипсин

Характеристики препарата и свойства белка

2.2.4. Растворимость белков в органических средах

2.3. Физико-химический эксперимент

2.3.1. Калориметрический эксперимент

2.3.2. Определение содержания воды в органических 56 растворителях

2.3.3. ИК-спектроскопические измерения

2.3.4. Изучение термостабильности белков методом 61 дифференциальной сканирующей калориметрии

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

СИСТЕМА «СУХОЙ БЕЛОК + ОРГАНИЧЕСКИЙ РАСТВОРИТЕЛЬ + ВОДА»

3.1. Тепловые эффекты, наблюдающиеся при внесении 64 осушенных белков в органические растворители с низким содержанием воды

3.2. Изменения в ИК-спектрах, наблюдающиеся при 80 внесении осушенных белков в безводные органические растворители

3.3. Особенности структурных изменений в этаноле, метаноле, воде и ДМСО

3.4. Влияние природы растворителя на величины 87 калориметрических и ИК-спектроскопических характеристик состояния белков

3.5. Влияние гидрофильности растворителей на 95 величины калориметрических и ИК-спектроскопических характеристик состояния белков

3.6. Проявления термодинамической неравновесности 100 осушенных белков в результатах дифференциальной сканирующей калориметрии

3.7. Влияние протонодонорной способности 102 растворителя

3.8. Дифференциация действия растворителей на 104 осушенные белки

ГЛАВА 4. СИСТЕМА «УВЛАЖНЕННЫЙ БЕЛОК +

ОРГАНИЧЕСКИЙ РАСТВОРИТЕЛЬ+ВОДА»

4.1 Тепловые эффекты смачивания препарата 108 сывороточного альбумина человека, содержащего

10% воды, водно-органическими смесями

4.2 Тепловые эффекты десорбции воды с белка в 111 органических средах

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Термохимия взаимодействий в системе белок - органический растворитель - вода»

Актуальность проблемы. В настоящее время является общепризнанным, что взаимодействия молекул с окружением могут оказывать значительное влияние на протекание различных биологических и физико-химических процессов. Так, интенсивно развивающиеся последние два десятилетия работы в области ферментативного катализа в органических средах с низким содержанием воды открыли новое научное направление, демонстрирующее широкие возможности управления ферментативными реакциями путем варьирования природы растворителя [1-11]. В таких системах смена естественного водного окружения белка на нетипичное органическое (с образованием поверхности, разделяющей твердую фазу белка, и жидкую фазу, содержащую органический компонент) приводит к тому, что белковые макромолекулы демонстрируют новые уникальные качества: повышенную термостабильность; возможность катализировать реакции, не протекающие в присутствии ферментов в водных растворах (например, ацилирование, переэтерификацию, синтез пептидов); явление «молекулярной памяти» -способность осушенных белков запоминать «водную» конформацию субстрата и селективно сорбировать их из органических сред. Успехи неводной энзимологии явились основанием для введения термина «растворная инженерия» ("medium engineering" [1]).

Однако, несмотря на впечатляющие успехи в практическом использовании ферментов в органических средах, целый ряд вопросов до настоящего времени остается в значительной степени открытым:

- Какие параметры органического растворителя (размер молекул, полярность, гидрофобность, способность к специфическим взаимодействиям) оказывают наиболее существенное влияние на свойства белков (в т.ч. на вторичную структуру, термостабильность) ?

- Каковы механизмы такого влияния; насколько зависимость свойств таких систем от природы растворителя чувствительна к природе самого белка, его биологической функции ?

- Насколько состояние белка в таких системах близко к состоянию в естественном водном окружении ?

В настоящее время становится очевидным, что изучение физико-химических закономерностей взаимодействия белков с компонентами водно-органических смесей позволяет не только оптимизировать различные биотехнологические процессы, но и существенно расширяет наши представления о стабильности белковых макромолекул и межмолекулярных силах, поддерживающих каталитически активную конформацию ферментов; дает информацию, недоступную в рамках традиционных «водных» исследований; создает предпосылки для прояснения роли воды в биокатализе [12,13].

Поэтому количественный анализ межмолекулярных процессов в сложных гетерогенных системах, содержащих белок, органический растворитель и воду, представляет собой важную научную проблему, решение которой представляется актуальным и практически значимым.

Целью настоящей работы является:

1) Изучение энергетики образования гетерогенных систем «белок -органический растворитель + вода»;

2) Выделение вкладов межмолекулярных взаимодействий типа «белок-вода» и «белок - органический растворитель» в суммарных тепловых эффектах образования систем «белок + органический растворитель + вода»

3) Выяснение возможности, исходя из информации по структуре молекулы растворителя, прогнозирования влияния органической среды на межмолекулярные взаимодействия типа «белок-вода» и «белок - органический растворитель»;

4) Построение феноменологической модели, позволяющей прогнозировать изменения в состоянии белков в неводных органических средах, а также их способности к взаимодействию с водой.

Решение этих задач требует применения эффективных и информативных методов анализа, способных дать термодинамическую информацию о межмолекулярных взаимодействиях типа «белок-вода» и «белок -органический растворитель». Поэтому экспериментальной основой настоящего исследования является анализ данных, полученных с использованием метода калориметрии.

В качестве объектов исследования были выбраны два не родственных белка - транспортный белок сывороточный альбумин человека (САЧ) и фермент бычий панкреатический химотрипсин (XT) - существенно различающихся по типу нативной конформации и механизму функционирования.

Научная новизна. В ходе выполнения работы впервые методом изотермической калориметрии было измерено более 100 величин тепловых эффектов смачивания осушенных и увлажненных белковых препаратов в органических растворителях с низким содержанием воды, а также тепловых эффектов растворения этих же препаратов в воде при 25°С. Ряд растворителей включал в себя ароматические, галогензамещенные и нитрозамещенные углеводороды, серию моноатомных алифатических спиртов и протоноакцепторных сред, карбоновую кислоту. Для всех этих растворителей были впервые рассчитаны величины свободных энергий растворения воды при

НпО бесконечном разбавлении AG ~ w . Впервые выявлена линейная корреляция между тепловыми эффектами величинами структурных интегральных изменений, сопровождающими процесс внесения сухих белков в неводные органические среды. Впервые установлено, что стабильность сухих белков при комнатной температуре к воздействию органического растворителя может быть качественно предсказана, исходя из анализа величины свободной энергии

Н0О растворения воды в растворителе при бесконечном разбавлении АС - и

LS14 L'III* протонодонорной способности среды. Впервые установлено, что сольватация воды играет определяющую роль в процессе десорбции воды с белка в растворителях с высокой степенью гидрофильности.

Работа изложена на 130 страницах, иллюстрирована 45 рисунками и 37 таблицами. В первой главе изложен обзор свойств систем, в которых твердые белковые препараты непосредственно помещаются в органические среды. Проанализирована имеющаяся в литературе информация о процессах, определяющих свойства белков в органических растворителях. Показана актуальность изучения состояния белковых макромолекул в таких гетерогенных системах, очерчен круг актуальных проблем.

Описание экспериментальной части работы представлено во второй главе. Она включает в себя обоснование выбора объектов исследования и методов экспериментального изучения, описание программы исследования. Во второй главе изложены методики калориметрического и ИК-спектроскопического экспериментов, а также сведения по подготовке растворителей и характеристике препарата белков и их свойствам.

В третьей главе изложены результаты собственных термохимических исследований по выделению вклада взаимодействия белок - органический растворитель в суммарные тепловые эффекты образования систем «белок-органический растворитель - вода». Осуществлена разработка качественной модели, позволяющей прогнозировать стабильность сухих белков при комнатной температуре в безводных органических средах

В четвертой главе на основании анализа собственных и литературных калориметрических данных, характеризующих процесс десорбции воды с белка в растворитель, предложен экспериментальный прием, позволяющий проводить выделение тепловых эффектов десорбции воды с белка в растворитель в суммарные тепловые эффекты образования систем «белок - органический растворитель - вода». Показано, что в случае гидрофильных растворителей энтальпии сольватации воды в растворителе при бесконечном разбавлении вносят определяющий вклад в изменения величин тепловых эффектов десорбции воды с белка.

Диссертационная работа была выполнена на кафедре физической химии Казанского Госуниверситета имени В.И. Ульянова-Ленина. Автор выражает глубокую благодарность научным руководителям проф., д.х.н. Соломонову Б.Н. и с.н.с., к.х.н. Сироткину В.А. за ценные советы и поддержку при выполнении диссертационной работы.

Автор благодарит кандидата биологических наук, научного сотрудника Казанского Института Биохимии и Биофизики КНЦ РАН Файзуллина Д.А. за помощь и ценные советы, полученные при обсуждении ИК-спектроскопических данных.

Автор благодарит научного сотрудника кафедры физической химии КГУ Захарычева Д. В. за помощь при проведении экспериментов методом дифференциальной сканирующей калориметрии.

Заключение диссертации по теме «Физическая химия», Зинатуллин, Альберт Наилевич

1. Методом изотермической калориметрии при 25"С определены энтальпии смачивания двух белков - сывороточного альбумина человека и бычьего панкреатического химотрипсина - в органических средах с низким содержанием воды. На основании полученных калориметрических данных на примере 12 органических растворителей различной природы (углеводороды, протоноакцепторные растворители, моноатомные алифатические спирты, карбоновая кислота) предложен способ выделения вклада теплового эффекта взаимодействия сухого белка с безводным органическим растворителем в суммарные тепловые эффекты образования систем «сухой белок + органический растворитель + вода».2. Обнаружена линейная корреляция между величинами энтальпий смачивания сухих белков и структурными изменениями в соответствующих безводных органических средах со свободным членом, близким нулю.Полученная линейная зависимость свидетельствует о том, что такие калориметрические величины определяются, главным образом, изменениями во вторичной структуре белков.3. На основании сопоставления данных изотермической калориметрии и ИК-спектроскопии установлено, что состояние изученных белков в безводных органических жидкостях и воде при комнатной температуре определяют, главным образом, два фактора - гидрофильность и протонодонориая способность среды: • В гидрофобных и умеренно гидрофильных средах вне зависимости от их протонодонорной способности состояние вторичной структуры белка не отличается сугцественно от ее исходного состояния в сухом белке, а энтальпии смачивания сухого белкового препарата в этих растворителях близки нулю. В таких средах сухой белок по причинам, вероятно, кинетического характера оказывается устойчивым к воздействию органического компонента. • В средах высокой степени гидрофильности реализуются процессы, сопровождающиеся значительными по величине экзотермическими тепловыми эффектами и приводящие к перестройке исходной вторичной структуры сухих белков. • При близкой гидрофильности скорость протекания изменений в состоянии сухого белка выше в протонодонорных средах, чем в протоноакцепторных.4. Предложен способ выделения вклада теплового эффекта десорбции воды с белка в тепловые эффекты образования систем «увлажненный белок + органический растворитель + вода». На основании сопоставления величин тепловых эффектов десорбции воды с белка и энтальпий сольватации воды в органических средах при бесконечном разбавлении установлено, что сольватация воды играет определяющую роль в процессе десорбции воды с белка в гидрофильных растворителях.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Зинатуллин, Альберт Наилевич, 2003 год

1. Rupley J.A., Careri G. Protein hydration and function 11 Adv. Protein Chem. -1991. -V. 41, -P.37-182.

2. Franks F. (Ed.), Water A Comprehensive Treatise, V.4., Plenum Press, New York and London, 1975.

3. Kuntz I.D., Kauzmann W. Hydration of proteins and polypeptides // Adv. Protein Chem. -1974. -V.28, -P.239-345.

4. Klibanov A.M. Enzymatic catalysis in anhydrous organic solvents // Trends Biochem. Sci. -1989. -V.14, N4. -P. 141-144.

5. Klibanov A.M. Asymmetric transformation catalysed by enzymes in organic solvents//Acc. Chem. Res. -1990. -V.23,N1. -P.114-144.

6. Tawaki S., Klibanov A.M. Inversion of enzyme enantioselectivity mediated by the solvent//J. Amer. Chem. Soc. -1992. -V.114, -P.l882-1884.

7. Zaks A., Klibanov A.M. The effect of water on enzyme action in organic media // J. Biol. Chem. -1988. -V.263, -P.8017-8021.

8. Yamane Т., Kojima Y., Ichiryu T. et al Intramolecular esterification by lipase powder in microaqueous benzene: effect of moisture content // Biotechnol. Bioeng. -1989. -V.34, -P.838-843.

9. Griebenow K., Klibanov A.M. On protein denaturation in aqueous-organic mixtures but not in pure organic solvents // J. Amer. Chem. Soc. -1996, -V.l 18, N47.-P.l 1695-11700.

10. ЕХалгашЯ. Биокатализаторы в органическом синтезе. М.: Мир. 1991.

11. Гладилин А.К, Левашов А.В. Стабильность ферментов в системах с органическими растворителями // Биохимия. -1998. -Т.63, вып.З, -с.408-421

12. Gupta M.N., in Gupta M.N. (ed.) Methods in non-aqueous enzymology. / Birhauser Verlag, Basel-Boston-Berlin. 2000. 218c.

13. Zaks A., Klibanov A.M. Enzymatic catalysis in organic media at 100°C // Science. -1984. -V.224,. -P. 1249-1251.

14. Zaks A., Klibanov A.M. Enzymatic catalysis in nonaqueous solvents // J. Biol. Chem. -1988. -V.263, -P.3194-3201.

15. Volkin D.V. Enzyme thermoinactivation in anhydrous organic solvents / D.V. Volkin, A. Staubli, R. Langer, A.M. Klibanov // Biotechnol. Bioeng. -1991. -V.37, -P.843-853.

16. Ayala G. Thermostability of membrane enzymes in organic solvents / G. Ayala, M.T. Gomez-Puyou, A. Gomez-Puyou, A. Drszon // FEBS Lett. -1986. -V.203, -P.41-43.

17. Ahern T.J., Klibanov A.M. The mechanizm of irreversible enzyme inactivation at 100°C // Science. -1985. -V.228, -P. 1280-1284.

18. Zale S.E., Klibanov A.M. Why does ribonuclease irreversibly inactivate at high temperatures? // Biochemistry. -1986. -V25, -P.5432-5444.

19. Fujita J., Noda Y. Effect of gidration on the thermal stability of protein as measured by differential scanning calorimetry // Int. J. Pept. Res. -1981. -V.18, -P.12-17.

20. Fujita J., Noda Y. Effect of hydration on the thermal stability of protein as measured by DSC: lysozyme-D20 system // Bull. Chem. Soc. Jpn. -1979. -V.52, -P.2349-2352.

21. Rupley J. A., Graton E., Careri G. Water and globular proteins // Trends Biochem. Sci. -1983. -V.8, -P.18-22.

22. Borisover M.D., Zakharychev D.V., Solomonov B.N. Effect of Solvent Composition on DSC Exothermic Peak of Human Serum Albumin Suspended in Pyridine-n-Hexane Mixtures // J. Thermal Analysis and Calorimetry. -1999. -V, 55. -P. 85-92.

23. Fitzpatrick P.A., Klibanov A.M. How can the solvent effect enzyme enantioselectivity? // J. Amer. Chem Soc. -1991. -V. 113, -P.3166-3171.

24. Cesti P., Zaks A., Klibanov A.M. //Appl. Biochem. Biotechnol. -1985. -V.l 1, -P. 401-407.

25. Russel A.J. Antibody-antigen binding in organic solvents / A.J. Russel, L.J. Trudel, P.L. Skipper, J.D. Groopman, S.R. Tannenbaum, A.M. Klibanov // Biochem. and Biophis. Res. Commun. -1989. V.l58, N1. -P.80-85.

26. Zaks A., Klibanov A.M. Substrate spesificity of enzymes in organic solvents vs. Water is reversed // J. Amer. Chem. Soc. -1986. -V.l08, -P.2767-2768.

27. Dabulis K., Klibanov A.M. Molecular imprinting of proteins and other macromolecules resulting in new adsorbent // Biotechnol. Bioing. -1992. -V.39, -P.176-185.

28. Slade C.J. Molecular (or bio-) imprinting of bovine serum albumin // J. Mol. Catal. B: Enzymatic. -2000. -V.9, -P.97-105.

29. Partridge J. Activity and mobility of subtilizin in low water organic media: hydration is more important that solvent dielectric / J. Partridge, P.R. Dennison, B.D. Moor, P.J. Hailing // Biochem. Biophys. Acta -1998. -V.l386, -P.79-89.

30. Tomiuchi Y., Kijima Т., Kise H. Fluorescence spectroscopic study of a-chymotrypsin as relevant to catalytic activity in aqueous-organic media // Bull.Chem. Soc. Jpn. -1993. -V.66, -P. 1176-1181.

31. Carrea G., Ottolina G., Riva S. Rol of solvents in the control of enzyme selectivity in organicmidea // Trends bioyechnol. -1995. -V.l 3. -P.63-70.

32. Narayan V.S., Klibanov A.M. Are water-immiscibility and apolarity of the solvent relevant to the enzyme efficiency? // Biotechnol. Bioeng. -1993, -V.41, -P. 390393.

33. Almarsson O., Klibanov A.M. Remarkable activation of enzymes in nonaqueous media by denaturating organic cosolvents // Biotechnol. Bioeng. 1996. - V.49, -P.87-92.

34. Gribenow K., Klibanov A.M. Lyophilization-induced reversible changes in the secondary structure of proteins // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1995. -V.92, -P. 10969-10976.

35. Costatntino H.R. Fourier-transform infrared spectroscopic investigation of protein stability in the lyophilized form / H.R. Costatntino, K. Griebenow, P. Mishra, R. Langer, A.M. Klibanov // Biochim. Biophys Acta. -1995. -V.1253, -P.69-74.

36. Griebenow K., Klibanov A.M. Can conformational changes be responsible for solvent and excipient effects on the catalytic behavior of subtilisin Carlsberg in organic solvents? // Biotechnol. Bioeng. -1997. -V.53, N4. -P.351-362.

37. Dong A. Effect of secondary structure on the activity of enzymes suspended in organic solvent / A. Dong, J.D. Meyer, B.S. Kendrick, M.C. Manning, J.F. Carpenter // Arch. Biochem. Biophys. -1996. -V.334, -P.406-414.

38. Singer S.J. The propeties of proteins in nonaqueous solvents // Adv. Protein Chem. -1962. -V.17, -P.l-68.

39. Chang N., Hen S.J., klibanov A.M. Protein separation and purefication in neat dimetil sulphoxid // Biochem. Biophys Res. Comm. -1991. -V. 176, N3. -P. 14621468.

40. Хургин Ю.И. Влияние диметилсульфоксида на вторичную структуру некоторых глобулярных белков / Ю.И. Хургин, Ю.М. Азизов, J1.B. Абатуров, Г.Н. Коган, В.Я. Росляков //Биофизика. -1972. -Т. 17, -С. 390.

41. Jackson М., Mantsch Н.Н. Beware of proteins in DMSO // Biochem. Biophys Acta, -1991. -V.1078, -P.231-235.

42. Burke P.A. Demonstration of structural integrity of an enzyme in organic solvent by solid-state NMR / P.A. Burke, S.O. Smits, W.W. Bachovchin, A.M. Klibanov // J. Amer. Chem. Soc. -1989. -V. 111, -P. 8290-8291.

43. Burke P. A.,Griffin R.G., Klibanov A. M.Solid-state nuclear magnetic resonance investigation of solvent dependence of tyrosyl ring motion in an enzyme // Biotechnol. Bioeng. -1993. -V.42, -P.87-94.

44. Guinn R.M. Activity and flexibility of alcohol dehydrogenase in organic solvents / R.M. Guinn, P.S. Skerker, P. Kavanaugh, D.S. Clark// Biotechnol. Bioing. -1991. -V.37, -P.303-308.

45. Fitzpatrick P. A., Ringe D., Klibanov A. X-ray crrystal structure of cross-linked subtilizin Carlsberg in water vs. acetonitrile // Biochem. Biophys. Res. Comm. -1994. -V.198, -P.675-681.

46. Fitzpatrick P.A. Enzyme crystal structure in neat organic solvent / P.A. Fitzpatrick, A.CU. Steinmetz, D. Ringe, A. M. Klibanov // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, -1993. -V.90, -P. 8653-8657.

47. Yennavar N.H., Yennavar H.P., Farber G.K. X-ray crystal structure of y-chymotrypsin in hexane // Biochemistry. -1994. -V.32, -P.7326-7336.

48. Wang Z. X-ray studies on cross-linked lysozyme crystals in acetonitrile-water mixtures / Z. Wang, G. Zhu, M. Qian, M. Shao, Y. Jia, Y. Tang // Biochim. Biophys. Acta. -1998. -V.1384, -P.335-344.

49. Zhu G. X-ray studies on two forms of bovine (3-trypsin crystals in neat cyclohexane / G. Zhu, Q. Huang, Z. Wang, M. Qian, Y. Jia, Y. Tang // Biochim. Biophys. Acta. -1998. -V.1429, -P. 142-150.

50. Рапли Дж., Янг П., Толлин. Исследование термических и других параметров взаимодействия воды с белками //В кн. "Вода в полимерах" / Под ред. С. Роуланд. М.: Мир, 1984, С. 114.

51. Chang N., Hen S.J., Klibanov A.M. Protein separation and purification in neat dimethyl sulphoxide // Biochem. Biophys. Res. Comm. -1991. -V.176, P. 14621468.

52. Affleck R., Haynes C.A., Clark D.S. Solvent dielectric affects on protein dynamics // Proc. Natl. Sci. USA. -1992. -V.89, -P.5167-5170.

53. Yamane T. Biocatalysis in a microaqueous organic solvent / T. Yamane, Y. Kojima, T. Ichiryu, S. Shimizy // Ann. NY Acad. Sci. -1988. -V.542, -P.282-329.

54. Yamane T. Intramolecular esterification by lypase powder in microaqueous benzene: factor affecting activity of pure enzyme / T. Yamane, T. Ichiryu, A. Nagata, A. Ueno, S. Shimizy // Biotechnol. Bioeng. -1990. -V.36, -P.1063-1069.

55. Hailing P.J. High-affinity binding of water by proteins is similar in air and in organic solvents // Biochim. Biophys. Acta. -1990. -V.1040, -P.225-228.

56. Borisover M.D., Sirotkin V.A., Solomonov B.N. Isoterm of water sorption by human serum albumin in dioxane: comparision with calorimetric data // J. Phys. Org. Chem. -1995. -V.8, -P.84-88.

57. Sirotkin V.A., Borisover M.D., Solomonov B.N. Effect of chain length on interactions of aliphatic alcohols with suspended human serum albumin // Biophys. Chem. -1997. -V.69, -P.239-248.

58. Benson S.W., Ellis D.A. Surface areas of protein. II. Adsorption of non-polar gases // J. Am. Chem. Soc. -1950. -V.72, -P.2095-2102

59. Gorbatchuk V.V. Vapor sorption of organic compounds on human serum albumin / V.V. Gorbatchuk, M.A. Ziganshin, B.N. Solomonov, M.D. Borisiver // J. Phys. Org. Chem. -1997. -V.10, -P.901-907.

60. Gorbatchuk V.V. Homotropic cooperative binding of organic solvent vapors by solid trypsin / V.V. Gorbatchuk, M.A. Ziganshin, N.A. Mironov, B.N. Solomonov // Biochim. Biophys Acta -2001. -V. 1545, -P.326-338.

61. Bull H.B. Adsorption of water vapor by proteins // J. Am. Chem Soc. -1944. -V.66, N9.-P. 1499-1507.

62. Yang P.-H., Rupley Y.A Protein-water interaction. Heat capacity of the lysozyme-water sustem//Biochemistry. -1979. -V.l8, -P.2654.

63. Suurcuusk J. Spesific heat measurement on lysozyme, chymotryosinogen, and ovalbumin in aqueous solution and in solid state // Acta Chem. Scand., -1974. -V.B28, -P.409.

64. Carreri G. Correlation of IR spectroscopic, heat capacity, diamagneticsusceptibility and anzymatic measurements on lysozyme powder / G. Carreri, E. Gratton, P.-H. Yang, Y. A Rupley // Nature. -1980. -V.284, -P.572.

65. Hill T. L. Statistical mechanics of adsorption. VI. Localised unimolecular adsorption on a heterogeneous surface // J. Chem. Phys. -1947. -V.l7, -P.762.

66. Luscher M., Ruegg M. Thermodynamic studies of interaction of a-chymotrypsin with water. I. Determination of the isosteric enthalpies and entropies of water binding to the native enzyme // Biochim. Biophys. Acta. -1978. -V.533, -P.428-439.

67. Hnojewyj W.S., Reyerson L.H. Futher studies on the sorptions of H20 and D20 vapors by lysozyme and the deuterium-hydrogen exchange effect // J. Phys. Chem.-1961.-V.65, -P.1694.

68. Борисовер М.Д., Сироткин В.А., Соломонов Б. Н. Энтальпии смачивания человеческого сывороточного альбумина в органических растворителях // Журн. физ. химии. -1992. -Т.66, -С. 3130-3132.

69. Borisover M.D., Sirotkin V.A., Solomonov B.N. Interactions of human serum albumin suspended in water-organic mixtures // Thermochim. Acta. -1996. -V.284,. -P.263-277.

70. Borisover M.D., Sirotkin V.A., Solomonov B.N. Heat effects and water sorption by human serum albumin on its suspension in water-dimethyl sulphoxide mixtures //Thermochim. Acta. -1995. -V.256, -P. 175-183.

71. Борисовер М.Д., Сироткин В.А., Соломонов Б.Н. Состояние сывороточного альбумина человека в водно-органических смесях // Ж. физ. химии. -1994. -Т.68, N5. -С.882-885.

72. Perrin D.D., Armarego W.L.F., Perrin D.R. Purification of Laboratory Chemicals. Oxford: Pergamon Press, 1980.

73. Christian S.D., Taha A.A., Gash B.W. // Q. Rev. Chem. Soc. -1970. -V.24, -P.20-36.

74. Riddick J.A., Toops E.E. Organic solvents. Physical properties and methods of purefication. 2nd edition Interscience Publishers, Inc., New York, 1955.

75. Hansen H.K., Rasmussen P., Fredenslund A., Shiller M., Gmehling J. // Ind. Eng. Chem. Res. -1991. -V.30, -P.2352-2355.

76. Коган В. Б., Фридман Б.Н., Кафаров В.В. Равновесие меду жидкостью и паром. Кн. 1. М.: Наука, 1966.

77. Trainer С., Tzias P., Chemla IvL, Poltoratskii G.M. // J. Chem. Soc. Faraday Trans. -1976. -V.172, -P.2007.

78. Lam S.Y., Benoit R.L. Some thermodynamic properties of the dimethylsulphoxide-water and propylene carbonate-water systems at 25°C// Can. J. Chem. -1974. -V.52, -P.718-722.

79. Krach Hansen U. //Pharmacol. Rev. -1986. -V.33, -P.17-53.

80. Мосолов B.B. Протеолитические ферменты, M, 1971.

81. Хеммингер В., Хене Г. Калориметрия: теория и практика. М.: Химия, 1989.

82. Ничуговский Г.Ф. Определение влажности химических веществ. JL: Химия, 1977.

83. Лурье Ю.Ю. Справочник по аналитической химии. М.: Химия, 1989.

84. Рябин В. А., Остроумов М. А., Свит Т. Ф. Термодинамические свойства веществ. JL: Химия, 1977. С. 75.

85. Byler D.M., Susi Н. Examination of the secondary structure of proteins by deconvolved FTIR spectra // Biopolymers. -1986. -V.25, -P.469-487.

86. Структура и стабильность биологических макромолекул. // Под ред. Волькенштейна М.В. М.: Мир. 1973.

87. Райхардт К. Растворители и эффекты среды в органической химии. Пер. с английского. М.: Мир, 1991. 763 с.

88. Тагер А.А. Физико-химия полимеров. М.: Химия, 1978.

89. Dong A., Huang P., Caughey W.S. Protein secondary structure in water from second-derivative amide I infrared spectra // Biochemistry -1990. -V.29, -P.3303-3308.

90. Борисовер М.Д, Столов A.A., Черкасов A.P., Изосимова C.B. Соломонов Б.Н. Калориметрическое и ИК-спектроскопическое изучение межмолекулярных взаимодействий воды в органических растворителях. Журнал физической химии. -1994, -Т.68, -С.56-62.

91. Макшакова О.Н., Файзуллин Д.А., Федотов В.Д., Сироткин В.А., Соломонов Б.Н. Структурные изменения в альбумине при сорбции паров воды и диоксана. Сборник статей «Структура и динамика молекулярных систем», -2002, Выпуск 9, Т.2, -С. 12-14.

92. Сироткин В.А., Соломонов Б.Н., Файзуллин Д.А., Федотов В.Д. Сорбция паров воды и ацетонитрила сывароточным альбумином человека // журнал физической химии -2002. -т.76, N12, -С.2255-2262.

93. Ке Т., Klibanov A.M. On enzymatic activity in organic solvents as a function of enzyme history, Biotechnol. Bioeng. -1998, -Vol.57, -C.746-750.

94. Dai L., Klibanov A.M. Striking activation of oxidative enzymes suspended in nonaqueous media, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, -1999, -Vol. 96, -P.9475-9478.