Термодинамика сорбции паров органических соединений твердыми белками тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.04, кандидат химических наук Зиганшин, Марат Ахмедович

• Зиганшин, Марат Ахмедович
• кандидат химических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат химических наук Зиганшин, Марат Ахмедович

ВВЕДЕНИЕ.

1. ГЛАВА 1. Литературный обзор.'.

1.1. Сорбция газов и паров воды на твердых белках.

1.2. Кооперативное влияние воды на свойства твердых белков.

1.3. Связь между физическими и структурными параметрами органических растворителей и их влиянием на свойства белков.

1.4. Структурные исследования белков, помещенных в органические растворители и водно-органические смеси.

1.5. Модельные представления о межмолекулярных взаимодействиях в белках.

ГЛАВА 2. Экспериментальная часть;.л.

2.1. Объекты исследования. . Л.

2.2. Определение изотерм сорбции паров органических соединений на высушенных препаратах белков.

2.3. Определение изотерм сорбции паров органических соединений на препаратах белков в присутствии третьего компонента: воды или органического соединения.

2.4. Проверка равновесности сорбции в изученных системах.

ГЛАВА 3. Обсуждение результатов;.г.

3.1. Сорбция паров органических соединений на высушенных препаратах белков.

3.1.1. Глобулярные белки.

3.1.2. Фибриллярный белок - коллаген.

3.2. Изотермы сорбции паров органических соединений на твердых белках в присутствии третьего компонента: воды или ,. органического соединения.

3.3. Молекулярная интерпретация влияния третьего компонента на ; сорбцию паров органических соединений твердыми белками.

Результаты и выводы работы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Термодинамика сорбции паров органических соединений твердыми белками»

Актуальность исследования.

Проблема влияния органических растворителей на свойства белковых препаратов в последние десятилетия стала актуальной в связи с активным использованием в биотехнологии ферментативных реакций в неводных средах, позволяющих управлять химическими реакциями посредством варьирования природы органического растворителя. Как было обнаружено, растворитель способен оказывать существенное влияние на скорость ферментативной реакции (сольватация субстрата; десорбция воды с молекулы фермента в органический растворитель; конкуренция с субстратом за активные центры фермента) и ее селективность. Кроме того, в неводном окружении белковые катализаторы проявляют повышенную термостабильность, функционируя десятки часов при температурах 100-120° С, высокие регио- и энантиоселективность, достигающие 95-100 %.

Проблема межмолекулярных" взаимодействий белков с органическими растворителями имеет и более общий характер, в связи с тем, что многие органические соединения способны быть не только средой для ферментативных реакций, но и выступать в качестве субстратов или ингибиторов различных реакций ферментативного катализа, субстратов транспортных белков, связываться антителами в качестве антигенов. Кроме того, вопрос о прогнозировании состояния белков в различных средах непосредственно связан с проблемой стандартизации белковых препаратов на основе данных о термодинамике межмолекулярных взаимодействий белков с органическими соединениями. Решение этой проблемы весьма важно для биотехнологии, поскольку предоставит новую возможность оценки сходства и различий во взаимодействии разных белковых препаратов со средой независимо от их функционального назначения. Изучение сорбции органических соединений из газовой фазы на твердых белках дает 5 непосредственную информацию о термодинамике взаимодействия белков с органическими молекулами. j

Цель работы. Настоящая работа посвящена выяснению критериев связывания белками паров органических соединений, различающихся, по групповому составу, размеру и форме молекул. Цель исследования состоит в изучении влияния особенностей молекулярной структуры твердых белковых препаратов, влияния воды или второго органического компонента на селективность и прочность связывания паров органических соединений.

Научная новизна и выносимые на защиту положения. Впервые определены изотермы сорбции паров органических соединений, применяемых в качестве растворителей в биотехнологии, твердыми белками. На основании

4 1 . ' > . полученных экспериментальных данных сДелан вывод о влиянии размера, структуры органической молекулы и типа функциональной группы на сорбцию органических соединений изученными белками. Впервые охарактеризована фрактальность высушенных белков: сывороточного альбумина,, человека, коллагена из бычьих сухожилий, казеина из козьего молока и инвертазы из пекарских дрожжей по данным о сорбции алифатических спиртов, принадлежащих одному гомологическому ря^у. Сделан вывод о том, что места связывания органических соединений в изученных белковых препаратах раскрываются лишь при непосредственном контакте с молекулами органического компонента, а не существуют заранее в виде готовых полостей или поверхности раздела фаз.

I,

Изучено влияние третичной структуры белка, гидратации и второго органического компонента на характер связывания паров органических соединений перечисленными выше белками.

Впервые получены сигмоидальные изотермы сорбции паров органических соединений на твердом препарате трипсина из поджелудочной железы свиньи, свидетельствующие о наличии кооперативного перехода в твердом белке при связывании органического компонента. Это позволило 6 предположить, что твердый препарат трипсина образует с парами изученных органических соединений твердые комплексы включения или клатраты.

Практическая значимость работы. Полученные результаты представляются полезными для прогнфзирования влияния неводных растворителей на свойства белков в биотехнологических процессах, осуществляемых в отсутствие или при низком содержании воды. Кроме того, полученные данные можно использовать в качестве основы для стандартизации белковых продуктов по их сорбционным свойствам.

Объем и структура работы.

- Диссертация изложена на 146 страницах машинописного текста и сбдержит 52 рисунка и 17 таблиц. Диссертация состоит из введения, трех глав, выводов, списка литературы из 111 наименований и приложения.

Заключение диссертации по теме «Физическая химия», Зиганшин, Марат Ахмедович

РЕЗУЛЬТАТЫ И ВЫВОДЫ РАБОТЫ ,

1. Анализ эффективной фрактальной размерности поверхности изученных белков по полученным данным об изотермах сорбции гомологического ряда алифатических спиртов дает основание полагать, что сорбция изученных органических соединений происходит в объем твердой фазы белка.

2. Впервые для твердого препарата белка (трипсина) обнаружен гомотропный кооперативный эффект при связывании паров органических соединений. В этих системах зафиксировано образование устойчивых соединений 1

включения.

3. Показано, что форма изотерм сорбции в системах: твердый белок ff вода + органический сорбат, существенно зависит от размера молекулы сорбата.

4. С ростом гидратации изученных белков наблюдается кооперативное повышение сорбционного сродства глобулярных белков к парам относительно гидрофобных органических соединений (1-пропа.нол, 2-пропанол, этилацетат, диоксан и бензол), что позволило сделать вывод об образовании клатратов ''твердый белок + вода + органический сорбат" в изученных системах.

5. С ростом молекулярных размеров сорбатов имеет место падение сорбции на глобулярных белках (альбумине, инвертазе, казеине и трипсине). Для фибриллярного коллагена эта зависимость имеет более сложную нелинейную форму.

Ill

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Зиганшин, Марат Ахмедович, 2001 год

1. Brunauer S., Emmett P.H., Teller E. Adsorption of gapes in multimolecular layers // J. Am. Chem. Soc. 1938.- V.60.-P.309-319. i

2. Benson S.W., Ellis D.A. Surface areas of proteins. II. Adsorption of non-polar gases // J. Am. Chem. Soc. 1950. - V.72. - P.2095-2102.

3. Boki K., Kawasaki N., Minami K., Takanashi H. Structural analysis of collagen fibers by nitrogen adsorption method // J. Colloid. Interface Sci. 1993. - V.157. -P.55-59. >

4. Bull H.B. Adsorption of water vapor by proteins // Ji Am. Chem. Soc. 1944. -V.66, N9. - P. 1499-15 07.

5. Boki K., Kawasaki N., Takahashi H. Moisture sorption properties of collagen varied in polarity and porous structure by alkali-treatment //. J. Colloid Interface Sci. 1993. - V.161. - P.148-154.

6. Gregory R.B. Protein hydration and glass transition behavior, in: Gregory R.B. (Ed.), Protein-solvent interactions. New York: Marcel Dekker, 1995. — V.264 -P. 191-264.

7. Zettlemoyer A.C., Chand A., Gamble E. Sorption by organic substances. I. Krypton and nitrogen on polyethylene, nylon and collagen II J. Am. Chem. Soc. -1950. V.72. - P.2752-2757.

8. Hnojewyj W.S., Reyerson L.H. Further studies on the sorption of H20 and D20 vapors by lysozyme and the deuterium-hydrogen exchange effect // J. Phys. Chem. 1961. - V.65.-P.1694-1698.112

9. Brausse G., Mayer A., Nedetzka Т., Schlect P., Vogel H. Water adsorption and dielectric properties of lyophilized hemoglobin // J. Phys. Chem. 1968. У.12. -P.3098-3105.

10. Liischer M., Riiegg M. Thermodynamic studies of the interaction of a-chymotrypsin with water. I. Determination of the isosteric enthalpies and entropies of water binding to the native enzyme // Biochim. Biophys. Acta 1978.1. V.533. P.428-439.

11. Yang F., Russell A.J. The role of hydration in enzyme activity and stability: 1. Water adsorption by alcohol dehydrogenase in continuous gas phase reactor // Biotech. Bioeng. 1996. - V.49. - P.700-708.

12. Вода в полимерах: Пер. с англ. / Под ред. С. Роуленда. М.: Мир, 1984. -555 е., ил.

13. Monod J., Wyman J., Changeux J.-P. On the nature of allosteric transitions; a plausible model // J. Mol. Biol. ^ 1965. V.12. - P.88-118.

14. Эдсолл Дж., Гатфренд X. Биотемодинамика. М.: Мир, .1986. - 296 с.

15. Perutz M.F., Wilkinson A.J4 Paoli М., Dodson G.G. Mechanism of the cooperative effects in hemoglobin revisited // Annu. Rev. Biophys. BiomoL Struct.-1998.-V.27.-P.1-34.

16. Bettati S., Mozzarelli A. T state hemoglobin binds oxygen noncooperatively with allosteric effects of protons, inositol hexaphosphate, and cloride // J. Biol. Chem. -1997. V.272, N51. - P.32050-32055.

17. Mozzarelli A., Bettati S., Rivetti C., Rossi G.L., Colotti G., Chiancone Emilia. Cooperative oxygen binding to Scapharca inaequivahis hemoglobin in the crystal

18. J. Biol. Chem. 1996. - V.271, N7. - P.3627-3632.

19. Abundo M., Accardi L., Agro A.F., Mei G., Rosato N. A stochastic model for the sigmoidal behaviour of cooperative biological systems. // Biophys. Chem. 1996.- V.58. P.313-323.

20. Bell G., Janssen A.E.M., Hailing P.J. Water activity fails to predict critical hydration level for enzyme activity in polar organic solvents: Interconversion of113water concentrations and activities // Enzyme Microb. Technol. 1997. - V.2(h -P.471-477.

21. Partridge J., Dennison P.R., Moore B.D., Hailing P.J. Activity and mobility pf subtilisin in low water organic media: hydration is more important than solvent dielectric // Biochem. Biophys. Acta 1998. - V. 1386. - P.79-89.

22. Yang F., Russell A.J. The role of hydration in ептуте activity and stability: 2. Alcohol dehydrogenase activity and stability in a continuous gas phase reactor // Biotechnol. Bioeng. 1996. - V.49. - P.709-716.

23. Barzana E., Klibanov A.M., Karel M. Enzyme-catalyzed, gas-phase reaction? // Apll. Biochem. Biotechnol. 1987. - V. 15. - P.25-34.

24. Jonsson A., van Breukelen W., Wehtje E., Adlercreutz P., Mattiasson В., The influence of water activity on the enantioselectivity in the enzyme-catalyzed reduction of 2-pentanone // J. Mol. Catal. B: Enzymatic 1998. - V.5. - P.273-276.

25. Xu K., Klibanov A.M. pH Control of the catalytic activity of cross-linked enzyme crystals in organic solvents // J. Am. Chem. Soc. 1996. - V.l 18. - P.9815-9819.

26. Mishra «P., Griebenow K., Klibanov A.M. Structural basis for the molecular memory of imprinted proteins in anhydrous media // Biotechnol. Bioeng. 1996. - V.52. - P.609-614.

27. Yang Z., Zacherl D., Russell A.J. pH dependence of subtilisin dispersed in organic solvents // J. Am. Chem. Soc. 1993. - V.l 15. - P.12251-12257.

28. Ke Т., Klibanov A.M. On enzymatic activity in organic solvents as a function of enzyme history // Biotechnol. Bioeng. 1998. - V.57, N6. - P.746-750.114

29. Parker M.C.^ Moore B.D., Blacker A J. In situ hydration of enzymes in non-polar organic media can increase the catalytic rate // Biocataly^is 1994. - Y.10. -P.269-277. :

30. Roziewski R., Russell A.J. Effect of hydration on the morphology of enzyme powder // Biotechnol. Bioeng. 1992. - V.39. - РД171-1175.

31. Hailing PJ. High-affinity binding of water by proteins is similar in air and in organic solvents // Biochim. Biophys. Acta. 1990. - V. 1040. - P.225-228.

32. Borisover M.D., Sirotkin V.A., Solomonov B.N, Isotherm of water sorption by human serum albumin in dioxane: comparison with caloribetric data // J. Phys. Org. Chem. 1995. - V.8. - P.84-88.

33. Sirotkin V.A., Borisover M.D., Solomonov B.N. Effect of chain length on interactions of aliphatic alcohols with suspended human serum albumin // Biophys. Chem. 1997. - V.69.-P.239-248.

34. Borisover M.D., Sirotkin V.A., Solomonov B.N. Interactions of human serum albumin suspended in water-organic mixtures // TKermochim. Acta. 1996. -V.284. - P.263-277. 5

35. Borisover M.D., Sirotkin V.A., Solomonov B.N. Thermodynamics of water binding by human serum albumin suspended in acetonitrile // Thermochim.- Acta.- 1995. V.254. -P.47-53.

36. McMinn J.H., Sowa M.J., Charnic S.B., Paulaitis M.E. The hydration of proteins in nearly anhydrous organic solvents // Biopolymers 1993. - V.33. - P.1213-1224.

37. McMinn J.H., Sowa M.J., Charnick S.B., Paulaitis M.E. The hydration of proteins in nearly anhydrous organic solvent suspensions // Biopolymers. 1993.- V.33. — P.1213-1224. *

38. Parker M.C., Moore B.D., Blacker A.J. Measuring enzyme hydration in nonpolar organic solvents usingNMR// Biotechnol. Bioeng. 1995. - V.46. - P.452-458.

39. Wehtje E., Adlercreutz P. Water activity and substrate concentration effects on lipase activity // Biotechnol. Bioeng. 1997. - V.55, N5. -P.798-806.115

40. Wehtje E., Costes D., Adlercreutz P. Enantioselectivity of lipases: effectg ofwater activity // J. Mol. Catal. B: Enzymatic 1997. - V.3. - P.221 -230. э1.1

41. Orrenius C., Norin Т., Hult K., Carrea G. The Candida antarctica lipase В catalysed kinetic resolution of seudenol in non-aqueous media of controlled water activity//Tetrahedron: Asymmetry 1995. - V.6, N12. - P.3023-3030.

42. Hailing P.J. Thermodynamic predictions for biocatalysis in nonconventional media: Theory, tests, and recommendations for experimental design and analysis // Enzyme Microb. Technol. 1994. - V. 16. - P. 178-206.

43. Wescott C.R., Klibanov A.M. The solvent dependence of enzyme specificity // Biochem. Biophys. Acta-1994. V.1206.-P.l-9.116

44. Ке Т., Klibanov A.M. Markedly enhancing enzymatic en^ntioselectivity in organic solvents by forming substrate salts // J. Am. Chem. Soc.>- 1999. V.121, N14. - P.3334-3340. '

45. Klibanov A.M. Why are enzymes less active in organic solvents than in water? // Trends. Biotech. 1997. - V.15.-P.97-101.

46. Kvittingen L. Some aspects of biocatalysis in organic solvents // Tetrahedron -1994. V.50. -P.8253-8274

47. Bell G., Hailing P.J., Moore B.D., Partridge J., Rees D.G. Biocatalysis behaviour in low-water systems // Tibtech -1995. V.13. -P.468-473. ,

48. Almarsson 6., Klibanov A.M. Remarkable activation of enzymes in nonaqueous media by denaturing organic cosolvents // Biotechnol. Bioeng. 1996. - V.49. -P.87-92.

49. Adlercreutz P. Activation of enzymes in organic media at low water activity by polyols and saccharides II Biocheni. Biophys. Acta 1:993. - V. 1163. - P. 144148.

50. Setford S.J. Immunosensing in organic and mixed aqueous-organic phase environments // Trends Anal. Chem. 2000. - V.19, N5; - p.330-339.;

51. Russell A.J., Trudel L.J., Skipper P.L., Groopman J.D., Tannenbaum S.R., Klibanov A.M. Antibody-antigen binding in organic solvents // Biochem. Biophys. Res. Commun.-1989. V.158,N1.-P.80-85.

52. Giraudi G., Baggiani C. Solvent effect testosterone-antitestosterone interaction // Biochim. Biophys. Acta 1993. - V. 1157. - P.211-216.

53. Babine R.E., Bender S.L. Molecular recognition of protein-ligand complexes: applications to drug design // Chem. Rev. 1997. - V.9,7. - 1359-1472.

54. Aki H., Goto M., Yamamoto M. Thermodynamic aspects of the molecular recognition of drugs by human serum albumin // Thermochim. Acta. 1995. -V.251. - P.379-388.

55. Gilli P., Ferr'etti V., Gilli G., Borea P.A. Enthalpy-entropy compensation in dryg-receptor binding//J. Phys. Chem.- 1994. -V.98. -P.1515-1518.117

56. Xing В., McGill W.B., Dudas M.J. Sorption of benzene, toluene, and o-xylene by collagen compared with non-protein organic sor^rents // Canadian J. Soil. Sci. -1994. V. 74. - P.465-469. ' с .

57. Sherman S.R., Trampe D.B., Bush D.M., Schiller, M., Eckert C.A., Dallas A.J., Li J., Carr P.W. Compilation and correlation of limiting activity coefficients of nonelectrolytes in water//Ind. Eng. Chem. Res. 1996. -V.3 5. - P. 1044-1058.

58. Mohammadzadeh-K.A., Feeney R.E., Smith L.M. Hydrophobic binding of hydrocarbons by proteins. I. Relationship of hydrocarbon structure // Biochim. Biophys. Acta 1969. - V.194. - P.246-255.

59. Kang Y., Marangoni A.G., Yada R.Y. Effect of two polar organic-aqueous solvent systems on the structure-function relationships of proteases III. Papain and trypsin // J. Food Biochem. 1994. - V. 17. - P.389-405.

60. Wangikar P.P., Michels P.C., Douglas S.C., and Dordick J.S. Structure and i function of subtilisin BPN' solubilized in organic solvents // J. Am. Chem. Soc. -® 1997. V.119. -P.70-76. ,

61. Griebenow K., Klibanov A.M. Can conformational changes be responsible for solvent and excipient effects on the catalytic behavior of subtilisin Carlsberg in organic solvents? // Biotechnol. Bioeng. -1997. V.53, N4. - P.351-362.

62. Liepinsh.E.,,Otting G. Organic solvents identify specific ligand binding sites on protein surfaces // Nature Biotechnology. 1997. - V.15. -P.264-268.

63. Kuznetsova N., Rau D.C., Parsegian V.A., Leikin S. Solvent Hydrogen-bond network in protein self-assembly: solvation of collagen triple helices in nonaqueous solvents // Biophys. J. 1997. - V.72. - P.353-362.

64. Schmitke J.L., Stern L.J., Klibanov A.M. Comparison of x-ray crystal structures of an acyl-enzyme intermediate of subtilisin Carlsberg formed in anhydrous118acetonitrile and in water // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. - V.95. - P. 1291812923. '

65. Schmitke J.L., Stern L.J., Klibanov A.M. The crystal structure of subtilisin Carlsberg in anhydrous dioxane and its comparison with those in water and acetonitrile // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. - V.94. - P.4250-4255.

66. Fitzpatrick P.A., Steinmetz A.C.U., Ringe D., Klibanov A.M. Enzyme crystal structure in a neat organic solvent // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. - V.90. -P.8653-8657.

67. Fitzpatrick P.A., Ringe D., Klibanov A.M. X-ray crystal structure of cross-linked subtilisin Carlsberg in water vs. acetonitrile // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1994. V.198. -P.675-681. i

68. Zhu G.,: Huang Q., Wang Z., Qian M., Jia Y., Tang Y. X-ray studies on two forms of bovine (3-trypsin crystals in neat cyclohexane II Biochim. Biophys. Acta. -1998. -V.1429.-P.142-150. \

69. Yennawar H.P., Yennawar N.H, and Farber G.K. A structural explanation for enzyme memory in nonaqueous solvents // J. Am. Chem. Soc. 1995. - V.l 17. -P.577-585. "

70. Wang Z., Zhu G., Qian M., Shao M., Jia Y., Tang Y. X-ray studies on cross-linked lysozyme crystals in acetonitrile-water mixtures // Bichim. Biophys. Acta -1998. V.13&4. - P.335-344.

71. Yennawar N.H., Yennawar H.P., Farber G.K. X-ray crystal structure of y-chymotrypsin inlhexane // Biochemistry 1994. -V.33, N23. - P.7326-7336.

72. Otting G., Liepinsh E.s Halle В., Frey U. NMR identification of hydrophobic cavities with low water occupancies in protein structures using small gas molecules // Nature Structural Biology. 1997. - V.4, N5. - P.396-404. }

73. Биополимеры: Пер. с япон. / Оои Т., Ицука Э., Онари С. и др.; Под ред. Ю. Иманиси. М.: Мир. 1988. - С.544, ил.119

74. Griebenow К., Klibanov AM. On protein denaturation in aqueous-organic mixtures but not in pure organic solvents // J. Am. Chem. Soc. 1996. - V.^ 18, N47.-P.11695-11700.

75. Khmelnitsky Y.L., Mozhaev; V.V., Belova A.B., Sergeeva M.Y., Martinek K. Denaturation capacity: a new quantitative criterion foe selection of organic solvents as reaction media in biocatalysis // Eur. J. Biochem. 1991.-V. 198.-P.31-41.

76. Zheng Y.-J., Ornstein R.L. A molecular dynamic study of the effect of carbon tetrachloride on enzyme structure and dynamics: subtilisin // Protein Eng. 1996. - V.9. - P.485-492.

77. Perrin D.D.,. Armarego W.L.F and. Perrin D.R. Purification of Laboratory Chemicals. -Oxford: Pergamon Press, 1980. 568 p.

78. Горбачук В. В., Смирнов С; А., Вишняков И. М. и др. Устройство отбора и ввода проб равновесного пара в газовый хроматограф: А. с. 1567973 СССР // Б. И. 1990. N20, * ,

79. Boublik Т., Hala V.* Fried Е. The Vapour Pressures of Pure Substances. — Amsterdam: Elsevier, 1973. 636 p.

80. Lencka M., Szafranski A., Maczynski A. Verified vapor pressure data. Warszawa: PWN, 1984. V.l. - 403p.

81. Hussam A., Carr P.W. Rapid and precise method for the measurement of vapor/liquid equilibria by headspace gas chromatography // Anal. Chem. 1985. -V.57. - P.793-801.

82. Горбачук В.В., Соломонов Б.Н. Определение изотерм адсорбции органических соединений на человеческом сывороточном альбумине120статическим методом парофазного газохроматографинеского анализа // Ж. физ. хим. -i 1996. Т.70, N4. - С.723-727.

83. Valvani S.C., Yalkowsky S.H., Amidon G.L. Solubility of nonelectrolytes in polar solvents. VI. Refinements in molecular surface area'computations // J. Phys. Chem. 1976.-V.80.-P.829-835.

84. Kuznetsova N., Rau D.C., Parsegian V.A., Leikin S. Solvent hydrogen-bond network in protein self-assembly: solvation of collagen triple helices in nonaqueous solvents // Biophys. J. 1997. - V.72. - P.353-362.

85. Mi Z., Zhbu S., Stern S.A. Representation of gas solubility in glassy polymers by a concentration-temperature superposition principle II Macromolecules 1991. -V.24. -P.2361-2367. >

86. Ramachandran S., Udgaonkar J.B. Stabilization of. barstar by chemical modification of the buried cysteines U Biochemistry 1996. - V.35. - P.8776-8785. i*

87. Levitt M.j Gerstein M., Huang E., Subbiah S.<, Tsai J. Protein folding: the endgame // Annu! Rev. Biochem. 1997. — V.66. •*■ P.549-579. '

88. Горбачук B.B., Смирнов С.А., Соломонов Б.Н., Коновалов А.И. Влияние поляризуемости и полярности молекул растворенного вещертва на свободную энергию сольватации // ЖОХ 1990. - Т.60 - С. 1200-1205.

89. Соломонов Б.Н., Коновалов А.И. Термохимия сольватации органических неэлектролитов // Успехи химии 1991. - Т.60. - С.45-68.

90. Федер Е. Фракталы. М.: Мир, 1991. С.232 - 240.

91. Хургин Ю.И., Максарева Е.Ю. Изучение твердофазных ферментативных реакцйй III.* Необратимая инактивация а-химотрипсина бензилсульфонилфторидом // Биоорганическая химия. 1991. - Т. 17, N1. — С.76-80.

92. Росляков В.Я., Хургин Ю.И. Изучение твердофазного гидролиза циннамоил-а-химотрипсина // Биохимия. 1972. -Т.37, Вып.З. - С.493-497.121

93. Остоловский Е.М., Боцянский А.Д., ;Борисенко С.Н., Толкачева Н.В.

94. Молекулярная организация структуры сывороточного альбумина человека //

95. Биополимеры и клетка. 1990. - Т.6, N5. — С.59-64.

96. Partridge J., Hutcheon G.A., Moore В.p., Hailing P.J. Exploiting hydration hysteresis for high activity of cross-linked subtilisin crystals in acetonitrile // J. Am. Chem. Soc.- 1999.-V.118, N51. -P.12873-12877.

97. Hirata M., Ohe S., Nagahama K. Computer aided data book of vapor-liquid equilibria Kodansha Ltd, Tokyo, New York: Elsever, 1975.933 p.-105. Горбачук B.B., Смирнов С.А., Соломонов Б.Н., Коновалов А.И.

98. Свободная энергия комплексообразования как составляющая свободнойэнергии сольватации. // ЖОХ 1990. - Т.60. - с. 1441-1446.

99. Wescott C.R., Klibanov A.M. Thermodynamic analysis of solvent effect on substrate specificity of lyophilized enzymes suspended in organic media // Biotechnol. Bioeng. 1997. - V.67, N3. - P.340-344.

100. Соломонов Б.Н., Коновалов A.M., Новиков В.Б., Ведерников A.H., Борисовер М.Д., Горбачук В.В., Антипин И.С. Сольватация органических соединений. Молекулярная рефракция, дипольный момент и энтальпия сольватации. //ЖОХ- 1984.-Т.54. с.1622-1632. >

101. Lehn J.-M. Supramolecular chemistry : concepts and perspectives Weinheim: VCH, 1995.

102. Connors K.A. The stability of cyclodextrin complexes in solution // Chem. Rev. 1997. - V.97. - P.1325-1357.122