Технология синтеза и очистки рекомбинантных антигенов вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней и цирковируса свиней второго типа и их применение в иммуноферментном анализе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Богданова, Валентина Саттаровна

  • Богданова, Валентина Саттаровна
  • кандидат биологических науккандидат биологических наук
  • 2007, Щёлково
  • Специальность ВАК РФ03.00.23
  • Количество страниц 139
Богданова, Валентина Саттаровна. Технология синтеза и очистки рекомбинантных антигенов вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней и цирковируса свиней второго типа и их применение в иммуноферментном анализе: дис. кандидат биологических наук: 03.00.23 - Биотехнология. Щёлково. 2007. 139 с.

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Богданова, Валентина Саттаровна

СОКРАЩЕНИЯ.

Введение.

Цель и задачи исследования.

Научная новизна работы.

Практическая значимость.

Положения, выносимые на защиту.

1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

РЕПРОДУКТИВНЫЙ и РЕСПИРАТОРНЫЙ СИНДРОМ СВИНЕЙ (РРСС).

1.1. Патогенез.

1.1.1.Клинические признаки РРСС.

1.1.2.Паталогоанатомические изменения при РРСС.

1.2. Эпизоотология РРСС.

1.3. Биология вируса РРСС.

1.3.1. Морфология.

1.3.2.Физико-химические свойства вируса РРСС.

1.3.3.Организация генома вируса РРСС.

1.3.4.Белки вируса РРСС.

1.3.4.1,Неструктурные белки вируса РРСС.

1.3.4.2, Структурные белки вируса РРСС.

1.3.4.2.1 .Минорные структурные белки вируса РРСС.

1.3.4.2,2.0сновные структурные белки вируса РРСС.

1.3.5.Репликация вирусов РРСС.

1.4.Профилактика и контроль.

1.4.1. Неспецифическая профилактика РРСС.

1.4.2.Вакцинация против вируса РРСС.

1.5.Диагностика РРСС.

Н.ЦИРКОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ СВИНЕЙ.

II. 1.Патогенез.

II. 1.1. Клинические признаки цирковирозов и механизм патогенеза.

II. 1.2.Паталогоанатомические изменения.

П.2.Эпизоотология цирковирозов.

Н.З Биология ЦВС-2.

II.3.1.Морфология.

П.3.2.Физико-химические свойства цирковирусов.

11.3.3. Организация генома.

11.3.4.Главный структурный капсидный белок ЦВС-2.

П.3.5.Репликация цирковирусов.

П.4.Профилактика и контроль.

П.4.1. Неспецифическая профилактика цирковирозов.

И.4.2.Вакцинация.

11.5. Диагностика цирковирозов.

III.БЕЛКИ СЛИЯНИЯ (ХИМЕРНЫЕ БЕЛКИ) И МЕТАЛЛО-ХЕЛАТНАЯ АФФИННАЯ

ХРОМАТОГРАФИЯ КАК МЕТОД ИХ ОЧИСТКИ.

Рекомендованный список диссертаций по специальности «Биотехнология», 03.00.23 шифр ВАК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Технология синтеза и очистки рекомбинантных антигенов вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней и цирковируса свиней второго типа и их применение в иммуноферментном анализе»

Репродуктивный и респираторный синдром свиней (РРСС), а также нередко сопутствующие этому заболеванию цирковирозы, причиняют большой экономический ущерб промышленному свиноводству. Так в США ежегодные потери только от РРСС достигают 228$ на одну свиноматку (Dee et al.j 1997). Не меньшей проблемой являются цирковирозы, смертность от которых в пораженных стадах составляет до 40% (Орлянкин, 2007), причем у больных поросят иногда достигает 100 % (Morozov et al., 1998.).

Как репродуктивный синдром (патология органов размножения), так и респираторный (поражение органов дыхания), характерны для многих заболеваний различной этиологии, значительная доля среди которых приходится на РРСС, парвовирусную инфекцию свиней (ПВИС) и цирковирозы (в основном на синдром послеотъемного мультисистемного истощения - СПМИ).

Тяжесть цирковирозов, этиологическим агентом которых является цирковирус свиней второго типа (ЦВС-2), часто обусловлена дополнительным воздействием на животных других инфекционных агентов: Pasteurella multocida, Micoplasma hyopneumoniae, вируса свиного гриппа, парвовируса свиней (Krakowka et al., 2000) и вируса РРСС (Harms et al., 2001). Такое совместное инфицирование приводит к продолжительным и необычно тяжелым вспышкам заболеваний свиней и высокому уровню их смертности (Neumann, 2002).

Своевременная дифференциальная диагностика, основанная на современных методах анализа, позволяющих выявлять возбудитель болезни и проводить мониторинг серологического статуса свиного поголовья, способствует снижению тяжести заболеваний животных и связанных с ними экономических потерь.

Разработка современных методов анализа, в частности, серологических, требует наличия препаративных количеств очищенных вирусных антигенов, в том числе, - рекомбинантных белков, полученных с помощью ДНК-технологий. В отличие от культуральных, рекомбинантные вирусные антигены могут быть продуцированы в форме, значительно облегчающей их дальнейшую очистку, и в количествах, достаточных для разработки диагностических тест-систем.

Цель и задачи исследования Цель исследования - разработка технологии синтеза и очистки рекомбинантных антигенов вируса РРСС и ЦВС-2 для получения на их основе диагностических иммуноферментных тест-систем, предназначенных для выявления антител к этим вирусам в сыворотке крови свиней

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

1 .Сконструировать рекомбинантную плазмиду для синтеза растворимой формы рекомбинантного нуклеокапсидного белка «К» вируса РРСС в прокариотической системе экспрессии в виде химерного белка слияния с протяженным, содержащим два полигистидиновых пептида и тиоредоксин, аффинным лигандом.

2.Сконструировать рекомбинантную плазмиду для синтеза растворимой формы рекомбинантного капсидного белка «С» ЦВС-2 в прокариотической системе экспрессии в виде химерного белка слияния с протяженным, содержащим два полигистидиновых пептида и тиоредоксин, аффинным лигандом.

3.Разработать технологию очистки синтезированных в прокариотической системе экспрессии рекомбинантных белков вируса РРСС и ЦВС-2 методом металло-хелатной аффинной хроматографии.

4.Провести оценку очищенных растворимых рекомбинантных белков: «№> вируса РРСС и «С» ЦВС-2 при использовании их в качестве антигенов в непрямом ИФА для выявления антител к вирусам РРСС и ЦВС-2 в сыворотке крови свиней в сравнении с антигенами, применяемыми в диагностических наборах «РРСС-СЕРОТЕСТ» и «ЦИРКО-СЕРОТЕСТ».

Научная новизна работы.

Научная новизна результатов, полученных при выполнении работы, состоит в следующем:

Проведены синтез растворимых форм рекомбинантных антигенов вируса РРСС и ЦВС-2 в прокариотической системе экспрессии и их очистка методом металло-хелатной аффинной хроматографии. Эти антигены пригодны для использования в качестве специфических компонентов в иммуноферментных тест-системах для выявления антител к вирусу РРСС и ЦВС-2.

Практическая значимость

В ходе выполнения работ по теме диссертации на основе очищенных рекомбинантных антигенов разработаны и внедрены в ветеринарную практику РФ диагностические иммуноферментные наборы «РРСС-СЕРОТЕСТ» и «ЦИРКО-СЕРОТЕСТ» для выявления антител к вирусу РРСС и ЦВС-2 в сыворотке крови свиней. Нормативно-техническая документация на изготовление наборов утверждена Россельхознадзором Минсельхоза России в установленном порядке (Инструкция по применению набора реагентов «РРСС-СЕРОТЕСТ» б/н от 12.08.05; ТУ № 9388-012-42418073-04; Инструкция по применению набора реагентов «ЦИРКО-СЕРОТЕСТ» б/н от 27.07.05; ТУ № 9388-010-42418073-04). Использование растворимых форм рекомбинантных антигенов вируса РРСС и ЦВС-2 в качестве специфических компонентов диагностических наборов снизит стоимость их производства.

Положения, выносимые на защиту

1. Конструирование рекомбинантной плазмиды, содержащей ген

01^7 нуклеокапсидного белка «14» вируса РРСС, на основе вектора рЕТ32 для синтеза целевого продукта в виде химерного белка слияния с протяженным, содержащим два полигистидиновых пептида и тиоредоксин, аффинным лигандом («tag») в прокариотической системе экспрессии.

2. Конструирование рекомбинантной плазмиды, содержащей ген ORF2 капсидного белка «С» ЦВС-2, на основе вектора рЕТ32ь+ или рЕТ32а+ для синтеза целевого продукта в виде химерного белка слияния с протяженным, содержащим два полигистидиновых пептида и тиоредоксин, аффинным лигандом («tag») в прокариотической системе экспрессии.

3. Технология очистки рекомбинантных белков нуклеокапсида «N» вируса РРСС и капсидного белка «С» ЦВС-2, синтезированных в прокариотической системе экспрессии, металло-хелатной аффинной хроматографией

4. Оценка возможности использования очищенных растворимых рекомбинантных белков: «N» вируса РРСС и «С» ЦВС-2 в непрямом ИФА для выявления антител к вирусам РРСС и ЦВС-2 в сыворотке крови свиней в сравнении с используемыми в диагностических наборах «РРСС-СЕРОТЕСТ» и «ЦИРКО-СЕРОТЕСТ» антигенами.

1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.РЕПРОДУКТИВНЫЙ И РЕСПИРАТОРНЫЙ СИНДРОМ

СВИНЕЙ (РРСС)

Репродуктивный и респираторный синдром свиней (РРСС) - это вирусное заболевание, основными симптомами которого являются репродуктивные нарушения у взрослых свиней и респираторные у поросят.

Название заболевания - «репродуктивный и респираторный синдром свиней» (porcine reproductive and respiratory syndrome), принято в 1992 году на первом международном симпозиуме по РРСС в США вместо используемых прежде названий: «синее ухо», эндемические поздние аборты у свиней, голубой аборт, загадочная болезнь свиней, бесплодие и респираторный синдром свиней (Christianson and Joo, 1994).

Возбудитель болезни - вирус РРСС, принадлежит, по современной классификации, к роду Arterivirus семейства Arteriviridae. Наряду с вирусом РРСС, в это семейство включены также вирусы артрита лошадей, повышения уровня лактатдегидрогеназы мышей и гемморрагической лихорадки обезьян (Cavanagh,. 1997). Семейства вирусов Arteriviridae и Togaviridae объединены в созданный для них порядок Nidovirales (Shnijder and Meulenberg, 1998).

Вирус РРСС повышает восприимчивость организма животных к другим возбудителям. Вторичные инфекции значительно увеличивают экономические потери от заболевания РРСС, их присутствие оказывает сильное влияние на смертность новорожденных поросят. Экономический ущерб, причиняемый РРСС свиноводству разных стран, составляет от 50 до 314 долларов на одну свиноматку (Байбиков и др., 2001). Серопозитивных по РРСС свиней выявляют в 40-80% обследованных хозяйств. В неблагополучных по РРСС хозяйствах специфические антитела регистрируют у 10-95% свиней (Орлянкин и др., 2000).

В России РРСС считается одним из важнейших, требующих пристального внимания, заболеваний свиней (Груздев и др., 2006; Кукушкин, Ковалишин, 2007).

1.1. Патогенез

Похожие диссертационные работы по специальности «Биотехнология», 03.00.23 шифр ВАК

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Богданова, Валентина Саттаровна

4.ВЫВ0ДЫ

1 .Разработана технология синтеза растворимой формы рекомбинантного белка «Ы» вируса РРСС в прокариотической системе экспрессии в виде химерного белка слияния с протяженным, содержащим два полигистидиновых пептида и тиоредоксин, аффинным лигандом.

2.Разработана технология синтеза растворимой формы рекомбинантного белка «С» ЦВС-2 в прокариотической системе экспрессии в виде химерного белка слияния с протяженным, содержащим два полигистидиновых пептида и тиоредоксин, аффинным лигандом.

3.Разработана технология очистки синтезированного растворимого рекомбинантного антигена вируса РРСС - нуклеокапсидного белка «Ы», методом металло-хелатной аффинной хроматографии Выход очищенного белка «г№> вируса РРСС составил 0,35% от веса исходной микробной массы.

4.Разработана технология очистки синтезированного растворимого рекомбинантного антигена ЦВС-2 - капсидного белка «С», методом металло-хелатной аффинной хроматографии Выход очищенного белка «гС» ЦВС-2 составил 0,05% от веса исходной микробной массы.

5.0чищенные рекомбинантные антигены: «гЫ» вируса РРСС, растворимая форма, синтезированный в прокариотической системе экспрессии на основе вектора рЕТ32ь+, и «гС» ЦВС-2, растворимая форма, синтезированный в прокариотической системе экспрессии на основе вектора рЕТ32а+, пригодны для использования в качестве специфических компонентов в иммуноферментных тест-системах для выявления антител к соответствующим вирусам в сыворотке крови свиней.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Полученные в результате исследований материалы вошли в следующие нормативные документы: Инструкция по применению набора реагентов «РРСС-СЕРОТЕСТ» б/н от 12.08.05; ТУ № 9388-012-42418073-04; нструкция по применению набора реагентов «ЦИРКО-СЕРОТЕСТ» б/н от 27.07.05; ТУ №9388-010-42418073-04.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Богданова, Валентина Саттаровна, 2007 год

1. Байбиков, Г. 3., Гусев, А. А., Яременко, Н. А., Дудникова, Н. С., Гаврилова, В. Л., Кукушкин, С. А., Курман, И. Я., Ковалишин, В. Ф. и Рахманов, А. М. Репродуктивно-респираторный синдром свиней.// Ветеринария, -2001 №.3 - стр. 18-24.

2. Т.З. Байбиков, С.А. Кукушкин. Профилактика основных вирусных болезней свиней в промышленном свиноводстве. // ПРОБЛЕМЫ ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТОЛОГИИ СВИНЕЙ /материалы XV МЕЖДУНАРОДНОГО МОСКОВСКОГО КОНГРЕССА, Россия, Москва. -2007 стр. 32-38.

3. К.Н. Груздев, Т.З. Байбиков, С.А. Кукушкин. Мониторинг экономически значимых инфекционных болезней свиней в России. ПРОБЛЕМЫ ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТОЛОГИИ СВИНЕЙ /материалы XIV МЕЖДУНАРОДНОГО МОСКОВСКОГО КОНГРЕССА, Россия, Москва. -2006 стр. 29-34.

4. Т.Дрю, Д.Пэйтон. Реродуктивно-респираторный синдром свиней. ПРОБЛЕМЫ ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТОЛОГИИ СВИНЕЙ /материалы XIV МЕЖДУНАРОДНОГО МОСКОВСКОГО КОНГРЕССА, Россия, Москва. -2006 стр. 25-29.

5. Каньшина A.B. Разработка иммуноферментного анализа для выявления антител к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней.// Дисс. к. биол. н.-Владимир -2004.

6. С.А. Кукушкин, В.Ф. Ковалишин. Комплекс респираторных болезней свиней в свиноводческих хозяйствах России. // ПРОБЛЕМЫ ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТОЛОГИИ СВИНЕЙ /материалы XV МЕЖДУНАРОДНОГО МОСКОВСКОГО КОНГРЕССА, Россия, Москва. -2007 стр. 24-29.

7. Менгелинг В. Проблемы репродуктивного и респираторного синдрома свиней взгляд из США.// ПРОБЛЕМЫ ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТОЛОГИИ СВИНЕЙ /материалы XIV МЕЖДУНАРОДНОГО МОСКОВСКОГО КОНГРЕССА, Россия, Москва. -2006 - стр. 12-17

8. Орлянкин Б. Г., Непоклонов, Е. А., Алипер, Т. И., Забережный, А. Д. и Мусиенко, М. И. Диагностика и специфическая профилактика РРСС. //Ветеринария -2000-№10-стр. 16-19

9. Орлянкин Б.Г., Т.И.Алипер, Е.А.Непоклонов. Цирковирусная инфекция свиней.// Ветеринария, 2002 - № 11 - стр. 48-51.

10. Б.Г. Орлянкин. Цирковирусные болезни свиней: диагностика и профилактика. // ПРОБЛЕМЫ ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТОЛОГИИ СВИНЕЙ /материалы XV МЕЖДУНАРОДНОГО МОСКОВСКОГО КОНГРЕССА, Россия, Москва. -2007 стр. 19-24.

11. Сатина Т. А. Цирковирусные инфекции свиней.// Владимир: ФГУ «ВНИИЗЖ», 2003. - 101 с.

12. Шкаева М.А. Разработка иммуноферментной тест-системы для выявления антител к цирковирусу свиней второго типа. // Дисс. к. биол. н.-М.-2006 стр.

13. Albina, Е, Madee, F, Cariolet, R. and Torrison, J. Immune response and persistence of porcine reproductive and respiratory syndrome virus in infected pigs and farm units. //Vet. Rec. -1994 -Vol. 134- p.567-573.

14. Allan G.M, Phenix K.V, Todd.D. e.a. Some biological and physico-chemical properties of porcine circovims.// J. Vet. Med. B, -1994-Vol. 41 p. 17-26.

15. Allan G.M, Ellis J.A. Porcine circoviruses: a review. //J. Vet. Diagn. Invest, -2000 Vol. 12 - p. 3-14.

16. Allan, C. Konoby, L. Hassard, B. Meehan, K. Martin, J. Harding, S. Kennedy, and F. McNeilly. Reproduction of lesions of postweaning multisystemic wasting syndrome in gnotobiotic piglets.// J. Vet. Diagn. Invest. -1999b.- Vol.11-p.3-14.

17. Allan, G.M., B. Meehan, D. Todd, S. Kennedy, F. McNeilly, J. Ellis, E.G. Clark, J. Harding, E. Espuna, A. Botner, and C. Charreyre. Novel porcine circoviruses from pigs with wasting disease syndromes. //Vet. Rec. 1998 -Vol.142-p.467-468.

18. Beyer, J., Fichtner, D., Schirrmeier, H., Polster, U., Weiland, E. and Wege, H. Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV): kinetics of infection in Lymphatic organs and lungs.// J. Vet. Med. B 2000-Vol.47- p.:9-25.

19. Bilodeau, R., Dea, S., Sauvageau, R. and Martineau, G. P. "Porcine reproductive and respiratory syndrome" in Quebec. Vet.Rec. -1991 -Vol.129-p. 102103.

20. Biagini, P., P. Gallian, H. Attoui, M. Touinssi, J-F. Cantaloube, P. de Micco, and X. de Lamballerie. Genetic analysis of iull-length genomes and subgenomic sequences of TT virus-like mini virus human isolates. //J. Gen. Virol. 2001 -Vol. 82- p.379-383.

21. Blanchard P, Mahe D, Cariolet R, et al. Detection of porcine circovirus type 2 (PCV2) specific antibodies in post-weaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) studies.//

22. Proceedings, European Society Veterinary Virology, PMWS.-2001-p. 104.

23. Bother, A., Nielsen, J. and Bille-Hansen, V. Isolation of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus in a Danish swine herd and experimental infection of pregnant gilts with the virus.// Vet. Microbiol. -1994 -Vol. 40-p.351-360.

24. Bother, A., Strandbygaard, B., Sorensen, K. J., Have, P., Madsen, K. G., Madsen, E. S. and Alexandersen, S. Appearance of acute PRRS-like symptoms in sow herds after vaccination with a modified live PRRS vaccine.// Vet. Rec.- 1997-Vol.141 -p.497-499.

25. Brinton, M. A., Gavin, E. I. and Fernandez, A. V. Genotypic variation among six isolates of lactate dehydrogenase-elevating virus. //J. Gen. Virol.- 1986 Vol.67-p.2673-2684.

26. Brown, C S., Van Lent, J. W. M., Vlak, J. M. & Spaan, W. J. M. Assembly of empty capsids by using baculovirus recombinants expressing human parvovirus B19 structural proteins.//Journal of Virology -1991- Vol.65 -p.2702-2706.

27. Bucher MH, Evdokimov AG, Waugh DS. Differential effects of short affinity tags on the crystallization of Pyrococcus furiosus maltodextrin-binding protein.// Biol Cryst -2002-Vol.5-p.392-397

28. Calsamiglia M, Segales J, Quintana J, et al. Detection of Porcine Circovirus Types 1 and 2 in Serum and Tissue Samples of Pigs with and without Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome. // J Clin Microbiol. -2002-Vol. 40-p. 1848-1850.

29. Carman, S., Sanford, S. E. and Dea, S. Assestment of seropositivety to porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus in swine herds in Ontario, 1978-1982. //Can. Vet. J. 1995-Vol.36-p.776-777.

30. Cavanagh, D. Nidovirales: a new order comprising Coronaviridae and Arteriviridae. //Arch. Virol. -1997- Vol.l42-p.629-633.

31. Chaga G, Bochkariov DE, Jokhadze GG, Hopp J, Nelson P Natural poly-histidine affinity tag for purification of recombinant proteins on cobalt(II)-carboxymethylaspartate crosslinked agarose. //J.Chromatogr.A.-1999b-Vol.864-p.257-256.

32. Cheung, A.K. Transcriptional analysis of porcine circovirus. Virology.-2003-Vol.305-p. 168-180.

33. Cheung, A.K., S.R. Bolin. Kinetics of porcine circovirus replication. //Arch. Virol.- 2002- Vol.l47-p. 43-58.

34. Cho, H.J., D. Deregt, and H.S.Joo. An ELISA for porcine reproducible and respiratory syndrome: production of antigen of high quality. //Clin. J. Vet. Res. -1996-Vol.60-p.89-93.

35. Cho, H. J., Entz, S. C., Magar, R. and Joo, H. S. Performance of ELISA antigens prepared from 8 isolates of porcine reproductive and respiratory syndrome virus with homologous and heterologous antisera. //Can. J. Vet. Res.-1997-. 61:299-304.

36. Christensen, J., Storgaard, T., Bloch, B., Alexandersen, S. & Aasted, B. . Expression of Aleutian mink disease parvovirus proteins in baculovirus vector system.//Journal of Virology-1993-Vol. 67-p. 229—238.

37. Christianson and Joo, Christianson, W. T. and Joo, H. S. Swine health and production,// -1994-2

38. Clark E. Post-weaning multisystemic wasting syndrome. //Proc AASP Ann Meet.- 1997-p.499-501.

39. Conzelmann, K.K., Visser, N., VanWoensel, P., Triel, H.J. Molecular characterization of porcine reproductive and respiratory syndrome virus, a member of the Arterivirus group // Virology. 1993. V.193. -P. 329-339.

40. Dea S.A., Joo H.S., Poison DD., Marsh W.E. Evaluation of the effect of nursery depopulation on the profitability of 34 pig farms.// Vet. Rec. -1997-Vol.l40-p.498-500.

41. Done, S. H., Paton, D. J. and White M. E. C. Porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS): a review, with emphasis on pathological, virological and diagnostic aspects. // Br. Vet. J. 1996- Vol.l52-p.l53-171.

42. Drew, T. W., Meulenberg, J. J. M., Sands, J. J. and Paton, D. J. Production, characterization and reactivity of monoclonal antibodies to porcine reproductive and respiratory syndrome virus.// J. Gen. Virol.- 1995-Vol.76-p. 1361-1369.

43. Drew, T.W. Comparative serology of porcine reproductive and respiratory syndrome in eight European laboratories, using immunoperoxidase monolayer assay and enzyme-linked immunosorbent assay.// Revue Scientifique et -1995.

44. Drew, T.W., Lowings, J.P., and Yapp, F. Variation in open readingframes 3, 4 and 7 among porcine reproductive and respiratory syndrome V irus isolates in the UK. //Vet. Microbiol.- 1997-Vol. 55-p.209-221.

45. Egli, C., Thur, B., Liu, L. and Hofmann, A. Quantitive TaqManO RT-PCR for detection and differentiation of European and North American strains of porcine reproductive and respiratory syndrome virus.// J. Virol. Meth.- 2001-Vol.98-p.63-75.

46. Ellis,J., S.Krakowka, G.Allan, E.Clark and S.Kennady. The clinical scope of porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection has expanded since 1987: an alternative perspective. //Vet. PathoL,- 1999-Vol36- p.262-265.

47. Goldberg, T. L., Weigel, R. M., Hahn, E. C. and Schreba, G. Association between genetic, farm characteristics and clinical disease in field outbreaks of porcine reproductive and respiratory syndrome virus.// Prev. Vet. Med.- 2000-Vol.43-p.293-302.

48. Gonin P, Mardassi H, Gagnon C. A, Massie B, Dea S. A nonstructural and antigenic glycoprotein is encoded by ORF3 of the IAF-Klop strain of porcine reproductive and respiratory syndrome virus. //Arch Virol -1998-Vol.l43-No.l -p.927-1940.

49. Guilmoto, H., and S. Wessel-Robert. Control of PMWS in Brittany: a mainly zootechnical approach. In: PMWS: a new emerging disease of swine. //Merial symposium, new emerging disease of swine. Melbourne, Australia- 2002-p. 45-55.

50. Hamel, A., Lin, L. L. & Nayar, G. P. S. . Nucleotide sequence of porcine circovirus associated with postweaning multisystemic wasting syndrome in pigs.//Journal of Virology-1998-Vol.71-p. 5262—5267.

51. Halbur, P.G. 2000. Proceedings of the swine disease conference for swine practitioners, 8:113-8123.

52. Halbur, P.G. 2001. Proceedings of the swine disease conference for swine practitioners, 9:162-9166

53. Harding, J.C., and E.G. Clark. Recognizing and diagnosing postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). //Swine Health and Production. -1997-Vol.5-p.201-203.

54. Hochuli E, Bannwarth W, Dbeli H, Gentz R, Stber D. Genetic approach to facilitate purification of recombinant proteins with a novel metal chelate adsorbent. //Bio/Technology-1988-Vol. 6-p. 1321-1325.

55. Hochuli E, D. and H, Schacher A New metal chelate adsorbent selective for proteins and peptide containing neighbouring histidine residues. //J Chromatogr -1987-Vol.411 -p. 177-184.

56. Horter, D. C., Pogranichniy, R. M., Chang, C.-C., Evans, R. В., Yoon, K.-J. and Zimmerman, J. J. Characterisation of carrier state in porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection.//Vet. Microbiol.- 2002-Vol. 86-p.213-228.

57. Katti SK, LeMaster DM, Eklund H Crystal structure of thioredoxin from Escherichia coli at 1.68 resolution. //J Mol Biol. -1990-Vol.212-p. 167-184.

58. Keffaber, К. K. Reproductive failure of unknown etiology.// ASSP Newsletter -1989-Vol.l-p.l-9.

59. Kim, H. S., Kwang, J., Yoon, I. J., Joo, H. S. and Frey, M. L. Enhanced replication of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus in ahomogeneous subpopulation of MA-104 cell line. //Arch. Virol.- 1993-Vol. 133-p.477-483.

60. Kiupel, M, G.W. Stevenson, S.K. Mittal, E.G. Clark, and D.M. Haines. Circovirus-like viral associated disease in weaned pigs in Indiana. //Vet. Pathol. -1998-Vol.35-p.303-307.

61. Kono, Y, Kanno, T, Shimizu, M., Yamada, S, Ohashi, S, Nakamine, M. and Shirai, J. Nested PCR for detection and typing of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus in pigs. //J. Vet. Met. Sci.- 1996-Vol. 58-No.10-p.941-946.

62. Krakowka, S, J.A. Ellis, F. McNeilly, D. Gilpin, B. Meeham, K. McCullough and G. Allan. Immunological features of porcine circovirus type 2 infection. //Viral Immunol.- 2002-Vol.l5-p.567-582.

63. Vallie ER, Lu Z, Diblasimo-Smith EA, Collins-Racie LA, McCoy JM Thioredoxin as a fusion partner for production of soluble recombinant proteins in Escherichia coli. //Methods Enzymol.- 2000-Vol. 326-p.322-340.

64. Cann ,P., E. Albina, F. Madec, R. Cariolet and A. Jestin. 1997. Piglet wasting disease. Vet Rec. 141:660.

65. MagarR., Larochelle R., Thibault S. e.a. Experimental transmission of porcine circovirus type 2 (PCV2) in weaned pigs: a sequential study. //J. CoAp. PathoL, -2000-Vol. 123-p. 258-269.

66. Mandrioli, L., G. Sarli, S. Panarese, S. Balboni, P.S. Marcato. Apoptosis and proliferative activity in lymph node reaction in postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). //Vet. Immun. Immunopathol.- 2004-Vol. 97-p. 2537.

67. Manual of Diagnostic Test and Vaccines for Terrestrial Animals, -2004-http://www.oie.int/eng/normes/mmanual/A 00013.htm.

68. Mardassi H, Massie B, Dea S Intracellular synthesis, processing, and transport of proteins encoded by ORFs 5 to 7 of porcine reproductive and respiratory syndrome virus. //Virology-1996-Vol.221-p. 98-112

69. Mardassi H, Mounir S, Dea S Molecular analysis of the ORF3-7 of porcine reproductive and respiratory syndrome virus, Quebec reference strain. //Arch Virol -1995-Vol. 140-p. 1405-1418.

70. Martelli P. Et al., Proc.l6th IPVSCongress, Melbourne, Melbourne,-2000p.634.

71. Meehan BM, Gilpin DF, Krakowka S, et al. In vivo quantification analyses of PCV2 DNAs: correlation of virus load measurements with disease reproduction. //Proceedings, European Society Veterinary Virology, PMWS.- 2001-p. 103.

72. Meehan, B. M., McNeilly, F., Todd, D., Kennedy, S., Jewhurst, V. A., Ellis, J. A., Hassard, L. E., Clark, E. G., Haines, D. M. & Allan, G. M. .

73. Characterization of novel circovirus DNAs associated with wasting syndromes in pigs. //J. Gen. Virol.- 1998-Vol. 79-p. 2171-2179.

74. Meng X-J, Paul PS, Halbur PG, Morozov I Sequence comparison of open reading frame 2 to 5 of low and high virulence United States isolates of porcine reproductive and respiratory syndrome virus.// J Gen Virol.- 1995-Vol. 76-p.3 181-3 188.

75. Meng, X. J. . Heterogeneity of porcine reproductive and respiratory syndrome virus: implication for current vaccine efficacy and future vaccine development. //Vet. Microbiol.,- 2000-Vol.74-p.309-329.

76. Meulenberg J. J. M, Petersen-Den Besten A Identification and characterization of a sixth structural protein of Lelystad Virus: the glycoprotein GP2 encoded by ORF2 is incorporated in virus particle. //Virology-1996-Vol. 225-p.44-51.

77. Meulenberg JJM, Petersen-Den Besten A, De Kluyver EP, Moormann RJM, Schaaper WMM, Wensvoort G. Characterization of proteins encoded by ORFs 2 to 7 of Lelystad virus. //Virology-1995-Vol. 206-p.l55-163.

78. Meulenberg, J. J. M., Petersen-den Besten, A., de Kluyver, E. P., Moormann, R. J. M., Schaaper, W. M. M. and Wensvoort, G. Characterization of proteins encoded by ORFs 2 to 7 of Lelystad virus. //Virology- 1995a-Vol.206-p.155-163.

79. Meulenberg, J. J. M., Bos-de Ruijter, J. N. A., Wensvoort, G. and Moormann, R. J. M. Infectious transcripts from cloned genomelength cDNA of porcine reproductive respiratory syndrome virus.// J. Virol.- 1998a-Vol.72-p.380-387.

80. Morozov, I., T.Sirinarumits, S.D. Sorden, P.G.Halbur, M.K.Morgan, K.-J.Yoon, and P.S.Paul. Detection of novel strain of porcine circovirus in pigs with -weaning multisystemic waating syndrome. // J.Cli.Microbiol.- 1998-Vol.36-p.2535-2541

81. Murtaugh M.P, Elam M.R, Kakach L.T Comparison of the structural protein coding sequences of the VR-2332 and Lelystad virus strains of the PRRS virus. //Arch Virol. -1995-Vol.l40-p. 1451-1460.

82. Murtaugh, M.P„ Z.Xiao, and F. Zuckerman.Immunological responses of swine to porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection. // Viral. Immunol.- 2002-Vol.l5-p.533-547.

83. Nawagitgul, P., Morozov, I., Bolin, S.R., Harms, P.A., Sorden, S.D. and Paul, P.S. Open reading frame 2 of porcine cir covirus type 2 encodes a major capsid protein.//J. Gen. Virol.-2000-81:2281-2287.

84. Nayar, G. P. S., H. Andre, and L. Lihua. Detection and characterization of porcine circovirus associated with postweaning multisystemic wasting syndrome in pigs. //Can. Vet. J. 1997-Vol.38-p.384-386.

85. Nelsen, E. A., Murtaugh, M. P. and Faaberg, K. S. Porcine reproductive and respiratory syndrome virus comparison: divergent evolution on two continents. //J. Virol, -1999-Vol.73-No.l-p. 270-280

86. Neumann/ Eric J. Swine Health Fact Sheet/ Circovirus Infection in Swine.//2002.

87. Nielsen, H. S, Oleksiewicz, M. B, Forsberg, R, Stadejek, T, Bother, A. and Storgaard, T. Reversion of a live of porcine reproductive and respiratory syndrome virus vaccine investigated by parallel mutations. // J. Gen. Virol. -2001-Vol.82-p.1263-1272.

88. Olvera A, Sibila M, Calsamiglia M, et al. Application of a newly developed real time per for the quantification of Porcine circovirus type 2 in different excretion routes.// Proc. 4th Int Symp Emerg Re-emerg Dis, Rome. -2003.

89. Paton, D. J, Brown, I. H, Scott, A. C, Done, S. H. and Edwards, S. Isolation of a Lelystad virus-like particles agent from british pigs and scanning electron microscopy of infected macrophages. //Vet. Microbiol. -1992-Vol.33-p.195-201

90. Pirzadeh B, Dea S Monoclonal antibodies to the ORF5 product of porcine reproductive and respiratory syndrome virus define linear neutralizing determinants. //J Gen Virol.- 1997-Vol. 78-p.l 867-1 873

91. Pirzadeh, B. and Dea, S. Immune response in pigs vaccinated with plasmid DNA encoding ORF5 of porcine reproductive and respiratory syndrome virus.// J. Gen. Virol. -1998-Vol.79-p.989-999.

92. Plagemann PGW Lactate dehydrogenase elevating virus and related viruses. //In: Fields BN, Knipe DM, Howley PM (eds) Field's Virology, 3rd ed. Lippincott-Raven Philadelphia,- 1996-pp 1 105-1 120.

93. Pogranichnyy RM, Yoon KJ, Harms PA, et al. Characterization of immune response of young pigs to porcine circovirus type 2 infection.//Viral Immunol.-2000-Vol. 13-p. 143-153.

94. Porath J, Carlsson J, Olsson I, Belfrage G Metal chelate affinity chromatography, a new approach to protein fractionation. //Nature -1975-Vol.258-p.598-599.

95. Quintana, J., M. Balasch, J. Segales, M. Calsamiglia, G.M. Rodriguez-Arrioja, J. Plana-Duran, M. Domingo. Experimental inoculation of porcine circovirus type 1 (PCV1) and type 2 (PCV2) in rabbits and mice. //Vet. Res.-2002-Vol.33-p.229-237.

96. Rodriguez-Arrioja GM, Segales J, Balasch M, et al. Serum antibodies to porcine circovirus type 1 (PCV-1) and type 2 (PCV-2) in pigs with and without postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS).//Vet Rec.- 2000-Vol. 146-p. 762-764.

97. Rodriguez-Arrioja GM, Segales J, Calsamiglia M, et al. Dynamics of porcine circovirus type 2 infection in a herd of pigs with postweaning multisystemic wasting syndrome. // Am. J .Vet .Res.-. 2002-Vol. 63-p. 354-357.

98. Rosell C, Segales J, Plana-Duran J, et al. Pathological, immunohistochemical, and in-situ hybridization studies of natural cases of postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) in pigs.//J Comp Pathol. -1999-Vol. 120-p. 59-78

99. Rossow, K.D., Collins, J.E., Goyal, S.M., Nelson, E.A., ChristopherHennings, J. and Benfield D.A. . Pathogenesis of porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection in gnotobiotic pigs.// Vet. Pathol. -1995-Vol.32-No4-p.361-373.

100. Rottier PJM, Welling GW, Welling-Wester S, Niesters HGM, LenstraJA, Van derZeijst. Predicted membrane topology of the coronavirus protein //El. ProcNatl AcadSciUSA -1986-81: 1421-1425.

101. Rovira A, Balasch M, Segales J, et al. Experimental inoculation of conventional pigs with porcine reproductive and respiratorysyndrome virus and porcine circovirus 2. //J Virol.-2001-Vol.76-p.3232-3239.

102. Royer R.L., P. Nawagitgul, P.G. Halbur and P.S. Paul. Susceptibility of porcine circovirus type 2 to commercial and laboratory disinfectants.// Swine Health Prod .- 2001-Vol.9-p. 281-284.

103. Segales, J., Piella, J., Marco, E., Mateu-de-Antonio, E.M., Espuna, E. and Domingo, M. 1998. Porcine dermatitis and nephropathy syndrome in Spain. Vet. Rec. 142,483-486.

104. Segales J. Update on postweaning multisystemic wasting syndrome and porcine dermatitis and nephropathy syndrome diagnostics. // Swine Health Prod. -2002-Vol. 10-p. 277-281.

105. Segales, J. and M. Domingo. Postweaning multisystemic wasting syndrome in pigs. A review. //Vet Q.- 2002-Vol.24-p. 109-124.

106. Segsles, J. and Domingo, M. Porcine circovirus type 2 infection: postweaning multisystemic wasting syndrome and other condidions. //Proceedings of the 17th IPVS congress, Ames, Iowa, USA,- 2002-Vol. l-p.35- 42.

107. Shibarara T„ et al., //J.Vet.Med.Sci, -2000-Vol.62-p.l 125.

108. Shibata, I., Uruno, K. and Mori, M. Serological property and replication in cell cultures of porcine reproductive and respiratory syndrome viruses isolated in Japan.//J. Vet. Med. Sci.- 1996-Vol.58-No8-p.805-807.

109. Shnijder and Meulenberg, Snijder, E. J. and Meulenberg J. M. Molecular biology of arteriviruses. // J. Gen. Virol.- 1998-Vol.79-p.961-979.

110. Sierra, M.A., Mulas, de-las J.M., Molenbeek, R.F., Maanen, van C, Vos, J.H., Quezada, M. and Gruys, E. Porcine immune complex glomerulonephritis dermatitis (PIGD) syndrome. // Eur. J. Vet. Path. -1997-3 (2), 63-70..

111. Smith W.J., Thomson J.R., Done S. Dermatitis/nephropathy syndrome of pigs. //Vet. Rec, -1993-Vol.132-p.47.

112. Snijder, E. J. and Meulenberg J. M. (1998) Molecular biology of arteriviruses. J. Gen. Virol. 79:961-979.

113. Sorden SD. Update on porcine circovirus and postweaning multisystemic wasting syndrome. //Swine Health Prod. -2000-Vol.8-p. 133136.

114. Sorensen, K. J., E.S. Madsen, B. Strandbygaard, and J. Nielsen. Evaluation of blocking ELISA for screening of antibodies against porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus.//Vet. Microbiol. -1997-Vol.56-p. 1-8.

115. Steven D. Sorden, D.V.M., SELECTED DISEASES OF SWINEPh is Diseases of Swine, 8th ed. (1999), BE Straw, S D'Allaire, WL Mengeling, DJ Taylor, eds, Iowa State University Press

116. Stevenson G.W., et. al.,// Proc.l6th IPVSCongress, Melbourne, Melbourne,-2000-p.575

117. Stewart, E. J., Aslund, F. & Beckwith, J. Disulfide bond formation in the Escherichia coli cytoplasm: an in vivo role reversal for the thioredoxins. //EMBO J -1998-Vol.l7-p. 5543-5550.

118. Sur, J.-H., Doster, A. R., Galeota, J. A. and Osorio, F. A. Evidence for the localization of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) antigen and RNA in ovarian follicles in gilts. //Vet. Pathol.- 2001-Vol.38-p.58-66.

119. Terpsta, C., Wensvoort, G. and Pol, J. M. A. Experimental reproduction of porcine epidemic abortion and respiratory syndrome (mystery swine disease) by infection with Lelystad virus: Koch's postulates fulfilled.// Vet. Q. -1991-Vol.l3-p.131-136.;

120. Tischer, I., H. Gelderblom, W. Vettermann, and M.A. Koch. A very small porcine virus with circular single-stranded DNA. //Nature-1982-Vol.295-p.64-66.

121. Tischer, I., L. Bode, J. Apodaca, H. Timm, D. Peters, R. Rasch, S. Pociuli, and E. Gerike. Presence of antibodies reacting with porcine circovirus in sera of humans, mice, and cattle. //Arch. Virol. -1995-Vol.l40-p.l427-1439.

122. Tischer, I., R. Rasch, and G. Tochtermann. Characterization of papovavirus and picornavirus-like particles in permanent pig kidney cell lines. //Zentralbl. Bakteriol. Hyg. A -1974.-Vol.226-p. 153-167.

123. Tisher, I., D. Peters, R. Rasch, S. Pociuli. Replication of porcine circovirus: induction by glucosamine and cell cycle dependence. //Arch. Virol. -1987-Vol.96-p. 39-57.

124. Todd D., Me Nulty M.S., Mankertz A. e.a. Family Circoviridae. //In: Virus Taxonomy. Sevent report of the ICTV, San Diego, -2000-p.299-303

125. Van der Meer, Y., van Tol, J. G., Krijnse Locker, J. and Snijder, E. J. ORF la-encoded replicase subunits are involved in the membrane association of the arterivirus replication complex. //J. Virol.- 1998-Vol.72-No.8-p.6689- 6698.

126. Van Woensel, P., Van der Wouw, J. and Visser, N. Detection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus by polymerase chain reaction. // J. Virol; Meth.- 1994-Vol.47-p. 273-278.

127. Waddilove, A.E.J, and E. Marco. Assessing serotherapeutic control of PMWS in the field. //Proceedings of the 17th International Pig Veterinary Society Congress. -2002-Vol.l-p. 34.

128. Wootton, S. K., Nelson, E. A. and Yoo, D. Antigenic structure of the nucleocapsid protein of porcine reproductive and respiratory syndrome virus. //Clin. Diagn. Lab. Immunol.- 1998-Vol.5-p.773-779.

129. Zhang Y, Sharma RD, Paul PS Monoclonal antibodies against conformationally dependent epitopes on porcine reproductive and respiratory syndrome virus. Vet. Microbiol.- 1998-Vol.63-p.l25-136.

130. Zimmerman, J., Swenson, S. L., Wills, R. W., Pirtli, E. C., Yoon, K. J., Hill, H. T. and McGinley, M. J. Transmission of PRRS virus. //In Proceedings of the Allen D Leman swine conference, university of Minnesota, MN, USA,- 1993-p.51-52

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.