Технология получения противотуберкулезного препарата и оценка его иммунобиологических свойств тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат наук Кошкин Иван Николаевич

• Кошкин Иван Николаевич
• кандидат наук
• 2022

Оглавление диссертации кандидат наук Кошкин Иван Николаевич

ВВЕДЕНИЕ

ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общие сведения о микобактериях, строение, основные компоненты клетки и их функции

1.2. Механизм противотуберкулезного иммунитета

1.2.1. Врожденный иммунный ответ

1.2.2. Адаптивный клеточный иммунный ответ

1.3. Морфологии туберкулезного процесса у морских свинок

1.4. Вакцины и специальные средства, применяемые для профилактики туберкулеза

1.5. Бетулин и его дериваты

1.6. Заключение к обзору литературы

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследования

2.2. Результаты исследования

2.2.1. Конструирование экспериментальных препаратов на основе антигенов БЦЖ и бетулина, и его производных

2.2.2. Испытание иммунологической активности экспериментальных конъюгатов на морских свинках, инфицированных M. bovis (шт. 14)

2.2.2.1. Изучение иммуногенных и протективных свойств

полученных конъюгатов

2.2.2.2. Оценка функционального состояния нейтрофильных гранулоцитов у морских свинок, сенсибилизированных экспериментальными конъюгатами

2.2.2.3. Оценка способности экспериментальных конъюгатов восстанавливать утраченную иммунологическую реактивность у морских свинок

2.2.2.4. Анализ патогистологических изменений легких, лимфоузлов, селезенки и печени у морских свинок, сенсибилизированных

экспериментальными конъюгатами

2.2.3. Испытание иммунологической активности экспериментальных конъюгатов на морских свинках, инфицированных M. bovis (шт. 8)

2.2.3.1. Изучение иммуногенных и протективных свойств иммуногенов, комплексированных с производными бетулина

2.2.3.2. Иммунные реакции у морских свинок на введение конъюгатов

на основе антигенов БЦЖ с производными бетулина

2.2.3.3. Анализ патогистологических изменений у морских свинок, сенсибилизированных конъюгатами антигенов БЦЖ с производными

бетулина до заражения M. bovis (шт. 8)

3. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

3.1. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

3.2. ВЫВОДЫ

3.3. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

3.4. ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА

ПРИЛОЖЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Технология получения противотуберкулезного препарата и оценка его иммунобиологических свойств»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Туберкулез крупного рогатого скота до настоящего времени остается трудноразрешимой социально-экономической проблемой многих стран мира, в том числе в России, несмотря на реализацию в некоторых из них еще в середине прошлого века программ борьбы с этой инфекцией (А.С. Донченко, Н.А. Донченко, 2004; Н.А. Донченко, 2008; Н.М. Колычев с соавт., 2010; Д.Н. Мингалеев, 2018; А.С. Донченко с соавт., 2019; М.О. Баратов, О.П. Сакидибиров, 2021; B.M. Buddle et al., 2018; A. Balseiro et al., 2020; D.N. Mingaleev et al., 2020). Сложившаяся ситуация обусловлена экономической нецелесообразностью внедрения кампаний по искоренению туберкулеза в развивающихся странах, а также наличием в дикой природе резервуаров инфекции обусловленной M. bovis. В таких случаях важной стратегической задачей борьбы с заболеванием является вакцинация крупного рогатого скота против туберкулеза (A.J.K. Conlan et al., 2018).

До настоящего времени единственной доступной вакциной против туберкулеза крупного рогатого скота является препарат, изготовленный на основе живого аттенуированный штамма M. bovis - Bacille Calmette-Guérin (BCG), который, индуцирует значительный уровень защиты от заражения M. bovis, но, тем не менее, не обеспечивает полного и постоянного протективного иммунитета (H.M. Vordermeier et al., 2016). Более существенным недостатком, ограничивающим использование БЦЖ, является высокая чувствительность привитых животных к диагностическим тестам, основанным на применении туберкулиновой кожной пробы (Г.П. Протодьяконова, 2015, 2021; A.O. Whelan et al., 2011; W.R. Waters et al., 2012; A. Balseiro et al., 2020), что создает значительные трудности в дифференциальной диагностике поствакцинальных реакций. В этой связи важность разработки специфических препаратов, позитивно воздействующих на систему иммунитета и не осложняющих контроль за туберкулезной инфекцией в стадах неоспорима.

Развитие этого направления в основном сосредоточено на создании новых вакцин с более продолжительными иммунопротекторными свойствами и лучшей защитой, способных заменить БЦЖ, а также бустерных вакцин после иммунизации БЦЖ, необходимых для усиления или пролонгации ее защитных эффектов и повышения иммуногенности (J. Li et al., 2020). В частности, на крупном рогатом скоте были испытаны противотуберкулезные препараты, включающие живые аттенуированные микобактерии, а также субъединичные вакцины (N.A. Parlane, B.M. Buddle, 2015; A. Balseiro et al., 2020).

Из целого ряда концепций конструирования безопасных вакцин заслуживает внимание конъюгация иммуногенной фракции, выделенной из вакцинных штаммов бактерий, с матрицей, формирующей в организме животного депо специфического иммуногена. В системе иммунитета данный комплекс предположительно имитирует живую вакцину, а именно способствует накоплению значительного количества клеток иммунной памяти, которые в дальнейшем и обеспечивают защиту животного от возбудителя. На основе этого принципа создания иммуногенов были сконструированы препараты из отдельных фракций разрушенной ультразвуком культуры БЦЖ, конъюгированной с целлюлозной матрицей, а также с синтетическими полиэлектролитами (В.В. Шамов, 2001; В.С. Власенко с соавт., 2009).

Дальнейшее совершенствование изготовления специфических препаратов по этому принципу основано на поиске новых эффективных средств с адъювантными свойствами, способных повысить иммуногенность вакцин, а также снизить их токсичность. Из такого рода веществ особое внимание привлекает бетулин, содержащийся в экстракте бересты и обладающий разнообразной биологической активностью, в т. ч. адъювантной.

Степень ее разработанности. Во Всероссийском НИИ бруцеллеза и туберкулеза разработана технология получения белково-целлюлозных комплексов из антигенов разрушенной культуры вакцинного штамма БЦЖ, обладающих высокой иммуногенностью и протективными свойствами, но ниже, чем у вакцины БЦЖ (М.А. Бажин, В.В. Шамов, 2000; А.Н. Новиков, 2003; М.А.

Бажин с соавт., 2004). В последующем высокоиммуногенные нереактогенные иммунобиологические препараты были получены на основе синтетических полиэлектролитов с антигенами, извлеченными из культуры БЦЖ, при этом технология их изготовления в процессе лабораторных и производственных испытаний претерпевала изменения, в основном, по причине токсичности поливинилпирролидона, входящего в состав препарата (Е.М. Шулико, 2011; В.А. Пелик с соавт., 2014; М.А. Бажин с соавт., 2016).

В качестве потенциальных иммуноадъювантов вакцин рассматриваются экстракт бересты с 70%-ным содержанием бетулина (И.В. Красильников с соавт., 2011) и экстракт бересты в форме водной нанодисперсии (И.В. Красильников с соавт., 2016). Также показано, что рекомбинантные белки ESAT-6 / CFP-10 вместе с адъювантом на основе бетулина обеспечивают протективную защиту мышам, чувствительным к возбудителю туберкулезной инфекции (И.В. Красильников с соавт., 2017). Какие-либо литературные источники по изучению иммунобиологических свойств у бетулоновой и бетулиновой кислот отсутствуют.

Цель и задачи. Цель состояла в разработке специфических противотуберкулезных препаратов на основе антигенных комплексов БЦЖ с бетулином и его производными и изучении их иммунобиологических свойств на модели экспериментального туберкулеза у морских свинок.

Для решения поставленной цели были определены следующие задачи:

- сконструировать серию экспериментальных конъюгатов на основе антигенов вакцинного штамма БЦЖ с бетулином и его дериватами и изучить на морских свинках их иммуногенные и иммуномодулирующие свойства при различных дозах препаратов;

- оценить структурно-функциональное состояние гистиоцитарной системы на морских свинках, экспериментально инфицированных вирулентной культурой штамма 14 M. bovis после введения оптимальных доз экспериментальных конъюгатов;

- изучить иммуногенные и протективные свойства, а также оценить эффективность иммунных реакций на введение лабораторным животным

наиболее перспективных экспериментальных конъюгатов и с последующим инфицированием вирулентной культурой штамма 8 M. bovis;

- провести анализ патогистологических изменений легких, лимфоузлов, селезенки и печени морских свинок, сенсибилизированных экспериментальными конъюгатами на введение вирулентной культуры штамм 8 M. bovis.

Научная новизна. Впервые сконструированы экспериментальные серии конъюгатов антигенов микобактерий с различным содержанием бетулина, бетулоновой и бетулиновой кислот и изучены их иммуногенные, протективные и иммуномодулирующие свойства. Установлено, что конъюгат антигенов БЦЖ с бетулоновой кислотой в дозе 500 мкг/мл белка индуцировал наиболее эффективную противотуберкулезную защиту, а также способствовал восстанавлению утраченной иммунологической реактивности и усилению протективных свойства БЦЖ.

Дана оценка эффективности иммунных реакций, а также охарактеризованы особенности иммуноморфологических изменений в легких, лимфатических узлах, селезенке и печени на введение экспериментальных конъюгатов в оптимальных дозах до введения вирулентных культур микобактерий.

Научная новизна подтверждена патентом РФ на изобретение: «Способ получения специфического иммуномодулятора» (2022 г.).

Теоретическая и практическая значимость работы. Представлено теоретическое обоснование технологии получения специфических противотуберкулезных конъюгатов и дана оценка эффективности иммунных реакций, а также структурно-функционального состояния гистиоцитарной системы на их введение морским свинкам и последующее введение патогенных микобактерий туберкулеза.

Полученные результаты дополняют и расширяют сведения об особенностях патогистологических изменений, развивающихся в организме морских свинок, вовлеченных в туберкулезный процесс, а также представления о механизме действия бетулина и его производных: бетулоновой и бетулиновой кислот.

Материалы диссертации использованы для разработки методических рекомендаций «Антигенные комплексы БЦЖ с производными бетулина: перспектива использования в ветеринарии» (2022 г., Омск).

Полученные данные могут быть использованы в научно-исследовательской работе аналогичной направленности, а также в учебном процессе биологического и ветеринарного профиля ВУЗов.

Методология и методы исследования. Методологической основой диссертационной работы явилось изучение и структурирование литературных данных по вопросам строения микобактериальной клетки и функций ее основных компонентов; особенностей противотуберкулезного иммунитета, морфологии органов и тканей при туберкулезном процессе; применения специфических средств для профилактики туберкулеза; биологической активности бетулина и его дериватов и возможности их использования в качестве адъювантов при конструировании специфических препаратов.

В соответствии с целью и задачами были выбраны объекты исследования (серии экспериментальных конъюгатов на основе антигенов БЦЖ с бетулином и его производными) и комплекс методов исследования: аллергических, гематологических, цитоморфологических, иммунологических, фотометрических, бактериологических, патологоанатомических, гистологических и статистических.

Основные положения, выносимые на защиту:

- конструирование экспериментальных конъюгатов на основе антигенов БЦЖ с бетулином и его дериватами: бетулоновой и бетулиновой кислотой;

- оценка иммуногенных, протективных и иммуномодулирующих свойств вновь синтезированных препаратов на модели экспериментального туберкулеза M. bovis шт. 8 и 14;

- введение конъюгата антигенов БЦЖ с бетулоновой кислотой в оптимальной дозе обеспечивает сопоставимый с эффективностью вакцины БЦЖ уровень противотуберкулезной защиты;

- морфологическая оценка эффективности препарата на основе антигенов БЦЖ с бетулоновой кислотой.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность результатов обеспечена большим объемом лабораторных исследований, проведенных с 2018 по 2021 год на сертифицированном оборудовании с использованием методов статистического анализа, цифровыми снимками микроскопических исследований и публикацией результатов диссертации в рецензируемых журналах.

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на национальных и международных научно-практических конференциях: «Актуальные вопросы иммунологии в разных отраслях агропромышленного комплекса» (Омск, 15 декабря 2019 г.), «Актуальные вопросы ветеринарии» (Омск, 29 июня 2020 г.); «Актуальные проблемы ветеринарной науки и практики» (Омск, 13 ноября 2020 г.); «Актуальные проблемы ветеринарной науки и практики» (Омск, 22-26 марта 2021 г.); «Фундаментальные и прикладные аспекты ветеринарной медицины на границе веков» (Омск, 30 ноября - 3 декабря 2021 г).

Публикация результатов исследования. По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ: из них 2 - в ведущих рецензируемых журналах и изданиях, рекомендованных ВАК РФ, 1 статья - в журнале, индексируемом в международной базе Scopus.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена 185 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 7 таблицами и 90 рисунками. Список литературы включает 237 источников, из них 161 иностранных авторов.

Личный вклад. Личное участие автора охватывает все разделы диссертации, участие соавторов отражено в совместно изданных научных статьях. Автор приносит глубокую благодарность за оказание научно-методической помощи доктору химических наук И.В. Кулакову и кандидату ветеринарных наук Ю.М. Гичеву.

ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общие сведения о микобактериях, строение, основные компоненты

клетки и их функции

На сегодняшний день известно около 100 видов микобактерий, относящихся к царству Bacteria, типу Actinobacteria, классу Actinobacteridae, подклассу Actinomycetales, отряду Firmicutes, подотряду Corynebacterineae, семейству Mycobacteriaceae, роду Mycobacterium (Дж. Хоулт с соавт., 1997; М.Ф. Агапова с соавт., 2011; М.И. Гулюкин с соавт., 2018; А.Х. Найманов, В.М. Калмыков, 2018)

Среди микобактерий различают патогенные (облигатные), потенциально-патогенные и сапрофитные (непатогенные) бактерии. Для ветеринарной практики особое значение имеют микобактерии туберкулезного комплекса (Mycobacterium tuberculosis complex - МТВС), включающего в себя следующие виды: M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG, M. africanum, M. canetti, M. caprae, M. microti, M. pinnipedii (M. A. Forrellad et al. 2013).

По морфологическим признакам микобактерии, это тонкие, прямые или слегка изогнутые неподвижные палочки размером от 0,8 до 5 мкм, шириной от 0,2 до 0,5 мкм (М.И. Гулюкин с соавт., 2018; А.Х. Найманов, В.М. Калмыков, 2018; А.А. Сидорчук с соавт., 2021). Для этих бактерий свойствен полиморфизм, чаще всего они не ветвятся, однако, у некоторых представителей формируются гифы или первичный мицелий. Кроме того, в определенных условиях микобактерии могут переходить в L-форму, которая связана с дефектом клеточной мембраны (А.И. Коротяев, С.А. Бабичев, 2008; М.И. Гулюкин с соавт., 2018; В.Л. Лебедев, 2020;).

Клеточная стенка микобактерий представляет сложную липофильную структуру, которая представлена 4 основными слоями: плазматической

(внутренней) мембраной; комплексом пептидогликан-арабиногалактан; ассиметричной внешней мембраной (микомембраной), ковалентно связанной с комплексом пептидогликан-арабиногалактан через миколиновые кислоты; внешней капсулой, в составе которой присутствуют внешние липиды, миколовые кислоты, липоарабиноманнан, маннозиды, полисахариды и пептидогликан (М.И. Гулюкин с соавт., 2018; R. Kalscheuer et al., 2019).

Между клеточной стенкой и цитоплазмой находится цитоплазматическая мембрана, представленная тремя слоями. В цитоплазме может быть обнаружено от 2 до 12 гранул, кроме того, в ней располагаются рибосомы, полисомы, вакуоли и включения. Ядерное вещество располагается в цитоплазме в виде тонких тяжей и трубчатых образований, соединяющихся с поверхностью клетки. ДНК микобактерий содержится в ядерном веществе и гранулах, а РНК сосредоточена в рибосомах и цитоплазме (В.В. Ерохин, 1982; А.И. Коротяев, С.А. Бабичев, 2008).

Благодаря особому строению клеточной стенки и ее химическому составу, все представители рода Mycobacterium являются, кислото-, спирто- и щелочеустойчивыми для растворов с низкой концентрацией во внешней среде.

Кислотоустойчивость достигается за счет высокого содержания липидных комплексов в клеточной стенке, благодаря чему обеспечивается гидрофобный барьер, из-за которого в нее не проникают обычные красители (А.Х. Найманов, В.М. Калмыков, 2018). В тоже время при окраске карболовым фуксином или другими анилиновыми красителями, которые проникают в клеточную стенку и связываются с миколовыми кислотами внешней оболочки клетки, в результате чего прочно удерживается окраска при последующем воздействии растворами минеральных кислот. На этой особенности основана дифференциальная окраска микобактерий по Цилю-Нильсену, предложенная немецкими врачами Ф. Цилем и Ф. Нильсеном в 1882-1883 гг. Фракции миколовой кислоты липидов клеточной стенки также отвечают за многие характерные свойства бацилл. К ним относятся кислотоустойчивость, медленный рост за счет задержки проникновения питательных веществ, резистентность к большинству применяемых

антибиотиков, устойчивость к детергентам, кислотами и щелочами и комкование или образование корда.

Помимо устойчивости к кислотам, спиртам и щелочам, микобактерии весьма устойчивы к воздействию факторов внешней среды. Так, солнечный свет вызывает их инактивацию через 1,5 часа, в почве они сохраняются до 6 месяцев, в воде - до 15 месяцев и навозе - 2 года. Микобактерии относительно устойчивы к действию обычных дезинфицирующих веществ: 5%-ный раствор фенола вызывает гибель туберкулезных палочек лишь через 6 часов. Соединения, выделяющие свободный активный хлор (3-5% растворы хлорамина, 10-20% растворы хлорной извести), вызывают гибель возбудителя туберкулеза в течение 3-5 часов (А.А. Сидорчук с соавт., 2021; Н.М. Колычев, 1984, 2001).

Клеточная стенка микобактерий богата липидами и обладает исключительными физико-химическими свойствами, но химические компоненты также играют важную роль в патогенности. В частности, липиды микобактерий, помимо участия в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЧЗТ), обладают комплексным биологическим действием, выражающимся в их токсичности и образовании специфических изменений в тканях.

На сегодняшний день известны следующие микобактериальные липиды: липоарабиноманнан (LAM), липоманнан (LM), фосфатидилинозитолманнозиды (PIM), трегалоза-6,6'-димиколат (TDM), димикоцерозатфтиоцерина (PDIM) и фенольные гликолипиды (PGL) (W. Ribón, 2018; R. Kalscheuer et al., 2019).

Липоарабиноманнан (LAM) - гликолипоконъюгат, состоящий из маннозилфосфата инозита (MPI) и полисахарида (M. Daffé et al., 2008), ответственный в разных штаммах и видах микобактерий за продукцию интерферона-у (IFN-y). Кроме того, LAM ингибирует созревание фагосом, за счет наличия незрелого маркера фагосомы (rab5) и способствует внутриклеточному выживанию микобактерий (H. Alonso et al., 2017).

Считается, что LAM может вызывать повышенную экспрессию фактора некроза опухолей альфа (TNF-a), повышение уровня интерлейкина-10 (IL-10) и различную экспрессию интерлейкинов-6 и 12 (IL-6, IL-12).

Маннозалипоарабиноманн (ManLAM) у некоторых микобактерий вызывает экспрессию IL-12 и апоптоз макрофагах, способствует выделению цитокинов Т-хелперами второго типа (Th2) и снижению экспрессии цитокинов Т-хелперами первого порядка (Th1) (D.N. Dao et al., 2004; A.K. Shabaana, 2005; T. Fukuda et al.,

2013).

Другой липид - липоманнан (LM) представляет собой мультигликозилированный или полиманнозилированный

маннозидфосфатидилинозитола (PIM) и считается антигеном врожденного иммунитета.

Тетраацилированный LM активирует макрофаги с помощью Toll-подобных рецепторов (TLR2 / TLR4), диацилированные молекулы регулируют и подавляют выработку секреции оксида азота (NO) и цитокинов в макрофагах, активированных липополисахаридом (ЛПС) (E. Doz et al., 2007).

Фосфатидилинозитолманнозиды (PIM) составляют существенный компонент клеточной оболочки, предшественник LAM и LM (J.B. Torrelles et al., 2006). В опытах на мышах показано, что PIM может ингибировать экспрессию фактора некроза опухолей (TNF) и IL-12 в макрофагах посредством CD14-зависимых и CD14-независимых механизмов (N. Court et al., 2011; P. Vir et al.,

2014).

Трегалоза-6,6'-димиколят (TDM), также известный как фактор Корда, является наиболее распространенным и токсичным липидом в оболочке микобактериальных клеток. Состоит из двух полярных головных групп трегалозы, в которых этерифицируются две миколовые кислоты. Обладает биологическими функциями, способствуя ангиогенезу, ингибирует подкисление фаголизосомы, предотвращает слияние Ca2+ зависимой фагосомы с лизосомой и удаление липидов микобактериальной поверхности, что увеличивает перенос бактерий в кислые компартменты, вызывая 99% гибель макрофагов после 3-х дней заражения (N. Saita et al., 2000; J. Indrigo et al., 2003).

Фиоцеролдимикоцерозат (PDIM) и фенольные гликолипиды (PGL) включают группу родственных липидов клеточной стенки, нековалентно ограниченных микобактериальной поверхностью.

PDIM и PLG являются основными факторами вирулентности микобактерий. PDIM и PGL - молекулы, необходимые для бактериального дублирования во время острой фазы (C.J. Cambier et al., 2014).

PDIM участвует в микобактериальной устойчивости к детергентам, а также связан с проницаемостью и плотностью оболочки, также он способствует выживанию внутриклеточных бактерий, защищая их от действия активных промежуточных соединений азота, и регулирует экспрессию TNF-a (J. Augenstreich et al., 2017; C. Rousseau et al., 2004). Недавние исследования показали, что PDIM взаимодействует с белком ESAT-6, вызывая повреждение мембраны фагосомы и апоптоз (C. Astarie-Dequeker et al., 2009; J. Augenstreich et al., 2017).

PGL продуцируется главным образом быстрорастущими микобактериями и большинство микобактерий не продуцируют его из-за мутации в гене phs15/1. Придает нейротоксические свойства макрофагам и увеличивает синтез активных форм азота (АФА) (C.A. Madigan et al., 2017).

Белки микобактерий разделяют на секретируемые белки, связанные с различными системами секреции (ESX, PE и PPE), и белки клеточной стенки или липопротеиды (LpqH, LppX, Mpt83, LprG, LpqS, PstS), являющихся частью оболочки микобактериальных клеток и плазматической мембраны (M. A. Forrellad et al., 2013; W. Ribón, 2018; P. Tucci et al., 2020; A. Ly, J. Liu, 2020). Их функция связана с молекулярным экспортом, гомеостазом клеточной стенки и поглощением питательных веществ; их присутствие способствует взаимодействию "хозяин-патоген".

LpqH - этот O-гликозилированный и ацилированный липогликопротеин является главным антигеном клеточной стенки. Распознается иммунной системой и вызывает пролиферацию Т-клеток in vitro, стимулирует созревание дендритных клеток и аутофагию и активирует TLR-2 (D.M. Shin et al., 2010). Белок изменяет

экспрессию и презентацию антигенов в главном комплексе гистосовместимости второго класса (MHCII) (E.H. Noss et al., 2001), индуцирует макрофаговый апоптоз каспаза-зависимых и -независимых механизмов (A. Sánchez et al., 2012).

Гликозилированный липопротеид Mpt83, связанный с адгезией клеток-хозяев, присутствует в M. tuberculosis и М. bovis, с некоторыми различиями в гликозилировании.

Белок распознается манозным рецептором (MR), индуцирует IL-б, IL-12 и TNF-a (W. Ribón., 201S). После воздействия не липидированного синтетического Mpt8 были обнаружены в мононуклеарных клетках периферической крови от доноров, вакцинированных БЦЖ, или с латентным туберкулезом, пролиферация Т-клеток и экспрессия IFN-y (A.S. Mustafa, 2011).

LprG, также известный как P27 липопротеин, представляет собой лиганд TLR2; ингибирует процессинг антигена в макрофагах МНС II (A.J. Gehring, 2004). Имеет большую полость, связывающую триацилированный агонист TLR2: LM, LAM и PIM (S.V. Balasingham et al., 2009), которые определяют локализацию оболочки LAM и контролируют слияние фагосом-лизосом (S. Shukla et al., 2014).

M. bovis P27 необходим для остановки созревания и репликации фагосом в бычьих макрофагах (C.L. Vázquez et al., 2017).

Многодоменный липопротеид RpfB, связанный с активацией после состояния покоя микобактерий, запускает дендритные клетки (DC) Th1 -типа посредством взаимодействия с TLR-4 (J.S. Kim et al., 2013).

LpqS представляет собой белок, связанный с выживаемостью в латентный период (S. Sakthi et al., 201б).

Липопротеид Lprl, присутствующий только в бактериях из MTBC, оказывает повышенную регуляцию во время инфицирования микобактериальными макрофагами. Прочно связывает лизоцим, полностью аннулируя его ферментативную активность.

Переносчик фосфата гликолипопротеин PstS вызывает фагоцитоз и снижает продукцию активных форм кислорода (D. Sethi et al., 201б).

Белки РЕ (РЕ-РРЕ и РЕ-РОКБ) взаимодействуют с ТЬЯ-2 на дендритных клетках и макрофагах, вызывая секрецию цитокинов, некроз и апоптоз, и, повышая выживаемость микобактерий ВаБи е1 а1., 2007).

Белки ESX-3 (EsxG и EsxH). Гетеродимер EsxG и EsxH, который вредит созреванию макрофагальных фагосом, секретируется системой ESX-3 и ингибирует эндосомно-сортировочный комплекс необходимый для транспорта (ESCRT), нарушая антиген-специфическую активацию CD4 + МТВС макрофагами и дендритными DC (Е. Ттаг1ере е1 а1., 2016; С. Ро11:а1-СеШау е1 а1., 2016)

Таким образом, микобактерии обладают двумя типами антигенов: первые представлены липидами и липопротеидами антигенами клеточной стенки и вторые - цитоплазматическими растворимыми белковыми антигенами, которые обладают рядом биологических эффектов, включая адъювантность, токсичность, подавление иммунитета и остановку созревания фагосом.

1.2. Механизм противотуберкулезного иммунитета 1.2.1. Врожденный иммунный ответ

Значение врожденного иммунитета в защите против MTBC имеет важное значение, так как его нарушение приводит к клиническим проявлениям микобактериальной инфекции (J. Rosain et al., 2019). Так, макрофаги, нейтрофилы, дендритные клетки (DC), естественные клетки-киллеры (NK), тучные клетки и комплемент являются основными участниками врожденного иммунитета.

С другой стороны, эпителиальные клетки дыхательных путей (AEC) также участвуют в защите против микобактерий и могут рассматриваться как компоненты врожденного иммунитета (Р.М. Хаитов и др. 2020)

Эпителиальные клетки дыхательных путей. AEC - это первые клетки, вступающие в контакт с возбудителем туберкулеза. Помимо своей основной функции, такой как создание физических барьеров, они обладают несколькими иммунологическими функциями, которые осуществляются через рецепторы распознавания образов (PRR). Так они могут воспринимать присутствие микобактерий и, следовательно, регулировать состав жидкости на поверхности дыхательных путей, улучшая ее антимикробную способность (Y. Li et al., 2012, Р.М. Хаитов и др. 2020).

Более того, активация PRR приводит к продукции воспалительных цитокинов и к активации связанных со слизистой оболочкой инвариантных Т-клеток, стимулирующих продукцию IFN-y и фактора некроза опухоли (TNF) -а (M. J. Harriff et al., 2014).

Макрофаги. Макрофаги первые из иммунокомпетентных клеток, которые вступают в контакт с возбудителем туберкулеза, если их достаточное количество и реакция на микобактерии незамедлительна, то происходит инактивация микобактерий и прекращение инфекции (M. Martino et al., 2014, C.J. Queval et al., 2017). Если же этого не происходит, то данные клетки способствуют развитию инфекции, потому что сначала в них происходит репликация микобактерий, а затем микобактерии находятся внутри их фагосомы.

После поглощения фагосомы немедленно созревают в фаголизосомы (R.S. Flannagan et al., 2009). Фагосомы подкисляют, поглощают лизосомальные гидролазы и антимикробные пептиды, и ограничивают основные питательные вещества, такие как железо, одновременно вызывая токсический выброс цинка (H. Botella et al., 2011). Кроме того, микроорганизмы активируют PRR, которые увеличивают противомикробную способность фагосом, способствуя привлечению НАДФН-оксидазы (P. Nunes et al., 2013). НАДФН-оксидаза генерирует активные формы кислорода (АФК) для уничтожения микроорганизмов и способствует определенному пути созревания фагосом, называемому LC3-ассоциированным фагоцитозом (J. Martinez et al., 2015; S. Upadhyay et al., 2018).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Кошкин Иван Николаевич, 2022 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Агапова, М. Ф. Диагностика, профилактика и меры борьбы при туберкулезе сельскохозяйственных животных: учебно-методическое пособие / М. Ф. Агапова, Н. А. Донченко, В. Т. Вольф. — Новосибирск: НГАУ, 2011. — 83 с. — Текст : электронный. — URL: https://e.lanbook.com/book/5503 (дата обращения: 05.04.2021). — Режим доступа: для авториз. пользователей.

2. Бажин, М. А. Иммуногенные и протективные свойства иммобилизированных на целлюлозной матрице антигенов микобактерий / М.А. Бажин, В.В. Шамов // Актуальные проблемы бруцеллеза и туберкулеза животных: Сб. науч. тр. ВНИИБТЖ. - Омск, 2000. - С. 61-66.

3. Бажин М.А. Вакцинопрофилактика в комплексе противотуберкулезных мероприятий / М.А. Бажин, Ю.И. Смолянинов, В.Г. Ощепков [и др.] // Ветеринарная патология. - 2004. - №1-2(9). - С. 139-142.

4. Бажин, М. А. Получение специфических антиген-полимерных комплексов и оценка их протективных свойств / М. А. Бажин, В. С. Власенко, Г. П. Неворотова // Вестник Омского ГАУ. - 2016. - № 4(24). - С. 124-134.

5. Батрак, Г. Е. Дозирование лекарственных средств экспериментальным животным / Г. Е. Батрак, А. Н. Кудрин. - Москва : Медицина, 1979. - 168 с.

6. Баратов, М. О. Туберкулез крупного рогатого скота в Республике Дагестан: проблемы и перспективы / М. О. Баратов, О. П. Сакидибиров // Ветеринария. - 2021. - № 1. - С. 24-28.

7. Бетулин и его производные. Химия и биологическая активность / Г.А. Толстиков, О.Б. Флехтер, Э.Э. Шульц [и др.] // Химия в интересах устойчивого развития. - 2005. - № 3. - С. 1-30.

8. Величко, Г. И. Противовирусное и иммуномодулирующее действие бетулина при вирусных респираторных инфекциях крупного рогатого скота :автореф. ... дис. канд. биол. наук : 03.00.23 / Г. И. Величко. - Щелково, 2008. - 14 с.

9. Верещагин, М. Н. Клиническое наблюдение над телятами, вакцинированными штаммом БЦЖ / М. Н. Верещагин, В. М. Аристовский, Н. Н. Благовещенский // Сб. тр. Казан.туб. комиссии.- Казань, 1926. - Т. 1. - С. 31-36.

10. Вишневский, П. П. Диагностика и профилактика туберкулеза / П. П. Вишневский // Практическая ветеринария. - 1927. - № 9. - С. 33.

11. Власенко, В. С. Оптимизация методов контроля и коррекции иммунного статуса при туберкулезе и лейкозе крупного рогатого скота: автореф. дис. ... д-ра биол. наук / В. С. Власенко. - Казань, 2011. - 43 с.

12. Власенко, В. С. Перспектива использования дискретно-динамического принципа оценки иммунного статуса в ветеринарии / В. С. Власенко, М. А. Бажин, А. Н. Новиков // Ветеринарная патология. - 2005. - № 3. -С. 90-94.

13. Гельберг, С. И. К методике экспериментального изучения иммуногенных свойств противотуберкулезных вакцин и эффективность методов их применения / С. И. Гельберг, Е. А. Финкель // Проблемы туберкулеза. - 1959. -№ 2. - С. 80-84.

14. Гепатопротекторная активность бетулоновой кислоты и ее производных при экспериментальной полихимиотерапии / Т. В. Ким, О. Р. Грек, Т. Г. Толстикова [и др.] // Вестник Новых Медицинских Технологий. - 2010. - Т. XVII, № 1. - С. 175.

15. Гистопатоморфологические изменения внутренних органов морских свинок при введении противотуберкулезного препарата Ким-М2 / В. С. Власенко, Ю. М. Гичев, Т. С. Дудоладова [и др.] // Вестник КрасГАУ. - 2019. - № 8(149). -С. 97-102.

16. Донченко, А.С. Научные и практические основы профилактики и ликвидации туберкулеза крупного рогатого скота /А.С. Донченко, Н.А. Донченко // Сиб. вестн. с.-х. науки. - 2004. - №3. - С. 81-88.

17. Донченко, Н.А. Усовершенствование средств и методов диагностики и профилактики туберкулеза крупного рогатого скота: автореф. дис. ... докт. ветеринар. наук / Н.А. Донченко. - Новосибирск, 2008. - 36 с.

18. Дидовец, С. Р. Опыт борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота в Украинской ССР / С. Р. Дидовец, Ю. Я. Кассич, А. Т. Борзяк // Материалы Всесоюзной научной конференции. - Омск, 1980. - С. 71-73.

19. Дискретно-динамический анализ в оценке иммунитета : методические рекомендации / М. А. Бажин, В. С. Власенко, А. Н. Новиков, Ю. И. Пацула. -Омск, 2005. - 24 с.

20. Ерохин, В. В. Строение микобактерий туберкулеза по данным электронной микроскопии / В. В. Ерохин // Проблемы туберкулеза. -1982. - № 3. -С. 55-59.

21. Задорожная, М. В. Применение бетулина для повышения поствакцинального иммунитета у цыплят-бройлеров против ньюкасловской болезни и инфекционного бронхита кур :автореф. ... дис. канд. ветеринар. наук : 06.02.02 / М. В. Задорожная. - Омск, 2013. - 15 с.

22. Иммуностимулирующие свойства конъюгатов, изготовленных на основе антигенов БЦЖ с поливинилпирролидоном / В.С. Власенко, Е.М. Шулико. С.Ю. Петров [и др.] // Достижения науки и техники АПК. - 2009. - №12. - С. 4749.

23. Изучение возможности использования нанодисперсии экстракта бересты в качестве адъюванта вакцинных препаратов / И. В. Красильников, А. В. Иванов, А. М. Николаева, В. В. Машин // Сиб. мед.журн. - 2011. - Т. 26, № 2. - С. 65-67.

24. Иммунные реакции у коров на введение специфического иммуномодулятора КИМ-М2 / В. А. Пелик, В. С. Власенко, М. А. Бажин [и др.] // Ветеринарный врач. - 2013. - №3. - С. 35-38.

25. Иммуногенные свойства сухой вакцины БЦЖ / А. И. Тогунова, Е. Н. Лещинская [и др.] // Бюл. ин-та туберкулеза АМН СССР. - 1951. - № 1. - С. 27-33.

26. Иммунопрофилактика в комплексе противотуберкулезных мероприятий / М. А. Бажин, Ю. И. Смолянинов, В. Г. Ощепков [и др.] // Ветеринарная патология. - 2004. - № 1-2. - С. 139-142.

27. Иммунобиологические свойства экспериментальных инактивированных гриппозных вакцин, содержащих корпускулярные адъюванты / И. В. Красильников, И. А. Ленева, Н. А. Михайлова [и др.] // Медицинский алфавит. - 2016. - Т. 2. - № 16(279). - С. 30-35.

28. Инфекционные болезни животных : учебник / А. А. Сидорчук, Н. А. Масимов, В. Л. Крупальник [и др.] ; под ред. А. А. Сидорчука. - 2-е изд., перераб. и доп. — Москва : ИНФРА-М, 2021. - 954 с.

29. Исследование протективной активности рекомбинантных антигенов возбудителя туберкулеза на мышах / И. В. Красильников, С. А. Аракелов, С. В. Петровский [и др.] // Медицинский алфавит. - 2017. - Т. 1, № 8(305). - С. 24-29.

30. Карантинные болезни животных : справочник / сост. В. Л. Лебедева. -Ставрополь :Энтропос, 2020. - 368 с. - Текст : электронный. - URL: https://znanium.com/catalog/product/1232801 (дата обращения: 02.12.2021). - Режим доступа: по подписке.

31. Колычев, Н. М. Зоопатогенные бактерии и меры борьбы с ними : монография / Н. М. Колычев, В. Г. Ощепков. - Омск : Изд-во ОмГАУ, 2001. - 350 с.

32. Колычев, Н. М. Изучение свойства микобактерий / Н. М. Колычев, Г. А. Красников, В. Н. Лисицин // Ветеринария. - 1984. - № 5. - С. 26-28.

33. Колычев, Н.М. О системе эффективности противотуберкулезных мероприятий и контроля ее выполнения / Н.М. Колычев // Актуальные проблемы инфекционных и незаразных патологий животных: Матер. X Междунар. науч.-практ. конф. (Омск, 21-22 сентября 2010 г.). - Омск, 2010. - С. 130-134.

34. Коротяев, А. И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология : учебник / А. И. Коротяев, С. А. Бабичев. - Санкт-Петербург :СпецЛит, 2008. - 767 с.

35. Коррекция побочных эффектов цитостатической полихимиотерапииаланинамидными производными бетулоновой кислоты / Е. П. Бессергенева, Н. А. Жукова, Т. Г. Толстикова, И. В. Сорокина // Медицина XXI

века: тезисы докладов международного семинара (Низкие Татры, 10-24 янв. 2004 г.). - Низкие Татры, 2004. - С. 21-23.

36. Кошкин, И. Н. Морфологические изменения ткани печени под действием конъюгатов антигенов БЦЖ и производных бетулина при экспериментальном туберкулёзе / И. Н. Кошкин, В. С. Власенко, Т. С. Дудоладова // Пермский аграрный вестник. - 2021. - № 3(35). - С. 100-109.

37. Кошкин, И. Н. Функциональная активность нейтрофилов у морских свинок, иммунизированных конъюгатами на основе антигенов БЦЖ с бетулином и его производными / И. Н. Кошкин, В. С. Власенко, М. А. Бажин // Вестник КрасГАУ. - 2021. - № 5(170). - С. 116-121.

38. Красиков, А. П. Перспективы применения препаратов бетулина в ветеринарной медицине / А. П. Красиков, И. Г. Алексеева, М. В. Задорожная. -Омск : Омский научный вестник, 2018. - 328 с.

39. Красиков, А. П. Применение бетулина в экспериментальных условиях при микоплазмозе, микоплазмоз-ассоциированной инфекции, цирковирозе и роже свиней / А. П. Красиков, Н. М. Колычев, И. Ю. Земляницына (Бессонова) // Вестник ОмГАУ. - 2016. - № 2 (22). - С. 158-162.

40. Кособоков Е.А. Оценка протективных свойств иммуномодулятора КИМ-М2, изготовленного по измененной технологии / Е.А. Кособоков // Актуальные вопросы ветеринарии: Матер. Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 100-летию кафедры вет. микробиологии, инфекц. и инвазион. болезней факультета вет. медицины. - Омск, 2020. - С. 410-415.

41. Маянский, А. Н. Туберкулез (микробиологические и иммунопато-генетические аспекты) / А. Н. Маянский // Иммунология. - 2001. - № 2. - С. 5363.

42. Методы оценки функциональной активности лейкоцитов при туберкулезе и лейкозе животных (методическое пособие) / В. С. Власенко, Н. А. Донченко, Ю. И. Пацула [и др.]. - Омск, 2015. - 16 с.

43. Микобактерии и микобактериальные инфекции животных : учебное пособие / М. И. Гулюкин, А. И. Клименко, Н. П. Овдиенко [и др.]. — Санкт-

Петербург : Лань, 2018. — 304 с. - Текст : электронный. - URL: https://e.lanbook.com/book/102214 (дата обращения: 05.04.2021). — Режим доступа: для авториз. пользователей.

44. Митинская, Л. А. Из истории применения вакцины БЦЖ / Л. А. Митинская // Проблемы туберкулеза. - 2001. - № 1. - С. 53-55.

45. Маматов, В.А. Сравнительные патологоанатомические исследования при заражении норок туберкулезными бактериями типов Avium, Bovis и Humanus / В.А. Маматов // Тр. 3-я Всесоюз. конф. по пат.анатомии животных. - Л., 1967. -С. 285-287.

46. Маматов, В.А. О патологической анатомии туберкулеза норок / В.А. Маматов //Актуальные вопросы профилактики и лечения болезней с.-х животных: науч. тр.Омского.вет. ин-та. - 1975. - Т. 31, Вып. 2. - С. 230-237.

47. Макаров, Ю.А. Персистирование L-форм микобактерий туберкулеза в организме лабораторных животных / Ю.А. Макаров, Н.Е. Горковенко // Труды Кубанского ГАУ. -2014. - № 5 (50). - C.148-151.

48. Мингалеев, Д.Н. Новые средства и методы профилактики туберкулезамолодняка крупного рогатого скота: автореф. дис. ... д-ра ветеринар. наук / Д.Н. Мингалеев. - Казань, 2018. - 42 с.

49. Мингалеев, Д.Н. Патоморфологическое изучение профилактического действия туберкулостатика -линарола /Д.Н. Мингалеев, Н.И. Садыков // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. - 2013. - Т. 216. - С. 205-210.

50. Найманов, А. Х. Туберкулез животных: монография / А. Х. Найманов, В. М. Калмыков. — Санкт-Петербург: Лань, 2018. — 504 с. - URL: https://e.lanbook.com/book/102231 (дата обращения: 05.04.2021). — Режим доступа: для авториз. пользователей.

51. Новиков, А. Н. Схема профилактики туберкулеза крупного рогатого скота с использованием БЦЖ и туберкулезной бесклеточной вакцины :автореф. дис. ... канд. ветеринар. наук / А. Н. Новиков. - Омск, 2003. - 17 с.

52. Обуховский, Б. П. Вакцинация телят против туберкулеза по методу Кальметта-Герена / Б. П. Обуховский, А. И. Пашковский // Вопросы туберкулеза. - 1929. - № 11. - С. 15-18.

53. Определитель бактерий Берджи : в 2 т. Т. 1. / под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита [и др.] ; пер. с англ. под ред. Г. А. Заварзина. - 9-е изд. - Москва : Мир, 1997. - 429, [1] с.

54. Оценка иммуногенных свойств противотуберкулезного препарата у лабораторных животных и крупного рогатого скота / М. А. Бажин, В. С. Власенко, Г. П. Неворотова [и др.] // Вестник Омского ГАУ. - 2016. - № 2(22). - С. 147-152.

55. Оценка иммуномодулирующих свойств препаратов на их способность восстанавливать утраченную иммунологическую реактивность / В. С. Власенко, М. А. Бажин, А. Н. Новиков, Е. М. Шулико // Ветеринарная патология. - 2007. -№ 3. - С. 195-199.

56. Патент 2478399 Российская Федерация, МПК А61К 39/04, A61K47/48.Способ получения специфического иммуномодулятора : № 2011124695 : заявл. 16.06.11: опубл. 16.06.11 / Бажин М.А., Новиков А. Н., Власенко В. С. [и др.] ; заявитель ГНУ ВНИИБТЖ Россельхоз-академии. - 8 с.

57. Патент 2262349 Российская Федерация, МПК A61P31/06. С Средство для лечения и профилактики туберкулеза: № 2004118652 :заявл. 21.06.04 :опубл. 20.10.05 / Бочарова И. В., Демихова О. В., Ерохин В. В [и др.]. - 6 с.

58. Патент 2366455 Российская Федерация, МПК А61К 39/04, 02Ш/20.Способ получения специфического иммуномодулятора : № 2007139594 : заявл. 25.10.07 :опубл. 10.09.09 / Бажин М.А., Новиков А. Н., Власенко В. С. [и др.] ; заявитель ГНУ ВНИИБТЖ Россельхоз-академии. - 8 с.

59. Патент 2355423 Российская Федерация, МПК A61K47/06, ^8^/04. Адъювант : № 2007134061 : заявл. 12.09.07: опубл. 20.05.09 / Старов С. К., Борисов В. В., Фролов С. В. [и др.]. - 6 с.

60. Протодьяконова, Г. П. Специфическая профилактика туберкулёза крупного рогатого скота с использованием вакцины БЦЖ и иммуномодулятора

полирибоната / Г. П. Протодьяконова // Иппология и ветеринария. - 2021. - № 2(40). - С. 156-160.

61. Протодьяконова, Г. П. Эпизоотологические и эпидемиологические особенности туберкулеза в Якутии, усовершенствование методов диагностики и специфической профилактики: автореф. дис. ... д-ра ветеринар. наук / Г. П. Протодьяконова - Новосибирск, 2015. - 35 с.

62. Профилактика туберкулеза крупного рогатого скота, завозимого из-за рубежа / А. С. Донченко, Н. А. Донченко, А. С. Жумаш [и др.] // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. - 2019. - Т. 49. - № 6. - С. 53-61.

63. Петров, Р. В. Иммуногены и вакцины нового поколения / Р. В. Петров, Р. М. Хаитов. - Москва : ГЭОТАР-Медиа, 2011. - 608 с.

64. Петров, Р. В. Успешные вакцинации реальны / Р. В. Петров, Р. М. Хаитов // Наука в России. - 2014. - № 3 (201). - С. 18-25.

65. Пелик В.А. Оценка эффективности иммунных реакций у крупного рогатого скота, привитого специфическим иммуномодулятором, в противотуберкулезной защите: автореф. дис. .канд. вет. наук: 06.02.02 / Пелик Валентина Александровна.- Омск, 2014.- 19 с.

66. Рецидивы туберкулеза / Ю. Я. Кассич, И. К. Целлариус, А. Е. Тесля [и др.] // Ветеринария. - 1981. - № 4. - С. 38-39.

67. Сафин, М. А. Вакцина БЦЖ и ее эффективность в общем комплексе противотуберкулезных мероприятий / М. А. Сафин // Совершенствование систем и методов в борьбе с бруцеллезом и туберкулезом животных / ВАСХНИЛ, Сиб. отд-ние. - Новосибирск, 1987. - С. 152-157.

68. Сергеев, Д. В. Клинико-экспериментальная оценка противовоспалительных свойств бетулина :автореф. дис. ... канд. мед. наук : 14.03.06 / Д. В. Сергеев. - Санкт-Петербург, 2012 - 23 с.

69. Специфическое иммуномодулирующее средство для профилактики туберкулеза и микобактериозов крупного рогатого скота / В. С. Власенко, М. А. Бажин, А. Н. Новиков [и др.] // Достижения науки и техники АПК. - 2011. - №9. -С. 75-78.

70. Фтизиопульмонология : учебник / В. Ю. Мишин, Ю. Г. Григорьев, А. В. Митронин [и др.]. -Москва : ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 504 с.

71. Хаитов, Р. М. Эпителиальные клетки дыхательных путей как равноправные участники врожденного иммунитета и потенциальные мишени для иммунотропных средств / Р. М. Хаитов, Б. В. Пинегин, М. В. Пащенков // Иммунология. - 2020. - № 41(2). - С. 107-113.

72. Характеристика культуры M. bovis, шт. 14 (ВНИИБТЖ) / Н.С. Боганец, Ю.И. Смолянинов, Л.Т. Аппельганц [и др.] // Актуальные проблемы ветеринарной медицины продуктивных и непродуктивных животных: Матер. 5-й межрег. науч.-практ. конф. - Омск, 2006. - С. 24-28.

73. Шамов, В. В. Технология изготовления белково-целлюлозных комплексов из микобактерий и их иммуногенныесвойства :автореф. дис. ... канд. биол. наук / В. В. Шамов. - Новосибирск, 2001. - 18 с.

74. Шубич, М. Г. Выявление катионного белка в цитоплазме лейкоцитов с помощью бромфенолового синего / М. Г. Шубич // Цитология. - 1974. - № 10. - С. 1321-1322.

75. Шулико, Е. М. Технологическая схема получения специфического иммуномодулятора на основе антигенов микобактерий его свойства :автореф. дис. ... канд. ветеринар. наук / Е. М. Шулико. - Омск, 2011. - 18 с.

76. Юрченко, И. В. Экспериментальное изучение гепатопротекторных и желчегонных свойств бетулина :автореф. дис. ... канд. мед. наук : 14.00.25 / И. В. Юрченко. - Санкт-Петербург, 2005. - 22 с.

77. A DNA prime-Mycobacterium bovis BCG boost vaccination strategy for cattle induces protection against bovine tuberculosis / M. A. Skinner, B. M. Buddle, D. N. Wedlock [et al.] // Infect Immun. - 2003. - Vol. 71(9). - P. 4901-4907.

78. A macrophage response to Mycobacterium leprae phenolic glycolipid initiates nerve dam- age in leprosy / C. A. Madigan, C. J. Cambier, K. M. Kelly-Scumpia [et al.] // Cell. - 2017. - Vol. 170(5). - P. 973-985.

79. Acylation determines the toll-like receptor (TLR)-dependent positive versus TLR2-, mannose receptor-, and SIGNR1-independent negative regulation of pro-

inflammatory cytokines by mycobacterial lipomannan / E. Doz, S. Rose, J. Nigou [et al.] // The Journal of biological chemistry. - 2007. - Vol. 282(36). - P. 26014-26025.

80. An ESAT-6:CFP10 DNA vaccine administered in conjunction with Mycobacterium bovis BCG confers protection to cattle challenged with virulent M. bovis / A. C. Maue, W. R. Waters, M. V. Palmer [et al.] // Vaccine. - 2007. - Vol. 25(24). - P. 4735-4746.

81. Antibodies and tuberculosis / A. J. Jacobs, J. Mongkolsapaya, G. R. Screaton [et al.] // Tuberculosis. - 2016. - Vol. 101. - P. 102-103.

82. Antiviral Activity of Acyl Derivatives of Betulin and Betulinic and Dihydroquinopimaric Acids / O. A. Kazakova, I. E. Smirnova, L. A. Baltina, E. I. Boreko // Russ J Bioorg Chem. - 2018. - Vol. 44. - P. 740-744.

83. Apoptosis, but not necrosis, of infected monocytes is coupled with killing of intracellular bacillus Calmette-Guerin. / A. Molloy, P. Laochumroonvorapong, G. Kaplan // J. Exp. Med. - 1994. - Vol.180. - P.1499-1509.

84. Arora, P. CD1d and natural killer T cells in immunity to Mycobacterium tuberculosis / P. Arora, E. L. Foster, S. A. Porcelli // Adv Exp Med Biol. - 2013. - Vol. 783. - P. 199-223.

85. Assessment of the immune responses induced in cattle after inoculation of a Mycobacterium bovis strain deleted in two mce2 genes / F. C. Blanco, M. Soria, M. J. Gravisaco [et al.]. - Text : electronic // J. Biomed. Biotechnol. - 2012. -URL:https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22719207/ (access date: 07.12.2021).

86. Assessment of the impact of betulin on the immune status of cows with leukemia-associated infection / V. S. Vlasenko, V. I. Pleshakova, S. T. Bayseitov, N. A. Lescheva // KnE Life Sciences :DonAgro: International Research Conference on Challenges and Advances in Farming, Food Manufacturing, Agricultural Research and Education, Rostov-on-Don, 17-19 июня 2020 года. - Dubai, 2021. - P. 693-700.

87. Augmentation of apoptosis and interferon-gamma production at sites of active Mycobacterium tuberculosis infection in human tuberculosis / C. S. Hirsch, Z. Toossi, J.L. Johnson [et al.] // J. Infect. Dis. - 2001. - Vol. 183. - P. 779-788.

88. Autoreactive T and B cells induce the development of bronchus-associated lymphoid tissue in the lung // R. A. Shilling, J. W. Williams, J. Perera [et. al] // Am J Respir Cell Mol Biol. - 2013. - Vol. 48. - P. 406-414

89. Bovine Tuberculosis in Cattle: Vaccines, DIVA Tests, and Host Biomarker Discovery. - Text : electronic / H. M. Vordermeier, G. J. Jones, B.M. Buddle [et al.] // Annu Rev Anim Biosci. - 2016. - Vol. 4. - P. 87-109. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26884103/ (access date: 24.01.2022).

90. Bovine tuberculosis vaccine research: historical perspectives and recent advances. / W.R. Waters, M.V. Palmer, B.M. Buddle, H.M. Vordermeier // Vaccine. 2012. V. 30(16). P. 2611-2622.

91. Betulin and its derivatives as novel compounds with different pharmacological effects / S. Amiri, S. Ghavami, S. Dastghaib, H. Behrouj [et al.] // Biotechnology advances. - 2020. - Vol. 38. - P. 107409.

92. Cartographic assay of nozoareal bovine tuberculosis in the Republic of Tatarstan. - Text : electronic / D.N. Mingaleev, A.G. Hisamutdinov, M.A. Efimova, [et al.] // BIO Web Conf. - 2020. - Vol. 17. - URL: https://www.bio-conferences.org/articles/bioconf/full_html/2020/01/bioconf_fies2020_00115/bioconf_fi es2020_00115.html/ (access date: 24.01.2022).

93. CD4+ and CD8+ T cells kill intracellular Mycobacterium tuberculosis by a perforin and Fas/Fas ligand-independent mechanism / D. H. Canaday, R. J. Wilkinson, Q. Li [et al.] // J Immunol. - 2001. - Vol. 167. - P. 2734-2742.

94. Combined DNA vaccines formulated either in DDA or in saline protect cattle from Mycobacterium bovis infection / H. Cai, X. Tian, X. D. Hu [et al.] // Vaccine. - 2005. - Vol. 23(30). - P. 3887-3895.

95. Comparison of the immunogenicity and protection against bovine tuberculosis following immunization by BCG-priming and boosting with adenovirus or protein based vaccines / G. Dean, A. Whelan, D. Clifford [et al.] // Vaccine. - 2014. -Vol. 32(11). - P. 1304-1310.

96. Complement component C1q as serum biomarker to detect active tuberculosis. - Text : electronic / R. Lubbers, J. S. Sutherland, D. Goletti [et al.] // Front

Immunol. - 2018. - Vol. 9. - P. 2427. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30405622/ (access date: 06.12.2021).

97. Cooper, A. M. Cell-mediated immune responses in tuberculosis / A. M. Cooper // Annu Rev Immunol. - 2009. - Vol. 27. - P. 393-422.

98. Critical roles for lipomannan and lipoarabinomannan in cell wall integrity of mycobacteria and pathogenesis of tuberculosis. - Text : electronic / T. Fukuda, T. Matsumura, M. Ato [et al.] // MBio. - 2013. - Vol. 19;4(1). - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23422411/ (access date: 05.12.2021).

99. Cytokines and chemokines in Mycobacterium tuberculosis infection. - Text : electronic / R. Domingo-Gonzalez, O. Prince, A. Cooper, S. A. Khader // Microbiol Spectr. - 2016. - Vol. 4, № 5. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/27763255/ (access date: 06.12.2021).

100. CXCR5+ T helper cells mediate protective immunity against tuberculosis / S. R. Slight, J. Rangel-Moreno, R. Gopal [et al.] // J Clin Invest. - 2013. - Vol. 123. P. 712-726

101. Dannenberg, Jr. A. M. Roles of cytotoxic delayed-type hypersensitivity and macrophage- activating cell-mediated immunity in the pathogenesis of tuberculosis / Jr. A. M. Dannenberg // Immunobiology. -1994 - Vol.191. - P. 461-473.

102. Development and Challenges in Animal Tuberculosis Vaccination / A. Balseiro, T. Jobin, C. Gortázar, M. A. Risalde // Pathogens. - 2020. - Vol. 9. - P. 472.

103. Decreased survival of guinea pigs infected with Mycobacterium tuberculosis after multiple BCG vaccinations / R. J. Basaraba, Izzo A. A., L. Brandt, I. M. Orme // Vaccine. - 2006. - Vol. 24. - P. 280-286.

104. Demangel, C. Autocrine IL-10 impairs dendritic cell (DC)-derived immune responses to mycobacterial infection by suppressing DC trafficking to draining lymph nodes and local IL-12 production / C. Demangel, P. Bertolino, W. J. Britton // Eur J Immunol. - 2002 - Vol. 32. - P. 994-1002.

105. Dharmadhikari, A. S. What animal models teach humans about tuberculosis. - Text : electronic / A. S. Dharmadhikari, E. A. Nardell // Am J Respir Cell Mol Biol. - 2008. - Vol. 39(5). - P. 503-508. - URL:

https://www.atsjournals.org/doi/full/10.1165/rcmb.2008-0154TR (access date: 24.01.2022).

106. Differential effect of viable versus necrotic neutrophils on Mycobacterium tuberculosis growth and cytokine induction in whole blood. - Text : electronic / D. M. Lowe, J. Demaret, N. Bangani [et al.] // Front Immunol. - 2018. - Vol. 9. - P. 903. -URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29755473/ (access date: 06.12.2021).

107. Distinct strategies employed by dendritic cells and macrophages in restricting Mycobacterium tuberculosis infection: different philosophies but same desire / N. Khan, A. Vidyarthi, S. Pahari, J. N. Agrewala // Int Rev Immunol. - 2016. - Vol. 35. - P. 386-398.

108. Distribution of IFN-gamma, IL-4 and TNF-alpha protein and CD8 T cells producing IL-12p40 mRNA in human lung tuberculous granulomas / G. Fenhalls, L. Stevens, J. Bezuidenhout [et al.] // Immunology. -2002. - Vol. 105. P. 325-335.

109. Discovery of betulinic acid as a selective inhibitor of human melanoma that functions by induction of apoptosis / E. Pisha, H. Chai, I. S. Lee [et al.] // Nat. Med. -1995. - Vol. 1. - P. 1046-1051.

110. Dynamics of Immunological Parameters of Cattle Infected with Leukemia Virus and its Correction with Betulin-Based Medication / A. Krasikov, V. Vlasenko, V. I. Pleshakova, I. Alekseeva // Advances in Social Science, Education and Humanities Research : Materials of the International scientific and practical conference, Omsk, 15 октября 2019 года. - Omsk, 2019. - P. 25-28.

111. Enhanced protection against bovine tuberculosis after coadministration of Mycobacterium bovis BCG with a mycobacterial protein vaccine-adjuvant combination but not after coadministration of adjuvant alone / D. N. Wedlock, M. Denis, G. F. Painter [et al.] // Clin Vaccine Immunol. - 2008. - Vol. 15(5). - P. 765-772.

112. Enhancement of innate andcell-mediated immunity by antimycobacterial antibodies / S. de Valiere, G. Abate, A. Blazevic [et al.] // Infect Immun. - 2005. - Vol. 75(10). - P. 6931-6920.

113. Esin, S. Natural killer cells: a coherent model for their functional role in Mycobacterium tuberculosis infection / S. Esin, G. Batoni // J Innate Immun. - 2015. -Vol. 7. - P. 11-24.

114. ESX-1 and phthiocerol dimycocerosates of Mycobacterium tuberculosis act in concert to cause phago- somal rupture and host cell apoptosis. - Text : electronic / J. Augenstreich, A. Arbues, R. Simeone [et al.] // Cellular Microbiology. - 2017. - Vol. 19(7). - P. e12726. - URL: https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/cmi.12726 (access date: 05.12.2021).

115. Effects of mycobacteria on regulation of apoptosis in mononuclear phagocytes / K. Klingler, K. M. Tchou-Wong, O. Brandli [et al.] // Infect. Immun. -1997. - Vol.65. - P. 5272-5278.

116. ETosis: a microbicidal mechanism beyond cell death. - Text : electronic / A. B. Guimaräes-Costa, M.T.C Nascimento, A. B. Wardini [et al.] // J Parasitol Res. -2012. - Vol. 2012. - P. 929743. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22536481/ (access date: 06.12.2021).

117. Evaluation of Mycobacterium bovis double knockout mce2-phoP as candidate vaccine against bovine tuberculosis / E. Garcia, M. V. Bianco, M. J. Gravisaco [et al.] // Tuberculosis (Edinb). - 2015. - Vol. 95. - P. 186-189.

118. Evaluation of new vaccines in mouse and guinea pig models of tuberculosis / S. Baldwin, D. D'Souza, A. Roberts [et al.] // Infect. Immun. - 1997. - Vol. 66. - P. 2951-2959.

119. Execution of macrophage apoptosis by PE_PGRS33 of Mycobacterium tuberculosis is mediated by Toll-like receptor 2-dependent release of tumor necrosis factor-alpha / S. Basu, S. K. Pathak A. Banerjee [et al.] // The Journal of Biological Chemistry. - 2007. - Vol. 282. - P. 1039-1050.

120. Efficacy and Safety of BCG Vaccine for Control of Tuberculosis in Domestic Livestock and Wildlife. - Text : electronic / B. M. Buddle, H. M. Vordermeier, M. A. Chambers, L. M. de Klerk-Lorist // Front Vet Sci. - 2018. - Vol. 5. - URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6214331/ (access date: 24.01.2022).

121. Fas ligand-induced apoptosis of infected human macrophages reduces the viability of intracellular Mycobacterium tuberculosis / M. Oddo, T. Renno, A. Attinger [et al.] // J Immunol. - 1998. - Vol. 160. - P. 5448-5454.

122. Flannagan, R. S. Antimicrobial mechanisms of phagocytes and bacterial evasion strategies / R. S. Flannagan, G. Cosío, S. Grinstein // Nat Rev Microbiol. -2009. - Vol. 7(5). - P. 355-366.

123. Glatman-Freedman, A. Serum therapy for tuberculosis revisited: reappraisal of the role of antibody-mediated immunity against Mycobacterium tuberculosis / A. Glatman-Freedman, A. Casadevall // Clin Microbiol Rev. - 1998. -Vol. 11. - P. 514-532.

124. Gregson, R. L. The response of rat bronchus-associated lymphoid tissue to local antigenic challenge / R. L. Gregson, M. J. Davey, D. E. Prentice // Br J Exp Pathol. - 1979. - Vol. 60. - P. 471-482.

125. Hepatoprotective Activity of Betulin and Dipterocarpol Derivatives / O. B. Kazakova, I. E. Smirnova, N. I. Medvedeva [et al.] // Russ J Bioorg Chem. - 2019. -Vol. 45. - P. 558-565.

126. Heterogeneity in tuberculosis. - Text : electronic / A. M. Cadena, S. M. Fortune, J. L. Flynn // Nat Rev Immunol. - 2017. - Vol. 17. - P. 691-702. - URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6247113/ (access date: 24.01.2022)

127. Hopewell, P. C. Overview of clinical tuberculosis / P. C. Hopewell // Tuberculosis: pathogenesis, protection, and control / eds B. R. Bloom. - ASM Press, Washington, D.C. - 1994. - P. 25-46.

128. Host defense mechanisms triggered by microbial lipoproteins through tolllike receptors. / H. D Brightbill, D. H. Libraty, S. R. Krutzik [et al.] // Science. - 1999. - Vol. 285. - P. 732-736.

129. Histamine plays an essential regulatory role in lung inflammation and protective immunity in the acute phase of Mycobacterium tuberculosis infection / D. Carlos, C. Fremond, A. Samarina [et al.] // Infect Immun. -2009. - Vol. 77. - P. 53595368.

130. Hrycek, A. Functional characterization of peripheral blood neutrophils in patients with primary hypothyroidism / A. Hrycek // Folia Biologica (Praha). - 1993. -Vol. 39, № 6. - P. 304-310.

131. Human lung epithelial cells contain Mycobacterium tuberculosis in a late endosomal vacuole and are efficiently recognized by CD8+ T cells. - Text : electronic / M. J. Harriff, M. E. Cansler, K. G. Toren [et al.] // PLoS ONE. -2014. - Vol. 14;9(5).-URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24828674/(access date: 06.12.2021).

132. Human NK cells positively regulate gammadelta T cells in response to Mycobacterium tuberculosis / R. Zhang, X. Zheng, B. Li [et al.] // J Immunol. - 2006. -Vol. 176. - P. 2610-2616.

133. Human tuberculous granulomas induce peripheral lymphoid follicle-like structures to orchestrate local host defence in the lung / T. Ulrichs, G. A. Kosmiadi, V. Trusov [et al.] // J Pathol. - 2004. - Vol. 204. - P. 217-228.

134. Human toll-like receptors mediate cellular activation by Mycobacterium tuberculosis. // T. K. Means, S. Wang, E. Lien [et al.] // J. Immunol. - 1999. - Vol.163. - P. 3920-3927.

135. Hunter, R.L. The Pathogenesis of Tuberculosis - The Koch Phenomenon Reinstated. - Text : electronic / R.L. Hunter // Pathogens. - 2020. - Vol. 9. - P. 813. -URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7601602/ (access date: 24.01.2022).

136. Identification of surrogates and correlates of protection in protective immunity against Mycobacterium bovis infection induced in neonatal calves by vaccination with M. bovis BCG pasteur and M. bovis BCG Danish / J. C. Hope, M. L. Thom, M. McAulay [et al.] // Clin Vaccine Immunol. - 2011. - Vol. 18(3). - P. 373379.

137. Identification of the missing trans- acting enoyl reductase required for phthiocerol dimycocerosate and phenolglycolipid biosynthesis in Mycobacterium tuberculosis / R. Simeone, P. Constant, C. Guilhot [et al.] // Journal of Bacteriology. -2007. - Vol. 189(13). - P. 4597-4602.

138. Immune requirements for protective Th17 recall responses to Mycobacterium tuberculosis challenge. - Text : electronic / L. Monin, K. L. Griffiths, S. Slight [et al.] // Mucosal Immunol. - 2015. - Vol. 8. - P. 1099-109. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25627812/ (access date: 06.12.2021).

139. Increased complement C1q level marks active disease in human tuberculosis. - Text : electronic / Y. Cai, Q. Yang, Y. Tang [et al.] // PLoS ONE. -2014. - Vol. 9. - P. e92340. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24647646/ (access date: 06.12.2021).

140. Increased TNF-alpha, IL-1beta and IL-6 levels in the bronchoalveolar lavage fluid with the upregulation oftheir mRNA in macrophages lavaged from patients with active pulmonary tuberculosis / T. C. Sao, J. Hong, C. Huang [et al.] // Tubercle and lung disease : the Official Journal of the International Unionagainst Tuberculosis and Lung Disease. - 1999. - Vol. 79(5). - P. 279-285.

141. Indrigo, J. Cord factor trehalose 6,6'-dimycolate (TDM) mediates trafficking events during mycobacterial infection of murine macrophages / J. Indrigo, R. L. Hunter, J. K. Actor // Microbiology. - 2003. - Vol. 149, pt. 8. - P. 2049-2059.

142. Integrative proteomic and glycoproteomic profiling of Mycobacterium tuberculosis culture filtrate. - Text : electronic / P. Tucci, M. Portela, C. R. Chetto [et al.] // PLoS One. - 2020. - Vol. 15(3). - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32126063/(access date: 05.12.2021).

143. Interaction between mannosylated lipoarabinomannan and dendritic cell-specific intercellular adhesion molecule-3 grabbing nonintegrin influences dendritic cells maturation and T cell immunity / T. Wu, S. Guo, J. Wang [et al.] // Cell Immunol. - 2011. - Vol. 272. - P. 94-101.

144. Influence of Mycobacterium bovis BCG vaccination on cellular immune response of guinea pigs challenged with Mycobacterium tuberculosis / D. Ordway, M. Henao-Tamayo, C. Shanley [et al.] // Clin. Vaccine Immunol. - 2008. - Vol. 15(8). - P. 1248-1258.

145. Interferon gamma eliminates responding CD4 T cells during mycobacterial infection by inducing apoptosis of activated CD4 T cells / D.K. Dalton, L. Haynes, C.Q. Chu [et al.] // J. Exp. Med.- 2000. - Vol.192. - P. 117-122.

146. Infection by Mycobacterium tuberculosis promotes human alveolar macrophage apoptosis / J. Keane, M. K. Balcewicz-Sablinska, H. G. Remold [ et. al.] // Infect. Immun. - 1997. - Vol. 65. - P. 298-304.

147. Induced bronchus-associated lymphoid tissue serves as a general priming site for T cells and is maintained by dendritic cells / S. Halle, H. C. Dujardin, N. Bakocevic [et al.] // J Exp Med. - 2009. - Vol. 206. - P. 2593-2601

148. Koshkin, I.N. The Effect of Experimental BCG Antigen-Betulin-Derived Conjugates on the Guinea Pig Immunological Response / I.N. Koshkin, V.S. Vlasenko, I.V. Kulakov // Russian Journal of Bioorganic Chemistry. - 2021. - Vol. 47. - No 4. -P. 837-844.

149. Kinetics of the Immune Response Profile in Guinea Pigs after Vaccination with Mycobacterium bovis BCG and Infection with Mycobacterium tuberculosis // A. Grover, J. Taylor, J. Troudt [et. al] // Infection and immunity. - 2009. - Vol. 77(11). -P. 4837-4846.

150. Lerner, T. R. The innate immune response in human tuberculosis / T. R. Lerner, S. Borel, M. G. Gutierrez // Cell Microbiol. - 2015. - Vol. 17. - P. 1277-1285.

151. Lesions in cattle exposed to Mycobacterium bovis-inoculated calves / J. P. Cassidy, D. G. Bryson, J. M. Pollock [et al.] // J/ Comp. Pathol. - 1999. - Vol. 121(4). -P. 321-337.

152. Li, Y. The role of airway epithelial cells in response to mycobacteria infection. - Text : electronic / Y. Li, Y. Wang, X. Liu // Clin Dev Immunol. - 2012. -URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22570668/ (access date: 06.12.2021).

153. Lin, P. L. CD8 T cells and Mycobacterium tuberculosis infection / P. L. Lin, J. L. Flynn // Semin Immunopathol. - 2015. - Vol. 37. - P. 239-249.

154. Lipoprotein LpqS deficient M. tuberculosis mutant is attenuated for virulence in vivo and shows protective efficacy better than BCG in guinea pigs / S.

Sakthi, K. Palaniyandi, U. D. Gupta [et al.] // Vaccine. -2016. - Vol. 34(6). - P. 735743.

155. Lipoprotein LprI of Mycobacterium tuberculosis Acts as a Lysozyme Inhibitor / D. Sethi, S. Mahajan, C. Singh [et al.] // The Journal of Biological Chemistry. - 2016. - Vol. 291(6). - P. 2938-2953.

156. Ly, A. Mycobacterial Virulence Factors: Surface-Exposed Lipids and Secreted Proteins / A. Ly, J. Liu. // Int J Mol Sci. - 2020. - Vol. 21(11). - P. 3985.

157. Lymphadenitis as a major element of disease in the guinea pig model of tuberculosis / R. J. Basaraba, D. D. Dailey, C. T. McFarland [et al.] // Tuberculosis. -2006. - Vol. 86. - P. 386-394.

158. Lymph nodes are sites of prolonged bacterial persistence during Mycobacterium tuberculosis infection in macaques. - Text : electronic / S. K. C Ganchua, A. M Cadena, P. Maiello [et al.] // PLoS Pathog. - 2018. - Vol. 14(11). -URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30383808/ (access date: 24.01.2022).

159. Macrophages acquire neutrophil granules for antimicrobial activity against intracellular pathogens / B. H. Tan, C. Meinken, M. Bastian [et al.] // J Immunol. -2006. - Vol. 177. - P. 1864-1871.

160. Macrophage heterogeneity and plasticity in tuberculosis. - Text : electronic / A. Khan, V. K. Singh, R. L. Hunter, C. Jagannath // J Leukoc Biol. - 2019. - Vol. 106. - P. 275-282. - URL: https://jlb.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/JLB.MR0318-095RR (access date: 24.01.2022).

161. Martino, M. Reflections on the immunology of tuberculosis: will we ever unravel the skein? - Text : electronic / M. Martino, L. Galli, E. Chiappini // BMC Infect Dis. - 2014. - Vol. 14 (Suppl. 1):S1. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24564297/ (access date: 06.12.2021).

162. Macrophage apoptosis in mycobacterial infections. / C. Fratazzi, R. D. Arbeit, C. Carini [et. al.] // J. Leukoc. Biol. - 1999. - Vol. 66. - P. 763-764.

163. MacDonald, E. M. Tuberculosis Vaccine Development — Its History and Future Directions. - Text : electronic / M. E. MacDonald, A. I. Angelo // Tuberculosis -

Expanding Knowledge/ eds Wellman Ribon. - Intech Open. - 2015. - Chap. 6. - URL: https://www.intechopen.com/chapters/47940 (access date: 05.12.2021).

164. Mendelian susceptibility to mycobacterial disease: 2014-2018 update / J. Rosain, X.-F. Kong, R. Martinez-Barricarte [et al.] // Immunol Cell Biol. -2019. - Vol. 97. - P. 360-367.

165. Mice deficient in CD4 T cells have only transiently diminished levels of IFN-gamma, yet succumb to tuberculosis / A. M. Caruso, N. Serbina, E. Klein [et al.] // J Immunol. - 1999. - Vol. 162. - P. 5407-5416.

166. Mihret, A. The role of dendritic cells in Mycobacterium tuberculosis infection / A. Mihret // Virulence. - 2012. - Vol. 3. - P. 654-659.

167. Molecular characterization of LC3-associated phagocytosis reveals distinct roles for Rubicon, NOX2 and autophagy proteins / J. Martinez, R. K. Malireddi, Q. Lu [et al.] // Nat Cell Biol. - 2015. - Vol. 17. - P. 893-906.

168. Molecular diagnostics in tuberculosis: Basis and implications for therapy / S. V. Balasingham, T. Davidsen, I. Szpinda [et al.] // Molecular Diagnosis & Therapy. -2009. - Vol. 13. - P. 137-151.

169. Moore, D. M. Hematology of the guinea pig / D. M Moore // Schalm's veterinary hematology 5th ed. / eds B. V. Fedlman, O. W. Schalm, J. G. Zinkl and N. C. Jain. Lippincott, Williams, and Wilkins, Baltimore, Md.- 2000. - P. 1107-1115.

170. Mustafa, A. S. Comparative evaluation of MPT83 (Rv2873) for T helper-1 cell reactivity and identification of HLA-promiscuous peptides in Mycobacterium bovis BCG-vaccinated healthy subjects / A. S. Mustafa // Clinical and Vaccine Immunology.

- 2011. - Vol. 18(10). - P. 1752-1759.

171. Mycobacteria manipulate macrophage recruitment through coordinated use of membrane lipids / C. J. Cambier, K. K. Takaki, R. P. Larson [et al.] // Nature. - 2014.

- Vol. 505(7482). - P. 218-222.

172. Mycobacteria, metals, and the macrophage / O. Neyrolles, F. Wolschendorf, A. Mitra, M. Niederweis // Immunol Rev. - 2015. - Vol. 264. - P. 249263.

173. Mycobacterial lipoarabinomannans modulate cytokine production in human T helper cells by interfering with raft/microdomain signaling. - Text :electronic / A. K. Shabaana, K. Kulangara, I. Semac [et al.] // Cellular and Molecular Life Sciences. - 2005. - Vol. 62(2). - P. 179-187. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15666089/ (access date: 05.12.2021).

174. Mycobacterial lipoprotein activates autophagy via TLR2/1/CD14 and a functional vitamin D receptor signaling / D. M. Shin, J. M. Yuk, H. M. Lee [et al.] // Cellular Microbiology. - 2010. - Vol. 12(11). - P. 1648-1665.

175. Mycobacterial p (1)-type ATPases mediate resistance to zinc poisoning in human macrophages / H. Botella, P. Peyron, F. Levillain [et al.] // Cell Host Microbe. -2011. - Vol. 10. - P. 248-259.

176. Mycobacterial PIMs inhibit host inflammatory responses through CD14-dependent and CD14-independent mechanisms. - Text : electronic / N. Court, S. Rose, M. L. Bourigault [et al.] // PLoS One. - 2011. - 6(9):e24631.-URL:https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21949737/ (access date: 05.12.2021).

177. Mycobacterium bovis requires P27 (LprG) to arrest phagosome maturation and replicate within bovine macrophages. - Text : electronic / C. L. Vázquez, M. V. Bianco, F. C. Blanco [et al.] // Infection and Immunity. -2017. - Vol. 85(3). - P. e00720-16. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28031264/(access date: 06.12.2021).

178. Mycobacterium bovis Amce2 double deletion mutant protects cattle against challenge with virulent M. bovis / F. C. Blanco, M. V. Bianco, S. Garbaccio [et al.] // Tuberculosis. - 2013. - Vol. 93(3). - P. 363-372.

179. Mycobacterium tuberculosis LprG (Rv1411c): A novel TLR-2 ligand that inhibits human macrophage class II MHC antigen processing / A. J. Gehring, K. M. Dobos, J. T. Belisle [et al.] // Journal of Immunology. - 2004. - Vol. 173. - P. 26602668.

180. Mycobacterium tuberculosis EsxH inhibits ESCRT-dependent CD4+ T-cell activation / C. Portal-Celhay, J. M. Tufariello, S. Srivastava [et al.] // Nat Microbiol. -2016. - Vol. 2. - P. 16232.

181. Mycobacterium tuberculosis GroEL2 modulates dendritic cell responses. -Text : electronic / M. Georgieva, J. K. Sia, E. Bizzell [et al.] // Infect Immun. - 2018. -Vol. 86. - P. e00387-17. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29133346/ (access date: 06.12.2021).

182. Mycobacterium tuberculosis impairs dendritic cell response by altering CD1b, DC-SIGN and MR profile / L. Balboa, M. M. Romero, N. Yokobori [et al.] // Immunol Cell Biol. - 2010. - Vol. 88. - P. 716-726.

183. Mycobacterium tuberculosis lipomannan induces apoptosis and interleukin-12 production in macro- phages. - Text : electronic / D. N. Dao, L. Kremer, Y. Guerardel[et al.] // Infection and Immunity. - 2004. - Vol. 72(4). - P. 2067-2074. -URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15039328/ (access date: 05.12.2021).

184. Mycobacterium tuberculosis lipoprotein LprG binds lipoarabinomannan and determines its cell enve- lope localization to control phagolysosomal fusion. - Text : electronic / S. Shukla, E. T. Richardson, J. J. Athman [et al.] // PLoS Pathogens. - 2014. - Vol. 10(10). - P. e1004471. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25356793/ (access date: 06.12.2021).

185. Mycobacterium tuberculosis RpfB drives Th1-type T cell immunity via a TLR4-dependent activation of dendritic cells / J. S. Kim, W. S. Kim, H. G. Choi [et al.] // Journal of Leukocyte Biology. - 2013. - Vol. 94(4). - P. 733-749.

186. Mycobacterium: research and development / edited by Wellman Ribon // IntechOpen. - 2018. - P. 374. - URL: https://www.intechopen.com/books/5853 (access date: 05.12.2021).

187. Mycobacteria-infected dendritic cells attract neutrophils that produce IL-10 and specifically shut down Th17 CD4 T cells through their IL-10 receptor / E. Doz, R. Lombard, F. Carreras [et. al] // J Immunol. - 2013. - Vol. 191. - P. 3818-3826

188. Neutrophils: innate effectors of TB resistance? - Text : electronic / E. E. Kroon, A. K. Coussens, C. Kinnear [et al.] // Front Immunol.- 2018. - Vol. 9. - P. 2637. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30487797/ (access date: 06.12.2021).

189. Mycobacterium tuberculosis inhibits neutrophil apoptosis, leading to delayed activation of naive CD4 T cells // R. Blomgran, L. Desvignes, V. Briken, J. D. Ernst // Cell Host Microbe. - 2011. - Vol. 11. - P. 81-90.

190. Nunes, P. Regulation of the NADPH oxidase and associated ion fluxes during phagocytosis / P. Nunes, N. Demaurex, M. C. Dinauer // Traffic. - 2013. - Vol. 14(11). - P. 1118-1131.

191. Orme, I. M. Mouse and guinea pig models for testing new tuberculosis vaccines / I. M. Orme // Tuberculosis. - 2005. - Vol. 85. - P.13-17.

192. Parkash, O. T regulatory cells: Achilles' heel of Mycobacterium tuberculosis infection? / O. Parkash, S. Agrawal, M. Madhan Kumar // Immunol Res. -2015. - Vol. 62. - P. 386-398.

193. Parlane, N. A. Immunity and vaccination against tuberculosis in cattle / N. A. Parlane, B. M. Buddle // Current Clinical Microbiology Reports. -2015. - Vol. 2(1). -P. 44-53.

194. Pathogenesis of experimental tuberculosis in animal models / D.N. McMurray, F.M. Collins, A.M. Dannenberg, D.W. Smith // Curr. Top. Microbiol. Immunol. - 1996. - Vol. 215. - P. 157-179.

195. Pabst, R. Is the bronchus-associated lymphoid tissue (BALT) an integral structure of the lung in normal mammals, including humans? / R. Pabst, I. Gehrke // Am J Respir Cell Mol Biol. - 1990. - Vol. 3(2). - P. 131-135.

196. PD-L1 blockade improves survival in experimental sepsis by inhibiting lymphocyte apoptosis and reversing monocyte dysfunction. - Text : electronic / Y. Zhang, Y. Zhou, J. Lou [et al.] // Crit Care. - 2010. - Vol. 14. - P. 220. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21118528/ (access date: 06.12.2021).

197. Phthiocerol dimycocerosates of M. tuberculosis participate in macrophage invasion by inducing changes in the organization of plasma membrane lipids. - Text : electronic / C. Astarie-Dequeker, L. Le Guyader, W. Malaga [et al.] // PLoS Pathogens. - 2009. - Vol. 5(2). - P. e1000289. - URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2632888/ (access date: 06.12.2021).

198. Production of phthiocerol dimycocerosates protects Mycobacterium tuberculosis from the cidal activity of reactive nitrogen intermediates produced by macrophages and modulates the early immune response to infection / C. Rousseau, N. Winter, E. Pivert [et al.] // Cellular Microbiology. - 2004. - Vol. 6(3). - P. 277-287.

199. Protein O-mannosylation deficiency increases LprG-associated lipoarabinomannan release by Mycobacterium tuberculosis and enhances the TLR2-associated infammatory response. - Text : electronic / H. Alonso, J. Parra, W. Malaga [et al.] // Scientific Reports. - 2017. - Vol. 7(1). - P. 7913. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28801649/(access date: 05.12.2021).

200. Profiling early lung immune responses in the mouse model of tuberculosis. - Text : electronic / D. D. Kang, Y. Lin, J. R. Moreno [et al.] // PloS one. - 2011. - Vol. 6(1). - P. e16161.- URL: https://www. https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0016161 (access date: 24.01.2022).

201. Pulmonary lymphatics are primary sites of Mycobacterium tuberculosis infection in guinea pigs infected by aerosol / R. J. Basaraba, E. E. Smith, C. A. Shanley, I. M. Orme // Infect. Immun. - 2006. - Vol.74. - P. 5397-5401.

202. Queval, C. J. The macrophage: a disputed fortress in the battle against Mycobacterium tuberculosis. - Text : electronic / C. J. Queval, R. Brosch, R. Simeone // Front Microbiol. - 2017. - Vol. 8. - P. 2284. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29218036/ (access date: 06.12.2021).

203. Rapid Accumulation of Eosinophils in Lung Lesions in Guinea Pigs Infected with Mycobacterium tuberculosis / T. M. Lasco, O.C. Turner, L. Cassone [et al.] // Infect Immun. - 2004. - Vol. 72(2). - P. 1147-1149.

204. Recombinant bacillus calmette-guerin (BCG) vaccines expressing the Mycobacterium tuberculosis 30-kDa major secretory protein induce greater protective immunity against tuberculosis than conventional BCG vaccines in a highly susceptible animal model / M. A. Horwitz, G. Harth, B. J. Dillon, S. Maslesa-Galic // Proc Natl Acad Sci USA. - 2000. - Vol. 97(25). - P.13853-13858.

205. Regulation of the Immune Response by Mycobacterium tuberculosis Beijing Genotype. - Text : electronic / M. Campillo-Navarro, I. Wong-Baeza, J. Serafin-López [et al.] // Tuberculosis-Expanding Knowledge. - 2015. - URL: https://www.researchgate.net/publication/290448263_Regulation_of_the_Immune_Res ponse_by_Mycobacterium_tuberculosis_Beijing_Genotype (access date: 06.12.2021).

206. Restoration of innate immune activation accelerates Th1-cell priming and protection following pulmonary mycobacterial infection / R. Lai, M. Jeyanathan, C. R. Shaler [et al] // Eur J Immunol. - 2014. - Vol. 44. - P. 1375-1386.

207. Ridley, D. S. Rationale for the histological spectrum of tuberculosis. A basis for classification / D. S. Ridley, M. J. Ridley // Pathology. - 1987. - Vol.19. -P.186-192.

208. Role of metal-dependent regulation of ESX-3 secretion in intracellular survival of Mycobacterium tuberculosis / E. Tinaztepe, J. R. Wei, J. Raynowska [et al.] // Infection and Immunity. - 2016. - Vol. 84(8). - P. 2255-2263.

209. Robbins pathologic basis of disease / R. S. Cotran, V. Kumar, T. Collins // Pathology. - 1990. - Vol. 16(1). - P. 89-89.

210. Roberts L. L. Mycobacterium tuberculosis infection of human dendritic cells decreases integrin expression, adhesion and migration to chemokines / L. L. Roberts, C. M. Robinson // Immunology. - 2014. - Vol. 141. - P. 39-51.

211. Saunders, B. M. Restraining mycobacteria: role of granulomas in mycobacterial infections / B. M. Saunders, A. M. Cooper // Immunol. Cell Biol. -2000. - Vol. 78. - P. 334-341.

212. Silva-Sanchez A. Role of iBALT in Respiratory Immunity. - Text : electronic / A. Silva-Sanchez, T.D. Randall // Curr Top Microbiol Immunol. -2020. -Vol. 426. - P. 21-43. - URL: https://link.springer.com/chapter/10.1007%2F82_2019_191 (access date: 24.01.2022).

213. Smith, D. W. What animal models can teach us about the pathogenesis of tuberculosis in humans / D. W. Smith, E.H. Wiegeshaus // Rev. Infect. Dis. - 1989. -vol. 11(2). - P. 385-393.

214. Th1 differentiation drives the accumulation of intravascular, non-protective CD4 T cells during tuberculosis / M. A. Sallin, S. Sakai, K. D. Kauffman [et al.] // Cell Rep. - 2017. - Vol. 18. - P. 3091-3104.

215. Turner O.C. Immunopathogenesis of Pulmonary Granulomas in the Guinea Pig after Infection with Mycobacterium tuberculosis / O.C. Turner, R.J. Basaraba, I.M. Orme // Infect. Immun. - 2003. - Vol. 71(2). - P. 864-871.

216. Tuberculosis vaccine development: from classic to clinical candidates. -Text : electronic / J. Li, A. Zhao, J. Tang [et al.] // Eur J Clin Microbiol Infect Dis. -2020. - Vol. 39. P. 1405-1425. - URL: https://link.springer.com/article/10.1007%2Fs10096-020-03843-6#Sec1 (access date: 24.01.2022).

217. The Cellular Immune Response to Mycobacterium tuberculosis. Infection in the Guinea Pig / D. Ordway, G. Palanisamy, M. Henao-Tamayo, E. E. Smith [et al.] The Journal of Immunology. - 2007.- Vol. 179. - P. 2532-2541.

218. The 19 kDa Mycobacterium tuberculosis lipoprotein (LpqH) induces macrophage apoptosis through extrinsic and intrinsic path- ways: a role for the mitochondrial apoptosis-inducing factor. - Text : electronic / A. Sánchez, P. Espinosa, T. García, R. Mancilla // Clinical & Developmental Immunology. - 2012. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23316255/ (access date: 06.12.2021).

219. The Mycobacterial Cell Envelope / editors Daffé M, Reyrat J.-M. -Washington : ASM Press, 2008. - 395 p.

220. The Mycobacterium tuberculosis capsule: a cell structure with key implications in pathogenesis. - Text : electronic / Kalscheuer R, Palacios A, Anso I. [et al.] // Biochem J. - 2019. - Vol. 476(14). - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31320388/(access date: 05.12.2021).

221. The order of prime-boost vaccination of neonatal calves with Mycobacterium bovis BCG and a DNA vaccine encoding mycobacterial proteins Hsp65, Hsp70, and Apa is not critical for enhancing protection against bovine tuberculosis / M. A. Skinner, D. N. Wedlock, G. W. de Lisle [et al.] // Infect Immun. -2005. - Vol. 73(7). - P. 4441-4444.

222. The role of B cells and humoral immunity in Mycobacterium tuberculosis infection / L. Kozakiewic, J. Phuah, J. Flynn, J. Chan // Adv Exp Med Biol. - 2013. -Vol. 783. - P. 225-250.

223. The role of mast cells in tuberculosis: orchestrating innate immune crosstalk? - Text : electronic / K. M. Garcia-Rodriguez, A. Goenka, M. T. Alonso-Rasgado [et al.] // Front Immunol. - 2017. - Vol. 8. - P. 1290. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29089945/ (access date: 06.12.2021).

224. The toll of innate immunity on microbial pathogens. / R. L. Modlin, H. D. Brightbill, P. J. Godowski // N. Engl. J. Med. - 1999. - Vol.340. - P.1834-1835.

225. The intractable challenge of evaluating cattle vaccination as a control for bovine Tuberculosis. - Text : electronic / A.J.K. Conlan, M. Vordermeier, M.C. de Jong, J.L Wood // Elife. - 2018. - Vol. 7. - P. e27694 - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29866255/ (access date: 24.01.2022).

226. TNF-alpha and IL-10 modulate the induction of apoptosis by virulent Mycobacterium tuberculosis in murine macrophages / M. Rojas, M. Olivier, P. Gros [et. al.] // J. Immunol. - 1999. - Vol.162. - P. 6122-6131

227. Toll-like recep- tor 2-dependent inhibition of macrophage class II MHC expression and antigen processing by 19-kDa lipoprotein of Mycobacterium tuberculosis / E. H. Noss, R. K. Pai, T. J. Sellati [et al.] // Journal of Immunology. -2001. - Vol. 167(2). - P. 910-918.

228. Torrelles, J. B. Fine discrimination in the recognition of individ- ual species of phosphatidyl-myo-inositol mannosides from Mycobacterium tuberculosis by C-type lectin pattern recognition receptors / J. B. Torrelles, A. K. Azad, L. S. Schlesinger // Journal of Immunology. - 2006. - Vol. 177(3). - P. 1805- 1816.

229. Trehalose 6,6'-dimycolate (cord factor) of Mycobacterium tuberculosis induces corneal angiogenesis in rats / N. Saita, N. Fujiwara, I. Yano [et al.] // Infection and Immunity. - 2000. - Vol. 68(10). - P. 5991-5997.

230. Upadhyay, S. Tuberculosis and the art of macrophage manipulation / S. Upadhyay, E. Mittal, J. A. Philips // Pathogens and Disease. - 2018. - Vol. 76, is. 4. -P. 456-459.

231. Vaccination of cattle with a CpG oligodeoxynucleotide-formulated mycobacterial protein vaccine and Mycobacterium bovis BCG induces levels of protection against bovine tuberculosis superior to those induced by vaccination with BCG alone / D. N. Wedloc, M. Denis, M. A. Skinner [et al.] // Infect Immun. - 2005. -Vol. 73(6). - P. 3540-3546.

232. Vaccination of neonatal calves with Mycobacterium bovis BCG induces protection against intranasal challenge with virulent M. bovis / J. C. Hope, M. L. Thom, B. Villarreal-Ramos [et al.] // Clin Exp Immunol. - 2005. - Vol. 139(1). - P. 48-56.

233. Vir, P. Immunomodulation of alveolar epithelial cells by Mycobacterium tuberculosis phosphatidylinositol mannosides results in apoptosis / P. Vir, D. Gupta, R. Agarwal, I. Verma // Acta Pathologica, Microbiologica, et Immunologica Scandinavica. - 2014. - Vol. 122(4). - P. 268-282.

234. Viral booster vaccines improve Mycobacterium bovis BCG-induced protection against bovine tuberculosis / H. M. Vordermeier, B. Villarreal-Ramos, P. J. Cockle [et al.] // Infect Immun. - 2009. -Vol. 77(8). - P. 3364-3373.

235. Virulence factors of the Mycobacterium tuberculosis complex. - Text : electronic / M. A. Forrellad, L. I. Klepp, A. Gioffré [et al.] // Virulence. - 2013. -Vol.4(1). - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23076359/ (access date: 05.12.2021).

236. Vlasenko, V. S. Influence of anti-tuberculosis drug KIM-M2 on morphology of lymph nodes, spleen, liver and lungs of guinea pigs infected with M. bovis / V. S. Vlasenko, V. I. Pleshakova // Advances in Intelligent Systems Research. -Vol. 167. - 2019. - P. 183-187.

237. Whelan, A.O. Lack of correlation between BCG-induced tuberculin skin test sensitisation and protective immunity in cattle / A.O. Whelan, M. Coad, B.L. Upadhyay, D.J. Clifford // Vaccine. - 2011. - V. 29(33). - P. 5453-5458.

СПИСОК ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА

Таблица 1 - Иммуногенные и протективные свойства различных серий экспериментальных конъюгатов на морских свинках........................ 46

Таблица 2 - Содержание лизосомальных катионных белков и активность миелопероксидазы у морских свинок на 30-е сутки............ 48

Таблица 3 - Содержание лизосомальных катионных белков и активность миелопероксидазы у морских свинок на 30-е сутки............ 50

Таблица 4 - Оценка конъюгатов антигенов БЦЖ с дериватами бетулина на их способность восстанавливать................................................ 53

Рисунок 1 - Лимфоузел морской свинки (группа №1). 1. Участок на границе крупного очага некроза с гнойным расплавлением............... 55

Рисунок 2 - Лимфоузел морской свинки (группа №1). 1. Некротизированная ткань 2. Полиморфноядерные лейкоциты............ 56

Рисунок 3 - Лимфоузел морской свинки (группа №2). 1. Обширные поля пролиферирующих клеток стромы и эпителиоидных макрофагов... 56

Рисунок 4 - Лимфоузел морской свинки (группа №2). 1. Клетка Пирогова-Лангханса среди пролиферирующих клеток стромы............ 57

Рисунок 5 - Лимфоузел морской свинки (группа №3). Туберкул с зоной сухого некроза. 1. Среди детрита видны скопления разрушенных ядер... 58

Рисунок 6 - Лимфоузел морской свинки (группа №3). Туберкул с нагноением в зоне некроза. 1. Многочисленные псевдоэозинофилы и. 58

Рисунок 7 - Лимфоузел морской свинки (группа №4). Туберкулезный очаг под капсулой лимфоузла. 1. Бесструктурный очаг некроза............ 59

Рисунок 8 - Лимфоузел морской свинки (группа №5). 1. Многоядерный макрофаг Пирогова-Лангханса среди пролиферирующих...... 60

Рисунок 9 - Лимфоузел морской свинки (группа №5). 1. Туберкул с нагноением в центре. 2. Очаг нагноения окружен фиброзной тканью. 60

Рисунок 10 - Лимфоузел морской свинки (группа №5). 1. Центр размножения в лимфатическом фолликуле............ 61

Рисунок 11 - Лимфоузел морской свинки (группа №5). Лимфобласты и плазмоциты в мозговых шнурах (1) и синусоидах (2) лимфоузла......... 61

Рисунок 12 - Лимфоузел морской свинки (группа №1). Уменьшение количества лимфоидной ткани в корковом веществе лимфоузла......... 62

Рисунок 13 - Лимфоузел морской свинки (группа №2). 1. Пролиферация клеток стромы и эпителиоидных макрофагов............... 63

Рисунок 14 - Лимфоузел морской свинки (группа №3). 1. Лимфатические фолликулы различного размера с центрами................ 64

Рисунок 15 - Лимфоузел морской свинки (группа №4). 1. Лимфатические фолликулы в корковом веществе лимфоузла............... 64

Рисунок 16 - Лимфоузел морской свинки (группа №5). 1. Небольшой очаг сухого некроза среди пролиферирующих эпителиоидных............ 65

Рисунок 17 - Лимфоузел морской свинки (группа №5). 1. Плазмоциты в мозговых синусах. 2. Лимфоциты и плазмоциты в мозговых шнурах 65

Рисунок 18 - Селезенка морской свинки (группа №1). 1. Обширный участок сухого некроза. 2. Пролиферирующие клетки стромы............ 66

Рисунок 19 - Селезенка морской свинки (группа №1). 1. Участок сухого некроза в ткани селезенки, состоящий из безъядерных разрушенных... 67

Рисунок 20 - Селезенка морской свинки (группа №2). 1. Фолликулы селезенки между туберкулезными узелками. 2. Обширная зона............ 67

Рисунок 21 - Селезенка морской свинки (группа №2). 1. Большое количество плазмобластов и плазмоцитов в периферийной.................. 68

Рисунок 22 - Селезенка морской свинки (группа №3). 1. Участок сухого некроза без признаков нагноения. 2. Эпителиоидные макрофаги......... 69

Рисунок 23 - Селезенка морской свинки (группа №3). Плазмоциты в синусе и селезеночных тяжах красной пульпы........... 69

Рисунок 24 - Селезенка морской свинки (группа №4). Белая и красная пульпа селезенки без видимых патологических изменений.................. 70

Рисунок 25 - Селезенка морской свинки (группа №4). 1. Плазматические клетки в синусе селезенки.................................... 70

Рисунок 26 - Селезенка морской свинки (группа №5). 1. Крупные лимфатические фолликулы с хорошо выраженными центрами............ 71

Рисунок 27 - Селезенка морской свинки (группа №5). 1. Лимфатический фолликул с центром размножения........................... 71

Рисунок 28 - Легкое морской свинки (группа №1). 1. Многочисленные лимфатические фолликулы в ткани легкого.................................... 75

Рисунок 29 - Легкое морской свинки (группа №1). 1. Муфта из лимфоцитов вокруг сосуда. 2. Утолщение стенок альвеол.................. 75

Рисунок 30 - Легкое морской свинки (группа №2). 1. Большое количество лимфатических фолликулов в ткани легкого..................... 76

Рисунок 31 - Легкое морской свинки (группа №3). 1. Лимфатический фолликул с небольшим центром размножения................................. 77

Рисунок 32 - Легкое морской свинки (группа №3). 1. Плазмоциты в межальвеолярных перегородках среди пролиферирующих.................. 77

Рисунок 33 - Легкое морской свинки (группа №4). 1. Пролиферация эпителиоидных макрофагов в межальвеолярной ткани........................ 79

Рисунок 34 - Легкое морской свинки (группа №5). 1. Крупный лимфатический фолликул с выраженным центром размножения......... 79

Рисунок 35 - Легкое морской свинки (группа №5). 1. Плазмоциты в ткани легких. Окраска гематоусилином и эозином........................ 80

Таблица 5 - Иммуногенные и протективные свойства препаратов на основе антигенов БЦЖ с производными бетулина........................... 82

Таблица 6 - Средние значения иммунологических параметров у морских свинок на 30-е сутки после введения................................. 84

Таблица 7 - Средние значения иммунологических параметров у морских свинок на 30-е сутки после инфицирования......................... 87

Рисунок 36 - Лимфоузел (регионарный) морской свинки (группа №1). 1. Лимфатический фолликул. 2. Участок пролиферации....... 90

Рисунок 37 - Лимфоузел (регионарный) морской свинки (группа №1). 1. Многоядерная гигантская клетка Пирогова-Лангханса..................... 90

Рисунок 38 - Лимфоузел (противоположный) морской свинки (группа №1). 1. Лифатические фолликулы с центрами размножения............... 91

Рисунок 39 - Лимфоузел (противоположный) морской свинки (группа №1). 1. Крупный центр размножения. 2. Немногочисленные............... 92

Рисунок 40 - Лимфоузел (регионарный) морской свинки (группа №2). 1. Небольшое количество лимфатических фолликулов........................ 92

Рисунок 41 - Лимфоузел (регионарный) морской свинки (группа №2). 1. Разрастание фибробластов и фиброцитов вокруг лимфатического 93

Рисунок 42 - Лимфоузел (регионарный) морской свинки (группа №2). 1. Эпителиоидные макрофаги в центре размножения фолликула......... 93

Рисунок 43 - Лимфоузел (противоположный) морской свинки (группа №2). 1. Диффузная пролиферация лимфоцитов. 2. Очаги..................... 94

Рисунок 44 - Лимфоузел (противоположный) морской свинки (группа №2). 1. Эпителиоидные макрофаги в центре лимфатического............... 94

Рисунок 45 - Лимфоузел (регионарный) морской свинки (группа №3). 1. Диффузная пролиферация лимфоцитов, эпителиоидных клеток......... 95

Рисунок 46 - Лимфоузел (регионарный) морской свинки (группа №3). 1. Разрастание фиброзной ткани в парехиме лимфоузла..................... 96

Рисунок 47 - Лимфоузел (регионарный) морской свинки (группа №3). 1. Периваскулярный отек. Окраска гематоксилином и эозином.... 96

Рисунок 48 - Лимфоузел (противоположный) морской свинки (группа №3). 1. Лимфатические фолликулы с центрами размножения............... 97

Рисунок 49 - Лимфоузел (противоположный) морской свинки (группа №3). 1. Мозговые шнуры с большим количеством лимфоцитов............ 97

Рисунок 50 - Лимфоузел (регионарный) морской свинки (группа №4). 1. Обширные участки разросшихся эпителиоидных клеток.................. 98

Рисунок 51 - Лимфоузел (регионарный) морской свинки (группа №4). 1. Разросшиеся эпителиоидные клетки. 2. Обширные участки............ 98

Рисунок 52 - Лимфоузел (регионарный) морской свинки (группа №4). 1. Рексис и апоптоз клеток в зоне некроза. 2. Эпителиоидные............... 99

Рисунок 53 - Лимфоузел морской свинки (группа №4). 1. Лимфатические фолликулы. 2. Обширные участки пролиферации......... 99

Рисунок 54 - Лимфоузел морской свинки (группа №4). Немногочисленные плазмоциты в мозговых тяжах и расширенных....... 100

Рисунок 55 - Селезенка морской свинки (группа №1). 1. Лимфатические фолликулы с выраженными центрами размножения 101

Рисунок 56 - Селезенка морской свинки (группа №1). 1. Трабекулы, отходящие от капсулы селезенки. Вокруг них небольшое количество. 102

Рисунок 57 - Селезенка морской свинки (группа №1). 1. В перифолликулярной (маргинальной) зоне и в синусоидах красной......... 102

Рисунок 58 - Селезенка морской свинки (группа №2). 1. Фолликулы в центральной части селезенки. Окраска гематоксилином и эозином 103

Рисунок 59 - Селезенка морской свинки (группа №2). 1. Плазмоциты и небольшое количество лимфоцитов и макрофагов с апоптозными......... 103

Рисунок 60 - Селезенка морской свинки (группа №2). 1. Скопление плазмоцитов в субкапсулярной области. Окраска гематоксилином и 104

Рисунок 61 - Селезенка морской свинки (группа №3). 1. Лимфатические фолликулы. Окраска гематоксилином и эозином......... 104

Рисунок 62 - Селезенка морской свинки (группа №3). 1. В расширенном венозном сосуде селезенки большое количество............ 105

Рисунок 63 - Селезенка морской свинки (группа №4). 1. Фолликулы селезёнки окружены пролиферирующими эпителиоидными................ 106

Рисунок 64 - Селезенка морской свинки (группа № 4). 1. Эпителиоидные клетки вокруг лимфатического фолликула.................. 106

Рисунок 65 - Селезенка морской свинки (группа №4). 1. Лимфатический фолликул с выраженным центром размножения... 107

Рисунок 66 - Селезенка морской свинки (группа №1). 1. Плазмобласты и лимфобласты по периферии лимфоидного фолликула....... 107

Рисунок 67 - Печень морской свинки (группа №1). 1. Пролиферация лимфоцитов вокруг желчного протока. Окраска гематоксилином.... 108

Рисунок 68 - Печень морской свинки (группа №1). 1. Лимфоциты в месте некроза гепатоцитов. Окраска гематоксилином и эозином... 109

Рисунок 69 - Печень морской свинки (группа №2). 1. Триада печени с выраженной пролиферацией лимфоцитов. Окраска гематоксилином 109

Рисунок 70 - Печень морской свинки (группа №3). Печеночная долька. Гепатоциты без признаков дистрофии. Окраска гематоксилином... 110

Рисунок 71 - Печень морской свинки (группа №4). 1 Гиперемия венозного сосуда и незначительная инфильтрация лимфоцитами... 111

Рисунок 72 - Печень морской свинки (группа №4). 1. Участок с типичной простой жировой дистрофией (перстневидные клетки) ... 111

Рисунок 73 - Печень морской свинки (группа №4). 1. Гиперемия субкапсулярного капилляра. 2. Гепатоциты в состоянии некроза... . 112

Рисунок 74 - Печень морской свинки (группа №4). 1. Очажок некроза. Среди продуктов лизиса гепатоцитов находятся лимфоциты..... 112

Рисунок 75 - Печень морской свинки (группа №4). Очажок некроза. 1. Продукты лизиса гепатоцитов. 2. Гепатоциты на разных стадиях......... 113

Рисунок 76 - Печень морской свинки (группа №4). 1. Крупный очаг пролиферации лимфоидных клеток. Окраска гематоксилином.... 113

Рисунок 77 - Легкое морской свинки (группы №1). 1. Пролиферация лимфоидных и эпителиоидных клеток вокруг бронха......................... 115

Рисунок 78 - Легкое морской свинки (группы №1). 1. Пролиферация эпителиоидных клеток в стенках альвеол. Окраска гематоксилином 115

Рисунок 79 - Легкое морской свинки (группа №1). 1. Лимфатический фолликул около кровеносного сосуда. Окраска гематоксилином......... 116

Рисунок 80 - Легкое морской свинки (группа №2). Стенки альвеол не утолщены в связи со слабо выраженной пролиферацией..................... 116

Рисунок 81 - Легкое морской свинки (группа №2). 1. Участки пролиферации эпителиоидных макрофагов. 2. Пролиферация............... 117

Рисунок 82 - Легкое морской свинки (группа №2). 1. Слабо выраженная пролиферация лимфоцитов вокруг расширенной вены........................ 117

Рисунок 83 - Легкое морской свинки (группа №3). 1. Небольшой участок уплотнения за счет пролиферации эпителиоидных.................. 118

Рисунок 84 - Легкое морской свинки (группа №3). 1. Пролиферация лимфоидных клеток вокруг кровеносного сосуда. Окраска.................. 118

Рисунок 85 - Легкое морской свинки (группа №3). Пролиферация лимфоидной ткани около лимфатического сосуда, проходящего......... 119

Рисунок 86 - Легкое морской свинки (группа №3). 1. В венозном сосуде гранулоциты, плазмоциты и лимфоциты. Окраска гематоксилином 119

Рисунок 87 - Легкое морской свинки (группы №4). 1. Уплотненные за счет пролиферации эпителиоидных клеток участки ткани легких......... 120

Рисунок 88 - Легкое морской свинки (группа №4). Пролиферация эпителиоидных клеток в уплотненном участке легких. Окраска......... 120

Рисунок 89 - Легкое морской свинки (группа №4). 1. Лимфатический фолликул. 2. Утолщенные стенки альвеол. Окраска гематоксилином 121

Рисунок 90 - Легкое морской свинки (группа №4). 1. Лизис эпителиоидных клеток. Скопление лимфоидных клеток вокруг............ 121

ПРИЛОЖЕНИЕ

Министерство науки и высшего образования Российской Федерации

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Омский а фарный научный центр» (ФГБНУ «Омский АНЦ»)

АНТИГЕННЫЕ КОМПЛЕКСЫ БЦЖ С ПРОИЗВОДНЫМИ БЕТУЛИНА: ПЕРСПЕКТИВА ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В ВЕТЕРИНАРИИ

Омск 2022

УДК 619-612 017+636.91 БГ>К 48 Л-721

Рецензенты:

Плешакока В.И. - заведующая кафедрой ветеринарной микробиологии, ипфекщюппых и и1шазиоптп.1Х болезней Омской» iptv ларстшшшм аграрного университета (ФГБОУ ВО Омский ГАУ им Н А. Столыпина), локгор писри-нарных паук, профессор

Пацу.та Ю.И. - старший научный сотрудник iруины паразитарных болезней Ol дола IК )БЗ. кандидат биологических наук

А-721 Антигенные комплексы БЦЖ с крон (водными бетулина: нерспекпшы иснолыованип п петерпнарнн методические рекомендации / B.C. Влассико, И Н. Кошкин. - Омск: ФГБНУ Омский AI 1Ц, 2022. - 20 с.

ISBN 978-5-98559-020-3

В методических рекомендациях иредстшисиа технолошя изготовления коныпиггов антигенов БЦЖ с производными бету лина (бету липовой и бетуло-новой кислот), а также описаны методы оценки иммунобиологических свойств лих специфических имму помодулирутощих средств на модели экспериментального туберкулепа.

Рекомендации предназначены для специалистов ветеринарных научио-исследоватедьских институтов, ВУЗов и лаборагорий, проводящих исследования в области разработки новых методов и средств иммунолошче-ской ЙЩИГЫ животных.

Материалы рассмотрены и утверждены на Ученом совете Ф1Т)ПУ «Омский aipapuwü научный центр» (протокол №1 от 24 января 2022 г)

ISBN 978-5-98550-020-3 УДК 619:612017+636 91

■г ФГБНУ Омский ЛИЦ 2022

СОДЕРЖАНИЕ

Введение........................................................................................ ■ ■ 3

1 Технология получения коиъюгатов антигенов ЕЦЖ с производными бетулина .............................................................5

1.1 Экстракция бетулииа л синтеп его дериватов .5

1.2 Получение антигенных комплексов и соединение с адъювантом......... ...................... ..........................................6

2 Оценка иммунобиологической активности экспериментальных коиъюгатов.................................. .................................... .........7

2 I Определение имисуногенностн ................ ........................ 7

2 2 Определение способности к иммуномодч линии.................. 9

2.3 Определение функционального состояния фагоцитир\ ющих

клеток.................................................................................................... Ю

2.3 I Определение активности мнслопероксидазы .......... 10

2 3.2 Определение катионных белков лиэосом................................II

Заключение.........................-....................................— ................... К

Слисок литерату ры...............................................................17

Федеральное rocs ларе таенное бюджетное научное учреждение

(«Омский аграрный научный центр» (Ф1 ЬН У «Омский ЛИЦ» >

AM I II I Kl 111 lil к КОМПЛЕКСЫ ЬЦЖ С ПРОИЗВОДНЫМИ БЕТУЛИНА: ПЕРСПЕКТИВА ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В ВЕТЕРИНАРИИ

Методические рекомендации .—

00

Компьютерная верстка В.!I. Книилнчншм

Подписана к печати 2701 2022 г Формат бумаги 60 -х 84 1/16. Печнгь опершиышис Гарнитур " l'inws New Komen" Усл. не1! л.1.16 Тираж 50 чкх Отпечатано в типографии ИГТ Мдишжшн К.Л 644034. г. Омск, ул. Долгирево. 126 Тел [phone]

«Утверждаю» Проректор по научной работе ФГБОУ ВО Омский ГАУ

кандидат экономических наук

« Ь » П 2021 год

.И. Новиков

КАРТА ОБРАТНОЙ СВЯЗИ

Материалы информационного письма о результатах НИР аспиранта Кошкина Ивана Николаевича на тему: «Технология получения противотуберкулезного препарата и оценка его иммунобиологических свойств» рассмотрены на заседании кафедры ветеринарной микробиологии, инфекционных и инвазионных болезней ФГБОУ ВО Омский ГАУ (протокол №6 от 13.12. 2021) и приняты к использованию в учебном процессе и в НИР.

Заведующая кафедрой ветеринарной микробиологии, инфекционных и инвазионных болезней.

доктор ветеринарных наук, профессор