ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНОГО ХИТОЗАНА И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ ХИТОЗАНА ПРИ КОНСТРУИРОВАНИИ БИОПРЕПАРАТОВ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат наук Мурадян Жора Юрикович

• Мурадян Жора Юрикович
• кандидат наук
• 2017

Оглавление диссертации кандидат наук Мурадян Жора Юрикович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Способы получения хитина, хитозана и их производных

1.1.1. Получение низкомолекулярного хитозана

1.2. Применение хитозана в медецине и ветеринарии

1.3. Адъювант

1.3.1. Основные свойства адъювантов

1.3.2. Классификация адъювантов

1.4. Хитозан в качестве адъюванта в составе вакцин

1.4.1. Сорбционные свойства хитозана

1.5. Пребиотические биологически активные добавки

1.5.1. Хитозан в качестве компонента пре- и пробиотических

кормовых добавок

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

2.2.1. Усовершенствование технологии производства регулируемого ферментативного расщепления хитозана для получения его низкомолекярных производных

2.2.2. Изучение эффективности применения различных форм хитозана при конструировании биопрепаратов

2.2.2.1. Изучение цитотоксического действия различных форм хитозана на монослой клеточных линий ПТ-80 и Таурус-1

2.2.2.2. Изучение адъювантной активности различных форм хитозана при конструировании антибактериальных и противовирусных вакцин

2.2.2.2.1. Адъювантная активность хитозана при конструировании вакцины против инфекционного

ринотрахеита крупного рогатого скота

2.2.2.2.2. Совершенствование схемы инактивированной вакцины против репродуктивно - респираторного синдрома свиней

2.2.2.2.3. Эффективность использования хитозана в составе вакцины против некробактериоза животных

2.2.2.2.4. Изучение влияния хитозана в составе защитной среды высушивания на выживаемость микроорганизмов и длительность хранения симбиотического препарата

« Симбиохит»

2.2.2.2.5. Использование хитозана в качестве компонента защитной среды при изготовлении сухой инактивированной вакцины против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота

2.2.3. Изучение влияния хитозана в составе пробиотика на организм

телят

2.2.3.1. Изучение эффективности включения в состав рациона молодняка крупного рогатого скота пробиотическо препарата «Муцинол Экстра», содержащего хитозан

3. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

4. ВЫВОДЫ

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

6. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

7. ПРИЛОЖЕНИЯ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ХТЗ - хитозан ХТ - хитин

ДВ - дистиллированная вода ММ - молекулярная масса кДа - килодальтон

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография ММР - молекулярно-массовое распределение полимера М ^ - средневесовая молекулярная масса

М N - среднечисленная молекулярная масса М W/М N - индекс полидисперсности молекулярных масс Да - дальтон

СДА - степень деацетилирования

СЗ - степень замещения

ИФА - иммуноферментный анализ

РРСС - репродуктивно - респираторный синдром свиней

РН - реакция нейтрализации

ИРТ - инфекционный ринотрахеит

РНГА - реакция непрямой гемагглютинации

сПз - сантипуаз

ПТ - почка теленка

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНОГО ХИТОЗАНА И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ ХИТОЗАНА ПРИ КОНСТРУИРОВАНИИ БИОПРЕПАРАТОВ»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Уникальная структура хитозана обуславливает его широкое применение в биотехнологии, медицине, ветеринарии, сельском хозяйстве и пищевой промышленности (Быков В.П., 1992; Гамзазаде А.И., 1999; ^дьга Л.А., 2002; Вихорева Г.А., 2002; Варламов В.П., 2004; Албулов А.И., 2005; Немцев С.В., 2006; Muzzarelli R.A.A., 1997; Peter M.G., 1997). Хитин и хитозан являются природными биополимерами и их синтез, модификация и деградация связана с ферментативными превращениями. Установлено, что хитозан является слабым аллергеном, обладает низкой токсичностью и пирогенностью.

В последние годы учеными различных стран проводятся исследования по использованию хитозана при конструировании вакцин. Одним из основных мер борьбы с инфекционными заболеваниями животных является специфическая профилактика. При конструировании противовирусных вакцин вопрос использования эффективных адъювантов до настоящего времени остается актуальным. При этом хитозан используется как в качестве сорбента антигена, так и в качестве стимулятора поствакцинального иммунного ответа (Маркушин С.Г., 2010; Переверзев А.Д., 2012; Черникова М.И., 2015; Ghendon Y., 2008; Wang X., 2012; Vasiliev Y., 2015 и др.).

Хитозан обладает широким спектром антимикробной активности, в том числе по отношению к патогенной микрофлоре (Бондаренко В.М., 2006; Куликов С.Н., 2010), способен стимулировать рост бифидобактерий и лактобактерий (Червинец В.М., 2001; Панин А.Н., 2006; Кириленко Ю.К., 2007; Huean-Woo L., 2002; Lee W.H., 2002), что позволяет применять его в комплексе с пробиотическими препаратами.

Степень разработанности проблемы. Особое внимание и важнейший интерес для перспективных применений хитозана представляют его низкомолекулярные формы. Главным образом в промышленных масштабах

5

такие низкомолекулярные соединения получают методами химического гидролиза. Вопросу гидролиза хитозана, в том числе и ферментативного, в последнее время уделяется достаточно много внимания.

В последние годы в ветеринарии большое значение приобретают адъюванты, получаемые из природного сырья. Это связанно с побочными эффектами (такими, как аллергия, кумулятивные свойства) препаратов, изготовленных путем химического синтеза. На этом фоне обращает на себя внимание хитозан, получаемый из панциря ракообразных. Свободные аминогруппы хитозана образуют хелатные комплексы с ионами металлов, активно взаимодействуют со сложными органическими молекулами, такими как белки и пептиды. Эта активность объясняется не только наличием высокого положительного заряда, но и, в большей степени, вторичной и третичной структурой полимера, что указывает на возможность использования хитозана в качестве адсорбента, адъюванта и иммуномодулятора. Известны работы по включению модификатов хитозана в качестве адъюванта в составе вакцин ветеринарного назначения (Самуйленко А.Я., 1995; Жоголев К.Д., 2006; Варламов В.П., 2010; Албулов А.И., 2012; Okawa Y., 2003; Chang N., 2010; Allison C., 2011 и др.).

Пребиотические свойства хитозана изучены недостаточно, поэтому оценка симбиотического действия хитозана с различными пробиотическими штаммами микроорганизмов представляет научный и практический интерес.

Цель и задачи исследований. Цель исследований заключалась в разработке технологии получения низкомолекулярного хитозана и изучении возможности применения различных форм хитозана при конструировании вакцинных и пробиотических препаратов.

Для достижения поставленной цели были определены следующие основные задачи:

1. Разработать технологию регулируемого ферментативного расщепления хитозана для получения его низкомолекулярных производных.

2. Изготовить опытные образцы низкомолекулярных форм хитозана, определить их основные физико-химические свойства.

3. Исследовать адъювантную и биологическую активность производных форм хитозана и эффективность их применения при конструировании антибактериальных и противовирусных вакцин.

4. Изучить влияние хитозана в составе защитной среды высушивания на выживаемость микроорганизмов на этапе лиофилизации и жизнеспособность в процессе хранения.

5. Исследовать эффективность выпаивания пробиотического препарата

«Муцинол Экстра», содержащего хитозан, на организм молодняка

крупного рогатого скота.

Научная новизна исследований. Разработана технология регулируемого ферментативного расщепления хитозана для получения его низкомолекулярных производных. Определены технологические параметры получения низкомолекулярного хитозана. Показано, что использование ферментного препарата дает возможность регулировать молекулярную массу хитозана в широких пределах.

Исследованы адьювантные свойства производных форм хитозана. Введение хитозана в составы вакцин против инфекционного ринотрахеита (ИРТ) крупного рогатого скота, репродуктивно - респираторного синдрома свиней (РРСС), некробактериоза животных способствовало повышению титра поствакцинальных антител и уменьшению воспалительного процесса в месте введения вакцины, увеличению продолжительности иммунного ответа.

Разработанная защитная среда высушивания, содержащая хитозан, для симбиотического препарата на основе штамма Escherichia coli VL-613, позволяет получить более стабильный по биологическим свойствам препарат и увеличить срок его хранения (патент РФ № 2571157).

Впервые получена сухая инактивированная безвредная высокоиммуногенная вакцина против ИРТ крупного рогатого скота, содержащая в качестве защитной среды высушивания хитозана сукцинат, обеспечивающая создание у привитых животных напряженного и длительного иммунитета (заявка на изобретение, рег. № 2016132302).

Научно обоснована и экспериментально доказана эффективность влияния пробиотика «Муцинол Экстра», содержащего хитозан, на микробиоценоз толстого кишечника, динамику живой массы и морфо-биохимические показатели гомеостаза телят.

Теоретическая и практическая значимость исследований.

Разработана и в производственных условиях апробирована технология получения низкомолекулярных форм хитозана. По результатам исследований разработаны ТУ «Хитозан низкомолекулярный» (ТУ 9289038-11734126-15). Изготовлены опытно-промышленные партии низкомолекулярного хитозана для изучения использования хитозана при конструировании вакцинных и пробиотических препаратов.

Полученные результаты подтверждают перспективность использования производных форм хитозана в составе бактерийных и вирусных вакцин. Установлено, что производные формы хитозана нетоксичны и могут безопасно и эффективно вводиться внутримышечно и внутрикожно, что может служить основанием для их использования при разработке лечебно-профилактических препаратов. Показано, что введение хитозана в состав вакцин способствует повышению эффективности специфической профилактики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, репродуктивно-респираторного синдрома свиней, некробактериоза животных.

Основные положения работы, выносимые на защиту:

1. Технология регулируемого ферментативного расщепления хитозана позволяет получать его низкомолекулярные производные с заданными свойствами.

2. Применение производных форм хитозана при конструировании антибактериальных и противовирусных вакцин.

3. Использование хитозана в составе защитной среды высушивания при изготовлении сухих вакцин.

4. Оценка эффективности выпаивания пробиотического препарата «Муцинол Экстра» на организм молодняка крупного рогатого скота.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность результатов исследований подтверждена соответствием теоретических данных с результатами проведенных экспериментальных исследований. При анализе и статистической обработке результатов использовали программу «Microsoft Excel», входящую в пакет программ «Microsoft Office, 2010», построение технологических и аппаратурных схем - с помощью программы «Microsoft Office Visio, 2016». Для выявления статистически значимых различий использовали критерий Стьюдента-Фишера (Н.А.Плохинский, 1961).

Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета ВНИТИБП (2013-2017гг.). Результаты работы представлены на Международных конференциях 2013-2016гг. (Екатеринбург, Пермь, Щелково, Минск, Уфа, Армавир). Автор является лауреатом премии им. П.П. Шорыгина в 2015, 2016, 2017 гг.

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 18 научных работ, в том числе 7 в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ. Получен 1 патент на изобретение.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности.

Результаты исследований соответствуют п.п 1, 3, 4, 9, 11 паспорта специальности 03.01.06. и п.п 9, 14 паспорта специальности 06.02.02.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из разделов: «Введение», «Обзор литературы», « Собственные исследования», «Обсуждения результатов», «Выводы», «Практические предложения», «Список использованной литературы», «Приложения». Работа изложена на 117 страницах, содержит 13 рисунков и 14 таблиц. Список литературы включает 229 наименований, из которых 119 отечественных 110 зарубежных.

Личный вклад автора заключается в формулировании основных положений диссертации, постановке целей и задач исследований, планировании и реализации эксперимента, обобщении результатов и использовании их в практике. Диссертация является совокупностью исследований, проведенных автором лично при его непосредственном участии в качестве ответственного исполнителя.

Благодарности. Диссертант выражает благодарность директору ВНИТИБП, академику РАН А.Я. Самуйленко; научному руководителю доктору биологических наук, М.А. Фроловой; а также за консультативную и практическую помощь доктору биологических наук, профессору А.И. Албулову (ВНИТИБП); доктору биологических наук, профессору Крапивиной Е.В. (Брянская ГСХА); доктору ветеринарных и биологических наук, профессору П.А. Красочко (УО «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины»); доктору биологических наук, профессору Е.И. Ярыгиной (ФГБОУ ВПО «МГАВМиБ» г. Москва) и другим.

1. Обзор литературы

1.1. Способы получения хитина, хитозана и их производных

Хитин является широко распространенным в природе биополимером, и был впервые обнаружен в грибах в 1811 г. во Франции профессором Анри Броконно (Вгасоппо11), а впоследствии - в наружных покровах насекомых и ракообразных. Безусловно, ракообразные: крабы, лангусты, креветки и раки являются основным сырьевым источником хитина и его производного -хитозана [187]. В 1823 году другой французский ученый, Одье (О&ег), выделил из надкрыльев майских жуков нерастворимое соединение, которое назвал хитином (от греческого хитон - покрытие, оболочка). Позднее он обнаружил хитин в деминерализованных панцирях раков и предположил, что это основной материал экзоскелета членистоногих [192].

Первые работы в России, связанные с хитином, были проведены под руководством академика АН СССР П. П. Шорыгина. Результаты исследований были опубликованы в 1934-1935 гг. Ориентировочно, с 1930 г. начались рыбохозяйственные исследования по изучению свойств хитина и его запасов, образовавшихся в Черном море в результате регулярных линек морских ракообразных. В 1950 - 1960-е годы к исследованию свойств хитина и его производных подключаются академические институты России: Институт высокомолекулярных соединений РАН (ИВС РАН) (г. Санкт-Петербург), Институт биофизики МЗ СССР (г. Москва) и другие. Следует подчеркнуть, что производство хитина и хитозана представляет особый интерес для рыбной отрасли [57].

Исходным хитинсодержащим сырьем служит панцирь промысловых крабов Дальневосточного региона, креветок океанических и раков, при разделывании которых образуются панцирьсодержащие отходы (ПСО),

которые названы панцирьсодержащим сырьем (ПСС). Панцирь ракообразных играет роль внешнего скелета и построен из трех основных элементов: хитина, играющего роль каркаса, минеральной части (карбоната кальция), придающей панцирю необходимую прочность, и белков в виде хитин-белкового комплекса (ХБК), делающих его живой тканью. В состав панциря кроме ХБК входят липиды, пигментные вещества, представленные каротиноидами типа астаксантина, астацина и криптоксантина [100].

Известные способы получения хитина из ПСС ракообразных можно разделить на химические, ферментативные, их комбинации и электрохимический [35], основными из которых являются химический и ферментативный. Получение хитина химической обработкой основано на очистке хитина от белка и минеральных соединений - депротеинировании и деминерализации [180]. Наиболее простым из биотехнологических способов получения хитина и его модификаций из хитина содержащего сырья является автопротеолиз или автоэнзимолиз - использование активного ферментного комплекса самого сырья. Такой способ описан применительно к мясу криля, панцирю краба, и балтийскому гаммарусу [85].

Обычно извлечение хитина из отходов оболочек ракообразных состоит из трех основных этапов: деминерализация (карбонат кальция и фосфат кальция, отделение), депротеинизация (отделение белка), обесцвечивание (удаление пигментов) и деацетилирование (удаление ацетильной группы). Эти три шага составляют стандартную процедуру получения хитина. Последующее преобразование хитина в хитозан (деацетилирование), как правило, достигается за счет обработки концентрированным раствором гидроксида натрия при более высокой температуре, чтобы удалить некоторые элементы или всю ацетильную группу из хитина. Более ранние исследования ряда авторов показали, что физико-химические характеристики хитозана влияют на его функциональные свойства, которые также отличаются в зависимости от видов ракообразных и методов подготовки [81].

Хитин и хитозан является линейными полисахаридами, состоящими из различного количества К-ацетил-2-дезокси-О-глюкопиранозы и 2-амино-2-дезокси-О-глюкозы (глюкозамин), находящихся в пиранозной форме и связанных 1-4 гликозидными связями (рис. 1). Хитин является вторым наиболее распространенным природным полимером после целлюлозы. В выделенном из природных источников хитине, как правило, содержится 5-10 % остатков 2-амино-2-дезокси-О-глюкозы. Дезацетилирование хитина обычно осуществляется в жестких щелочных условиях, при этом происходит частичная деполимеризация. Проведение дезацетилирования в мягких условиях (с помощью ферментов или при низких температурах) позволяет получать хитозан с высокой молекулярной массой [78].

Рисунок 1. Химическая структура хитина и хитозана.

В зависимости от расположения восстанавливающего конца полимерной молекулы различают три формы третичной структуры хитина: а, в и у. Разница между ними заключается в расположении цепочек в кристаллической решетке. Так, в а-хитине цепи расположены антипараллельно по отношению друг к другу, он характеризуется самым стабильным состоянием. В у -хитине две цепочки полимера направлены «вверх» относительно одной, направленной «вниз». В в - хитине они расположены параллельно друг другу. в и у-хитины могут превращаться в а-хитин. а-хитин встречается в природе чаще других форм [186].

Дезацетилирование хитина / хитозана является наиболее важным параметром, который влияет на их различные свойства, в том числе биологические, физико-химические и механические. Было обнаружено, что эффективность и поведение хитина/ хитозана и его производных зависит от степени дезацетилирования. Расширение и жесткость конформации цепи макромолекулы и тенденция цепей макромолекул агрегировать сильно зависят от степени дезацетилирования. Определение степени дезацетилирования для двух сополимеров имеет важное значение для изучения их химических структур, свойств и структурообразующих свойств отношений [4].

Не менее важной задачей является осуществление депротеинирования ПСО, позволяющего получать из ПСО депротеинированный панцирь (полуфабрикат для получения хитина), качественные белковые продукты, липиды и т.д. При создании технологии консервации ПСО учитывались данные, полученные при разработке научных основ процессов обработки биосырья электрохимическим способом [68].

Среди производных хитина наибольшее распространение имеет хитозан благодаря своей биологической активности, реакционной способности и технологичности, обусловленных простотой растворения. В основе получения хитозана лежит реакция отщепления от структурной единицы хитина - К- ацетил-Б-глюкозамина - ацитильной группы или реакция дезацетилирования, глубину которой принято оценивать по величине степени ацетилирования - Ба или по виличине степени дезацетилирования (1-Ба).

Получение хитозана включает в себя два основных технологических процесса: выделение хитина из исходного сырья путем его деминерализации и депротеинизации; производство хитозана путем деацетилирования хитина водным раствором щелочей. Степень деацетилирования до 96 % - один из основных показателей, определяющий качество полученного продукта [72, 224, 218].

Традиционная технология получения хитозана предусматривает использование панцирьсодержащего сырья (ПСС) ракообразных, базируется на массообменных химико- технологических процессах, в которых основную роль играет перенос вещества из одной фазы в другую, и включает следующие основные этапы:

- измельчение сырья;

- удаление из сырья белковых фракций - депротеинирование;

- перевод в растворимую форму минеральных компонентов сырья -

деминерализация;

- деацетилирование хитина с получением хитозана [100].

Важным фактором интенсификации массообменных процессов при получении хитозана из ПСС ракообразных является степень измельчения сырья [91]. Однако варьирование только данного фактора как в отношении ПСС, так и извлеченного из него хитина не может обеспечить стабильное качество продукта, идентифицируемое по степени деацетилирования хитозана, если процесс деацетилирования происходит в условиях жесткого химического взаимодействия [92].

Классический подход к получению хитозана состоит в депротеинировании измельченного до определенной степени хитинсодержащего сырья слабым раствором щелочи с последующей деминерализацией в растворе соляной кислоты. При этом не обеспечивается депигментация хитина, в связи с чем возникает необходимость обработки выделенного хитина с использованием токсичных химических реагентов, в частности, пероксида водорода, с промывкой метанолом, после чего производят деацетилирование гидроксидом натрия [30].

Для заготовки ПСС необходимо использовать глубокую переработку

ракообразных, что позволяет фракционировать их на части тела и

устанавливать их соотношение после термической обработки. ПСС,

состоящее из карапакса, ходильных ножек, при заготовке в качестве

технического сырья подвергается сушке, измельчению и хранится при

температуре окружающей среды до переработки в хитин, из которого получают хитозан [108].

Доказана возможность получения хитина из ПСС посредством проведения двухступенчатой экстракции природного красителя (каротиноидов), одноступенчатой деминерализации 8%-й соляной кислотой и ферментативного депротеинирования протосубтилином ГЗх с активностью 70 ед./г (доза 8 %) с последующей щелочной доочисткой; выход составляет 8-9 % хитина, содержащего минеральные (0,7 %) и белковые (0,16 %) примеси, что соответствует требованиям технической документации ТУ 9289-010-00471704-05. Известен способ получения хитозана из предварительно измельченного высокоочищенного хитина, представляющего собой порошок кремового цвета, растворяющийся в 1%-й уксусной кислоте и имеющий молекулярную массу 48,7 кДа, степень деацетилирования порядка 85 % и содержащий минеральных примесей не более 0,2 %, белковых - не более 0,11 % [86].

1.1.1. Получение низкомолекулярного хитозана

Особый интерес для перспективных применений хитозана представляют его низкомолекулярные формы. В настоящее время в промышленных масштабах такие низкомолекулярные соединения получают методами химического гидролиза. Однако эти процессы сопорвождаются образованием значительных количеств токсичных побочных продуктов, содержащих белки, щелочи, кислоты и соли и требуют весьма затратного обезвреживания отходов перед их сбросом в окружающую среду. Кроме того, для данного метода характерны большие временные затраты, а получающиеся при этом низкомолекулярные продукты обладают высокой степенью полидисперсности [100].

Хитин и хитозан являются природными биополимерами и их синтез,

модификация и деградация связана с ферментативными превращениями.

Именно биоразлагаемость до обычных для организма веществ является

одним из основных среди многочисленных достоинств хитозана. Очевидно,

16

что самыми подходящими из ферментов для осуществления процесса ферментативного гидролиза являются хитозаназы, которые приводят к получению олигосахаридов со степенью полимеризации 2-5. Однако в живой природе хитозан деградирует с помощью неспецифических ферментов [41, 117].

В промышленных масштабах низкомолекулярные хитоолигосахариды получают главным образом методами химического или ферментативного гидролиза с хорошо известными ограничениями и недостатками, присущими этим технологиямх [217].

Для получения низкомолекулярных соединений хитина и хитозана может быть использована неравновесная электронно-пучковая плазма (ЭПП), которая генерируется при инжекции электронного пучка в плотные газообразные среды. Перспективы применения ЭПП и ее технологические преимущества для плазмохимического гидролиза хитина и хитозана по сравнению с газоразрядной плазмой [222]. Результаты проведенных работ по масштабированию процесса плазмохимического гидролиза хитина и хитозана позволяют рассчитывать на то, что пучково-плазменные реакторы смогут стать альтернативой традиционным технологиям получения низкомолекулярных водорастворимых продуктов [27].

Известно об успешном использовании хитиназ микробного происхождения и ряда гидролаз неспецифического действия для получения низкомолекулярного хитозана, но доступные коммерческие ферменты системы практически отсутствуют [166, 161].

Ильиной А.В. и соавтр. 2009 подобраны оптимальные условия процесса деполимеризации высокомолекулярного хитозана, а также N,0-карбоксиметил- и ^сукцинил-хитозана с использованием экстракта гепатопанкреаса камчатского краба в качестве ферментного препарата для получения низкомолекулярного хитозана, ^0-карбоксиметил- и N сукцинил-хитозана. Низкомолекулярные производные были получены с выходом 85, 55 и 80% соответственно. Гидролиз следует проводить при

17

ферментн-субстратном соотношении 1:200 при 37°С, в течение 20 ч. Так как

в этих условиях только протеиназы сохраняли 50 % первоначальной

активности, можно предположить, что они главным образом ответственны за

расщепление в-гликозидных связей и получение низкомолекулярного

хитозана и его производных.

1.2. Применение хитозана в медицине и ветеренарии

В последние два десятилетия отмечается особенный интерес к

фармакологическим эффектам хитозана в профилактической и клинической

медицине, ветеринарии, животноводстве. Хитозан проявляет себя как

препарат поливалентного действия на организм человека и животных в

условиях экологического неблагополучия и ряда патологий различного

генеза[181, 210]. Отмеченное увеличение хитозаном в интактном организме

животных гормона кортикостерона и энергометаболитов в тканях создает

новую гомеостатическую ситуацию, не превышающую адаптационные

лимиты и направленную на поддержание метаболизма и энергетического

потенциала в тканях в состоянии повышенной готовности к действию

экстремальных факторов. Механизм действия хитозана предстоит еще

изучить, тем не менее появились работы, согласующиеся с настоящими

данными. Показано, что хитоолигосахариды индуцируют митохондриальный

биосинтез, что на прямую связанно с генерацией АТФ, и повышают

выносливость крыс к физической работе[157].

Стимуляцию хитозаном синтеза кортикостерона в организме

подтверждают гистологические данные об увеличении им пучковой зоны

надпочечников при введении в корм поросят, как известно, в этой зоне

происходит синтез кортикостероидов [21]. Результаты настоящего

исследования свидетельствуют о перспективности применения хитозана при

истощающих физических нагрузках на организм животных и человека [106].

Кроме того, являясь природным антиоксидантом, сульфатированный

хитозан поглощает супероксидные анион-радикалы, гидроксильные

радикалы и может быть субстратом для создания фармацевтических

18

препаратов и биологически активных добавок [137, 215]. Способствуя повышению уровня инсулина, хитозан может применяться для лечения сахарного диабета [198]. Доказаны противоаллергические свойства хитозана, возможность использования биополимера в качестве полимерной матрицы для доставки и дозированного высвобождения лекарственных средств [65]. Перспективно применение хитозана для иммунотерапии в качестве противоопухолевого средства, способного подавлять рост опухолевых клеток, болезнетворных микроорганизмов, стимулировать гуморальный и клеточный иммунитет, для генотерапии с целью адресной доставки генетических материалов [177].

В комбинации с другими веществами хитозан благодаря набору функциональных групп образует прочные связи с действующими компонентами, играет роль депо. Хитозан используется в качестве природного каркаса при разработке биодеградируемых повязок, создании биодеградируемых носителей антибиотиков, противоопухолевых, противовирусных препаратов в виде пленок, применение которых обеспечивает пролонгирование их действия. Хитозан способен повышать неспецифическую резистентность животных при физических нагрузках, гипоксии, тем самым способствует усилению адаптационных возможностей организма животных в условиях максимальной физической работы и психоэмоционального стресса [55, 101, 79].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Мурадян Жора Юрикович, 2017 год

б.Список литературы

1. Албегова, Ж.К. Влияние энтеросорбентов на гемодинамические показатели и свободнорадикальные процессы у крыс при моделировании хронической интоксикации хлоридом никеля / Ж.К. Албегова., В.Б. Брин., Э.М. Гаглоева. // Вестник новых медицинских технологий. - 2010. -Т. 17, № 3. - С. 91-93.

2. Албулов, А.И. Перспективы использования хитозана в производстве вакцин. / А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, В.П. Варламов [и др.] // Материалы междунар. научно-практ. конференции «Роль ветеринарной науки и практики в эффективном развитии животноводства», Алматы, 2012. -С. 62-67.

3. Албулов, А.И. Применение хитозана и его производных в составе вакцинных препаратов / А.И. Албулов, В.И. Белоусов, А.Я. Самуйленко, А.С. Фоменко, // «Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов» Тезисы докладов V Всероссийской конференции, Щелково, -1996. -С. 64-65.

4. Аллам, А.Ю.Ф. Хитин и хитозан: Строение, свойства, применение / А.Ю.Ф. Аллам, Н.В. Долганова. // Вестник науки и творчества. - 2016. -№ 10 - С. 11-14.

5. Антонов, С.Ф. Морфологические особенности процессов регенерации ран при лечении коллаген-хитозановыми и желатин-хитозановыми губками / С.Ф. Антонов, Б.А. Парамонов, Б.А. Никонов [и др.] // Вестник СевероЗападного государственного университета им. И.И. Мечникова. - 2014. -Т. 4, № 2 - С. 59-62

6. Арзыматов, Р.К. Регенерация костной ткани на фоне местного применения хитозана / Р. К. Арзыматов, А. А. Бейсембаев, П. А. Елясин. // Медецина и образование в Сибири. - 2014. - №2. - С. 36-40.

7. Атауллаханов, Р.И. Адъюванты в составе вакцин. / Р.И. Атауллаханов, Хаитов Р.М. Сообщение № 2. Микро и наночастицы // Иммунология. -2011. - № 2. - С. 101-109.

8. Ахматова, Н.К. Влияние хитозана на иммунофенотип и функциональную активность мононуклеарных лейкоцитов мышей при иммунизации инактивированной противогриппозной вакциной / Н.К. Ахматова, Н.Б. Егорова , Е.А.Курбатова [ и др.] // ЖМЭИ.-2008.-№6.-С. 31 - 35.

9. Ашихмин, Д. Пробиотик «Проваген»-решение многих проблем при выращивании поросят // Свиноводство. -2010.-№ З.-С. 46-47.

10.Балышев, А.Г. Эффективность лактулозосодержащих препаратов на гематологические показатели, рост и развитие телят / А.Г. Балышев // Вестник аграрной науки Дона. - 2012. - № 3 (19). - С. 80.

11. Баньковский, В.В. Еськов Е.К., Ярошевич Г.С. Полизин и хитозан выводит из организма пчел амитраз/ В.В. Баньковский, Е.К. Еськов, Г.С. Ярошевич. // Пчеловодство. -2009. -№ 3. -С. 26-27.

12. Батырбеков, Е.О. Перспективы применения хитозана в офтальмологии. /Е.О.Батырбеков, З.Т. Утельбаева, А.Б. Исмаилова, М.Б. Умерзакова , Т.К Ботабекова. //Научно-информационный издательский центр и редакция журнала "Актуальные проблемы гуманитарных и естественных наук" (Москва) .-2010. -№7. -С. 25-28.

13. Бауэр, А.М. Регенерация тканей преддверия рта при использовании геля хитозана / А.М. Бауэр, И. А. Голубева, В. А. Головнев [и др.] // Медицина и образование в Сибири. - 2011. - № 5. - С. 9.

14. Березин, А.С. Противотуберкулезные конъюгаты хитозана / А.С. Березин, Ю.А. Скорик. // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: матер. 11-й Международной конференции РосХит - Мурманск, - 2012. - С. 266-271.

15. Бовкун, Г.Ф. Микробиоценоз кишечника в норме и паталогии у молодняка птиц, крупного рогатого скота и целесообразность пробиотической и пребиотической коррекции /Г.Ф. Бовкун, Е.П.

93

Ващецкин, Е.В. Малик //Брянск, из-во ФГОУ ВПО «Брянская ГСХА», 2005.- С. 80.

16. Большаков, И.Н. Влияние различных производных гелевых форм хитозана на уровень эндогенной интоксикации при деструктивной форме панкреатита / И.Н. Большаков, А.А. Приходько, С.М. Насимов, А.И. Гамзазаде // - М.: ВНИРО, 2003. - С. 144 - 149.

17. Бондаренко, В.М. Пребиотическое и противоинфекционное действие лактулозосодержащих препаратов // Фарматека. - 2004. - № 11. - С. 1-5.

18. Бондаренко, В.М. Чувствительность к хитозану микрофлоры биоптатов язвенных поражений желудка и двенадцатиперстной кишки / В.М. Бондаренко, В.М. Червинец, А.И. Албулов. // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: матер. 8-й Международной конференции. - М.: ВНИРО, -2006. - С. 179-182.

19. Булкина, Н. В. Опыт применения аскорбата хитозана в комплексной терапии заболеваний пародонта / А.П. Ведяева, Е. В. Токмакова, О. В. Попкова. // Саратовский научно-медицинский журн. -2013. -Т. 9, № 3. -С. 372-375.

20. Бурдов, А.Н. Ящур / А.Н. Бурдов, А.И. Дудников, П.В. Малярец [и др.]. //

- М.: Агропромиздат, 1990. - С. 320.

21. Буянов, А.А. Влияния хитозана иммунную и эндокринную системы поросят / А. А. Буянов, В.Н. Виденин [и др.] // Ветеринария, -2004. -№ 2, С. 47-51.

22. Быков, В.П. Разработка технологии получения водорастворимой формы хитозана / В.П. Быков, В.М. Быкова, Л.И. Кривошеина и др.// Производство применение хитина и хитозана: Тез. докл. 4-й Всерос. конф

- М.: Изд. ВНИРО, -1995. - С. 26.

23. Быков, В.П. Перспективы организации в рыбной отрасли промышленного производства хитина и хитозана / В.П. Быков // Производство и применение хитина и хитозана: тез. докл. 4-й Всероссийской конф. - М., -1995. - С. 3-5.

24. Варламов, В.П. Ред. Хитин и хитозан: природа, получение, применение / В.П. Варламов, С.В. Немцев, В.Е.Тихонов. // Российское хитиновое общество, -2010.

25. Васильев, Ю.М. Адъюванты гриппозных вакцин. Журн. микробиол. -2010, № 1. С. 100- 110.

26. Васильев, Ю.М. Иммуноадьювантные свойства препарата на основе хитозана при добавлении к вакцинам против болезни Ньюкасла и парагриппа-3 / О.С. Каширина, С.В. Фролов, Р.В. Белоусова [и др.] // Материалы конференций молодых ученых Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, -2013. -С. 57-70.

27. Васильева, Т.М. Получение низкомолекулярных форм хитина и хитозана в электронно-пучковой плазме / Т.М. Васильева, С.А. Лопатин, В.П. Варламов // Химия высоких энергий. 2016. Т. 50. № 2. С. 155-159.

28. Воробьев, А.А. Адьюванты. / А.А. Воробьев, Н.Н. Васильев // Медицина, 1969. - С. 206.

29. Воробьева, А.А. Новые принципы и методы создания иммунобиологических препаратов / А.А. Воробьева, Н.В. Медуницин // Медицина. - 1999. - № 10. - С. 16-17.

30. Гамзазаде, А.И. Некоторые особенности получения хитозана/ А.И. Гамзазаде, А.И. Скляр, С.В. Рогожин // ВМС. Том (А) XXYII - 1985. - С. 6.

31. Герасименко, Д.В. Антибактериальная активность водорастворимых низкомолекулярных хитозанов в отношении различных микроорганизмов / Д.В. Герасименко, И.Д. Авдиенко, Г.Е. Банникова, О.Ю. Зуева, В.П. Варламов // Прикл. биохим. и микробиол. - 2004. - № 3. -С. 301- 306.

32. Гладкова, Е.В. Влияние растворов хитозана на клинические штаммы staphylococcus aureus / Е.В. Гладкова [и др.] // Вестник новых медицинских технологий. -2013. -№ 1. - С. 39-42.

33. Гладкова, Е.В. Особенности репаративной регенерации экспериментальных ран при использовании хитозана / Е.В. Гладкова, И.В.

95

Бабушкина, И.А. Мамонова [и др.] // Фундаментальные исследования. -2014. - Вып.6. -С. 1397-1400.

34. Гулюкин, М.И. Комплексная система мероприятий при некробактериозе животных / М.И. Гулюкин, Ю.Д. Караваев, И.Н. Семенова, Н.В. Мельник // Ж. «Ветеринария». - 2007. - № 9. - С. 5.

35. Дацун, В. М. Биологически активные вещества / В.М. Дацун., Б.Н. Семенов // Технология продуктов из гидробионтов / под ред. Т. М. Сафроновой, В. И. Шендерюка. М., -2001. -С. 466-485.

36. Дуктов, А.П. Состояние микрофлоры пищеварительного тракта цыплят-бройлеров при использовании биодобавки «Хитозан» / А.П. Дуктов, П.А. Красочко. // Молодежь и инновации. Материалы Международной начно-практической конференции молодых ученых. Горки, - 2013. -С. 27-30.

37. Дьяконов, Л.П. Животная клетка в культуре (Методы и применение в биотехнологии) / под. ред. Л.П. Дьяконова, В.И. Ситькова // Ставрополь, 2000. - С.400.

38.Еремец, О.В. Проектный подход в обеспечении качества и безопасности лекарственных средств для животных / О.В. Еремец., М.А. Малышева, Л.А. Неминущая, [и др.] // Ветеринария и кормление, № 6, (2010). -С. 6061.

39. Еськов, Е.К. Полизин, хитозан и мелакрил - стимуляторы развития пчел/ Е.К. Еськов, Г.С. Ярошевич // Пчеловодство. - 2006.- № 5. С.16-15.

40. Жанзаков, А.Е. Лечение ран у животных с использованием хитозана // Фундаментальные исследования. -2007. -№ 6. -С. 11-14.

41. Журавлева, Н.В. Хитинолептические ферменты: источники, характеристика и применение в биотехнологии/ Н.В. Журавлева, П.А. Лукьянов // Вестник ДБО РАН. - 2004. - №3. - С.76-86.

42. Злобин, С.В. Оптимизация использования пробиотиков Субтилис в промышленном свиноводстве // Веткорм. 2008. №5. - С. 26-27.

43. Иванов, Д.В. Иммунореактивность у телочек при вакцинации против лептоспироза на фоне подкожного введения сукцината хитозана / Д.В.

96

Иванов, Е.В. Крапивина, Ю.Н. Федоров, А.И. Албулов. // Сельскохозяйственная биология, -2009. № 2. - С. 104 - 110.

44. Иванов, П.В. Патогенетическое обоснование и внедрение в практику новых регенеративных методов лечения генерализованного пародонтита : автореферата диссертации доктора медицинских наук. Саратов, -2013. - С. 51.

45. Ирза, А.В. Адъювантное действие хитозана при интраназальной вакцинации цыплят против ньюкаслской болезни / А.В. Ирза, М.А. Волкова. И.Р. Рунина, И.А. Чвала, С.В. Фролов [и др.] // Веткорм. -2010. -№ 6. - С. 40-42.

46. Исаенко, Е.Ю. Адъюванты в современной вакцинологии / Е.Ю. Исаенко, Е.М. Бабич, И.В. Елисеева [и др.] // Анналы Мечниковского института. 2013. - №4. - С. 5-21.

47. Кайминын, И.Ф. Физико-химические свойства хитозана и возможности его практического использования / И.Ф. Кайминын // Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана: матер. 5-й Международной конференции. - М.: ВНИРО, -1999. - С. 230-231.

48. Калинкевич, О.В. Экспериментальное обоснование применения геля на основе ацетата хитозана для лечения ожогов / О.В. Калинкевич [и др.] // Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова. -2012. -№ 4. -С. 35-46.

49. Караваев, Ю.Д. Эффективность использования комплексной системы профилактики и борьбы с некробактериозом крупного рогатого скота и северных оленей / Ю.Д. Караваев, И.Н. Семенова, М.И. Гулюкин [и др.] // Ж. «Веткорм». - 2006. - № 6. - С. 6-8.

50. Каширская, Н. Ю. Значение пробиотиков и пребиотиков в регуляции кишечной микрофлоры / Н. Ю. Каширская // Русский медицинский журнал. - 2000. - №13-14. - С. 6-9.

51. Ким, В.В. Зарубежный опыт использования пребиотиков [Текст] / В.В. Ким, Д.В. Харитонов, Э.Г. Шубакова. // Молочная промышленность. -2001. - № 2. - С. 31-32.

52. Киреев, М.Н. Современные биотехнологические подходы для создания профилактических препаратов / М.Н. Киреев, О.А. Волох, А.К. Никифоров. // Общие угрозы - совместные действия. Ответ государств БРИКС на вызовы опасных инфекционных болейней: материалы международной конференциии. - М. 2015. -С. 193-195.

53. Клюев, М.А. средства: справочник. / М.А. Клюев // . Лекарственные- М.: Локус, -2004. - С. 765.

54. Козлов, В.Г. Адъюванты в современной медицине и ветеринарии [Текст] : (обзор) / В. Г. Козлов [и др.] // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2014. - № 1. - С. 91-101.

55. Козырева, Е.В. Особенности физико- химических свойств растворов хитозана/ Е.В. Козырева, А.Ю. Абрамов, А.Б. Шиповская. // Известия Саратовского 6 университета. Новая серия. Серия: Химия. Биология. Экология. - 2011. - Т. 11. № 2. -С. 25-31.

56. Константинов, В.А. Новый отечественный пробиотик проваген /В.А. Константинов, Р.С. Краснокутский // Свиноводство.-2009.-№ 5.-С. 30-31.

57. Красавцев, В.Е. Задачи рыбной отрасли в интенсификации исследований хитина и хитозана / В.Е. Красавцев, Л. А. Заславская, И.В. Яковлева, В.П. Варламов. // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: матер. 11-й Междунар. конф. РосХит - Мурманск: 2012. - С. 20-25.

58. Красочко, П.А. Нормализация микробиоценоза и иммуностимулирующие свойства комплексного препрата на основе хитозана, пробиотиков и фитолектинов « Метафитохит» / П.А. Красочко., О.Л. Канделинская., И.А. Красочко [и др.] // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: матер. 12 -й Междунар. конф. РосХит -Пермь: 2014. - С. 195199.

59. Красочко, П.А. Сорбционная способность различных модификаций хитозана в отношении регламентируемых микотоксинов / П.А. Красочко., В.Н. Дубинич., М.В. Дубинич [и др.] // Известия Уфимского научного центра РАН. - 2016. № 3(1). -С. 124-127.

60. Крыжановская, Е.В. Адсорбционные и адъювантные свойства хитозана / Е.В. Крыжановская, А.И. Албулов, А.Я. Самуйленко, С.М. Шинкарев, Л.С. Люлькова, М.А. Фролова [и др.] // Веткорм. -2008. -№4. - С. 34-35.

61. Крыжановская, Е.В. Биологические активные вещества в ветеринарии: афтореф. дис. докт. биол. наук. Щёлково, - 2008. С. 52.

62. Кузнецов П.А. Изучение иммуномодулирующих свойств сукцината хитозана. / П.А. Кузнецов, А.И. Албулов, В.И. Клюкина [и др.] // Ветеринария и кормление, 2007, № 5 С. 12-13.

63. Кузнецов Д.П. Исследование адъювантных свойств сукцината хитозана / Д.П. Кузнецов, С.М. Шинкарев, А.И. Албулов [и др.] // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: матер. 8-й Междунар. Конференции. - Казань, 2006. - С. 217-219.

64. Кузовников, В.В. Использование изделий медицинского назначения на основе хитозана в офтальмологии / В.В. Кузовников, В.В.Гарькавенко, Д.Г. Чанчиков и [др.] // Материалы межд. конф. Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана.- Ставрополь, -2008.- С. 181-183.

65. Куликов, С.Н. Перспективы применения хитина и хитозана в лечении различных форм аллергических заболеваний/ С.Н. Куликов, Ю. А. Тюрин, Р. С. Фассахов, В. П. Варламов. // Практическая медицина. - 2009. - №3. - С. 92-97.

66. Куликов, С.Н. Антибактериальная активность хитозана в отношении энтеробактерий и стафилококков, выделенных у пациентов с дисбактериозом кишечника/ С.Н. Куликов, Ю.А. Тюрин, Р.З. Хайруллин. // Казанский медицинский журнал. -2010. -Т. 91. № 5. -С. 656-660.

67. Куликов, С.Н. Исследование бактерицидных свойств хитозанов / С.Н. Куликов // Рыбпром. - 2010. - № 2. - С. 36-41.

68. Куприна, Е.Э. Научные основы технологии переработки белок- и хитинсодержащего сырья электрохимическим способом: Автореферат диссертации доктора технических наук. - С.-Петербург, -2007. - С. 40

69. Курзюкова, Т.А. Эффективность производства молока с применением пробиотика «ЛЕВИСЕЛЛ SC» / Т.А. Курзюкова, Н.А. Крамаренко // Вестник КрасГАУ. - 2012. - № 10. - С. 133-136.

70. Лазаренко, В.И. Опыт применения изделий медицинского назначения Бол-хит и Коллахит-бол» в офтальмологии / В.И. Лазаренко, И.Н. Большаков, С.С. Ильенков [и др.] // Российский офтальмологический журнал.- 2009.- Т.2.- №4.- С. 21-24.

71. Лодыгин, А. Д. Научно-техническое обоснование управляемого синтеза галактоолигосахаридов из лактозы молочного сырья/ А. Д. Лодыгин, А.Б. Родная, И.А. Евдокимов, С.А. Рябцева, А.Г. Храмцов. //Материалы XXXV11 научно-технической конференции СевКавГТУ за 2007. -Т.1.-Ставрополь: СевКавГТУ, - 2008.- С.100.

72. Лябин, М.П. Совершенствование технологии получения хитозана / М.П. Лябин, П.С. Семенов // Вестник Волгоградского государственного университета. Серия 11: Естественные науки. - 2011. - № 2. - С. 17-21.

73. Недосеков, В.В. и др. // Матер. VI междунар. конф. М.: ВНИРО, -2001. -С. 366-367.

74. Нежута, А. А. Теоретические и практические основы технологии сублимационного высушивания биопрепаратов / А.А. Нежута, Э.Ф. Токарик, А.Я. Самуйленко // Курск. Изд-во Курской гос. сельскохозяйственной академии. (2002). -С. 240.

75. Нежута, А.А. Выбор режимов при производстве сухих биопрепаратов

методом сублимационной сушки / А.А. Нежута, Е.С. Сербис // Материалы

Межд. научно-практ. конф. «Научные основы производства ветеринарных

биологических препаратов». Щелково, (2005). С. 415 - 420.

100

76. Некрасов, Р.В. Использование пробиотиков нового поколения в кормлении свиней /Р.В. Некрасов, М.П. Кириллов, Н.А. Ушакова // Проблемы биологии продуктивных животных, -2010.-№ 3.-С. 64-75.

77.Немцев, C.B. Расширение области применения пищевого хитозана / С.В. Немцев, Е.А. Ежова, В.М. Быкова // Пищевая и морская биотехнология: проблемы и перспективы: Материалы научно-практической конференции.- Калининград, 2006. - С. 84-85.

78. Немцев, С.В. Комплексная технология хитина и хитозана из панциря ракообразных / С.В. Немцев. - М.: ВНИРО, -2006. - C.134.

79. Никитенко, П. Хитозан - полимер будущего/ П. Никитенко, Л. Хрустицкая/ // Наука и инновация. -2013. -№ 9 (127). -С. 14-17.

80. Нудьга, Л.А. Производные хитина и хитозана и их свойства // Хитин и хитозан. Получение, свойства, применение. — М., 2002. — С. 141-142.

81. Максимов, И.В. Биологическая активность хитина и сферы его применения // Известия Уфимского научного центра РАН, № 2. - 2013. - С. 38-61.

82. Маркушин, С.Г. Сравнительное изучение адъювантых свойств различных свойств различных форм хитозана при мукозальной вакцинации живой и инактивированной гриппозными вакцинами / С.Г. Маркушин, А.Д. Переверзев, И.Б. Коптяева, Г.Г. Кривцов, А.С. Сухно. // Эпидемиология и вакцинопрофилактика 2010, № 5, - С. 82-85.

83.Медуницин, Н.В. Вакцинология. / Н.В. Медуницин // - М.: Триада -Х, -2004. - C.448.

84. Медуницын, Н.В. Вакцинология. - М., 2010. -C. 507.

85. Мезенова, О.Я. Совершенствование технологии хитина/хитозана из Балтийского гаммаруса / О.Я. Мезенова, Е.В. Григорьева. // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: матер. 8-й Междунар. Конференции. - Казань, 2006. - С 40-42.

86. Мукатова, М.Д. Качественные характеристики хитина и хитозана,

полученных из панцирьсодержащих отходов речных раков / М.Д.

101

Мукатова, Н. А. Киричко, Е. Н. Романенкова. // Вестник Мурманского государственного технического университета. -2015.-Т.18.№4.-С. 641-646.

87. Островский, Н.В. Оценка эффективности применения инновационных раневых биопо-крытий на основе хитозана при лечении ожоговых ран у крыс / Н.В. Островский [и др.] // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Матер. Одиннадцатой Международ. конф. Мурманск, -2012. -С. 386-391.

88. Павленко, И.В. Разработка технологии производства технологического препарата Пролизер на основе штамма Echerichia coli VL-613. Часть 2. Оптимизация условий сохранения жизнеспособности штамма Echerichia coli VL-613 / И.В. Павленко., А.Я. Самуйленко., В.И. Еремец [и др.]// Вестник Казанского технологического университета - 2013, № 9, - С. 171176.

89. Панин, А.Н. Пробиотики - неотъемлемый компонент рационального кормления животных / А.Н. Панин, Н.И. Малик . // Ветеринария. - 2006. -№ 7. - С. 19-22.

90. Патент RU № 2450051, 18.08.2010 г. Способы получения симбиотического препарата на основе Echerichia coli VL-613. /А.Я.Самуйленко, Л.К. Эрнст, Е.Э. Школьников, А.А. Раевский, Л.В. Анисимова, Л. А. Коротеева, И.В. Павленко, И.И. Чеботарев, С. А. Гринь, Н.А. Бондарева . / Опубликован 10. 05.2012. БИ № 13, ч.2 - С. 318.

91. Патент РФ № 2258102 МПК D 01 F 4/00, C 08 B 9/00 Способ получения хитозанесодержащего волокна/ Ю.К. Кириленко, В.Г. Фролов, Р.А. Нагапетян, Т.В. Коломиец, А.М. Байков, И.Н. Бутузов Заявка: 2004116363/04; Заявлено 01.06.2004. Опубликовано 10.08.2005.

92. Патент РФ № 2358553 МПК A 23 L 1/33 Способ получения хитозана из хитина / А.И. Сливкин, В.Л. Лапенко, П.И. Кулинцов, А.А. Болгов// Заявка: 2007131895/13; Заявлено 22.08.2007. Опубликовано 20.06.2009.

93. Переверзев, А. Д. Факторы влияющие на адьювантные свойства

производных хитозана, при парентеральном введении инактивированных

гриппозных вакцин / А.Д. Переверзев, С.М. Шинкарев, С.Г. Маркушин [и др.] // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. - 2012. № 4. - С. 80-86.

94. Петухов, В. А. Нарушение функций печени и дисбиоз при липидном дистресс-синдроме Савельева и их коррекция пробиотиком Хилак-форте // РМЖ.-2002.- Т. 10, № 4.-С. 77-89.

95. Провоторова, О.В. Расчет технологических линий производства пробиотических и симбиотических препаратов / О.В. Провоторова., И.В. Павленко, Л.А. Неминущая [и др.] Ветеринарный врач. Казань. № 1. С. 28 - 30 (2013).

96. Самуйленко, А.Я., А.А. Нежута, В.И. Еремец. К вопросу о стандартизации разработки технологии сублимационного высушивания биопрепаратов / А.Я. Самуйленко, А.А. Нежута, В.И. Еремец [и др.]// Материалы Межд. научно-практ. конф. «Актуальные проблемы инфекционной патологииживотных». Владимир. -2003.-С. 379 - 383.

97. Рябцева, С.А. Технология лактулозы. - М.: ДеЛи принт, -2003.- C. 232.

98. Самуйленко, А.Я. Разработка экологических симбиотиков в биологической промышленности для АПК / А.Я. Самуйленко., В.И. Еремец, И.В. Павленко, И.П. Салеева // Экология и промышленность России, 9, С. 38 - 40 (2013).

99. Симонова, Г.И. Медико-биологические эффекты аминополисахаридов животного происхождения - хитозанов: монография / Г.И. Симонова, А.К. Кунцевич. Новосибирск, 2007. - С. 38-40.

100. Скрябин, Г.А. Хитин и хитозан. Получение.свойства, применение / Под. Ред. К.Г. Скрябина, Г.А. Вихоревой, В.П. Варламова // - М. :Наука, 2002. - С.368.

101. Сливкин, Д.А. Хитозан для фармации и медицины / Д.А. Сливкин [и др.] // Вестник Воронежского государственного университета. Серия: Химия. Биология. Фармация, -2011. № 2. С. 214-232.

102. Староверов, С.А. Адъювантные свойства воднодисперсных растворов

неионогенных поверхностно активных веществ и витаминов / С.А.

103

Староверов, С.В. Семенов, В.А. Сидоркин. // Ветеринария. - 2003. - №10. -С. 30-31.

103. Тарнавский, Д.К. Использование микробиовита «Енисей» в кормлении телят / Д.К. Тарнавский, Т.А. Полева // Вестник КрасГАУ. - 2010. - № 5.

- С. 77-80.

104. Хантимирова, Л.М. Адьювантный эффект охарактеризованных препаратов на основе хитозана в составе инактивированной вакцины против гриппа человека / Л.М. Хантимирова, О.С. Каширина, М.И. Черникова, Ю.М. Васильев // Известия Уфимского научного центра РАН.

- 2016. -№ 3(1). -С. 170-172.

105. Хамадиева, А.Р. Влияние препарата на основе хитозана на пораженность пчелиных семей варроатозом / А.Р. Хамадиева, Н.Г. Кутлин, Б.К. Назмиев. // Ученые записки Казанского Государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. - 2012. - Т 209. С. 325-330.

106. Хасина, Э.И. Энергостабилизирующий эффект хитозана в условиях интенсивной физической нагрузки / Э.М. Хасина, В.Н. Давыдова, И.М. Ермак. // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: матер. 12-й Междунар. Конференции. - Пермь, -2014. - С. 335-340.

107. Херольд, Э. Новый курс пчеловодства. Основы теоретических и практических знаний - М.: АСТ: Астрель, -2007. - С. 368.

108. Утеушев, Р.Р. Рациональная технология переработки панцирьсодержащих отходов речных раков / Р.Р. Утеушев, М.Д. Мукатова. // Сб. докладов 2-й Всеросс. науч.-техн. конф.-выставки "Высокоэффективные пищевые технологии, методы и средства для их реализации". М. -2004. -Ч. I. С. 66-71.

109. Учасов, Д.С. Иммуно - биохимический статус и продуктивность поросят - сосунов и отъёмышей при использовании пробиотика «Проваген» / Д.С. Учасов [и др.] // Вестник Орел ГАУ. 2011. №6 (33). С.49-51.

110. Феофилова, Е.П. Биологические функции и практическое использование хитина / Е.П. Феофилова // Прикладная биохимия и микробиология, -1984. Т. 20. -№2. -С. 147-160.

111. Фрешни, Р.Я. Культура животных клеток: практическое руководство / Р.Я. Фрешни; пер. 5-го англ. изд. М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2010. -С. 691.

112. Фролова, М.А. Изучение влияния хитозана в составе рациона кормления на продуктивность цыплят-бройлеров. / М.А. Фролова, А.И. Албулов, А.Я. Самуйлекно, О.В. Буханцев, П.А. Красочко. // Национальный научный центр «Институт экспериментальной и клинической ветеринарной медецины» Харьков, -2011. - С. 414-415.

113. Фролова, М.А. Практические аспекты применения хитозана и его производных в различных областях народного хозяйства / М.А. Фролова,

A.И. Албулов, В.И. Еремец [и др.] // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана. Казань, - 2006. -С. 68-70.

114. Чахава, О.В. Изучение механизма действия бактериальных биологических препаратов с использованием модели безмикробных крыс / О.В. Чехава, Е.Н. Горская // Бюллетень В ИОВ, «Теоретические и практические основы гнотобиологии».М., 1984.-Был. 53.-С. 7-10.

115. Червонова, И.В. Эффективность применения пробиотиков «Субтилис» и «Проваген» при выращивании цыплят-бройлеров / И.В. Червонова, Н.В. Абрамкова // Главный зоотехник. - 2014. - № 7. - С. 3-6.

116. Черникова, М.И. Сравнительное изучение иммуноадъювантов при добавлении к инактивированной вакцине против гриппа / М.И. Черникова, О.С. Каширина, Ю.М. Васильев. // Мат. конф. молодых ученых Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, -2013. -С. 71-78.

117. Чернова, В.В. Влияние неспецифических ферментов на хитозан /

B.В.Чернова, Е.И. Кулиш, В.П. Володина, С.В. Колесов. // Новые

достижения в исследовании хитина и хитозана: Материалы Девятой

105

международной конференции, Ставрополь.- М.: Изд-во ВНИРО, -2008 . -С. 234-236.

118. Чирков, С.Н. Противовирусные свойства хитозана / С.Н. Чирков // В кн.: Хитин и хитозан. Под. ред. Скрябина К.Г., Вихоревой Г. А., Варламова В.П. - М.: Наука, -2002. - С. 327 - 338.

119. Эрнст, Л.К. Лизинсинтезирующий препарат Пролизер при выращивании бройлеров / Л.К.Эрнст, А.Я. Самуйленко, Е.Э. Школьников [и др.] // Птицеводство, № 4, - С. 35-36 (2011).

120. Adams, R. (1983) Methods of cell culture for biochemists, p. 263.

121. Aguilar J. C. Vaccine adjuvants revisited [Тех^ / J. C. Aguilar, E. G. Rodriguez // Vaccine. - 2007. - № 25. - Р. 3752-3762.

122. Antu K Dey. Novel adjuvants and delivery systems for enhancing immune responses induced by immunogens [Тех^ / Antu K Dey, Indresh K. Srivastava // Expert Review of Vaccines. - 2011. - Vol. 10, № 2. - Р. 227-251.

123. Albulov, A.I. (2004) Different types of chitosan for veterinary science and animal husbandry. Agrarian Russia, no 5. pp. 8-11.

124. Al Garib, S.O. Review of Newcastle disease virus with particular references to immunity and vaccination / S.O. Al Garib, A.L. Gielkens, E. Druys, G. Koch // World's Poultry Science Journal. - 2003. - Vol. 59. - P. 185 - 200.

125. Allison, A. C. Immunological adjuvants: desirable properties and side-effects [Тех^ / A. C. Allison, N. E. Byars // Mol. Immunol. - 1991. - № 28. -Р. 279-284.

126. Allison, C. Rice-ficht good or bad bruccella vaccine // Its All in the Delivery Brucellosis Int. Research Con. 2011. - P. 15.

127. Bacon, A. Carbohydrate biopolymers enhance antibody responses to mucosally delivered vaccine antigens / A. Bacon, J. Makin, P.J. Sizer et al. // infect. Immun.- 2000. -V.68. -P.5764 - 5770.

128. Bal, S.M. Efficient induction of immune responses through intradermal vaccination with N-trimethyl chitosan containing antigen formulations./ S.M.

Bal, B. Slutter, E. van Riet, et al. // J Control Release, -2010. -142(3). -P.374-383.

129. Baçaran, E. Chitosan nanoparticles for ocular delivery of cyclosporine A / E. Baçaran, E. Yenilmez, S. Berkman M., G. Buyukkoroglu, Y. Yazan //J.Microencapsul. - 2014. - Vol. 31, № 1. - P. 49-57.

130. Bautista, E.M. Comparison of porcine alveolar macrophages and CL 2621 for the detection of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus and anti-PRRS antibody / E.M. Bautista, S.M. Goyal, I.J. Yoon [et al.] // J. Vet. Diagn. Invest. — 1993. — Vol. 5, № 2. — P. 163-165.

131. Banerjee, R. Biodegradable polymer based microimplant for ocular drug delivery: патент США №20140105956 A1 / R. Banerjee.,

S. Manna.,J. Augsburger. - 2014. - Р. 19.

132. Berlin, B.S. // Immunol. -1990. -V. 85. -№1. -P. 81.

133. Borges, O. Alginate coated chitosan nanoparticles are an effective subcutaneous adjuvant for hepatitis B surface antigen / O. Borges, M. Silva, A. de Sousa et al. // Int.immunopharmacol.2008. V.8.P.1773 - 1780.

134. Boonyo, W. Chitosan and trimethyl chitosan chloride (TMC) as adjuvants for inducing immune responses to ovalbumin in mice following nasal administration / W. Boonyo, H.E. Junginger, N. Waranuch [et al.] // Official Journal Controlled Release Society. - 2007. - Vol. 121, № 3. - Р.168 - 175.

135. Byars, N. E. Immunologic adjuvants: general properties, advantages, and limitations [Text] / N. E. Byars, A. C. Allison. // Laboratory Methods in Immunology. - 1990. - Р. 39-51.

136. Chang, H. Comparison of adjuvant efficacy of chitosan and aluminum hydroxide for intraperitoneally administered inactivated influenza H5N1 vaccine./ H. Chang., X. Li., Y. Teng. et al. // DNA Cell Biol. -2010. -№29 (9)-P. 563-568.

137. Charernsriwilaiwat , N. In vitro antioxidant activity of chitosan aqueous solution: effect of salt form / N. Charernsriwilaiwat, P. Opanasopit, T.

Rojanarata, T. Ngawhirunpat // Trop. J. Pharm. Res. - 2012. - Vol. 11, № 2. -P. 235-242.

138. Cho, Y.W. Water-soluble chitin as a wound healing accelerator / Y.W. Cho, Y.N. Cho, S.H. Chung [et al.] // Biomaterials. — 1999. — Vol. 20, № 22. — P.2139-2145.

139. Chung, Y.C. Effect of abiotic factors on the antibacterial activity of chitosan against waterborne pathogens / Y.C. Chung, H.L. Wang, Y.M. Chem, S.L. Li // Bioresour. Technol. - 2003. - Vol. 88, №3. - P. 179-184.

140. Contorno, M. Pat. 2432173 Russian Federation, MPK A61K39/095. Vaccines containing aluminum adjuvants and histidine / Contorno M., M. Maffei : the applicant and patentee Chiron SRL. - № 2007139924/15; appl. 29.10.2007, publ. 10.05.2009.

141. Derek T O'Hagan MF59 is a safe and potent vaccine adjuvant that enhances protection against influenza virus infection [Text] / Derek T O'Hagan // Expert Review of Vaccines, - 2007. - Vol. 6, № 5. - P. 699 - 710.

142. De la Fuente, M. Novel hyaluronic acid-chitosan nanoparticles for ocular gene therapy / M. De la Fuente, B. Seijo, M. J. Alonso // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. - 2008. - Vol. 49, №5. - P. 2016-2024.

143. Elijah, I. The Effect of Probiotic and Prebiotic Feed Supplementation on Chicken. Health and Gut Microflora: A Review / I. Elijah, Ohimain and Ruth T.S. Ofongo // International Journal of Animal and Veterinary Advances. -2012. - № 4 (2). - P. 135-143.

144. Felt, O. Chitosan: a unique polysaccharide for drug delivery / O. Felt, P. Buri, R. Gurny // Drug Dev. Ind. Pharm. - 1998. - V. 24. - P. 979-993.

145. Fred, Zepp. Principles of vaccine design— Lessons from nature [Text] / Fred Zepp // Vaccine. - 2010. - Vol. 28, № 3. - P. 14 - 24.

146. Freund, J. The mode of action of immunologic adjuvants. // Adv. Tuberc. Res. - 1956. - Vol. 7. - P. 130-148.

147. Frolova, M.A. The effectiveness of chitosan application in combination with

probiotics, «Mutsinol» and «Provagen» for fattening calves and piglets / M.A.

108

Frolova, A.I. Albulov, O.V. Buhantsev [ et al ]// Veterinary medicine. - 2012. -Vol. -96. - P. 333-334.

148. Ghendon, Y. Chitosan as an adjuvant for poliovaccine. / Y. Ghendon, S. Markushin, I. Akopova. et al. // J. Med. Virol. -2011. -№83 (5)-P.847-852.

149. Ghendon, Y. Evaluation of properties of chitosan as an adjuvant for inactivated influenza vaccines administered parenterally / Y. Ghendon, S. Markushin, Y. Vasiliev, T. Koptiaeva.et al. // Journal of Medical Virology, -2009. -V.81- P. 494 - 506.

150. Gibson, G.R. Roberfroid M.B. Dietary modulation of the human colonic microbiota: introducing the concept of prebiotics // J. Nutr. -1995. -№125 (6) -P.1401-1412.

151. Hagenaars, N. Relationship between structure and adjuvanticity of N-trimethyl chitosan (TMC) structural variants in a nasal influenza vaccine / N. Hagenaars , R.J. Verheul,I. Mooren et al. // J. Control Release. -2009. -V. 140. P. 126 -133.

152. Hefferman, M.J. In vivo efficacy of chitosan / IL -12 adjuvant system for proteinbased vaccines / M.J. Hefferman, D.A. Zaharoff, J.K. Fallon, J. Schlon, J.W. Greiner // Biomaterials - 2011. -Vol. 32. -P. 926 -932.

153. Herbert, W. J. Methods for the preparation of water-in-oil, and multiple, emulsions for use as antigen adjuvants; and notes on their use in immunization procedures//In: Handbook of Experimental Immunology/Ed. D. M. Weir. -1967. -P.1207-1217.

154. Holmgren, J. Mucosal immunization and adjuvants : a brief overview of recent advances and challenges / J. Holmgren, C. Czerkinsky, K. Eriksson, A. Mharandi // Vaccine. - 2003. -Vol. 21. -P. 89 -95.

155. Huang X., Wang Y., Cai J.P., Ma X.Y., Li Y., Cheng J.W., Wei R.L. Sustained release of 5-fluorouracil from chitosan nanoparticles surface modified intra ocular lens to prevent posterior capsule opacification: an in vitro and in vivo study // J. Ocul. Pharmacol. Ther. - 2013. - Vol. 29, №2. - P. 208215.

156. Jen-You Wang and Yun-Peng Chao. Immobilization of Cells with Surface-Displayed Chitin-Binding Domain // Appl. Envir. Microbiol. - 2006. - Vol. 72, - P. 927-931.

157. Jeong, H.W. Chitooligosacharide induces mitochondrial biogenesis and increases exercise endurance through the activation of Sirt 1 and AMPK in rats. / H.W. Jeong, S.Y. Cho, S. Kim et al. // PLoS One, -2012. - Vol. 7. № 7. e 40073.

158. Kabiri, M. Preparration and Characterization of absorbable hemostat crosslinked gelatin sponges for surgical applications / M. Kabiri, S.H. Emami, M. Rafi nina, M. Tahriri // Current Applied Physics.- 2011. -Vol. 11, № 3. -P. 457-461.

159. Kang, M.L. Application of chitosan microspheres for nasal delivery of vaccines / M.L. Kang, C.S. Cho, H.S. Yoo // Biotechnol. Adv. -2009. -V. 27. -P. 857 - 865.

160. Kaminski, W.E. Interactions of metal ions sorbed on chitosan beads/ W.E. Kaminski, K.J. Tomczak // Desalination. -2008. -Vol. 218. Is. 1-3. -P. 281286.

161. Kittur F.S., Vishu Kumar A.B., Varadaraj M.C., Tharanathan R.N. // Carbohydr. Res. 2005. V. 340. < 6. P. 1239-1245.

162. Kirilenko, Y.K. Chitosan oligomer and acid salt in compensation of deficiency of some micronutrients / Y.K. Kirilenko, Z.G. Dushkova, E.I. Cherkasova, [et al] // Advances in chitin science. - 2007. - Vol. 10. - P. 487491.

163. Kensil, C.R. Saponins as vaccine adjuvants / C.R. Kensil // Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst.-1996 - V. 13. - P. 1 -55.

164. Khatri, K. Plasmid DNA loaded chitosan nanoparticles for nasal mucosal immunization against hepatitis / B K. Khatri, A.K. Goyal, P.N. Gupta // int.J.Pharm.-2008. -V. 354. -P. 235 - 241.

165. Kono, K. Vaccination with multiple peptides derived from novel cancer-

testis antigens can induce specific T-cell responses and clinical responses in

110

advanced esophageal cancer/ K. Kono, Y. Mizukami, Y. Daigo et al. // Cancer Sci. -2009. -Vol. 100, № 8. -P. 1502-1509.

166. Kumar, B.A. Low molecular weight chitosan - preparation with the aid of pepsin? Characterization, and its bactericidal activity / B.A. Kumar, M.C. Varadaraj, R.N. Tharanathan // Biomacromolecules. - 2007. - Vol.8, №2. - P. 566-572.

167. Kvitash, V. I. Principles of selection dlyapromyshlennogo receiving adjuvant therapeutic and diagnostic sera [Text] / V. I. Kvitash, N. I. Zacepin // Theoretical and practical issues of vaccine - whey case. - 1970.-Vol. 4. - P. 5 -7.

168. Kwak, L. W. Modern vaccine adjuvants [Text] / L.W. Kwak [et al.] // Canc. Chemother. Biother. — 1996. — P. 749-763.

169. http: // www. oligopharm. org/

170. http://www.provet.ru/ru/aviculture/item/29-feed-additives/99-page.

171. Ivanushko, L.A. Antibacterial and antitoxic properties of chitosan and its derivatives / L.A. Ivanushko, T.F. Solovyova, T.S. Zaporozhets, L.M. Somova, V.I. Gorbach // Pacific Medical Journal. - 2009. - №3. - P. 82-85.

172. Illum, L. Chitosan as a novel nasal delivery system for vaccine. /L. Illum,I. Jabbal - Gill, M. Hinchcliffe, A.N. Fisher, and S.S. Davis.// Adv. Drug Delive. 2001. -Rev. 51:81 - P. 96.

173. Illum, L. Nanoparticulate systems for nasal delivery of drugs: a real improvement over simple systems // J. Pharm. -2007.-V.96. -P. 473 - 483.

174. Illum, L. Nasal drug delivery - possibilities, problems and solutions // J. Control Release. -2003. -V. 87. -P. 187 - 198.

175. Lemke, C.D. Chitosan is a surprising negative modulator of cytotoxic CD8+ T cell responses elicited by adenovirus cancer vaccines / C.D. Lemke, J.B. Graham, S.M. Geary, et al.// Mol Pharm 2011;8(5):1652-61.

176. Li, N. Low molecular weight chitosan-coated liposomes for ocular drug

delivery: in vitro and in vivo studies/ N. Li, C. Y. Zhuang, M. Wang, C. G. Sui,

W. S. Pan // Drug Deliv. - 2012. -Vol. 19, №1. - P. 28-35.

111

177. Li, X. Chitin, chitosan, and glycated chitosan regulate immune responses: the novel adjuvants for cancer vaccine/ X. Li, M. Min, N. Du, Y. Gu, T. Hode, M. Naylor, D. Chen, R.E. Nordquist, W.R. Chen // Clin. Dev. Immunol. -2013. - Vol. 2013, №2013 - P. 1-6.

178. Lieder, R. Endotoxins affect bioactivity of chitosan derivatives in cultures of bone marrow - derived human mesenchymal stem cells. / R. Lieder,V.S. Gaware, F. Thormodsson. // Acta Biomater. -2013. - № 9(1) -P. 4771 - 4778.

179. Liu, X.F. Antibacterial action of chitosan and carboxymethylated chitosan / X.F. Liu, Y.L. Guan, D.Z. Yang, K.D. Yao // J. Appl. Polym. Sci. - 2001. -Vol. 79. - P. 1324-1335.

180. No, H.K. Preparation and Characterization of chitin and chitosan a review / H.K. No, S.P. Meyers // J. Aquatic Food Product Technology. - 1995. - Vol. 4, №2. - P. 27-52.

181. MacKay, R.G. Handbook of chitosan research and applications: Biotechnology in agriculture industry and medicine. / R.G. MacKay., J.M. Tait // London: Nova Science Publishers, -2011. - P. 492.

182. Mangala, Rao. Highly effective generic adjuvant systems for orphan or poverty-related vaccines [Text] / Mangala Rao, Kristina K. Peachman, Qin Li [et al.] // Vaccine. - 2011. - Vol. 29, № 5. - P.873-877.

183. Mattioli-Belmonte, M. Chitin and chitosan in wound healing and other biomedical applications. / M. Mattioli-Belmonte, B. Muzzarelli, RAA Muzzarelli // // Carbohydr Europe -1997. -№ 19(30). -P. 6.

184. Medunitsyn, N. V. Basics of immunization and immunotherapy of infectious diseases [Text] : [textbook tutorial] / N. V. Medunitsyn, V. I. Pokrovsky. - M: GEOTAR-Media, -2005. - P. 512.

185. Mukatova, M.D. Biologically active substances of fresh-water crustacean: methods of extraction and prospects of use / M. D. Mukatova, A. V. Privezentsev, T. V. Boeva, A. M. Yunis // Astrakhan State Technical Bulletin University. Series: Fisheries. -2009. -№ 2. -P. 109-113.

186. Muzzarelli, R.A.A. Chitin / R.A.A. Muzzarelli. N.-Y.: Pergamon Press, 1977. - P. 309.

187. Muzzarelli, R .A.A. Chitin chemistry, upgrading a renewable resource. / R AA Muzzarelli, C. Muzzarelli, M. Terbojevich // Carbohydr Europe - 1997. -19(10) - P. 7.

188. Muzzarelli, R.A.A. Citin per os. Oxford. Pergamon press.

189. Myoung, H.S. Binding mechanism of low molecular weight chitosan to bacterial cells / H.S. Myoung, M.H. Choi, D.H. Jo, Y.H. Park // Advances in chitin science: proceedings of the 5th Asia Pacific Chitin and chitosan Symposium & Exhibition. - Bangkok, Thailand, 2002. - P. 242-245.

190. Nathalie Garcon Vaccine adjuvants [Text] / Nathalie Garcon, Geert Leroux-Roels, Wen-Fang Cheng // Perspectives in Vaccinology. - 2011. - Vol. 1, № 1. - P. 89 - 113.

191. Nikolaeva, T. N. Immunoprotektivnye properties modulators of bacterial origin [Electronic resource] / T. N. Nikolaeva , V. V. Zorina. -Access mode : http://vetanimals.ru/flash/vet/ satc 14.htm.

192. Odier, A.. Memoire sur la Composition des Parties Cornees des Insect. Mem. Soc. Histoire Nat. 1, 1823. -P. 29-42.

193. Okawa Y., Kobayashi M., Comparative study of protective effects of chitin, chitosan, and N-acetyl chitohexaose against Pseudomonas aeruginosa and Listeria monocytogenes infections in mice Biol Pharm Bull. 2003 Jun; 26(6). -P. 902-904.

194. Oliveira, G. A. Safety and enhanced immunogenicity of a hepatitis B core particle Plasmodium falciparum malaria vaccine formulated in adjuvant Montanide ISA 720 in a phase I trial/ G. A. Oliveira, K. Wetzel, J. M. Calvo-Calle et al. // Infect. and. Immun. -2005. -Vol. 73, № 6. -P. 3587-3597.

195. Pantueleone D. and Yalpani M. // An Carbohydrates and carbohedratepolymers, Analisis, Biotechnology, Modification. Antiviral, Biomedical and other application. ATL Press, - 1993, - P. 44-51.

196. Peluso, G. Chitosan mediated stimulation of macrophage function / G. Peluso, O. Petillo, M. Ranieri et al. // Biomaterials. -1994. -V. 15. -P. 1215 -1220.

197. Porporatto, C. Local and systemic activity of the poplysaccharide chitosan at lymphoid tissues after oral administration / C. Porporatto C, I.D. Bianco, S.G. Correa // J.Leurocyte Biology. -2005. -V. 78. -P. 715 - 723.

198. Prabu K., Natarajan E. Antihyperglycemic effect of chitosan of podophthalmus vigil in streptozotocin induced diabetic rats // Int. J. Pharm. Sci. Res. - 2013. - Vol. 4, №1. - P. 352-359.

199. Prajapati Bhupendra, G. Poly Electrolyte pf Chitosan Alginate for Local Drug Delivery / G. Prajapati Bhupendra, K. Sawant Krutika // Int. J. Chem. Trch. Research. -2009. -Vol. 1, -Issue 3. -P. 643-648.

200. Prego, C. Chitosan based nanoparticles for improving immunization against hepatitis infection / C. Prego,P. Paolicelly,B. Diaz et al. // Vaccine. -2010. -V. 28. -P. 2607 - 2614.

201. Rabea, E.I. Chitosan as antimicrobial agent: application and mode of action / E.I. Rabea, M.E.T. Badawy, C.V. Stevens, [et al.] // Biomacromolecules. -2003. - Vol. 4. - №6. - P. 1457-1465.

202. Ramon, G. Sur la toxine et surranatoxine diphtheriques [Text] / G. Ramon // Ann. Inst. Pasteur. - 1924. - Vol. 38. - P. 1-7.

203. Roberfroid, M. Prebiotics: The Concept Revisited / M. Roberfroid // J. Nutr. - 2007. - Vol. 137, № 3. - P. 830-837.

204. Roestenberg, M. Safety and immunogenicity of a recombinant Plasmodium falciparum AMA 1 malaria vaccine adjuvanted with Alhydrogel, Montanide ISA 720 or AS02 / M. Roestenberg, E. Remarque, E. de Jonge et al. // PLoS ONE. -2008. -Vol. 3, № 12. -P. e3960.

205. Rumyantseva, E.V. [et al.]. Sorption of copper ions by granulated chitosan // Fibre Chemistry. -2006. -Vol. 38. -№. 2. -P. 98-102.

206. Samantha, Sayers. Vaxjo: A Web-Based Vaccine Adjuvant Database and Its Application for Analysis of Vaccine Adjuvants and Their Uses in Vaccine

114

Development [Text] / Samantha Sayers, Guerlain Ulysse, Zuoshuang Xiang [et al.] // Journal of Biomedicine and Biotechnology. - 2012. - Vol 10, Article ID 831486. - P. 13.

207. Shinde, U. A. Design and characterization of chitosan-alginate microspheres for ocular delivery of azelastine/ U. A. Shinde, J. N. Shete , H. A. Nair, K. H. Singh // Pharm. Dev. Technol. - 2014. - Vol. 19, №7. - P. 813-823.

208. Scalzo, A.A. Induction of protective cytotoxic T cells to murine cytomegalovirus by using a nonapeptide and a humancompatible adjuvant (Montanide ISA 720) / A.A. Scalzo, S. L. Elliott, J. Cox et al. // J. Virol. -1995. -Vol. 69. № 2. -P. 1306-1309.

209. Schmitt, A. Cytomegalovirus vaccination of leukemia and lymphoma patients after allogeneic stem cell transplantation-validation of a peptide vaccine / A. Schmitt, C. Bechter, J. Yao et al. // J. Immunol. Meth. -2009. -Vol. 343, № 2. -P. 140-147.

210. Senel, S.Potential application of chitosan in veterinary medicine. / S. Senel , S.J. McClure // Adv. Drug Deliv. Rev., -2004- Vol. 56.- № 10 - P. 1467-1480.

211. Sergio, C. Evaluation of the prebiotic potential of chitooligosacharides / C. Sergio, M. J. Pinto // Advances in chitin science. - 2007. - Vol. 10. - P.492-497.

212. Singh, M. Recent advances in vaccine adjuvants [Text] / M. Singh // Pharm. Res. - 2002. - Vol. 19. - P. 715-728.

213. Skehel, J. Changes in the conformation of influenza virus hemagglutinin at the pH optimum of virus-mediated membrane fusion / J. Skehel, P. Bayley., E. Brown et al. // PNAS. -V. 79. -P. 968 - 972.

214. Slutter, B. Dual role of CpG as immune modulator and physical crosslinker in ovalbumin loaded N-trimethyl chitosan (TMC) nanoparticles for nasal vaccination /.B. Slutter,W.J. Jiskoot // Control Release -2010.- 148(1):117-21

215. Subhapradha, N. Anticoagulant and antioxidant activity of sulfated chitosan from the shell of donacid clam Donax scortum (Linnaeus, 1758) / N. Subhapradha, S. Suman, P. Ramasamy, R. Saravanan, V. Shanmugam, A.

115

Srinivasan, A. Shanmugam // Int. J. Nutr. Pharm. Neurol. Dis. - 2013. - Vol.3, №1. - P. 39-45.

216. Tsai, G.J. In vitro and in vivo antibacterial activity of shrimp chitosan some intestinal bacteria / G.J. Tsai, S.H. Hwang // Fisheries Sci. - 2004. - Vol. 70. -P. 675-681.

217. Zargar, V. A review on chitin and chitosan polymers: structure, chemistry, solubility, derivatives, and applications / V. Zargar., M. Asghari., A. Dashti // ChemBioEng Reviews. -2015. -V. 2. № 3. C. 204 - 226.

218. Zhao, Y. Chitin deacetylases: properties and applications / Y. Zhao, R.-D. Park, R.A.A. Muzzarelli // Mar. Drugs. - 2010. - Vol. 8, № 1. - P. 24-46.

219. Zverev, V. V. Medicinskaja mikrobiologija, virusologija i immunologija: volume 1 : textbook / V. V. Zverev , M. N. Boitchenko . - M. : GEOTAR-Media. - 2010.

220. Uchida, Y. Antibacterial activity by chitin and chitosan / Y. Uchida // Food Chemical. - 1988. - Vol. 2. - P. 22-29.

221. Vasiliev, Y.M. Chitosan-based vaccine adjuvants: incomplete characterization complicates preclinical and clinical evalution // Exspert Review of Vaccines, -2015. -№ 1. -P. 37-53.

222. Vasilieva, T. Controllable degradation of polisaccharides stimulated by electron-beam plasma / T. Vasilieva., S. Lopatin., V. Varlamov., Aung Tun Win // 22 nd International Symposium on Plasma Chemistry. Antwerp, Belgium. - 2015. -P. 11.

223. Vogel., F. R. Adjuvants in Perspective. Modulation of the Immune Response to Vaccine Antigens [Text] / F. R. Vogel // Dev. Biol. Stand. - 1998. Vol. 92. - P. 241-248.

224. Yang, T.L. Chitin-based materials in tissue engineering: applications in soft tissue and epithelial organ / T.L. Yang // Int. J. Mol. Sci. - 2011. - Vol. 12, №3. - P. 1936-1963.

225. Yalpani, M. An experimental of the unusual suspectibilities of aminoglycans to enzymatic hydrolysis / M. Yalpani, D. Panteleone // Carbohydrate Research. -1994. - V. 256. - P. 159-175.

226. Wan Ngah W.S., L.C. Teong, M.A.K.M. Hanafiah, Carbohydrate Polymers, -2011.- №83(4)-P.1446-1456.

227. Wang, X. Intranasal immunization with live attenuated influenza vaccine plus chitosan as an adjuvant protects mice against homologous and heterologous virus challenge / X. Wang, W. Zhang, F. Liu, et al.// Arch Virol -2012. -№ 157(8) -P.1451-61.

228. Wu F.-C., R.-L. Tseng, R.-S. Juang, Journal of Environmental Management, -2010. -№91. -P.798-806.

229. Wu, Y. Phase 1 trial of malaria transmission blocking vaccine candidates Pfs25 and Pvs25 formulated with montanide ISA 51/ Y. Wu, R. D. Ellis, D. Shaffe et al. // PLoS ONE. -2008. -Vol. 3, N 7. -P. e2636.

6. Приложения

Настоящие технические условия распространяются на хитозан низкомолекулярный, вырабатываемый из хитозана, производимого из панциря промысловых ракообразных. Хитозан низкомолекулярный предназначен для использования в пищевой промышленности в качестве структурообразователя, эмульгатора и загустителя.

I. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1 Хитозан низкомолекулярный изготавливают в соответствии с требованиями настоящих технических условий по технологической инструкции с соблюдением санитарных норм и правил, утвержденных в установленном порядке.

1.2 Характеристики.

1.2.1. Хитозан низкомолекулярный изготавливают в виде порошка или чешуек.

1.2.2. По органолептическим и физико-химическим показателям хитозан низкомолекулярный должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в таблице 1.

__Таблица 1.

Наименование показатели Характеристика и нормы Методы испытаний

Внешний вид Тонкодисперсный порошок или чешуйки размером < Змм ГОСТ 7631-85

Цвет От белого до кремового или розового ГОСТ 7631-85

Вкус Свойственный данному виду продукта без постороннего привкуса ГОСТ 7631-85

Массовая доля воды, %, не более 10,0±1 ГОСТ 7636-85

Массовая доля хитозана, % не менее 99 ГОСТ 9289-09200472124-99

Массовая доля золы, % ,не более 1,0 ГОСТ 7636-85

рН, не более 7,5 ГОСТ 8756.16-70

Динамическая вязкость 1% раствора, сПз, не более 200 ТУ 9289-09200472124-99

1.2.3. Содержание токсичных элементов и пестицидов в хитозане низкомолекулярном не должно превышать допустимые уровни, установленные в Технологическом регламенте таможенного союза 021/2011 «О безопасности пищевой продукции», указанным в таблице 2.

УТВЕРЖДАЮ: Директор ФГБНУ «Всероссийский научно-ис€ледовательский и технологический ^г биологической промышленности»

А.Я. Самуйленко 2016г.

ИН1

по применению пробиотиче^ад^^п^^^Гата «МУЦИНОЛ Экстра» для повышения несиецифической резистентности животных, улучшения роста и развития молодняка крупного рогатого скота (организация-производитель - ФГБНУ «ВНИТИБП - ООО «Биопрогресс», Московская область, Щелковский район, п.Биокомбината)

I. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

1. «МУЦИНОЛ Экстра» - MUCHINOL Extra.

2. «МУЦИНОЛ Экстра» представляет собой пробиотическую кормовую добавку и содержит лиофильно высушенную биомассу Bifidobakterium globosum, Enterococcus faecium, Bacillus licheniformis, Bacillus subtilis, хитозан и наполнитель ( лактозу и/или крахмал и/или сухую молочную сыворотку и/или отруби.

3. По внешнему виду - сыпучий порошок от кремового до бежевого или коричневого цвета со специфическим запахом с включением частиц серого цвета. В 1г «МУЦИНОЛ Экстра» содержится не менее 1х109 КОЕ (колописобразуюших единиц) живых пробиотических бактерий. Не содержит генетически модифицированные микроорганизмы.

4. Выпускают «МУЦИНОЛ Экстра» расфасованным: по 0.1, 1,5, 10, 15, 20, 25 кг в пакеты или банки из полимерных материалов. Пакеты должны быть герметично запаяны и вложены либо в многослойный бумажный мешок или пластиковую тару, защищающие добавку от света и влаги.

Каждую единицу фасовки снабжают инструкцией по применению и этикеткой с указанием: организации-производителя, её товарного знака; адреса и телефона, организации, по заказу которой производится добавка, её адреса и телефона, названия добавки; состава, количества добавки в упаковке; номера партии; даты изготовления (месяц, год); срока годности; условий хранения; надписи «Для животных»; обозначения ТУ, информации о подтверждении соответствия номера государственной регистрации.

Хранят «МУЦИНОЛ Экстра» в сухом защищен! температуре от 4°С до 18°С.

Срок годности - 12 месяцев со дня изготовления. 11о истечении срока годности кормовая добавка к применению не пригодна. И. БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА

5. Пробиотические бактерии, входящие в состав препарата, отобраны таким образом, что подавляют рост стафилококков, синегнойной палочки, сальмонелл, протея, кандидомикозов и других патогенных микроорганизмов, обладают антибактериальной активностью по отношению к широкому спектру

ном от света месте при

Гр+ и Гр- микроорганизмов (продуцируют антибиотические вещества широкого спектра действия), усиливают неспецифическую резистентность организма животного, способствуют быстрому заживлению травмированных слизистых оболочек ЖКТ, что особенно актуально при смене рационов или при ухудшении качества кормового сырья и тем самым повышают сохранность и продуктивность животных. Является средством восстановления нормального микробиоциноза кишечника после заболеваний, приема антибиотиков и низкокачественных кормов. Побочных явлений и осложнений при применении препарата в рекомендуемых дозах не выявлено. Противопоказаний для применения не установлено.

6. Кормовая добавка «МУЦИНОЛ Экстра» безвредна, не является лекарственным средством.

III. ПОРЯДОК ПРИМЕНЕНИЯ

7. «МУЦИНОЛ Экстра» применяют для улучшения переваривания кормов и повышения неспецифической резистентности организма животных в течение 10 суток в дозе 7г/голову в сутки.

8. «МУЦИНОЛ Экстра» применяют индивидуально или групповым методом с комбикормом, концентратами, минеральными добавками, заменителями молока и с водой.

При добавлении «МУЦИНОЛ Экстра» в комбикорма, концентраты, минеральные добавки и заменители молока на комбикормовых, премиксных заводах или кормоцехах хозяйств используют соответствующие технологии смешивания и оборудование, обеспечивающее равномерное смешивание.

9. «МУЦИНОЛ Экстра» совместим с лекарственными средствами, в том числе с антибиотиками.

10. Побочных явлений и осложнений при применении пробиотической кормовой добавки «МУЦИНОЛ Экстра» в рекомендуемых дозах не выявлено. Противопоказаний для применения не установлено.

И. Продукты животноводства и птицеводства в пищевых целях используются без ограничений.

IV. МЕРЫ ЛИЧНОЙ ПРОФИЛАКТИКИ

12. При работе с «МУЦИНОЛ Экстра» следует соблюдать общие правила личной гигиены.

13. «МУЦИНОЛ Экстра» не должен применяться по истечении срока годности.

14. Продукты животноводства после применения препарата используются в пищевых целях без ограничений.

Инструкция по применению «МУЦИНОЛ Экстра» разработана ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности», Московской области.

Организация-производитель: ФГБНУ «ВНИТИБП»-000 «Биопрогресс», Россия, 141142, Московская область, Щелковский район, п.Биокомбината.

УТВЕРЖДАЮ: Проректор по научной работе ФГБОУ ВПО Брянской ГСХА проф. В.Е. Ториков 18 июля 2013 года

УТВЕРЖДАЮ: Директор ООО «Снежка -С.Н. КорявйО 16 июля 2013

АКТ От 16 июля 2013 года

Нами, главным ветврачом Бахрушиной ОН. и главным .......

Зиновкиной Л.В ООО «Сноюса - Бешво» Брянского р-на, Брянской обл^ос»! акго том, что с 15 марта 2013 года по 7 июля 2013 года на МТФ ООО «Снежка -Ьетово» под руководством зав. кафедрой эпизоотологии, микробивййГии паразитологии и ветеринарнсьсанитарной экспертизы БГСХА. дбн' профессора Крапивиной Е.В. проведен эксперимент аспиратами БГСХА Чумаковым О.М. и В НИТИ биологической промышленности Мураян Ж Ю (в плане реализации Договора о творческом научном сотрудничестве) по изучению влияния разных сроков выпаивания препарата «Муцинол»-экстра, содержащего хитозан, на микробиоценоз толстого кишечника, биохимические параметры крови, и динамику живой массы у телят.

морфо-

Были сформированы по методу парных аналогов 3 группы телят черно-пестрой породы 2-2 5-месячного возраста (±3-4 суток) со средней живой массой 73,6211 32 кг по 20 голов в каждой. Животные 1 группы были контрольными, телята 2 группы получали препарат «Муцинол»-экстра один раз в сутки по 7 по г/гол в течение 10 суток, а 3 группы - по 7 г/гол препарата в^чеи^О суток 11репарат был предоставлен ЗАО «Биопрогресс».

Телята содержались . в соответствующих ветеринарно-зоогигиеническим требованиям условиях, -получали хозяйственный рацион в соответствии с общепринятыми нормами.

Материалом исследований служили образцы крови, которые брали утром до кормления из яремной вены у 5 подобных животных из каждой группы до начала опыта, через 21 сутки и 2 месяца опытного периода.

Пробы фекалий для анализа микробиоценоза толстого кишечника получали при акте вынужденной дефекации перед началом опыта через 21 сутки и 2 месяца опытного периода у 3 животных из каждой группы. Анализ проводился в аккредитованном испытательном лабораторном центре ФГУ здравоохранения «Центр гигиены и эпидемиологии Брянской области» В результате анализа полученных данных установлено следующее.

Выпаивание телятам с 2-2,5-месячного возраста в течение 10 суток препарата «Муцинол»-экстра обусловило оптимизацию микробиоценоза толстого кишечника, на что указывает выраженная тенденция к повышению числа бифидобактерий, лактобактерий, типичных эшерихий, н снижению числа клостридии в содержимом толстого кишечника.

Выпаивание телятам с 2-2,5-месячного возраста препарата «Муцинол»-экстра в течение более длительного времени (20 суток) не оказало существенного влияния на изученные показатели, но создав, ю условия, исключающие рост грибов Кандида в содержимом кишечника 0 1риложения, табл. 1).

Содержание лейкоцитов, эритроцитов и уровень гемоглобина в крови телят подопытных групп, как перед началом эксперимента, так и на протяжении всего опытного периода превышал нормативные значения без существенных межгрупповых различий (Приложения, табл. !)• Следует отметить"Ярко выраженную тенденцию к повышению уровня лейкоцитов у телят 3 группы после выпаивания препарата «Муцинол»- экстра г. течение 20 оянвуто«» что указывает па повышение защитных сил организма.

Через 30-40 суток после окончания выпаивания телятам препарата «Муцинол»- экстра установлено повышение среднесуточных приростов живой нмассы на 11,96%....43,33% (Приложения, табл. 3). Валовый прчрост живой ~ {пассы за опытный период и среднесуточный прирост за весь опы ный период был достоверно выше (на 20,06 и 20,01% соответственно) у телят, которым выпаивали препарат в течение 10 суток. Более длительное применение препарата не оказало существенного влияния на валовый и среднесуточный прирост живой массы.

Главный ветврач ООО «Снежка - Бетово»

Главный зоотехник ООО «Снежка - Бетовр»

Зиновкина

Л.В.

I

Приложения

Таблица 1 - Количественное содержание различных представителей микробиоценоза, КОЕ lg/r___

Наименование микроорганизмов Группы Возраст

2-2.5 мес. Через 21 сутки опытного периода Через 82 суток опытного периода

Бифидобактерии » 1, п=3 9.00+0,00 9.6710,67 9,0010,00

2, п=3 9,00±0.00 10.3310,67 9.0010.00

3 п=3 9.67±0,67 9.6710,67 9,0010,00

Лактобакгерии 1, п=3 5,0010,00 6,3310,67 6,3311,67

2, п=3 6,33+0,67 5,6710,67 7.0010,00

3, п=3 7,00±0,00 7.0010.00 5,6710,.67

Эшерихии: типичные I, п=3 5,67±0,88 5,6710,33 6,6710,33

2. п=3 6.00±1,00 5.6710,67 7,0010,00

3, п=3 5,33±0,33 5,6710,67 6,3310,33

лактозонегативные 1 ,.л=3 0±0 010 010

2, п=3 0+0 010 ОЮ

3, п=3 0±0 010 010

гемолитические 1. п=3 0±0 0+0 010

2, п=3 0±() 010 010

3, п=3 0±0 0Í0 010

Патогенные энтсробактерии г 1. п=3 0±0 010 010

2, п=3 0+0 S. dublin 010

3, п=3 0±0 010 010

Бактерии рода Протея 1. п=3 0±0 010 010

2, п=3 0±0 010 ' 010

3, п=3 0±() 010 010

Другие условно-патогенные энтеробактерии 1, п=3 0±0 0+0 3,6711,86 KI. Рп.

2. п=3 0±0 010 3,6711,86 KI. Рп., ох.

3, п=3 0±0 1.6711.67 KI. Рп. 1.6711,67 KI. Рп

Энтерококки 1, п=3 5,00±0,00 5,0010,00 5,6710,33

2. п=3 5.67±0.67 5.00+0.00 7,00+0,00

3, п=3 5,6710.67 5.3310.33 5.6710.331

Стафилококк золотистый 1, п=3 010 0+0 0±0

2, п=3 010 Dio 010

3, п=3 0±0 0±0 0±0

Коагулазанегативный стафилококк 1.п=3 0±0 ()±0 0±0

г—1 II Г" 0±0 0±0 0±0

3. п=3 0±0 0±0 0±0

Клостридии I. п=3 0±0 0±0 3,00±1,53

2, п=3 0+0 2.67±1.330 1.67±!,67

3, п=3 0±0 0±0 3.00± 1,53

Г рибы рода Кандида 1, п=3 0±0 0±0 1,33±1,33

2, п=3 0±0 0±0 1,67±1,67

3, п=3 0±0 0+0 0±0

Дрожжеподобные грибы 1, п=3 0±0 0±0 0±0

2, п=3 0±0 0±0 0±0

3. п=3 0±0 0±0 0±0

Неферментирующие бактерии 1, п=3 0±0 0±0 0+0

2, п=3 0±0 0±0 0±0

3,п=3 0±0 0±0 0±0

Приложение, таблица 2. 1аблица 2 -Динамика гематологических показателей телят при выпаивании препарата «Муцинол»- экстра

Показатели Группы 2-2,5 мес. возраст г Группы Через 21 сутки опытного периода Группы Через 82 суток опытного периода

Лейкоциты, 10" 1, п=4 19,72+3,63 1, п=5 18,13+2 ,03 1, п=4 15,2+1,91

2, п=5 14,78±1.66 2. п=5 13,0+0.' 79 2. п=4 12,79+0,49

3 п=5 15,73±1,11 3 п=5 20.08+1 .61 3 п=5 14.76+1,64

Эритроциты, 1012 1, п=4 11,76±0,16 1, п=5 11,87+0 .34 1, п=4 12.07+0,14

2, п=5 12.17+.07 2, п=5 11,93+0 .73 2, п=4 12,23+0,45

3, п=5 13,57+0,48 3, п=5 12,86+0 ,19 3, п=5 12,23+0,45

Гемоглобин, г/л 1,п=4 126,4+1,62 1, п=5 129,8+1 ,1 I, п=4 120,б8±1,87

2, п=5 129,06+1.34 2, п=5 128,76+3,38 2, п=4 118.83+3,48