Технология и конструирование сухих биопрепаратов на основе микрокапельных порошков тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, доктор биологических наук Давыдкин, Валерий Юрьевич

• Давыдкин, Валерий Юрьевич
• доктор биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации доктор биологических наук Давыдкин, Валерий Юрьевич

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ: ПРИМЕНЕНИЕ В ПРАКТИКЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И ТЕХНОЛОГИИ ПРИГОТОВЛЕНИЯ.

1.1. Сферы применения иммунобиологических препаратов.

1.1.1. Биопрепараты в акушерско-гинекологической практике.

1.1.2. Применение препаратов в терапевтической стоматологии.

1.1.3. Пробиотики в лечении больных с кранио-фациальной патологией.

1.1.4. Комплексное лечение некоторых заболеваний ЛОР-органов и легких.

1.1.5. Лечение больных атопическим дерматитом.

1.1.6. Биопрепараты при острых кишечных инфекциях и дисбактериозах кишечника.

1.2. Состав и лекарственные формы биопрепаратов.

1.2.1. Колисодержащие биопрепараты.

1.2.2. Бифидосодержащие препараты.

1.2.3. Биопрепараты на основе лактобацилл.

1.2.4. Споровые биологические препараты.

1.2.5. Иммуноглобулиновые и интерфероновые препараты.

1.3. Анализ технологий приготовления сухих биопрепаратов. 56 1.3.1. Способы обезвоживания биоматериалов.

1.3.1.1. Получение сухих материалов методом распылительной сушки.

1.3.1.2. Сублимационное высушивание биопрепаратов.

1.3.1.3. Сорбционно-контактное обезвоживание биопрепаратов.

1.3.2. Технологии получения сухих биопрепаратов.

1.3.2.1. Способы приготовления таблеток.

1.3.2.2. Технология приготовления порошков и капсул в производстве биопрепаратов.

1.3.2.3. Псевдосухие материалы в технологии 69 приготовления биопрепаратов.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Материалы.

2.1.1. Микроорганизмы.

2.1.2. Питательные и защитные среды.

2.1.3. Биоматериалы, материалы и реактивы.

2.1.4. Экспериментальные животные.

2.2. Методы исследований.

2.2.1. Культивирование микроорганизмов, концентрирование биомассы и введение защитных сред.

2.2.2. Микробиологические методы.

2.2.3. Иммунохимические методы.

2.2.4. Физико-химические методы.

2.2.5. Физические методы.

2.2.6. Планирование эксперимента и статистическая обработка результатов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

ГЛАВА 3. ФОРМИРОВАНИЕ МИКРОКАПЕЛЬНОГО ПОРОШКА.

3.1. Микрокапельный порошок как дисперсная система.

3.2. Устройство для приготовления микрокапельных порошков

3.3. Обоснование требований к размерам микрокапель в порошке.

ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ ПЕРЕРАБОТКИ СИСТЕМЫ АЭРОСИЛ

СУСПЕНЗИЯ В ЭЛЕКТРОМАГНИТНОМ ДИСПЕР-ГАТОРЕ.

4.1. Обоснование показателей состояния системы аэросил-жидкость при получении микрокапельных порошков.

4.2. Изучение зависимости выживаемости микроорганизмов от режимных параметров процесса образования микрокапельных порошков в ЭМД.

ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОЦЕССА СОРБЦИОННО-КОНТАКТНОГО ОБЕЗВОЖИВАНИЯ МИКРОКАПЕЛЬНЫХ ПОРОШКОВ.

5.1. Обоснование методического подхода обезвоживания микрокапельного порошка при контакте с влагоемким сорбентом.

5.1.1. Выбор типа сорбента для контактного обезвоживания микрокапельных порошков.

5.1.2. Исследование основных закономерностей процесса с использованием модельного микроорганизма.

5.2. Сорбционно-контактное обезвоживание МП энтеральных микроорганизмов.

ГЛАВА 6. КОНСТРУИРОВАНИЕ КОМПЛЕКСНЫХ БИОПРЕПАРАТОВ.

6.1. Обоснование компонентного состава комплексного препарата КИП и В. adolescentis МС-42.

6.2. Приготовление сухого биопрепарата комплекса иммуноглобулинов и бифидобактерий.

6.3. Обоснование методического подхода к конструированию биопрепарата КИП и L. acidophilus (смесь штаммов NKb

100аш,К3Ш24).

6.3.1. Исследование основных закономерностей конвективной сушки МП при атмосферном давлении.

6.3.2. Выбор компонентного состава комплексного биопрепарата.

6.3.3. Приготовление комплексного препарата КИП и L. acidophilus (смесь штаммов NKb ЮОаш, К3Ш24).

ГЛАВА 7. ИССЛЕДОВАНИЕ ЗАЩИТНЫХ СВОЙСТВ СТРУКТУРНОГО КОМПОНЕНТА ПРЕПАРАТА.

7.1. Оценка гигроскопичности сухого препарата, полученного из микрокапельного порошка.

7.2. Изучение in vitro защитного эффекта аэросила при моделировании воздействия неблагоприятных факторов пищеварительной системы.

7.3. Рентгенография прохождения капсулами верхних отделов желудочно-кишечного тракта обезьян.

ГЛАВА 8. ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ КОМПЛЕКСНОГО

ПРЕПАРАТА КИП И В. ADOLESCENTIS МС-42.

8.1. Оценка острой токсичности биопрепарата.

8.2. Изучение безвредности и терапевтической эффективности препарата КИП и В. adolescentis МС-42 на обезьянах.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Технология и конструирование сухих биопрепаратов на основе микрокапельных порошков»

Атуальность проблемы

Важное значение симбиотической микрофлоры для организма человека к настоящему времени общепризнанно и обосновано результатами многочисленных исследований [25, 107, 201, 226, 278, 316, 375, 376, 394, 396, 413, 415, 417, 429,433, 451, 458, 461].

Симбиотическая микрофлора составляет основу микроэкологии человека. Все сообщающиеся с внешней средой полости тела человека, а также кожные покровы заселены микроорганизмами, которые представлены несколькими сотнями видов бактерий, без учёта одновременной персистенции вирусов, простейших, грибов [68, 194, 428, 434, 445]. Макроорганизм и населяющая его микрофлора составляют чётко интегрированную структуру, сложившуюся в процессе длительного эволюционного развития. Эта интеграция обеспечивает слаженную работу всех органов^ и систем, базирующуюся до известной степени на принципе саморегуляции.

Нарушения качественного и количественного состава симбиотической микрофлоры объединяются термином "дисбактериоз" [442, 443], под которым в настоящее время понимают [68] «любые количественные и качественные изменения типичной для данного биотопа микрофлоры человека и животных, возникающие в результате воздействия ' на макро- и микроорганизм различных факторов экзогенного и эндогенного характера, влекущие за собой выраженные клинические проявления со стороны макроорганизма или являющиеся следствием каких-либо патологических процессов в организме».

В современных условиях на фоне частого воздействия неблагоприятных экологических факторов и широкого распространения в повседневной практике противомикробных лекарственных средств, дисбиотические нарушения микрофлоры носят массовый характер и выявляются практически среди всех слоев населения. По данным Российской академии наук, до 90% населения страны страдают теми или иными отклонениями от оптимального состава симбиотической микрофлоры [65, 212, 215]. Наиболее незащищенными от них являются дети, особенно первого полугодия жизни. Даже у находящихся на грудном вскармливании отклонения по срокам становления нормального бакгериоценоза кишечника с преобладанием бифидофлоры встречаются с частотой до 25% [3, 76, 77, 152, 170, 171].

Для коррекции дисбиотических нарушений микрофлоры применяется целый комплекс лечебных мероприятий с учетом клинических проявлений основного заболевания и степени выраженности дисбактериоза, а таюке данных лабораторных исследований микрофлоры биотопа и состояния » реактивности организма. Наряду с общетерапевтическими мероприятиями (диета, ферменты, витамины и т.п.) при необходимости проводится селективная деконтаминация патогенной и условно-патогенной микрофлоры (бактериофаги, антисептики, антибактериальные препараты и т.п.). Однако основную роль играет дифференцированное применение различных иммунобиологических препаратов, в том числе пробиотиков, являющихся наиболее физиологичными для коррекции микрофлоры и профилактики, дисбиотических изменений, а таюке препаратов, применяемых для повышения резистентности организма, восстановления иммунного статуса [5; 24, 68, 78, 82, 83, 149, 155, 191, 192, 338, 397, 403].

Спектр иммунобиологических препаратов для терапии дисбиотических состояний биотопов организма широк и включает сывороточные иммуноглобулины (нормальный и комплексный), пробиотики (микробные препараты нормофлоры), цитокины (интерферопы, интерлейкины, фактор некроза опухолей-a), иммуномодуляторы и др. [134]. Лекарственные формы их различны - от жидких ампулированных до твердых дозированных (таблетки, капсулы) форм. Разнообразны и технологии их приготовления.

Вместе с тем, до настоящего времени в производстве сухих биопрепаратов единственным широко используемым методом стабилизации свойств биологических субстанций остается сублимационное (лиофильное) высушивание. Этот способ, обеспечивая высокое качество продукта, отличается чрезмерной длительностью (до 2 суток), а получаемая сухая субстанция без дополнительной переработки непригодна для приготовления сухих дозированных форм [37, 142, 202, 224, 369, 389, 446]. Кроме того, получаемые с использованием этого способа высушивания пероральные препараты на основе живых пробиотических микроорганизмов нуждаются в защите от кислотно-ферментного комплекса пищеварительной системы. По-видимому, этим, а также стремлением придать биологическому началу новые фармакокинетические свойства (повышенную биодоступность и защищенность от воздействия неблагоприятных факторов хранения и применения), объясняется появление разработок, направленных на создание технологий с иммобилизацией биокомпонентов, которая осуществляется сорбцией на различных носителях [113, 114, 115, 116, 117, 118, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240].

Одним из вариантов современной технологии с наименьшим количеством стадий и продолжительностью является описанный в патентной литературе способ с непосредственным обезвоживанием биомассы пробиотических микроорганизмов моно - или поликомпонентного • состава * сорбентами [234, 235, 236, 237, 238]. Высушивание биомассы и приготовление препарата происходит на одной технологической стадии. Однако вследствие прямого контакта биомассы с сорбентом выживаемость клеток пробиотических микроорганизмов не превышает 10-20%. Отсутствуют также сведения о принципиальной возможности и эффективности применения такого способа для получения сухих биопрепаратов немикробной природы (например, иммуноглобулинов).

Таким образом, не существует современной технологии приготовления пероральных иммунобиологических препаратов, отличающейся универсальностью в плане возможности переработки биологических компонентов различной природы. Вместе с тем создание нового вида биологического материала - микрокапельного порошка, рациональное использование его особых свойств в сочетании с обоснованным' выбором обезвоживания создают предпосылку для разработки такой технологии. Однако системных исследований в этом направлении не проводилось, что и определило актуальность данной работы.

Цель исследования

На модели микроорганизмов Bifidobacterium adolescentis МС-42, Lactobacillus acidophilus (смесь штаммов NKb ЮОаш, К3Ш24) и иммуноглобулиновых комплексов типа КИП экспериментально обосновать новый концептуальный принцип и практические подходы к конструированию и технологии приготовления сухих комплексных биопрепаратов для профилактики и лечения заболеваний, ассоциированных с дисбалансом нормофлоры желудочно-кишечного тракта.

Задачи исследования

1. На основе анализа и в эксперименте идентифицировать микрокапельный порошок как дисперсную систему, определить его основные свойства и требования к размерам микрокапель жидкости. Обосновать выбор устройства для приготовления микрокапельного порошка.

2. Определить технологические показатели состояния системы аэросил-биообъект, исследовать устойчивость биообъектов к механическим нагрузкам, возникающим при диспергировании жидкой субстанции, и выбрать оптимальный режим приготовления микрокапельных порошков в электромагнитном диспергаторе.

3. Определить требования к сорбенту как структурному элементу и биологически активному компоненту препарата и на примере модельного микроорганизма обосновать методический подход к проведению процесса сорбционно-контактной сушки микрокапельного порошка. Доказать общность установленных положений при обезвоживании микрокапельных порошков микроорганизмов и КИП.

4. Исследовать основные закономерности конвективной сушки микрокапельного порошка при атмосферном давлении. Обосновать компонентный состав и методический подход к конструированию биопрепаратов на основе комплекса сывороточных иммуноглобулинов и пробиотических микроорганизмов.

5. В экспериментах in vitro исследовать защитные свойства структурного компонента препарата - наноразмерного разобщителя аэросила.

6. Оценить нетоксичность и безвредность комплексного биопрепарата КИП и В. adolescentis МС-42 в экспериментах на мелких лабораторных животных и здоровых приматах. Изучить терапевтическую эффективность препарата при лечении обезьян, больных острой кишечной инфекцией с диарейным синдромом.

Научная новизна

Получены знания о структуре, основных свойствах и способе получения нового вида биоматериала - микрокапельного порошка, образующегося при диспергировании биологической жидкости во взвешенном слое наноразмерного разобщителя аэросила. Наиболее эффективно процесс формирования порошка протекает в электромагнитном диспергаторе, принцип действия которого основан на передаче энергии вращающегося электромагнитного поля рабочим ферромагнитным телам, осуществляющим механическое дробление жидкости.

Показано, что степень инактивации биокомпонента при диспергировании жидкой субстанции обусловливается его восприимчивостью к механическим нагрузкам. Наиболее чувствительными оказались клетки L. acidophilus (смесь штаммов NKj, ЮОаш, К3Ш24) и В. adolescentis МС-42, клетки Е. coli М-17 занимают промежуточное положение, и наименее чувствительным является энтерококк Е. faecium ГНКИ-27. Значительно большей механоустойчивостью, чем энтеральные микроорганизмы, обладают сывороточные иммуноглобулины трех основных классов (IgG, IgA и IgM) в растворе КИП.

Доказано, что закономерности протекания процесса сорбционно-контактной сушки микрокапельного порошка являются общими для биологических субстанций различной природы. При этом гибель клеток энтеральных микроорганизмов независимо от их видовой принадлежности составляет от 30 до 70%, а наибольшее снижение антисальмонеллезной активности иммуноглобулинов - одно двукратное разведение.

Впервые проведенными исследованиями атмосферного обезвоживания микрокапельных порошков бифидобактерий и лактобацилл установлено, что температура осушающего воздуха не должна превышать 35-40°С, то есть величин, близких к оптимальной температуре роста этих микроорганизмов, во избежание интенсивной гибели клеток как в процессе конвективного обезвоживания, так и последующего досушивания сорбционно-контактным методом.

Исследованиями in vitro впервые показан защитный эффект аэросильной оболочки, проявляющийся в затруднении доступа к сухому биологическому началу паров воды из воздуха и агрессивных составляющих желудочного и кишечного соков, и таким образом обеспечивающий негигроскопичность препарата и повышенную биодоступность бактериального компонента.

Впервые проведенными доклиническими испытаниями комплексного биопрепарата КИП и В. adolescentis МС-42 показана его нетоксичность и безвредность для приматов, а также 100% терапевтическая эффективность при лечении обезьян, больных острой кишечной инфекцией с диарейным синдромом. Исчезновение клинических проявлений заболевания сопровождалось выраженными положительными изменениями в микробиоценозе желудочно-кишечного тракта обезьян - повышением содержания нормальных Е. coli, существенным снижением количества таких условно-патогенных микроорганизмов, как Staph. epidermidis, представители родов Enterococcus, Proteus, Klebsiella, и полной элиминацией Citrobacter.

Теоретическое значение работы

Обоснован концептуальный принцип разработки биопрепаратов нового поколения для коррекции дисбиотических нарушений в биотопах организма, базирующийся на сочетании в одной лекарственной форме обогащенных иммуноглобулиновых комплексов типа КИП с микробными пробиотиками, обладающими широким спектром и высоким уровнем антагонистической активности против как патогенных, так и условно-патогенных возбудителей заболеваний.

Предложен метод конструирования сухих биопрепаратов, заключающийся в использовании особых свойств микрокапельного порошка и обеспечивающий получение препаратов перорального применения на основе биологических субстанций различной природы, и являющийся основой L универсальной технологии. Этот метод может быть использован в дальнейшем при разработке иммунобиологических препаратов для профилактики и терапии других заболеваний.

Практическая значимость

Предложен новый вид биологических материалов - микрокапельный порошок, относящийся к трехфазным микрогетерогенным дисперсным системам и обладающий вследствие особой структуры одновременно свойствами сухого порошка и жидкого аэрозоля, что существенно расширяет возможности его технологической переработки и обусловливает наличие улучшенных фармакокинетических свойств у сухого препарата.

Разработан способ обработки материалов и конструкция электромагнитного диспергатора для осуществления технологического процесса получения микрокапельного порошка биологических жидкостей. Предложена упрощенная методика перехода, при переработке суспензий микроорганизмов различных видов, базирующаяся на общей для большинства бактерий закономерности экспоненциальной их гибели с увеличением интенсивности механического воздействия.

Аналитически и экспериментально выдвинут ряд требований к физическим, физико-химическим и биологическим характеристикам сорбента, позволяющих обосновать его выбор в качестве структурного элемента сухого биопрепарата, получаемого сорбционно-контактной сушкой микрокапельного порошка.

Введение в технологическую схему двухэтапной стадии обезвоживания микрокапельных порошков приводит к несущественному увеличению длительности технологического цикла, обеспечивая повышение выживаемости бифидобактерий и лактобацилл до 50-70% и сохранение без потери антисальмонеллезной активности сывороточных иммуноглобулинов. Полученные результаты по выживаемости микроорганизмов не уступают, а по соханению специфической активности иммуноглобулинов превосходят результаты их лифильного обезвоживания.

Защита аэросильной оболочкой сухого биологического начала от воздействия влаги воздуха и агрессивных составляющих желудочного и кишечного соков обеспечивает следующие преимущества. Во-первых, исключается необходимость проведения специальных мероприятий, направленных на предотвращение гидратации препарата при выполнении технологических операций, что упрощает и удешевляет технологию в целом, а во-вторых, снижается инактивация биокомпонента при прохождении верхних отделов желудочно-кишечного тракта, что делает возможным уменьшение доз лекарственных веществ в препарате для достижения адекватного терапевтического эффекта.

С использованием разработанного метода сконструированы комплексные биопрепараты КИП и В. adolescentis МС-42, КИП и L. acidophilus (смесь штаммов NKb ЮОаш и К3Ш24).

Внедрение результатов работы

На базе лаборатории медицинской биотехнологии ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора разработаны и приготовлены экспериментальные серии комплексных биопрепаратов КИП и В. adolescentis МС-42, КИП и L. acidophilus (смесь штаммов NKb ЮОаш и К3Ш24).

На основании проведенных исследований оформлено 10 патентов на изобретения:

1. Пат. 1831801 СССР, B01F 13/08. Устройство для обработки материалов / И.Ю. Давыдкин, Ю.П. Давыдкин, В.Ю. Давыдкин, В.М. Блинов; С.Д. Никитинский (СССР). Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 13.10.1992. Патентообладатель коллектив авторов.

2. Пат. 2026730 РФ, B01F 13/08. Способ обработки материалов / И.Ю. Давыдкин, Ю.П. Давыдкин, В.Ю. Давыдкин, В.М. Блинов, С.Д. Никитинский (РФ). Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 20.01.95. Патентообладатель коллектив авторов.

3. Пат. 2161887 RU, A23D 9/00. Биологическая активная добавка / В.А. Алешкин, С.С. Афанасьев, В.Ю. Давыдкин, О.В. Рубальский, И.Ю. Давыдкин,

Г.И. Ханина, А.Г. Гаврин, A.B. Алешкин, JI.A. Денисов, Д.С. Афанасьев, М.С. Афанасьев (RU). Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 20.01.2001. Патентообладатель коллектив авторов.

4. Пат. 2164765 RU, A23L 1/30. Биологически активная добавка / В.А. Алешкин, С.С. Афанасьев, О.В. Рубальский, В.Ю. Давыдкин, J1.A. Денисов, И.Ю. Давыдкин, А.Г. Гаврин, A.B. Алешкин, Д.С. Афанасьев, М.С. Афанасьев (RU). Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 10.04.2001. Патентообладатель коллектив авторов.

5. Пат. 2240136 RU, А61К 39/395. Композиция, содержащая иммуноглобулины и целевые добавки / В.А. Алешкин, С.С. Афанасьев, В.Ю. Давыдкин, И.Ю. Давыдкин, А.Г. Гаврин, О.В. Рубальский, A.B. Мелихова, И.В. Борисова, М.С. Афанасьев, Л.И. Новикова (RU). Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 20.11.2004. Патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора.

6. Пат. 2247578 RU, А61К 39/395. Состав, обладающий-противомикробным действием / A.B. Мелихова, В.А. Алешкин, В.Ю. Давыдкин, И.Ю. Давыдкин, С.С. Афанасьев, И.В. Борисова, О.В. Рубальский,

A.Г. Гаврин (RU). Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 10.03.2005. Патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора.

7. Патент РФ № 2371200, МПК А61К 39/395. Способ получения иммуноглобулинового препарата / Мелихова A.B., Давыдкин В.Ю., Алешкин

B.А., Давыдкин И.Ю. Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 27.10.2009. Патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора.

8. Пат. 2317064 RU, МПК А61К 6/00. Способ определения защитного действия покрытия капсул от содержимого желудка / Алешкин В.А., Лапин-Б.А., Афанасьев С.С., Джикидзе Э.К., Симавонян К.В., Давыдкин В.Ю., Давыдкин И.Ю., Холодилова Л.И., Мелихова A.B., Трофимова Л.И., Кебу Т.И., Калашникова В.А., Егорова Т.П. (RU). Зарегистрирован в

Государственном реестре изобретений Российской Федерации 20.04.2008. Патентообладатели ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора, ГУ НИИ МП РАМН.

9. Пат. 2317065 RU, МПК А61К 6/00. Способ определения целевой доставки в желудочно-кишечном тракте твердой лекарственной формы с защитным покрытием / Алешкин В.А., Лапин Б.А., Давыдкин В.Ю., Джикидзе Э.К., Мелихова А.В., Симавонян К.В., Рубальский О.В., Давыдкин И.Ю. (RU). Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 20.02.2008. Патентообладатель коллектив авторов.

10. Пат. 2322506 RU, МПК C12Q 1/02. Способ определения защитного действия покрытия капсул для штамма Bifidobacterium adolescentis МС42 от содержимого желудка / Алешкин В.А., Лапин Б.А., Афанасьев С.С., Джикидзе Э.К., Симавонян К.В., Давыдкин В.Ю., Давыдкин И.Ю., Воропаева Е.А., Рубальский О.В., Холодилова Л.И., Мелихова А.В., Трофимова Л.И., Кебу Т.И., Байракова АЛ., Калашникова В.А., Афанасьев М.С., Егорова Т.П. (RU). Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 20.04.2008. Патентообладатели ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора, ГУ НИИ МП РАМН.

Результаты исследований использованы в ОКБ А (г. Йошкар-Ола) при разработке и испытаниях аквабиодиспергатора на базе плоских двухсторонних индукторов, а также ОНОПБ (п. Восточный) при отработке промышленной технологии получения препаратов ветеринарного и медицинского назначения. Акты внедрения от 26 ноября 1991 г. и 22 октября 1992 г.

Экспериментальная серия комплексного биопрепарата КИП и В. adolescentis МС-42 прошла успешные доклинические испытания при лечении больных ОКИ обезьян в питомнике ГУ НИИ медицинской приматологии РАМН (г. Сочи - Адлер) под руководством академика РАМН, профессора Б.А. Лапина и доктора медицинских наук, профессора Э.К. Джикидзе. Акт о доклинических испытаниях от 9 апреля 2009 г.

Методика доклинических испытаний биопрепаратов, разработанная в ходе выполнения работы совместно с сотрудниками ГУ НИИ медицинской приматологии РАМН, легла в основу разработки «Новые алгоритмы доклинических испытаний неинъекционных иммунобиологических препаратов и БАД», награжденной серебряной медалью VII Московского международного салона инноваций и инвестиций на ВВЦ (Москва) в 2007 г.

Разработан лабораторный регламент приготовления комплексного биопрепарата КИП и В. ас1о1езсепйз МС-42.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Разработанная универсальная технология приготовления сухих биопрепаратов позволяет перерабатывать жидкие биологические субстанции различной природы и основана на переводе субстанций в устойчивое микрокапельиое состояние в виде высокодисперсного порошка, что в свою очередь позволяет использовать различные интенсивные, в том числе и комбинированные, способы обезвоживания.

2. Структурный компонент препарата - наноразмерный аэросил оказывает защитный эффект, проявляющийся в ограничении доступа к сухому биокомпоненту паров воды из воздуха и агрессивных составляющих желудочного и кишечного соков, в результате чего препарат приобретает повышенную устойчивость к неблагоприятным факторам пребывания в атмосфере воздуха и прохождения желудочно-кишечного тракта.

3. Концепция разработки биопрепаратов нового поколения для коррекции дисбиотических нарушений в микробиоценозе желудочно-кишечного тракта базируется на конструировании комплексных препаратов на основе сочетания обогащенных иммуноглобулиновых комплексов типа КИП с микробными пробиотиками, в совокупности обладающими широким спектром и высоким уровнем антагонистической активности против как патогенных, так и условно-патогенных возбудителей заболеваний.

Апробация работы:

Диссертация апробирована на заседании Ученого Совета ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора 28 апреля 2009 г. протокол № 4.

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на VII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», Москва, 2000; VIII съезде Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, Москва, 2002; Международной научно-практической конференции памяти Г.И. Гончаровой «Пробиотические микроорганизмы -современное состояние вопроса и перспективы использования», Москва, 2002; IX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», Москва, 2002; 1-м международном Конгрессе «Биотехнология — состояние и перспективы развития», Москва, 2002; Третьей международной конференции, посвященной 80-летию института имени Пастера, «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями», Санкт-Петербург, 2003; П-м Московском международном Конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития», Москва, 2003; Научно-практической конференции «Иммуноглобулиновые препараты энтерального и внутривенного применения», Москва, 2003; XI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», Москва, 2004; Международной конференции «Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы», Москва, 2004; Симпозиуме «Лабораторные приматы для решения актуальных проблем медицины и биологии», Москва, 2004; Третьей международной конференции «Высокие медицинские технологии XXI века», Бенидорм (Испания), 2004; Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы совершенствования технологии производства и переработки продукции сельского хозяйства», Йошкар-Ола, 2005; Всероссийской научной конференции «Перспективные направления использования лабораторных приматов в медико-биологических исследованиях», Сочи-Адлер, 2006; Всероссийской конференции, посвященной 75-летию со дня открытия Чувашской государственной сельскохозяйственной академии, Чебоксары,

2006; IX съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, Москва, 2007; Международной научной конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии в опытах на обезьянах», Сочи-Адлер, 2007; Юбилейной Всероссийской научно-практической конференции "Научное обеспечение противоэпидемической защиты населения", Н.Новгород, 2009.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 60 печатных работ, в4 том числе: 7 - в изданиях, рекомендованных ВАК Российской Федерации, 6 - в периодических изданиях, 4 - в сборниках научных трудов, 32 - в материалах конференций, разделы в 1 монографии, 10 патентов РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 271 странице, состоит из введения, 8 глав, заключения, выводов, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 43 таблицами и 41 рисунком. Список литературы включает 474 работы, в том числе 378 - отечественных и 96 - иностранных авторов.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Давыдкин, Валерий Юрьевич

выводы

1. Показано, что микрокапельный порошок представляет собой смешанную трехфазную микрогетерогенную дисперсную систему типа т-ж/г и обладает одновременно свойствами сухого порошка и жидкого аэрозоля. Разработан способ и предложено техническое средство для приготовления микрокапельных порошков.

2. Чувствительность биообъектов в жидкой субстанции к физическим факторам диспергирования определяется их природой: молекулы иммуноглобулинов трех основных классов (IgG, IgA и IgM) более устойчивы, чем энтеральные микроорганизмы Е. faecium ГНКИ-27, Е. coli М-17, L. acidophilus (смесь штаммов NKb ЮОаш, К3Ш24) и В. adolescentis МС-42. Предложенный режим получения микрокапельных порошков в электромагнитном диспергаторе обеспечивает полное сохранение специфической активности иммуноглобулинов и 90-100% жизнеспособности энтеральных микроорганизмов.

3. Определены требования к выбранной в качестве сорбента окиси алюминия по параметрам влагоемкости, величины pH, насыпной и утрясочной плотности, механической прочности и термостойкости. С применением биомассы различных микроорганизмов и растворов иммуноглобулинов показано, что закономерности протекания процесса сорбционно-контактной сушки микрокапельных порошков являются общими для биологических субстанций различной природы.

4. Разработан метод конструирования и технология приготовления комплексных биопрепаратов, включающая раздельное получение микрокапельных порошков биокомпонентов, их смешение, последующее одноэтапное обезвоживание сорбционно-контактной сушкой или двухэтапное с предварительным конвективным обезвоживанием и досушиванием влагоемким сорбентом, а также заключительную выдержку биопрепарата. Приготовлены экспериментальные серии препаратов КИП и В. adolescentis МС-42, КИП иХ. acidophilus (смесь штаммов NKb ЮОаш, К3Ш24).

5. Защитный эффект аэросила проявляется в пониженной гигроскопичности препарата при его нахождении на воздухе и устойчивости к повреждающему воздействию агрессивных составляющих желудочного и кишечного соков при моделировании прохождения верхних отделов желудочно-кишечного тракта.

6. Доклиническими испытаниями показана нетоксичность и безвредность комплексного биопрепарата КИП и В. а^кясепйз МС-42. Терапевтическая эффективность препарата при лечении обезьян, больных ОКИ с диарейным синдромом, составляет 100% и достоверно превосходит эффективность антибиотикотерапии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для конструирования биопрепаратов с улучшенными фармакокинетическими свойствами целесообразно использовать новый вид биологических материалов - микрокапельный порошок, относящийся к трехфазным микрогетерогенным дисперсным системам и получаемый диспергированием биологической жидкости в присутствии наноразмерного гидрофобного разобщителя аэросила. Приготовление микрокапелыгого порошка наиболее эффективно осуществлять в электромагнитном диспергаторе.

2. С целью исключения необходимости проведения полномасштабных исследований для отработки оптимального режима получения микрокапельного порошка в электромагнитном диспергаторе при переработке суспензий микроорганизмов различных видов может быть использована упрощенная методика перехода, базирующаяся на общей для большинства микроорганизмов закономерности экспоненциальной их гибели с увеличением интенсивности механического воздействия.

3. При выборе сорбента в качестве не только влагопоглотителя, но и структурного элемента сухого биопрепарата, необходимо учитывать его физические (фракционно-дисперсный состав, прочность, насыпную и утрясочную плотность), физико-химические (влагоемкость, термостойкость) и биологические (инертность, биологическая активность) свойства.

4. С целью повышения выживаемости пробиотических микроорганизмов и сохранения специфической активности сывороточных иммуноглобулинов технологическая схема приготовления комплексного биопрепарата должна включать легко реализуемую и не требующую сложного оборудования двухэтапную стадию сушки с обезвоживанием микрокапельного порошка до промежуточной влажности конвекцией при атмосферном давлении на первом этапе и досушиванием сорбционно-контактным способом - на втором.

5. Для повышения терапевтической эффективности комплексного биопрепарата, предназначенного для профилактики и лечения дисбиотических нарушений микробиоценоза ЖКТ, целесообразно при его конструировании использовать концептуальный принцип сочетания в одной лекарственной форме обогащенных иммуноглобулиновых комплексов типа КИП с микробными пробиотиками, в совокупности обладающими широким спектром и высоким уровнем антагонистической активности против как патогенных, так и условно-патогенных возбудителей заболеваний.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Давыдкин, Валерий Юрьевич, 2011 год

1. Ажгихин И.С. Технология лекарств. М.: Медицина, 1975. - 511 с.

2. Акоев Ю.С., Сенцова Т.Б., Яцык Г.В. Новый взгляд на дисбиозы у новорождённых детей // Рос. педиатрич. журн. 2000. - № 5. - С. 13-14.

3. Алексеев К.В., Шалдырван. Лекарственные формы интерферона // Антибиотики и химиотерапия. 1990. - № 9. - С. 51 - 54.

4. Алёшкин В.А., Султанова C.B., Афанасьев С.С. Некоторые особенности иммунодиагностики и иммунотерапии торпидных хронических смешанных инфекций гениталий // International Journal on Immunorehabilitation. 2000. -V. 2, №2.-P. 76.

5. Алешкин В.А., Борисова И.В., Холчев Н.В. Получение и исследование комплексных иммуноглобулиновых препаратов // Новые лекарственные препараты. Экспресс-информация. -М., 1993. В. 3. - С. 1 - 11.

6. Алёшкин В.А., Амерханова A.M., Бандоян А.К., Бояркина Л.А. Новые подходы к конструированию препаратов-пробиотиков // Клиническая геронтология. 2001. - Т. 7, № 8. - С. 74 - 75.

7. Алёшкин В.А., Зацепин Ю.К., Башлай А.Г. Получение противодифтерийного иммуноглобулина // Роль иммунобиологических препаратов в современной медицине. Уфа. - 1995. - 4.1. - С. 100 - 102.

8. Алешкин В.А., Борисова И.В., Новикова Л.И. Разработка препаратов для профилактики и терапии инфекционных заболеваний // Проблемы мед. биотехнологии и иммунологии инфекционных болезней. М. - 1996. - Т. 2. -С. 7-21.

9. Алешкин В.А., Борисова И.В., Феклисова Л.В. Новые иммуноглобулиновые препараты для энтерального применения // Новые лекарственные препараты. М., 1997. - Вып. 2. - С. 3 - 11.

10. Алешкин В.А., Лютов А.Г., Антонян Р.К. Технологические аспекты вирусологической безопасности КИПа // Производственная трансфузиология на рубеже XXI века. М. - 1999. - С. 51 - 52.

11. Амбарцумян А.Д., Арутюнян К.Э., Тер-Степанян М.М. Молочнокислые бактерии в профилактике и лечении гнойно-воспалительных заболеваний //

12. Мат-лы VIII съезда Всерос. об-ва эпидемил., микробиол. и паразитологов. -М. 2002. - Т. 1 . - С. 132 - 133.

13. Апастасиев В.В. Разработка технологии получения нового поколения иммуноглобулинов для терапии инфекционных и аутоиммунных заболеваний человека.: Автореф.дисс. докт. биол. наук.- М. 1997. - 49 с.

14. Антонова Л.В. Острые воспалительные заболевания придатков матки: этиология, клиника, диагностика, терапия: Автореф. дис. докт. мед. наук. -М. 1990.-52 с.

15. Антоняи А.Р. Клинико-лабораторная эффективность пероральных иммуноглобулиновых препаратов при острых кишечных инфекциях вирусной и бактериальной этиологии у детей: Автореф.дис. канд. мед. наук. М. -1999. - 22 с.

16. Антоняи Р.К. Иммуноглобулин человеческий для внутривенного введения, вирусинактивированный // Производственная трансфузиология на рубеже XXI века. М. - 1999. - С. 39.

17. Арзуманян В.Г., Мокроносова М.А., Самуилова Т.Л., Гервазиева В.Б. Дрожжеподобные грибы на коже больных атопическим дерматитом // Ж. микробиол.- 1998.-№3.-С. 10-13.

18. Асцатурова O.P. Диагностика и лечение вульвовагинальной и хламидийной инфекции в 3 триместре беременности: Автореф дис. канд. мед. наук. -M.- 1998.-21 с.

19. Афанасьев С.С. Антитела против энтеробактерий, лизоцим и бета-лизины, стимулированные сапрофитами: Дис. канд. мед. наук. Воронеж. -1970.-205 с.

20. Афанасьев М.С., Алёшкин В.А., Сидорова И.С. и др. Результаты клинических испытаний комплексного иммунобиологического препарата

21. Кипферон-суппозитории // Аллергология и иммунология. 2000. - Т. 1, № 2. -С. 29.

22. Ашмарин И.П., Воробьев A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях. — JL: Медицинская литература, 1962. 179 с.

23. Ашмарин И.П., Васильев H.H., Амбросов В.А. Быстрые методы статистической обработки и планирование экспериментов. JL: Изд-во Ленингр. ун-та, 1975. - 77 с.

24. Бактерийный препарат нового поколения «Споробактерин» / A.B. Алешкин, С.С. Афанасьев, В.Ю.Давыдкин, Т.Н. Манько, И.Ю. Давыдкин, А.Г. Гаврин // Парафармацевтика. № 2 (12). - 2003. - С. 21.

25. Бала М.А., Смирнова A.A., Цой A.C. Эффективность энтеросорбентов в комплексной реабилитации больных хронической патологией пищеварительной системы // IX Российский национальный конгресс "Человек и лекарство" 8-12 апреля в Москве М. - 2002. - С. 39.

26. Балезин С.А. Практикум по физической и коллоидной химии. М.: Просвещение, 1980.-271 с.

27. Бевз Н.И. Новый препарат-эубиотик на основе двух видов бифидобактерий (В. bifidum и В. longum) и его нормализующая микробиоценоз кишечника активность: Дис.канд. биол. наук. М., 1991. -123 с.

28. Бекер М.Е. Обезвоживание микробной биомассы. Рига: Зинатне, 1967. -361 с.

29. Бекер М.Е., Дамберг Б.Э., Рапопорт А.И. Анабиоз микроорганизмов. -Рига: Зинатне, 1981. 247 с.

30. Белоусов В.А., Вальтер М.Б. Основы дозирования и таблетирования лекарственных порошков. — М.: Медицина, 1980. 216 с.

31. Бланков Б.И., Клебанов Д.Л. Применение лиофилизации в микробиологии. М.: Медгиз, 1961. - 263 с.

32. Блохина И.Н., Соколова К.Я., Аникина Т.А. Комплексное использование биологических препаратов для лечения и профилактики острых кишечных инфекций и заболеваний, вызванных условно-патогенными микроорганизмами у детей. М. - 1989. - С. 119 - 124.

33. Богданова В.В., Анцупова A.C. Испытание профилактической эффективности колибактерина в детских учреждениях // Научные основы вакцинно-сывороточного дела. 1969. - Казань. - С. 224 - 229.

34. Богданова В.В., Анцупова A.C. Испытание профилактической эффективности колибактерина в детских учреждениях // Научные основы вакцинно-сывороточного дела. 1969. - Казань. - С. 224 - 229.

35. Богомолов Б.П., Генина Г.С. Применение колибактерина в период реконвалесценции после острой дизентерии // Применение колибактерина для профилактики и лечения кишечных заболеваний и технология его производства. 1967. - М. - С. 232-235.

36. Болотов В.Д., Мурашова А.О., Феклисова JI.B. Новый минералопробиотик "Кальцидум" // Мат-лы VIII съезда Всерос. об-ва эпидемил., микробиол. и паразитологов. М. - 2002 - Т. 1. - С. 139.

37. Бондаренко В.М., Лиходед В.Г. Идеи И.И. Мечникова и современная микроэкология кишечника человека // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2008. - №5. - С. 23 - 29.

38. Бондаренко В.М., Воробьев A.A. Дисбиозы и препараты с пробиотической функцией // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -2004.-№1.-С. 84-92.

39. Бондаренко В.М., Грачева Н.М. Препараты пробиотики, пребиотики и синбиотики в терапии и профилактике кишечных дисбактериозов // Фарматека. 2003. - №7. - С. 56 - 63.

40. Борисова И.В., Мухина H.A. Получение и исследование иммуноглобулинов из отходов производства препаратов крови // Сб. науч. тр. «Препараты нормальных и специфических иммуноглобулинов человека» -М., 1976. Т. XVIII. - С. 69 - 78.

41. Борисова И.В. Содержание иммуноглобулинов в сыворотках крови и в отходах производства у-глобулина (в осадке Б) // Сб. науч. тр. «Препараты нормальных и специфических иммуноглобулинов человека». М., 1976. -T.XVIII. - С. 66 - 68.

42. Борисова И.В. Экспериментальные исследования по получению комплексных препаратов иммуноглобулинов из сывороток плацентарной крови: Дис.канд. биол. наук: 14.00.36. -М., 1979.-21 с.

43. Борисова И.В., Алешкин В.А., Холчев Н.В. Комплексные иммуноглобулиновые препараты для перорального и ректального применения // Сб. научных трудов "Иммунобиологические препараты". М. - 1989. - С. 5 -9.

44. Бэйли Дж. Методы химии белков // Пер. с англ. Под. ред. А.Е. Браунштейна. - М.: Мир, 1965. - 284 с.

45. Вельтищев Ю.Е., Святкина О.Б. Атопическая аллергия у детей // Рос. вестн. перинатол. и педиатрии. 1995. - № 1- С. 4-10.

46. Ветлугина К.Ф., Любарт A.M. Опыт профилактического применения колибактерина в детских учреждениях // Применение колибактерина для профилактики и лечения кишечных заболеваний и технология его производства. 1967. - М. - С. 125-127.

47. Вивденко М.И., Шабалин К.Н. Исследование условий получения равномерных капель размеров 1 0,5 мм. // Изв. вузов. Химия и хим. технол., 1965. - Т.8, №4. - С. 685 - 690.

48. Вилыианская Ф.Л., Поспелова В.В. Жизнь и научная деятельность профессора Л.Г. Перетца // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -1989,-№5.-С. 109-110.

49. Вилыпанская Ф.Л., Поспелова В.В., Рахимова Н.Г. Эффективность комплексного препарата бификол при хронических кишечных расстройствах //Сов. медицина. 1974. -№3.-С. 100- 104.

50. Витман A.A. Распыливание жидкости форсунками. — М.: ГосэнергоиздатД962. 246 с.

51. Влодавец В.В. Определение жизнеспособности бактерий в аэрозоле // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1963. - №4. - С. 46 - 50.

52. Водилова О.В. Значение углеводного состава кала для дифференциальной диагностики кишечных заболеваний у детей первого года жизни // Материалы VI Всерос. конфер. "Здоровое питание". М. - 2000. - С. 8-9.

53. Волынский М.С. Необыкновенная жизнь обыкновенной капли. М.: Знание, 1986.- 144 с.

54. Воробьёв A.A., Украинцев А.Д., Бережной A.M., Земсков Е.М. Влияние ферментов и секретов желудочно-кишечного тракта на вакцинный штамм ЕВ // Микробиология. 1976. - № 10. - С. 98 - 101.

55. Воробьёв A.A., Пак С.Г., Савицкая К.И. и др. Дисбактериозы у детей. Учебное пособие для врачей и студентов. М. - 1998. - 60 с.

56. Ворошилина H.H. Микробы вида Lactobacillus acidophilus как основа фармакопейных форм бактерийных препаратов: Дисс.канд. мед. наук. М., 1982.- 181 с.

57. Гавришева H.A., Антонова Т.В. Инфекционный процесс. Клинические и патофизиологические аспекты. Учебное пособие. С.-Петербург. - 1999. -256 с.

58. Гапонов К.П. Процессы и аппараты микробиологических производств. -М.: Легкая и пищевая промышленность, 1981. 240 с.

59. Глинка Н.Л. Общая химия: Учебн. пособие для вузов. 21-е изд., стереотипное / Под ред. В.А. Рабиновича. - Л.: Химия, 1980. - 720 с.

60. Глушанова H.A. Экспериментальное обоснование новых подходов к коррекции микробиоценоза кишечника: Дисс.док. мед. наук. Новокузнецк, 2005.-265 с.

61. Голдовский A.M. Анабиоз. Л.: Наука, 1981. - 136 с.

62. Гомберг М.А., Соловьев A.M., Некрасов A.B., Иванова A.C. Иммунотерапия при хроническом персистирующем урогенитальном хламидиозе // ЗППП. 1997. - № 4. - С. 34 - 36.

63. Гончарова Г.И. Бифидофлора человека, её защитная роль в организме и обоснование сфер применения препарата бифидумбактерина: Автореф.дис. док. биол. наук. М. - 1982. - 38 с.

64. Гончарова Г.И., Козлова Э.П., Лянная A.M., Чистякова В.И. Значение бифидофлоры для организма человека и необходимость её нормализации // Новые лекарственные препараты. Экспресс-информация. М. - 1987. - Вып. 4.-С. 1 - 5.

65. Гончарова Г.И. Изучение бифидобактерий, разработка препарата "Сухой бифидумбактерин" и его эффективность при кишечных заболеваниях детей первого года жизни: Автореф. .дис. канд. биол. наук. М. - 970. - 20 с.

66. Гончарова Г.И., Лянная A.M. Культуральная, морфологическая и биохимическая характеристика Bacterium bifidum // Тр. МНИИЭМ «Кишечные и воздушнокапельные инфекции». Т. XIII. - М., 1969. - С. 415 -426.

67. Государственная фармакопея СССР XI изд. М.: Медицина, 1990. -Вып. 1.-397 с.

68. Градус Л.Я. Руководство по дисперсионному анализу методом микроскопии. М.: Химия, 1979. - 232 с.

69. Грачёва Н.М., Гончарова Г.И., Аваков A.A. Применение бактерийных биологических препаратов в практике лечения больных кишечными инфекциями. Диагностика и лечение при дисбактериозе кишечника. Методические рекомендации. М. - 1986. - 23 с.

70. Грачёва Н.М., Ющук Н.Д., Чупринина Р.П. Дисбактериозы кишечника, причины возникновения, диагностика, применение бактерийных биологических препаратов (пособие для врачей и студентов). М. - 1999. - 44 с.

71. Грачёва Л.А. Цитокины в онкогематологии,- М.: Алтус. 1996. - 168 с.

72. Гранитов В.М. Хламидиозы Н.Новгород, Изд-во НГМА. - 2000. - 192

73. Грачева Н.М., Петрова М.С., Аваков A.A., Партии О.С. Иммуноглобулиновые препараты для энтерального применения в практике лечения детей и взрослых / Новые лекарственные препараты 2003. - Вып.4. -С.33 - 42.

74. Грачёва Н.М., Ющук Н.Д., Чупринина Р.П. Дисбактериозы кишечника, причины возникновения, диагностика, применение бактерийных биологических препаратов. М. - 1999. - 44 с.

75. Грачёва Н.М., Гаврилов А.Ф., Щербаков И.Т., Леонтьева H.H. Эффективность коротких курсов лечения бактерийными биопрепаратами у больных ОКИ // Новые лекарственные препараты. М. - 1990. - № 5. - С. 9 -16.

76. Грачёва Н.М., Чупринина Р.П., Мацулевич Т.В. Дифференцированное применение биологических бактерийных препаратов при острых кишечных инфекциях вирусно-бактериальной природы в современных условиях. Учебное пособие. М. - 1999. - 24 с.

77. Грачёва Н.М., Поспелова В.В., Гаврилов А.Ф. Применение колисодержащих бактерийных биопрепаратов у больных с дисбактериозом кишечника // Новые лекарственные препараты. Экспресс-информация. 1986. -М.-Вып. 12.-С. 1-5.

78. Грачёва Н.М., Поспелова В.В., Гаврилов А.Ф. Применение бактерийных биопрепаратов у больных с острыми кишечными инфекциями // Мед. аспекты микробной экологии. -1991.-М. С. 183- 191.

79. Грачева Н. М., Петров М. С., Аваков A.A., Партии О.С. Иммуноглобулиновые препараты для энтерального применения в практикелечения детей и взрослых // Новые лекарственные препараты. 2003. - Вып. 4. - С. 33 - 42.

80. Григорьев A.B., Бондаренко В.М., Абрамов H.A. Разработка и клиническая оценка пробиотика "Бифидумбактерин форте" // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1997. - № 3. - С. 92 - 96.

81. Гуйго Э.И., Журавская Г.К., Каухчешвили Э. Сублимационная сушка в пищевой промышленности. М.: Пищевая промышленность, 1972. -433 с.

82. Давыдкин Ю.П., Похиленко В.Д., Давыдкин В.Ю., Давыдкин И.Ю. Анализ системы получения продуктов тонкого биотехнологического синтеза с позиции системного подхода. Микробиологическое производство: Обзорн. информ. М.: НИИСЭНТИ, 1992. - Вып. 1. - 20 с.

83. Давыдкин И.Ю., Давыдкин В.Ю., Давыдкин Ю.П., Блинов В.М. Масштабирование процессов тонкого измельчения биологических материалов: Процессы и аппараты химико-фармацевтических производств: Обзорн. информ. НИИСЭНТИ, 1992. - Вып. 2. - 22 с.

84. Даниэльс Ф., Олберти Р. Физическая химия. М.: Мир, 1978. - 638 с.

85. Дашевский Ю.Я., Аваков A.A. Эффективность применения бификола при сальмонеллёзе // Сб. науч. тр. «Биологические препараты для профилактики, терапии и диагностики инфекционных заболеваний». М. -1983.-С. 102- 105.

86. Дей К., Селбин Д. Теоретическая неорганическая химия. 3-е. изд. М.: Химия, 1976.-567 с.

87. Демиховский И.Е. Бактерии-антагонисты, обитающие в полости рта человека, и возможность их терапевтического применения: Автореф.дис. канд. мед. наук. М., 1974. - 23 с.

88. Денисова И.В. Санитарно-гигиеническая и микробиологическая характеристика новых пробиотических препаратов «Соя-бифидум» и «Соя-лактум»: Автореф.дис. канд. мед. наук. Оренбург, 2006. - 23 с.

89. Демешева М.И. Совершенствование технологии лекарственных форм бифидумбактерина: Автореф.дис. канд. фарм. наук. Пермь, 2005. -22 с.

90. Долинов К.Е. Основы технологии сухих биопрепаратов. М.: Медицина, 1968. - 196 с.

91. Дубинин A.B., Бабин В.Н., Раевский П.М. Трофические регуляторные связи кишечной микрофлоры и макроорганизма (к патогенезу синдрома раздражённой толстой кишки) // Клинич. медицина. 1991. - № 7. - С. 24-28.

92. Дунский В.Ф., Никитин Н.В., Соколов М.С. Моподисперсные аэрозоли. -М.: Наука, 1975. 188 с.

93. Дьякова Е.И., Шандалов Б.Я. Применение сухого колибактерина с целью профилактики и терапии кишечных заболеваний у детей раннего возраста // Научные основы вакцинно-сывороточного дела. 1969. - Казань. -С. 222 - 224.

94. Евстратова К.И., Купина H.A., Малахова Е.Е. Физическая и коллоидная химия: Учеб. для фармвузов и факультетов / Под ред. К.И. Евстратовой. М.: Высшая школа, 1990. - 487 с.

95. Зайцева О.В., Левшин И.Б., Лаврентьев A.B. и др. Частота встречаемости и особенности течения бронхиальной астмы у детей, ассоциированной с Chlamydia pneumoniae // Педиатрия. 1999. - № 1. - С. 29 -33.

96. Заявка 2002106749 RU, МПК7 А61К 9/22. Оральные лекарственные формы / Й. Бартоломойз (DE), И. Циглер (DE); Грюненталь ГМБХ (DE). -Заявл. 29.08.2000; Опубл. 20.11.2003.

97. Заявка 2002117074 RU, МПК7 А61К 35/74. Способ получения сухих форм комплексного препарата-пробиотика / М.М. Алсынбаева, Ф.А. Байгузина, В.Ф. Кулагин, Т.Н. Кузнецова (RU). Заявл. 28.06.2002; Опубл. 27.02.2004.

98. Заявка 2002117254 RU, МПК7 А61К 33/06. Комплексный препарат / В.Д. Болотов, A.C. Зальцман, И.И. Вайншток и др. (RU). Заявл. 28.06.2002; Опубл. 20.01.2004.

99. Заявка 2006100740 RU, МПК А61К 35/00. Комплексный препарат-пробиотик в иммобилизованной и лиофилизированной форме и способ его получения / A.B. Молокеев, P.M. Ильина, P.M. Яцентюк и др. (RU). Заявл. 10.01.2006; Опубл. 20.07.2007.

100. Заявка 2004108581 RU, МПК7 А61К 35/66. Способ получения сухого пробиотического препарата «БАЦЕЛЛ» / А.И. Петренко, В.А. Ярошенко, А.Г. Кощаев и др. (RU). Заявл. 22.03.2004; Опубл. 27.09.2005.

101. Заявка 97110769 RU, МПК6 А61К 9/48. Способ получения капсул, содержащих бактерии В. bifidum (бифидумбактерин сухой в капсулах) / Б.И. Алин, О.Б. Красильникова, A.A. Ворончихин и др. (RU). Заявл. 26.06.1997; Опубл. 10.06.1998.

102. Заявка 99112456 RU, МПК7 А61К 35/74. Биопрепарат для повышения продуктивности / А.Н. Панин, Н.И. Малик, Е.В. Малик, И.Ю. Вершинина1Ш); ВГНИИ контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (БШ).-Заявл. 12.06.1999; Опубл. 10.06.2001.

103. Заявка 2000103216 ГШ, МПК 7 А61К 31/7064. Новая композиция / Бродхед Джоанн (ОВ); АСТРА ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ ЛТД. (ОВ). -№2000103216/14; Заявлено 29.06.1998; Опубл. 10.01.2002.

104. Заявка 2001101910 1Ш, МПК 7 А61К 9/127. Способ получения липосом / Грегориадис Грегори, Зади Брахим, Джайасекера Прамукх Налака (ОВ); ДЗЕ СЕКРЕТЕРИ ОФ СТЕЙТ ФОР ДЕФЕНС (ОВ). №2001101910/14; Заявлено 16.06.1999; Опубл. 27.11.2002.

105. Заявка 2005140093 БШ, МПК А61Ь 27/12. Неорганический резорбируемый материал для замены костей / Гербер Томас (БЕ); АРТОСС ГМБХ (ЭЕ). №2005140093/15; Заявлено 24.05.2004; Опубл. 27.06.2007.

106. Заявка 95110319 БШ, МПК 6 А61К 35/74. Способ получения пробиотического препарата / В.М. Батарагин, С.М. Кузина, М.Н. Мартовецкий, Н.Б. Голуб (БШ). Заявл. 19.06.1995; Опубл. 27.03.1996.

107. Заявка 2002129938 RU, МПК 7 C12N 1/20. Пробиотическая добавка и способ ее получения / Г.В. Кулаков, В.В. Михайлов, A.B. Колосков (RU). -Заявл. 11.11.2002; Опубл. 10.08.2004.

108. Зимон А.Д. Адгезия пыли и порошков. М.: Химия, 1976. - 432 с.

109. Зорик A.B., Алешкин В.А., Лютов А.Г. Новый способ выделения иммуноглобулинов из осадка Б // Материалы 1 Международного Конгресса «Биотехнология состояние и перспективы развития», 14-18 октября 2002 г. в Москве. - М.: ЗАО «ПИК «Максима», 2002. - С. 65.

110. Иммунохимический анализ // Под ред. Л.А.Зильбера. М.: Медицина, 1968.-300 с.

111. Иммунобиологические препараты и перспективы их применения в инфектологии / Под ред. Г.Г. Онищенко, В.А. Алешкина, С.С. Афанасьева, В.В. Поспеловой. М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2002. - 608 с.

112. Исрафилов А.Г., Лютов А.Г., Кудашева Г.Б. и др. Способ получения внутривенного иммуноглобулина (ВВИГ) с pH 3,9-4,4 // International jornal of immunorehabilitation. 1998. - № 10,- P. 174 - 181.

113. К вопросу использования электромагнитных аппаратов для получения высокодисперсных эмульсий / А.Г. Гаврин, В.Ю. Давыдкин, И.Ю. Давыдкин, В.М. Блинов, С.С. Афанасьев // Проблемы инфекционных болезней. -М.,2000. -Ч. 2.-С. 261 -266.

114. Каншина H.H. Оценка адгезии бактерийных препаратов как критерий эффективности их применения в комплексном лечении больных острой дизентерией: Дис.канд. мед. наук. -М. 1996. - 121 с.

115. Кантере В.М. Системный подход к анализу и синтезу промышленной системы культивирования микроорганизмов // В кн.: Применение математических методов в микробиологии. Пущино, 1975. - С. 97 - 119.

116. Карпов A.M., Улумиев A.A. Сушка продуктов микробиологического синтеза. М.: Пищевая промышленность, 1982. - 216 с.

117. Кафаров В.В., Винаров А.Ю., Гордеев Л.С. Системный подход к анализу биологических систем/ В кн.: Математическое моделирование сложных ХТС. Таллин, 1982. - С. 116 - 117.

118. Кафаров В.В., Винаров А.Ю., Гордеев Л.С. Моделирование и системный анализ биохимических производств. М.: Лесная промышленность, 1985. - 280 с.

119. Кашкин П.Н., Долииская А.Г., Соколова Н.М. О бактерицидных свойствах натурального желудочного сока // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол,- 1953. -№ 8. С. 59 - 64.

120. Кашковская Н.В. Экспериментально-клиническое обоснование применения биологических микробных препаратов в гинекологии и стоматологии: Автореф. дис. канд. биол. наук. М. - 1992. - 17 с.

121. Кельцев Н.В. Основы адсорбционной техники. М.: Химия, 1976. -511 с.

122. Кира Е.Ф. Бактериальный вагиноз: клиника, диагностика и лечение: Автореф. дис. докт. мед наук. С-П. - 1995. - 45 с.

123. Козлова Э.П. Микрофлора кишечника новорождённых детей в норме и патологии и восстановление её бифидумбактерином: Автореф.дис. канд. мед. наук. M. - 1978. - 25 с.

124. Коколина В.Ф., Зубакова О.В. Диагностика и лечение урогенитальных инфекций в гинекологии детского и подросткового возраста. Москва. - 1998. - 19 с.

125. Кокуев A.B. Действие ректального и ингаляционного введения лекарственных форм рекомбинантного а2-интерферона с комплексным иммуноглобулиновым препаратом при инфекционно-воспалительных заболеваниях: Дис.канд. мед. наук. М. - 2000. - 88 с.

126. Королюк A.M., Савичева A.M., Мартикайиен З.М. Пробиотическая стимуляция вагинальной микрофлоры // Мат-лы VIII съезда Всерос. об-ва эпидемия., микробиол. и паразитологов. М. - 2002. - Т. 1. - С. 186 - 187.

127. Короткий Н.Г., Бельмер C.B., Фабрика Н.П., Григорьева Е.В. К вопросу о патогенезе атопического дерматита // Вестн. Акад. постдипломн. мед. образования. М. - 1999. -№ 2. - С. 12 - 18.

128. Короткий Н.Г., Тихомиров A.A. Современная фармакотерапия аллергодерматозов у детей // Рос. педиатрич. журнал. 2000. - № 3. - С. 38 -41.

129. Крамарь B.C. Опыт лечения детей, больных хронической дизентерией, сухим колибактерином //Применение колибактерина для профилактики и лечения кишечных заболеваний и технология его производства. 1967. - М. -С. 134- 137.

130. Красик Jl.JI. Усовершенствование производства колибактерина и разработка нового экспериментального препарата из молочных бактерий штамма Lbm. plantarum 8Р-АЗ: Автореф.дис. канд. биол. наук. 1972. -Пермь. - 29 с.

131. Кузьменко Л.Г., Соколов А.Л., Капустин И.В. Инфицированность детей с бронхиальной астмой цитомегаловирусом и возбудителями микоплазмоза, пневмоцистоза, хламидиоза // Педиатрия. 1999. - № 1. - С. 15 -20.

132. Культивирование микроорганизмов в микрообъемах питательной среды / В.Ю. Давыдкин, С.С. Афанасьев, И.Ю. Давыдкин, В.А. Алешкин, A.A. Воробьев, А.Г. Гаврин, A.B. Зорик // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- № 3. -2003. С. 11 - 15.

133. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1980. - 293 с.

134. Лапин Б.А., Джикидзе Э.К., Крылова Р.И., Стасилевич З.К., Яковлева Л.А. Проблемы инфекционной патологии обезьян. М.: Издательство РАМН, 2004. - 140 с.

135. Лебедева О.В., Бажукова Т. А. Профилактика дисбиотических изменений у детей // Мат-лы VIII съезда Всерос. об-ва эпидемил., микробиол. и паразитологов. М. - 2002. - Т. 1. - С. 196 - 197.

136. Ленцнер A.A. Лактобактерии в профилактике и лечении дисбактериозов кишечника // Тез. докл. IV Всерос. съезда эпидемиологов и микробиологов. 1978.-М. - С. 123 - 124.

137. Ленцнер A.A. Антагонистическая активность лактобацилл микрофлоры человека // Мат-лы науч. конф. «Аутофлора здорового и больного организма». 1972. - Таллин. - С. 157 - 160.

138. Лизько H.H. Дисбактериозы экстремальных состояний //Антибиотики и медицинская биотехнология. 1987. - Т. 32, № 3. - С. 184 - 186.

139. Литяева Л. А. Микроэкологические подходы к профилактике инфекционных заболеваний у новорождённых: Автореф.дис. докт. мед. наук.-М.- 1992.-41 с.

140. Лукьянов А.Б. Физическая и коллоидная химия. М.: Химия, 1988. -288 с.

141. Лыкова Е.А., Бондаренко В.М., Сидоренко C.B. Сочетанная антибактериальная и пробиотическая терапия хеликобактер-ассоциированных заболеваний у детей // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1999. -№2.-С. 76-81.

142. Лыков A.B. Теория сушки. М.: Энергия, 1968. - 471 с.

143. Лютов А.Г., Алешкин В. А. Разработка внутривенного иммуноглобулина нового поколения // Сб. тр. МНИИЭМ им. Т.Н. Габричевского «Проблемы мед. биотехнологии и иммунологии инфекционных болезней». М., - 1996. - Т.2. - С. 21 - 27.

144. Лютов А.Г., Алешкин В.А., Исрафилов А.Г. Особенности производственного процесса приготовления комплексного иммуноглобулинового препарата // Актуальные вопросы диагностики, терапии и профилактики инфекционных заболеваний. М. - 1997.- С. 6.

145. Майстрах Е.В. Гипотермия и анабиоз. М.,Л.: Наука, 1964. - 327 с.

146. Мальнева Н.С. Изменение состояния тканей пародонта при воздействии некоторых экстремальных факторов: Автореф.дис. канд. мед. наук.-М.- 1997.- 16 с.

147. Мацулевич Т.В., Новокшонов А.А., Мурашова А.О. Пробифор в лечении острых кишечных инфекций // IX Российский национальный конгресс "Человек и лекарство", 8-12 апреля 2002 г. в Москве М.-С. 290.

148. Машкиллейсон А.С. Красный плоский лишай // Заболевания слизистой оболочки полости рта и губ. М. - 1992. - С. 10 - 13.

149. Маянский А.Н. Микробиология для врачей (очерки патогенетической микробиологии). Н.Новгород: Издательство Нижегородской государственной медицинской академии, 1999. - 400 с.

150. Мелихова А.В. Разработка технологии приготовления сухих дозированных форм комплексного иммуноглобулинового препарата: Автореф. дисс. канд. биол. наук. М. - 2010. - 29 с.

151. Мельничук Г.М. Применение эубиотика "Ацилакт" в комплексном лечении пародонтита: Автореф. дис. канд. мед. наук. М. - 1995. - 25 с.

152. Местное применение лекарственных форм, содержащих человеческий рекомбинантный интерферон а-2 / В.А. Алешкин, С.С. Афанасьев, М.С. Афанасьев и др. // Методические рекомендации. Астрахань, 2001. - 8с.

153. Методы общей бактериологии: Пер. с англ. / Под ред. Ф.Герхарда и др. М.: Мир, Т.1.- 1984. - С. 458 - 464.

154. Минушкин О.Н., Ар датская М.Д., Бабин В.Н. Изучение содержания и профиля летучих жирных кислот в кале у больных с дисбактеиозом толстой кишки // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. -1995.-T. V, № 3. С. 155.

155. Мирошник O.A. Бактерийные и биологические препараты для коррекции дисбиозов // Тез. Всерос. конфер. "Пробиотики и пробиотические продукты в профилактике и лечении наиболее распространённых заболеваний человека". М. - 1999. - С. 33.

156. Миттел К. Мицелообразование, солюбилизация и микроэмульсии. -М.: Мир, 1980.-598 с.

157. Митрохин С.Д. Метаболиты нормальной микрофлоры человека в экспресс-диагностике и контроле лечения дисбиоза толстой кишки: Автореф. дис. док. мед. наук. М. - 1998. - 37 с.

158. Молохова Е.И. Экспериментально-теоретическое обоснование составов, технологии и стандартизации лекарственных форм пробиотиков: Автореф. .дис. док. фарм. наук. Пермь, 2003. - 45 с.

159. Морозова В.Т., Миронова И.И., Марцишевская P.JI. Лабораторная диагностика патологии пищеварительной системы. М.: Лабора, 2005. - 128 с.

160. Мунблит В .Я., Тальрозе В.Л., Трофимов В.И. Термоинактивация микроорганизмов. -М.: Наука, 1985. 248 с.

161. Муравьев И.А. Технология лекарств. М.: Медицина, 1971. - 752 с.

162. Наумова О.В., Белова Е.Е., Хабазова Е.И. Аутофлора человека в норме и патологии и её коррекция. Горький. - 1988. - 52 с.

163. Несчисляев В.А. Пробиотики: микробиологические и технологические аспекты получения, контроля и конструирования препаратов: Автореф.дис. док. мед. наук. Пермь, 2005. - 45 с.

164. Никитин Е.Е. Сушка биопрепаратов методом распыления // Труды Московского НИИ эпидемиологии, микробиологии и гигиены «Сушка биологических материалов, вопросы механизации и автоматизации производства». -М., 1960. -Вып. VII. С. 151 - 161.

165. Никитин Е.Е. Сушка биопрепаратов методом распыления // Труды Московского НИИ эпидемиологии, микробиологии и гигиены «Сушка биологических материалов, вопросы механизации и автоматизации производства». -М., 1960.-Вып. VII. С. 151-161.

166. Никитин Е.Е., Звягин И.В. Замораживание и высушивание биологических препаратов. М.: Колос, 1971. - 343 с.

167. Нисевич Н.И., Гаспарян М.О., Новокшонов A.A. и др. Применение ударных доз бифидумбактерина-форте при острых кишечных инфекциях у детей // Terra medica. 1999.-№ 51.-С. 14-15.

168. Новик Т.Н., Астапович Н.И., Самарцев A.A., Рябая Н.Е. Выделение и характеристика белково-полисахаридного комплекса, секретируемого В. adolescentis // Микробиология. 1997. - Т. 66, № 5. - С. 621 - 627.

169. Новокшонов A.A., Соколова Н.В., Портных О.Ю. Клиническая эффективность энтеросорбента фильтрум при острых кишечных инфекциях у детей // IX Российский национальный конгресс "Человек и лекарство" 8-12 апреля в Москве М. - 2002. - С. 324.

170. Новые подходы к конструированию препаратов-пробиотиков на основе бифидобактерий / Бандоян А.К., Амерханова A.M., Алешкин В.А. и др. // Сб. науч. тр. «Проблемы инфекционных болезней». М., 2000. - С. 284 -286.

171. Обеспечение безопасности в клинико-диагностических лабораториях. Справочное пособие. М.: Лабора, 2006. - 336 с.

172. Озерная М.С. Клинико-микробиологическое обоснование применения бактерийных и иммунных препаратов при ОКИ у детей раннего возраста: Автореф. дис. канд. мед. наук.-М. 1991.-21 с.

173. Олейниченко E.B. Побочные биологические эффекты антибактериальной терапии у пульмонологических больных и пути их коррекции.: Автореф. дис. канд. мед. наук. 1977.-22 с.

174. Олейник И.И., Жданова Л.П., Быченко Б.Д., Робустова Т.Г. Бактериологическая диагностика неспорогенных анаэробных инфекций при острых одонтогенных воспалительных процессах. Методические рекомендации. — М. 1985. - 28 с.

175. Олейниченко Е.В. Эффективность аципола в профилактике дисбактериоза кишечника при антибактериальной терапии // Антибиотики и химиотерапия. 1999. - Т. 4, № 1. - С. 23 - 25.

176. Олейникова Е.А., Маковоз Р.К. Методика определения и природа бактерицидного действия желудочного сока // Лабораторное дело. 975. - № 4.-С. 239-242.

177. Осипова И.Г. Экспериментально-клиническое изучение споровых пробиотиков: Автореф. .дис. док. биол. наук. М, 2006. - 48 с.

178. Оценка способа получения сухой высокодисперсной вакцины вируса болезни Ньюкасла / В.Ю. Давыдкин, И.Ю. Давыдкин, В.А. Алешкин, А.Г. Гаврин, A.A. Ворообьев, С.С. Афанасьев // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2001. - № 2. - С. 45 - 49.

179. В.А. Калашникова, А.Г. Гаврин, A.B. Зорик, Л.И. Новикова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. № 3. - 2003. - С. 57 - 62.

180. Пажи Д.Г., Галустов B.C. Распылители жидкости. М.: Химия, 1979. -228 с.

181. Панин А.Н., Малик Н.И., Малик Е.В. Иммунобиология и кишечная микрофлора. "Аграрная наука", НК "Родник". - 1998. - 47 с.

182. Парфёнов А.И., Калоев Ю.К., Сафонова С.А. и др. Дисбактериоз кишечника // Московский мед. журнал. 1998. - Т. 1, № 12. - С. 7.

183. Патент 2270684 RU, МПК А61К 33/24. Лекарственный препарат «ВИТАСОРБ» / А.Г. Гриценко (RU). № 2005101244/15; Заявл. 20.10.2005; Опубл. 27.02.2006.

184. Патент 2076722 RU, МПК6 А61К 35/74. Способ получения сухой биомассы лакто-, коли- или бифидобактерий / B.C. Пучнин, H.H. Чугунова, В.А. Насчисляев (RU); Пермский фармацевтический институт (RU). № 94024323/13; Заявл. 29.06.1994; Опубл. 10.04.1997.

185. Патент 2227036 RU, МПК7 А61К 33/06. Способ лечения кишечных инфекций у детей / Т.В. Мацулевич, JI.B. Феклисова, JI.B. Титова, И.В. Щепина (RU); ЗАО «Партнер» (RU). № 2002109287/14; Заявл. 11.04.2002; Опубл. 20.04.2004.

186. Патент 2104299 RU, МПК6 C12N 1/04. Способ получения сухих бактериальных препаратов / В.И. Ходак, П.П. Фукс, В.Г. Квачов, Э.П. Петренчук (RU). № 96110483/13; Заявл. 24.05.1996; Опубл. 10.02.1998.

187. Патент 2043587 RU, МПК6 F26B 5/16. Способ сушки биологических материалов / А.И. Григоренко, Н.В. Крамской, A.B. Колосков и др. (RU); Вирусологический центр НИИ микробиологии МО РФ (RU). № 92001747/06; Заявл. 22.10.1992; Опубл. 10.09.1995.

188. Патент 2067114 RU, МПК6 C12N 1/20. Способ получения сухого пробиотического препарата / И.М. Нахабин, В.В. Перелыгин, Ю.С. Биркина, A.B. Старцев (RU); ГНИИ прикладной микробиологии (RU). № 5016135/13; Заявл. 05.12.1991; Опубл. 27.09.1996.

189. Патент 2164801 RU, МПК7 А61К 35/74. Препарат-пробиотик в сухой иммобилизованной форме / A.B. Молокеев, Л.Г. Никулин, P.M. Ильина и др. (RU); Дочернее ГУЭПП «Вектор-Биальгам» (RU). № 99125163/13; Заявл. 06.12.1999; Опубл. 10.04.2001.

190. Патент 1156693 СССР. Способ лечения воспалительных заболеваний женской половой сферы / Бакулева Л.П., Желнина Р.К., Нестерова A.A. и др. (СССР). Заявлено 20 июня 1982.

191. Патент 2146531 РФ. Способ лечения инфекционных заболеваний / Султанова С.В., Алёшкин В.А., Афанасьев С.С. и др. (РФ). Зарегистрирован 20.03.2000 г.

192. Патент 2137498 RU, МПК6 А61К 38/32. Способ лечения дисбактериозов кишечника / А.Л. Бурмистрова, Т.А. Суслова, Э.А. Рыбин и др. (RU). № 96119817/14; Заявл. 01.10.1996; Опубл. 20.09.1999.

193. Патент 2200566 RU, МПК7 А61К 35/74. Способ получения лактобактерина / В.А. Несчисляев, И.В. Фадеева (RU); Пермское НПО «Биомед» (RU). № 96119817/14; Заявл. 01.10.1996; Опубл. 20.09.1999.

194. Патент 2083666 RU, МПК6 C12N 1/20. Способ получения сухого бактериального препарата «Бифацид» / В.И. Ганина, В.Ф. Семенихина, В.Ф. Иноземцева и др. (RU). № 95113405/13; Заявл. 27.07.1995; Опубл. 10.07.1997.

195. Патент 2174400 RU, МПК7 А61К 35/74. Лечебно-профилактический препарат, содержащий бифидобактерии / Т.Н. Кузнецова, А.Ф. Садыкова, Т.А. Баталова, А.Н. Нуртдинова (RU); ГУП «Иммунопрепарат» (RU). № 2000111666/13; Заявл. 10.05.2000; Опубл. 10.10.2001.

196. Патент 2182008 RU, МПК7 А61К 35/74. Вводимая перорально, ректально или интравагинально композиция, содержащая живые бактерии / И.Н. Самойленко, О.И. Самойленко, Т.В. Хорошева и др. (RU). № 2000126345/14; Заявл. 20.10.2000; Опубл. 10.05.2002.

197. Патент 2185842 RU, МПК7 А61К 35/74. Лекарственный препарат для профилактики и лечения урогенитальных инфекций / Т.Н. Кузнецова, А.Ф.

198. Хазиев, O.B. Кунягина (RU); ГУП «Иммунопрепарат» (RU). № 99121116/14; Заявл. 06.10.1999; Опубл. 27.07.2002.

199. Патент 2065305 RU, МПК6 А61К 35/74. Способ получения сухого пробиотического препарата / В.Б. Зинченко, И.М. Нахабин, Ю.П. Падерин и др. (RU); ГНИИ прикладной микробиологии (RU). № 5015484/13; Заявл. 05.12.1991; Опубл. 20.08.1996.

200. Патент 2284354 RU, МПК C12N 1/20. Пробиотик / М. Микелсаар (ЕЕ), М. Зилмер (ЕЕ), Т. Куллисаар (ЕЕ), X. Аннук (ЕЕ), Е. Сонгисепп (ЕЕ); Тартусский университет (ЕЕ). № 2003137810/13; Заявл. 21.06.2002; Опубл. 27.09.2006.

201. Патент 2314819 RU, МПК А61К 35/74. Лечебно-профилактическое пробиотическое средство / А.И. Леляк, A.A. Малярчук (RU). № 2006122653/13; Заявл. 23.07.2004; Опубл. 27.02.2006.

202. Патент 2189833 РФ, А61К 39/395. Способ получения иммуноглобулинового препарата / A.B. Зорик, В.А. Алешкин, А.Г. Лготов, И.В. Борисова (РФ); ГУ МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского МЗ РФ. № 2000126310/14; Заявлено 19.10.2000; Опубл. 27.09.2002, Бюл. №27.-6 с.

203. Патент № 2140787 RU, МПК6 А61К 35/74. Способ получения бифидумбактерина сухого / Бубнов Н.В., Петров И.Г. (RU). № 98105327/13; Заявлено 13.03.1998; Опубл. 10.11.1999, Бюл. №3.-4 с.

204. Патент № 2232808 RU, МПК 7 C12N 7/00. Биопрепарат на основе бактериофагов для профилактики и лечения сальмонеллеза животных / Э.А. Светоч, С.В. Ленев, В.В. Перелыгин и др. (RU) № 2002127149/13; Заявл. 11.10.2002; Опубл. 20.07.2004, Бюл. № 20.-17 с.

205. Патент 2159624 RU, МПК7 А61К 35/66. Средство для коррекции микробиоценоза / Григорьев А.В., Егорова С.М., Григорьева Т.А. (UA); Григорьев А.В. (UA). №99104933/14; Заявл. 18.03.1999; Опубл. 27.11.2000, Бюл. №33.

206. Патент 1831801 СССР, В 01 F 13/08. Устройство для обработки материалов / И.Ю. Давыдкии, Ю.П. Давыдкин, В.Ю. Давыдкин, В.М. Блинов, С.Д. Никитинский (СССР). № 4927044/26; Заявлено 16.04.91; Зарегистрировано 13.10.1992 (непубл.). - 3 с.

207. Патент 2026730 РФ, B01F 13/08. Способ обработки материалов / И.Ю. Давыдкин, Ю.П. Давыдкин, В.Ю. Давыдкин, В.М. Блинов, С.Д. Никитинский (РФ). № 4915199/26; Заявлено 28.02.91; Опубл. 20.01.95, Бюл. №2.-5 с.

208. Перетц Л.Г. Значение нормальной микрофлоры для организма человека. М. - 1955. - 431 с.

209. Перетц Л.Г. СоН-антагонизм и Coli-терапия. Ленинград, 1935. - 80 с.

210. Петрова Л.В. Комплексная терапия заболеваний слизистой оболочки рта и красной каймы губ с применением эубиотиков // Сб. тр. юбил. конф. педиатр, ф-та РГМУ «Актуальные вопросы дерматологии и венерологии». -М -1997.-С. 163 164.

211. Петрянов-Соколов И.В., Сутугин А.Г. Аэрозоли. М.: Наука, 1989. -144 с.

212. Подольский В.М. Высушивание препаратов крови и кровезаменителей.- М.: Медицина, 1973.- 192 с.

213. Полинг JI. Общая химия. М.: Мир, 1974. - 846 с.

214. Покатилова А.И., Галкина Л.А., Мацулевич Т.В. Результаты использования высоких доз бифидумбаюгерина-форте при ОКИ у детей раннего возраста // Новые технологии в терапии и профилактике инфекционных заболеваний у детей. Санкт-Петербург. - 2000. - С. 46.

215. Поспелова В.В., Пожалостина Л.В., Агеева Л.В. Коррекция микробиоценоза желудочно-кишечного тракта и полости рта с помощью ацилакта // Мат-лы конф. "Идеи Пастера в борьбе с инфекциями". С.Петербург. - 1998. - С. 210.

216. Поспелова В.В. Микробные биопрепараты для коррекции бактериоценоза кишечника, их конструирование и применение: Дисс.док. мед. наук. М., 1979. - 459 с.

217. Поспелова В.В., Грачёва ILM., Ханина Г.И. Эубиотики эффективное средство нормализации микрофлоры и вклад МНИИЭМ в их разработку (к 100-летию института) // Врач. - 1997. - № 4. - С. 30 - 32.

218. Поспелова В.В., Манвелова М.А., Рахимова Н.Г. Ацидофильные лактобактерии и их значение в системе средств, регулирующих бактериоценоз //В кн.: Медицинские аспекты микробной экологии. 1991. - М. - С. 175 -182.

219. Прахин Е.И., Куртасова JI.M., Перьянова О.В. Оценка эффективности биовестина у детей, инфицированных микобактериями туберкулёза // Материалы VI Всерос. Конф. «Здоровое питание». М. - 2001. - С. 161 - 162.

220. Применение препаратов интерферона в лечении воспалительных заболеваний лимфаденоидного кольца глотки /В.А. Алешкин, С.С. Афанасьев, В.Ю. Давыдкин, Т.Н. Манько, И.Ю. Давыдкин, А.Г. Гаврин // Медицинская картотека. №1. - 2003. - С. 26 - 27.

221. Применение замораживания-высушивания в биологии // Под ред. Р. Харриса. М.: Иностранная литература, 1956. - 533 с.

222. Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы // Сб. матер, междунар. конф. под ред. В.А. Алешкина, 2-4 июня 2004 г. в Москве. М., 2004. - 242 с.

223. Пробиотические микроорганизмы современное состояние вопроса и перспективы использования // Сб. матер, междунар. науч.-практич. конф. памяти Г.И. Гончаровой под ред. В.А. Алешкина. - М., 2002. - 88 с.

224. Производственный регламент. Комплексный иммуноглобулиновый препарат сухой для энтерального применения (КИП). Immunoglobulinum complexus siccum ad usum enteralem / Минздрав РФ: Введ. 30.05.1996. M., 1996.-86 с.

225. Протоклитова Н.С., Воротынцева Н.В., Трембовля С.И. Применение бификола и бифидумбактерина при лечении детей, больных дизентерией и сальмонеллёзом // Тез. докл. I Всерос. съезда инфекционистов «Кишечные инфекции и инвазии» 1977. - Уфа. - С. 177- 179.

226. Равич-Биргер Е.Д., Эпштейн-Литвак Р.В. Бактериологические и серологические методы исследования при инфекционных заболеваниях. М.: Медицина, 1965.-248 с.

227. Равич-Щербо М.И., Новиков В.В. Физическая и коллоидная химия. -М.: Высшая школа, 1975. 255 с.

228. Разработка технологии приготовления твердой дозированной формы БАД «Биобактерин» / В.Ю. Давыдкин, В.А. Алешкин, А.Г. Гаврин и др. // Тез. докл. VII Российского национального конгресса «Человек и лекарство», 10-14 апреля 2000 г. М.,2000. - С. 568.

229. Разработка мягкой лекарственной формы с цитокинами / Т.Н. Манько, С.С. Афанасьев, В.Ю. Давыдкин, В.А. Алешкин, А.Г. Гаврин, И.Ю. Давыдкин, A.B. Мелихова // Материалы II Московского международного

230. Конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития», 10-14 ноября 2003 г. в Москве. М.: ЗАО «ПИК «Максима», 2003. - 4.1. - С. 144 - 145.

231. Разработка измельчителя для биопрепаратов / Давыдкин И.Ю., Давыдкин В.Ю., Давыдкин Ю.П. и др. // Медицинская промышленность и биотехнология. Наука-производство-маркетинг. 1992. - Вып. 7. - С. 11- 33.

232. Рахимова Н.Г. Разработка комплексного бактерийного препарата бификола и его эффективность при кишечных расстройствах, связанных с дисбактериозом: Автореф. дис. канд. биол. наук. 1977. -М. - 16 с.

233. Репринцева С.М., Федорович Н.В. Новые методы термообработки и сушки химико-фармацевтических препаратов. Минск: Наука и техника, 1979.-248 с.

234. Розенцвейг П.Э., Сандер Ю.К. Технология лекарств и галеновых препаратов. Д.: Медицина, 1967. - 772 с.

235. Рокасуева JI.A. Атопический дерматит у детей: комплексная терапия с использованием ацидофильного лактобактерина: Автореф. дис. канд. мед. наук.-М.- 1996.- 16 с.

236. Рощупкин В.И., Лукашевич К.К., Самусевич Н.Т. Бификол в комплексной терапии острой дизентерии // Сов. медицина. 1977. - № 5. - С. 60 - 66.

237. Савельева P.A. О бактерицидном действии натурального желудочного сока на туляремийный микроб // Ж. микробиол. 1956. - № 2. -С. 42 - 47.

238. Савицкая К.И., Воробьёв A.A., Русанова Е.В. и др. Роль неспорообразующих анаэробов в формировании микробного пейзажа содержимого толстой кишки у больных с воспалительными процессами различной локализации // Вестн. РАМН. 1996. - № 2. - С. 15-23.

239. Сайфуллин М.А., Зверева H.H. Энтеросгель в лечении острых кишечных инфекций у детей // IX Российский национальный конгресс "Человек и лекарство" 8-12 апреля в Москве М. - 2002. - С. 391.

240. Самарцев A.A., Астапович H.H., Новик Г.И. Особенности роста и образования внеклеточных протеиназ Bifidobacterium adolescentis 94-БИМ //Микробиология. 1997. - Т. 66, № 5. - С. 635 - 639.

241. Сапожникова B.C. Разработка и изучение свойств антистафилококкового и противостолбнячного иммуноглобулинов для внутривенного введения: Автореф. дис. канд.биол. наук. Л., 1990. - 20 с.

242. Семенихина В.Ф., Ганина В.И., Лешина B.C., Банникова A.A. Сухой молочный продукт "Бифацид" // Сб. науч. тр. ВНИМИ "Производство десертных молочных продуктов. 1986. - М. - С. 45 - 47.

243. Сенов П.Л. Фармацевтическая химия. М.: Медицина, 1978. - С. 132 -133.

244. Серебрянский Ю.Е., Афанасьев С.С., Алёшкин В.А. Проблемы цитокинотерапии инфекционных заболеваний. М. - 2000. - 106 с.

245. Скирда Г.И., Лаврушко B.C. Влияние молочного колибактерина на кишечную микрофлору детей, больных острой дизентерией Зонне // Труды Моск. НИИЭМ «Кишечные и воздушно-капельные инфекции». 1969. - М. -Т. XIII.-С. 281 - 282.

246. Смирнова Г.И. Аллергодерматозы у детей (особенности течения и тактика лечения): Автореф. дис. докт. мед. наук. М. - 1997. - 46 с.

247. Смирнов В.В., Резник С.Р., Выоницкая В.А. и др. Современные представления о механизмах лечебно-профилактического действия пробиоти-ков из бактерий рода Bacillus // Микробиол. журнал. 1993. - Т. 55, № 4. - С. 92-112.

248. Смирнова Т.В., Шелекетина И.И., Чернякова В.И., Селезнёва С.И. О лечебном действии колибактерина // Врачебное дело. 1982. - № 11. — С. 68 -71.

249. Сорокулова И.Б. Перспективы применения бактерий рода Bacillus для конструирования биопрепаратов // Антибиотики и химиотерапия. 1996. - Т. 41, № 10.-С. 13 - 15.

250. Сорокулова И.Б. Сравнительное изучение биологических свойств биоспорина и других коммерческих препаратов па основе бацилл //Микробиол. журнал. 1997. - Т. 35, № 6. - С. 43 - 49.

251. Сорокулова И.Б. Влияние пробиотиков из бацилл на функциональную активность макрофагов // Антибиотики и химиотерапия-1998. Т. 44, №2. -С. 20 - 23.

252. Сорокулова И.Б. Теоретическое обоснование и практика применения бактерий рода Bacillus для конструирования новых пробиотиков: Автореф. дис. докт. биол. наук. 1999. - Киев. - 37 с.

253. Способ обезвоживания КИП методом распылительного высушивания / Давыдкин В.Ю., Давыдкин И.Ю., Афанасьев С.С. и др. // Сб. матер, конф. «Пробиотические микроорганизмы современное состояние вопроса и перспективы использования». - М., 2002. - С. 67.

254. Способ получения тест-культуры / Давыдкин И.Ю., Давыдкин В.Ю., Алибеков К.Б., Давыдкин Ю.П., Егоров О.П. // Передовой производственный опыт в медицинской промышленности, рекомендуемый для внедрения. -1991.-Вып. 11 12.-С. 6- 10.

255. Стасилевич З.К. Экспериментальные сальмонеллезы и колиэнтериты у обезьян. Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Сухуми, 1961. -22 с.

256. Стасилевич З.К., Кебу Т.И., Томасян A.B., Сахарова Т.В. Этиологическая структура шигеллезов у обезьян Адлерского питомника // Журн. микробиол. 1994.- Т.6. - С. 7 - 8.

257. Студеникин М.Я., Соколова Т.С. Аллергические болезни у детей. М. - 1986.-287 с.

258. Суворова К.Н. Атопический дерматит: иммунопатогенез и стратегия иммунотерапии // Рус. мед. журнал. Спец. выпуск "Дерматология". 1998. -№6.-С. 363 - 367.

259. Тамм А.О., Вия М.П., Микельсаар М.Э. и др. Метаболиты кишечной микрофлоры в диагностике дисбактериоза кишечника //Антибиотики и медицинская биотехнология. 1987. - № 3. - С. 191 - 195.

260. Тарасова Н.Б. К выбору штаммов лактобактерий для введения в препараты, нормализующие микрофлору кишечника // Тр. Моск. НИИЭМ «Кишечные и воздушно-капельные инфекции». 1969. - М. - С. 444 - 449.

261. Тарасова Н.Б. Опыт получения сухого лактобактерина // Тр. Моск. НИИЭМ «Кишечные и воздушно-капельные инфекции». 1969. - М. - Т. 13 -С. 450-456.

262. Трембовля С.И., Воротынцева Н.В., Курносова H.A. Применение биологического препарата бификола для долечивания детей реконвалесцептов дизентерии. Методические рекомендации. М. - 1977.- 6 с.

263. Технологическая инструкция к ТУ 9280-003-49947596-99 на производство биологически активной пищевой добавки «Биоангин». -Москва, 1999.-36 с.

264. Торопова Н.П., Синявская O.A., Градинаров A.M. Тяжёлые (инвалидизирующие) формы атопического дерматита у детей. Методы медико-социальной реабилитации // Рус. мед. журн. 1997. - 11. - С. 713 -720.

265. Трофимова И.Б., Мищурис Л.А., Гевондян B.C. и др. Новое в патогенезе и лечении атопического дерматита // Вестн. дерматол. и венерол. -2001.-№ 2.-С. 9- 13.

266. ТУ 9383-001-18756307-2003. Кипацид. Биологически активная добавка к пище. 11 с.

267. ТУ 9383-002-18756307-2000. Таблетки «СЕПТОФЕРОН». Биологически активная добавка к пище.- ОАО «Иммуно-Гем». 2000. - 11 с.

268. Тутова Э.Г., Куц П.С. Сушка продуктов микробиологического производства. М.: Агропромиздат,1987. - 303 с.

269. Ульямс В., Ульямс X. Физическая химия для биологов. М.: Мир, 1976.-600 с.

270. Ульянова И.Л. Влияние коррекции биоценоза влагалища на исходы хирургического лечения у больных с гиперпластическими процессами шейки матки: Автореф. дис. канд. мед. наук. М. - 1994. - 24 с.

271. Уорсинг А., Геффнер Дж. Методы обработки экспериментальных данных: Пер. с англ. // Под ред. A.C. Монина. М.: Иностранная литература, 1953. - 345 с.

272. Учайкин В.Ф., Новокшонова A.A., Соколова И.В., Корнюшин М.А. Современные подходы к лечению ОКИ у детей // Педиатрия. 1996. - № 3. -С. 49- 54.

273. Федосеев К.Г. Физические основы и аппаратура микробного синтеза биологически активных соединений. М.: Медицина, 1977. - 304 с.

274. Феклисова J1.B., Новокшонова В.А. Кишечная коли-инфекция у детей. Учебное пособие. М. - 1996. - 14 с.

275. Феклисова Л.В. Клинико-лабораторная характеристика кишечных и респираторных инфекций у детей: Автореф. дис. докт. мед. наук. М. - 1975. -29 с.

276. Феклисова Л.В., Мескина Е.Р., Галкина Л.А. и др. Применение комбинированных иммунобиологических препаратов для лечения инфекционных болезней у детей // Новые лекарственные препараты 2003. -Вып.4. - С. 43 - 52.

277. Феклисова Л.В., Ганина В.И., Иноземцева В.Ф. и др. Новый микробный препарат бифацид при лечении детей, больных ОКИ // Российский вестник перинатологии и педиатрии. 1996. - № 4. - С. 18 - 22.

278. Феклисова Л.В., Мескина Е.Р., Покатилова А.И. и др. Новые комбинированные иммунобиологические препараты в лечении вирусно-бакгериальных инфекций у детей. Пособие для врачей. М. - 2002. - 16 с.

279. Феклисова JI.В., Новокшонова В. А., Галкина Л.А. и др. Иммуноглобулины человека в лечении вирусно-бактериальных инфекций у детей. Пособие для врачей. Москва. - 1999. - 15 с.

280. Феклисова Л.В., Ганина В.И., Иноземцева В.Ф. и др. Новый микробный препарат Бифацид в лечении детей, больных острыми кишечными инфекциями // Рос. вестн. перинаталогии и педиатрии. — 1996. Т. 41, № 4. -С. 18-21.

281. Феклисова Л.В., Королёва Н.С., Бавина H.A. и др. Новый биологический препарат аципол для лечения и оздоровления детей. Учебное пособие. М. - 1996. - 12 с.

282. ФСП 42-0194695305. Иммуноглобулиновый комплексный препарат (КИП), лиофилизат для приготовления раствора для приема внутрь. ЗАО «Иммуно-Гем» - 2006. - 19 с.

283. Фукс H.A. Механика аэрозолей. М.: Изд-во АН СССР, 1955. - 352 с.

284. Хавкин А.И., Жихарева Н.С. Опыт применения сорбентов у детей с функциональными нарушениями желудочно-кишечного тракта // IX Российский национальный конгресс "Человек и лекарство" 8-12 апреля в Москве М. - 2002. - С. 479 - 480.

285. Халенева М.П. Эффективность разных способов накопления и обезвоживания биомассы в производстве таблетированного бифидумбактерина: Дис.канд. биол. наук. -М., 1984.-204 с.

286. Ханина Г.И. Бактерийные препараты в неампулированных формах и изыскание способов их защиты от разрушающих воздействий: Дис.канд. биол. наук: 03.00.07. М., 1980. - 236 с.

287. Холчев Н.В. Препараты нормальных и специфических иммуноглобулинов человека // Сб. тр. «Очистка и стандартизация препаратов крови человека». М. - 1980. - С. 3 - 14.

288. Хронические и рецидивирующие заболевания носоглотки хламидийной этиологии у детей / В.А. Алешкин, Н.В. Лобачев, С.С. Афанасьев и др. // Проблемы инфекционных болезней. М., 2000. - Ч. 2. - С. 113-116.

289. Чахкиев P.O. Роль клеточного и гуморального иммунитета в патогенезе красного плоского лишая: Автореф. дис. канд. мед. наук. Киев. -1980.- 16 с.

290. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора и её роль в поддержании здоровья человека // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. 1998. - Том VIII. - С. 61 - 65.

291. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. / Том I: Микрофлора человека и животных и её функции. М., "Грант". - 1998.-288 с.

292. Шендеров БА. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том 3: Пробиотики и функциональное питание. М.:ГРАНТЪ, 2001. -288 с.

293. Шерман Ф. Эмульсии. JL: Химия, 1972. - 448 с.

294. Щербаков И.Т. Патоморфология слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта при острых бактериальных, вирусных кишечных инфекциях и хронических колитах: Дис. докт. мед. наук. М. - 1996. - 240 с.

295. Щербаков И.Т., Гаврилов А.Ф., Грачёва Н.М. и др. Влияние лактосодержащих бактерийных биологических препаратов на процессы репарации в слизистой оболочке толстой кишки // Сб. науч. тр. МНИИЭМ «Иммунобиологические препараты». 1989. - М. - С. 157 - 161.

296. Шебекова В.М., Феклисова JI.B., Целипанова Е.Е. и др. Противодифтерийный иммуноглобулиновый препарат человека в лечении больных дифтерией // Материалы VIII съезда педиатров России. — М. — 1998. — С. 176.

297. Эльпинер И.Е. Ультразвук. Физико-химическое и биологическое действие. М.: Физматгиз, 1963. - 420 с.

298. Эткинс П. Физическая химия. М.: Мир, 1980. - Т.1 - 557 с.

299. Ярных B.C. Применение аэрозолей в ветеринарии.- М.: Сельхозиздат, 1962. 240 с.

300. A hyperefficient process for enzymatic cellulose hydrolysis in the intensiv mass transfer reactor / Sinitsyn A.P., Gusakov A.V., Davydkin I.Yu., Davydkin V.Yu., Protas O.V. // Biotechnol. Letters. 1993. - V. 15, № 3. - P. 283 - 288.

301. Akao Т., Che G.M., Kobashi K. et al. Isolation of a human intestinal anaerobe Bifidobacterium sp. strain SEN, capable of hydrolyzing sennosides to sennidins // Appl.- Environ.-Microbiol. 1994. - V. 60, № 3. - P. 1041 - 1043.

302. Annuk H., Schepetova J., Kullisaar T. Characterization of intestinal lactobacilli as putative probiotic candidates // J. of Appl. Microbiol. 2003. -Vol.94.-P. 403 -412.

303. Antheunisse J., de Bruin-Tol J.W., van der Polvan Solst M. E. Survival of microorganisms after drying and storage // Ant. van Leuw. J. Serol. Microbiol. -1981. Vol.47, №6. - P. 539 - 545.

304. Ballow M. Mechanisms of action of intravenous immunoglobulin: clinical implications in autoimmune and inflammatory diseases // Intravenous immunoglobulin: research and therapy. Bath.- UK.- 1996.- P. 123 128.

305. Barandun S., Kistler P., Jenet F., Isliker H. Intravenous administration of human y-globulin // Vox sanguinis. 1962. - V.7, № 2 .- P. 157 - 174.

306. Barandun S., Isliker H. Development of immunoglobulin preparations for intravenous use // Vox sanguinis. 1986. - V. 51. - P. 157 - 160.

307. Bengmark S. Ecological control of the gastrointestinal tract. The role of probiotic flora // Gut. 1998. - V. 42. - P. 2 - 7.

308. Berkman S.A., Lee M.L., Gale R.P. Clinical uses of intravenous immunoglobulins // Annals of internal medicine. 1990. - V. 112, № 4. - P. 278 -292.

309. Bougie D., Reland N., Lebeurrier F., Arhan P. Effect of propionibacteria supplementation on fecal bifidobacteria and segmental colonic transit time in healtly human subjects // Scand. J. Gastroenterol. 1999. - V. 34, № 2. - P. 144 -148.

310. Cauci S., Driussi S., Monte R. et al. Immunoglobulin A response against Gardnerella vaginalis hemolysin and salidase activity in bacterial vaginosis // Am. J. Obstet. Gynaecol.- 1998.-V. 178, № 3. P. 511 -515.

311. Cisalpino E.O., Pereira L.H., De Carvalho A.C.T. Rotavirus in Callithrix Geoffroyi (Humbolt, 1812) // A primatologia no Brasil. 1991. - Vol.3.- P. Ill -117.

312. Cooper R.R. Immunologic aspects of atopic dermatitis // Current Concepts in Skin Disorders. 1986. - № 4. - P. 10 - 23.

313. De Roos N.M., Katan M.B. Effects of probiotic bacteria on diarrhea, lipid metabolism and carcinogenesis: a review of papers published between 1988 and 1998 // Am. J. Clin. Nutr. 2000. - Vol.71, №2. - P. 405 - 410.

314. De Simone C., Famularo G., Harp J. et al. Effect of Lactobacilli on Cryptosporidium parvum infection in man and animals // Microecol. Therapy. — 1995.-V. 25.-P. 23-31.

315. Decker R. Diagnostik and therapie genitaler infectionen wahrend kindheit, pubertat and adoleszenz // Gynaekol. 1983. -Bd. 16, № 1. - S. 56 - 60.

316. Delire M. Immunoglobulins. Rationale for the clinical use of polyvalent intravenous immunoglobulins. Petersfield.- UK. - 1995. - 88 p.

317. Dzhikidze E.K., Stasilevich Z.K., Krylova R.I. Spontaneous bacterial and viral infections in non-human primates // Baltic J. Lab. Anim. Sci. 1999. - Vol.9. -P. 98- 112.

318. Eichhorn W., Czerny C.-P. Enteric coronaviruses in primates // Zentralbl. Veterinarmed. B. 1988. - Vol.35. - P. 709 - 712.

319. Eugster A.K., Kalter S.S., Kim C.S., Pinkerton M.E. Isolation of adenoviruses from the baboons (Papio sp.) with respiratory and enteric infection // Arch. Gesamte Virusforsch. 1969. - Vol. 26. - P. 260 - 270.

320. Fang H., Elina T., Heikki A., Seppo S. Modulation of humoral immune response through probiotic intake // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2000. -Vol. 29, №1,- P. 47 -52.

321. Fuller R. Probiotics in man and animals // J. Appl. Bacteriol. 1989. - №66. -P. 365 - 378.

322. Fuller R. Probiotics in human medicine // Gut. 1991. - Vol.32, №4. - P. 439 - 442.

323. Fuller R., Gibson G.R. Probiotics and prebiotics: microflora management for improved gut health // Clin. Microbiol. Infect. 1998. - №4. - P. 477 - 480.

324. Gall L.S. Normal fecal flora of man // Amer. J. Clin. Nutr. 1970. - V. 23, № 11. - P. 1457- 1465.

325. Goerg K.J., Schlorer E. Probiotic therapy of pseudomembranous colitis. Combination of intestinal lavage and oral administration of Escherichia coli // Dtsch. Med. Wochenschr. 1998. - V. 123, № 43. - S. 1274 - 1278.

326. Haenel H. Human normal and abnormal gastrointestinal flora // Amer. J. Clin. Nutr.-1970.-V. 23, № 11.-P. 1433 1439.

327. Hanifin J.M., Chan S.C. Diagnosis and treatment of atopic dermatitis // Dermatol. Ther. 1996. - № 1. - P. 9 - 18.

328. Hill M.J. Metabolism of carbohyrates and glycosides // Microbial Metabolism in the Digestive Tract. / ed. Hill M.J. Acad. Press N.-Y. - 1986. - P. 31-40.

329. Hirayama K., Rafter J. The role of probiotic bacteria in cancer prevention // Microb. Infect. 2000. - V. 2, № 6. - P. 681 - 686.

330. Homoe P., Prag J., Olsen C.B., Farholt S. Nasopharyngeal bacteria found on blood agar plates from healthy children in Greenland // Int. J. Circumpolar. Health.- 1998. Vol. 57, № 1. - P. 32 - 39.

331. Holzapfel W.H., Haberer P., Geisen R. et al. Taxonomy and important features of probiotic microorganisms in food and nutrition // Am. J. of Clin. Nutr. -2001. Vol.73. -P. 3655 - 3735.

332. Holzapfel W.H., Haberer P., Snel J. et al. Overview of gut flora and probiotics//Int. J. of Food Microbiol. 1998. - Vol.41. - P. 85 - 101.

333. International symposium on Atopic Dermatitis (6th) and European immunodermatology Society meeting (7th) (7-9 June, 1996). Aarbus, Dehmark.

334. Kailasapathy K.A., Chin J. Survival and therapeutic potential of probiotic organisms with reference to Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium spp. // Immunol. Cell. Biol. 2000. - Vol.78. - P. 80 - 88.

335. Kawai V., Konishi H., Horitsu H.H. et al. Purification and characterization of D-xylose isomerase from Bifidobacterium adolescentis // Biosci. Biotechnol. Biochem. 1994. - V. 58, № 4. - P. 691 - 694.

336. Khedkar J.N., Sannabhadti S.S., Dave J.M. Inhibitory effect of Bifidobacterium adolescentis (Hbl) on faecal coliform count // J. of Dair. Foods and Home Sciences. 1994.-V. 13, № 03/04.-P. 187- 191.

337. Kiss T., Gratwohl A., Frei R. et al. Bacillus subtilis infections // Schweiz. Rundsch. Med. Prax. 1988. - № 77. - P. 1219 - 1223.

338. Larsen B., Galask R.P. Vaginal microbial flora : composition and influences of host physiology // Ann. Intern. Med. 1982. - V. 96, № 8. - P. 926 -930.

339. Lee A., Neglected N. The microbial ecology of the gastrointestinal tract // Adv. Microbiol. Ecol.- 1985. V. 8.-P. 115 - 162.

340. Lee S.K, Kim V.B., Ji G.E. Note: purification of amylase secreted from Bifidobacterium adolescentis // J. Appl. Microbiol. 1997. - V. 83, № 3. - P. 267 -272.

341. Lilly D.M., Stillwell R.H. Probiotics: growth promoting factors produced by microorganisms // Science. 1965. - Vol.147, №3659. - P. 747 - 748.

342. Liotet S., Catalan F., Franck M. Immunisation anti-Chlamydia apres stimulation du systcme de defense immunitaire des muqueuses par voie orale ches l'animal // Bull. Acad. vet. Fr. 1993. - Vol. 66, № 1. - P. 63 - 70.

343. Luckey T.D. Introduction to the ecology of the intestinal flora // Amer. J. Clin. Nutr. 1970,-V. 23, № 11.-P. 1430- 1432.

344. Luckey T.D. Overview of gastrointestinal microecology // Die Nahrung-1987. V. 31, № 5-6. - P. 359 - 364.

345. McClure H.M., Strozier L.M., Keeling M.E. Enteropathogenic Escherichia coli infection in anthropoid apes // J. Am. Vet. Med. Assoc. 1972. -Vol. 161. -№6. - P. 687 - 689.

346. Moore W.E., Holdeman L.V., Cato E.P. et al. Variation in periodontal floras // Infect. Immunol. 1984. - V. 46. - P. 720 - 726.

347. Moore W.E., Holdeman L.V., Smibert R.M. et al. Bacteriology of severe periodontitis in young adult humans // Infect. Immunol. 1982. - V. 38. - P. 1137 -1148.

348. Moore W.E., Holdeman L.V., Smibert R.M. et al. Bacteriology of experimental gingivitis in children // Infect. Immunol. 1984. - V. 46. - P. 1 - 6.

349. Monk G.W., McCaffrey P.A., Davies M.S. Studies on the mechanism of sorbed water killing of bacteria // J. Bacteriol. 1957. - V.73. - P. 661 - 672.

350. Mukai T., Toba T., Ohori H. Collagen binding of Bifidobacterium adolescentis // Curr.-Microbiol. 1997. -V. 34, № 5. - P. 326 - 331.

351. Novik G.I., Astapovich N.I., Riabaia N.E., Bogdan A.S. Biological activity of the protein-polysaccharide complex secreted by Bifidobacterium adolescentis // Microbiologiia. 1997. - V. 66, № 5. - P. 628 - 634.

352. Nissle A. Uber die Grundlagen einer neuen ursachlichen Bekämpfung der patologischen Darmflora // Dtsch. Med. Wochenschr. 1916. - № 42. - S. 1181 -1184.

353. Nissle A. Die antagonistische Behanlung chronischer Darmstorungen mit Colibacterien // Med. Klinik. 1918. - V. 2, № 14. - S. 29 - 30.

354. Oggioni M.R., Pozzi G., Vaiensin P.E. Recurrent Septicemia in an Immunocompromised Patient Due to Probiotic Strains of Bacillus subtilis // J. Clin. Microbiol. 1998.-Vol. 36.-№ i.p. 325 -327.

355. Onderdonk A.B. Wissemann K.W. Normal vaginal microflora // In: "Vulvovaginitis".-N-Y-Basel-Hong Kong. 1993. - P. 285 - 303.

356. Onions A., Smith D. Current status of culture preservation and technology // Brobl. Cult. Collect. Symp. Osaka, 1984. - P. 41 - 47.

357. Pathology of Simian Primates / An edit.: R.N.T-W-Fiennes-London. 1972. -VI.-929 p.

358. Plein K., Holtz J. Therapeutic effects of Saccharomyces boulardii on mild residual symptoms in a stable phase of Cron's disease with special respect to chronic diarrhea- a pilot study // Z. Gastroenterol. 1993. - V. 31, № 2. - S. 129 -134.

359. Richard V., Van der Auwera P., Snoeck R. et al. Nosocomial bacteremia caused by Bacillus species // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1988. - № 7. - P. 783 -785.

360. Roberfroid M.B. Prebiotics and probiotics: are they functional foods? // Am. J. Clin. Nutr. 2000. - Vol.71,№6. - Suppl. - P. 1682 - 1687.

361. Romond M.B., Chadli N., Mitsuoka T., Romond C. Host-intestinal microflora interactions: role of mucus and gynolactose // Bifidobacteria and Microflora. 1990. - V. 9, № 2. - P. 119 - 130.

362. Rosebury T. Experimental air-born Infection. Baltimore, 1947.

363. Saarela M., Lahteenmaki L., Critterden R. et. al. Gut bacteria and health foods the European perspective // Int. J. of Food Microbiol. - 2002. - Vol.78. - P. 99-117.

364. Sampson H.A., Jolic P.L. Increased plasma histamine concentration after food challenges in children with atopic dermatitis // Engl. J. Med. 1984. - V. 311. -P. 372 - 376.

365. Sampson H.A., Jolic P.L. Increased plasma histamine concentration after food challenges in children with atopic dermatitis // Engl. J. Med. 1984. - V. 311. -P. 372- 376.

366. Sanders M.E. Overview of functional foods: emphasis on probiotic bacteria //Int. Dairy J. 1998.-Vol.8, №5/6.-P. 341 -347.

367. Savage D.C. Microbial ecology of the gastrointestinal tract // Ann. Rev. Microbiol. 1977.-V. 31.-P. 107 - 133.

368. Schwartz R.S. Overview of biochemistry and safety of a new native intravenous gamma globulin, IGIV, pH 4.25 // Amer. J. Medicine. 1987. - V. 83. -Suppl. 4A. - P. 46 - 51.

369. Simon G.L., Gorbach S.L. Intestinal microflora // Med. Clin. North. Amer.- 1982. V. 66.-P. 567-574.

370. Staffar K. H., Jahn J., Claussen N. Flowavility of Powders under the influence of vibrations // Pouder Mettalurgy International. 1977. - V.9. - P. 20 -23.

371. Strickland R.G. Gastritis // Springer sem. Immunopathol. 1990. - Bd.12. -H.2/3.-P. 203 -217.

372. Strus M. The significance of lactic acid bacteria in treatment and prophylaxis of digestive tract disorders // Postepy-Hig.-Med.-Dosw. 1997. - V. 51, №6.-P. 605 -619.

373. Stuker G., Oshiro L.S., Schmidt N.J. et al. Virus detection in monkeys with diarrhea: the association of adenoviruses with diarrhea and possible role of rotaviruses // Lab. Anim. Sci. 1979. - Vol.29. - P. 610 - 616.

374. Superantigens: Molecular biology, immunology and relevance to human disease. / Ed. By Leung Y.M., Huber B.T., Schlievert P.M.-Marcel Dekker, Inc. NY-Basel-Hong Kong. 1977.

375. Thestrup-Pedersen K. Environmental factors and atopic dermatitis- And who has the disease increased in incidence? // JEADV. 1997. -V. 9, Supp 1. - P. 16.

376. Thomas M., and Whittet H. Atypical meningitis complicating a penetrating head injury // J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 1991. - № 54. - P. 92 - 93.

377. Thomas J.P. A comparative Study of the viability of bacterial aerosols // Doct. diss, series Publ. Michigan. - 1955. - №13. - P. 49.

378. Velasco E., De Sousa Martins C.A., Tabak D., Bouzas L.F. Bacillus subtilis infection in a patient submitted to a bone marrow transplantation // Rev. Paul. Med. 1992. - № 110.-P. 116-117.

379. Veld J.H., Bosschaert M.A.R., Shortt C. Health aspects of probiotics // Food Sci. Technol. Today. 1998. - Vol.12, №1. -P.46 - 50.

380. Wallet F., Crunelle V., Roussel-Delvallez M. et al. Bacillus subtilis as a cause of cholangitis in polycystic kidney and liver disease // Am. J. Gastroenterol. -1996.-№91.-P. 1477- 1478.

381. ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ НАУКИ «МОСКОВСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭПИДЕМИОЛОГИИ И МИКРОБИОЛОГИИ ИМ. Г.Н.ГАБРИЧЕВСКОГО» ФЕДЕРАЛЬНОЙ СЛУЖБЫ ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗАЩИТЫ ПРАВ ПОТРЕБИТЕЛЕЙ И БЛАГОПОЛУЧИЯ ЧЕЛОВЕКА

382. ТЕХНОЛОГИЯ И КОНСТРУИРОВАНИЕ СУХИХ БИОПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ МИКРОКАПЕЛЬНЫХ1. ПОРОШКОВ052011504981. На правах рукописи1. ДАВЫДКИН ВАЛЕРИЙ ЮРЬЕВИЧ0301.06 Биотехнология

383. Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук

384. Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор С.С.Афанасьев1. МОСКВА-20111. ОГЛАВЛЕНИЕ1. ВВЕДЕНИЕ. 81. ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

385. ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ: ПРИМЕНЕНИЕ В ПРАКТИКЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И ТЕХНОЛОГИИ ПРИГОТОВЛЕНИЯ. 21

386. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

387. ГЛАВА 3. ФОРМИРОВАНИЕ МИКРОКАПЕЛЬНОГО ПОРОШКА. 84

388. Микрокапельный порошок как дисперсная система.84

389. Устройство для приготовления микрокапельных порошков 91

390. Обоснование требований к размерам микрокапель в порошке.94

391. ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ ПЕРЕРАБОТКИ СИСТЕМЫ АЭРОСИЛ

392. СУСПЕНЗИЯ В ЭЛЕКТРОМАГНИТНОМ ДИСПЕР-ГАТОРЕ. 100

393. Обоснование показателей состояния системы аэросил-жидкость при получении микрокапельных порошков. 100

394. Изучение зависимости выживаемости микроорганизмов от режимных параметров процесса образования микрокапельных порошков в ЭМД. 105

395. ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОЦЕССА СОРБЦИОННО-КОНТАКТНОГО ОБЕЗВОЖИВАНИЯ МИКРОКАПЕЛЬНЫХ ПОРОШКОВ. 125

396. Сорбционно-контактное обезвоживание МП энтеральных микроорганизмов. 139

397. ГЛАВА 6. КОНСТРУИРОВАНИЕ КОМПЛЕКСНЫХ БИОПРЕПАРАТОВ. 146

398. Обоснование компонентного состава комплексного препарата КИП и В. adolescentis МС-42. 146

399. Приготовление сухого биопрепарата комплекса иммуноглобулинов и бифидобактерий. 148

400. ГЛАВА 7. ИССЛЕДОВАНИЕ ЗАЩИТНЫХ СВОЙСТВ СТРУКТУРНОГО КОМПОНЕНТА ПРЕПАРАТА. 175

401. Оценка гигроскопичности сухого препарата, полученногоиз микрокапельного порошка. 175

402. Изучение in vitro защитного эффекта аэросила при моделировании воздействия неблагоприятных факторов пищеварительной системы. 177

403. Рентгенография прохождения капсулами верхних отделов желудочно-кишечного тракта обезьян. 185

404. ГЛАВА 8. ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ КОМПЛЕКСНОГО

405. ПРЕПАРАТА КИП И В. ADOLESCENTIS МС-42. 190

406. Оценка острой токсичности биопрепарата. 190

407. Изучение безвредности и терапевтической эффективности препарата КИП и В. adolescentis МС-42 на обезьянах. 1901. ЗАКЛЮЧЕНИЕ. 2061. ВЫВОДЫ. 215

408. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ. 2171. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ. 2191. СОКРАЩЕНИЯ

409. AJIT аланинаминотрансфераза ACT - аспартатаминотрансфераза АтД - атопический дерматит ББП - бактериальные биопрепараты ББФ - бифидумбактерин-форте

410. БЭТ изотермы сорбции Брунауэра, Эммета и Теллера

411. ГМ гидролизатно-молочная среда

412. ГФ XI государственная фармакопея XI издания

413. ЖКТ желудочно-кишечный тракт

414. ЗС защитная среда (среда высушивания)

415. ИГАРВ антиротавирусный иммуноглобулин1. ИФН-а интерферон-альфа

416. КД-5 казеиново-дрожжевая среда №5

417. КИП комплексный иммуноглобулиновый препарат1. КПД красный плоский лишай

418. КС концентрированная суспензия

419. КСО коэффициент сорбционного обезвоживания

420. JIT лактозо-тиомочевинная защитная среда1. МП микрокапельный порошок

421. ОКИ острая кишечная инфекция

422. ОНФО ороназофарингеальная область

423. ОРВИ — острая респираторная вирусная инфекция1. ПС питательная среда

424. ПЭГ полиэтиленгликоль (полиэтиленоксид)

425. РБ — рецидивирующий бронхит

426. РИД радиальная иммунодиффузия

427. РПГА — реакция пассивной гемагглютинации

428. СЖ сахарозо-желатиновая защитная среда

429. СЖМ сахарозо-желатино-молочная защитная среда1. ТГ тиогликолевая среда

430. УПМ условно-патогенные микроорганизмы

431. ФГК ферментативный гидролизат казеина1. ФМТ — ферромагнитные тела

432. ФСП фармакопейная статья предприятия

433. ХГП — хронический генерализованный пародонтиг

434. ХРАС хронический рецидивирующий афтозный стоматит

435. ЭМД электромагнитный диспергаториммуноглобулин

436. М, ^А иммуноглобулины классов в, М и А1. ВВЕДЕНИЕ1. Атуальность проблемы

437. Важное значение симбиотической микрофлоры для организма человека к настоящему времени общепризнанно и обосновано результатами многочисленных исследований 25, 107, 201, 226, 278, 316, 375, 376, 394, 396, 413, 415, 417, 429,433, 451, 458, 461.

438. На основе анализа и в эксперименте идентифицировать микрокапельный порошок как дисперсную систему, определить его основные свойства и требования к размерам микрокапель жидкости. Обосновать выбор устройства для приготовления микрокапельного порошка.

439. В экспериментах in vitro исследовать защитные свойства структурного компонента препарата наноразмерного разобщителя аэросила.

440. Теоретическое значение работы

441. С использованием разработанного метода сконструированы комплексные биопрепараты КИП и В. adolescentis МС-42, КИП и L. acidophilus (смесь штаммов NK1; ЮОаш и К3Ш24).

442. Внедрение результатов работы

443. На основании проведенных исследований оформлено 10 патентов на изобретения:

444. Пат. 2161887 RU, A23D 9/00. Биологическая активная добавка / В.А. Алешкин, С.С. Афанасьев, В.Ю. Давыдкин, О.В. Рубальский, И.Ю. Давыдкин,

445. Г.И. Ханина, А.Г. Гаврин, A.B. Алешкин, JI.A. Денисов, Д.С. Афанасьев, М.С. Афанасьев (RU). Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 20.01.2001. Патентообладатель коллектив авторов.

446. Пат. 2247578 RU, А61К 39/395. Состав, обладающий-противомикробным действием / A.B. Мелихова, В.А. Алешкин, В.Ю. Давыдкин, И.Ю. Давыдкин, С.С. Афанасьев, И.В. Борисова, О.В. Рубальский,

447. A.Г. Гаврин (RU). Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 10.03.2005. Патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора.

448. Патент РФ № 2371200, МПК А61К 39/395. Способ получения иммуноглобулинового препарата / Мелихова A.B., Давыдкин В.Ю., Алешкин

449. B.А., Давыдкин И.Ю. Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 27.10.2009. Патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора.

450. Государственном реестре изобретений Российской Федерации 20.04.2008. Патентообладатели ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора, ГУ НИИ МП РАМН.

451. Разработан лабораторный регламент приготовления комплексного биопрепарата КИП и В. ас1о1езсепйз МС-42.

452. Основные положения, выносимые на защиту:

453. Диссертация апробирована на заседании Ученого Совета ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора 28 апреля 2009 г. протокол № 4.

454. Объем и структура диссертации

455. ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ: ПРИМЕНЕНИЕ В ПРАКТИКЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И1. ТЕХНОЛОГИИ ПРИГОТОВЛЕНИЯ

456. В нашей стране коррекцию дисбиотических нарушений проводят, как правило, назначением иммунобиологических препаратов с учетом особенностей возбудителя заболевания и иммунологического статуса организма.

457. Сферы применения иммунобиологических препаратов

458. У девочек при клинических проявлениях вульвовагинита, бактериального вагиноза и субкомпенсированного дисбиоза применение местной аппликации лактобактерина способствовало устойчивой стабилизации нормального уровня лактофлоры 157.

459. Результаты комплексной терапии инфекции урогенитального тракта с применением эубиотиков демонстрировали большую эффективность в плане реабилитации структуры и функции плацентарной ткани при хронической внутриматочной инфекции 35.

460. В группах больных с аналогичными формами заболеваний, получавших другой лактосодержащий пробиотик "Лактобактерин", получены несколько менее выраженные положительные результаты, чаще сохранялись дисбактериальные нарушения бактериоценоза.

461. Постоянство дисбиотических нарушений ОНФО и кишечника у детей с врождённой кранио-фациальной патологией определяет необходимость коррекционной бактериотерапии на разных этапах хирургического лечения 1, 196, 287, 373.

462. Опыт применения споровых биологических бактерийных препаратов при острых кишечных инфекциях у детей до настоящего времени невелик.

463. Состав и лекарственные формы биопрепаратов

464. Первый отечественный бифидосодержащий пробиотик

465. Вариант производственного штамма В. adolescentis МС-42 (В-1) входит в состав двухкомпонентного пробиотика «Бифацид», содержащего дополнительно штамм L. acidophilus и разработанного ВНИИ молочной промышленности 320, 364.

466. Отдельную группу составляют биопрепараты на основе живых культур микроорганизмов, не свойственных бактериоценозу человека апатогенных представителей рода Bacillus.

467. Анализ технологий приготовления сухих биопрепаратов

468. Основными физическими факторами, регулирующими интенсивность обмена веществ в живых клетках, являются температура и влажность.

469. При снижении температуры системы (криоанабиоз) подавляется активность ферментов, замедляется обмен веществ, развитие, рост, движение и т.д. 180.

470. Состояние ксероанабиоза достигается обезвоживанием различными способами, наибольшее распространение из которых получили сублимационное, распылительное и контактно-сорбционное высушивание.13.1.1. Получение сухих материалов методом распылительной сушки

471. В. М. Подольским получены положительные результаты распылительного высушивания кровезаменителей: низкомолекулярного поливинилпирролидона (гемодез), полиглюкина, гидролизата казеина, гидролизина, белкового кровезаменителя БК-8 282.

472. В ряде случаев распылительное высушивание биопрепаратов позволяет получать результаты, не уступающие сублимационному обезвоживанию.

473. Сохранение специфической активности биокомпонентов находится в прямой зависимости от температуры обезвоживания. Однако сушка жидких биоматериалов в слое при низких температурах и атмосферном давлении протекает крайне медленно.

474. Процесс сублимационной сушки включает три этапа: 1) замораживание материала; 2) сублимацию льда и удаление образующихся паров; 3) удаление связанной влаги при температуре выше 0°С (досушивание).

475. Сущность иммобилизации заключается в том, что биокомпонент прикрепляется к поверхности сорбента или проникает в его структуру (капилляры, поры). При использовании пористых сорбентов (активные угли, силикагели и др.) реализуются оба варианта.

476. Вакуумную или сублимационную сушку используют для обезвоживания иммобилизованной глюконатом кальция биомассы штамма В. subtilis ЗН при получении таблетированной формы препарата-пробиотика 231.

477. Таблетки дозированная лекарственная форма, получаемая прессованием лекарственных или смеси лекарственных и вспомогательных веществ, предназначенная для внутреннего, наружного, сублингвального, имплантационного или парентерального применения 80.

478. При приготовлении колибактерина в капсулах сухую культуру размельчали, т.е. получали порошок, и заполняли им твердые желатиновые капсулы 293.

479. Исходя из изложенного, разработку технологии получения сухих биопрепаратов, отличающейся универсальностью в плане возможности переработки биологических субстанций различной природы, следует считать актуальной.

480. Предпосылкой успешного решения такой задачи может явиться подход к конструированию препаратов на основе использования микрокапельного состояния биокомпонентов.

481. ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ21. Материалы21.1. Микроорганизмы

482. В качестве модельного микроорганизма использовали облигатные аэробные бактериии Serratia marcescens. Штамм S. marcescens ВКМ-851 был получен из Всесоюзной коллекции микроорганизмов (Пущино).

483. В исследованиях использовали также:

484. Entherococcus (Str.) faecium ГНКИ-27 биокомпонент некоторых пробиотических препаратов (коллекция НИИ прикладной микробиологии, Оболенск);

485. Escherihia coli М-17 биокомпонент пробиотического препарата Колибактерин (коллекция НИИ особо чистых биопрепаратов, г. Санкт-Петербург);

486. Работы с S. marcescens, Е. faecium и Е. coli проводились на базе ВНИИ прикладной биохимии. Исследования с использованием В. adolescentis и L. acidophilus в МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского.21.2. Питательные и защитные среды

487. Для глубинного выращивания S. marcescens применяли питательную среду (ПС) на основе гидролизата рыбо-костной муки (РКМ) состава: КН2Р04 0,8 гхл"1,

488. MgS04x7H20 0,12 гхл"1, FeS04x7H20 - 0,08 гхл"1, глицерин - 8,0 млхл"1, вода дистиллированная - до 1,0 л. Содержание аминого азота - от 160 до 320 мг%. рН среды до стерилизации - 7,0±0,2.

489. Перед инокулированием питательной среды клетками микроорганизмов в нее вносили глюкозу в количестве 0,8% объемных.

490. Клетки Е. coli выращивали в среде на основе казеинового гидролизата (МРТУ-42) с 230-250 мг% аминного азота, рН 7,0-7,5 и с 0,1-0,4% хлорида натрия с добавкой 0,5-0,6% пептона и 3,5-4,0% агара.

491. Накопление клеток L. acidophilus проводили в гидролизатно-молочной (ГМ) среде с аминным азотом 118-135 мг%, пептоном 0,5-1,0%, натрием хлористым 0,18-0,20% и триптофаном 34-43 мг%. рН среды 6,4-6,6.

492. Для остальных микроорганизмов лактозо-тиомочевинную защитную среду (ЗС) состава (% масс.): лактоза - 20,0, тиомочевина — 6,6, полиглюкин -1,5, аскорбиновая кислота - 3,6, вода дистиллированная - 68,3.

493. Для анализа иммуноглобулиновых фракций КИП использовали моноспецифические антисыворотки к иммуноглобулинам человека ^М и сыворотку крови человека с известным содержаниемиммуноглобулинов, антисыворотку ко всем белкам плазмы крови человека.

494. Оценку изменения специфической активности КИП проводили с помощью диагностикума эритроцитарного сальмонеллезного О-антигенного жидкого (комплексного).

495. Стабилизацию жидкости при получении микрокапельных порошков осуществляли гидрофобным аэросилом марки АМ-1-300 и Я 972.

496. В качестве основных влагоемких сорбентов использовали карбоксильный катионит КБ-4П-2 с рН водной вытяжки 10,0-11,0 и окись алюминия основную с рН водной вытяжки 8,0-9,0.

497. Для получения жидкого хладоагента с начальной температурой минус 18-22°С использовали смесь льда и хлорида натрия в соотношении 10:3 по массе.

498. В качестве модельной жидкости на первых этапах исследований процесса получения микрокапельных порошков использовали дистиллированную воду.

499. Перечень материалов и реактивов приведен ниже.

500. Наименование Норматив Примечание

501. Антисыворотки к ^С, Sigma for immunochem. res.и ^А

502. Антисыворока ко всем Sigma for immunochem. res.белкам

503. Диагностикум ФС 42-3408-97сальмонеллезный

504. Диагностикум ФС 42 3403-97шигеллезный

505. Агар ГОСТ 16280-89 Бактериологический

506. Гидролизат казеина ТУ 9385-002- Бактериологичекий00479327-98

507. Пептон ферментативный ГОСТ 13805-76 Б актериологическийсухой

508. Молоко сухое обезжирен- ГОСТ 10970-87 Массовая доля основногоное вещества 98 %

509. Масло иммерсионное ГОСТ 13739-78 Для микроскопии

510. Альбумин БС ТУ 09-10-342-75 Марки А

511. Аэросил АМ-1-300 ТУ-6-18-185-19

512. Аскорбиновая кислота ГФ X, ст. 6 Ч.д.а.

513. Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72

514. Глицерин ГОСТ 6259-75 Ч.д.а.

515. Глюкоза ГОСТ 975-88 Ч.д.а.1. Глицин ГОСТ 5860-75 Ч.1. КБ-4П-2 ГОСТ 20298-74

516. CysteinxHClxH20 D-6900 Heidelberg 1 für biochemischen

517. Лактоза ТУ 6-09-2293-79 Ч.д.а.

518. Сахароза ГОСТ 5833-75 Ч.д.а.

519. Полиглюкин (декстран) ГОСТ 6034-74

520. Тиомочевина ГОСТ 6344-73 Х.ч.1. AI 203 ТУ 6-09-426

521. CH3C00Nax3H20 ГОСТ 199-78 Х.ч.

522. С2Н5ОН ГОСТ 5262-67 Ректификат

523. FeS04x7H20 ГОСТ 4148-78 Х.ч.

524. H2S04 ГОСТ 14262-78 ОСЧ 11-151. HCl ГОСТ 3118-77 Х.ч.

525. HOC(CH2COOH)2COONH4 ГОСТ 7234-79 Ч.

526. K2HP04x3H20 ГОСТ 2493-75 Х.ч.

527. MgS04x7H20 ГОСТ 4523-77 Х.ч.

528. MnS04x5H20 ГОСТ 435-77 Х.ч.1. NaCl ГОСТ 4233-77 Х.ч1. NaOH ГОСТ 11078-78 Х.ч21.4. Экспериментальные животные

529. Испытания острой токсичности комплексного биопрепарата на основе КИП и бифидобактерий проведены на 50 беспородных белых мышах обоих полов на базе вивария МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского.

530. Использовано 5 здоровых и 29 больных острой кишечной инфекцией с диарейным синдромом обезьян 166.22. Методы исследований22.1. Культивирование микроорганизмов, концентрирование биомассы и введение защитных сред

531. Подготовку биомассы к обезвоживанию проводили смешением концентрированной биомассы соответствующих микроорганизмов с соответствующей защитной средой в массовом соотношении 2:1.

532. Биомассу В. adolescentis МС-42 и смесь трех штаммов L. acidophilus получали из лаборатории биологии бифидобактерий МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского (рук. д.б.н. A.M. Амерханова).22.2. Микробиологические методы

533. Ресусиендирование проб биоматериалов осуществляли с использованием программируемого ротационного шуттель-аппарата МиШ ЯБ-бО не менее 301. МИН.

534. БК = Ых 10 х V/ Р, где БК- биологическая концентрация клеток в материале, КОЕ/г, КОЕ/мл;

535. И- среднее арифметическое числа колоний в пробирках;п степень последнего разведения;

536. V- объем разводящей жидкости, мл;

537. Р навеска сухого (г) или объем жидкого (мл) материала.

538. БК = Ых10п+1хУ/Р, где БК- биологическая концентрация ¡слеток в материале, КОЕ/г, КОЕ/мл;

539. И- среднее арифметическое числа колоний на чашках;п — степень разведения;

540. V- объем разводящей жидкости, мл;

541. Р навеска сухого (г) или объем жидкого (мл) материала.

542. Доверительный интервал концентрации клеток в материалах определялся с вероятностью 95 % по формуле1.5/N = 2 /Т 0,5,где Т- общее количество колоний во всех пробирках или на всех чашках в данном разведении.

543. Жизнеспособность микроорганизмов после воздействия различных факторов оценивали по их выживаемости.

544. Выживаемость клеток в процессе получения микрокапельных порошков (В{) рассчитывали по формуле

545. В, = БКмпх (.1+ у)х 100/БКбс, где БКЛШ концентрация клеток в МП, КОЕ/г;

546. БКбс концентрация живых клеток в биосуспензии, КОЕ/мл; отношение массы аэросила к массе биосуспензии в МП.

547. Выживаемость микроорганизмов при обезвоживании МП до промежуточной влажности или в отделенном рассевом сухом порошке (В2) определяли по выражению

548. Выживаемость микроорганизмов при приготовлении сухого препарата сорбционным обезвоживанием (Вз) рассчитывали по формуле

549. Вз = БКпхМпх 100 / БКмпх Ммп, где БКп концентрация клеток в сухом препарате, КОЕ/г;

550. Мп масса сухого препарата, г;

551. Млт масса МП, взятого для приготовления сухого препарата, г.

552. Выживаемость микроорганизмов в процессе хранения материалов (В4) определяли по отношению концентрации живых клеток в хранившихся материалах к таковой в свежеприготовленных.22.3. Иммунохимические методы

553. Преципитацию в геле по Оухтерлони проводили в соответствии с 133. в 1 % агаре, используя при этом моноспецифические антисыворотки к ^О, ^А, ^М человека.

554. Определение антисальмонеллезной активности осуществляли методом РПГА с помощью соответствующих диагностикумов согласно инструкциям производителя в соответствии с 303.

555. Концентрацию белка в образцах определяли спектрофотометрически на СФ-46 или КФК-3-01 56. Для этого измеряли оптическую плотность исследуемого белкового раствора при 280 и 260 нм. Затем рассчитывали концентрацию белка по формуле Калькара:

556. С = 1,45 х ОД280 0,74 х ОД260 , где С - концентрация белка, мг/мл;

557. ОД280 показатель оптической плотности раствора при 280 нм;

558. ОД260 показатель оптической плотности раствора при 260 нм.

559. С = 8Х(А./А2), где С концентрация общих липидов, г/л;

560. А1 оптическая плотность пробы;

561. А2 оптическая плотность стандарта.22.4. Физико-химические методы

562. Физико-химические характеристики жидкостей определяли в соответствии с рекомендациями 31.

563. Вязкость растворов и биосуспензий определяли, используя стеклянные капиллярные вискозиметры типа ВПЖ, по методике изготовителя. Величину вязкости рассчитывали по известной формуле, с учетом приведенной в паспорте постоянной вискозиметра.

564. Плотность жидкостей измеряли с помощью набора стеклянных ареометров.

565. Поверхностное натяжение жидкостей определяли методом отрыва кольца.22.5. Физические методы

566. Относительную и остаточную влажности различных материалов определяли гравиметрически, выдерживанием навесок в сухо-жаровом шкафу при 105°С до постоянной массы.

567. Реологические характеристики порошков (насыпная и утрясочная плотность, угол естественного откоса, текучесть и т.д.) определяли в соответствии с рекомендациями 129.

568. Разделение сухих препаратов на компоненты (сорбент и биокомпонент) проводили на вибростенде Laborette-20 Fritch или вибросите Vipo с использованием мини сита с размером ячеек 100 мкм.

569. Относительную влажность воздуха в помещениях измеряли гигрометром М-19.

570. Дезинфекционную обработку бокса после проведения работ осуществляли аэрозолями 1% хлорамина или 3% перекиси водорода с 0,5% моющего средства с экспозицией не менее 1 часа.

571. Фасовку сухих биопрепаратов в твердые желатиновые капсулы осуществляли в фармацевтической машине МС-2 Туре 1 Регт по инструкции изготовителя.

572. Методы получения микрокапельных порошков и их сорбционно-контактного обезвоживания подробно описаны в соответствующих разделах работы.

573. Некоторые частные методические приемы приведены в дальнейшем изложении при описании экспериментов.22.6. Планирование эксперимента и статистическая обработка результатов

574. При обработке экспериментальных данных использовали следующие статистические методы.

575. Результаты 3-5 определений экспериментальной величины представляли средней арифметической с доверительным интервалом, рассчитанным для вероятности 95%.

576. При сравнении совокупностей с количественными данными использовали также:- метод попарного сравнения сопряженных вариант;- корреляционный анализ;-дисперсионный анализ одно- и двухфакторных комплексов 27, 28, 165,353.

577. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ ГЛАВА 3. ФОРМИРОВАНИЕ МИКРОКАПЕЛЬНОГО ПОРОШКА

578. Микрокапельный порошок как дисперсная система

579. В табл. 1 приведены условно принятые границы размеров частиц систем с различной раздробленностью вещества 72, 100.