Связывание когезина Saccharomyces cerevisiae с хроматином тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Каганский, Александр Маркович

• Каганский, Александр Маркович
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Каганский, Александр Маркович

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Цели и задачи исследования

Основные положения, выносимые на защиту

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Биологическая роль когезии сестринских хроматид

2. Молекулярная природа когезии сестринских хроматид

2.1. Введение

2.2. Когезин: структура комплекса и механизм действия

2.3. Дополнительные факторы когезии в митотическом цикле

2.4. Когезия в мейозе

3. Регуляция когезии при сегрегации хромосом

4. Структура сайтов когезии

5. Открытые вопросы в когезии 26 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1. Стандартные методы

2. Манипуляции с клетками дрожжей

3. Антитела

4. Очистка рекомбинантных белков

5. Метод торможения фрагментов ДНК в геле (ретардация)

6. Сборка хроматина in vitro

7. Эксперименты по связыванию когезина с хроматином

8. Прочие эксперименты in vitro 40 РЕЗУЛЬТАТЫ

1. Функциональная характеризация когезина

1.1. Исследование структуры сайтов когезии in vivo

1.2. Взаимодействие когезина с ДНК и хроматином in vitro

1.3. Исследование вклада составляющих когезина в установление когезии:

2. Исследование структурно-функциональных взаимоотношений белков, участвующих в когезии сестринских хроматид

2.1. Сайт-направленный мутагенез белка Med 1 р

2.2. Изучение роли белка Pds5p в когсзии

2.3. Изучение роли белка Ecolp в когезии 3. Мейотический вариант когезина ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ Благодарности

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Связывание когезина Saccharomyces cerevisiae с хроматином»

Клетки всех эукариотических организмов, включая Saccharomyces cerevisiae и человека, наследуют генетическую информацию на ДНК, которая уложена в ДНК-белковый комплекс - хромосому. Для воспроизведения точных копий своего генома, в процессе митоза или мейоза, клетке необходимо правильным образом разделить каждую редуплицировавшуюся хромосому на две хроматиды, чтобы дочерняя клетка получила одну из них. Недостаток или избыток числа хроматид приводит, соответственно, к гибели или дестабилизации генома. Так, человеческие эмбрионы с неправильным хромосомным набором в большинстве случаев погибают, а в случае их выживания приводят к серьезным дефектам у новорожденных. Подобные же нарушения в клетках взрослого человека часто являются причиной злокачественных новообразований (Jallepalli et al. 2001).

История изучения процесса, получившего название «когезия сестринских хроматид» насчитывает немногим более пяти лет, когда было доказано, что хроматиды остаются сцепленными друг с другом при помощи специализированного белкового комлекса, когезина, с момента их синтеза до расхождения. Именно механизм когезии лежит в основе хорошо известного (по' данным микроскопии) распределения хромосом в центре митотического веретена и последующего одновременного расхождения хромосом к противоположным полюсам (Tanaka et al. 2000, Toyoda et al. 2002).

Установление когезии происходит строго во время репликации и непосредственным образом зависит от формирования когезина, состоящего из четырех субъединиц : Smcl; Smc3; Mcdl/Sccl/Rad21 и Scc3/SA1,2 (Losada et al. 1998, Toth et al. 1999, Uhlmann et al.

1998). Данные, полученные к настоящему моменту, свидетельствуют о том, что образовавшиеся при этом хроматиды могут удерживаться вместе либо за счет ДНК-связывающей активности когезина (Akhmedov et al. 1998, Hirano 2000), либо за счет удержания хроматид внутри кольца, образуемого субъединицами когезина (Haering et al. 2002).

Хотя главная функция когезина состоит в обеспечении правильной сегрегации хромосом, он, по-видимому, принимает участие в других важных процессах в клетке и играет роль в структурной организации хроматина. Кроме того, он принимает участие в ответе клетки на повреждение ДНК (Kim et al. 2002а, Kim et al. 2002b, Yazdi et al. 2002), в репарации двунитевых разрывов (Pasierbek et al. 2001, Sjogren et al. 2001, Walowsky et al.

1999) и регуляции образования гетерохроматипа (Donze et al. 1999, Ishii et al. 2002, Nonaka et al. 2002). При этом, в силу того, что когезин был до сих пор практически не охарактеризован с точки зрения его ферментативной активности, остается неизвестным, заложена ли многофункциональность когезина в его способности «скреплять» хроматиды, или же у данного комплекса много различных молекулярных функций.

Хотя центральная роль в обеспечении когезии сестринских хроматид отводится когезину, этот процесс зависит от ряда других белковых факторов, многие из которых остается к настоящему моменту плохо изученными. К их числу относятся белки Pds5p и Ecolp, роль которых в когезии, а также взаимоотношения с когезином, до сих пор не известны.

В настоящий момент молекулярный механизм установления когезии практически не изучен. Центральным вопросом здесь является то, каким образом когезин физически взаимодействует с хромосомой, а также, чем обусловлена пространственная и временная специфичность этого взаимодействия in vivo. Принимая во внимание тот факт, что когезин связывается с хромосомами в локусах с различной структурой, включая такие как эу- и гетерохроматин, центромерные области и двунитевые разрывы хромосом, для исследования функции когезина, необходимо разработать экспериментальные системы, моделирующие когезию in vitro.

Представленная работа посвящена исследованию молекулярных механизмов когезии сестринских хроматид в различных условиях. Главной целью данного исследования было выделить четырехсубъединичный когезин из S. cerevisiae и установить его субстратную специфичность.

Задачи исследования Целью данного исследования было выделение четырехсубъединичного когезина из Saccheromyces cerevisiae и установление его субстратной специфичности. Для ее достижения были поставлены следующие задачи

1. Определить особенности связывания когезина с хромосомами S. cerevisiae in vivo.

2. Клонировать, экспрессировать и очистить рекомбинантный когезин S. cerevisiae.

3. Охарактеризовать ДНК-связывающую активность когезина in vitro.

4. Охарактеризовать хроматин-связывающую активность когезина in vitro.

5. Определить факторы, влияющие на взаимодействие когезина с хроматином in vitro.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Активный рекомбинантный комплекс когезин дрожжей S. cerevisiae может быть выделен из клеток насекомых.

2. Взаимодействие рекомбинантного когезина хроматином in vitro является специфическим и характеризуется высокой аффинностью.

3. Взаимодействие когезина с хроматином происходит не через хвостовые домены гистонов и не через межнуклеосомную (линкерную) ДНК.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Каганский, Александр Маркович

выводы

1.Когезин дрожжей S. cerevisiae имеет высоко-аффинное сродство к хроматину.

2.Активный когезин S. cerevisiae, состоящий из рекомбинантных белков Smclp, Smc3p, Scc3p и Mcdlp, может быть выделен и очищен из клеток насекомых.

3.Рекомбинантный когезин образует с фрагментом хроматина специфический комплекс in vitro.

4.Рекомбинантный когезин не образует специфических комплексов с ДНК, но имеет повышенное сродство к АТ-богатой ДНК.

5.Для взаимодействия когезина с фрагментом хроматина in vitro не достаточно гетеродимера белков Smclp и Smc3p.

6.Взаимодействие рекомбинантного когезина с фрагментом хроматина не зависит от линкериой ДНК, а также от хвостовых доменов коровых гистонов.

Благодарности

Автор благодарен Дмитрию Байтину, Юрию Килю и Эстебану Баллестар (Estebari Ballestar) за обучение некоторым экспериментальным методам на начальном этапе настоящей работы. Автор искренне признателен Лите Фриман (Lita Freeman), Йоши Адзума (Yoshi Azuma) и Дмитрию Гущину за содействие в экспериментальной работе и ценные советы. Хотелось бы также поблагодарить Эрин Шлаг (Erin Schlag) за помощь в сиквенировании образцов ДНК, а также Карла By (Carl Wu), Питера Джонса (Peter Johnes) и Стефана Дмитрова за предоставленные материалы. Особую признательность автор выражает Дмитрию Лукьянову за активное участие в экспериментах и обсуждении результатов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Каганский, Александр Маркович, 2004 год

1. Agarwal, R. and О. Cohen-Fix. 2001. Pdsl is a novel substrate of Cdc28. in Yeast cell biology meeting abstracts.

2. Cold Spring Harbor Laboratory.

3. Akhmedov, A.T., C. Frei, M. Tsai-PJlugfelder, et al., 1998. Structural maintenance of chromosomes protein C-terminal domains bind preferentially to DNA with secondary structure. J Biol Chem. 273(37): p. 24088-94.

4. Alexandru, G., F. Uhlmann, K. Mechtler, et al., 2001. Phosphorylation of the cohesin subunit Sccl by Polo/Cdc5 kinase regulates sister chromatid separation in yeast. Cell. 105(4): p. 459-72.

5. Amon, A., U. Surana, I. Muroff, et al., 1992. Regulation of p34CDC28 tyrosine phosphorylation is not required for entry into mitosis in S. cerevisiae. Nature. 355(6358): p. 368-71.

6. Anderson, D.E., A. Losada, H.P. Erickson, et al., 2002. Condensin and cohesin display different arm conformations with characteristic hinge angles. J Cell Biol. 156(3): p. 419-24.

7. Bachant, J., A. Alcasabas, Y. Blat, et al., 2002. The SUMO-1 isopeptidase Smt4 is linked tocentromeric cohesion through SUMO-1 modification of DNA topoisomerase II. Mol Cell. 9(6): p. 1169-82.

8. Bernard, P., J.F. Maure, J.F. Partridge, et al., 2001. Requirement of heterochromatin for cohesion at centromeres. Science. 294(5551): p. 2539-42.

9. Bernard, P. and R. Allshire, 2002. Centromeres become unstuck without heterochromatin. Trends Cell Biol. 12(9): p. 419-24.

10. Birkenbihl, R.P. andS. Subramani, 1992. Cloning and characterization of rad21 an essential gene of Schizosaccharomycespombe involved in DNA double-strand-break repair. Nucleic Acids Res. 20(24): p. 6605-11.

11. Blat, Y. andN. Kleckner, 1999. Cohesins bind to preferential sites along yeast chromosome III, with differential regulation along arms versus the centric region. Cell. 98(2): p. 249-59.

12. Bloom, K.S. and J. Carbon, 1982. Yeast centromere DNA is in a unique and highly orderedstructure in chromosomes and small circular minichromosomes. Cell. 29(2): p. 305-17.

13. Buonomo, S.B., R.K. Clyne, J. Fuchs, et al., 2000. Disjunction of homologous chromosomes in meiosis I depends on proteolytic cleavage of the meiotic cohesin Rec8 by separin. Cell. 103(3): p. 387-98.

14. Chandler, S.P., D. Guschin, N. Landsberger, et al., 1999. The methyl-CpG binding transcriptional repressor MeCP2 stably associates with nucleosomal DNA. Biochemistry. 38(22): p. 700818.

15. Cheng, Т.Н., Y.C. Li, and M.R. Gartenberg, 1998. Persistence of an alternate chromatin structure at silenced loci in the absence of silencers. Proc Natl Acad Sci USA. 95(10): p. 5521-6.

16. Chipev, C.C. and A.P. Wolffe, 1992. Chromosomal organization of Xenopus laevis oocyte and somatic 5S rRNA genes in vivo. Mol Cell Biol. 12(1): p. 45-55.

17. Ciosk, R., M. Shirayama, A. Shevchenko, et al., 2000. Cohesin's binding to chromosomes depends on a separate complex consisting of Scc2 and Scc4 proteins. Mol Cell. 5(2): p. 243-54.

18. Cohen-Fix, O., J.M. Peters, M.W. Kirschner, et al., 1996. Anaphase initiation in Saccharomycescerevisiae is controlled by the APC-dependent degradation of the anaphase inhibitor Pdsl p. Genes Dev. 10(24): p. 3081-93.

19. Comings, D.E., 1966. Centromere: absence of DNA replication during chromatid separation in human fibroblasts. Science. 154(755): p. 1463-1464.

20. Dohmen, R.J., P. Wu, and A. Varshavsky, 1994. Heat-inducible degron: a method for constructing temperature-sensitive mutants. Science. 263(5151): p. 1273-6.

21. Donze, D„ C.R. Adams, J. Rine, et al., 1999. The boundaries of the silenced HMR domain in Saccharomyces cerevisiae. Genes Dev. 13(6): p. 698-708.

22. Freeman, L„ L. Aragon-Alcaide, and A. Strunnikov, 2000. The condensin complex governschromosome condensation and mitotic transmission of rDNA. J Cell Biol. 149(4): p. 81124.

23. Funabiki, H„ I. Hagan, S. Uzawa, et al, 1993. Cell cycle-dependent specific positioning and clustering of centromeres and telomeres in fission yeast. J Cell Biol. 121(5): p. 961-76.

24. Funabiki, H., H. Yamano, K. Kumada, et al., 1996. Cut2 proteolysis required for sister-chromatid seperation in fission yeast. Nature. 381(6581): p. 438-41.

25. Georgel, P.T., T. Tsukiyama, andC. Wu, 1997. Role of histone tails in nucleosome remodeling by Drosophila NURF. EmboJ. 16(15): p. 4717-26.

26. Ghidelli, S., D. Donze, N. Dhillon, et al., 2001. Sir2p exists in two nucleosome-binding complexes with distinct deacetylase activities. Embo J. 20(16): p. 4522-35.

27. Goh, P.Y. and J. V. Kilmartin, 1993. NDC10: a gene involved in chromosome segregation in Saccharomyces cerevisiae. J Cell Biol. 121(3): p. 503-12.

28. Goldstein, L.S., 1980. Mechanisms of chromosome orientation revealed by two meiotic mutants in Drosophila melanogaster. Chromosoma. 78(1): p. 79-111.

29. Goshima, G. andM. Yanagida, 2000. Establishing biorientation occurs with precocious separation of the sister kinetochores, but not the arms, in the early spindle of budding yeast. Cell. 100(6): p. 619-33.

30. Gregson, H.C., J.A. Schmiesing, J.S. Kim, et al., 2001. A potential role for human cohesin in mitotic spindle aster assembly. J Biol Chem. 276(50): p. 47575-82.

31. Gruber, S., C.H. Haering, andK. Nasmyth, 2003. Chromosomal cohesin forms a ring. Cell. 112(6): p. 765-77.

32. Guacci, V., A. Yamamoto, A. Strunnikov, et al., 1993. Structure and function of chromosomes in mitosis of budding yeast. Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 58(p. 677-85.

33. Guacci, V., E. Hogan, and D. Koshland, 1994. Chromosome condensation and sister chromatid pairing in budding yeast. J Cell Biol. 125(3): p. 517-30.

34. Guacci, V., D. Koshland, and A. Strunnikov, 1997. A direct link between sister chromatid cohesion and chromosome condensation revealed through the analysis of MCD1 in S. cerevisiae. Cell. 91(1): p. 47-57.

35. Haering, C.H., J. Lowe, A. Hochwagen, et al., 2002. Molecular architecture of SMC proteins and the yeast cohesin complex. Mol Cell. 9(4): p. 773-88.

36. Hakimi, M.A., D.A. Bochar, J.A. Schmiesing, et al., 2002. A chromatin remodelling complex that loads cohesin onto human chromosomes. Nature. 418(6901): p. 994-8.

37. Hanna, J.S., E.S. Kroll, V. Lundblad, et al., 2001. Saccharomyces cerevisiae CTF18 and CTF4 are required for sister chromatid cohesion. Mol Cell Biol. 21(9): p. 3144-58.

38. Hartman, Т., К. Stead, D. Koshland, et al., 2000. Pds5p is an essential chromosomal proteinrequired for both sister chromatid cohesion and condensation in Saccharomyces cerevisiae. J Cell Biol. 151(3): p. 613-26.

39. Hartsuiker, E., E. Vaessen, A.M. Carr, et al., 2001. Fission yeast Rad50 stimulates sister chromatid recombination and links cohesion with repair. Embo J. 20(23): p. 6660-71.

40. Hauf S., I.C. Waizenegger, andJ.M. Peters, 2001. Cohesin cleavage by separase required for anaphase and cytokinesis in human cells. Science. 293(5533): p. 1320-3.

41. He, X., S. Asthana, and P.K. Sorger, 2000. Transient sister chromatid separation and elastic deformation of chromosomes during mitosis in budding yeast Cell. 101(7): p. 763-75.

42. Hirano, M„ D.E. Anderson, H.P. Erickson, et al., 2001. Bimodal activation of SMC ATPase by intra- and inter-molecular interactions. EMBO J. 20(12): p. 3238-3250.

43. Hirano, Т., 2000. Chromosome cohesion, condensation, and separation. Annu Rev Biochem. 69(p. 115-44.

44. Hirano, Т., 2002. The ABCs of SMC proteins: two-armed ATPases for chromosome condensation, cohesion, and repair. Genes Dev. 16(4): p. 399-414.

45. Jallepalli, P. V. and C. Lengauer, 2001. Chromosome segregation and cancer: cutting through the mystery. Nat Rev Cancer. 1(2): p. 109-17.

46. Jensen, S., M. Segal, D.J. Clarke, et al., 2001. A novel role of the budding yeast separin Espl in anaphase spindle elongation: evidence that proper spindle association of Espl is regulated by Pdsl. J Cell Biol. 152(1): p. 27-40.

47. Jessberger, R., 2002. The many functions of SMC proteins in chromosome dynamics. Nat Rev Mol Cell Biol. 3(10): p. 767-78.

48. Kagansky, A. and A. Strunnikov. 2000a. Purification of S. cerevisiae mitotic and meiotic recombinant cohesin complexes, in 1st Eucaryotic replication meeting abstracts1.Jolla, CA USA.

49. Kagansky, A. and A. Strunnikov. 2000b. Directed Mutagenesis of a Cohesin Subunit in

50. Saccharomyces cerevisiae. in Yeast genetics and molecular biology meeting abstracts1. Seattle.

51. Kagansky, A. and A. Strunnikov. 2001 .In vitro characterization ofS. cerevisiaecohesin complex, in 41th ASCB meeting abstracts.1. Washington.

52. Kagansky, A., D. Lukyanov, and A. Strunnikov. 2002. S. cerevisiae recombinant cohesin complex binds to chromatin with high affinity in vitro, in Yeast cell biology meeting abstracts.

53. Cold Spring Harbor Laboratory.

54. Kagansky, A., D. Lukyanov, L. Freeman, et al. 2003. Chromatin is a preferred substrate for cohesin binding independently ofhistone tails, in Transregio 5 Symposium abstracts1. Munchen.

55. Kagansky, A., L. Freeman, D. Lukyanov, et al., 2004. Histone Tail-independent Chromatin Binding Activity of Recombinant Cohesin Holocomplex. J Biol Chem. 279(5): p. 3382-8.

56. Kerrebrock, A.W., D.P. Moore, J.S. Wu, et al., 1995. Mei-S332, a Drosophila protein required for sister-chromatid cohesion, can localize to meiotic centromere regions. Cell. 83(2): p. 24756.

57. Kim, J.S., T.B. Krasieva, V. LaMorte, et al., 2002a. Specific recruitment of human cohesin to laser-induced DNA damage. J Biol Chem. 277(47): p. 45149-53.

58. Kim, S.T., B. Xu, and M.B. Kastan, 2002b. Involvement of the cohesin protein, Smcl, in Atm-dependent and independent responses to DNA damage. Genes Dev. 16(5): p. 560-70.

59. Kitajima, T.S., S. Yokobayashi, M. Yamamoto, et al., 2003. Distinct cohesin complexes organize meiotic chromosome domains. Science. 300(5622): p. 1152-5.

60. Koshland, D. and L.H. Hartwell, 1987. The structure of sister minichromosome DNA before anaphase in Saceharomyces cerevisiae. Science. 238(4834): p. 1713-6.

61. Kumada, К., T. Nakamura, К Nagao, et al., 1998. Cutl is loaded onto the spindle by binding to

62. Madril, A.C., R.E. Johnson, M.T. Washington, et al., 2001. Fidelity and damage bypass ability of Schizosaccharomycespombe Esol protein, comprised of DNA polymerase eta and sister chromatid cohesion protein Ctf7. J Biol Chem. 276(46): p. 42857-62.

63. Mayer, M.L., S.P. Gygi, R. Aebersold, et al., 2001. Identification of RFC(Ctfl8p, CtfSp, Dcclp): an alternative RFC complex required for sister chromatid cohesion in S. cerevisiae. Mol Cell. 7(5): p. 959-970.

64. McNeill, P.A. and M. W. Berns, 1981. Chromosome behavior after laser microirradiation of a single kinetochorc in mitotic PtK2 cells. J Cell Biol. 88(3): p. 543-53.

65. Megee, P.C., C. Mistrot, V. Guacci, et al., 1999. The centromeric sister chromatid cohesion site directs Mcdlp binding to adjacent sequences. Mol Cell. 4(3): p. 445-50.

66. Met, J., X. Huang, and P. Zhang, 2001. Securin is not required for cellular viability, but is required for normal growth of mouse embryonic fibroblasts. Curr Biol. 11(15): p. 1197-1201.

67. Melby, Т.Е., C.N. Ciampaglio, G. Briscoe, et al., 1998. The symmetrical structure of structural maintenance of chromosomes (SMC) and MukB proteins: long, antiparallel coiled coils, folded at a flexible hinge. J Cell Biol. 142(6): p. 1595-604.

68. Meluh, P.B. and A. V. Strunnikov, 2002. Beyond the ABCs of CKC and SCC. Do centromeres orchestrate sister chromatid cohesion or vice versa? Eur J Biochem. 269(9): p. 2300-14.

69. Mercier, R., D. Vezon, E. Bullier, et al., 2001. SWITCH1 (SWI1): a novel protein required for the establishment of sister chromatid cohesion and for bivalent formation at meiosis. Genes Dev. 15(14): p. 1859-71.

70. Michaelis, C„ R. Ciosk, and K. Nasmyth, 1997. Cohesins: chromosomal proteins that prevent premature separation of sister chromatids. Cell. 91(1): p. 35-45.

71. Miyazaki, W.Y. andT.L. Orr-Weaver, 1994. Sister-chromatid cohesion in mitosis and meiosis. Annu Rev Genet. 28(p. 167-87.

72. Moore, D.P. andO.-W. T.L., 1998. Chromosome segregation during meiosis: building an unambivalent bivalent. Curr Top Dev Biol. 37(p. 263-99.

73. Mumberg, D„ R. Muller, andM. Funk, 1995. Yeast vectors for the controlled expression of heterologous proteins in different genetic backgrounds. Gene. 156(1): p. 119-22.

74. Murray, A.W. andJ.W. Szostak, 1985. Chromosome segregation in mitosis and meiosis. Annu Rev Cell Biol. 1 (p. 289-315.

75. Nasmyth, K., J.M. Peters, and F. Uhlmann, 2000. Splitting the chromosome: cutting the ties that bind sister chromatids. Science. 288(5470): p. 1379-85.

76. Nemergut, M.E., C.A. Mizzen, T. Stukenberg, et al., 2001. Chromatin docking and exchangeactivity enhancement of RCC1 by histones H2A and H2B. Science. 292(5521): p. 1540-3.

77. Nicklas, R.B. and S.C. Ward, 1994. Elements of error correction in mitosis: microtubule capture, release, and tension. J Cell Biol. 126(5): p. 1241-1253.

78. Nonaka, N. T. Kitajima, S. Yokobayashi, et al., 2002. Recruitment of cohesin to heterochromatic regions by Swi6/HPl in fission yeast Nat Cell Biol. 4(1): p. 89-93.

79. Panizza, S., T. Tanaka, A. Hochwagen, et al., 2000. Pds5 cooperates with cohesin in maintaining sister chromatid cohesion. Curr Biol. 10(24): p. 1557-64.

80. Partridge, J.F., K.S. Scott, A.J. Bannister, et al., 2002. cis-acting DNA from fission yeastcentromeres mediates histone H3 methylation and recruitment of silencing factors and cohesin to an ectopic site. Curr Biol. 12(19): p. 1652-60.

81. Pasierbek, P., M. Jantsch, M. Melcher, et al., 2001. A Caenorhabditis elegans cohesion proteinwith functions in meiotic chromosome pairing and disjunction. Genes Dev. 15(11): p. 134960.

82. Pati, D., N. Zhang, andS.E. Plon, 2002. Linking sister chromatid cohesion and apoptosis: role of Rad21. Mol Cell Biol. 22(23): p. 8267-77.

83. Pearson, C.G., P.S. Maddox, E.D. Salmon, et al., 2001. Budding yeast chromosome structure and dynamics during mitosis. J Cell Biol. 152(6): p. 1255-66.

84. Prieto, I., J.A. Suja, N. Pezzi, et al., 2001. Mammalian STAG3 is a cohesin specific to sister chromatid arms in meiosis I. Nat Cell Biol. 3(8): p. 761-6.

85. Rao, H., F. Uhlmann, K. Nasmyth, et al., 2001. Degradation of a cohesin subunit by the N-end rule pathway is essential for chromosome stability. Nature. 410(6831): p. 955-9.

86. Richards, E.J. and S.C. Elgin, 2002. Epigenetic codes for heterochromatin formation and silencing: rounding up the usual suspects. Cell. 108(4): p. 489-500.

87. Rieder, C.L. and R.E. Palazzo, 1992. Colcemid and the mitotic cycle. J Cell Sci. 102(3): p. 387392.

88. Saez, С., M.A. Japon, F. Ramos-Morales, et al., 1999. hpttg is over-expressed in pituitary adenomas and other primary epithelial neoplasias. Oncogene. 18(39): p. 5473-5476.

89. Saitoh, S., A. Chabes, W.H. McDonald, et al, 2002. Cid 13 is a cytoplasmic poly(A) polymerase that regulates ribonucleotide reductase mRNA. Cell. 109(5): p. 563-73.

90. Schleiffer, A., S. Kaitna, S. Maurer-Stroh, et al., 2003. Kleisins: a superfamily of bacterial and eukaryotic SMC protein partners. Mol Cell. 11(3): p. 571-5.

91. Shonn, M.A., R. McCarroll, and A.W. Murray, 2002. Spol3 protects meiotic cohesin at centromeres in meiosis I. Genes Dev. 16(13): p. 1659-71.

92. Simon, R.H., R.D. Camerini-Otero, and G. Felsenfeld, 1978. An octamcr of histones 113 and H4 forms a compact complex with DNA of nucleosome size. Nucleic Acids Res. 5(12): p. 4805-18.

93. Sjogren, C. and K. Nasmyth, 2001. Sister chromatid cohesion is required for postreplicative double-strand break repair in Saccharomyces cerevisiae. Curr Biol. 11(12): p. 991-5.

94. Sonoda, E., T. Matsusaka, C. Morrison, et al., 2001. See 1/Rad21/Mcdl is required for sisterchromatid cohesion and kinetochore function in vertebrate cells. Dev Cell. 1(6): p. 759-70.

95. Stegmeier, F„ R. Visintin, and A. Amon, 2002. Separase, Polo Kinase, the Kinetochore Protein SIkl9, and Spol2 Function in a Network that Controls Cdcl4 Localization during Early Anaphase. Cell. 108(2): p. 207-20.

96. Stemmann, О., H. Zou, S.A. Gerber, et al., 2001. Dual inhibition of sister chromatid separation at metaphase. Cell. 107(6): p. 715-26.

97. Straight, A.F., A.S. Belmont, C.C. Robinett, et al., 1996. GFP tagging of budding yeastchromosomes reveals that protein-protein interactions can mediate sister chromatid cohesion. Curr Biol. 6(12): p. 1599-608.

98. Stralmann, R. and C.F. Lehncr, 1996. Separation of sister chromatids in mitosis requires the

99. Drosophila pimples product, a protein degraded after the metaphase/anaphase transition. Cell. 84(1): p. 25-35.

100. Strauss, F. and A. Varshavsky, 1984. A protein binds to a satellite DNA repeat at three specificsites that would be brought into mutual proximity by DNA folding in the nucleosome. Cell. 37(3): p. 889-901.

101. Sullivan, M., C. Lehane, and F. Uhlmann, 2001. Orchestrating anaphase and mitotic exit: separase cleavage and localization of Slkl9. Nat Cell Biol. 3(9): p. 771-777.

102. Sumara, /., E. Vorlaufer, C. Gieffers, et al., 2000. Characterization of vertebrate cohesin complexes and their regulation in prophase. J Cell Biol. 151(4): p. 749-62.

103. Sumara, I., E. Vorlaufer, P.T. Stukenberg, et al., 2002. The dissociation of cohesin fromchromosomes in prophase is regulated by Polo-like kinase. Mol Cell. 9(3): p. 515-25.

104. Sumner, A.T., 1991. Scanning electron microscopy of mammalian chromosomes from prophase to telophase. Chromosoma. 100(6): p. 410-8.

105. Tanaka, K., Z Hao, M. Kai, et al., 2001. Establishment and maintenance of sister chromatid cohesion in fission yeast by a unique mechanism. EMBO J. 20(20): p. 5779-5790.

106. Tanaka, Т., M.P. Cosma, K. Wirth, et al., 1999. Identification of cohesin association sites at centromeres and along chromosome arms. Cell. 98(6): p. 847-58.

107. Tanaka, Т., J. Fuchs, J. Loidl, et al., 2000. Cohesin ensures bipolar attachment of microtubules to sister centromeres and resists their precocious separation. Nat Cell Biol. 2(8): p. 492-9.

108. Tomonaga, Т., К. Nagao, Y. Kawasaki, et al., 2000. Characterization of fission yeast cohesin:essential anaphase proteolysis of Rad21 phosphorylated in the S phase. Genes Dev. 14(21): p. 2757-70.

109. Toth, A., R. Ciosk, F. Uhlmann, et al., 1999. Yeast cohesin complex requires a conserved protein, Ecolp(Ctf7), to establish cohesion between sister chromatids during DNA replication. Genes Dev. 13(3): p. 320-33.

110. Towbin, //., T. Staehelin, and J. Gordon, 1979. Elcctrophoretic transfer of proteins frompolyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc Natl Acad Sci USA. 76(9): p. 4350-4.

111. Toyoda, Y„ К. Furuya, G. Goshima, et al., 2002. Requirement of chromatid cohesion proteinsrad21/sccl and mis4/scc2 for normal spindle-kinctochore interaction in fission yeast Curr Biol. 12(5): p. 347-58.

112. Turner, B.M., 2002. Cellular memory and the histonc code. Cell. 111(3): p. 285-91.

113. Uhlmann, F. andK. Nasmyth, 1998. Cohesion between sister chromatids must be established during DNA replication. Curr Biol. 8(20): p. 1095-101.

114. Uhlmann, F., F. Lottspeich, and K. Nasmyth, 1999. Sister-chromatid separation at anaphase onset promoted by cleavage of the cohesin subunit Sccl. Nature. 400(6739): p. 37-42.

115. Uhlmann, F., D. Wernic, M.A. Poupart, et al., 2000. Cleavage of cohesin by the CD clan protease separin triggers anaphase in yeast Cell. 103(3): p. 375-86.

116. Waizenegger, I.C., S. Hauf, A. Meinke, et al., 2000. Two distinct pathways remove mammalian cohesin from chromosome arms in prophase and from centromeres in anaphase. Cell. 103(3): p. 399-410.

117. Walowsky, C., D.J. Fitzhugh, LB. Castano, et al., 1999. The topoisomerase-related function gene TRF4 affects cellular sensitivity to the antitumor agent camptothecin. J Biol Chem. 274(11): p. 7302-8.

118. Wang, Z, LB. Castano, A. De Las Penas, et al., 2000. Pol kappa: A DNA polymerase required for sister chromatid cohesion. Science. 289(5480): p. 774-9.

119. Watanabe, Y., S. Yokobayashi, M. Yamamoto, et al., 2001. Pre-meiotic S phase is linked toreductional chromosome segregation and recombination. Nature. 409(6818): p. 359-63.

120. Yamamoto, A., V. Guacci, and D. Koshland, 1996. Pdslp, an inhibitor of anaphase in buddingyeast, plays a critical role in the APC and checkpoint pathway(s). J Cell Biol. 133(1): p. 99 110.

121. Yazdi, P.T., Y. Wang, S. Zhao, et al., 2002. SMC1 is a downstream effector in the ATM/NBS1 branch of the human S-phase checkpoint Genes Dev. 16(5): p. 571-82.

122. Zachariae, W. andK. Nasmyth, 1999. Whose end is destruction: cell division and the anaphase-promoting complex. Genes Dev. 13(16): p. 2039-2058.

123. Zheng, L., Y. Chen, andW.H. Lee, 1999. Hcclp, an evolutionarily conserved coiled-coil protein, modulates chromosome segregation through interaction with SMC proteins. Mol Cell Biol. 19(8): p. 5417-5428.

124. Zheng, L., Y. Chen, D.J. Riley, et al., 2000. Retinoblastoma protein enhances the fidelity of chromosome segregation mediated by hsHeclp. Mol Cell Biol. 20(10): p. 3529-3537.

125. Zou, H, T.J. McGarry, T. Bernal, et al., 1999. Identification of a vertebrate sister-chromatidseparation inhibitor involved in transformation and tumorigenesis. Science. 285(5426): p. 418-22.

126. Каганский, A.M. andA.B. Струнников. 2002. Механизмы когезии сестринских хроматид. in Бреслеровские Чтения. С.-Петербург: ПНЯФ РАН.

127. Каганский, A.M. andA.B. Струнников, 2004. Новый белковый комплекс (мейотическийкогезин), регулирующий когезию сестринских хроматид в мейозе у Saccharomyces cerevisiae. Доклады РАН. Биология, 3): р. 394.