Свойства и механизм действия декапептида, соответствующего кортикотропин-подобной последовательности иммуноглобулина G1 человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Лепихова, Татьяна Николаевна

• Лепихова, Татьяна Николаевна
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Лепихова, Татьяна Николаевна

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

Часть I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Механизмы взаимосвязи нейроэндокринной и иммунной систем на примере гормонов гипоталамуса и гипофиза.

1. Влияние нейроэндокринных гормонов на клетки иммунной системы.

1.1. Гипоталамические рилизинг-гормоны.

1.2. Кортикотропин.

1.2.1. Экспрессия кортикотропина и его предшественника РОМС иммунокомпетентными клетками.

1.2.2. Семейство меланокортиновых рецепторов.

1.2.3. Рецептор кортикотропина.

1.2.4. Влияние кортикотропина на активность иммунокомпетентных клеток.

1.3. Тиреотропин, лютеинизирующий гормон и фолликулостимулирующий гормон.

1.4. Пролактин и гормон роста.

2. Продукция цитокинов нейроэндокринной системой.

3. Влияние цитокинов на нейроэндокринную систему.

3.1.IL-1.

3.2. IL-6.

3.3.IL-2.

3.4. IFN-y.

3.5. TNF-ot.

3.6. LIP; IL-11.

3.7. Тимозин ai.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Свойства и механизм действия декапептида, соответствующего кортикотропин-подобной последовательности иммуноглобулина G1 человека»

Актуальность проблемы. Результаты исследований сотен синтетических фрагментов и аналогов природных пептидов и белков (гормонов, цитокинов, интерферонов, иммуноглобулинов, гемоглобина и т.д.) показывают, что многие из них являются высокоактивными корректорами нарушений нейроэндокринных, иммунных и других функций организма. Высокая активность пептидов, быстрая реакция организма на их введение, "нечужеродность" организму и практически полное отсутствие токсичности - все это привлекает внимание фармакологов и клиницистов, рассматривающих эти соединения как потенциальные лекарственные средства нового класса. В настоящее время в большинстве развитых стран препараты на основе пептидов довольно широко применяются в медицине. Клиническое применение нашли, например, синтетические фрагменты aj-тимозина, тафтцин и его синтетические аналоги, тимопентин и его производные, многочисленные аналоги и фрагменты эндорфинов и энкефалинов. В России практическое использование пептидных препаратов, к сожалению, незначительно. В ветеринарии нашел применение сурфагон как средство восстановления нарушений функций воспроизводства. Деларгин разрешен Фармакологическим комитетом МЗ России как препарат для лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Разрабатываются показания для клинического применения антриопептидов - стимуляторов роста и регенерации. Таким образом, не вызывает сомнений, что пептиды имеют значительные клинические перспективы в качестве потенциальных лекарственных средств нового класса. В этой связи совершенно очевидно, что исследования, направленные на изучение биологической активности и механизма действия кортикотропин-подобного пептида (авторское название -"иммунокортин"), соответствующего фрагменту 11-20 вариабельной части тяжелой цепи иммуноглобулина G1 (IgGl) человека, важны и актуальны. Полученная информация может быть использована в практической медицине, кроме того, она внесет определенный вклад в понимание механизмов взаимосвязи нейроэндокринной и иммунной систем организма.

Цели и задачи исследования

Цель настоящего исследования - изучение свойств и механизма действия кортикотропин-подобного пептида иммунокортина. Основные задачи исследования:

1. Изучение влияния иммунокортина на активность иммунокомпетентных клеток мыши in vitro.

2. Изучение влияния иммунокортина на рост лейкемических клеточных линий человека in vitro.

3. Исследование молекулярного механизма действия иммунокортина.

Научная новизна.

Впервые изучены свойства и механизм действия синтетического кортикотропин-подобного пептида иммунокортина:

Установлено, что иммунокортин оказывает иммуносупрессорное действие ш vitro: подавляет бластную трансформацию тимоцитов, обладает выраженными макрофагингибирующими свойствами, которые проявляются в подавлении спонтанной подвижности, уменьшении бактерицидности по отношению к бактериям вирулентного штамма Salmonella typhimurium 415.

Показано, что иммунокортин полностью подавляет рост клеток человеческой Т-лимфобластной линии МТ-4 in vitro.

На макрофагах и тимоцитах мыши и МТ-4 клетках человека обнаружены и охарактеризованы специфические рецепторы иммунокортина. Показано, что эти рецепторы являются рецепторами к кортикотропину.

10

Практическая ценность результатов работы.

Высокая иммуносупрессорная активность иммунокортина in vitro, низкая токсичность и отсутствие кортикотропной активности позволяют рекомендовать этот пептид для доклинических испытаний в качестве потенциального иммуносупрессорного препарата нового поколения. В настоящее время в Филиале Института биоорганической химии проводится изучение иммунокорригирующего действия иммунокортина при аутоиммунном заболевании на созданной в институте экспериментальной биомодели рассеянного склероза (экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита) на крысах линии DA.

Способность иммунокортина снижать рост опухолевых клеток in vitro представляет несомненный интерес для практической медицины. В Филиале Института биоорганической химии начаты исследования противоопухолевой активности пептида in vivo на мышиных моделях солидных перевиваемых легочной карциномы Льюиса и меланомы В-16.

Поскольку иммунокортин с высоким сродством связывается с рецепторами к кортикотропину, целесообразно использовать этот пептид в качестве инструмента для идентификации и характеристики рецепторов к гормону.

Часть I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Механизмы взаимосвязи нейроэндокриниой и иммунной систем на примере гормонов гипоталамуса и гипофиза

В последние годы проводятся многочисленные исследования по установлению механизмов, ответственных за взаимодействие между нейроэндокриниой и иммунной системами. Согласно данным, полученным из экспериментов in vitro и in vivo, в качестве общего химического языка внутри и между иммунной и нейроэндокриниой системами используются общие сигнальные молекулы и рецепторы [1-4]. Нейрональные стимулы передаются посредством нейромедиаторов, гормонов и цитокинов, которые воздействуют на рецепторы иммунной системы, участвуя в ее функционировании. С другой стороны медиаторы иммунной системы - цитокины действуют на рецепторы нейроэндокриниой системы. Поэтому интересно описать сигнальные молекулы и их рецепторы общие для эндокринной и иммунной систем, обеспечивающие взаимодействие этих систем. Настоящий обзор посвящен анализу молекулярных механизмов взаимосвязи нейроэндокриниой и иммунной систем на примере гормонов гипоталамуса и гипофиза.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Лепихова, Татьяна Николаевна

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что синтетический кортикотропин-подобный декапептид иммунокортин, соответствующий последовательности 11-20 вариабельной части тяжелой цепи IgGl человека, ингибирует активность тимоцитов и перитонеальных макрофагов мыши in vitro.

2. Показано, что иммунокортин подавляет рост клеток Т-лимфобластной линии МТ-4 человека in vitro.

3. Обнаружена способность иммунокортина с высоким сродством связываться с рецепторами кортикотропина на тимоцитах, перитонеальных макрофагах и МТ-4 клетках. Определены кинетические параметры связывания [3Н]иммунокортина с этими рецепторами.

4. Показано, что связывание иммунокортина с рецепторами приводит к увеличению активности аденилатциклазы клетки-мишени.

Заключение

Быстро увеличивающееся количество данных указывает на то, что нейроэндокринная и иммунная системы тесно взаимосвязаны. Приведенный в обзоре анализ влияния гормонов гипоталамуса и гипофиза на иммунные функции показывает, что эти гормоны являются полноценными компонентами иммунной системы, поскольку секретируются иммунокомпетентными клетками и регулируют их активность. В то же время, результаты изучения нейротропных функций цитокинов in vivo и in vitro демонстрируют, что они являются медиаторами нейроэндокринного ответа на инфекции. Важно подчеркнуть, что во всех случаях их влияние опосредовано через гипоталамус и гипофиз. Установлено, что IL-1, IL-2, IL-6 и TNF активируют ось гипоталамус-гипофиз-надпочечники. IL-1 и TNF ингибируют ось гипоталамус-гипофиз-половые железы, a TNF и IFN-y оказывают ингибирующее воздействие на ось гипоталамус-гипофиз-щитовидная железа.

Часть II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава I. Материалы и методы 1. Реактивы

В работе использовали: фетальную сыворотку теленка, трипсин, ЭДТА, агарозу (Sigma, США); L-глутамин, HEPES (Flow, США); пенициллин и стрептомицин (Gibco, США); агарозу, сахарозу, БСА, ЭДТА, ЭГТА, Tris-HCl, фенилметилсульфонилфторид (PMSF), азид натрия (№N3) (Serva, Германия); Кон А, фиколл, декстран 500, Isopaque (Pharmacia, Швеция); бензил-пенициллин, гентамицин (Gibco, США); Na125I без носителя в NaOH (100 мКи/мл) (Amersham, Англия); 1,3,4,6-тетрахлоро-3а,6а-дифенилгликолюрил (Лодоген) (Pierce, США), [метил-3Н]тимидин с удельной активностью 76 Ки/ммоль (Amersham, Англия); AI2O3 по Брокману II (Reanal, Венгрия), Cyclic-AMP-Assay Kit (Amersham, Англия).

Все остальные реактивы соответствовали квалификации ч.д.а., х.ч., ос.ч.

Дистиллированную воду дополнительно очищали с помощью системы Mono-Q (Millipore, США).

Жидкий сцинтиллятор Ready Gel (Beckman, США), сцинтиллятор Unisolv 100 (Amersham, Англия).

Среды для культивирования клеток: среда 199 (ПАНЭКО, Москва) и RPMI-1640 (Serva, ФРГ).

3Н]Иммунокортин (удельная активность 9,6 Ки/ммоль) был получен в Институте молекулярной генетики РАН.

2. Экспериментальные животные

В работе использовали линейных мышей BALB/c в возрасте 2,5 месяца и линейных мышей СВА с массой тела 16-18 г. Все животные были получены из питомника ФИБХ РАН.

3. Клеточные линии

Промиелоцитарная лейкемическая клеточная линия HL-60, клеточная линия хронического эритробластного лейкоза К-562 и Т-лимфобластная лейкемическая клеточная линия Jurkat были любезно предоставлены Р.Г. Василовым (Институт биотехнологии РАН, Москва). Т-лимфобластная лейкемическая клеточная линия МТ-4 была любезно предоставлена Л.И. Краморовой (Институт биофизики клетки РАН), а нейробластома В103 крысы - В.Г. Цыгановой (ФИБХ РАН).

4. Синтетические пептиды

Кортикотропин-подобный пептид Val-Lys-Lys-Pro-Gly-Ser-Ser-Val-Lys-Val и фрагменты кортикотропина 13-24 (Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-Pro-Val-Lys-Val) и 4-10 (Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly) были синтезированы в Лаборатории химии пептидов Института белка РАН д. х. н., проф. Митиным Ю.В. Синтез был осуществлен методом пентафгорфениловых эфиров N-замещенных аминокислот [306]. Очистку пептидов проводили с помощью ВЭЖХ на колонке Zorbax ODS (4x150 мм, 5 мкм) при линейном градиенте водного ацетонитрила (95%) в 0,2% трифторуксусной кислоте (10-25%, 20 мин) при скорости потока 1 мл/мин. Содержание основного вещества определяли по поглощению при 220 нм. Чистота пептидов после очистки ВЭЖХ превышала 95%. Молекулярную массу пептидов определяли с помощью масс-спектрометрического анализа.

5. Штаммы бактерий

В экспериментах был использован вирулентный штамм Salmonella typhimurium 415 с типичными морфофункциональными свойствами и ЛД50 примерно 100 микробных клеток при внутрибрюшинном заражении белых мышей. Сальмонеллезную бактериальную культуру выращивали в течение 4-6 часов при 37°С в бульоне Хоттингера, пересевали на мясо-пептонный агар и инкубировали при 37°С в течение 18 часов.

6. Методы выделения и оценки функциональной активности иммунокомпетентных клеток 6.1. Получение спленоцитов мышей

Мышей линии СВА забивали цервикальной дислокацией, вскрывали и стерильно извлекали селезенки. Всю дальнейшую работу также проводили в стерильных условиях согласно рекомендациям [307]. Сразу после извлечения селезенки погружали в охлажденную среду 199, освобождали от крови, жира и соединительной ткани, переносили в стеклянный гомогенизатор (150x25 мм), содержащий среду RPMI 1640 (примерно 10 мл на 5 селезенок), и измельчали, вращая пестик вручную. Полученную взвесь клеток отсасывали через длинную иглу шприцем, переносили в центрифужную пробирку и оставляли на 30 мин в ледяной бане для оседания клеточных агрегатов. После этого отсасывали верхнюю половину взвеси, содержащую только одиночные клетки, и определяли их концентрацию в камере Горяева. В соответствии со схемой опыта и результатами подсчета клеток брали необходимый объем клеточной взвеси, добавляли 5 объемов охлажденной до 4°С среды RPMI 1640 и центрифугировали при 600 g в течение 10 мин (охлаждение не требуется). Клеточный осадок ресуспендировали в "полной среде для культивирования" (эту и дальнейшие процедуры проводили при комнатной температуре). В 1 мл полученной взвеси содержалось 5x106 клеток. Для подсчета клеток взвесь разбавляли 0,2 % раствором трипанового синего в физиологическом растворе. Окончательный объем взвеси устанавливали в зависимости от результатов подсчета.

Состав "полной среды для культивирования": среда RPMI 1640, содержащая 2 мМ L-Gln, по 100 мкг стрептомицина и пенициллина, 20 мМ HEPES и термически инактивированную (56°С, 30 мин) эмбриональную сыворотку теленка- 5%.

6.2. Получение тимоцитов мышей

Тимоциты получали как описано в пункте (6.1), используя для этой цели тимусы 3-6 недельных мышей линии СВА [307]. Жизнеспособность свежевыделенных клеток по тесту с трипановым синим превышала 95%.

6.3. Реакция бласт-трансформации спленоцитов и тимоцитов мышей in vitro

Влияние иммунокортина на бласт-трансформацию клеток тимуса in vitro изучали, используя методику работы [308]: в лунки планшета для микрокультивирования клеток (Flow, США) вносили по 100 мкл суспензии тимоцитов мыши, (5x105 клеток на 1 мл), 50 мкл раствора Кон А (2 мкг/мл) и 100 мкл раствора иммунокортина известной концентрации. Каждую опытную и контрольную пробу ставили в 3-4-параллельных культурах. Контролем служили пробы без Кон А (а), без Кон А с пептидом (б), с Кон А без пептида (в). Планшет инкубировали 72 ч при 37°С в атмосфере 5%-ного С02. Через 60 ч в лунки вносили [метил-3Н]тимидин (1 мкКи на 1 лунку). По окончании инкубации содержимое каждой лунки переносили на отдельный фильтр и промывали 100-кратным объемом физиологического раствора. Радиоактивность на фильтрах подсчитывали с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика 1211 Minibeta ("LKB", Швеция). Состав среды культивирования: среда RPMI 1640, содержащая 2 мМ L-Gln, стрептомицин и пеницилин (100 мкг/мл каждого), HEPES (20 мМ) и термически инактивированную (56° , 30 мин) эмбриональную сыворотку теленка (5%).

6.4. Получение макрофагов брюшной полости мышей

Мышей линии BALB/c забивали цервикальной дислокацией, помещали в 3%-ный раствор перекиси водорода и разрезали кожу на животе. Все последующие операции выполняли в стерильном боксе согласно рекомендациям Учитель И.Я. [309]. Через небольшой разрез в брюшине в брюшную полость вводили 2-2,5 мл среды 199, содержащей по 100 мкг/мл бензил-пенициллина. Этой средой тщательно промывали брюшную полость и полученную таким путем взвесь клеток переносили в колбу, помещенную в сосуд со льдом для препятствия адгезии макрофагов к стеклянной поверхности. Концентрацию клеток в полученной суспензии определяли в камере Горяева и доводили ее "средой культивирования" до 106 клеток/мл.

Для получения монослоя макрофагов суспензию клеток разливали по 1,5 мл в стерильные пробирки с покровными стеклами. Пробирки закрывали резиновыми пробками и культивировали в атмосфере 5% СО2 при 37°С. Через 1 час среду в пробирках заменяли для того, чтобы избавиться от не прилипших к стеклам клеток и белков перитонеальной жидкости. Полученные таким образом монослои макрофагов использовали в описанных ниже экспериментах. Чистоту монослоя контролировали с помощью теста с акридиновым оранжевым [310].

Состав среды для культивирования: среда 199, бензил-пенициллин 100 мкг/мл, инактивированная (56°С, 30 мин) эмбриональная сыворотка теленка - 5 %, бикарбонат натрия - 0,2 %, L-Gln - 2 мМ.

6.5. Получение плазматических мембран тимоцитов и макрофагов мыши

Фракцию плазматических мембран тимоцитов и макрофагов мыши получали как описано в работе Naldini и соавт. [311]. Для выделения использовали 0,5 М фосфатный буфер, рН 7,5, содержащий PMSF (0,6 мг/л). Клетки гомогенизировали в большом объеме этого буфера (30-40 движений плотно пригнанного пестика). Гомогенат центрифугировали при 800 g 5 мин при 4°С. Супернатант помещали в лед, а осадок, содержащий ядерную фракцию, реэкстрагировали тем же объемом 0,5 М фосфатного буфера, гомогенизируя и центрифугируя. После этого, оба супернатанта объединяли и центрифугировали при 20000 g 30 мин при 4°С. Осадок ресуспендировали в буферном растворе для радиолигандного анализа. Концентрацию белка определяли методом Лоури [312].

6.6. Определение фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов in vitro

Предварительно по стандарту мутности готовили разведение бактериальной культуры. Для штамма Salmonella typhimurium 415 - 109 микробных клеток/мл забуференного физиологического раствора, рН 7,2. Для приготовления "среды заражения макрофагов" к среде 199 добавляли инактивированную эмбриональную сыворотку теленка (конечная концентрация 5%) и приготовленную бактериальную культуру в таком количестве, чтобы ее о конечное разведение составляло 10 микробных клеток/мл.

После замены в пробирках с монослоями макрофагов "среды для культивирования" "средой для заражения" пробирки помещали в атмосферу 5% СО2 при 37°С на 2 часа. По истечению этого времени контакт между микробами и макрофагами прерывали, заменяя "среду для заражения" "средой для культивирования". Фиксирование препаратов (по три на каждую временную точку) проводили через 2 и 4 часа. Для этого из пробирок извлекали покровные стекла, промывали их забуференным физиологическим раствором, рН 7,2, имеющим температуру 37°С, и высушивали при комнатной температуре. Затем монослои макрофагов фиксировали, выдерживая стекла в метаноле в течение 7 мин, вновь сушили и окрашивали 0,1 % водным раствором красителей азур П-эозин в течение 5 мин. После этого, стекла промывали в проточной воде и высушивали. Полученные таким образом препараты исследовали при помощи микроскопа МБИ-15 при увеличении х1350. На каждом стекле просматривали по 300 клеток, определяя следующие показатели: фагоцитарное число (ФЧ) -среднее количество микробов, приходящееся на один макрофаг; фагоцитарную активность (ФА) - процент макрофагов, участвующих в фагоцитозе; цитопатическое действие бактерий (ЦПД) - процент фагоцитов, разрушенных внутриклеточными бактериями.

6.7. Изучение спонтанной миграции макрофагов из капли агарозы

Для определения спонтанной подвижности клеток системы мононуклеарных фагоцитов использовали микрометод, разработанный Fahlbush и соавт. [313] и Zalmar и соавт. [314].

Предварительно готовили 0,4%-ный раствор агарозы; к 3 мл среды 199 добавляли 20 мг агарозы, выдерживали в кипящей водяной бане и охлаждали до 60°С. К полученному раствору добавляли 1,5 мл эмбриональной сыворотки теленка и 0,5 мл среды 199, содержащей остальные ингредиенты в таком количестве, чтобы приготовленный раствор агарозы содержал 10 мМ HEPES и 50 мкг/мл бензил-пенициллина.

Суспензию макрофагов в среде 199 (концентрация 109 клеток/мл) смешивали с равным объемом приготовленного раствора агарозы (конечная концентрация агарозы в полученной суспензии - 0,2%, сыворотки - 5%). Суспензию и плоскодонные планшеты для постановки теста подогревали до 37°С, в каждую лунку микрошприцем вносили по 1 мкл клеточной суспензии в агарозе, затем планшеты термостатировали при 4°С в течение 15 мин. После застывания агарозы в каждую лунку вносили по 200 мкл среды 199, содержащей 10 мМ HEPES и 50 мкг/мл бензил-пенициллина, 5%-ную эмбриональную сыворотку теленка и исследуемый пептид в нужной концентрации. Планшеты закрывали крышками и инкубировали 18-20 часов в атмосфере 5% СО2 при 37°С. Реакцию учитывали следующим образом: под микроскопом с помощью окулярного микрометра определяли диаметр зоны миграции клеток из капли агарозы и подсчитывали индекс миграции (ИМ)

ИМ = [1 - диаметр зоны миграции в опыте/ диаметр зоны миграции в контроле] х 100% Определение ИМ для каждой концентрации испытываемого вещества проводили 7 раз. Опыты повторяли трижды.

6.8. Определение способности макрофагов к адгезии

Для оценки способности макрофагов прилипать к стеклу (адгезии) клетки культивировали на покровных стеклах в стерильных пробирках со "средой культивирования", содержащей 5% эмбриональной сыворотки теленка, в течение двух часов в атмосфере 5% СО2 при 37°С. Монослои макрофагов на покровных стеклах фиксировали метанолом в течение 5 минут и окрашивали раствором Гимза. В камере Горяева подсчитывали число клеток, прилипших к 1 мм2 стеклянной поверхности. Опыты повторяли трижды.

6.9. Определение жизнеспособности макрофагов

Суспензию макрофагов разливали по 2 мл в стерильные пробирки с покровными стеклами и культивировали в атмосфере 5% СОг при 37°С. Через 2 часа среду в пробирках заменяли для того, чтобы избавиться от не прелипших к стеклам клеток и белков перитонеальной жидкости. Полученные таким образом монослои инкубировали в пробирках с покровными стеклами в отсутствие (контроль) и в присутствии иммунокортина в полной средой культивирования в течение 24 часов в атмосфере 5% СО2. После этого монослои окрашивали трипановым синим и подсчитывали в камере Горяева процент окрашенных (погибших) клеток.

6.10. Определение способности макрофагов к распластыванию

В определенных условиях при адгезии к стеклу макрофаги могут изменять свою округлую форму на звездчатую. Это явление получило название "распластывание". Для изучения этого свойства макрофаги инкубировали в пробирках с покровными стеклами, как описано выше в отсутствие (контроль) и в присутствии иммунокортина в полной среде культивирования в течение 48 часов в атмосфере 5% СО2 при 37°С. После чего, покровные стекла с монослоями макрофагов на них извлекали из пробирок, фиксировали метанолом и окрашивали раствором Гимза. Количество распластанных макрофагов подсчитывали под микроскопом с помощью окулярной сетки, распластанными считали макрофаги, у которых продольные размеры превышали поперечные в 3 раза [315]. На каждом стекле просчитывали по 300 клеток. Опыты повторяли трижды.

6.11. Определение активности аденилатциклазы

Активность аденилатциклазы определяли с помощью [а-32Р]АТФ по ранее предложенному методу [316]. Состав среды для проведения реакции: 40 мМ Tris-HCl, рН 7,4, содержащий 50 мкМ АТФ, 4 мМ цАМФ, 12 мМ фосфоенолпируват, пируваткиназу (2 мкг/мл). В стеклянные силиконизированные конические пробирки, находящиеся в ледяной лл бане, вносили [ос- Р]АТФ (200000-500000 имп/мин) в 50 мкл среды и 50 мкл исследуемого материала (опыт) или такой же объем буфера (контроль). Пробирки переносили в термостат и выдерживали при 34°С в течение 45 мин. Реакцию останавливали добавлением 100 мкл 0,5 М НС1. После этого пробирки помещали в кипящую водяную баню на 15 мин, а затем переносили в ледяную баню и добавляли в каждую по 100 мкл 1,5 М имидазола. Содержимое каждой пробирки пропускали через отдельную колонку с 1 см AI2O3 по Брокману II и промывали 5 мл дистиллированной воды. Активность фермента определяли по убыли субстрата и выражали в нмоль цАМФ, образовавшегося за 10 мин в расчете на 1 мг белка исследуемого материала.

6.12. Определение внутриклеточного уровня цАМФ

Внутриклеточное содержание цАМФ в макрофагах определяли методом радиоизотопного анализа, используя Cyclic-AMP-Assay-Kit (Amersham, Англия) в соответствии с прилагаемым фирмой-изготовителем руководством.

Суспензию перитонеальных макрофагов получали, как описано в пункте (6.2), разливали ее по 2 мл в конические пробирки без покровных стекол, так что макрофаги могли прилипать только к стенкам пробирок, и инкубировали при 37°С 24 часа. После этого производили замену среды инкубации, включая в состав новой пептид в нужной концентрации. Пробирки снова помещали в термостат при 37°С. Через определенные интервалы времени из пробирок удаляли среду, добавляли в них по 2 мл 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, выдерживали на кипящей водяной бане в течение 10 мин и центрифугировали при 3000 об/мин, 10 мин (20°С). Супернатанты, содержащие цАМФ, отбирали из пробирок, доводили в них рН до 7,0 1н раствором NaOH по фенол-рот, сушили струей сухого воздуха при 37°С и хранили при 4°С [317, 318].

Содержание цАМФ в экстрактах определяли по следующей схеме: экстракты растворяли в 0,05 М Tris-HCl буфере, рН 7,5, содержащем 4 мМ ЭДТА, а все компоненты набора - в дистиллированной воде. Для определения фоновой активности в первый ряд пробирок вносили по 150 мкл Tris-HCl буфера, рН 7,5. Во второй ряд пробирок добавляли по 50 мкл раствора цАМФ известной концентрации для построения калибровочной кривой (0,5; 1; 2; 4; 8 и 16 пмолей в 50 мкл). В третий ряд пробирок вносили по 50 мкл растворенных экстрактов с неизвестной концентрацией цАМФ. После этого во все пробирки добавляли по 50 мкл раствора [3Н]цАМФ и по 100 мкл раствора цАМФ-связывающего белка. Пробирки энергично встряхивали и инкубировали 2 часа при 4°С. За 15 мин до окончания инкубации приготовляли суспензию угольного адсорбента и охлаждали ее. По окончании инкубации в каждую пробирку второго и третьего ряда добавляли по 100 мкл суспензии угольного адсорбента, встряхивали и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 мин (4°С). Затем из каждой пробирки отбирали по 200 мкл супернатанта и помещали в отдельный сцинтилляционный флакон с 5 мл сцинтиллятора Unisolv 100. Подсчет радиоактивности осуществляли с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика 1211 Minibeta (LKB, Швеция). Опыты повторяли трижды. Ошибка измерений не превышала 7-8%.

7. Методы культивирования и оценки ростовой активности лейкемических клеток

7.1. Культивирование лейкемических клеток

Человеческие лейкемические клеточные линии: промиелоцитарную HL-60, эритробластную К-562 и Т-лимфобластную Jurkat культивировали во влажной атмосфере воздуха с 5% С02 при 37°С в среде RPMI-1640, содержащей 10 мМ HEPES, 0,2% NaHC03, 2 мМ L-Gln, 2 мМ пируват натрия, 50 мкг/мл гентамицин, 6% инактивированную эмбриональную сыворотку теленка, рН 7,5. Клетки инкубировали в культуральных флаконах. Концентрация клеток для инициации роста 2x105 клеток/мл. Время удвоения клеток: HL-60 - 36-48 часов, К-562 и Jurkat - 24-36 часов. Клетки пересевали при достижении ими максимальной плотности - 2x106 клеток/мл. Для оптимального роста важно, чтобы пересеваемые клетки находились в конце логарифмической фазы. По тесту с трипановым синим жизнеспособность клеток превышала 95%.

7.2. Определение пролиферативной активности

Пролиферация клеток оценивалась по включению метил-тимидина меченного тритием ([метил-3Н]-тимидина) в клетки. Для постановки этого теста в 24-луночные планшеты вносили по 1 мл суспензии клеток (концентрация 2x105 клеток/мл среды RPMI-1640, содержащей 10 мМ HEPES, 0,2% ИаНСОз, 2 мМ L-Gln, 2 мМ пируват натрия, 50 мкг/мл гентамицин, 6%-ную инактивированную эмбриональную сыворотку теленка, рН 7,5). Затем в опытные лунки вносили иммунокортин в диапазоне концентраций 10"12-10~5 М. Клетки культивировали во влажной атмосфере воздуха с 5% СО2 при 37°С в течение 2 или 3 дней. За о два часа до фильтрации в каждую лунку добавляли по 10 мкл [метил- Н]-тимидина (1 мкКи на лунку). После этого, клетки переносили на стекловолокнистые фильтры GF/C (Whatman, UK, Англия), используя водоструйный насос. Радиоактивность на фильтрах подсчитывали с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика (Rack-Beta LKB Wallas, Швеция). Процент включения [метил- Н]-тимидина рассчитывали по формуле:

Доля включения [метил-3Н]-тимидина = (имп/мин в опыте)/(имп/мин в контроле)

8. Кинетическая характеристика взаимодействия изучаемых пептидов сс рецепторами методом радиолигандного анализа 8.1. Иодирование пептида - фрагмента кортикотропина (13-24)

Иодирование кортикотропина(13-24) (10 мкг) проводили по методу [319] с помощью

1 9S 1 9 S

Na I (1 мКи) и иодогена. Удельная активность [ 1]кортикотропина( 13-24) составила 165 Ки/ммоль.

В пробирку с иодогеном последовательно вносили 10 мкл буфера А, 10 мкл Na125I (80 МБк, 8 мкл, 16,5 мк/мл) и пептид (10 мкг, 10 мкл из раствора с концентрацией 1 мг/мл в буфере А). Реакцию останавливали через 10 мин добавлением в пробирку 550 мкл буфера А. После этого реакционную смесь наносили на колонку (0,7 х 10 см) с сефадексом G-10. Элюцию проводили буфером А со скоростью 5 мл/час. Объем выхода меченного 1251 пептида определяли в контрольном опыте с немеченным пептидом. Радиоактивность фракций измеряли с помощью счетчика ((Rack-Beta LKB Wallas, Швеция). Фракции с максимальной радиоактивностью, соответствующие позиции пика немеченного пептида в контрольном опыте, объединяли и определяли суммарную и удельную активность полученного препарата. Для оценки чистоты иодированного пептида аликвоту препарата хроматографировали в тонком слое (окись алюминия на стекле) в системе н-бутанол : уксусная кислота : вода =4:1 : 1 [320]. Хроматографическую пластинку авторадиографировали [321]. Буфер А - 0,05 М фосфатный буфер, рН 7,4.

8.2. Радиолигандный анализ

Реакцию связывания меченых пептидов с клетками проводили в среде RPMI-1640, содержащей 2 мМ NaN3 и ЮмМ HEPES, рН 7,5. Для ограничения протеолиза в реакционную смесь вводили ингибитор протеаз PMSF - 0,6 мг/л. Реакционную смесь инкубировали при температуре 4°С в течение 1 ч. Неспецифическое связывание меченного лиганда оценивали в присутствии 1000-кратного избытка немеченого лиганда. Для отделения связанного меченного лиганда от свободного реакционную смесь фильтровали через стекловолокнистые фильтры GF/C (Whatman, UK, Англия), используя водоструйный насос. Радиоактивность на фильтрах подсчитывали с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика (Rack-Beta LKB Wallas, Швеция).

Для определения параметров специфического связывания меченных лигандов с их рецепторами (равновесной константой диссоциации K<j, плотности рецепторов п, то есть число мест связывания в расчете на одну клетку) строили графики Скэтчарда зависимости отношения молярных концентраций связанного (В) и свободного (F) меченного лиганда от молярной концентрации связанного лиганда В [322].

Под конкурентным ингибированием понимали ингибирование, величина которого зависела от соотношения концентраций меченого лиганда и немеченого ингибитора (конкурента); ингибирование, зависящее только от концентрации ингибитора, считали неконкурентным [323].

Константу ингибирования К; вычисляли по формуле [323]: Kj = IC5o/(l+[L]/Kd]), где величину IC50 определяли графически (график зависимости процента ингибирования специфического связывания меченого лиганда от молярной концентрации ингибитора); L -молярная концентрация меченого лиганда; Ка - равновесная константа диссоциации комплекса меченый лиганд-рецептор.

8.3. Связывание [3Н]иммунокортина с тимоцитами и перитонеальными макрофагами мыши

Реакцию связывания [3Н]иммунокортина с тимоцитами и перитонеальными макрофагами мыши проводили в среде 199, содержащей HEPES (25 мМ), NaN3 (20 мМ), PMSF (0,6 мг/л), соответствии со следующей схемой: в силиконизированные пробирки

10 7 вносили по 100 мкл меченого пептида (изучен диапазон концентраций - 10" -10" М), 100 мкл среды (общее связывание) или раствора немеченного пептида (неспецифическое связывание) и 800 мкл суспензии клеток (107клеток на 1 мл). Пробирки инкубировали при 4° в течение 1 ч. По окончании инкубации для отделения связавшегося с клетками меченого пептида реакционную смесь фильтровали через стекловолокнистые фильтры GF/B (Whatman, Англия). Фильтры трижды промывали 5 мл ледяного 25 мМ HEPES, рН 7,4. Радиоактивность на фильтрах подсчитывали с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика 1211 Minibeta (LKB, Швеция). Неспецифическое связывание [3Н]иммунокортина определяли в присутствии 0,1 мМ немеченного иммунокортина.

8.4. Связывание [3Н]иммунокортина с плазматическими мембранами, выделенными из тимоцитов и перитонеальных макрофагов мыши

Реакцию связывания [3Н] иммунокортина с плазматическими мембранами, выделенными из тимоцитов и макрофагов, проводили в 25 мМ HEPES, содержащем PMSF (0,6 мг/л), рН 7,4, при 4°С в течение 40 мин. Объем реакционной пробы 1 мл. Концентрация белка в пробах 0,5 мг/мл. Неспецифическое связывание [3Н] иммунокортина оценивали в присутствии 0,1 мМ немеченного пептида. Дальнейшие процедуры - фильтрование, подсчет радиоактивности на фильтрах и обработку результатов - проводили как описано выше. Плазматические мембраны из свежевыделенных тимоцитов и макрофагов получали по методу [311]. Концентрацию белка определяли методом Лоури, используя в качестве стандарта ЕС А [312].

Для определения параметров специфического связывания меченого иммунокортина с рецепторами (равновесной константы диссоциации Кл и плотности рецепторов п - числа мест специфического связывания пептида в расчете на 1 клетку или Втах - максимальной связывающей способности в расчете на 1 мг белка для мембран), строили графики зависимости отношения молярных концентраций связанного (В) и свободного (F) меченого иммунокортина от молярной концентрации связанного меченого пептида (В). Плотность рецепторов (п) определяли по формуле:

71 п = (Ro ■ число Авогадро)/количество клеток в 1 л, где Ro - молярная концентрация рецептора [322].

Для оценки способности кортикотропина(13-24) конкурировать с меченым иммунокортином за связывание с рецепторами строили кривые ингибирования специфического связывания 10 нМ [ Н]иммунокортина с тимоцитами и макрофагами возрастающими концентрациями немеченного кортикотропина( 13-24), соматостатина и кортикотропина(4-10) (диапазон концентраций

10"12 - 10"4 М). Реакцию связывания и все последующие процедуры проводили как описано выше. Константу ингибирования К} вычисляли по формуле, как описано выше (см. пункт 8.2.) [323].

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Лепихова, Татьяна Николаевна, 2001 год

1. Blalock J.E. Production of peptide hormones and neurotransmitters by the immune system // Neunimmunoendocrinology, Chemical Immunology, 1992, V. 52, 2nd ed. (J.E. Blalock, ed.), Karger, Basel, P. 1-19.

2. Blalock J.E. The immune system: our sixth sense // Immunologist, 1994, V. 2, P. 8-15.

3. Blalock J.E. The syntax of immune neuroendocrine communication // Immunol. Today, 1994, У. 15, P. 504-511.

4. Straub R.H., Westermann J., Scholmerich J., Falk W. Dialogue between the CNS and the immune system in lymphoid organs // Immunology Today, 1998, V. 19, № 9, P. 409-413.

5. Besedovsky H.O., del Rey A. Immune-neuro-endocrine interactions: facts and hypotheses // Endocr. Rev., 1996, V.17,№ 1, P. 64-102.

6. Weigent D.A., Blalock J.E. Associations between the neuroendocrine and immune systems // J. Leukoc. Biol., 1995, V. 58, № 2, P. 137-150.

7. Madden K.S., Felten D.L. Experimental basis for neural-immune interactions // Physiol. Rev., 1995, V. 75, № 1,P. 77-106.

8. Carr D.J.J. Neuroendocrine peptide receptors on cells of the immune system // In Neuroimmunoendocrinology: Chemical Immunology, 1992, V. 52, 2nd ed. (J. E. Blalock, ed.), Karger, Basel, P. 49-83.

9. Berczi I., Chalmers I.M., Nagy E., Warrington R.J. The immune effects of neuropeptides // Baillieres Clin. Rheumatol., 1996, V. 10, № 2, P. 227-257.

10. Tsagarakis S., Grossman A. Corticotropin-releasing hormone: interactions with the immune system // Neuroimmunomodulation, 1994, V. 1, № 6, P. 329-334.

11. De Souza E.B. Corticotropin-releasing factor and interleukin-1 receptors in the brain-endocrine-immune axis // Ann. N.Y. Acad. Sci., 1993, V. 697, P. 9-27.

12. Grigoriadis D.E., Heroux J.A., De Souza E.B. Characterization and regulation of corticotropin-releasing factor receptors in the central nervous, endocrine and immune systems // Ciba Found Symp., 1993, V. 172, P. 85-101, discussion P. 101-107.

13. Jain R., Zwickler D., Hollander C.S., Brand H., Saperstein A., Hutchinson В., Brown C., Audhya T. Corticotropin-releasing factor modulates the immune response to stress in the rat // Endocrinology, 1991, V. 128, P. 1329-1336.

14. Bell R.C., Feng J., Lipton J.M. Is the endogenous antipyretic neuropeptide aMSH responsible for reduced fever in aged rabbits // Peptides, 1987, V. 8, P. 501-504.

15. Smith E.M., Hughes Т.К., Cadet P., Stefano G.B. Corticotropin-releasing factor-induced immunosuppression in human and invertebrate immunocytes // Cell. Mol. Neurobiol., 1992, V. 12, P. 473-481.

16. Smith E.M., Hughes Т.К.Jr., Hashemi F., Stefano G.B. Immunosuppressive effects of corticotropin and melanotropin and their possible significance in human immunodeficiency virus infection // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992, V. 89, P. 782-786.

17. Melzig M.F., Papsdorf G., Putscher I., Winkler A., Siems W.E. Inhibition of corticotropin releasing factor (CRF)-induced adrenocorticotropin (ACTH) secretion in pituitary corticotropic cells by substance P // Pharmazie, 1998, V. 53, № 8, P. 569-572.

18. Zelazowski P., Dohler K.D., Stepien H., Pawlikowski M. Effect of growth hormone releasing hormone on human peripheral blood leukocyte chemotaxis and migration in normal subjects // Neuroendocrinology, 1989, V. 50, P. 236-239.

19. Blalock J.E., Costa O. Immune neuroendocrine interactions: implications for reproductive physiology // Ann. N.Y. Acad. Sci., 1990, V. 564, P. 261-266.

20. Grasso G., Massai L., De Leo V., Muscettola M. The effect of LHRH and TRH on human interferon-gamma production in vivo and in vitro // Life Sci., 1998, V. 62, № 22, P. 2005-2014.

21. Harbour D.V., Leon S., Keating C., Hughes Т.К. Thyrotropin modulates B-cell function through specific bioactive receptors // Prog. Neurendocrinol. Immunol., 1990, V. 3, P. 266-276.

22. Harbour D.V., Hughes Т.К. Thyrotropin releasing hormone (TRH) induces gamma interferon release // FASEB J., 1991, V. 5, A5884 (Abstr.).

23. Raiden S., Polack E., Nahmod V., Labeur M., Holsboer F., Arzt E. TRH receptor on immune cells: in vitro and in vivo stimulation of human lymphocyte and rat splenocyte DNA synthesis by TRH // J. Clin. Immunol., 1995, V. 15, № 5, P. 242-249.

24. Payan D.G., Hess C.A., Goetzl E.J. Inhibition by somatostatin of the proliferation of T-lymphocytes and Molt-4 lymphoblasts // Cell Immunol., 1984, V. 84, № 2, P. 433-438.

25. Muscettola M., Grasso G. Somatostatin and vasoactive intestinal peptide reduce interferon gamma production by human peripheral blood mononuclear cells // Immunobiology, 1990, V. 180, №4-5, P. 419-430.

26. Wagner М., Hengst К., Zierden E., Gerlach U. Investigations of the antiproliferative effect of somatostatin in man and rats // Metab. Clin. Exp., 1979, V. 27, P. 1381-1386.

27. Hinterberger W., Cerny C., Kinast H., Pointner H., Tragi K.H. Somatostatin reduces the release of colony-stimulating activity (CSA) from PHA-activated mouse spleen lymphocytes // Experientia, 1978, V. 34, № 7, P. 860-862.

28. Ghamrawy C.E., Rabourdin-Combe C., Krantic S. sst5 somatostatin receptor mRNA induction by mitogenic activation of human T-lymphocytes // Peptides, 1999; V. 20, № 3, P. 305311.

29. Sreedharan S.P., Kodama K.T., Peterson K.E., Goetzl E.J. Distinct subsets of somatostatin receptors on cultured human lymphocytes // J. Biol. Chem., 1989, V. 264, № 2, P. 949-952.

30. Nakamura H., Koike Т., Hiruma K., Sato Т., Tomioka H., Yoshida S. Identification of lymphoid cell lines bearing receptors for somatostatin // Immunology, 1987, V. 62, № 4, P. 655658.

31. Hiruma K., Koike Т., Nakamura H., Sumida Т., Maeda Т., Tomioka H., Yoshida S., Fujita T. Somatostatin receptors on human lymphocytes and leukaemia cells // Immunology, 1990, V. 71, № 4, P. 480-485.

32. Pawlikowski M., Stepien H., Kunert-Radek J., Zelazowski P., Schally A.V. Immunomodulatory action of somatostatin // Ann. N. Y. Acad. Sci., 1987, V. 496, P. 233-239.

33. Liu J.L., Papachristou D.N., Patel Y.C. Glucocorticoids activate somatostatin gene transcription through co-operative interaction with the cyclic AMP signalling pathway // Biochem J., 1994, V. 301 (Pt 3), P. 863-869.

34. Liu J.L., Patel Y.C. Glucocorticoids inhibit somatostatin gene expression through accelerated degradation of somatostatin messenger ribonucleic acid in human thyroid medullary carcinoma (TT) cells // Endocrinology, 1995, V. 136, № 6, P. 2389-2396.

35. Schonbrunn A. Glucocorticoids down-regulate somatostatin receptors on pituitary cells in culture // Endocrinology 1982 Apr; 110(4): 1147-54

36. Rodriguez M.N., Gomez-Pan A., Arilla E. Decrease in number of somatostatin receptors in rat brain after adrenalectomy: normalization after glucocorticoid replacement // Endocrinology, 1988, V. 123, №2, P. 1147-1152.

37. Xu Y., Berelowitz M., Bruno J.F. Dexamethasone regulates somatostatin receptor subtype messenger ribonucleic acid expression in rat pituitary GH4C1 cells // Endocrinology, 1995, Y. 136, № 11, P. 5070-5075.

38. Kraus J., Woltje M., Hollt V. Regulation of mouse somatostatin receptor type 2 gene expression by glucocorticoids // FEBS Letters, 1999, V. 459, № 2, P. 200-204.

39. Tsutsumi A., Takano H., Ichikawa K., Kobayashi S., Koike T. Expression of somatostatin receptor subtype 2 mRNA in human lymphoid cells // Cell Immunol., 1997, V. 181, № 1, P. 44-49.

40. Ishihara S, Hassan S, Kinoshita Y, Moriyama N, Fukuda R, Maekawa T, Okada A, Chiba T. Growth inhibitory effects of somatostatin on human leukemia cell lines mediated by somatostatin receptor subtype 1. // Peptides, 1999, V. 20, № 3, P. 313-318.

41. Johnson H.M., Farrar W.L., Torres B.A Vasopressin replacement of interleukin-2 requirement in gamma interferon production: lymphokine activity of a neuroendocrine hormone // Immunol., 1982, V. 129, P. 963-986.

42. Smith E.M., Blalock J.E. Human lymphocyte production of corticotropin and endorphin-like substances: association with leukocyte interferon // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1981, V. 78, № 12, P.7530-7534.

43. Hashemi F.B., Hughes Т.К., Smith E.M. Human immunodeficiency virus induction of corticotropin in lymphoid cells // J. Clin. Endocrinol. Metab., 1998, V. 83, № 12, P. 4373-4381.

44. Lyons P.D., Blalock J.E. The kinetics of ACTH expression in rat leukocyte subpopulations // J. Neuroimmunol., 1995, V. 63, № 2, P. 103-112.

45. Chang A.C., Cochet M., Cohen S.N. Structural organization of human genomic DNA encoding the pro-opiomelanocortin peptide // Proc. Natl. Acad. Sci USA, 1980, V. 77, № 8, P. 4890-4894.

46. Nakanishi S., Inoue A., Kita Т., Nakamura M., Chang A.C., Cohen S.N., Numa S. Nucleotide sequence of cloned cDNA for bovine corticotropin-beta-lipotropin precursor // Nature, 1979, V. 278, № 5703, P. 423-427.

47. Martens G.J. Expression of two proopiomelanocortin genes in the pituitary gland of Xenopus laevis: complete structures of the two preprohormones // Nucleic Acids Res., 1986, V. 14, № 9, P. 3791-3798.

48. Drouin J., Chamberland M., Charron J., Jeannotte L., Nemer M. Structure of the rat proopiomelanocortin (POMC) gene //FEBS Lett, 1985, V. 193, № 1, P. 54-58.

49. Amemiya Y., Takahashi A., Dores R.M., Kawauchi H. Sturgeon proopiomelanocortin has a remnant of gamma-melanotropin // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1997, V. 230, № 2, P. 452456.

50. Takeuchi S., Teshigawara K., Takahashi S. Molecular cloning and characterization of the chicken pro-opiomelanocortin (POMC) gene // Biochimica et Biophysica Acta (BBA)/Molecular Cell Research, 1999, V. 1450, № 3, P. 452-459.

51. Amemiya Y., Takahashi A., Meguro H., Kawauchi H. Molecular cloning of lungfish proopiomelanocortin cDNA // Gen. Сотр. Endocrinol., 1999, V. 115, № 3, P. 415-421.

52. Galin F.S., LeBoeuf R.D., Blalock J.E. Corticotropin-releasing factor upregulates expression of two truncated pro-opiomelanocortin transcripts in murine lymphocytes // J. Neuroimmunol., 1991, V. 31, № 1,P. 51-58.

53. Lyons P.D., Blalock J.E. Pro-opiomelanocortin gene expression and protein processing in rat mononuclear leukocytes // J. Neuroimmunol., 1997, V. 78, № 1-2, P. 47-56.

54. Murao K., Sato M., Imachi H., Ohe H., Nagai M., Niimi M., Ishida Т., Takahara J. Expression of truncated pro-opiomelanocortin gene transcript in human leukemia cell lines // Endocr. J., 1998, V. 45, № 3, P. 399-405.

55. Smith E.M., Morrill A.C., Meyer W.J., Blalock J.E. Corticotropin releasing factor induction of leukocyte-derived immunoreactive ACTH and endorphins // Nature, 1986, V. 321, № 6073, P. 881-882.

56. Hendricks G.L., Mashaly M.M. Effects of corticotropin releasing factor on the production of adrenocorticotropic hormone by leukocyte populations // Br. Poult. Sci., 1998, V. 39, № 1, P. 123127.

57. Harbour D.Y., Galin F.S., Hughes Т.К., Smith E.M., Blalock J.E. Role of leukocyte-derived pro-opiomelanocortin peptides in endotoxic shock // Circ. Shock, 1991, V. 35, P. 181-191.

58. Clarke B.L., Gebhardt B.M., Blalock J.E. Mitogen-stimulated lymphocytes release biologically active corticotropin//Endocrynology, 1993, V. 132, J\T° 3, P. 983-988.

59. Zurawski G., Benedik M., Kamp B.J., Abrams J.S., Zurawski S.M., Lee F.D. Activation of mouse T-helper cells induces abundant pre-proenkephalin mRNA synthesis // Science, 1986, V. 232, P. 772-775.

60. Behar 0., Ovadia H., Polakiewicz R.D., Rosen H. Lipopolysaccharide induces proenkephalin gene expression in rat lymph nodes and adrenal glands // Endocrinology, 1994, V. 134, P. 475-481.

61. Mountjoy K.G., Robbins L.S., Mortrud M.T., Cone R.D. The cloning of a family of genes that encode the melanocortin receptors// Science, 1992, V. 257, № 5074, P. 1248-1251.

62. Barrett P., MacDonald A., Helliwell R., Davidson G., Morgan P. Cloning and expression of a new member of the melanocyte-stimulating hormone receptor family // J. Mol. Endocrinol., 1994, V. 12, №2, P. 203-213.

63. Chhajlani V., Wikberg J.E. Molecular cloning and expression of the human melanocyte stimulating hormone receptor cDNA // FEBS Lett., 1992, V. 309, № 3, P. 417-420.

64. Chhajlani V., Muceniece R., Wikberg J.E. Molecular cloning of a novel human melanocortin receptor // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1993, V. 195, № 2, P. 866-873.

65. Gantz I., Miwa H., Konda Y., Shimoto Y., Tashiro Т., Watson S.J., DelValle J., Yamada T. Molecular cloning, expression, and gene localization of a fourth melanocortin receptor // J. Biol. Chem., 1993, V. 268, № 20, P. 15174-15179.

66. Gantz I., Konda Y., Tashiro Т., Shimoto Y., Miwa H., Munzert G., Watson S.J., DelValle J., Yamada T. Molecular cloning of a novel melanocortin receptor // J. Biol. Chem., 1993, V. 268, № 11, P. 8246-8250.

67. Gantz I., Shimoto Y., Konda Y., Miwa H., Dickinson C.J., Yamada T. Molecular cloning, expression, and characterization of a fifth melanocortin receptor // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1994, V. 200, № 3, P. 1214-1220.

68. Mountjoy K.G., Mortrud M.T., Low M.J., Simerly R.B., Cone R.D. Localization of the melanocortin-4 receptor (MC4-R) in neuroendocrine and autonomic control circuits in the brain // Mol. Endocrinol., 1994, V. 8, № 10, P. 1298-1308.

69. Cammas F.M., Kapas S., Barker S., Clark A.J. Cloning, characterization and expression of a functional mouse ACTH receptor // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1995, V. 212, № 3, P. 912918.

70. Probst W.C., Snyder L.A., Schuster D.I., Brosius J., Sealfon S.C. Sequence alignment of the G-protein coupled receptor superfamily // DNA Cell Biol., 1992, V. 11, № 1, P. 1-20.

71. Elphick M.R. An invertebrate G-protein coupled receptor is a chimeric cannabioid/melanocortin receptor // Brain research, 1998, V. 780, P. 170-173.

72. Fathi Z., Iben L.G., Parker E.M. Cloning, expression, and tissue distribution of a fifth melanocortin receptor subtype // Neurochem. Res., 1995, V. 20, № 1, P. 107-113.

73. Vanetti M., Schonrock C., Meyerhof W., Hollt Y. Molecular cloning of a bovine MSH receptor which is highly expressed in the testis // FEBS Lett., 1994, V. 348, № 3, P. 268-272.

74. Griffon N., Mignon V., Facchinetti P., Diaz J., Schwartz J.C., Sokoloff P. Molecular cloning and characterization of the rat fifth melanocortin receptor // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1994, V. 200, № 2, P. 1007-1014.

75. Konda Y., Gantz I., DelValle J., Shimoto Y., Miwa H., Yamada T. Interaction of dual intracellular signaling pathways activated by the melanocortin-3 receptor // J. Biol. Chem., 1994, V. 269, № 18, P. 13162-13166.

76. Frandberg P.A., Doufexis M., Kapas S., Chhajlani V. Amino acid residues in third intracellular loop of melanocortin 1 receptor are involved in G-protein coupling // Biochem. Mol. Biol. Int., 1998, V. 46, № 5, P. 913-922.

77. Frandberg P.A., Xu X., Chhajlani V. Glutamine235 and arginine272 in human melanocortin 5 receptor determines its low affinity to MSH // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1997, Y. 236, № 2, P. 489-492.

78. Schioth H.B., Chhajlani V., Muceniece R., Klusa V., Wikberg J.E.S. Major pharmacological distinction of the ACTH receptor from the other melanocortic receptors // Life Sci., 1996, V. 59, P. 797-801.

79. Schioth H.B., Yook P., Muceniece R., Wikberg J.E., Szardenings M. Chimeric melanocortin MCI and MC3 receptors: identification of participating in binding of melanocyte-stimulating hormone peptides// Mol. Pharmacol., 1998, V. 54, № 1, P. 154-161.

80. Schioth H.B., Fredriksson A., Carlsson C., Yook P., Muceniece R., Wikberg J.E. Evidence indicating that the extracellular loops of the mouse MC5 receptor do not participate in ligand binding // Mol. Cell. Endocrinol., 1998, V. 139, № 1-2, P. 109-115.

81. Oosterom J., Burbach J.P.H., Gispen W.H., Adan R.A.H. Asp10 in Lys-y2-MSH determines selective activation of the melanocortin MC3 receptor // Eur. J. Pharmacol, 1998, V. 354, R9-R11.

82. Chhajlani V. Distribution of cDNA for melanocortin receptor subtypes in human tissues // Biochem. Mol. Biol. Int., 1996, V. 38, № 1, P. 73-80.

83. Boston B.A., Cone R.D. Characterization of melanocortin receptor subtype expression in murine adipose tissues and in the 3T3-L1 cell line // Endocrinology, 1996, V. 137, № 5, P. 20432050.

84. Thornwall M., Dimitriou A., Xu X., Larsson E., Chhajlani V. Immunohistochemical detection of the melanocortin 1 receptor in human testis, ovary and placenta using specific monoclonal antibody // Horm. Res., 1997, Y. 48, № 5, P. 215-218.

85. Chen W., Kelly M.A., Opitz-Araya X., Thomas R.E., Low M.J., Cone R.D. Exocrine gland dysfunction in MC5-R-deficient mice: evidence for coordinated regulation of exocrine gland function by melanocortin peptides // Cell, 1997, V. 91, № 6, P. 789-798.

86. Artuc M., Grutzkau A., Luger Т., Henz B.M. Expression of MCI- and MC5-receptors on the human mast cell line HMC-1 // Ann. N. Y. Acad. Sci., 1999, Y. 885, P. 364-367.

87. Chowdhary B.P., Gustavsson I., Wikberg J.E., Chhajlani V. Localization of the human melanocortin-5 receptor gene (MC5R) to chromosome band 18pl 1.2 by fluorescence in situ hybridization // Cytogenet. Cell. Genet., 1995, V. 68, № 1-2, P. 79-81.

88. Magenis R.E., Smith L., Nadeau J.H., Johnson K.R., Mountjoy K.G., Cone R.D. Mapping of the ACTH, MSH, and neural (MC3 and MC4) melanocortin receptors in the mouse and human // Mamm. Genome, 1994, V. 5, № 8, P. 503-508.

89. Buggy J.J. Binding of alpha-melanocyte-stimulating hormone to its G-protein-coupled receptor on B-lymphocytes activates the Jak/STAT pathway // Biochem. J., 1998, V. 331 (Pt. 1), P. 211-216.

90. Schioth H.B., Prusis P., Muceniece R., Mutulis F., Mutule I., Wikberg J.E. Thyrotropin releasing hormone (TRH) selectively binds and activates the melanocortin 1 receptor // Peptides, 1999, V. 20, №3, P. 395-400.

91. Wikberg J.E. Melanocortin receptors: perspectives for novel drugs // Eur. J. Pharmacol., 1999, V. 375, № 1-3, P. 295-310.

92. Lerner M.R. Synthetic melanocortin receptor agonists and antagonists // Arm. N. Y. Acad. Sci., 1999, V. 885, P. 153-60.

93. Raikhinstein M., Zohar M., Hanukoglu J. cDNA cloning and sequence analysis of the bovine adrenocorticotropic hormone (ACTH) receptor // Biochim. Biophys. Acta, 1994, У. 1220, P. 329-332.

94. Kubo M., Ishizuka Т., Kijima H., Kakinuma M., Koike T. Cloning of mouse adrenocorticotropin receptor-encoding gene // Gene, 1995, V. 153, P. 279-280.

95. Takeuchi S., Kudo Т., Takahashi S. Molecular cloning of the chicken melanocortin 2 (ACTH)-receptor gene // Biochimica et Biophysica Acta (BBA)/Molecular Cell Research, 1998, V. 1403, №27, P. 102-108.

96. Clark A.J.L., Cammas F.M. The ACTH receptor // Bailliere's Clinical Endocrinology and Metabolism, 1996, V. 10, № 1, P. 29-47.

97. Naville D., Penhoat A., Barjhoux L., Jaillard C., Fontanay S., Saez J., Durand P. Characterization of the human ACTH receptor gene and in vitro expression // Endocr. Res., 1996, V. 22, №4, P. 337-348.

98. Tatro J.B. Receptor biology of the melanocortins, a family of neuroimmunomodulatory peptides //Neuroimmunomodulation, 1996, V. 3, P. 259-284.

99. Durand P., Locatelli A. Up regulation of corticotrophin receptors by ACTH1-24 in normal and hypophysectomized rabbits // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1980, V. 96, № 1, P. 447456.

100. Penhoat A., Jaillard C., Saez J.M. Corticotropin positively regulates its own receptors and cAMP response in cultured bovine adrenal cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, V. 86, № 13, P. 4978-4981.

101. Rainey W.E., Viard I., Saez J.M. Transforming growth factor beta treatment decreases ACTH receptors on ovine adrenocortical cells // J. Biol. Chem., 1989, V. 264, № 36, P. 2147421477.

102. Lebrethon M.C., Naville D., Begeot M., Saez J.M. Regulation of corticotropin receptor number and messenger RNA in cultured human adrenocortical cells by corticotropin and angiotensin II // J. Clin. Invest., 1994, V. 93, № 4, P. 1828-1833.

103. Mountjoy K.G., Bird I.M., Rainey W.E., Cone R.D. ACTH induces up-regulation of ACTH receptor mRNA in mouse and human adrenocortical cell lines // Molecular and Cellular Endocrinology, 1994, V. 99, № 1, P. R17-20.

104. Penhoat A., Jaillard C., Saez J.M. Regulation of bovine adrenal cell corticotropin receptor mRNA levels by corticotropin (ACTH) and angiotensin-II (A-II) // Molecular and Cellular Endocrinology, 1994, V. 103, № 1-2, P. R7-10.

105. Penhoat A., Lebrethon M.C., Begeot M., Saez J.M. Regulation of ACTH receptor mRNA and binding sites by ACTH and angiotensin II in cultured human and bovine adrenal fasciculata cells//Endocr. Res., 1995, V. 21, № i2,P. 157-168.

106. Johnson H.M., Downs M.O., Pontzer C.H. Neuroendocrine peptide hormone regulation of immunity //Neuroimmunoendocrinology, Chemical Immunology, 1992, 2nd ed. (J.E. Blalock, ed.), Karger, Basel, V. 52, P. 49-83.

107. Johnson H.M., Smith E.M., Torres B.A., Blalock J.E. Neuroendocrine hormone regulation of in vitro antibody production// Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1982, V. 79, P. 4171-4174.

108. Zwilling B.S., Lafuse W.P., Brown D., Pearl D. Characterization of ACTH mediated suppression of MHC class II expression by murine peritoneal macrophages // Journal of Neuroimmunology, 1992, V. 39, № 1-2, P. 133-138.

109. Ichinose M., Sawada M., Maeno T. Suppression of phagocytosis by adrenocorticotropic hormone in murine peritoneal macrophages // Immunology Letters, 1994, V. 42, № 3, P. 161-165.

110. Altavilla D, Bazzani C, Squadrito F, Cainazzo MM, Mioni C, Bertolini A, Guarini S. Adrenocorticotropin inhibits nitric oxide synthase II mRNA expression in rat macrophages // Life Sci. 2000;66(23):2247-54.

111. McGlone J.J., Lumpkin E.A., Norman R.L. Adrenocorticotropin stimulates natural killer cell activity // Endocrinology, 1991, V. 129, № 3, P. 1653-1658.

112. Koff W.C., Dunegan M.A. Modulation of macrophage-mediated tumoricidal activity by neuropeptides and neurohormones // J. Immunology, 1985, Y. 135, № 3, P. 350-354.

113. Nair M.P., Saravolatz L.D., Schwartz S.A. Selective inhibitory effects of stress hormones on natural killer (NK) cell activity of lymphocytes from AIDS patients // Immunol. Invest., 1995, V. 24, № 5, P. 689-699.

114. Catania A., Garofalo L., Cutuli M., Gringeri A., Santagostino E., Lipton J.M. Melanocortin peptides inhibit production of proinflammatory cytokines in blood of HIV-infected patients // Peptides, 1998, V. 19, №6, P. 1099-1104.

115. Miwa H., Gantz I., Konda Y., Shimoto Y., Yamada T. Structural determinants of the melanocortin peptides required for activation of melanocortin-3 and melanocortin-4 receptors // J. Pharmacol. Exp. Ther., 1995, V. 273, № 1, P. 367-372.

116. Clarke B.L., Bost K.L. Differential expression of functional adrenocorticotropic hormone receptors by subpopulations of lymphocytes // Immunol., 1989, V. 143, P. 464-469.

117. Clarke B.L. Binding and processing of 125I-ACTH by isolated rat splenic lymphocytes // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999, V. 266, № 2, P. 542-546.

118. Mishell RI, Dutton RW. Immunization of dissociated spleen cell cultures from normal mice // J. Exp. Med., 1967, V. 126, № 3, P. 423-442.

119. Johnson H.M., Smith E.M., Torres B.A., Blalock J.E. Regulation of the in vitro antibody response by neuroendocrine hormones // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, V. 79, № 13, P. 41714174.

120. Alvarez-Mon M., Kehrl J.H., Fauci A.S. A potential role for adrenocorticotropin in regulating human В lymphocyte functions // J. Immunol., 1985, V. 135, № 6, P. 3823-3826.

121. Carr D.J., Radulescu R.T., deCosta B.R., Rice K.C., Blalock J.E. Differential effect of opioids on immunoglobulin production by lymphocytes isolated from Peyer's patches and spleen // Life Sci., 1990, V. 47, № 12, P. 1059-1069.

122. Johnson H.M., Torres B.A., Smith E.M., Dion L.D., Blalock J.E. Regulation of lymphokine (gamma-interferon) production by corticotropin// J. Immunol., 1984, V. 132, № 1, P. 246-250.

123. Torres B.A., Farrar W.L., Johnson H.M. Interleukin 2 regulates immune interferon (IFN gamma) production by normal and suppressor cell cultures // J. Immunol., 1982, V. 128, № 5, P. 2217-2219.

124. Torres B.A., Yamamoto J.K., Johnson H.M. Cellular regulation of gamma interferon production: Lyt phenotype of the suppressor cell // Infect. Immun., 1982, V. 35, № 3, P. 770-776.

125. Epstein L.B., Cline M.J., Merigan T.C. PPD-stimulated interferon: in vitro macrophage-lymphocyte interaction in the production of a mediator of cellular immunity // Cell Immunol., 1971, Y. 2, № 6, P. 602-613.

126. Slominski A., Botchkareva N.V., Botchkarev V.A., Chakraborty A., Luger Т., Uenalan M., Paus R. Hair cycle-dependent production of ACTH in mouse skin // Biochim. Biophys. Acta, 1998, Y. 1448, P. 147-152.

127. Kapas S., Hagi-Pavli E., Brown D.W., Chhajlani V., Farthing P.M. Direct effects of corticotrophin on oral keratinocyte cell proliferation. Eur. J. Biochem. 1998, V. 256, № 1, P. 75-79.

128. Lotti Т., Teofoli P., Bianchi В., Mauviel A. POMC and fibroblast biology // Ann. N. Y. Acad. Sci., 1999, V. 885, P. 262-267.

129. Cooke B.A. Signal transduction involving cyclic AMP-dependent and cyclic AMP-independent mechanisms in the control of steroidogenesis // Mol. Cell Endocrinol., 1999, V. 151, № 1-2, P. 25-35.

130. Clarke B.L. Calcium uptake by ACTH-stimulated lymphocytes: what is the physiological significance? // Adv. Neuroimmunol., 1995, V. 5, № 3, P. 271-81.

131. Clarke В., Lyons P., Carr D., Blalock J. Corticotropin-induced nucleotide cyclase activity in isolated rat lymphocytes // J. Cell Biol., 1991, V. 115, 18a.

132. Cheitlin R., Buckley D.I., Ramachandran J. The role of extracellular calcium in corticotropin-stimulated steroidogenesis // J. Biol. Chem., 1985, V. 260, № 9, P. 5323-5327.

133. Schimmer B.P. Cyclic nucleotides in hormonal regulation of adrenocortical function // Adv. Cyclic Nucleotide Res., 1980, V. 13, P. 181-214.

134. Enyeart J.J., Enyeart J. A. Activation of separate calcium and A-kinase-dependent pathways by ACTH // Endocrine Res., 1998, V. 24, № 3-4, P. 325-334.

135. Kimoto Т., Ohta Y., Kawato S. Adrenocorticotropin induces calcium oscillations in adrenal fasciculata cells: single cell imaging // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1996, V. 221, № 1, P. 25-30.

136. Yanagibashi K., Papadopoulos V., Masaki E., Iwaki Т., Kawamura M., Hall P.F. Forskolin activates voltage-dependent Ca2+ channels in bovine but not in rat fasciculata cells // Endocrinology, 1989, V. 124, № 5, P. 2383-2391.

137. Yamazaki T, Higuchi K, Kominami S, Takemori S. 15-lipoxygenase metabolite(s) of arachidonic acid mediates adrenocorticotropin action in bovine adrenal steroidogenesis // Endocrinology, 1996, V. 137, № 7, P. 2670-2765.

138. Rubin R.P., Laychock S.G., End D.W. On the role of cyclic AMP and cyclic GMP in steroid production by bovine cortical cells // Biochim. Biophys. Acta, 1977, V. 496, № 2, P. 329338.

139. Clarke B.L., Moore D.R., Blalock J.E. Adrenocorticotropic hormone stimulates a transient calcium uptake in rat lymphocytes // Endocrinology, 1994, V. 135, № 5, P. 1780-1786.

140. Falaschi P., Martocchia A., Proietti A., Pastore R., D'Urso R. Immune system and the hypothalamus-pituitary-adrenal axis. Common words for a single language // Ann. N. Y. Acad. Sci., 1994, V. 741, P. 223-233.

141. Savastano S., Tommaselli A.P., Valentino R., Scarpitta M.T., D'Amore G., Luciano A., Covelli V., Lombardi G. Hypothalamic-pituitary-adrenal axis and immune system // Acta Neurol (Napoli), 1994, V. 16, № 4, P. 206-213.

142. Ottaviani E., Franchini A., Genedani S. ACTH and its role in immune-neuroendocrine functions. A comparative study // Curr. Pharm. Des., 1999, V. 5, № 9, P. 673-681.

143. Clarke B.L., Moore D.R., Blalock J.E. Adrenocorticotropic hormone stimulates a transient calcium uptake in rat lymphocytes // Endocrinology, 1994, V. 135, № 5, P. 1780-1786.

144. Costagliola S., Madec A.M., Benkirane M.M., Orgiazzi J., Carayon P. Monoclonal antibody approach to the relationship between immunological structure and biological activity of thyrotropin // Mol. Endocrinol., 1988, V. 2, № 7, P. 613-618.

145. Smith E.M., Phan M., Coppenhaver D., Kruger Т.Е., Blalock J.E. Human lymphocyte production of immunoreactive thyrotropin // Proc. Nail. Acad. Sci. USA, 1983, V. 80, P. 60106013.

146. Kruger Т.Е., Smith L.R., Harbour D.V., Blalock J.E. Thyrotropin: an endogenous regulator of the in vitro immune response // J. Immunol., 1989, V. 142, № 3, P. 744-747.

147. Harbour D.V., Kruger Т.Е., Coppenhaver D., Smith E.M., Meyer W.J. Differential expression and regulation of diyrotropin (TSH) in T cell lines // Mot. Cell. Endocrinol., 1989, V. 64, P. 229-241.

148. Peele M.E., Carr F.E., Baker J.R.Jr., Wartofsky L., Burman K.D. TSH beta subunit gene expression in human lymphocytes // Am. J. Med. Sci., 1993, V. 305, P. 1-7.

149. Standaert F.E., Chew B.P., Wong T.S., Michal J.J. Porcine lymphocytes secrete factors in response to LHRH to stimulate progesterone production by granulosa cells in vitro // Biol. Reprod., 1990, V. 42, P. 75 (abstr.).

150. Ebaugh M.J., Smith E.M. Human lymphocyte production of immunoreactive luteinizing hormone // FASEB J., 1988, V. 2, A1642 (abstr.).

151. Gorospe W.C., Kasson B.C. Lymphokines from concanavalin-A-stimulated lymphocytes regulate rat granulosa cell steroidogenesis in vitro // Endocrinology, 1989, V. 123, P. 2462-2471.

152. Pierpaoli W. Psychoneuroimmunology. New York, Academic Press, 1981, pp. 575-606.

153. Habaud O., Lissitzky S. Thyrotropin-specific binding M human peripheral blood monocytes and polymorphonuclear leucocytes // Mol. Cell. Endocrinol., 1977, V. 7, P. 79-87.

154. Harbour D.Y., Leon S., Keating C., Hughes Т.К. Thyrotropin modulates B-cell function through specific bioactive receptors // Prog. Neurendocrinol. Immunol., 1990, V. 3, P. 266-276.

155. Coutelier J.P., Kehrl J.H., Bellur S.S., Kohn L.D., Notkins A.L., Prabhakar B.S. Binding and functional effects of thyroid stimulating hormone on human immune cells // J. Clin. Immunol., 1990, V. 10, №4, P. 204-210.

156. Blalock J.E., Johnson H.M., Smith E.M., Torres B.A. Enhancement of the in vitro antibody response by thyrotropin // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1984, V. 125, № 1, P. 30-34.

157. Kruger Т.Е., Blalock J.E. Cellular requirements for thyrotropin enhancement of in vitro antibody production // J. Immunol., 1986, V. 137, № 1, P. 197-200.

158. Provinciali M., DiStefano G., Fabris N. Improvement in the proliferative capacity and natural killer cell activity of murine spleen lymphocytes by thyrotropin // Int. J. Immunopharm., 1992, V. 14, P. 865-870.

159. Rouabhia M., Chakir J., Deschaux P. Interaction between the immune and endocrine systems: immunomodulatory effects of luteinizing hormone // Prog. Neuroendocrinol. Immunol., 1991, V. 4, P. 86-91.

160. Smith P.E. The effect of hypophysectomy upon the involution of the thymus in the rat // Anat. Rec., 1930, V. 47, P. 119-129.

161. Berczi I., Nagy E. A possible role of prolactin in adjuvant arthritis // Arthritis Rheum., 1982, V. 25, №5, P. 591-594.

162. Nagy E., Berczi I., Friesen H.G. Regulation of immunity in rats by lactogenic and growth hormones // Acta Endocrinol (Copenh)., 1983, V. 102, № 3, P. 351-357.

163. Arranbrecht S. Specific binding of growth hormone to thymocytes // Nature (Lond), 1974, V. 252, P. 255-257.

164. Kiess W., Butenandt O. Specific growth hormone receptors on human peripheral mononuclear cells: reexpression, identification, and characterization // J. Clin. Endocrinol. Metab., 1985, V. 60, №4, P. 740-746.

165. Russell D.H., Kibler R., Matrisian L., Larson D.F., Poulos В., Magun B.E. Prolactin receptors on human T and В lymphocytes: antagonism of prolactin binding by cyclosporine // J Immunol., 1985, V. 134, № 5, P. 3027-3031.

166. Russell D.H., Matrisian L., Kibler R., Larson D.F., Poulos В., Magun B.E. Prolactin receptors on human lymphocytes and their modulation by cyclosporine // Biochem. Biophys. Res. Commun, 1984, V. 121, № 3, P. 899-906.

167. Hiestand P.C., Mekler P., Nordmann R., Grieder A., Permmongkol C. Prolactin as a modulator of lymphocyte responsiveness provides a possible mechanism of action for cy-closporin // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1986, V. 83, P. 2599-2603.

168. Weigent D.A., Baxter J.B., Wear W.E., Smith L.R., Bost K.L., Blalock J.E. Production of immunoreactive growth hormone by mononudear leukocytes // FASEB J., 1988, V. 2, P. 28122818.

169. Kao T.L., Harbour D.V., Smith E.M., Meyer W.J. Immunoreactive growth hormone production by cultured lymphocytes // Endocrinology, 1989, A343 (Abstr.).

170. Hattori N., Shimatsu, A., Sugita, M., Kumagai, S., Imura, H. Immunoreactive growth hormone (GH) secretion by human lymphocytes augmented exogenous GH // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1990, V. 168, P. 396-401.

171. Varma S., Sabharwal P., Sheridan J.F., Malarkey W.B. Growth hormone secretion by human peripheral blood mononuclear cells detected by an enzyme-linked immunoplaque assay // J. Clin. Endocrinol. Metab., 1993, V. 76, P. 49-53.

172. Lytras A., Quan M.E., Vrontakis M.E., Shaw J.E., Cattini P.A., Friesen H.G. Growth hormone expression in human Burkitt lymphoma serum-free Ramos cell line // Endocrinology, 1993, Y. 132, P. 620-628.

173. Rohn W.M., Weigent D.A. Cloning and nucleotide sequencing of rat lymphocyte growth hormone cDNA. // Neuroimmunomodulation. 1995, V. 2, № 2, P. 108-114.

174. Weigent D.A., Vines C.R., Long J.C., Blalock J.E., Elton T.S. Characterization of the promoter-directing expression of growth hormone in a monocyte cell line // Neuroimmunomodulation, 2000, V. 7, № 3, P. 126-134.

175. Weigent D.A., Blalock J.E. Effect of the administration of growth-hormone-producing lymphocytes on weight gain and immune function in dwarf mice // Neuroimmunomodulation, 1994, V. 1,P. 50-58.

176. Baxter J.B., Blalock J.E., Weigent D.A. Characterization of immunoreactive insulin-like growth factor-I from leukocytes and its regulation by growth hormone // Endocrinology, 1991, V.129, P. 1727-1734.

177. Payne L.C., Rohn W., Weigent D.A. Lymphocyte-derived growth hormone releasing hormone is an autocrine modulator of lymphocyte-derived growth hormone // Endocrinology, 1994, A1255, P. 514 (Abstr.).

178. Kao T.-L., Supowit S.C., Thompson E.A., Meyer W.J., III Immunoreactive growth hormone production by human lymphocyte cell lines // Cell. Mol. Neurobiol., 1992, V. 12, P. 483498.

179. Clevenger C.V., Sillman A.L., Hanley-Hyde J., Prystowsky M.B. Requirement for prolactin during cell cycle regulated gene expression in cloned T-lymphocytes // Endocrinology, 1992, V.130, P. 3216-3222.

180. Weigent D.A., Blalock J.E. The production of growth hormone by subpopulations of rat mononuclear leukocytes // Cell. Immunol., 1991, V. 135, P. 55-65.

181. Weigent D.A., Baxter J.B., Blalock J.E. The production of growth hormone and insulin-like growth factor-I by the same subpopulation of rat mononuclear leukocytes // Brain Behav. Immun., 1992, V. 6, P. 365-376.

182. Jurcovicova J., Day R.N., MacLeod R.M. Expression of prolactin in rat lymphocytes // Prog. Neuroendocrinol. Immunol., 1992, V. 5, P. 256-263.

183. Pellegrini I., Lebrun J.-J., All S., Kelly P.A. Expression of prolactin and its receptor in human lymphoid cells // Mol. Endocrinol., 1992, V. 6, P. 1023-1031.

184. O'Neal K.D., Montgomery D.W., Truong T.M., Yu-Lee L.-Y. Prolactin gene expression in human thymocytes // Mol. Cell. Endocrinol., 1992, V. 87, R19-R23.

185. Montgomery D.W., Shen G.K., Ulrich E.D., Steiner L.L., Parrish P.R., Zukoski C.F. Human thymocytes express a prolactin-like messenger ribonudeic acid and synthesize bioactive prolactin-like proteins // Endocrinology, 1992, V. 131, P. 3019-3026.

186. Friesen H.G., DiMattia G.E., Too C.K.L. Lymphoid tumor cells as models for studies of prolactin gene regulation and action // Prog. Neuroendocrinol. Imnunol., 1991,V. 4, P. 1-9.

187. Turkington R.W. Ectopic production of prolactin //N. Engl. J. Med., 1971, Y. 285, P. 14551458.

188. Rosen S.W., Weintraub B.D., Aaronson S.A. Nonrandom ectopic protein production by malignant cells: direct evidence in vitro // J. Clin. Endocrinol. Metab., 1980, V. 50, № 5, P. 834841.

189. DiMattia G.E., Gellersen В., Bohnet H.G., Friesen H.G. A human B-lymphoblastoid cell line produces prolactin // Endocrinology, 1988, V. 122, № 6, P. 2508-2517.

190. Hiestand P.C., Mekler P., Nordmann R., Grieder A., Permmongkol C. Prolactin as a modulator of lymphocyte responsiveness provides a possible mechanism of action for cyclosporine // Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1986, V. 83, № 8, P. 2599-2603.

191. Schuler L.A., Hurley W.L. Molecular cloning of a prolactin-related mRNA expressed in bovine placenta //Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1987, V. 84, № 16, P. 5650-5654.

192. Duckworth M.L., Kirk K.L., Friesen H.G. Isolation and identification of a cDNA clone of rat placental lactogen II // J. Biol. Chem., 1986, V. 261, № 23, P. 10871-10878.

193. Linzer D.I., Lee S.J., Ogren L., Talamantes F., Nathans D. Identification of proliferin mRNA and protein in mouse placenta // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1985, V. 82, № 13, P. 43564359.

194. Gala R.R. Prolactin and growth hormone in the regulation of the immune system // Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1991,V. 198, P. 513-527.

195. Bazan J.F. Structural design and molecular evolution of a cytokine receptor superfamily // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1990,V. 87, P. 6934-6938.

196. Dardenne M., deMoraes M.D.C.L., Kelley P.A., Gagnerault M.-C. Prolactin receptor expression in human hematopoietic tit sues analyzed by flow cytofluorometry // Endocrinology, 1994, V. 134, P. 2108-2114.

197. Gagnerault M.-C., Touraine P., Savino W., Kelly P.A., Dardenu M. Expression of prolactin receptors in murine lymphoid ce& in normal and autoimmune situations // Immunol., 1993, V. 150, P. 5673-5681.

198. Gala R.R., Shevach E.M. Identification by analytical flowcytometry of prolactin receptors on immunocompetent cell populations in the mouse // Endocrinology, 1993, V. 133, P. 1617-1623.

199. Ali S., Pellegrini I., Kelly P.A. A prolactin-dependent immune cell line (Nb2) expresses a mutant form of prolactin recepux // Biol. Chew., 1991, V. 266, P. 20110-20117.

200. Krown K.A., Wang Y.-F., Walker A.M. Autocrine interactiui between prolactin and its receptor occurs intracellularly in the 235-1 mammotroph cell line // Endocrinology, 1994, V. 134, P. 1546-1552.

201. De Vos A.M., Ultsch M., Kossiakoff A.A. Human growth hormone and extracellular domain of its receptor: crystal structure of the complex // Science, 1992, V. 255, P. 306-312.

202. Silva C.M., Weber M.J., Thorner M.O. (1993) Stimulation d tyrosine phosphorylation in human cells by activation of the growit hormone receptor // Endocrinology, 1993, V. 132, P. 101108.

203. Argetsinger L.S., Campbell G.S., Yang X., Witthuhn B.A., Silvennoinen O., Ihle J.N, Carter-Su C. (1993) Identification of JAK2 as a growth hormone receptor-associated tyrosine kinase // Cell, 1993, Y. 74,P. 237-244.

204. Roupas P., Herington A.C. Cellular mechanisms in the processing of growth hormone and its receptor// Mol. Cell. Endocrinol, 1989, V. 61, P. 1-14.

205. Baumann G. Growth hormone-binding proteins // Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1993, V. 202, P. 392-400.

206. Kelley K.W. Growth hormone, lymphocytes, and macrophages // Biochem. Pharmacol, 1989, V. 35, P. 705-713.

207. Kelley K.W. The role of growth hormone in modulation of the immune response // Ann. N. Y. Acad. Sci, 1990, V. 594, P. 95-103.

208. Fu Y.-K, Arkins S, Fuh G, Cunningham B.C., Well J.A, Font S, Cronin M.J, Dantzer R, Kelley K.W. Growth hormone augments superoxide anion secretion of human neutrophils by binding to the prolactin receptor // J. Clin. Invest, 1992, V. 89, P. 451-457.

209. Johnson E.W, Jones L.A, Kozak R.W. Expression and function of insulin-like growth factor receptors on anti-CDS-activated human T lymphocytes // J. Immunol, 1992, V. 148, P. 6371.

210. Gala R.R, Shevach E.M. Influence of prolactin and growth hormone on the activation of dwarf mouse lymphocytes in vivo II Proc. Soc. Exp. Biol. Med, 1993, V. 204, P. 224-230.

211. Weigent D.A., Blalock J.E., LeBoeuf R.D. An antisense oligonucleotide to growth hormone mRNA inhibits lymphocyte proliferation // Endocrinology, 1991, Y. 128, P. 2053-2057.

212. Berczi I., Nagy E. Prolactin and other lactogenic hormones // In Pituitary Function and Immunity (I. Berczi, ed.), 1986, CRC Press, Boca Raton, FL, 161.

213. Berczi I. The immunology of prolactin // Semin. Reprod. Endocrinol., 1992, V. 10, P. 196219.

214. Bernton E.W., Meltzer M.S., Holaday J.W. Suppression of macrophage activation and T-lymphocyte function in hypoprolactinemic mice // Science, 1988, V. 239, № 4838, P. 401-404.

215. Wilner M.L., Ettenger R.B., Koyle M.A., Rosenthal J.T. The effect of hypoprolactinemia alone and in combination with cyclosporine on allograft rejection // Transplantation, 1990, V. 49, № 2, P. 264-267.

216. Russel D.H. New aspects of prolactin and immunity: a lymphocyte-derived prolactin-like product and nuclear protein kinase С activation // TiPS, 1989, V. 10, P. 40-44.

217. Tabor C.W., Tabor H. Polyamines // Annu Rev Biochem., 1984, V. 53, P. 749-790.

218. Clevenger C.V., Russell D.H., Appasamy P.M., Prystowsky M.B. Regulation of interleukin 2-driven T-lymphocyte proliferation by prolactin // Proc. Natl. Acad. Sci USA, 1990, V. 87, № 16, P. 6460-6464.

219. Berczi I., Nagy E., de Toledo S.M., Matusik, RJ., Friesen H.G. Pituitary hormones regulate c-myc and DNA synthesis in lymphoid tissue // J. Immunol., 1991, V. 146, P. 2201-2206.

220. Bernton E.W., Bryant H.U., Holaday J.W. (1991) Prolactin and immune function // In Psychoneuroimmunology, 2nd ed (R. Ader, D.L. Felten, and N. Cohen, eds.), Academic Press, San Diego, CA, 403-428.

221. Croze F., Walker A., Friesen H.G. Stimulation of growth of Nb2 lymphoma cells by interleukin-2 in serum-free and serum-containing media // Mol. Cell Endocrinol., 1988, V. 55, P. 253-259.

222. Clevenger C.V., Sillman A.L., Hanley-Hyde J., Prystowsky M.B. Requirement for prolactin during cell cycle regulated gene expression in cloned T-lymphocytes // Endocrinology, 1992, V. 130, P. 3216-3222.

223. Russell D.H., Larson D.F. Prolactin-induced polyamine biosynthesis in spleen and thymus: specific inhibition by cyclosporine // Immunopharmacology, 1985, V. 9, P. 165-169.

224. Clevenger C.V., Altmann S.W., Prystowsky M.B. Requirement of nuclear prolactin for interleukin-2-stimulated proliferation of T lymphocytes // Science, 1991, V. 253, P. 77-79.

225. Matera L., Cesano A., Bellone G., Oberholtzer E. Modulatory effect of prolactin on the resting and mitogen-induced activity of T, B, and NK lymphocytes // Int. J. Immunopharmacol., 1992, V. 14, P. 1235-1240.

226. Bernton E., Bryant H., Holaday J., Dave J. Prolactin and prolactin secretagogues reverse immunosuppression in mice treated with cysteamine, glucocordcoids, or cyclosporin-A // Brain Behav. Immun., 1992, V. 6, P. 394-408.

227. Vankelecom H., Carmeliet P., Van Damme J., Billiau A., Denef C. Production of interleukin-6 by folliculo-stellate cells of the anterior pituitary gland in a histiotypic cell aggregate culture system //Neunendocrinology, 1989, V. 49, P. 102-106.

228. Spangelo B.L., MacLeod R.M., Isakson P.C. Production of interleukin-6 by anterior pituitary cells in vitro // Endocrinology, 1990, V. 126, 582-586.

229. Koenig J.I., Snow K., Clark B.D., Toni R., Cannon J.G., Show A.R., Dinarello C.A., Reichlin S., Lee S.L., Lechan R.M. (1990) Intrinsic pituitary interleukin-ip is induced by bacterial lipopolysaccharide // Endocrinology, 1990, V. 126, P. 3053-3058.

230. Dubois J.-M., Dayer J.-M., Siegrist-Kaiser C.A., Burger A.G. Human recombinant interleukin-ip decreases plasma thyroid hormone and thyroid stimulating hormone levels in rats // Endocrinology, 1988, V. 123, P. 2175-2181.

231. Scarborough D.E., Lee S.L., Dinarello C.A., Reichlin S. Interleukin-ip stimulates somatostatin biosynthesis in primary cultures of fetal rat brain // Endocrinology, 1989, V. 124, P. 549-551.

232. Pang X.-P., Hershman J.M., Mirell C.J., Pekary A.E. Impairment of hypothalamic-pituitary-thyroid function in rats treated with human recombinant tumor necrosis factor-a (cachectin) // Endocrinology, 1989, V. 125, P. 76-84.

233. Spangelo B.L., MacLeod R.M. Regulation of acute phase response and neuroendocrine function by interleukin 6 // Prog. Neuroendocrinol. Immunol., 1990, V. 3, P. 167-174.

234. Spangelo B.L., Isakson P.C., MacLeod R.M. Production of interleukin-6 by anterior pituitary cells in stimulated by increased intracellular adenosine 3',5'-monophosphate and vasoactive intestinal peptide // Endocrinology, 1990, V. 127, P. 403-409.

235. Carmeliet P., Vankelecom, H., Van Damme J., Billiau A., Denef C. Release of interleukin-6 from anterior pituitary cell aggregates: developmental pattern and modulation by glucocorticoids and forskolin//Neuroendocrinology, 1991, V. 53, P. 29-34.

236. Spangelo B.L., Judd A.M., MacLeod R.M., Goodman D.W., Isakson P.C. Endotoxin-induced release ofinterleukin-6 from rat medial basal hypothalami // Endocrinology, 1990, V. 127, P. 1779-1785.

237. Spangelo B.L., DeHoll P.D., Kalabay L., Bond B.R., Arnaud P. Neurointermediate pituitary lobe cells synthesize and release interleukin-6 in vitro: effects of lipopolysaccharide and interleukin-IP //Endocrinology, 1994, V. 135, P. 556-563,

238. Lyson K., McCann S.M. Involvement of arachidonic acid cascade pathways in interleukin-6-stimulated corticotropin-releasing factor release in vitro // Neuroendocrinology, 1992, V. 55, P. 708-713.

239. Katakami Y., Nakao Y., Koizumi Т., Katakami N., Ogawa R., Fujita T. Regulation of tumour necrosis factor production by mouse peritoneal macrophages: the role of cellular cyclic AMP // Immunology, 1988, V. 64, № 4, P. 719-724.

240. Novogrodsky A., Patya M., Rubin A.L., Stenzel K.H. Agents that increase cellular cAMP inhibit production of interleukin-2, but not its activity // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1983, V. 114, № 1, P. 93-98.

241. Reizin F.N., Roikhel V.M., Chumakov M.P. The influence of substances changing the intracellular concentration of cyclic adenosine 3'5'-monophosphate on interferon synthesis in chick embryo cell culture // Arch. Virol., 1975, V. 49, № 4, P. 307-315.

242. Aloisi F., Penna G., Cerase J., Menendez Iglesias В., Adorini L. IL-12 production by central nervous system microglia is inhibited by astrocytes // J. Immunol., 1997, V. 159, № 4, P. 16041612.

243. Lacour M., Arrighi J.F., Muller K.M., Carlberg C., Saurat J.H., Hauser C. cAMP up-regulates IL-4 and IL-5 production from activated CD4+ T cells while decreasing IL-2 release and NF-AT induction//Int. Immunol., 1994, V. 6, № 9, P. 1333-1343.

244. Siegel M.D, Zhang D.H, Ray P, Ray A. Activation of the interleukin-5 promoter by cAMP in murine EL-4 cells requires the GATA-3 and CLEO elements // J. Biol. Chem, 1995, V. 270, №41, P. 24548-24555.

245. Zhang Y, Lin J.X, Yilcek J. Synthesis of interleukin 6 (interferon-beta 2/B cell stimulatory factor 2) in human fibroblasts is triggered by an increase in intracellular cyclic AMP // J. Biol. Chem, 1988, V. 263, № 13, P. 6177-6182.

246. Platzer C, Meisel C, Vogt K, Platzer M„ Volk H.D. Up-regulation of monocytic IL-10 by tumor necrosis factor-alpha and cAMP elevating drugs // Int. Immunol, 1995, V. 7, № 4, P. 517523.

247. Eigler A, Siegmund B, Emmerich U, Baumann K.H, Hartmann G, Endres S. Antiinflammatory activities of cAMP-elevating agents: enhancement of IL-10 synthesis and concurrent suppression of TNF production // J. Leukoc. Biol, 1998, V. 63, № 1, P. 101-107.

248. Mashaly M.M, Trout J.M, Hendricks G.L. The endocrine function of the immune cells in the initiation of humoral immunity // Poultry Sci, 1993, V. 72, P. 1289-1293.

249. Woloski B.M.R.N.J, Smith E.M, Meyer W.J.I. Corticotropin-releasing activity of monokines // Science, 1985, V. 230, P. 1035-1037.

250. Bernton E.W, Beach J.E, Holaday J.W, Smallridge R.C, Fein H.G. Release of multiple hormones by a direct action of interleukin-1 on pituitary cells // Science, 1987, V. 238, P. 519-522.

251. Uehara A, Gillis S, Arimura A. Effects of interleukin-1 on hormone release from normal rat pituitary cells in primary culture // Neuroendocrinology, 1987,V. 45, P. 343-347.

252. Sapolsky R, Rivier C, Yamamoto G, Plotsky P, Vale W. Interleukin-1 stimulates the secretion of hypothalamic corticotropin-releasing factor // Science, 1987, V. 238, P. 522-524.

253. Webster E.L, Tracey D.E, DeSouza E.B. Upregulation of interleukin-1 receptors in mouse AtT-20 pituitary tumor cells following treatment with corticotropin-releasing factor // Endocrinology, 1991, V. 129, P. 2796-2798.

254. Payne L.C., Weigent D.A., Blalock J.E. Induction of pituitary sensitivity to interleukin-1: a new function for corticotropin releasing hormone // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1994, V. 198, P. 480-484.

255. Kaira P.S., Sahu A., Kaira S.P. (1990) Interleukin-1 inhibits the ovarian steroid-induced luteinizing hormone surge and release of hypothalamic luteinizing hormone-releasing hormone in rats // Endocrinology, 1990, V. 126, P. 2145-2152.

256. Spangelo B.L, Judd A.M., Isakson P.C., MacLeod R.M. Interleukin-6 stimulates anterior pituitary hormone release in vitro // Endocrinology, 1989, V. 125, P. 575-577.

257. Naitoh Y., Fukata J., Tominaga Т., Nakai Y., Tamai S., Mori K., Imura H. Interleukin-6 stimulates the secretion of adrenocorticotropic hormone in conscious, freely moving rats // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1988, V. 155, P. 1459-1463.

258. Karanth S., McCann S.M. Anterior pituitary hormone control by interleukin-2 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, V. 88, P. 2961-2965.

259. Lotze M.T., Frana L.W., Sharrow S.O., Robb R.J., Rosenberg S.A. In vivo administration of purified human interleukin 2. I. Half-life and immunologic effects of the Jurkat cell line-derived IL-2//J. Immunol., 1985, V. 134, P. 157-166.

260. Artz E., Buric R., Stelzer G., Stalla J., Sauer J., Renner U., Stalla G.K. Interleukin involvement in anterior pituitary cell growth regulation: effects of IL-2 and IL-6 // Endocrinology, 1993, V. 132, P. 459-467.

261. Karanth S., Aguila M.C., McCann S.M. The influence of interleukin-2 on the release of somatostatin and growth hormone releasing factor by mediobassal hypothalamus // Neuroendocrinology, 1993, V. 58, P. 185-190.

262. Gonzalez M.C., Aguila M.C., McCann S.M. In vitro effects of recombinant human gamma-interferon on growth hormone release // Prog. Neuroendocrinol. Immunol., 1991, V. 4, P. 222-227.

263. Gonzalez M.C., Riedel M., Rettori V., Yu W.H., McCann, S.M. Effect of recombinant human gamma-interferon on the release of anterior pituitary hormones // Prog. Neuroendocrinol. Immunol., 1990, V. 3, P. 49-54.

264. Milenkovic L., Rettori V., Snyder G.D., Reutler В., McCann SA Cachectin alters anterior pituitary hormone release by i direct action in vitro // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, V. 86, P. 2418-2422.

265. Gaillard R.C., Turnill D., Sappino P., Muller A.F. Tumor necrosis factor a inhibits the hormonal response of the pituitary gland to hypothalamic releasing factors // Endocrinology, 1990, V. 127, P.101-106.

266. McCann S.M., Karanth S., Kamat A., Dees W.L., Lyson K., Gimeno M., Rettori V. Induction of cytokines of the pattern of pituitary hormone secretion in infection // Neuroimmunomodulation, 1994, V. 1, P. 2-13.

267. Ray D.W., Ren S.G., Melmed S. Leukemia inhibitory factor regulates proopiomelanocortin transcription // Ann. N. Y. Acad. Sci., 1998, V. 840, P. 162-173.

268. Bousquet C., Ray D.W., Melmed S. A common proopiomelanocortin-binding element mediates leukemia inhibitory factor and corticotropin-releasing hormone transcriptional synergy // J. Biol. Chem., 1997, V. 272, № 16, P. 10551-10557.

269. Bousquet C., Melmed S. Critical role for STAT3 in murine pituitary adrenocorticotropin hormone leukemia inhibitory factor signaling // J. Biol. Chem., 1999, V. 274, № 16, P. 1072310730.

270. Auernhammer С.J., Chesnokova V., Melmed S. Leukemia inhibitory factor modulates interleukin-1(3-induced activation of the hypothalamo-pituitary-adrenal axis // Endocrinology, 1998, V. 139, №5, P. 2201-2208.

271. Mitin Y.V., Navolotskaya E.V., Vasilenko R.N., Abramov Y.M., Zav'yalov Y.P. Synthesis and properties of the peptides corresponding to the ACTH-like sequence of human immunoglobulin G1 // Int. J. Pept. Protein Res., 1993, V. 41, P. 517-521.

272. Учитель И.А. Макрофаги в иммунитете. М.; Медицина, 1978. С. 168-180.

273. Колесников С.И., Иванов Г.Г., Трунова JI.A. Метод выявления макрофагов в культуре мононуклеарных клеток // Новые методы научных исследований в клинической и экспериментальной медицине. Новосибирск; Наука, 1980. - С. 68-70.

274. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr O.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol receptor // J. Biol. Chem., 1951, V. 193, P. 265-275.

275. Fahlbusch В., Dornberger G. Studies of assay conditions for macrophage migration from an agarose droplet // Acta Biol. Med. Germ., 1979, V. 38, № 10, P. 1453-1460.

276. Zalmar J., Gergely P. J. One-step indirect migration inhibition (alF) assay // Immunol. Meth., 1982, V. 53, № 2, P. 245-250.

277. Sundsmo J.S., Gotze O. Human monocyte spreading induced by factor Bb of the alternative pathway of complement activation. A possible role for C5 in monocyte spreading // J. Exp. Med., 1981, V. 154, №3, P. 763-777.

278. Saltarelli D., Fischer S., Gacon G. Modulation of adenylate cyclase by guanine nucleotides and kirsten sarcoma virus mediated transformation // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1985, V. 127, P. 318-325.

279. Подопригора Г.И., Абакумова О.Ю. Образование цАМФ при фагоцитозе // Бюлл. эксперим. биол. и мед., 1976, Т. 82, № 8, С. 953-956.

280. Подопригора Г.И. цАМФ и его роль в клеточных механизмах адаптационных реакций //Успехи совр. биол., 1975, Т. 79, № 3, С. 361-370.

281. Остерман JI.A. Тонкослойная хроматография // Хроматография белков и нуклеиновых кислот / Под. ред. Г.П. Георгиева. М.; Наука, 1985. С. 457-509.

282. Роберте Т. Радиохроматография. М.; Мир, 1981. 259 с.

283. Chang K.-J, Jacobs S, Cuatrecasas P. Quantitative aspects of hormone-receptor interactions of high affinity. Biochim. Biophys. Acta. 1975; 406: 294-303.

284. Cheng Y.C.; Prusoff W. Relationship between the inhibition constant (ki) and the concentration of inhibitor which causes 50 percent inhibition (IC50) of an enzymatic reaction. Biochem. Pharmacol. 1973; 22: 3099-3108.

285. Julliard J.H, Shibasaki T, LingN, Guilemin R. High-molecular-weight immunoreactive p-endorphin in extracts of human placenta is a fragment of immunoglobulin G // Science, 1980, V. 208, P.183-185.

286. Houck J.C, Kimbull C, Chang C, Pedigo N.W, Yamamura H.J. Placental (3-endorphin like peptides // Science, 1980, V. 207, P. 78-80.

287. Gill G.N. Mechanism of ACTH action // Metabolism, 1972, V. 21, P. 571-582.

288. Gispen W.H. ACTH and brain membrane phosphorylation: a model for modulation by neuropeptide // Acta Biol. Med. Gen, 1982, V. 41, P. 279-288.

289. Naville D, Barjhoux L, Jaillard C, Saez J.M, Durand P, Begeot M. Stable expression of normal and mutant human ACTH receptor. Study of ACTH binding and coupling to adenylate cyclase // Mol. Cell. Endocrinol, 1997, V. 129, P. 83-90.

290. Bromberg Y, Pick E. Activation of macrophage adenylate cyclase by stimulants of the oxidative burst and by arachidonic acid—two distinct mechanisms // Cell. Immunol, 1981, V. 61, P. 90-103.

291. Pick E, Keisari Y. Superoxide anion and hydrogen peroxide production by chemically elicited peritoneal macrophages—induction by multiple nonphagocytic stimuli // Cell. Immunol, 1981, V. 59, P. 301-318.

292. Weissmann G., Dukor P., Zurier R.B. Effect of cyclic AMP on release of lysosomal enzymes from phagocytes//Nat. New. Biol. 1971, Y. 231, № 1,P. 131-135.

293. O'Dorisio M.S., Vandenbark G.R., LoBuglio A.F. Human monocyte killing of Staphylococcus aureus: modulation by agonists of cyclic adenosine 3'^'-monophosphate and cyclic guanosine 3',5'-monophosphate // Infect. Immun., 1979, V. 26, № 2, P. 604-610.

294. McLeod R., Remington S. Inhibition or killing of an intracellular pathogen by activated macrophages is abrogated by TLCK or aminophylline // Immunology, 1980, V. 39, № 4, P. 599-605.

295. Di Donato A., Draetta G.F., Illiano G., Tufano M.A., Sommese L., Galdiero F. Do porins inhibit the macrophage phagocyting activity by stimulating the adenylate cyclase? // J. Cyclic Nucleotide Protein Phosphor. Res., 1986, V. 11, № 2, P. 87-97.

296. Жилина И.Л., Елкина С.И., Бойченко М.Н. Влияние инсулина и изопренола на фагоцитарную активность макрофагов // Ж. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол., 1984, Т. 6, С. 98-101.

297. Johnson Н.М., Smith Е.М., Torres В.А., Blalock J.E. Regulation of the in vitro antibody response by neuroendocrine hormones // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, V. 79, P. 4171-4174.

298. Siemion I.Z., Kluczyk A. Tuftsin: On the 30-year anniversary of Victor Najjar's discovery // Peptides, 1999, V. 20, P. 645-674.

299. Constantopoulos A., Najjar V.A. Tuftsin, a natural and general phagocytosis stimulating peptide affecting macrophages and polymorphonuclear granulocytes // Cytobios, 1972, V. 6, № 2122, P. 97-100.

300. Morgan E.L., Hugli Т.Е., Weigle W.O. Isolation and identification of a biologically active peptide derived from the CH3 domain of human IgGl // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, 79, 5388-5391.

301. Huber R., Deisenhover J., Colman P.M., Matsushima M., Palm W. Crystallographic structure studies of an IgG molecule and an Fc fragment // Nature, 1976, 264, 415-420.

302. Pestka S., Langer J.A., Zoon K.C., Samuell C.E. Interferons and their actions // Arm. Rev. Biochem., 1987, V. 56, P. 727-777.

303. Adan R.A., van der Kraan M., Doornbos R.P., Bar P.R., Burbach J.P., Gispen W.H. Melanocortin receptors mediate alpha-MSH-induced stimulation of neurite outgrowth in neuro 2A cells // Brain Res. Mol. Brain Res., 1996, V. 36, № 1, P. 37-44.

304. Чипенс Г.И., Веретенникова Н.И., Вегнер Р.Э., Гниломедова JI.E., Розенталь Г.Ф. Структурные основы действия пептидных и белковых иммунорегуляторов. Рига: Знание, 1990.

305. Nyberg F., Sanderson К., Glamsta E.-L. The hemorphins: a new class of opioid peptides derived from the blood protein hemoglobin // Biopolymers, 1997, V. 43, № 2, P. 147-156.133

306. Carraway R.E., Ferris C.F. Isolation, biological and chemical characterization, and synthesis of a neurotensin-related hexapeptide from chicken intestine // J. Biol. Chem., 1983, V. 258, № 4, P. 2475-2479.

307. Koch G., Wiedemann K., Drebes E., Zimmermann W., Link G., Teschemacher H. Human beta-casomorphin-8 immunoreactive material in the plasma of women during pregnancy and after delivery // Regul. Peptides, 1988, V. 20, № 2, P. 107-117.

308. Кутышенко В.П., Христофоров B.C., Завьялов В.П. 'Н-ЯМР-исследование пептида, соответствующего АКТГ-подобной последовательности вариабельной части тяжелой цепи иммуноглобулина G1 Ей человека // Биофизика, 1986, Т. 31, № 6, С. 958-960.

309. Abramov V.M., Arkhangelskaya Z.A., Zav'yalov Y.P. Conformational properties of human immunoglobulin G subclasses. Analysis by temperature-perturbation and solvent-perturbation spectroscopy. // Biochim. Biophys. Acta, 1983, V. 742, P. 295-302.

310. Tischenko V.M., Zav'yalov V.P., Medgyesi G.A., Potekhin S.A., Privalov V.L. A thermodynamic study of cooperative structures in rabbit immunoglobulin G // Eur. J. Biochem., 1982, 126,517-521.

311. Schneider I.I., De Dwe C., Trowet D. Fate of plasma membrane during endocytosis. III. Evidence for incomplete breakdown of immunoglobulins in lysosomes of cultured fibroblasts // J. Cell. Biol., 1981, Y. 88, P. 380-387.