Сверхкритическая флюидная экстракция среднелетучих органических соединений из человеческих волос с последующим хромато-масс-спектрометрическим анализом всего экстракта тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат химических наук Богданов, Александр Владимирович

• Богданов, Александр Владимирович
• кандидат химических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат химических наук Богданов, Александр Владимирович

Введение.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Способы очистки волос.

1.2. Способы разложения волос.

1.2.1. Щелочное разложение.

1.2.2. Кислотное разложение.

1.2.3. Ферментативное разложение волос.

1.3. Способы экстракции из волос.

1.3.1. Способы экстракции из раствора после разложения волос.

1.3.1.1. Жидкость-жидкостная экстракция.

1.3.1.2. Твердофазная экстракция.

1.3.1.3. Твердофазная микроэкстракция.

1.3.2. Способы экстракции органических соединений без разложения волос.

1.3.2.1. Жидкостная экстракция.

1.3.2.2. Сверхкритическая флюидная экстракция.

1.4. Способы улавливания органических соединений из потока сверхкритического флюида.

1.5. Химическая модификация.

1.6. Сравнение различных методов извлечения органических соединений из волос

ГЛАВА 2. ИСХОДНЫЕ ВЕЩЕСТВА, АППАРАТУРА, МЕТОДИКА ЭКСПЕРИМЕНТА.

2.1. Оборудование.

2.2. Исходные вещества и реагенты.

2.3. Методика эксперимента.

2.3.1. Измельчение волос.

2.3.2. Разложение волос.

2.3.3. Жидкость-жидкостная экстракция.

2.3.4. Экстракция органических соединений из волос метанолом.

2.3.5. Сверхкритическая флюидная экстракция из волос.

2.3.6. Сверхкритическая флюидная экстракция из раствора.

2.3.7. Сбор экстракта.

2.3.8. Газохроматографический анализ экстрактов.

2.3.9. Хромато-масс-спектрометрический анализ экстрактов.

ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ ЗАВИСИМОСТИ СТЕПЕНИ ИЗВЛЕЧЕНИЯ СРЕДНЕЛЕТУЧИХ ОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ ИЗ ВОЛОС МЕТОДОМ СФЭ ОТ ПАРАМЕТРОВ ЭКСПЕРИМЕНТА.

3.1. Исследование зависимости степени извлечения от температуры флюида.

3.2. Исследование зависимости степени извлечения от давления флюида.

ГЛАВА 4. ХРОМАТО-МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЭКСТРАКТОВ ЧЕЛОВЕЧЕСКИХ ВОЛОС.

ГЛАВА 5. СРАВНЕНИЕ РАЗЛИЧНЫХ СПОСОБОВ ИЗВЛЕЧЕНИЯ СРЕДНЕ ЛЕТУ ЧИХ ОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ ИЗ ЧЕЛОВЕЧЕСКИХ ВОЛОС.

5.1. Экстракция органических соединений метанолом под действием ультразвука.

5.2. Разложение волос при помощи IMNaOHc последующей жидкость-жидкостной экстракцией из полученного раствора.

5.3. Разложение волос при помощи 1МNaOH с последующей сверхкритической флюидной экстракцией из полученного раствора.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сверхкритическая флюидная экстракция среднелетучих органических соединений из человеческих волос с последующим хромато-масс-спектрометрическим анализом всего экстракта»

В настоящее время волосы являются третьим по важности биологическим объектом для медицинских и токсикологических исследований после крови и мочи, выгодно отличаясь от них простотой отбора, долговременностью хранения аналитов в матрице (можно зафиксировать однократное принятие наркотического вещества спустя 2-6 месяцев), а также возможностью отбора пробы в любое время суток.

Обычно работы ограничиваются определением одной группы заданных соединений (например, анаболические стероиды) и продуктами их метаболизма. Гораздо реже встречаются работы, в которых определяют 2-3 группы соединений (чаще всего опиаты и кокаин с продуктами их метаболизма), и для определения в волосах соединений различных групп необходимо проведение множества дорогостоящих анализов, нацеленных на определение конкретных групп соединений.

Существует два подхода к экстракции органических соединений из волос - экстракция без разложения волос и экстракция с частичным либо полным разложением. Наиболее широко используются деструктивные способы извлечения, которые можно разделить на три типа: разложение при помощи щелочей (0.1 - 5М NaOH), кислот (0.05 - ЗМ HCI, H2S04) HCI/MeOH, ТФК/МеОН) и ферментативное разложение. После разложения проводят нейтрализацию и экстракцию определяемых соединений с помощью органических растворителей либо картриджей для твердофазной экстракции. Каждый из этих способов имеет свои ограничения. Так, щелочное разложение позволяет извлекать такие вещества, как морфин, амфетамины и каннабиноиды, но кокаин, героин, ацетилморфин и другие соединения, неустойчивые к действию щелочей, претерпевают деструкцию с образованием более простых производных. Кислотное разложение, особенно с использованием смесей ТФК/МеОН и HCI/MeOH минимизирует разложение сложных эфиров и способствует эффективной экстракции кокаина и опиатов, но при извлечении, неустойчивых к действию кислот, например, бензодиазепинов, приводит к деструкции и образованию множества побочных продуктов. Также при щелочном либо кислотном разложении происходит загрязнение пробы примесями из реагентов, используемых как для разложения волос, так и для нейтрализации полученного раствора. Ферментативное разложение позволяет извлекать вещества, неустойчивые к действию как кислот, так и оснований, но при этом требует дополнительной очистки раствора после экстракции, а также характеризуется большой стоимостью реагентов. После разложения определяемые соединения извлекают из раствора при помощи жидкостьжидкостной экстракции, твердофазной экстракции либо твердофазной микроэкстракции. Основным недостатком ЖЖЭ является необходимость использования больших объемов токсичных, а часто и горючих органических растворителей. Кроме того, их чистота редко превышает 99.7 %, и при упаривании происходит концентрирование примесей из растворителя, что приводит к искажению состава пробы. При этом для дальнейшего анализа используется 0.001-0.01 часть экстракта. Недостатком ТФЭ является использование органических растворителей, хотя и в количествах, меньших, чем в ЖЖЭ. При этом для анализа также используется малая часть экстракта. Преимущество ТФМЭ перед ЖЖЭ и ТФЭ - в отсутствии использования органических растворителей, недостаток

- в малых степенях извлечения.

Существуют также способы извлечения органических соединений из волос без их разложения, например, экстракции метанолом под действием ультразвука (обычно при определении бензодиазепинов, но возможно использование для извлечения каннабиноидов), инкубация в фосфатном буфере (КНгРО^МагНРСУ NaOH, рН 7.6) с последующей экстракцией смесью диэтилового эфира и хлороформа (при определении бензодиазепинов), экстракция в аппарате Сокслета (толуол, при определении внешнего загрязнения экотоксикантами). Недостатки способа

- в использовании органических растворителей и в низких степенях извлечения. При этом для анализа также используется малая часть экстракта.

В последние годы возник интерес к сверхкритической флюидной экстракции (СФЭ) как к альтернативе классическим методам экстракции веществ из биологических матриц. В качестве преимуществ этого метода можно отметить: s желаемая селективность экстракции может быть получена варьированием таких параметров, как давление, температура, модификатор; s хорошие диффузионные качества сверхкритических флюидов способствуют быстрому проникновению и извлечению из образца; использование низких температур позволяет извлекать без разложения термически лабильные соединения.

Также преимуществом СФЭ из волос перед другими экстракционными методами является возможность одновременной экстракции соединений, извлечение которых другими методами невозможно из-за различных условий экстракции. Так, например, при экстракции кокаина и опиатов волосы обычно подвергают щелочному либо кислотному гидролизу, а бензодиазепины в этих условиях разлагаются с образованием различных соединений (например, бензофенонов). На настоящий момент в литературе описаны методики извлечения органических соединений (опиатов, кокаина, метадона, каннабиноидов, бензодиазепинов и барбитуратов), не включающие разложение волос.

Сверкритическую флюидную экстракцию органических соединений из волос обычно проводят, ограничиваясь 1-2 классами заданных соединений, при анализе лишь малой (0.001-0.01) части экстракта. Также встречаются редкие работы по определению некоторых экотоксикантов в волосах, но вопрос определения всех неизвестных органических соединений, включая экотоксиканты, в волосах с использованием СФЭ из волос и анализа всего экстракта в литературе не рассматривался.

После экстракции производят определение соединений с помощью иммуноферментативных методов, ВЭЖХ, капиллярного электрофореза, ГХ-МС ВЭЖХ-МС. Основная сложность при этом заключается в низком содержании определяемых соединений - на уровне нг/мг, иногда - пг/мг.

ВЭЖХ и капиллярный электрофорез для определения органических соединений в волосах используются крайне редко ввиду низкой чувствительности и недостатком достоверности определения, иммуноферментативные методы обычно используются как скриннинговые из-за малой точности на данном уровне концентраций, и даже хромато-масс-спектрометрические методы зачастую ограничены применением "режима сбора отдельных ионов" в целях достижения большей чувствительности. Использование всего экстракта для анализа является одним из возможных путей решения данной проблемы.

Необходимо отметить, что в литературе отсутствуют работы по изучению состава неизвестных среднелетучих примесей, присутствующих в волосах. Кроме того, нет единого мнения о степени извлечения соединений, принадлежащих к различным классам, при использовании известных методов извлечения. Поэтому актуально исследование возможности обнаружения различных классов органических соединений, присутствующих в волосах, и их идентификации.

Целью настоящей работы являлось разработка способа определения состава среднелетучих органических соединений, присутствующих в волосах человека, основанного на СФЭ без использования растворителя и ГХ/МС анализе всего экстракта, и его сопоставление с существующими способами выделения примесей из волос и их определения.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Исследовать зависимости сверхкритической флюидной экстракции из волос от давления и температуры, а также от времени экстракции;

2. Разработать способ определения среднелетучих органических соединений различных классов в человеческих волосах, основанный на СФЭ из волос и последующем ГХ-МС анализе всего экстракта;

3. В оптимальных условиях провести анализ волос различных людей с использованием перевода всего экстракта в ГХ-МС путем термодесорбции;

4. Провести сравнение результатов анализа волос при использовании разработанного способа и при использовании экстракции из волос органическими растворителями с последующим ГХ/МС анализом малой части экстракта;

5. Провести сравнение результатов анализа волос при использовании разработанного способа и при разложении волос с последующей экстракцией из реакционной смеси органическими растворителями с последующим ГХ/МС анализом малой части экстракта;

6. Провести сравнение результатов анализа волос при использовании разработанного способа и при разложении волос с последующей СФЭ из реакционной смеси и анализом всего экстракта методом ГХ/МС.

Научная новизна работы:

1. Исследована зависимость степени извлечения среднелетучих органических соединений из волос методом СФЭ без использования растворителя от времени экстракции, температуры и давления сверхкритического флюида;

2. В результате проведенных исследований разработан способ определения среднелетучих органических соединений в человеческих волосах, основанный на сочетании СФЭ из волос с хромато-масс-спекгрометрическим анализом всего экстракта без использования органических растворителей;

3. Исследован состав среднелетучих органических соединений в волосах различных людей при использовании разработанного способа определения. Диапазон содержаний определяемых соединений составил 0.002 - 99.6 нг/мг волос. Показано, что состав экстрагированных соединений и их количества схожи для различных образцов волос. В основном, различия между образцами волос проявляются на уровне менее 1 нг/мг волос;

4. Исследован состав среднелетучих соединений, выделенных из одного из образцов волос жидкостной экстракцией без разложения и проведено сопоставление с данными, полученными разработанным способом. При использовании разработанного способа обнаружено 214 соединений, при использовании экстракции метанолом - 43, при этом 28 соединений обнаружено обоими способами. Суммарное содержание извлеченных соединений при использовании разработанного способа составило 223 нг/мг волос, при использовании экстракции метанолом - 123 нг/мг волос;

5. Исследован состав среднелетучих соединений, выделенных жидкостной экстракцией дихлорметаном из реакционной смеси после разложения волос и проведено сопоставление с данными, полученными разработанным способом. При использовании ЖЖЭ зарегистрировано 36 соединений, из них 11 входят в число соединений, выделенных СФЭ из волос. Суммарное содержание извлеченных соединений при использовании экстракции дихлорметаном из реакционной смеси составило 37 нг/мг волос;

6. С использованием ГХ/МС и анализа всего экстракта исследован состав органических соединений, выделенных сверхкритической флюидной экстракцией без использования органического растворителя из реакционной смеси, полученной щелочным разложением волос, и проведено сопоставление с составом примесей, полученных при использовании разработанного способа, основанного на СФЭ из волос и ГХ/МС анализе всего концентрата. Обнаружено 151 соединение, из них 47 входят в число соединений, выделенных СФЭ из волос. Суммарное содержание извлеченных соединений при использовании СФЭ из реакционной смеси составило 188 нг/мг волос;

7. Показано, что в состав исследованных экстрактов входили соединения, принадлежащие к таким классам соединений, как алифатические углеводороды, альдегиды, кетоны, спирты, карбоновые кислоты и их эфиры. Наряду с ними в состав всех исследованных образцов волос входили различные фталаты, которые относятся к стойким органическим загрязнителям (СОЗ), подлежащим обязательному контролю.

Практическая значимость работы: Разработан способ определения неизвестных среднелетучих органических соединений в человеческих волосах на уровне 0.001 - 100 нг/мг волос, основанный на СФЭ из волос, улавливании соединений из потока СФ в сорбционный картридж, термодесорбции в газовый хроматограф и ГХ-МС анализе всего экстракта. Результаты работы использованы на Химическом факультете МГУ им. М.В. Ломоносова. С использованием разработанного способа проведено определение состава среднелетучих органических соединений в волосах различных людей. Показано, что наиболее полная информация о составе неизвестных среднелетучих примесей в волосах может быть получена при сочетании различных способов выделения, рассмотренных в работе. Результаты работы могут быть использованы для оценки загрязненности внутренней среды организма человека стойкими органическими загрязнителями, а также для в медицине для ранней диагностики различных заболеваний путем определения в волосах соединений-маркеров заболеваний.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Результаты исследования зависимости степени извлечения органических соединений методом СФЭ из волос без использования органических растворителей от параметров эксперимента.

2. Способ определения среднелетучих органических соединений в человеческих волосах, основанный на СФЭ из волос и хромато-масс-спектрометрическом анализе всего экстракта без использования органических растворителей.

3. Результаты определения среднелетучих органических соединений в волосах различных людей, полученные с использованием разработанного способа.

4. Результаты сопоставления состава среднелетучих органических соединений, обнаруженных в волосах при использовании разработанного способа и общепринятого способа, основанного на экстракции органическим растворителем из волос с последующим ГХ/МС анализом малой части экстракта.

5. Результаты сопоставления состава среднелетучих органических соединений, обнаруженных в волосах при использовании разработанного способа и общепринятого способа, основанного на разложении волос раствором NaOH, жидкостной экстракции из реакционной смеси органическим растворителем и ГХ/МС анализе малой части экстракта.

6. Результаты сопоставления состава среднелетучих органических соединений, обнаруженных в волосах при использовании разработанного способа и предложенного нами способа, основанного на разложении волос раствором NaOH, прямой СФЭ из реакционной смеси без использования органического растворителя и ГХ/МС анализе всего экстракта.

Апробация работы:

Результаты работы были представлены на Тринадцатой европейской конференции по аналитической химии Euroanalysis XIII (Саламанка, Испания, 2004 г), на Втором международном симпозиуме по разделению и концентрированию в аналитической химии и радиохимии (Краснодар, Россия, 2005 г), на Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2005» (Москва, Россия, 2005 г.), на Двадцать восьмом международном симпозиуме по газовой хроматографии и капиллярному электрофорезу (Лас Вегас, США, 2005 г.).

Публикации:

По материалам диссертации опубликовано 6 работ в виде статей и тезисов докладов.

Структура и объем работы:

Диссертация состоит из введения, пяти глав, заключения, выводов и списка литературы. Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель работы, задачи, научная новизна, практическая значимость и положения, выносимые на защиту. Первая глава представляет собой литературный обзор методов анализа волос на

Заключение диссертации по теме «Аналитическая химия», Богданов, Александр Владимирович

Выводы

1. Исследованы зависимости сверхкритической флюидной экстракции из волос среднелетучих органических соединений неизвестного состава от температуры и давления сверхкритического флюида, от времени экстракции; выбраны оптимальные условия СФЭ неизвестных соединений из волос.

2. На основании проведенных исследований разработан способ определения среднелетучих органических соединений в волосах, основанный на сверхкритической флюидной экстракции из волос без использования органического растворителя, сорбционном концентрировании экстрагированных соединений на выходе из экстрактора и переводе термодесорбцией в инжектор хроматографа всего экстракта и его анализе с помощью ГХ/МС.

3. С использованием разработанного способа исследован состав среднелетучих органических соединений в ряде образцов волос, полученных от разных людей. Диапазон определяемых содержаний составил 0.002 - 99.6 нг/мг волос. Показано, что состав экстрагированных соединений и их количества схожи для различных образцов волос. В основном, различия между образцами волос проявляются на уровне менее 1 нг/мг волос.

4. Исследован состав среднелетучих органических соединений, выделенных из одного из образцов волос общепринятым способом жидкостной экстракции метанолом с последующим ГХ/МС анализом малой части экстракта, и проведено сопоставление с результатом, полученным при помощи разработанного способа, основанного на СФЭ из волос. При использовании разработанного способа обнаружено 214 соединений, при использовании экстракции метанолом - 43, при этом 28 соединений обнаружено обоими способами. Суммарное содержание извлеченных соединений при использовании разработанного способа составило 223 нг/мг волос, при использовании экстракции метанолом -123 нг/мг волос.

5. Исследован состав среднелетучих органических соединений, выделенных общепринятым способом жидкостной экстракции из реакционной смеси, полученной после разложения волос раствором NaOH, с последующим ГХ/МС анализом малой части экстракта, и проведено сопоставление с результатом, полученным при помощи разработанного способа. В этом случае зарегистрировано 36 соединений, из них 11 входят также в 214, выделенных СФЭ из волос. Суммарное содержание извлеченных соединений при использовании экстракции дихлорметаном из реакционной смеси составило 37 нг/мг волос.

6. Исследован состав среднелетучих органических соединений, выделенных сверхкритической флюидной экстракцией из реакционной смеси, полученной после разложения волос раствором NaOH, с последующим ГХ/МС анализом всего экстракта. Обнаружено 151 соединение, при этом 47 соединений входят в число зарегистрированных с использованием СФЭ из волос. Суммарное содержание извлеченных соединений при использовании СФЭ из реакционной смеси составило 188 нг/мг волос.

7. Показано, что в состав исследованных экстрактов входили соединения, принадлежащие к таким классам соединений, как алифатические углеводороды, альдегиды, кетоны, спирты, карбоновые кислоты и их эфиры. Наряду с ними в состав всех исследованных образцов волос входили различные фталаты, которые относятся к стойким органическим загрязнителям (СОЗ), подлежащим обязательному контролю.

8. Показано, что наиболее полная информация о составе неизвестных среднелетучих примесей в волосах может быть получена при сочетании различных способов выделения, рассмотренных в работе.

Заключение

В результате проведенного исследования изучено состояние современных методов определения среднелетучих органических соединений различных классов в волосах. Критически рассмотрены достоинства и недостатки существующих методов, показаны их ограничения при анализе волос при решении экологических, токсикологических и медицинских задач. Предложен новый подход к решению данной проблемы, основанный на СФЭ таких соединений из волос с последующим хроматографическим или хромато-масс-спекгрометрическим анализом всего экстракта. Проведено сравнение состава среднелетучих примесей в волосах различных людей с использованием СФЭ-ГХ-МС. В четырех образцах волос обнаружено 276 соединений, из них 89 идентифицировано.

Проведено сравнение результатов разработанного способа при анализе одного образца волос с результатами, полученными при использовании трех других способов определения органических соединений в человеческих волосах, два из которых (ЖЭ-ГХ-МС, разложение-ЖЖЭ-ГХ-МС) широко известны, третий (разложение-СФЭ-ГХ-МС) предложен нами. Всего при совместном использовании данных, полученных для всех четырех способов, в одном образце волос было обнаружено 336 соединений, из них 108 идентифицировано. Из них разработанным способом (СФЭ-ГХ-МС) было обнаружено 214 соединений, способом ЖЭ-ГХ-МС - 43, способом разложение-ЖЖЭ-ГХ-МС - 36, способом разложение-СФЭ-ГХ-МС - 151. При сравнении волос различных людей наиболее целесообразно использовать способ СФЭ-ГХ-МС, как способ, обеспечивающий обнаружение максимального количества примесей в волосах. Предложенный способ обеспечивает увеличение количеств извлеченных из волос соединений, снижение пределов обнаружения и уменьшение загрязнения окружающей среды.

Предложенный способ сверхкритической флюидной экстракции из волос и способ определения среднелетучих органических соединений в человеческих волосах, основанный на сочетании СФЭ из волос с последующим хроматографическим либо ГХ-МС анализом всего экстракта, открывает широкие перспективы для определения широкого спектра органических соединений в человеческих волосах на следовом и ультраследовом уровнях содержаний. В общем случае, при исследовании человеческих волос необходимо совместное использование рассмотренных способов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Богданов, Александр Владимирович, 2007 год

1. Nakahara Y. Hair analysis for abused and therapeutic drugs // J. of Chromatogr. B. 1999. V.733. P.161-180

2. Nakahara Y., Takahashi K., Kikura R. // Biol. Chem. Bull. 1995. V.18. P.1223-1227

3. Sachs H., Kintz P. Testing for drugs in hair. Critical review of chromatographic procedures since 1992 //J. of Chromatogr. B. 1998. V.713. P.147-161

4. Thieme D., Sachs H. Improved screening capabilities in forensic toxicology by application of liquid chromatography-tandem mass spectrometry // Anal. Chim. Acta. 2003. V.492. P. 171-186

5. Thieme D., Anielski P., Grosse J., Sachs H., Mueller R. K. Identification of anabolic steroids in serum, urine, sweat and hair. Comparison of metabolic patterns //Anal. Chim. Acta. 2003. V.483. P. 299-306

6. Welch M. J., Sinegoski L. Т., Allgood С. C., Habram M. Hair analysis for drugs of abuse: evaluation of analytical methods, environmental issues, and development of reference materials II J. Anal. Toxicol. 1993. V.17(7). P. 389398

7. Nishida M., Namera A., Yashiki M., Kojima T. Routine analysis of amphetamine and methamphetamine in biological materials by gas chromatography-mass spectrometry and on-column derivatization // J. of Chromatogr. B. 2003. V.789. P.65-71

8. Jouvel C., Maciejewski P., Garcia P., Bonnaire Y., Horning S., Popot M.-A. Detection of diazepam in horse hair samples by mass spectrometric methods //Analyst. 2000. V.125. P.1765-1769

9. Toyo'oka Т., Yano M., Kato M., Nakahara Y. Simultaneous determination of morphine and its glucironides in rat hair and rat plasma by reversed-phaseliquid chromatography with electrospray ionization mass spectrometry // Analyst. 2001. V.126. P.1339-1345

10. Al-Dirbashi 0., Kuroda N., Inuduka S., Menchini F., Nakashima K. HPLC with fluorescence detection of methamphetamine and amphetamine in segmentally analyzed human hair // Analyst. 1999. V.124. P.493-497

11. Nakahara Y., Kikura R. Hair analysis for drugs of abuse. XVIII. 3,4-Methylenedioxymethamphetamine (MDMA) disposition in hair roots and use in identification of acute MDMA poisoning // Biol. Pharm. Bull. 1995. V.18. P. 1223-1227

12. Nakahara Y., Kikura R. Hair analysis for drugs of abuse. XIX. Determination of ephedrine and its gomologues in rat hair and human hair drugs // J. of Chromatogr. B. 1997. V.700(1-2). P.83-91

13. Kikura R., Nakahara Y. Hair analysis for drugs of abuse. XVI. Disposition of fenethylline and its metabolite into hair and discrimination between fenethylline use and amphetamine use by hair analysis // J. Anal. Toxicol. 1997. V.21(4). P.291-296

14. Nakahara Y., Kikura R., Takanashi K. Foltz P. L., Mieczkowski T. Detection of lysergic acid diethylamide (LSD) and its metabolites in rat and human hair// J. Anal. Toxicol. 1996. V.20(5). P.323-329

15. Polettini A., Montagna M., Segura J., de-la-Torre X. Determination of beta-agonists in hair by gas chromatography/mass spectrometry analysis // J. Mass. Spectrom. 1996. V.31(1). P.47-54

16. Sakamoto Т., Tanaka A., Nakahara Y. Hair analysis for drugs of abuse. XII. Determination of PCP and its major metabolites, PCHP and PPC, in rat hair after administration of PCP // J. Anal. Toxicol. 1996. V.20(2). P. 124-130

17. Scherer C., Wachter U., Wudy S. A. Determination of testosterone in human hair by gas chromatography-selected ion monitoring mass spectrometry // Analyst. 1998. V.123. P.2661-2663

18. Choi M. H., Kim K. R., Chung В. C. Determination of estrone and 17/?-estradiol in human hair by gas chromatography-mass spectrometry // Analyst. 2000. V.125. P.711-714

19. Choi M. H., Kim K. R., Chung В. C. Determination of hair polyamines as N-ethoxycarbonyl-N-pentafluoropropionyl derivatives by gas chromatography-mass spectrometry//J. Chromatogr. A. 2000. V.897 P.295-305

20. Choi M. H., Chung В. C. GC-MS determination of steroids related to androgen biosynthesis in human hair with pentafluorophenyldimethylsilyl-trimethylsilyl derivatisation //Analyst. 1999. V.124. P. 1297-1300

21. Wainhaus S. В., Tzanani N., Dagan S., Miller M. L., Amirav A. Fast analysis of drugs in a single hair // J. Am. Soc. Mass. Spectrom. 1998. V.9(12). P.1311-1320

22. Dauberschmidt C., Wennig R. Organochlorine pollutants in human hair. Letter. II J. Anal. Toxicol. 1998. V.22(7). P.610-611

23. Negrusz A., Moore С. M., Perry J. L. Detection of doxepin and its major metabolite desmethyldoxepin in hair following drug therapy // J. Anal. Toxicol. 1998. V.22(6). P.531-536

24. Iwersen S., Schmoldt A., Schulz F., Pueschel K. Evidence of destational heroin exposure by comparative analysis of foetal and maternal body fluids, tissues, and hair in a heroin-related death hair // J. Anal. Toxicol. 1998. V.22(4). P.296-298

25. Kronstrand R., Grundin R., Jonsson J. Incidence of opiates, amphetamines, and cocaine in hair and blood in fatal cases of heroin overdose // Forensic. Sci. Int. 1998. V.92(1). P.29-38

26. Rossi S. S., Offdani CM Charlotti M. Application of hair analysis to document coercive heroin administration to a child. // J. Anal. Toxicol. 1998. V.22(1). P.75-77

27. Polettini A., Stramesi C., Vignali C., Montagna M. Determination of opiates in hair. Effects of extraction methods on recovery and on stability of analytes // Forensic. Sci. Int. 1997. V.84(1-3). P.259-269

28. Yegles M., Mersch F., Wennig R. Detection of benzodiazepines and other psychotropic drugs in human hair by GC-MS // Forensic. Sci. Int. 1997. V.84(1-3). P.211-218

29. Cassani M., Da-Re N., Giuliani L., Sesana F. Experience with hair testing in the clinical biochemistry laboratory of Ca'Granda Niguarda // Forensic. Sci. Int. 1997. V.84(1-3). P. 17-24

30. Tanada N., Kageura M., Нага K., Hieda Y., Takamoto M., Kashimura S. Demonstration of oxidation dyes on human hair // Forensic. Sci. Int. 1994. V.64(1). P. 1-8

31. Schramm K. W. Hair: A Matrix for Non-Invasive Biomonitoring of Organic Chemicals in Mammals // Bull. Environ. Contam. Toxicol. 1997. V.59. P.396-402

32. Villan M., Cirimele V., Tracqui A., Ricaut F. X., Ludes В., Kintz P. Testing for kavain in human hair using gas chromatography-tandem mass spectrometry // J. of Chromatogr. B. 2003. V.798. P.351-354

33. Cirimele V., Kintz P., Ludes B. Screening for forensically relevant benzodiazepines in human hair by gas chromatography-negative ion chemical ionization-mass spectrometry//J. of Chromatogr. B. 1997. V.700. P.119-129

34. Mahoney G. N. Al-Delaimy W. Measurement of nicotine in hair by reversed-phase high-performance liquid chromatography with electrochemical detection //J. Chromatogr. B. 2001. V.753. P. 179-187

35. Kintz P., Cirimele V., Ludes B. Physiological concentrations of dehydroepiandrosterone (DHEA) in human hair // J. Anal. Toxicol. 1999. V.23(6). P.424-428

36. Kintz P., Cirimele V., Jeanneau Т., Ludes B. Identification of testosterone and testosterone esters in human hair // J. Anal. Toxicol. 1999. V.23(5). P.352-356

37. Cirimele V., Kintz P., Jamey C., Ludes B. Are cannabinoids detected in hair after washing with Cannabio shampoo? // J. Anal. Toxicol. 1999. V.23(5). P.349-351

38. Pichini S., Pacifici R., Altieri I., Pellegrini M., Zuccaro P. Determination of opiates and cocaine in hair as trimethylsilyl derivatives using gas chromatography-tandem mass spectrometry// J. Anal. Toxicol. 1999. V.23(5). P.343-348

39. Kintz P., Jamey C., Cirimele V., Brenneisen R., Ludes B. Evaluation of acetylcodeine as a specific marker of illicit heroin in human hair // J. Anal. Toxicol. 1998. V.22(6). P.425-429

40. Kintz P,. Bundeli P., Brenneisen R., Ludes B. Dose-concentration relationships in hair from subjects in a controlled heroin-maintenance programme // J. Anal. Toxicol. 1998. V.22(3). P.231-236

41. Kintz P., Cirimele V. Inter-laboratory comparison of quantitative determination of amphetamine and related compounds in hair samples hair // Forensic. Sci. Int. 1997. V.84(1-3). P.151-156

42. Cirimele V., Kintz P., Staub C., Mangin P. Testing human hair for flunitrazepam and 7-aminoflunitrazepam by GC negative-ion CIMS // Forensic. Sci. Int. 1997. V.84(1-3). P.189-200

43. Jurado C., Menendez M., Repetto M., Kintz P., Cirimele V., Mangin P. Hair testing for cannabis in Spain and France: is there a difference in consumption?//J. Anal. Toxicol. 1996. V.20(2). P.111-115

44. Cirimele V., Sachs H., Kintz P., Mangin P. Testing human hair for cannabis. III. Rapid screening procedure for the simultaneous identification of Delta9-tetrahydrocannabinol, cannabinol, and cannabidiol // J. Anal. Toxicol. 1996. V.20(1). P.13-16

45. Kintz P., Cirimele V., Mangin P. Testing human hair for cannabis II. Identification of THC-COOH by GC-MS-NCI as a unique proof // J. Forensic. Sci. 1995. V.40(4). P.619-622

46. Kintz P., Mangin P. Simultaneous determination of opiates, cocaine and major metabolites of cocaine in human hair by gas chromatography-mass spectrometry//Forensic. Sci. Int. 1995. V.73(2). P.93-100

47. Cirimele V., Kintz P., Mangin P. Testing human hair for cannabis // Forensic. Sci. Int. 1995. V.70(1-3). P. 175-182

48. Jurado C., Gimenez M. P., Menendez M., Repetto M. Simultaneous quantification of opiates, cocaine and cannabinoids in hair II Forensic. Sci. Int. 1995. V.70(1-3). P. 165-174

49. Goulle J. P., Noyon J., Layet A., Rapoport N. F., Vaschalde Y., Pignier Y., Bouige D., Jouen F. Phenobarbital in hair and drug monitoring // Forensic. Sci. Int. 1995. V.70(1-3). P.191-202

50. Mangin P., Kintz P. Variability of opiates concentrations in human hair according to their anatomical origin: head, axillary and pubic regions // Forensic. Sci. Int. 1993. V.63(1-3). P.77-83

51. Staub С. Hair analysis: its importance for the diagnosis of poisoning associated with opiate addiction // Forensic. Sci. Int. 1993. V.63(1-3). P.69-75

52. Sabzevari O., Abdi K., Amini M., Shafie A. Application of a simple and sensitive GC-MS method for determination of morphine in the hair of opium abusers//Anal. Bioanal. Chem. 2004. V.379. P.120-124

53. Shen M., Xiang P., Shen В. H. Detection of meperidine and its metabolites in the hair of meperidine addicts // Forensic. Sci. Int. 1999. V. 103(3). P. 159171

54. Roehrich J., Kauert G. Determination of amphetamine and methylenedioxyamphetamine derivatives in hair // Forensic. Sci. Int. 1997. V.84(1-3). P. 179-188

55. Uhl M. Determination of drugs in hair using GC-MS-MS // Forensic. Sci. Int. 1997. V.84(1-3). P.281-294

56. Gaillard Y., Pepin G. Simultaneous solid-phase extraction on C18 cartridges of opiates and cocainics for an improved quantitation in human hair by GC-MS: one year of forensic applications // Forensic. Sci. Int. 1997. N/.86(1-2). P.49-59

57. Fente C. A., N/azquez В. I., Franco C., Cepeda A., Gigosos P. G. Determination of clenbuterol residues in bovine hair by using diphasic dialysisand gas chromatography-mass spectrometry // J. Chromatogr. B. 1999. V.726. P. 133-139

58. Haasnoot W., Stouten P., Schilt R., Hooijernk D. A fast immunoassay for screening of ^-agonists in hair//Analyst. 1998. V.123. P.2707-2710

59. Machnik M., Geyer H., Horning S., Breidbach A., Delahaut P., Shanzer W. Long-term detection of clenbuterol in human scalp hair by gas chromatography-high-resolution mass spectrometry//J. Chromatogr. B. 1999. V.723. P.147-155

60. Kintz P., Cirimele V., Sachs H., Jeanneau Т., Ludes B. Testing for anabolic steroids in hair from two bodybuilders // Forensic. Sci. Int. 1999. V. 101(3). P.209-216

61. Strano-Rossi S., Chiarotti M. Solid-phase microextraction for cannabinoid analysis in hair and its possible application to other drugs // J. Anal. Toxicol. 1999. V.23(1). P.7-10

62. Tanada N., Kashimura S., Kageura M., Нага K. Practical GC-MS analysis of oxidation dye components in hair fibre as a forensic investigative procedure // J. Forensic. Sci. 1999. V.44(2). P.292-296

63. Scherer C., Wachter U., Wudy S. A. Determination of testosterone in human hair by gas chromatography selected-ion monitoring mass spectrometry // Analyst. 1998. V.123(12). P.2661-2663

64. Rothe M., Pragst F., Spiegel K., Harrach Т., Fischer K., Kunkel J. Hair concentrations and self-reported abuse history of 20 amphetamine and ecstasy users//Forensic. Sci. Int. 1997. V.89(1-2). P.111-128

65. Hoeld К. M., Crouch D. J., Wilkins D. G., Rollins D. E., Maes R. A. Detection of alprazolam in hair by negative-ion chemical-ionization mass spectrometry // Forensic. Sci. Int. 1997. V.84(1-3). P.201-209

66. Hoeld К. M., Wilkins D. G., Crouch D. J., Rollins D. E., Maes R. A. Detection of stanozolol in hair by negative-ion chemical-ionization mass spectrometry // J. Anal. Toxicol. 1996. V.20(6). P.345-349

67. Wilkins D. G., Nagasawa P. R., Gygi S. P., Foltz R. L., Rollins D. E. Quantitative analysis of methadone and two major metabolites in hair bychemical-ionization ion-trap mass spectrometry // J. Anal. Toxicol. 1996. V.20(6). P.355-361

68. Wilkins D., Haughey H., Cone E. J., Huestis M. A., Foltz R., Rollins D. E. Quantitative analysis of THC, 11-OH-THC, and THCCOOH in human hair by negative ion chemical ionization mass spectrometry // J. Anal. Toxicol. 1995. V.19(6). P.483-491

69. Nielen M. W. F., Hooijernik H.p Essers M. L., Lasaroms J. J. P., van Bennekom E. 0., Brouwer L. Value of alternative sample matrices in residue analysis for stanozol // Anal. Chim. Acta. 2003. V.483. P. 11 -17

70. Covaci A., Tutudaki M., Tsatsakis A. M., Scepens P. Hair analysis: another approach for the assessment of human exposure to selected persistent organochlorine pollutants // Chemosphere. 2002. V.46. P.413-418

71. Balabanova S., Brunner H., Nowak R. Radioimmunological determination of cocaine in human hair//Z.Rechtsmed. 1987. V.98. P.229-234

72. Kintz P. Inter-laboratory comparison of quantitative determinations of drugs in hair samples//Forensic. Sci. Int. 1995. V.70(1-3). P. 105-109

73. Wang W. L., Cone E. J. Testing human hair for drugs of abuse. IV. Environmental cocaine contamination and washing effects // Forensic. Sci. Int. 1995. V.70(1-3). P.39-51

74. Kikura R., Nakahara Y. Hair analysis for drugs of abuse. IX. Comparison of deprenyl use and methylamphetamine use by hair analysis // Biol. Pharm. Bull. 1995. V.18(2). P.267-272

75. Hold К. M., Hubbard D. L., Wilkins D. G., Rollins D. E. Quantitation of cocaine in human hair: the effect of centrifugation of hair digests // J. Anal. Toxicol. 1998. V.22(6). P.414-417

76. Chiarotti M., Strano-Rossi S., Offidani C., Fiori A. Evaluation of cocaine use during pregnancy through toxicological analysis of hair // J. Anal. Toxicol. 1996. V.20(7). P.555-558

77. Moeller M. R., Mueller C. The detection of 6-monoacetylmorphine in urine, serum and hair by GC-MS and RIA // Forensic. Sci. Int. 1995. V.70(1-3). P. 125-133

78. Moeller M. R., Fey P., Wennig R. Simultaneous determination of drugs of abuse (opiates, cocaine and amphetamine) in human hair by GC-MS and its application to a methadone treatment programme // Forensic. Sci. Int. 1993. V.63(1-3). P. 185-206

79. Liu J., Нага K., Kashimura S., Kashiwagi M., Kageura M. New method of derivatization and headspace solid-phase microextraction for gas chromatographic-mass spectrometric analysis of amphetamines in hair // J. Chromatogr. B. 2001. V.758. P.1-7

80. Goldberger B. A., Darraj A. G., Caplan Y. H., Cone E. J. Detection of methadone, methadone metabolites, and other illicit drugs of abuse in hair of methadone-treated subjects // J. Anal. Toxicol. 1998. V.22(6). P.526-530

81. Crimele V., Kintz P., Mangin P. Determination of chronic flunitrazepam abuse by hair analysis using GC-MS-NCI // J. Anal. Toxicol. 1996. V.20(7). P.596-598

82. Kintz P., Cirimele V., Vayssette F., Mangin P. Hair analysis for nordiazepam and oxazepam by gas chromatography-negative-ion chemical ionization mass spectrometry//J. Chromatogr. B. 1996. V.677(2). P.241-244

83. Cone E. J., Darwin W. D., Wang W. L. The occurrence of cocaine, heroin and metabolites in hair of drug abusers // Forensic. Sci. Int. 1993. V.63(1-3). P.55-68

84. Phelis C. L., Smart N. G., Wai С. M. Past, present, and possible future applications of supercritical fluid extraction technology // J. of Chem. Education 1996. V.73. №12. P. 1163-1167

85. Satyajit Sengupta, Sumnesh Gupta, Kerry M. Dooley, F. Carl Knopf // J. of Supercritical Fluids 1994. V.7. P.201-209

86. Radcliffe CM Maguire K., Lockwood B. Applications of supercritical fluid extraction and chromatography in forensic science // J. of Biochem. and Biophys. Methods. 2000. V.43. P.261-272

87. Edder P., Staub C., Veuthey J. L., Pierroz I., Haerdi W. Subcritical-fluid extraction of opiates in hair of drug addicts // J. Chromatogr. B. 1994. V.658(1). P.75-86

88. Crimele V., Kintz P., Majdalani R., Mangin P. Supercritical fluid extraction of drugs in drug addict hair//J. of Chromatogr. B. 1995. V.673. P. 173-181

89. Hawthorne S.B., Miller D. J., Nivens D. E., White D. C. Supercritical-fluid extraction of polar analytes using in situ chemical derivatization // Anal. Chem. 1992. N/.64. P.405-412

90. Marguerite Y. Croft, E. John Murby, Robert J. Wells // Anal. Chem. 1994. V.66. P.4459-4465

91. Mulkahey L. J., Taylor L.T. Supercritical-fluid extraction of active components in a drug formulation //Anal. Chem. 1992. V.64. P.981-984

92. Barnabas I.J., Dean J.R. Supercritical fluid extraction of analytes from environmental samples: review // Analyst. 1994. N/.119. P.2381-2394

93. Bowadt S., Hawthorne B. Supercritical fluid extraction in environmental analysis II J. of Chromatogr. A. 1995. N/.703. P.549-571

94. Eckard P.R., Taylor T. // J. of High Resol. Chromatogr. 1996. V.16. P.117-120

95. HO.Vejrosta J., Ansorgova A., Mikesova M., Bartle K.D. Sensitivity enhancement in dynamic "off-line" supercritical-fluid extraction // J. of Chromatogr. A. 1994. V.659. P.209-212

96. Vejrosta J., Ansorgova A., Planeta J., BreenD.G., Bartle K.D., Clifford A.A. Solute trapping in off-line supercritical fluid extraction using controlled modifier condensation //J. of Chromatogr. A. 1994. V.683. P.407-410

97. Palma M., Taylor L.T. Statistical design for optimization of extraction of polyphenols from an inert matrix using carbon dioxide-based fluids // Anal. Chim. Acta. 1999. V.391. P. 321-329

98. Chaudot X., Tambute A., Caude M. Simultaneous extraction and derivatization of 2-chlorovinilarsonous acid from soils using supercritical and pressurized fluids // J. of Chromatogr. A. 2000. V.888. P.327-333

99. Ramsey E. D., Minty В., Lewis R. Hydrocarbons in water analysis using online aqueous supercritical-fluid extraction-fourier transform-infrared spectroscopy//Anal. Commun. 1996. V.33. P.203-204

100. Glazkov I.N., Revelsky I.A., Efimov I.P., Zolotov Y.A. Direct solventless supercritical fluid extraction of polycyclic aromatic hydrocarbons from aqueous solutions // Chromatographia. 2000. V.52. P.495-498

101. Glazkov I.N., Revelsky I.A., Efimov I.P., Zolotov Y.A. Supercritical fluid extraction of water samples containing ultratrace amounts of organic micropollutants // J. Microcol. Sep. 1999. V.11. P.729-736

102. Глазков И.Н., Ревельский И.А., Кузнецов М.П., Мартынов А.А., Ефимов И.П. Оптимизация условий прямой сверхкритической флюидной экстракции эфиров фталевой кислоты из водных растворов // Заводская Лаборатория. 2003. Т.69. №6 С. 13-16

103. Field J. A. Coupling chemical derivatization reactions with supercritical fluid extraction //J. of Chromatogr. A. 1997. V.785. P.239-249