Структурные особенности мембран эритроцитов с различным содержанием холестерина в норме и при развитии атеросклероза тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Бондарь, Ольга Петровна

• Бондарь, Ольга Петровна
• кандидат биологических наук
• 1984

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Бондарь, Ольга Петровна

03.00.04 - Биохимия

Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научный руководитель доктор биологических наук 10. Д. ХОЛОДОВА

Киев

СОДЕРЖАНИЕ

Введение.

Глава I. Обзор литературы.

1.1. Влияние холестерина на структуру и функцию мембран; их роль в патогенезе атеросклероза.

1.2. Ионогенные группы в мембранах и заряд клеточной поверхности.

Экспериментальнаяя часть

Глава 2. Материалы и методы.

2.1. Получение мембран эритрощтов и липосом с различным содержанием холестерина, выделение липидов плазмы крови, исследование липидного ■ состава и функциональных свойств.

2.1.1. Мембраны эритроцитов

2.1.2. Липосомы, определение геометрических параметров

2.1.3. Липопротеины плазмы крови.

2.1.4. Выделение, разделение и определение липидов

2.1.5. Определение кислотной резистентности и осмотической стойкости эритроцитов.

2.2. Исследование электрокинетических свойств и структурных особенностей мембран эритроцитов ' , и липосом.

2.2.1. Потенциометрическое титрование мембран эритроцитов и липосом. Црименение ЭВМ для . расчета кривых титрования

2.2.2. Применение флуоресцентных зондов для иссле дования мембранных систем и липоцротеинов

2.2.3. Применение микроэлектрофореза для определения электрокинетических свойств и плотности поверхностного заряда мембран эритроцитов

Глава 3. Липидный состав и функциональные свойства мембран эритроцитов с различным содержанием холестерина, в норме и цри разной выраженности атеросклеротического цроцесса

Глава 4. Электрокинетические свойства мембран эритроцитов, обогащенных холестерином в опытах in vitro И in vivo.

Глава 5. Потенциометрические исследования природы и количества ионогенных групп мембран эритроцитов цри изменении содержания холестерина в норме и цри патологии

5.1. Анализ потенциометрических кривых, получаемых цри титровании мембран эритроцитов.

5.2. Ионогенные участки.в мембранах эритроцитов, рК и емкость связывания.

5.3. Модельные исследования на липосомах различного состава

Глава 6. Флуоресцентные исследования структурных особенностей мембран эритроцитов с различным содержанием холестерина.

6.1. Связывание флуоресцентного зонда астрафлокси на с мембранами.

6.2. О возможности использования данных флуоресцентных исследований для оценки поверхностного заряда мембран; сравнение с электрофоретическими и потенциометрическими исследованиями.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Структурные особенности мембран эритроцитов с различным содержанием холестерина в норме и при развитии атеросклероза»

Актуальность проблемы. Холестерин, являясь основным стерино-вым компонентом мембран животных клеток, оказывает существенное влияние на их структуру и функцию. Многочисленными экспериментами с использованием современных физико-химических методов /рент-геноструктурный анализ, метод спиновых и флуоресцентных зондов, ЯМР, колориметрическое сканирование и др./ показано, что повышение содержания холестерина в липидной матрице мембран приводит к их стабилизации, т.е. к увеличению микровязкости и ограничению подвижности отдельных участков молекул /186,209,210/. Это, в свою очередь, ведет к уменьшению проницаемости для неэлектролитов и ионов /102,107,226/. Повышенное содержание холестерина в мембранах различных клеток влияет на пассивный транспорт ионов, затрудняя, в частности, пассивную утечку одновалентных катионов /232/. Холестерин ингибирует транспорт, индуцируемый переносчиками /88,136/, а также активный транспорт, вызывая изменение активности мембраносвязанных ферментов /90,91/. Известно, что холестерин, взаимодействуя с углеводородными цепями фосфоли-пидов, способствует переходу липидов из одного фазового состояния в другое. При этом, если фосфолипиды мембран находятся в кристаллическом состоянии, холестерин действует как "разжижающий" фактор, способствуя переходу их в гелеобразное состояние. Если же фосфолипиды находятся в жидкокристаллическом состоянии, то холестерин "конденсирует" жирнокислотные цепи фосфолипидов, вызывая их переход в кристаллическое состояние. Полагают, что холестерин имеет большее сродство к липидам, находящимся в жидкокристаллическом состоянии /186/.

Влияние холестерина на перечисленные характеристики мембран цредполагает его воздействие и на их поверхностный заряд, который отражает изменения как ионного состава среды, так и распределения и взаимодействия зарядов в мембране. В то же время данные о влиянии холестерина на физическую структуру мембран -природу и количество реакционно способных ионогенных хрупп, плотность поверхностного заряда, электрокинетические параметры в литературе практически отсутствуют.

Избрав в качестве объекта исследований мембраны эритроцитов, мы исходили из следующих соображений. Во-первых, эритроциты являются удобной моделью для выяснения роли индивидуальных липидов и, в частности, холестерина в изменении структуры мембран благодаря возможности направленного изменения их состава и содержания в мембранах. Во-вторых, увеличение содержания холестерина в мембранах эритроцитов играет существенную роль в патогенезе многих заболеваний. Так, в последние годы широкое расцростране-ние получила "мембранная" гипотеза возникновения атеросклероза /23,156/, согласно которой патобиохимическую основу поражения гладкомышечных клеток аорты составляют цроцессы, связанные с увеличением микровязкости мембран и йодавлением активности мембра-носвязанных ферментов как следствия увеличения содержания холестерина в мембранах этих клеток.

Заметная роль в патогенезе атеросклероза отводится также эритроцитам, мембраны которых могут претерпевать подобные изменения. Огромное количество эритроцитов в организме, большая адсорбционная поверхность, интенсивный обмен холестерином между ними и плазмой крови создают мощный и быстрообменивающийся эрит-роцитарно-плазменный пул холестерина /36,52/. Нарушения регуляции обмена холестерина 1фови вследствие изменения состава и физической организации мембран эритроцитов могут приводить к возникновению гиперхоле стеринемии, являющейся важным фактором риска атеросклероза и ишемической болезни сердца.

В связи с этим, мембраны эритроцитов в условиях гиперхо-лестеринемии, атеросклероза и ишемической болезни сердца с различными типами нарушения липидного обмена могут служить удобным объектом для исследования структурно-функциональных изменений при этих патологиях, связанных с воздействием холестерина.

Данные об особенностях физической структуры мембран эритроцитов при изменении в них содержания холестерина в опытах in vitro , а также при различной выраженности атеросклеротического цроцесса могут быть полезными для объяснения изменения ряда функциональных свойств мембран, механизмов взаимодействия холестерина с мембранами и регуляции его обмена в организме, реологических свойств крови, ее агрегативной устойчивости. Они важны также при выяснении механизмов возникновения и развития атеросклероза .

Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение физической структуры мембран эритроцитов при обогащении их холестерином в опытах in vitro, а также при различной выраженности атеросклеротического процесса: его доклинической стадии - гиперхолестеринемии, алиментарном атеросклерозе, и его осложнении - ишемической болезни сердца с различными типами нарушения липидного обмена.

В соответствии с поставленной целью необходимо было решить следующие задачи:

I/ получить мембраны эритроцитов с различным содержанием холестерина в опытах in vitro и in vivo прИ различной вьцэа-женности атеросклеротического процесса у крыс, кроликов, человека и изучить изменения их липидного состава;

2/ охарактеризовать функциональные свойства мембран;

3/ исследовать электрокинетические характеристики - электрофор етиче скую подвижность, j -потенциал и плотность поверхностного заряда мембран методом микроэлектрофореза;

4/ установить природу и количество мембранных зарядов, вносящих вклад в суммарный заряд мембран цри изменении в них содержания холестерина, методом потенциометрического титрования; повысить эффективность метода путем использования ЭВМ;

5/ изучить структурные изменения в мембранах методом флуоресцентных зондов;

6/ исследовать изменения липидного состава и плотности зарядов атерогенных липоцротеинов плазмы крови цри гиперхолесте-ринемии для анализа участия эритроцитов в регуляции обмена холестерина крови при развитии атеросклероза.

Научная новизна. В работе с помощью методов потенциометрического титрования, микроэлектрофореза и флуоресцентных зондов впервые экспериментально доказано нарушение баланса электростатических взаимодействий в мембранах цри увеличении в них содержания холестерина в сторону уменьшения плотности как поверхностного, так и суммарного мембранного заряда. На основании анализа данных потенциометрического титрования сделан вывод, что это уменьшение цроисходит за счет снижения количества титруемых СООН-концевых и боковых групп, вторичных фосфорнокислых и ими-дазола гистидина и увеличения количества доступных для титрования ОН-групп тирозина и а-Ш^-групп лизина. Проявление этого эффекта зависит от содержания холестерина в мембранах,способа и степени их обогащения холестерином ; последняя оцределяется также исходным со держанием холестерина и фосфолипидов в мембране.

Значительное обогащение мембран холестерином приводит к существенным сдвигам рК имида зольных групп гистидина и вторичных фосфорнокислых групп, а также к сдвигу максимума флуоресценции в коротковолновую область, что свидетельствует о снижении полярности микроокружения зонда и возможных перегруппировках мембранных компонентов, выражающихся в маскировке и недоступности для титрования определенных полярных групп.

Показаны различия в липидном составе мембран эритроцитов человека при гиперхоле стеринемии и ишемической болезни сердца с различными типами нарушения липидного обмена: значительное увеличение содержания холестерина в мембранах эритроцитов при гипер-холестеринемии, менее значительное цри ишемической болезни сердца с нормальным уровнем холестерина и повышенным триглицеридов и отсутствие изменений цри ишемической болезни сердца с гиперхо-лестеринемией. На основании анализа возможных способов выражения и интерпретации данных потенциометрического титрования предложен наиболее адекватный способ и разработана программа его реализации с использованием ЭВМ.

Практическая значимость работы. Результаты проведенных исследований позволяют предположить, что структурная организация мембран, в частности,заряд их поверхности может оказывать влияние на обмен холестерина в организме и таким образом обеспечивать его различную устойчивость к заболеванию.

Электрокинетические свойства мембран эритроцитов могут быть рекомендованы в качестве дополнительного теста возникновения ишемической болезни сердца на стадии развития гиперхолестеринемии.

Разработанные в работе методы изучения структурных характеристик мембран эритроцитов используются в Институте кардиологии им.Н.Д.Стражеско МЗ УССР цри выполнении теш "Эпидемиологическое изучение липидов крови и типов липоггротеидемии в мужской популяции одного из районов г.Киева, как возможного фактора ише-мической болезни сердца" /№ 0.69.01.03 Н2/.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Обогащение мембран эритроцитов холестерином в опытах in vitro и при развитии атеросклероза цриводит к уменьшению плотности поверхностного и суммарного мембранных зарядов.

2. Уменьшение плотности зарядов цроисходит за счет снижения количества доступных для титрования карбоксильных концевых и боковых групп, вторичных фосфорнокислых и имидазола гистидина. Существенные сдвиги величин рК имидазольных групп гистидина и вторичных фосфорнокислых групп, а также коротковолновый сдвиг максимума флуоресценции зонда астрафлоксина свидетельствуют о конформационных изменениях в мембранных компонентах под действием холестерина.

3. В отличие от увеличения содержания холестерина и уменьшения плотности зарядов в мембранах эритроцитов крыс, кроликов и человека цри гиперхолестеринемии и на ранних сроках развития атеросклероза, ишемическая болезнь сердца с нормолипидемией и гшгер-холестеринемией не сопровождается существенным изменением содержания холестерина, электрофоретической подвижности и плотности поверхностных зарядов мембран эритроцитов; однако при этом на- . блюдается перерасцределение емкости титруемых ионогенных групп мембран.

4. Холестерин незначительно изменяет заряд липосом их фосфа-тидилхолина, выраженный на единицу площади их поверхности, и, следовательно, воздействует не только на липидную фазу мембран.

5. Плотность отрицательных зарядов атерогенных липоцротеинов плазмы крови уменьшается с увеличением в них содержания холестерина при гиперхолестеринемии, что с учетом уменьшения плотности зарядов мембран позволяет высказать предположение о роли мембранных зарядов в регуляции обмена холестерина между липоцротеинами и мембранами эритроцитов.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Бондарь, Ольга Петровна

ВЫВОДЫ

1. Обогащение мембран эритроцитов холестерином с помощью холестерин-фосфатидилхолиновых липосом в опытах in vitro на 9-3556 не сопровождается существенным изменением содержания других липидных компонентов в мембранах. Развитие гиперхолестерине-мии у крысы и человека, алиментарного атеросклероза у кролика приводит к выраженному в разной степени увеличению содержания холестерина в мембранах эритроцитов, изменению фосфолипидного состава, увеличению молярного соотношения холестерин/фосфолипи-ды. При ишемической болезни сердца с гиперлипопротеидемиями На, 116 типов содержание холестерина в мембранах эритроцитов не изменяется, а с 1У типом vвeличивaeтcя. к

2. Нарушение липидного состава при гиперхолестеринемии и алиментарном атеросклерозе вызывает изменение функциональных свойств эритроцитов, проявляющееся в увеличении их осмотической стойкости и кислотной резистентности. При ишемической болезни сердца увеличение количества стойких эритроцитов в кровяном русле наблюдается лишь при осложнении заболевания гиперлипопротеи-демией 1У типа.

3. Величины электрофоретической подвижности эритроцитов, -потенциала, плотности поверхностного заряда мембран эритроцитов быка, крысы, кролика и человека существенно различаются и коррелируют с изменением содержания холестерина в мембранах при обогащении их в опытах in vitro , гиперхолестеринемии и алиментарном атеросклерозе - понижаются с увеличением содержания холестерина. При этом изоэлектрическая точка поверхности смещается в сторону более высоких значений.

4. Показано нарушение баланса электростатических взаимодействий в мембранах эритроцитов за счет уменьшения количества титруемых СООН-концевых и боковых групп, вторичных фосфорнокислых и имидазола гистидина и увеличения ОН-групп тирозина и £-Ш2 лизина в опытах in vitro и при патологиях, сопровождающихся увеличением содержания холестерина; установлены сдвиги в значениях рК ионогенных групп мембран.

5. Выявлено снижение количества участков связывания положительно заряженного флуоресцентного зонда астрафлоксина, соцро-вождающееся коротковолновым сдвигом максимума флуоресценции зонда в мембранах эритроцитов, обогащенных холестерином,

6. Анализ экспериментальных данных, данных литературы и дополнительные модельные исследования на липосомах различного состава дают основание предполагать, что уменьшение числа отрицательных мембранных зарядов, сопровождающее увеличение содержания холестерина в мембранах, является результатом их маскировки вследствие воздействия холестерина на взаимодействия мембранных компонентов.

7. Цроведена сравнительная характеристика результатов определения плотности мембранных зарядов методами микроэлектрофореза, потенциометрического титрования и флуоресцентных зондов; установлены возможные гранили применимости методов; предложен наиболее адекватный способ выражения и интерцретавди данных потенциометрического титрования и программа его реализации с помощью ЭВМ.

8. Уменьшение плотности зарядов мембран эритроцитов и ате-рогенных липоцротеинов с увеличением содержания в них холестерина цри развитии гиперхолестеринемии и атеросклероза позволяет предположить усиление их взаимодействия вследствие подавления сил электростатического отталкивания и возможную регулят,орную роль мембранных зарядов в обмене холестерина между липопротеи-нами - мембранами эритроцитов - мембранами сосудистой стенки.

9. Величины электрофоретической подвижности эритроцитов могут быть рекомендованы в качестве дополнительного теста степени тяжести гиперхолестеринемии и риска возникновения ишемической болезни сердца на стадии развития гиперхолестеринемии.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Бондарь, Ольга Петровна, 1984 год

1. Актиыпсть альдолази та дег1дрогеназ рб-глщеро фосфату i 3-фосфогл1церинового альдегму м"яз1в кроля за експериментально-го атеросклерозу / Литвиненко Л.Т., Гулий М.Ф., Гыыиярова Ф.Н., Сидоренков I.B. Укр. 6ioxiM. журн., 1972, 44,. J* 2,с. 214-216.

2. Апуховская Л.И., Ивашкевич С.П., Вендт В.П. Влияние стеринов на свойства мембран эритроцитов при экспериментальном рахите. -Вопр. мед. химии, 1974, 24, £ 5, с. 548-554.

3. Бирштейн Т.М., Дмитренко Л.В. Потенциометрическое титрование. -В кн.: Физико-химические методы изучения, анализа и фракционирования биополимеров. М.-Л. : Наука, 1966, с. 10-39.

4. Бородинский Ю.Н., Сидоренко М.И. Некоторые показатели липид-ного обмена в мембранах эритроцитов и плазме крови при коронарном атеросклерозе и инфракте миокарда. Сов', медицина, 1975,10, с. 103-105.

5. Бранков Г. Форма и реология эритроцитов. Биомеханика, 1979, & 8, с. 6-Ю.

6. Бурыкина И.А., Александрова Н.П., Виноградова О.И. Электрофо-ретическая подвижность тромбоцитов и эритроцитов у больных с острой артериальной и венозной непроходимостью-. В кн.: Актуальные вопросы скорой медицинской помощи, М.: 1972, с.87-89.

7. Вендт В.П. О комплексах белков со стеринами. В кн.: Витамины. Киев, Изд. АН УССР, 1956, с. 30-39.

8. Взаимодействие холестерина с апопротеином Е-аргининбогатым белком липопротеидов очень низкой и плотности / Титова Г.В., Клюева Н.Н., Кожевникова К.А. и др. Биохимия, 1980, 45, И, о. 51-55.

9. Взаимодействие холестерина с полипептидами и аминокислотами. / Климов А.Н., Титова Г.В., Кожевникова К.А. и др. Биохимия, 1982, 47, & 2, с. 226-232.

10. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. М.: Наука, I960. - 320 с.

11. Влияние холестериноксидазы на обратное развитие экспериментальной гиперхолестеринемии у кроликов / Титов А.В., Слободская В.В., Тарасова Е.В., Терешин И.М. Вопр. мед. химии, 198I, 27, fig, с. 345-349.

12. BMicT стерин1в у мембранах еритроцит1в крол1В у норм: й за атеросклерозу / Апуховська ji.I., Вендт В.П., 1вашкевич С.П., Щомик В.О. Укр. 6ioxiM. журн., 1976, 46, £ 5, с. 592-596.

13. Гельферих Ф. Иониты. Основы ионного обмена. М. : ИЛ, 1962, 490 с.

14. Глушков В.М., Летичевский А.А., Стогний А.А. Входной язык вычислительной машины для инженерных расчетов. Кибернетика, 1965, й I, с. 74-32.

15. Данилов И.П., Буглов Н.Д., Горельчик К.И. К патогенезу по-достных и хронических гипопластических анемий. Пробл. гема-тол. и переливания крови, 1969, 6, с. 23-26.

16. Жихарева А.И. Влияние охлаждения на фосфолипиды печени. -Вопр. мед. химии, 1979, 25, & 6, с. 673-676.

17. Ивашкевич С.П., Апуховская Л.И., Вендт В.П. Влияние стери-нов различной химической структуры и сквалена на осмотическую стойкость эритроцитов. Биохимия, 1981, 46, вып. 8, с.1420-1425.

18. Изменение активности липолитических ферментов в плазме крови крыс при содержании их на атерогенном рационе. / Малакова Э.А., Ефимова Л.В., Базазьян Г.Г., Левчук Т.П. Вопр. питания, 1981, № 3, с. 31-35.

19. Изменение плотности отрицательных поверхностных зарядов ате-рогенных липопротеидов при гиперхолестеринемии у крыс. / Бондарь О.П., Холодова Ю.Д., Климашевский В.М., Феденко Т.А. -ДАН УССР, 1982, серия Б, № 10, с. 55-58.

20. Изменение структуры атерогенных липопротеидов при экспериментальном атеросклерозе / Формазюк В.Е., Добрецов Г.Е., Полеский В.А. и др. Вопр. мед. химии, 1980, 26, № 4,с. 540-545.

21. Кейтс М. Техника липидологии. М.: Мир, 1975. - 322 с.

22. Кенчингтон А. Кривые титрования. В кн.: Аналитические методы белковой химии. - М., 1963, с. 394-429.

23. Климов А.Н. Причины и условия развития атеросклероза. В кн. : Биохимические основы патогенеза атеросклероза. Ленинград, 1980, с. 3-35.

24. Клиорин А.И., Тлунов А.А. Функциональная неравнозначность эритроцитов. Л. : Наука, 1974. - 148 с.

25. Козинец Г.И., Борзова Л.В., Кульман Р.А. Поверхностный заряд клеток крови и некоторые аспекты его биологической роли. -Лабор. дело, 1975, № 5, е. 284-285.

26. Колмаков В.Н., Пожиленкова К.Ш., Шорохов Ю.А. Влияние пищевой гиперхолестеринемии на некоторые свойства клеточной мембраны эритроцитов. В кн.: Атеросклероз и мембранная проницаемость. - Л., 1974, с. 55-57.

27. Краснобаева Н.Н., Атанасова Б.П. Кислотно-щелочное равновесие феррилагемоглобина желтого люпина: Потенциометрические исследования.- Молекулярная биология, 1978, 12, N24, с. 901-906

28. Кузнецов И.А., Филиппов С.М., Хамизов Р.Х. Кислотно-основные свойства и вторичная структура ДНК в изоионных раствоpax. Мол. биол., 1973, 12, & 4, с. 748-758.

29. Курашов М.И. Электрический заряд и липиды эритроцитов у больных атеросклерозом. Казан, мед. журн., 1979, 60, В 6,с. 46-48.

30. ЛанкинВ.З., Тихадзе А.К. Активность глутатионпероксидазы в крови млекопитающих при гиперхолестеринемии. Бюл. эксперим. биологии и медицины, 1980, 5, с. 554-556.

31. Левин Г.Я., Шереметьев Ю.А. Роль У-ацетилнейраминовой кислоты и отрицательного заряда эритроцитов в их агрегации. -Пробл. гематол. и переливания крови, 1981, № 6, с. 6-8.

32. Левин С.В. Структурные изменения клеточных мембран. Л.: Наука, 1976, 224 с.

33. Левчук Ю.Н., Воловик З.Н. Спектроскопическое определение содержания липидов в суспензиях липосом. Укр. биохим. журн., 1982, 84, В I, с. 66-69.

34. Ленинджер А. Биохимия. М.: Мир, 1974, 956 с.

35. Леонова Т.Я. К вопросу об эритроцитарном механизме регулирования холестеринемии при экспериментальной гиперхолестеринемии и ишемической болезни сердца. Автореферат канд. дис., Новосибирск, 1982, 25 с.

36. Леонова Т.Н., Феденков В.И. Некоторые показатели липидов сыворотки крови и эритроцитов у больных ишемической болезнью сердца. В кн.: Вопросы организации кардиологической помощи населению, Новосибирск, 1981, т.107, с. 71-31.

37. Нарушения баланса электростатических взаимодействий в мембранах эритроцитов при Д-гиповитаминозе / Холодова Ю.Д., Апухов-ская Л.И., Бондарь О.П. и др. Укр. биохим. журн., 1980, 52, Й5, с. 597-603.

38. S8. Окисление холестерина в биологических мембранах и атеросклероз /Лопухин Ю.М., Арчаков А.И., Халимов Э.М., Бородин Е.А. -Кардиология, 1980, 20, 15 8, с. III-II6.

39. Оценка плотности поверхностного заряда липопротеидов плазмы крови человека. / Фармазюк В.Е., Добрецов Г.Е., Леев А.И., Владимиров Ю.А. -Вопросы мед. химии, 1982, 28, & I, с.119-122.

40. Распределение холестерина между плазмой и эритроцитами при атеросклерозе / Бородин Е.А., Сергиенко В.И., Халимов Э.М., Зюляев А.И. Труды 2-го Московского мед. ин-та, 1979, 129, 15 S, с. 90-91.

41. Розенцвейг К.И. Ускоренный метод определения общего холестерина по Илька. Лаб. дело, 1962, 1ё 9, с. '43-44.

42. Смирнова И.П., Феденко Г.А., Выховнюк И.В. Фенотипирование нарушений липидного обмена. Докл. АН УССР, 198I, № 9, серия Б, с. 80-82.

43. Смитт Я., Бутлер К. Системы ориентированных липидов как модельных мембран. В кн.: Метод спиновых меток. М., 1979, с. 444-488.

44. Содержание холестерина в эритроцитах человека и кролика при атеросклерозе и экспериментальной гиперхолестеринемии / Лопухин Ю.М., Бородин Е.А., Сергиенко В.И. и др. Вопр. мед. химии, 1979, 25, $ 4, с. 466-468.

45. Соколов В.И., Черный В.В., Абидор И.Г. Определение поверхностного заряда бислойных липидных мембран. ДАН СССР, 1980, 251, 1*1, с. 236-239.

46. Состояние эритроцитарного механизма регулирования холесте-ринемии при атеросклерозе /Феденков И.И., Леонова Т.Я., Шуйская В.Г. и др. В кн.: Механизмы патологических реакций. Томск, 198I, с. 132-135.

47. Структурные и функциональные изменения мембран эритроцитов при экспериментальном атеросклерозе / Торховская Т.И., Артемов а Л.Г., Ходжакулиева Б.Г. и др. Бюл. экспер. биологии и медицины, I960, £ 6, с. 675-678.

48. Тенфорд У, Физическая химия полимеров. М.: Химия, 1965. -772 с.

49. Терсков Й.А., Гительзон И.И. Значение дисперсионных методов анализа эритроцитов в норме и патологии. В кн.: Вопросы биофизики, биохимии и патологии эритроцитов. М. : Наука, 1967,с. 41-48.

50. Терсков И.А., Гительзон И.И. Метод химических /кислотных/ эритроэдамм. Биофизика, 1957, 2, £ 2, с. 259-263.

51. Трещинский А.И., Мищук И.И. ейектрокинетические свойства крови. Анестезиология, 1982, £ 4, с. 17-21.

52. Феденков В.И. Роль эритроцитов в обмене холестерина.

53. В кн.: Механизм регуляции в системе крови. Красноярск, 1978, ч. 2, с. 17-18.

54. Формазюк В.Е., Добрецов Г.Е., Владимиров Ю.А. Изменение поверхностного заряда липопротеидов, выделенных из плазмы крови лиц с гиперальфалипопротеидемией. Вопр. мед. химии, 1981,1. I, с. 125-128.

55. Фридрихсберг Д.А. Курс коллоидной химии. Л.: Химия, 1974, с. 351.

56. Харамоненко С.С. Коллоидно-химические основы групповой классификации крови человека. Труды Белорус. НИИ переливания крови, Минск, т.4, 1947, с. 26-65.

57. Харамоненко С.С., Ракитянская А.А. Электрофорез клеток крови в норме и при патологии. Минск: Белорусь, 1974. -142 с.

58. Холодова Ю.Д. АТФ-^залежне зв"язування ioHiB у мембранних фрагментах. Анал13 у терм1нах 10нообм1нних властивостей мембран. Ф1310л. журн., АН УРСР, 1976, 22, й 2, с. 232-240.

59. Холодова Ю.Д. Iohith i проблема нер1вном1рного розподыу iohib mis кл1тинною i навколипним середовищем. Ф1З10Л. журн. АН УРСР, 1965, II, й 5, с. 664-673.

60. Холодова Ю.Д. Ионогенные группы в мембранных фрагментах и миофибрилах скелетных мышц. Биофизика, 1972, 17, й I, с.70-76,

61. Холодова Ю.Д., Безручко Н.Ф. Неспеци^ическое связывание ионов К, Па и Н в ядрах и митохондриях скелетных мышц. -В кн.: Биофизика мембран, Каунас, 1971, с. 755-767.

62. Холодова Ю.Д., Бондарь О.П. Потенциометрическое титрование в биологических исследованиях. Цитология, 1980, 22, й 5, , с. 499-513.

63. Шубочкин А.К. Липиды крови, мембран эритроцитов и митохондрий печени при экспериментальной гиперхолестеринемии на фоне общего вибрационного воздействия. Автореф. канд. мед. наук,

64. Ростов-на-Дону, 1981, 23 с.

65. Эритроцитарные и тромбоцитарные показатели крови у больных атеросклерозом коронарных артерий / Адамян К.Г., Меликян Н*Г., Мелкумова Л.Г. и др. йурн. эксперим. и клинической медицины, 1977, & 4, с. 70-73.

66. Яковенко Г.М., Михно А.^. Методы выделения и разделения по классам липидов листьев и хлоропластов растений. Физиол. и биохим. культурных растений, 1971, 3, вып. 6, с. 651-656.

67. Abrazason М.Б., Katzman Е., Gregor Н.Р. Aqueous dispersions of phosphatidylserine. J. Biol. Ohem., 1964, 239,N21,p. 70-78.69* Abramson М.Б., Yu E.K., Zaby V. Ionic properties of beef brain gangliosides. Biochim. et biopbys. acta, 1972, 280,

68. Borggaard O.K. Titrimetric determination of acidity and pK values of humic acid. Acta chim. Scand. A, 1974, 28, N 1, p. 121-122.

69. Breslow E., Gurd P. R.N. Reactivity of sperm whate met-myoglobin towards hydrogen ion and p-nitrophenylacetate. -J. Biol. Chem., 1962, 237, N 2, p. 371-381.

70. Bruckdorfer K.R., Graham J.M., Green C. The incorporation of steroid molecules into lecethin, p -lipoproteins and cellular membranes. Eur. J. Biochem., 1968, 4, N 4, p. 512518.

71. Carman R.K., Palmer A«H«, Kibrick A.C. The hydrogen ion dissociation curve of J, -lactoglobulin. J. Biol. Chem., 1942, 142, N 2, p. 803-822.

72. Chen H.W., Heiniger H.J., Kandutsch A.A. Alteration of 86Rb+ influx and efflux follorving depletion of membrane sterol in L-cells. J. Biol. Chem., 1978, 253, N 9, Р- 3180-3185»

73. Chen P.S., Toribaro Т.Г., Waruer H. Microdetermination of Phospharus. Anal. Chemistry, 1956, 28, N 11, p. 1756-1763.

74. Cholesterol in mycoplasma membranes / Rottem S., Cirillo V.P., de Kruyff B. et al. Biochim. et biophys. acta, 1973, 323,1. N 4, p. 509-519.

75. Claret M., Garay R«, Girand P. The effect of membrane cholesterol on the sodium pump in red blood cells. J. -Physiol. (Gr. Brit), 1978, 274, N 1, p. 247-264.

76. C-NMR studies of lipid interactions in single- and multi-component lipid vesicles / Stoffel W., Tunggal B.D., Zierenberg 0. et al. Hoppe-Seylerfs Z. Physiol Chem., 1974, 355, N 11, p. 1367-1380.

77. Cook G.M.W., Heard D.H., Seaman G.V.E. Sialic acid and theelectrokinetic charge of the human erythrocyte. Nature, 1961, 191, N 4783, p. 44-47.

78. Cullis P.R., De Kruyff B. Lipid oolimoxphism and the functio;-nal roles of lipids in biological membranes. Biochim. et biophys. acta, 1979, 559, N 1, p. 399-420.

79. Cullis P.R., Hope M.J. The bilayer stabilizing role of sfingomyelin in the presence of cholesterol. Biochim. et biophys. acta, 1980, 597, N 3, P* 533-542.

80. Dahl Ch.E., Dahl J.S., Bloch K. Effect of alkyl-subsititu-ted precursors of cholesterol on artificial and natural membranes and on the viability of Mycoplasma capricolum. -Biochemistry, 1980, 19, N 7, p. 1462-1467.

81. Dahl J.S., Dahl Ch.E., Bloch K. Sterols in membranes. -Biochemistry, 1980, 19, N 7, p. 1467-1472.

82. Dawes E.A. Quantiteve problems in biochemistry. Leving-ston, Edenbyrgh, 1965* - 61 p.

83. DeGier J., Mandersloot J.G., Van Deenen L.L.M. Lipid composition and permeability of liposomes. Biochim. et biophys. acta, 1968, 150, N4, p. 666-675*

84. Demel E.A., Bruckdorfer K.E., Van Deenen L.L.M. The effect of sterol structure on the permeability of liposomes to glucose, glycerol and Eb+. Biochim. et biophys. acta1972, 255, N 1, p. 321-330.

85. Demel E.A., De Kruyff B. The function of sterols in membranes. Biochim. et biophys. acta, 1976, 457, N 1, p. 109132.

86. Demel E.A., Geurts Van Kessel W.S.M., Van Deenen L.L.M. The properties of polyunsaturated lecithins and their interaction with cholesterol. Biochim. et biophys. acta, 1972, 266, N 1, p. 26-40.

87. Denticke В., Euska C. Changes of nonelectrolyty permeability in cholesterol-loaded erythrocytes. Biochim. et biophys. acta, 1976, 433, N 3, p. 638-653*

88. Diet and lipoproteins influence primate atheroscleroses / Nicolosi R.J., Hojnacki J.L., LansaN., Rayes R.C. -Amer. J. Chim. Nutr., 1977, 30, N 4, p. 615-617.

89. Dodge J.T., Mitchell C.F., Hanahan D.S. The preparation and chemical characteristic of hemoglobin free ghosts of human erythrocytes. - Arch. Biochem. and Biophys., 1963, 100, N 1, p. 119-123*

90. Duke J.A., Bier M., Nord F.F. On the mechanism of enzyme action. The amphoteric properties of tiypsin. Arch. Biochem. Biophys., 1952, 40, N 2, p. 424-436.

91. Durham A.C.H., Butler J.G-. a prediction of the structure of tobacco mosaic-virus protein. Eur. J. Biochem., 1975»53, N 2, p. 397-404.

92. Durham A.C.H., Vogel D., De Marcillac G.D. Hydrogen ion binding by tobacco-mosaic-virus protein polymer.

93. Eur. J. Biochem., 1977, 79, IT 1, p. 151-159.

94. Edelhock H. The denaturation of pepsin. II. Hydrogen ion equilibria of native and denatured pepsin. J.Amer. Chem. Soc., 1958, 80, N 24, p. 6640-6656.

95. Electrokinetic behavioerof inside-out vesides from human red cell membranes / Yen Wei S., Mercer R.W., Ware B.R., Dunham Ph.B. Biochem. et biophys. acta, 1982, 689, N 2, p. 290-298.

96. Electrostatic effects on lipid phase transition: membrane structure and ionic enviroument / Watts A., Harlos K., Maschke W., Marsh D. Biochim. et biophys. acta, 1978, 510, IT 1, p. 63-74.

97. Evidence for isotopic motion of phospholipid in liver microsomal membranes / De Kruyff В., Van Dessalaar A.M.N.P., Cullis P.R. et al. Biochim. et biophys. acta, 1978, 514, N 1, p. 1-е.

98. Ety-lar E.H., Doolittle R.F. Sialic and from blood cells of the Lamprey Ed. Nature, 1962, 193, N 4821, p. 11831184.

99. Fisher K.M. Analysis of membrane nalves: Cholesterol. -Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1976, 73, N 1, p. 173-188.129* Pisher K.M. "Half" Membrane Eurichments Verification of Electron Microscopy. Science, 1975, 190, N 4218, p. 983984.

100. Furchgott R., Ponder E. Electrophoretic studies on human red blood cells. J. Gen. Physiol., 1941, 24, N 3, p. 447452.

101. Gockoop J.G. pH-dependent behaviour of erythrocyte membrane elevation. Cell Biol. Intern. Reports, 1978, 2, N 2,p. 139-147.

102. Goldshein J.L., Brown M. The low-densidy lipoprotein pathway and its relation to atherosclerosis. Aon. Rev. Biochem., 1977, 46, p. 897-930.

103. Gottlieb M.H. The limited depletion of cholesterol from erythrocyte membranes on treatment with incubated plasma. -Biochim. et biophys. acta, 1976, 433, N 2, p. 333-343.

104. Hallam C., Wriggleswirth J.M. Hydrogen ion titration studies on erythrocyte membranes. Biochem. J., 1976, 156,1. N 1, p. 159-165»

105. Harris E.A. Studies on the fluorescence and binding of 8-Anilino-1-Naphtalene sulfonate by submitochondrial per-ticles. Arch. Biochem. and Biophys., 1974, 147, N 2,p. 436-44-4.

106. High resolution proton relaxation studies of lecithins,/ Lee A.G., Birdsall N.J.M., Levine Г.К. et al. Biochim. et biophys.,acta, 1972, 255, N 1, p. 43-56.

107. Hildebrand J., Stryckmans P.A., Vanhouchen J. Gangliosides in leukemie and non-leukemic human leukocytes. Biochim. et biophys. acta, 1972, 260, N 2, p. 272-278.

108. Howard K., Cooper R.A., Foster R.E. Erythrocyte water permeability. The effect of anesthetic alcohols and alterationsin the level of membrane cholesterol. Biochim. et biophys. acta, 1980, 600, N 2, p. 542-552.

109. Hsia J.C., Schneider H., Smith J.O.P. A spin label study-of the influence of cholesterol on phospholipid multibilayer structures. Can. J. Biochem., 1971, 49, N 5, p. 614-622.

110. Hui D.Y., Noel J.C., Harmony J.A.K. Bunding of plasma low density lipoproteins to erythrocytes. Biochim. et biophys acta, 1981, $6, n 3, Р» 513-523»

111. Identification of 9-0-acetyl-N-acetylneuroaminic acid of the surface of BALB/c mouse erythrocytes / Reuter G., Vliegen-thart J.F.G., ?/ember M., Schauer R., Howard R. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1980, 94, N 2, p. 567-572.

112. Innerarity T.L., Pitas R.E., Mahley R.W. Binding of argi-ninerich (E) apoprotein after recombination with phospholipid vesicles to the low density lipoprotein receptors of fibroblasts. J. Biol. Chem., 1979, 254, N 10, p. 4186-4190.

113. Jackson R.L., Gotto A.M. Hypothesis concerning membrane structure, cholesterol and atherosclerosis. In: Atherosclerosis reviews, 1976, ed. by Paoletti R., Gotto A.M., N.-Y.: -Raven Press, p. 1-22.

114. John D.T., Rouser G. Removal of lipid from intact erythrocytes and ghost by aqueous solutions and its relevance to membrane structure. Lipids, 1973, 9, N 1, p. 49-54.

115. Johnson. S.M. The effect of charge and cholesterol on the size and thickness of sonicated phospholipid vesicles. -Biochim. et biophys. acta, 1973, 307, N 1, p. 27-41.

116. Joos R.W., Carr O.W. The binding of Oa in mixtures of phospholipids. Proc. Soc. Exper. Biol. Med., 1967, 124, N 4, p. 1268-1289.

117. Joos P., Demel R.A. The interection energies of cholesterol and lecithin in spread mixed monolayers at the air -water interface. Biochim. et biophys. acta, 1969, 183,1. N 3, Р» 447-457.

118. Kamel G. Blood lipid in infanttie richets. J. Egypt. Med. Assoc., 1975, 58, IT 3-4, p. 189-195.

119. Kutchai H., Cooper R.A., Forster R.F. Erythrocyte waterperemeability. The effects of anestetic alcohols and alterations in the level of membrane cholesterol. Biochim. et biophys. acta, 1980, 600, N 2, p. 541-553.

120. Laggner P. Physicochemical characterization of high-deu-sity lipoproteins. In: High-deusity lipoproteins ed.by Day C.E., N.-Y.: 1981, p. 43-73.

121. Lakshminatayanaiah N. Potentiometric Estimation of Charges in Barnaele Muscle Fibers under Internal Peg.Fusion.

122. Lindgren F.T., Jensen L.C., Hatch F.T. The isolation and quontitative analysis of serum lipoproteins. In: Blood lipids and Lipoproteins: Quantitation, Composition and Metabolism. Ed. Nelson G.J., N.-Y.: 1972, p. 181-193.

123. Maciejek Z., MacLcy K., Chemilewski H. Serum lipid pattern changes and erythrocyte lipid content changes in pa-tiens with cerebral atherosclerosis. Acta med. pol., 1979, 20, N 3, p. 281-292.

124. Marinetti G.V., Grain R.C. Topology of aminophospholipids in the red cell membrane. J. Supramol. struct., 1978,8, N 2, p. 191-213.

125. Martin G.K., Margenhagen S.E., Scott D.B. Relation of ionizing groups to the structure of the collagen fibrin. -Biochim. et biophys. acta, 1961, 49, N 1, p. 245-250.

126. Matthews E.K., Evans R. J., Deen P.M. The ionogenic Nature of Secretory-Granule Membrane. Electrokinetic properties of isolated chromaffin granull. Biochem. J., 1972, 130, N 3, P. 825-832.

127. Mc.Layghlin S. Electrostatic Potentials of Membrane-Solution Interface. In: Current Topics in Membranes and Transport, N.-Г., 1977, 9, p. 71-135179* Mihalyi E. The dissociation curves of crystalline myosin.

128. Enzymologia, 1950, 14, N 1, p. 224-236.

129. Mihalyi E. Transformation of fibrinogen into fibrin. Electrochemical investigation of the activation process. -J.Biol. Chem., 1954, 209, N 2, p. 723-733«

130. Nakatani Н.Г., Barber S., Forrester J.A. Surface chargeson choloroplast membranes as studies by particle electrophoresis. Biochim. et biophys. acta, 1978, 504, N 1, p. 215-225.

131. Nelson G.J., Lipid Composition and Metabolism of Erythrocytes. In: Blood Lipid and Lipoproteins; Quantitationj

132. Ponder E., Ponder R.V. The electrophoretic velocity of human red cells of their ghosts and mechanically produced fragments and of certain lipid complexes. J. Gen. Physiol., 1960, 43, N 3, Р- 503-508.

133. Ruhenstroth-Bauer G. The normal and pathological haemocyto-pherogramm of man» Ins Cell Electrophoresis, ed» Ambrose E.I. London, 1965, p. 66-72.

134. Sanui H., Carvalho A.P., Pace Ж. Relationship of hydrogen ion binding to sodium and potassium binding by rat liver cell microsomes. J. Cell Compar. Physiol., 1962, 59» N 3» p. 241-250.

135. Sanui H., Pace N. Sodium and potassium and hydrogen ion binding characteristics of dog erythrocyte ghosts.

136. Scatchard G. The attractions of protein for small molecules of ions. Ann. N.-Y. Acad. Sci., 1949, 51, N 5, p.660-671.

137. Scheele R.B., Lauffer M.A. Acid-base titrations of tobacco mosaic virus and tobacco mosaic virus protein. Biochemistry, 1967, 6, N 10 , p. 3076-3081.

138. Seamon G.V.P., Cook G.M. Modification of the electrophoretic behaviotur of the erythrocyte by chemical and enzymatic methods. In: Cell Electrophoresic, ed. Ambrose E.I., London, 1965, p. 48-65.

139. Seaman G.V.P., Kok D.A., Heard D.H. The electrophoretic mobility of human red cells re-suspended in their nativ serum. Clin. Sci., 1962, 23, N 1, p. 115-123.

140. Shov/ D.J. Electrophoresis. L., 1T.-X. : Academic Press, 1976. - 381 p.

141. Silk S.T., Breslow E. H-ion interaction of horse spleen feritin and apoferritin. J. Biol. Chem., 1976, 251,1. N 22, p. 6963-6973.

142. Small D.M., Bourges M.C. The biophysics of lipidic associations. Biochim. et biophys. acta, 1966, 125, N 3»p. 566-569.

143. Smith R.J.M., Green C. The rate of cholesterol "flip-flop" in lipid bilayers and its relation to membranes sterol pools. FEBS Lett., 1974, 42, N 1, p. 108-111.

144. Studies on the hydrogen belts of membranes / Tirri L.J., Schmidt P.G., Piillarket R.K. et al. Lipids, 1977» 12,1. N 10, p. 857-862.

145. Studies on the hydrogen belts of membranes / Tirri L.J.,

146. Szabo G. Dual mechanism for theaction of cholesterol on membrane permeability. Nature, 1974, 252, 5478, p. 47-49.

147. Takayuki K., Shoshichi N., Keizo J. Properties of liposomal membranes composed of short chain lecithins.

148. Tanford C. Protein denaturation. Adv. Protein. Chem., 1970 , 24, p. 2-95.

149. Tetronic-701-a novel hupocholesterolaemic agent / Green J., HealdM., Baggdlyk E.H., et al. Atherosclerosis, 1976, 26, n 3, P. 549-558.

150. The interaction of the "folch-less" protein v/ith lipid at the air-water interface / London Y., Demel R.A«, Geurts van Kessel W.S.M. et al. Biochim. et biophys. acta, 1974, 332, N 1, p. 69-84.

151. The preferential interaction of cholesterol with different classes of phospholipids / Demel R.A., Jansen J.W.C.M., Van Dijck R.W.M. et al. Biochim. et biophys. acta, 1977, 465, N 1, p. 1-10.

152. The temperature dependence of molecular order and the influence of cholesterol in Acholeplasma laidlawii membranes / Davis J.H., Bloom M., Butter K.M. et al. Biochim. et biophys acta, 1980, 597, N 3, P. 477-491.

153. Trauble H., Eibl H. Electrostatic effects on lipids phase transition membrane. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1974, 71, N 1, p. 214-219.