Структурные основы контракции (ретракции) сгустков крови и тромбов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Хисматуллин Рафаэль Рафикович

• Хисматуллин Рафаэль Рафикович
• кандидат наук
• 2023

Оглавление диссертации кандидат наук Хисматуллин Рафаэль Рафикович

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Гемостаз и тромбоз

1.1.1 Компоненты гемостаза: сосудистый, тромбоцитарный, плазменный

1.1.2 Физиологические антикоагулянты и фибринолиз. Гемостатический баланс

1.1.3 Клеточные и молекулярные механизмы тромбоза. Триада Вирхова

1.1.4 Артериальные и венозные тромбы. Тромбоэмболия

1.2 Структура и состав сгустков крови и тромбов

1.2.1 Образование, структура и свойства фибрина

1.2.2 Морфофункциональная характеристика тромбоцитов и их взаимодействие с фибрином

1.2.3 Эритроциты как участники тромбообразования и составная часть сгустков крови и тромбов

1.2.4 Лейкоциты в составе воспалительных тромбов

1.3 Контракция (ретракция) сгустков крови и тромбов

1.3.1 Биомеханические механизмы контракции

1.3.2 Структурные изменения сгустков крови в процессе контракции

1.3.3 Патофизиологическое значение контракции сгустков крови и тромбов

1.3.4 Клиническое значение нарушений контракции сгустков крови и тромбов 56 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Клинический материал. Разрешения этических комитетов

2.1.1 Пациенты и умершие с венозным тромбозом и тромбоэмболическими осложнениями

2.1.2 Пациенты с ишемическим инсультом

2.1.3 Умершие от осложнений COVID-19

2.1.4 Источники крови здоровых доноров и пациентов

2.2 Формирование и контракция сгустков крови in vitro

2.2.1 Получение крови и ее компонентов

2.2.2 Образование контрактированных и неконтрактированных сгустков крови

2.2.3 Определение степени контракции сгустков крови in vitro

2.3 Гистологические и гистохимические исследования

2.3.1 Фиксация и разрезание образцов; депарафинирование и регидратация парафиновых срезов

2.3.2 Окрашивание гематоксилином и эозином

2.3.3 Окрашивание по методу Пикро-Маллори

2.3.4 Окрашивание по методу Маллори

2.3.5 Методы визуализации цитруллинированных Н3-гистонов в составе венозных тромбов, тромботических эмболов и в тканях лёгких

2.3.5.1 (Иммуно)флуоресцентное окрашивание венозных тромбов, тромбоэмболов и тканей лёгких

2.3.5.2 Иммуногистохимическое окрашивание венозных тромбов и легочных тромбоэмболов методом пероксидазной детекции

2.3.6 Световая микроскопия гистологических препаратов

2.4 Сканирующая электронная микроскопия сгустков крови, тромбов и тканей лёгких

2.4.1 Сканирующая электронная микроскопия сгустков крови

2.4.2 Сканирующая электронная микроскопия тромбов, тромбоэмболов и тканей лёгких

2.5 Качественный и количественный анализ сканирующих электронограмм сгустков крови и тромбов

2.6 Трансмиссионная электронная микроскопия сгустков крови и тканей легких

2.6.1 Трансмиссионная электронная микроскопия сгустков крови

2.6.2 Трансмиссионная электронная микроскопия тканей легких

2.7 Визуализация эритроцитов в сгустках крови методом конфокальной микроскопии

2.8 Статистический анализ полученных результатов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Структурная реорганизация сгустков крови в процессе контракции in vitro

3.1.1 Качественные структурные изменения в сгустках крови, вызванные контракцией

3.1.2 Сегрегация структурных элементов сгустков крови в зависимости от степени контракции

3.1.3 Ступенчатая компрессионная деформация эритроцитов в процессе контракции сгустков крови

3.1.4 Послойные изменения состава сгустков крови в зависимости от степени контракции

3.1.5 Доля деформированных эритроцитов (полиэдроцитов) как показатель степени контракции сгустков крови («контракционная линейка»)

3.1.6 Заключение по разделу

3.2 Качественная и количественная патоморфология артериальных церебральных тромбов

3.2.1 Общая гистологическая характеристика церебральных тромбов

3.2.2 Состав церебральных тромбов по данным сканирующей электронной микроскопии. Морфологическое разнообразие эритроцитов и признаки прижизненной контракции

3.2.3 Содержание и морфология тромбоцитов и лейкоцитов в составе церебральных тромбов

3.2.4 Особенности строения и распределения фибрина в церебральных тромбах

3.2.5 Заключение по разделу

3.3 Качественная и количественная патоморфология венозных тромбов и тромботических эмболов

3.3.1 Общая гистологическая характеристика венозных тромбов и легочных тромботических эмболов. Нейтрофильные внеклеточные ловушки

3.3.2 Ультраструктура венозных тромбов и тромботических эмболов и признаки их прижизненной контракции

3.3.3 Степень прижизненной контракции венозных тромбов и их частей в зависимости от сроков формирования. Связь контракции венозных тромбов с эмбологенностью

3.3.4 Заключение по разделу

3.4 Структурные особенности воспалительного тромбоза при СОУГО-19

3.4.1 Морфологическая характеристика аутопсийных тканей лёгких при СОУГО-19 по данным макроскопического исследования и световой микроскопии

3.4.2 Морфологическая характеристика аутопсийных тканей лёгких и легочных

(микро)тромбов при СОУГО-19 по данным электронной микроскопии

3.4.2.1 Ультраструктурные изменения в лёгких при СОУГО-19

3.4.2.2 Ультраструктура макроскопического сгустка крови из легочной артерии пациента, умершего от осложнений СОУГО-19

3.4.3 Морфологическая характеристика аутопсийных тканей сердца, головного мозга, почек и печени при СОУГО-19 по данным световой микроскопии

3.4.3.1 Патологические изменения в сердце

3.4.3.2 Патологические изменения в головном мозге

3.4.3.3 Патологические изменения в почках

3.4.3.4 Патологические изменения в печени

3.4.4 Заключение по разделу

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Структурные основы контракции (ретракции) сгустков крови и тромбов»

ВВЕДЕНИЕ Актуальность исследования

Тромбозы являются причиной смертельно опасных сердечно-сосудистых заболеваний, таких как церебральная ишемия, острая ишемическая болезнь сердца и острая легочная тромбоэмболия. Заболевания системы кровообращения, включая тромбозы, - одна из ведущих причин смерти во всем мире, уносящая 17,5 млн. жизней в год [Шляхто, 2020]. В России от сердечно-сосудистых заболеваний каждый год умирает около 1 миллиона людей, что составляет около половины в структуре смертности [Matskeplishvili, 2021]. Предупреждение, раннее выявление и лечение тромботических заболеваний и осложнений остается чрезвычайно актуальной медицинской и социальной проблемой [Lee, 2016; Bing, 2016].

В сложном патогенезе тромбоза одним из наименее изученных процессов является сжатие (контракция, ретракция) тромбов, вызванное сокращением активированных тромбоцитов, потенциально влияющее на течение и исход тромбоза. Если патогенетическая роль контракции сгустков крови и тромбов будет доказана и изучена, этот процесс может стать терапевтической мишенью для разработки новых эффективных методов борьбы с тромбозами и при разнообразных (про)тромботических состояниях. Знание клеточных структурных основ контракции сгустков крови и тромбов может помочь в расшифровке механизмов формирования и созревания тромбов, оценке рисков тромбоэмболии, определении потенциальной эффективности терапевтического тромболизиса и механической тромбэктомии.

Помимо практического, медицинского аспекта, биомеханическая реорганизация сгустков крови и тромбов имеет научно-теоретическое значение с точки зрения клеточной биологии и общей морфологии как пример структурной пластичности клеток в ответ на внешние компрессионные воздействия, широко распространенные в природе. Несмотря на большую практическую и теоретическую значимость, структурные клеточные основы контракции сгустков крови и тромбов остаются недооцененной и не до конца изученной медико-

биологической проблемой.

С учетом современного состояния вопроса, проведенная работа была направлена на изучение наименее разработанных морфологических аспектов контракции (ретракции) с целью выявления новых клеточных механизмов свертывания крови и тромбообразования, структурного ремоделирования и определения динамического состава сгустков крови и тромбов. Исследование выполнено на стыке клеточной биологии, патологии и гематологии и по своим методам, целям и задачам относится к трансляционной медицине.

Диссертационная работа, посвященная морфологии клеток крови, соответствует паспорту специальности «1.5.22. Клеточная биология» по следующим пунктам: изучение закономерностей строения клеток (п. 1); анализ взаимоотношений клеток (п. 3); исследование адаптации тканевых элементов к действию физических и других факторов (п. 5); молекулярные, иммунологические и физиологические аспекты изучения клеток в норме и патологии (п. 6); разработка экспериментальных моделей, морфометрии и маркерной гистохимии (п. 7).

Исходя из сказанного, цель работы - исследование морфологических проявлений контракции (ретракции) сгустков крови и тромбов различной локализации в сопоставлении с патогенезом и клиническими проявлениями тромбозов.

Для достижения цели поставлены следующие задачи.

Основные задачи исследования:

1. Изучить качественную и количественную динамику клеточного состава сгустков крови человека на разных уровнях пространственной организации в процессе их естественного сжатия (контракции).

2. Проследить морфологические признаки ступенчатой компрессионной деформации эритроцитов из исходных двояковогнутых клеток в многогранники (полиэдроциты).

3. Установить количественную взаимосвязь между клеточным составом

сгустков крови и степенью их контракции для определения полноты прижизненной контракции тромбов по содержанию деформированных эритроцитов.

4. Изучить клеточный состав и ультраструктуру внеклеточного матрикса свежих тромбов, извлеченных из артерий головного мозга, для обнаружения структурных признаков прижизненной контракции и выявления связи строения тромбов с клиническими проявлениями ишемического инсульта.

5. Изучить зависимость клеточного состава и ультраструктуры прижизненных венозных тромбов от давности формирования тромбов и их отдельных частей.

6. Сопоставить клеточный состав и структуру первичных венозных тромбов и легочных тромбоэмболов для установления связи между степенью прижизненной контракции тромбов и их предрасположенностью к эмболизации.

7. Изучить особенности клеточного состава и архитектуры, включая морфологические признаки прижизненной контракции, воспалительных микро- и макротромбов у пациентов, умерших от осложнений COVID-19.

Научная новизна

Впервые количественно охарактеризованы изменения клеточного состава и морфологии сгустков крови в процессе их контракции. Обнаружено прогрессирующее сжатие наружного слоя сгустков, представленного фибрином и тромбоцитами, с одновременным увеличением объемной доли эритроцитов, аккумулированных в средней части сгустков. Описаны промежуточные морфологические варианты эритроцитов в процессе компрессионной деформации из двояковогнутых в многогранники (полиэдроциты). Установлена экспоненциальная зависимость между содержанием полиэдроцитов в сгустках крови и степенью их контракции.

Впервые обнаружены морфологические признаки прижизненной контракции церебральных тромбов и установлена связь контракции с течением и исходами ишемического инсульта (церебральной ишемии). Описаны неизвестные

ранее структурные разновидности внеклеточного матрикса (фибрина) в составе артериальных тромбов; разработана цветовая шкала для гистохимического определения возраста тромбов.

Используя различия клеточного состава, впервые установлено, что более старые, фиксированные части венозных тромбов (голова и тело) имеют большую степень сжатия, чем более молодые и подвижные (флотирующий хвост). Обнаружено морфологическое сходство легочных эмболов с наименее компактной хвостовой частью венозных тромбов, что косвенно указывает на связь сниженной контракции тромбов с риском тромбоэмболии.

Впервые установлено, что при летальных формах острого СОУГО-19 первичные воспалительные микро- и макротромбы в легких характеризуются морфологическими признаками прижизненной контракции, включая деформацию эритроцитов.

Научно-практическая значимость

Проведенное исследование расширяет фундаментальные представления о фенотипической пластичности клеток в составе биологических структур (сгустков крови и тромбов) в ответ на биомеханические воздействия. Изучение динамики строения сгустков крови под действием активированных тромбоцитов углубляет понимание механизмов и вариантов морфологической трансформации клеток. Исследование структурных закономерностей ремоделирования прижизненных тромбов способно помочь в понимании фундаментальных основ тромбогенеза и клеточных механизмов образования и созревания тромбов.

Наряду с исследованием фундаментальных биологических проблем, полученные результаты имеют практическое значение для медицины. Разработаны новые методы морфологического анализа сгустков крови и тромбов, а именно: 1) определение степени прижизненной контракции тромбов на основе их клеточного состава («контракционная линейка»); 2) определение давности формирования тромбов путем применения цветовой шкалы для гистохимического определения возраста фибрина, что может найти применение в

патоморфологической и судебно-медицинской практике. Описанная в работе прогрессирующая компактизация тромбов обосновывает раннее терапевтическое окно и объясняет низкую эффективность тромболизиса и тромбэктомии на отдаленных сроках после тромбоза. Обнаруженная связь между клеточным составом тромбов, степенью их контракции и риском тромботической эмболизации раскрывает новые аспекты патогенеза тромбоэмболии.

Положения, выносимые на защиту

1. Контракция (ретракция) сгустков крови сопровождается закономерными морфологическими изменениями, а именно: прогрессирующей пространственной сегрегацией клеток и внеклеточного матрикса и компрессионной деформацией эритроцитов.

2. Наличие клеточного полиморфизма и структурных изменений, характерных для сжатых сгустков крови, в составе артериальных и венозных тромбов, а также тромботических эмболов, доказывает факт их прижизненной контракции.

3. Тромбы и их части, различающиеся по срокам формирования, имеют разный клеточный состав и разную степень контракции; при этом более молодые тромбы с низкой степенью компактизации более подвержены механическому разрыву и тромбоэмболии.

Степень достоверности результатов

Достоверность результатов исследования обусловлена тщательным выбором и характеристикой объектов исследования, большим количеством экспериментальных данных, полученных на современном оборудовании, и детальным анализом результатов, в том числе с использованием обоснованных методов статистической обработки. Методы, выбранные для исследования, современны, соответствуют мировому уровню и поставленным задачам. Все результаты исследования представлены и обсуждены на многочисленных научных конференциях с участием ведущих специалистов и опубликованы в

рецензируемых российских и зарубежных изданиях.

Личный вклад автора

Исследование выполнено автором лично за период 2017-2022 гг. Большая часть экспериментов выполнена в Центре Биомедицинской Микроскопии кафедры морфологии и общей патологии, а также в научно-исследовательской лаборатории «Белково-клеточные взаимодействия» Института фундаментальной медицины и биологии Казанского (Приволжского) федерального университета по Федеральной Программе «5-100». Отдельные эксперименты, включая сканирующую электронную микроскопию, проведены в лаборатории Джона Вайзела в Пенсильванском университете (Филадельфия, США) в ходе научной стажировки (2019 г.) по Программе «Алгарыш» Правительства Республики Татарстан. Часть исследований по сканирующей электронной микроскопии выполнена на базе междисциплинарного центра "Аналитическая микроскопия" Казанского (Приволжского) федерального университета. Трансмиссионная электронная микроскопия проведена совместно с к.б.н., с.н.с. Анастасией Анатольевной Пономаревой и к.б.н., с.н.с. Аминой Галеевной Даминовой из Казанского института биохимии и биофизики РАН.

Прижизненный и посмертный биологический материал, использованный в работе, предоставлен врачами: Романом Александровичем Бредихиным, Дмитрием Владимировичем Малясёвым, Люцией Суляймановной Фатхуллиной из Межрегионального клинико-диагностического центра г. Казани; Кэтлин Т. Монтоун из госпиталя Пенсильванского университета (Филадельфия, США); Виталием Павловичем Давыдовым из Университетской клиники Казанского (Приволжского) федерального университета; Вацлавом Прохазка, Яромиром Гумулеком, Иржи Мачаком из Университетского Госпиталя Остравы (Острава, Чешская Республика); Розалиной Азгатовной Иваевой и Иваном Сергеевичем Рагиновым из Республиканской клинической больницы Минздрава Республики Татарстан; Светланой Сергеевной Санниковой из Городской больницы № 16 г. Казани. Консультативная помощь в работе оказана сосудистым хирургом

Анваром Наилевичем Хузиахмедовым из Городской клинической больницы №7 г. Казани.

Цель и задачи исследования сформулированы совместно с научным руководителем. Автор лично участвовал на всех этапах получения результатов, их обработки, анализа и в подготовке публикаций. Текст диссертации написан автором самостоятельно и отредактирован научным руководителем.

Апробация работы

Научные результаты были доложены на следующих научных конференциях и съездах:

• Итоговая научная конференция сотрудников Казанского университета за 2021 год. Казань, КФУ. 03.02.2022 - 03.02.2022

• Всероссийская научная конференция Конференция "Инфекционные осложнения в детской онкогематологии: диагностика, лечение и профилактика". Москва, Россия, Национальный центр Рогачева. 03.12.2021 - 04.12.2021

• III Объединенный научный форум (VII Съезд Физиологов СНГ; VII Съезд биохимиков России; Х Российский симпозиум «Белки и пептиды»). Сочи, Россия. 03.10.2021 - 08.10.2021

• Конгресс Международного общества по тромбозу и гемостазу. Филадельфия, США 17.07.2021 - 21.07.2021

• Виртуальное собрание Европейского Общества Клинических Исследований. 20.09.2020 - 30.09.2020

• Виртуальный Конгресс Международного общества по тромбозу и гемостазу. 12.07.2020 - 14.07.2020

• II Объединенный научный форум (VI Съезд Физиологов СНГ; VI Съезд биохимиков России; IX Российский симпозиум «Белки и пептиды«). Сочи, Россия. 01.10.2019 - 06.10.2019

• Ежегодная Конференция 2019 года Американского общества клеточной

биологии. Вашингтон, Округ Колумбия, США. 07.12.2019 - 11.12.2019

• 47-ой Ежегодный Филадельфийский семинар по Гемостазу, Тромбозу и Атеросклерозу. Филадельфия, США. 16.11.2018

Публикация результатов исследования

Материалы диссертации отражены в 16 публикациях, в том числе 8 научных статьях, среди них 2 статьи в российском рецензируемом научном журнале, входящем в перечень Высшей аттестационной комиссии, и 6 статей в международных журналах, индексируемых в базах данных Scopus и/или WoS.

Структура и объём диссертации

Материалы диссертационной работы изложены на 182 страницах машинописного текста. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и их обсуждения, выводов, списка цитированной литературы, списка сокращений и приложений. Работа содержит 53 рисунка в основном тексте и 11 таблиц в приложениях. Список литературы включает 16 отечественных и 223 иностранных источников.

Благодарности

Автор благодарит научного руководителя профессора Р.И. Литвинова; научного консультанта доцента А.З. Шакирову, профессора А.П. Киясова и всех сотрудников кафедры морфологии и общей патологии КФУ; сотрудников лаборатории к.б.н. И.А. Андрианову, к.б.н. А.Д. Пешкову, Н.Г. Евтюгину, Ш.М. Абдуллаеву; врачей Р.А. Иваеву, А.Н. Хузиахмедова, А.М. Аухадиеву и Р.Р. Курбаналиеву; с.н.с., к.б.н. А.А. Пономареву; лаборанта Л.С. Фазулзянову; свою маму, младшую сестру и друзей за постоянную помощь и поддержку при выполнении диссертации.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 Гемостаз и тромбоз

Гемостаз (от греческих слов haema - кровь и stasis - остановка) - это филогенетически древний защитный (пато)физиологический процесс, направленный на остановку кровотечения. Одним из главных механимов гемостаза у млекопитающих и человека является свертывание крови, т. е. образование желеобразного сгустка, который, подобно пробке, закрывает дефект и предотвращает кровопотерю в месте повреждения кровеносного сосуда.

Иногда сгусток крови образуется в патологически измененном, но физически целом кровеносном сосуде или в полости сердца, препятствуя свободному кровотоку; этот нежелательный, обтурационный сгусток называется тромбом, а процесс его образования - тромбозом. Таким образом, гемостаз выполняет двоякую функцию: с одной стороны, он предотвращает кровотопотерю, а, с другой стороны, - поддерживает жидкое состояние циркулирующей крови. Соответственно, нарушения гемостаза имеют два крайних патологических проявления - кровотечение или тромбоз. Оба состояния являются смертельно опасными, что обусловливает исключительную значимость проблем гемостаза и его нарушений не только для биологии, но и для медицины.

1.1.1 Компоненты гемостаза: сосудистый, тромбоцитарный, плазменный

Реакции гемостаза образуют сложную систему, которая условно подразделяется на три компонента: сосудистый, тромбоцитарный и плазменный.

Cосудистый гемостаз включает в себя вазоконстрикцию, обнажение адгезивной поверхности субэндотелия и экспрессию эндотелиоцитами прокоагулянтов с их последующим высвобождением в кровоток.

Сужение сосуда (вазоконстрикция), возникающее в участке его повреждения, вызывает уменьшение локального кровотока, что снижает объем кровопотери [Атауллаханов, 2015]. Сужение сосудов осуществляется в результате сокращения гладких мышц средней стенки в артериях и артериолах. Вазоконстрикция происходит либо вследствие прямого механического

раздражения гладких мышц сосудистой стенки, либо под действием вазоконстрикоторов, которые высвобождаются поврежденными эндотелиальными клетками и активированными тромбоцитами. Наиболее сильными вазоконстрикторами являются тромбоксан А2 (ТХА2) и серотонин [Пантелеев, 2008].

К сосудистому гемостазу относится обнажение адгезивного (липкого для клеток) субэндотелиального слоя, к которому прикрепляются активированные тромбоциты, что является первым и необходимым условием механического «заклеивания» дефекта сосудистой стенки [Wolberg, 2012].

Важным компонентом сосудистого гемостаза является способность эндотелиоцитов экспрессировать и секретировать молекулы, которые активируют (тканевой фактор - tissue factor, TF) или ингибируют (тромбомодулин) свертывание крови, активируют (t-PA) или ингибируют (PAI-1) фибринолиз. Кроме того, эндотелий вырабатывает вещества, которые подавляют адгезию и активацию тромбоцитов, такие как оксид азота, простациклин (PGI2) и эндотелиальная CD39/экто-АДФ-аза [Покровский, 2007].

Тромбоцитарный гемостаз

Тромбоциты - это циркулирующие в крови фрагменты мегакариоцитов, обладающие гемостатическими свойствами. Участие тромбоцитов в гемостазе включает процессы адгезии, агрегации, секреции и формирование прокоагулянтной поверхности на наружной мембране тромбоцитов. В последнее время к важным гемостатическим свойствам тромбоцитов относится их способность к контракции, которая вызывает сжатие, или компактизацию, сгустков крови (см. раздел 1.3).

Адгезия тромбоцитов. Тромбоциты адгезируются (прилипают) к месту повреждения сосудистой стенки, покрывая дефект и тем самым уменьшая истечение крови. При отсутствии дефекта эндотелиального слоя адгезии не происходит, тогда как в случае нарушения его целостности адгезивные рецепторы тромбоцитов связываются с белками субэндотелия, такими как коллаген, фактор

Виллебранда (vWF), ламинин, фибронектин и тромбоспондин [Famdale, 2003]. Тромбоциты имеют два белковых рецептора к коллагену: гликопротеин VI (GPVI) и интегрин a2pi [Nieswandt, 2003]. GPVI опосредует первичное взаимодействие неактивированых тромбоцитов с коллагеном, инициирует передачу внутриклеточных сигналов и активацию интегрина a2pi. Последующее связывание тромбоцитов с коллагеном через a2pi приводит к еще большей адгезии и дополнительной стимуляции тромбоцитов, которая сопровождается активацией еще одного адгезивного белка тромбоцитов - интегрина аПЬрЗ. Последний связывается с иммобилизированным фибриногеном и фибрином, что обеспечивает еще более прочную адгезию тромбоцитов в месте повреждения сосуда.

Кроме прямого взаимодействия с коллагеном, адгезия тромбоцитов к коллагену опосредуется vWF [Ruggeri, 2007], активные центры которого связываются как с субэндотелиальным коллагеном, так и с рецепторами тромбоцитов GPIb на поверхности покоящихся тромбоцитов [Heemskerk, 2002; Montague, 2018].

Активация тромбоцитов. В условиях эндотелиального повреждения тромбоциты активируются под действием растворимых стимуляторов и адгезивных белков внеклеточного матрикса. К физиологическим тромбоцитарным агонистам относятся АДФ, ТХА2, коллаген, тромбин и адреналин; каждый из них имеет специфические рецепторы на наружной мембране тромбоцитов.

Наиболее сильный тромбоцитарный агонист - протеолитический фермент тромбин, активирующий тромбоциты через рецепторы PAR1 и PAR4 путём отщепления от них N-концевого фрагмента. Механизм передачи внутриклеточных сигналов через PAR рецепторы основан на активации фосфолипазы С с образованием инозитол-3-фосфата и высвобождением внутриклеточного ионизированного кальция из плотной канальцевой системы [Sveshnikova, 2016]. Передача сигналов с рецепторов на G-белок активирует Rho-киназу, переносящую остаток фосфорной кислоты с АТФ на легкую цепь миозина, что запускает сокращение актомиозинового комплекса и приводит к

изменению цитоскелета и, соответственно, формы тромбоцитов. Кроме того, тромбин снижает в клетках концентрацию цАМФ путем ингибирования его образования мембранной аденилатциклазой. Активация тромбином приводит к изменению формы тромбоцитов, выбросу АДФ и АТФ, синтезу и высвобождению ТХА2 из фосфолипидов мембраны тромбоцита. Кроме того, под действием тромбина на мембране активированных тромбоцитов экспрессируется фосфатидилсерин, образующий матрицу для сборки ферментных комплексов, необходимых для свертывания крови [Пантелеев, 2008].

Аденозиндифосфат (АДФ) высвобождается из 5-гранул активированных тромбоцитов, из эритроцитов и/или из клеток поврежденных тканей, в том числе эндотелиоцитов [Golebiewska, 2015; Versteeg, 2013]. АДФ способен активировать тромбоциты путем связывания с пуриновыми рецепторами P2Y1, P2Y12 и P2X1. Рецептор P2Y1 ассоциирован с G-белком, он активирует фосфолипазу С и вызывает изменение формы тромбоцитов за счёт увеличения уровня внутриклеточного ионизированного кальция [Lam, 2015]. P2Y12 - это рецептор, вызывающий ингибирование аденилатциклазы и снижение уровня цАМФ, что усиливает активацию тромбоцитов [Hechler, 2015]. Рецептор P2X1 - это АДФ-зависимый кальциевый канал [Mahaut-Smith, 2011].

При воздействии тромбина, АДФ или коллагена активированные тромбоциты синтезируют простагландины из арахидоновой кислоты, высвобождающейся из фосфолипидов мембраны тромбоцитов под действием фосфолипазы А2. Арахидоновая кислота сначала превращается в эндоперекиси простагландинов PGG2 и PGH2, а потом непосредственно в ТХА2. Последний связывается со своим тромбоцитарным рецептором (TP-рецептор), ассоциированным с G-белками [Ting, 2010]. Дальнейшие внутриклеточные реакции, индуцируемые ТХА2, идентичны превращениям под влиянием тромбина.

Адреналин вызывает агрегацию тромбоцитов путем связывания с а2А-адренергическими рецепторами и является синергистом тромбина и АДФ.

Независимо от природы стимула, активация тромбоцитов сопровождается экстернализацией фосфатидилсеринов, которые обеспечивает прокоагулянтную

активность тромбоцитов. На наружной мембране тромбоцитов ионы кальция связываются с отрицательно заряженными фосфолипидами, в частности, с фосфатидилсеринами, и обеспечивают сборку внутренней теназы и протромбиназы.

Секреция тромбоцитов. Активация тромбоцитов сопровождается выбросом биологически активных веществ из а- и 5-гранул тромбоцитов. Первые содержат белки, такие как P-селектин, фибриноген, фибронектин, фактор V, фактор VIII, фактор 4 тромбоцитов (PF4), тромбоцитарный фактор роста (PDGF), опухолевый фактор роста-а (TGF-а), а также рецепторы клеточной адгезии (интегрины aIIbß3 и avß3) [Blair, 2009]. 5-Гранулы содержат низкомолекулярные вещества - АТФ, АДФ, ионы кальция, серотонин, гистамин и адреналин [Heemskerk, 2002]. Секреция 5-гранул играет особую роль в гемостазе, обеспечивая механизм положительной обратной связи, так как высвобождающийся из них АДФ стимулирует новые тромбоциты через пуриновые рецепторы P2Y12 и P2Y1 [Peters, 2012].

Агрегация тромбоцитов. Прилипание тромбоцитов друг к другу (агрегация) происходит после их активации и адгезии под действием физиологических индукторов, таких как АДФ, тромбин, адреналин, TXA2 и другие. Ключевую роль в агрегации тромбоцитов играет активация интегринового рецептора aIIbß3, конформационное изменение которого приводит к его связыванию с vWF и, особенно, с растворимым фибриногеном, который выполняет роль мостика между тромбоцитами [Litvinov, 2004; Bledzka, 2013]. Новые данные указывают на важную роль в агрегации тромбоцитов растворимых олигомерных предшественников фибрина [Litvinov, 2016b]. Таким образом, агрегация опосредуется молекулами активного интегрина aIIbß3 и фибрин(огена), которые склеивают тромбоциты между собой [Покровский, 2007].

Результатом агрегации тромбоцитов является образование гемостатической тромбоцитарной пробки, которая сама по себе может остановить кровотечение при небольшом размере дефекта сосудистой стенки.

Плазменный гемостаз (свертывание крови, гемокоагуляция) необходим для образования сгустка, закупоривающего сосудистое повреждение и предотвращающего кровопотерю [Атауллаханов, 2015]. В условиях патологии свертывание крови может происходить внутри физически целых сосудов и является важным механизмом тромбоза.

Плазменный компонент гемостаза представляет собой каскад ферментативных реакций, приводящих к формированию желеобразного фибринового сгустка, то есть свертыванию крови [Smith, 2015]. Каскад гемокоагуляции складывается из серии реакций, включающих активацию зимогенов (неактивных предшественников ферментов) посредством ограниченного протеолиза (Рисунок 1). Большинство образуюшихся ферментов представляют собой сериновые протеазы, однако сами по себе они обладают низкой ферментативной активностью. Связывание такой протеазы со специфическим белковым кофактором на мембранной поверхности усиливает активность протеазы на несколько порядков. Белковые кофакторы коагуляционного каскада также циркулируют в плазме в виде инертных прокофакторов, которые преобразуются в активные кофакторы посредством ограниченного протеолиза. Большинство белков системы свертывания крови (как зимогенов, так и прокофакторов) принято обозначать римскими цифрами с добавлением строчной буквы «a» к цифре после того, как белок преобразован в активную форму (например, фактор VII^VIIa). Запуск гемокоагуляционного каскада может осуществляться по внутреннему и/или внешнему путям.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Хисматуллин Рафаэль Рафикович, 2023 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Атауллаханов Ф.И. и др. Применение теста тромбодинамики для оценки состояния системы гемостаза // Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (Москва), 2015. 72 с.

2. Бойцов С.А., Шальнова С.А., Деев А.Д. Эпидемиологическая ситуация как фактор, определяющий стратегию действий по снижению смертности в Российской Федерации // Терапевтический архив. 2020. T. 92. C. 4-9.

3. Деев Р.В. и др. Опыт клинико-морфологического анализа летальных случаев коронавирусной инфекции «первой волны» (весна-осень 2020 г.) // Профилактическая и клиническая медицина. 2021. Т. 81, №4. С. 90-99.

4. Зубаиров Д.М. Молекулярные основы свертывания крови и тромбообразования // Казань: Фэн, 2000. 364 с.

5. Литвинов Р.И. 9^2 уроков по биохимии свертывания крови: Учебно-практическое руководство // КФУ (Казань), 2014. 128 с.

6. Литвинов Р.И. Молекулярные механизмы и клиническое значение фибринолиза // Казанский медицинский журнал. 2013. T. 94, №5. C. 711718.

7. Литвинов Р.И., Пешкова А.Д. Контракция (ретракция) сгустков крови и тромбов: патогенетическое и клиническое значение // Альманах клинической медицины. 2018. Т. 46, № 7. С. 662-671.

8. Ложкин А.П. и др. Разработка и применения нового метода контракции (ретракции) сгустка крови // Гены & Клетки (Scopus). 2014. T. 9, № 3. C.99-104.

9. Мазуров А.В., Хаспекова С.Г., Васильев С.А. Диагностика тромбоцитопений // Терапевтический архив. 2018. Т. 90, №7. C. 4-13.

10. Пантелеев М.А., Атауллаханов Ф.И. Свертывание крови: биохимические основы // Клиническая онкогематология. 2008. Т. 1, №1. С. 50-62.

11. Пешкова А.Д. и др. Зависимость контракции (ретракции) сгустка от молекулярного и клеточного состава крови // Казанский медицинский журнал. 2016. T. 97, № 1. C.70-77.

12. Пешкова А.Д. и др. Изменения гемостаза по данным тестов тромбодинамики и контракции сгустков крови у женщин с привычным невынашиванием беременности в анамнезе // Акушерство и гинекология. 2019. Т. 12. С. 111-119.

13. Пешкова А.Д. и др. Изменения параметров тромбодинамики и контракции сгустков крови у пациентов с ревматоидным артритом // Научно-практическая ревматология. 2020. Т. 58, № 3. С. 294-303.

14. Покровский В.М., Коротько Г.Ф. Физиология человека. / Медицина, 2007. 656 с.

15. Пономарева А.А. и др. Структурная характеристика тромбоцитов и тромбоцитарных микровезикул // Цитология. 2016. Т. 58, № 2. С. 105-114.

16. Шляхто Е.В., Баранова Е.И. Основные направления снижения сердечнососудистой смертности: что можно изменить уже сегодня? // Российский кардиологический журнал. 2020. T. 25, № 7. C. 10-18.

17. Aarts P.A. et al. Blood platelets are concentrated near the wall and red blood cells, in the center in flowing blood // Arteriosclerosis. 1988. Vol. 8. P. 819-824.

18. Agbani E.O., Poole A.W. Procoagulant platelets: generation, function, and therapeutic targeting in thrombosis // Blood. 2017. Vol. 130, No. 20. P. 21712179.

19. Ahn S.H. et al. Histologic features of acute thrombi retrieved from stroke patients during mechanical reperfusion therapy // Int J Stroke. 2016. Vol. 11. P. 10361044.

20. Aibibula M., Naseem K.M., Sturmey R.G. Glucose metabolism and metabolic flexibility in blood platelets // J Thromb Haemost. 2018. Vol. 16, No. 11. P. 2300-2314.

21

22

23

24

25

26

27

28

29

30

31

32

33

Aleman M.M. et al. Factor XIII activity mediates red blood cell retention in venous thrombi // Journal of Clinical Investigation. 2014a. Vol. 124. P. 35903600.

Aleman M.M. et al. Fibrinogen and red blood cells in venous thrombosis // Thromb Res. 2014b. Vol. 133, No. 1. P. S38-S40.

Ali T. et al. Monocyte recruitment in venous thrombus resolution // J Vasc Surg. 2006. Vol. 43, No. 3. P. 601-608.

Ashorobi, D. Thrombosis / D. Ashorobi, R. Femandez // StatPearls [Internet] -2022.

Bark D.L. Jr, Ku D.N. Wall shear over high degree stenoses pertinent to atherothrombosis // J Biomech. 2010. Vol. 43, No. 15. P. 2970-2977. Barshtein G. et al. Role of red blood cell flow behavior in hemodynamics and hemostasis // Expert Rev Cardiovasc Ther. 2007. Vol. 5, No. 4. P. 743-752. Baskurt O.K., Meiselman H.J. Erythrocyte aggregation: basic aspects and clinical importance // Clin Hemorheol Microcirc. 2013. Vol. 53, No. 1-2. P. 23-37. Bäumler H. et al. Basic phenomena of red blood cell rouleaux formation // Biorheology. 1999. Vol. 36, No. 5-6. P. 439-442.

Bevilacqua M.P. et al. Identification of an inducible endothelial-leukocyte adhesion molecule // Proc Natl Acad Sci USA. 1987. Vol. 84. P. 9238-9242. Bing R. et al. Prevalence of echocardiography use in patients hospitalized with confirmed acute pulmonary embolism: a real world observational multicenter study// PLoS One. 2016. Vol. 11, No. 12. Article 0168554. Blair P., Flaumenhaft R. Platelet a-granules: Basic biology and clinical correlates // Blood Reviews. 2009. Vol. 23, No. 4. P. 177-189.

Bledzka K., Smyth S.S., Plow E.F. Integrin aIIbß3: from discovery to efficacious therapeutic target // Circ Res. 2013. Vol. 112, No. 8. P. 1189-1200. Boilard E. Extracellular vesicles and their content in bioactive lipid mediators: more than a sack of microRNA // J Lipid Res. 2018. Vol. 59. P. 2037-2046.

34. Brass L.F., Shattil S.J. Identification and function of the high affinity binding sites for Ca2+ on the surface of platelets // J Clin Invest. 1984. Vol. 73, No. 3. P. 626-632.

35. Brill A. et al. Neutrophil extracellular traps promote deep vein thrombosis in mice // Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2012. Vol. 10. P. 136-144.

36. Bucay I. et al. Determinants of fibrinolysis in single fibrin fibers // Biophys J. 2014. Vol. 106. P. 253.

37. Byrnes J.R. et al. Factor XIIIa-dependent retention of red blood cells in clots is mediated by fibrin a-chain crosslinking // Blood. 2015. Vol. 126, No. 16. P. 1940-1948.

38. Byrnes J.R., Wolberg A.S. Red blood cells in thrombosis // Blood. 2017. Vol. 130, No. 16. P. 1795-1799.

39. Calaminus S.D. et al. MyosinIIa contractility is required for maintenance of platelet structure during spreading on collagen and contributes to thrombus stability // J Thromb Haemost. 2007. Vol. 5. P. 2136-2145.

40. Cardinal-Fernández P. et al. Acute respiratory distress syndrome and diffuse alveolar damage. New insights on a complex relationship // Ann Am Thorac Soc. 2017. Vol. 14. P. 844-850.

41. Carmeliet P., Collen D. Gene targetting and gene transfer studies of the plasminogen/plasmin system: implications in thrombosis, hemostasis, neo-intima formation and atherosclerosis // FASEB J. 1995. Vol. 9. P. 934-938.

42. Carr Jr M.E. Development of platelet contractile force as a research and clinical measure of platelet function // Cell Biochem Biophys. 2003. Vol. 38, No. 1. P. 55-78.

43. Carr Jr M.E., Martin E.J., Carr S.L. Delayed, reduced or inhibited thrombin production reduces platelet contractile force and results in weaker clot formation // Blood Coagul Fibrinolysis. 2002. Vol. 13, No. 3. P. 193-197.

44. Chernysh I.N. et al. The distinctive structure and composition of arterial and venous thrombi and pulmonary emboli // Sci Rep. 2020. Vol. 10, No. 1. P. 5112.

45. Cines D.B. et al. Clot contraction: compression of erythrocytes into tightly packed polyhedra and redistribution of platelets and fibrin // Blood. 2014. Vol. 123, No. 10. P. 1596-1603.

46. Clark S.R. et al. Platelet TLR4 activates neutrophil extracellular traps to ensnare bacteria in septic blood // Nat Med. 2007. Vol. 13. P. 463-469.

47. Cocucci E., Meldolesi J. Ectosomes and exosomes: shedding the confusion between extracellular vesicles // Trends Cell Biol. 2015. Vol. 25. P. 364-372.

48. Cohen I. et al. The role of contractile filaments in platelet activation // Protides Biol. Fluids. 2002. Vol. 26. P. 555-566.

49. Cohen I., De Vries A. Platelet contractile regulation in an isometric system // Nature. 1973. Vol. 246, No. 5427. P. 36-37.

50. Collet J.P. et al. Dynamic changes of fibrin architecture during fibrin formation and intrinsic fibrinolysis of fibrin-rich clots // J Biol Chem. 2003. Vol. 278, No. 24. P. 21331-21335.

51. Comerota A.J., Kamath V. Thrombolysis for iliofemoral deep venous thrombosis // Expert Rev Cardiovasc Ther. 2013. Vol. 11, No. 12. P. 1631-1638.

52. Corral J. et al. The genetics of antithrombin // Thrombosis Research. 2018 . Vol. 169. P. 23-29.

53. Del Conde I. et al. Tissue-factor-bearing microvesicles arise from lipid rafts and fuse with activated platelets to initiate coagulation // Blood. 2005. Vol. 106, No. 5. P. 1604-1611.

54. Dole V.S. et al. Activated platelets induce Weibel-Palade-body secretion and leukocyte rolling in vivo: role of P-selectin // Blood. 2005. Vol. 106, No. 7. P. 2334-2339.

55. Du V.X. et al. New insights into the role of erythrocytes in thrombus formation // Semin Thromb Hemost. 2014. Vol. 40, No. 1. P. 72-80.

56. Ed Rainger G. et al. The role of platelets in the recruitment of leukocytes during vascular disease // Platelets. 2015. Vol. 26, No. 6. P. 507-520.

57. Edler C. et al. Dying with SARS-CoV-2 infection-an autopsy study of the first consecutive 80 cases in Hamburg, Germany // Int J Legal Med. 2020. Vol. 134. P. 1275-1284.

58. Emberson J. et al. Stroke Thrombolysis Trialists' Collaborative Group. Effect of treatment delay, age, and stroke severity on the effects of intravenous thrombolysis with alteplase for acute ischaemic stroke: a meta-analysis of individual patient data from randomised trials // Lancet. 2014. Vol. 384, No. 9958. P. 1929-1935.

59. Engelmann B., Massberg S. Thrombosis as an intravascular effector of innate immunity // Nat Rev Immunol. 2013. Vol. 13. P. 34-45.

60. Esmon C.T. The protein C anticoagulant pathway // Arterioscler Thromb.1992. Vol. 12. P. 135-145.

61. Evtugina N.G. et al. Impaired contraction of blood clots precedes and predicts postoperative venous thromboembolism // Sci Rep. 2020. Vol. 10, No. 1. P. 18261.

62. Fahraeus R. The influence of the rouleau formation of the erythrocytes on the rheology of the blood // Acta Med Scand. 1958. Vol. 161, No. 2. P. 151-165.

63. Falati S. et al. Accumulation of tissue factor into developing thrombi in vivo is dependent upon microparticle P-selectin glycoprotein ligand 1 and platelet P-selectin // J Exp Med. 2003. Vol. 197, No. 11. P. 1585-1598.

64. Farndale R.W. et al. Collagen-platelet interaction: recognition and signaling // Biochem Soc Symp. 2003. Vol. 70. P. 81-94.

65. Finsterbusch M. et al. Measuring and interpreting platelet-leukocyte aggregates // Platelets. 2018. Vol. 29, No. 7. P. 677-685.

66. Flick M.J. et al. Fibrin(ogen) exacerbates inflammatory joint disease through a mechanism linked to the integrin alphaMbeta2 binding motif // J Clin Invest. 2007. Vol. 117, No. 11. P. 3224-3235.

67. Flick M.J., Du X., Degen J.L. Fibrin(ogen)-alpha M beta 2 interactions regulate leukocyte function and innate immunity in vivo // Exp Biol Med (Maywood). 2004. Vol. 229, No. 11. P. 1105-1110.

68. Frangos J.A, et al. Flow effects on prostacyclin production by cultured human endothelial cells // Science. 1985. Vol. 227, No. 4693. P. 1477-1479.

69. Fraser S.R., Booth N.A., Mutch N.J. The antifibrinolytic function of factor XIII is exclusively expressed through a2-antiplasmin cross-linking // Blood. 2011. Vol. 117, No. 23. P. 6371-6374.

70. Fuchs T.A. et al. Extracellular DNA traps promote thrombosis // Proc Natl Acad Sci U S A. 2010. Vol. 107, No. 36. P. 15880-15885.

71. Furie B., Furie B.C. Mechanisms of thrombus formation // N Engl J Med. 2008. Vol. 359, No. 9. P. 938-949.

72. Furie B., Furie B.C., Flaumenhaft R. A journey with platelet P-selectin: the molecular basis of granule secretion, signalling and cell adhesion // Thromb Haemost. 2001. Vol. 86, No. 1. P. 214-221.

73. Gersh K.C., Nagaswami C., Weisel J.W. Fibrin network structure and clot mechanical properties are altered by incorporation of erythrocytes // Thromb Haemost. 2009. Vol. 102, No 6. P. 1169-1175.

74. Giesen P.L. et al. Blood-borne tissue factor: another view of thrombosis // Proc Natl Acad Sci U S A. 1999. Vol. 96, No. 5. P. 2311-2315.

75. Gimbrone Jr M.A. et al. Endothelial interleukin-8: A novel inhibitor of leukocyte-endothelial interactions // Science. 1989. Vol. 246. P. 1601-1603.

76. Goel M.S., Diamond S.L. Adhesion of normal erythrocytes at depressed venous shear rates to activated neutrophils, activated platelets, and fibrin polymerized from plasma. Blood. 2002. Vol. 100. P. 3797-3803.

77. Golebiewska E.M., Poole A.W. Platelet secretion: From haemostasis to wound healing and beyond // Blood Rev. 2015. Vol. 29, No. 3. P. 153-162.

78. Greenberg C.S. Lai T-S, Ariens RAS, Weisel JW, Grant PJ. Biology and disorders of fibrinogen and factor XIII // Blood Principles and Practice of Hematology, 2nd edition. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins, 2003. P. 1225-1248.

79. Greilich P.E. et al. Reductions in platelet contractile force correlate with duration of cardiopulmonary bypass and blood loss in patients undergoing cardiac surgery // Thromb Res. 2002. Vol. 105, No. 6. P. 523-529.

80. Grobler C. et al. Covid-19: the rollercoaster of fibrin(ogen), d-dimer, von Willebrand factor, p-selectin and their interactions with endothelial cells, platelets and erythrocytes // Int J Mol Sci. 2020. Vol. 21. P. 5168.

81. Hathcock J.J. Flow effects on coagulation and thrombosis // Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2006. Vol. 26, No. 8. P. 1729-1737.

82. Hechler B., Gachet C. Purinergic receptor in thrombosis and inflammation // Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2015. Vol. 35, No. 11. P. 2307-2315.

83. Heemskerk J.W., Bevers E.M., Lindhout T. Platelet activation and blood coagulation // Thromb Haemost. 2002. Vol. 88, No. 2. P. 186-193.

84. Heemskerk J.W., Mattheij N.J., Cosemans J.M. Platelet-based coagulation: different populations, different functions // J Thromb Haemost. 2013. Vol. 11, No. 1. P. 2-16.

85. Heijnen H., van der Sluijs P. Platelet secretory behaviour: as diverse as the granules or not? // J Thromb Haemost. 2015. Vol. 13, No. 12. P. 2141-2151.

86. Heijnen H.F. et al. Multivesicular bodies are an intermediate stage in the formation of platelet alpha-granules // Blood. 1998. Vol. 91. P. 2313-2325.

87. Heijnen H.F.G. Exocytosis of multivesicular bodies and a-granules microvesicles by surface shedding and exosomes derived from activated platelets release two types of membrane vesicles // Blood. 1999. Vol. 94. P. 3791-3799.

88. Henke P.K. et al. Interleukin-8 administration enhances venous thrombosis resolution in a rat model // J Surg Res. 2001. Vol. 99, No. 1. P. 84-91.

89. Henke P.K. et al. Neutrophils modulate post-thrombotic vein wall remodeling but not thrombus neovascularization // Thromb Haemost. 2006. Vol. 95, No. 2. P. 272-281.

90. Henschen A. et al. Chapter 7 fibrinogen, fibrin and factor XIII // New comprehensive biochemistry. 1986. Vol. 13. P. 171-241.

91. Humphries J. et al. Monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1) accelerates the organization and resolution of venous thrombi // J Vasc Surg. 1999. Vol. 30, No. 5. P. 894-899.

92. Inciardi R.M. et al. Cardiac involvement in a patient with coronavirus disease 2019 (COVID-19) // JAMA Cardiol. 2020. Vol. 5. P. 819-824.

93. Italiano J.E. Jr. et al. Blood platelets are assembled principally at the ends of proplatelet processes produced by differentiated megakaryocytes // J Cell Biol. 1999. Vol. 147. P. 1299-1312.

94. Janiuk K., Jablonska E., Garley M. Significance of NETs formation in COVID-19 // Cells. 2021. Vol. 10. P. 151.

95. Jayarangaiah A. et al. COVID-19-associated coagulopathy: an exacerbated immunothrombosis response // Clin Appl Thromb Hemost. 2020. Vol. 26. Article 1076029620943293.

96. Jurk K. et al. Platelets in patients with acute ischemic stroke are exhausted and refractory to thrombin, due to cleavage of the seven-transmembrane thrombin receptor (PAR-1). Thromb Haemost. 2004. Vol. 91, No. 2. P. 334-344.

97. Kasahara K. et al. Clot retraction is mediated by factor XIII-dependent fibrin-aIIbb3-myosin axis in platelet sphingomyelin-rich membrane rafts // Blood. 2013. Vol. 112, No 10. P. 3340-3348.

98. Kattula S. et al. Factor XIII in plasma, but not in platelets, mediates red blood cell retention in clots and venous thrombus size in mice // Blood Advances. 2018. Vol. 2. P. 25-35.

99. Khairy K., Foo J., Howard J. Shapes of Red Blood Cells: Comparison of 3D Confocal Images with the Bilayer-Couple Model // Cell Mol Bioeng. 2010. Vol. 1, No 2-3. P. 173-181.

100. Kim O.V. et al. Fatal dysfunction and disintegration of thrombin-stimulated platelets // Haematologica. 2019. Vol. 104, No 9. P. 1866-1878.

101. Kim O.V. et al. Quantitative structural mechanobiology of platelet-driven blood clot contraction // Nat Commun. 2017. Vol. 8, No. 1. P. 1274.

102. Kim O.V. et al. Structural basis for the nonlinear mechanics of fibrin networks under compression // Biomaterials. 2014. Vol. 35, No. 25. P. 6739-6749.

103. Klok F.A. et al. Incidence of thrombotic complications in critically ill ICU patients with COVID-19 // Thromb Res. 2020. Vol. 191. P. 145-147.

104. Kovacs A. et al. Ambivalent roles of carboxypeptidase B in the lytic susceptibility of fibrin. Thromb Res. 2014. Vol. 133, No. 1. P. 80-87.

105. Kovalenko T.A. et al. Asymmetrical Forces Dictate the Distribution and Morphology of Platelets in Blood Clots // Cells. 2021. Vol. 10, No. 3. P. 584.

106. Lam F.W., Vijayan K.V., Rumbaut R.E. Platelets and Their Interactions with Other Immune Cells // Compr Physiol. 2015. Vol. 5, No. 3. P. 1265-1280.

107. Lam W.A. et al. Mechanics and contraction dynamics of single platelets and implications for clot stiffening // Nat Mater. 2011. Vol. 10, No. 1. P. 61-66.

108. Le Minh G. et al. Impaired contraction of blood clots as a novel prothrombotic mechanism in systemic lupus erythematosus // Clin Sci (Lond). 2018. Vol. 132, No. 2. P. 243-254.

109. Leal J.K.F. et al. Red Blood Cell Homeostasis: Mechanisms and Effects of Microvesicle Generation in Health and Disease // Front Physiol. 2018. Vol. 9. P. 703.

110. Lee D. Differential dynamics of platelet contact and spreading // Biophys J. 2012. Vol. 102. P. 472-482.

111. Lee J.S. et al. Deep vein thrombosis in patients with pulmonary embolism: prevalence, clinical significance and outcome// Vasc. Specialist. Int. 2016. Vol. 32, No. 4. P. 166-174.

112. Leenaerts D. et al. Plasma carboxypeptidase U (CPU, CPB2, TAFIa) generation during in vitro clot lysis and its interplay between coagulation and fibrinolysis. Thromb Haemost. 2017. Vol. 117, No. 8. P. 1498-1508.

113. Leonard-Lorant I. et al. Acute pulmonary embolism in patients with COVID-19 at CT angiography and relationship to d-dimer levels // Radiology. 2020. Vol. 296. P. 189-191.

114

115

116

117

118

119

120

121

122

123

124

125

126

127

Leor J. et al. Ex vivo activated human macrophages improve healing, remodeling, and function of the infarcted heart // Circulation. 2006. Vol. 114, No. 1. P. 94100.

Li J. et al. Piezo1 integration of vascular architecture with physiological force // Nature. 2014. Vol. 515, No. 7526. P. 279-282.

Li Y.S., Haga J.H., Chien S. Molecular basis of the effects of shear stress on vascular endothelial cells // J Biomech. 2005. Vol. 38. P. 1949-1971. Liebeskind D.S. et al. CT and MRI early vessel signs reflect clot composition in acute stroke // Stroke. 2011. Vol. 42. P. 1237-1243.

Lin M.C. et al. Shear stress induction of the tissue factor gene. J Clin Invest. 1997. Vol. 99, No. 4. P. 737-744.

Lindemann S. et al. Activated platelets mediate inflammatory signaling by regulated interleukin 1beta synthesis // J Cell Biol. 2001. Vol. 154. P. 485-490. Lipowsky H.H. Microvascular rheology and hemodynamics // Microcirculation. 2005. Vol. 12, No. 1. P. 5-15.

Lippi G., Favaloro E.J. Venous and Arterial Thromboses: Two Sides of the Same Coin? // Semin Thromb Hemost. 2018. Vol. 44, No. 3. P. 239-248. Litvinov R.I. et al. Effects of Hyperhomocysteinemia on the Platelet-Driven Contraction of Blood Clots // Metabolites. 2021. Vol. 11, No. 6. P. 354. Litvinov R.I. et al. The Platelet Integrin aIIbß3 Differentially Interacts with Fibrin Versus Fibrinogen // J Biol Chem. 2016a. Vol. 291, No. 15. P. 7858-7867. Litvinov R.I., et al. Functional and structural correlations of individual alphaIIbbeta3 molecules. Blood. 2004. Vol. 104, No. 13. P. 3979-3985. Litvinov R.I., Weisel J.W. What is the biological and clinical relevance of fibrin? // Semin Thromb Hemost. 2016b. Vol. 42, No. 4. P. 333-343. Llitjos J.F. et al. High incidence of venous thromboembolic events in anticoagulated severe COVID-19 patients // J Thromb Haemost. 2020. Vol. 18. P. 1743-1746.

Longstaff C., Kolev K. Basic mechanisms and regulation of fibrinolysis // J Thromb Haemost. 2015. Vol. 13, No. 1. P. S98-S105.

128. Mackman N. Regulation of the tissue factor gene // FASEB J. 1995. Vol. 9. P. 883-889.

129. Mackman N. Triggers, targets and treatments for thrombosis // Nature. 2008. Vol. 451, No. 7181. P. 914-918

130. Mahaut-Smith M.P., Jones S., Evans R.J. The P2X1 receptor and platelet function // Purinergic Signal. 2011. Vol. 7, No. 3. P. 341-356.

131. Manly D.A., Boles J., Mackman N. Role of tissue factor in venous thrombosis // Annu Rev Physiol. 2011. Vol. 73. P. 515-525.

132. Marder V.J. et al. Analysis of thrombi retrieved from cerebral arteries of patients with acute ischemic stroke // Stroke. 2006. Vol. 37. P. 2086-2093.

133. Martin D.M.A., Boys C.W.G., Ruf W. Tissue factor: molecular recognition and co-factor function // FASEB J. 1995. Vol. 9. P. 852-859.

134. Massberg S. et al. Reciprocal coupling of coagulation and innate immunity via neutrophil serine proteases // Nat Med. 2010. Vol. 16. P. 887-896.

135. Matskeplishvili S., Kontsevaya A. Cardiovascular Health, Disease, and Care in Russia // Circulation. 2021. Vol. 144, No. 8. P. 586-588.

136. Matthay Z. A., Kornblith L. Z. Platelet Imaging [Electronic resource] Platelet Imaging. 2020. URL: https://www.intechopen.com/chapters/71470 (accessed 22.06.2022).

137. Mattila P.K., Lappalainen P. Filopodia: molecular architecture and cellular functions // Nat Rev Mol Cell Biol. 2008. Vol. 9. P. 446-454.

138. McDonald B. et al. Intravascular danger signals guide neutrophils to sites of sterile inflammation // Science. 2010. Vol. 330, No. 6002. P. 362-366.

139. McEver R.P. et al. GMP-140, a platelet alpha-granule membrane protein, is also synthesized by vascular endothelial cells and is localized in Weibel-Palade bodies // J Clin Invest. 1989. Vol. 84, No. 1. P. 92-106.

140. McGuinness C.L. et al. Recruitment of labelled monocytes by experimental venous thrombi // Thromb Haemost. 2001. Vol. 85, No. 6. P. 1018-1024.

141. McIntyre T.M., Zimmerman G.A., Prescott S.M. Leukotrienes C4 and D4 stimulate human endothelial cells to synthesize platelet-activating factor and bind neutrophils // Proc Natl Acad Sci USA. 1986. Vol. 83. P. 2204-2208.

142. Melki I. et al. Platelet microvesicles in health and disease // Platelets. 2017. Vol. 28. P. 214-221.

143. Moir E. et al. Polymorphonuclear leucocytes have two opposing roles in fibrinolysis // Thromb Haemost. 2002. Vol. 87, No. 6. P. 1006-1010.

144. Montague S.J., Andrews R.K., Gardiner E.E. Mechanisms of receptor shedding in platelets // Blood. 2018. Vol.132, No. 24. P. 2535-2545.

145. Morel O. et al. Procoagulant microparticles: disrupting the vascular homeostasis equation? // Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2006. Vol. 26, No. 12. P. 25942604.

146. Morrissey JH, Broze GJ. Jr. Tissue factor and the initiation and regulation (TFPI) of coagulation. Hemostasis and Thrombosis // Basic Principles and Clinical Practice. 6th. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins, 2013.

147. Mosesson M.W. Cross-linked gamma-chains in fibrin fibrils bridge 'transversely' between strands: yes // J Thromb Haemost. 2004. Vol. 2, No. 3. P. 388-393.

148. Müller F., Renne T. Platelet polyphosphates: the nexus of primary and secondary hemostasis // Scand J Clin Lab Invest. 2011. Vol. 71, No. 2. P. 82-86.

149. Muthard R.W., Diamond S.L. Blood clots are rapidly assembled hemodynamic sensors: flow arrest triggers intraluminal thrombus contraction // Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2012. Vol. 32, No. 12. P. 2938-2945.

150. Nakata T., Hirokawa N. Cytoskeletal reorganization of human platelets after stimulation revealed by the quick-freeze deep-etch technique / T. Nakata, N. Hirokawa // J Cell Biol. 1987. Vol. 105, No. 4. P. 1771-1780.

151. Nicolai L., Gaertner F., Massberg S. Platelets in host defense: experimental and clinical insights // Trends Immunol. 2019. Vol. 40. P. 922-938.

152. Nieswandt B., Watson S.P. Platelet-collagen interaction: is GPVI the central receptor? // Blood. 2003. Vol. 102, No. 2. P. 449-461.

153. Nieuwland R. et al. Platelet-Derived Microparticles. In: Michelson A.D., ed // Platelets, 3rd edn. Academic Press., 2013. 453-467 p.

154. Norris C.S., Greenfield L.J., Herrmann J.B. Free-floating iliofemoral thrombus. A risk of pulmonary embolism // Arch Surg. 1985. Vol. 120, No. 7. P. 806-808.

155. Nosaka M. et al. Immunohistochemical detection of MMP-2 and MMP-9 in a stasis-induced deep vein thrombosis model and its application to thrombus age estimation // Int J Legal Med. 2010. Vol. 124, No. 5. P. 439-444.

156. O'Donnell J.S., O'Sullivan J.M., Preston R.J.S. Advances in understanding the molecular mechanisms that maintain normal haemostasis // British Journal of Haematology. 2019. Vol. 186. P. 24-36.

157. Panteleev M.A. et al. Two subpopulations of thrombin-activated platelets differ in their binding of the components of the intrinsic factor X-activating complex // J Thromb Haemost. 2005. Vol. 3, No. 11. P. 2545-2553.

158. Páramo J.A. Pulmonary embolism, pulmonary microvascular thrombosis, or both in COVID-19? // Clin Appl Thromb Hemost. 2020. Vol. 26. Article 1076029620933953.

159. Pawlinski R. et al. Role of tissue factor in haemostasis, thrombosis, angiogenesis and inflammation: lessons from low tissue factor mice // Thromb Haemost. 2004. Vol. 92, No. 3. P. 444-450.

160. Peshkova A.D. et al. Activated Monocytes Enhance Platelet-Driven Contraction of Blood Clots via Tissue Factor Expression // Sci Rep. 2017. Vol. 7, No 1. P. 5149.

161. Peshkova A.D. et al. Reduced Contraction of Blood Clots in Venous Thromboembolism Is a Potential Thrombogenic and Embologenic Mechanism // TH Open. 2018. Vol. 2, No 1. P. 104-115.

162. Peters C.G., Michelson A.D., Flaumenhaft R. Granule exocytosis is required for platelet spreading: Differential sorting of alpha-granules expressing VAMP-7 // Blood. 2012. Vol. 120, No. 1. P. 199-206.

163. Petrich B.G. et al. The antithrombotic potential of selective blockade of talin-dependent integrin alpha lib beta 3 (platelet GPIIb-IIIa) activation // J Clin Invest. 2007. Vol. 117, No. 8. P. 2250-2259.

164. Pillay, J. et al. Functional heterogeneity and differential priming of circulating neutrophils in human experimental endotoxemia // J Leukoc Biol 2010. Vol. 88, No. 1. P. 211-220.

165. Pober J.S. et al. Overlapping patterns of activation of human endothelial cells by interleukin 1, tumor necrosis factor, and immune interferon //J Immunol. 1986. Vol. 137, No. 6. P. 1893-1896.

166. Pober J.S., Cotran R.S. Overview: the role of endothelial cells in inflammation // Transplantation. 1990. Vol. 50. P. 537-544.

167. Ponomareva A.A. et al. Intracellular origin and ultrastructure of platelet-derived microparticles. J Thromb Haemost. 2017. Vol. 15, No. 8. P. 1655-1667.

168. Poredos P. Interrelationship between venous and arterial thrombosis // Int Angiol. 2017. Vol. 36, No. 4. P. 295-298.

169. Prandoni P. et al. An association between atherosclerosis and venous thrombosis // N Engl J Med. 2003. Vol. 348, No. 15. P. 1435-1441.

170. Preston R.J.S., O'Sullivan J.M., O'Donnell J.S. Advances in understanding the molecular mechanisms of venous thrombosis // Br J Haematol. 2019. Vol. 186, No. 1. P. 13-23.

171. Puelles V.G. et al. Multiorgan and renal tropism of SARS-CoV-2 // N Engl J Med. 2020. Vol. 383. P. 590-592.

172. Rabai G. et al. Contribution of neutrophil elastase to the lysis of obliterative thrombi in the context of their platelet and fibrin content // Thromb Res. 2010. Vol. 126, No. 2. P. 94-101.

173. Reimers R.C., Sutera S.P., Joist J.H. Potentiation by red blood cells of shear-induced platelet aggregation: relative importance of chemical and physical mechanisms // Blood. 1984. Vol. 64. P. 1200-1206.

174. Rijken D.C. et al. Compaction of fibrin clots reveals the antifibrinolytic effect of factor XIII // J Thromb Haemost. 2016. Vol. 14, No. 7. P. 1453-1461.

175. Rosendaal F.R., Reitsma P.H. Genetics of venous thrombosis // Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2009. Vol. 7 (Suppl. 1). P. 301-304.

176. Rubanyi G.M., Romero J.C., Vanhoutte P.M. Flow-induced release of endothelium-derived relaxing factor // Am J Physiol. 1986. Vol. 250, No. 6 (Pt. 2). P. 1145-1149.

177. Ruggeri Z.M. The role of von Willebrand factor in thrombus formation // Thromb Res. 2007. Vol. 120, No. 1. P. 5-9.

178. Saha P. et al. Leukocytes and the natural history of deep vein thrombosis: current concepts and future directions // Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2011. Vol. 31, No. 3. P. 506-512.

179. Sakharov D.V., Rijken D.C. The effect of flow on lysis of plasma clots in a plasma environment // Thromb Haemost. 2000. Vol. 83, No. 3. P. 469-474.

180. Sawa H., Fujii S., Sobel B.E. Augmented arterial wall expression of type-1 plasminogen activator inhibitor induced by thrombosis // Arterioscler Thromb. 1992. Vol. 12. P. 1507-1515.

181. Semple J.W., Italiano J.E. Jr, Freedman J. Platelets and the immune continuum // Nat Rev Immunol. 2011. Vol. 11, No. 4. P. 264-274.

182. Shi J. et al. Lactadherin detects early phosphatidylserine exposure on immortalized leukemia cells undergoing programmed cell death // Cytometry A. 2006. Vol. 69, No. 12. P. 1193-1201.

183. Shul'gina L.E. et al. Ultrasound criteria for embologenicity of venous thrombosis // Angiol Sosud Khir. 2005. Vol. 11, No. 1. P. 43-51.

184. Silvain J. et al. Composition of coronary thrombus in acute myocardial infarction // J Am Coll Cardiol. 2011. Vol. 57, No. 12. P. 1359-1367.

185. Silverberg M. et al. Autoactivation of human Hageman factor. Demonstration utilizing a synthetic substrate // J Biol Chem. 1980. Vol. 255, No. 15. P. 72817286.

186. Singh P., Kaur R., Kaur A. Clot composition and treatment approach to acute ischemic stroke: the road so far // Ann Indian Acad Neurol. 2013. Vol. 16. P. 494-497.

187. Smith S.A. How it all starts: Initiation of the clotting cascade // Crit Rev Biochem Mol Biol. 2015. Vol. 50, No. 4. P. 326-336.

188. Soo K.S. et al. Tissue plasminogen activator production by monocytes in venous thrombolysis // J Pathol. 1996. Vol. 178, No. 2. P. 190-194.

189. Stalker T.J. et al. Hierarchical organization in the hemostatic response and its relationship to the platelet-signaling network // Blood. 2013. Vol. 121, No. 10. P. 1875-1885.

190. Stark K., Massberg S. Interplay between inflammation and thrombosis in cardiovascular pathology // Nat Rev Cardiol. 2021. Vol. 18, No. 9. P. 666-682.

191. Sveshnikova A.N. et al. Systems biology insights into the meaning of the platelet's dual-receptor thrombin signaling // J Thromb Haemost. 2016. Vol. 14, No. 10. P. 2045-2057.

192. Swystun L.L., Liaw P.C. The role of leukocytes in thrombosis // Blood. 2016. Vol. 128, No. 6. P. 753-762.

193. Tablin F., Castro M., Leven R.M. Blood platelet formation in vitro. The role of the cytoskeleton in megakaryocyte fragmentation // J Cell Sci. 1990. Vol. 97, Pt. 1. P. 59-70.

194. Tankersley D.L., Finlayson J.S. Kinetics of activation and autoactivation of human factor XII // Biochemistry. 1984. Vol. 23, No. 2. P. 273-279.

195. Thachil J. et al. SARS-2 coronavirus-associated hemostatic lung abnormality in COVID-19: is it pulmonary thrombosis or pulmonary embolism? // Semin Thromb Hemost. 2020. Vol. 46. P. 777-780.

196. Thompson D.W. The forms of tissues, or cell-aggregates // On Growth and Form. Cambridge: Cambridge University Press. 1945. Vol. 102, No 6. P. 465565.

197. Thon J.N., Italiano J.E. Platelets: production, morphology and ultrastructure // Handb Exp Pharmacol. 2012. Vol. 210. P. 3-22.

198. Ting H.J., Khasawneh F.T. Platelet function and Isoprostane biology. Should isoprostanes be the newest member of the orphan-ligand family? // J Biomed Sci. 2010. Vol. 17, No. 1. P. 24.

199. Tomaiuolo M. et al. Use of electron microscopy to study platelets and thrombi // Platelets. 2020. Vol. 31, No. 5. P. 580-588.

200. Tomasiak-Lozowska M.M. et al. Reduced clot retraction rate and altered platelet energy production in patients with asthma // J Asthma. 2016. Vol. 53, No. 6. P. 589-598.

201. Turitto V.T., Weiss H.J., Baumgartner H.R. The effect of shear rate on platelet interaction with subendothelium exposed to citrated human blood // Microvasc Res. 1980. Vol. 19. P. 352-365.

202. Tutwiler V. et al. Blood clot contraction differentially modulates internal and external fibrinolysis // J Thromb Haemost. 2019. Vol. 17, No. 2. P. 361-370.

203. Tutwiler V. et al. Contraction of Blood Clots Is Impaired in Acute Ischemic Stroke // Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2017a. Vol. 37, No. 2. P. 271-279.

204. Tutwiler V. et al. Interplay of Platelet Contractility and Elasticity of Fibrin/Erythrocytes in Blood Clot Retraction // Biophys J. 2017b. Vol. 112, No 4. P. 714-723.

205. Tutwiler V. et al. Kinetics and mechanics of clot contraction are governed by the molecular and cellular composition of the blood // Blood. 2016. Vol. 127, No. 1. P. 149-159.

206. Tutwiler V. et al. Rupture of blood clots: mechanics and pathophysiology // Sci Adv. 2020. Vol. 6, No. 35. eabc0496.

207. Tyagi T. et al. A guide to molecular and functional investigations of platelets to bridge basic and clinical sciences // Nat Cardiovasc Res. 2022. Vol. 1. P. 223237.

208. Van Furth R., Cohn Z.A. The origin and kinetics of mononuclear phagocytes // J Exp Med. 1968. Vol. 128, No. 3. P. 415-435.

209. Varma M.R. et al. Neutropenia impairs venous thrombosis resolution in the rat // J Vasc Surg. 2003. Vol. 38, No. 5. P. 1090-1098.

210. Veklich Y. et al. Structural studies of fibrinolysis by electron microscopy // Blood. 1998. Vol. 92, No. 12. P. 4721-4729.

211. Veras F.P. et al. SARS-CoV-2-triggered neutrophil extracellular traps mediate COVID-19 pathology // J Exp Med. 2020. Vol. 217. Article 20201129.

212. Versteeg H.H. et al. New Fundamentals in Hemostasis // Physiol Rev. 2013. Vol. 93, No. 1. P. 327-358.

213. Virchow R. Gesammalte abhandlungen zur wissenschaftlichen medtzin // Frankfurt: Medinger Sohn & Co. 1856. P. 219-732.

214. Von Brühl M.L. et al. Monocytes, neutrophils, and platelets cooperate to initiate and propagate venous thrombosis in mice in vivo // J Exp Med. 2012. Vol. 209, No. 4. P. 819-835.

215. Wakefield T.W. et al. Venous thrombosis-associated inflammation and attenuation with neutralizing antibodies to cytokines and adhesion molecules // Arterioscler Thromb Vasc Biol. 1995. Vol. 15, No. 2. P. 258-268.

216. Wakefield T.W., Myers D.D., Henke P.K. Mechanisms of venous thrombosis and resolution // Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2008. Vol. 28, No. 3. P. 387-391.

217. Weisel J.W. Litvinov, R.I. Mechanisms of Fibrinolysis and Basic Principles of Management // Hemostasis and Thrombosis, 2014. P 169-185.

218. Weisel J.W. The mechanical properties of fibrin for basic scientists and clinicians // Biophys Chem. 2004. Vol. 112, No. 2-3. P. 267-276.

219. Weisel J.W., Litvinov R.I. Fibrin Formation, Structure and Properties // Subcell Biochem. 2017. Vol. 82. P. 405-456.

220. Weisel J.W., Litvinov R.I. Mechanism of fibrin polymerization and clinical implications // Blood. 2013. Vol. 121, No. 10. P. 1712-1719.

221. Weisel J.W., Litvinov R.I. Red blood cells: the forgotten player in hemostasis and thrombosis // J Thromb Haemost. 2019. Vol. 17, No. 2. P. 271-282.

222. Weisel J.W., Litvinov R.I., Visualizing thrombosis to improve thrombus resolution // Res Pract Thromb Haemost. 2021. Vol. 5, No 1. P. 38-50.

223. Wellicome S.M. et al. A monoclonal antibody that detects a novel antigen on endothelial cells that is induced by tumor necrosis factor, IL-1, or lipopolysaccharide // J Immunol. 1990. Vol. 144, No. 7. P. 2558-2565.

224. Welsh J.D. et al. Hemodynamic regulation of perivalvular endothelial gene expression prevents deep venous thrombosis // J Clin Invest. 2019. Vol. 129, No. 12. P. 5489-5500.

225. Whelihan M.F. et al. Prothrombin activation in blood coagulation: the erythrocyte contribution to thrombin generation // Blood. 2012. Vol. 120, No. 18. P. 3837-3845.

226. Whelihan M.F. et al. Thrombin generation and cell-dependent hypercoagulability in sickle cell disease // Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2016. Vol. 14. P. 1941-1952.

227. Whelihan M.F., Mann K.G. The role of the red cell membrane in thrombin generation // Thromb Res. 2013. Vol. 131, No. 5. P. 377-382.

228. White J.G. Effects of colchicine and Vinca alkaloids on human platelets. I. Influence on platelet microtubules and contractile function. Am J Pathol. 1968. Vol. 53. P. 281-291.

229. White J.G. Interaction of membrane systems in blood platelets // Am J Pathol. 1972. Vol. 66. P. 295-312.

230. White J.R., Kravit W., Vernier R.L. The platelet-fibrin relationships in human blood clots: an ultrastructural study utilizing ferritin-conjugated anti-human fibrinogen antibody // Blood. 1965. Vol. 25. P. 241-257.

231. Wichmann D. et al. Autopsy findings and venous thromboembolism in patients with COVID-19: a prospective cohort study // Ann Intern Med. 2020. Vol. 173. P. 268-277.

232. Wolberg A.S. et al. Procoagulant activity in hemostasis and thrombosis: Virchow's triad revisited // Anesth Analg. 2012. Vol. 114, No. 2. P. 275-285.

233. Wolberg A.S. Primed to Understand Fibrinogen in Cardiovascular Disease // Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2016. Vol. 36, No. 1. P. 4-6.

234. Yokoyama S., et al. Platelet P-selectin plays an important role in arterial thrombogenesis by forming large stable platelet-leukocyte aggregates // J Am Coll Cardiol. 2005. Vol. 45, No. 8. P. 1280-1286.

235. Youssefian T., Cramer E.M. Megakaryocyte dense granule components are sorted in multivesicular bodies // Blood. 2000. Vol. 95. P. 4004-4007.

236. Yu F.T. et al. A local increase in red blood cell aggregation can trigger deep vein thrombosis: evidence based on quantitative cellular ultrasound imaging // Thromb Haemost. 2011. Vol. 9, No. 3. P. 481-488.

237. Z^bczyk M. et al. Polyhedrocytes in intracoronary thrombi from patients with ST-elevation myocardial infarction // Int J Cardiol. 2015. Vol. 179, P. 186-187.

238. Zalewski J. et al. Plasma fibrin clot phenotype independently affects intracoronary thrombus ultrastructure in patients with acute myocardial infarction // Thromb Haemost. 2015. Vol. 113, No 6. P. 1258-1269.

239. Zubairova L.D. et al. Circulating Microparticles Alter Formation, Structure, and Properties of Fibrin Clots // Sci Rep. 2015. Vol. 5, P. 17611.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

COVID-19 - новая коронавирусная инфекция

SARS-CoV-2 - коронавирус (severe acute respiratory syndrome-related coronavirus 2) ТХА2 - тромбоксан А2 TF - тканевой фактор

u-PA - активатор плазминогена урокиназного типа (urokinase-type plasminogen activator)

t-PA - тканевой активатор плазминогена (tissue-type plasminogen activator) PAI-1 - ингибитор активатора плазминогена 1 (plasminogen activator inhibitor-1) PAI-2 - ингибитор активатора плазминогена 2 (plasminogen activator inhibitor-2) PGI2 - простациклин

PGG2 и PGH2 - эндоперекиси простагландинов

vWF - фактор Виллебранда

GPIb - гликопротеин Ib

GPVI - гликопротеин VI

АДФ - аденозиндифосфат

PAR - рецептор, активируемый протеазой (protease-activated receptor)

АТФ - аденозинтрофосфат

цАМФ - циклический аденозинмонофосфат

TP - тромбоцитарный рецептор

PF4 - тромбоцитарный фактор 4 (platelet factor 4)

PDGF - тромбоцитарный фактор роста

TFPI - ингибитор пути тканевого фактора (tissue-factor pathway inhibitor) a2-AP - а2-антиплазмин

TAFI - активируемый тромбином ингибитор фибринолиза (thrombin-activatable

fibrinolysis inhibitor)

Lp(a) - липопротеин(а)

ФНО-а - фактор некроза опухоли-а

ICAM-1 - молекула клеточной адгезии-1 (inter-cellular adhesion molecule 1)

АФС - антифосфолипидный синдром

ГИТ - гепарин-индуцированная тромбоцитопения

PSGL-1 - белковый лиганд P-селектина 1(P-selectin glycoprotein ligand 1)

FOXC2 - фактор транскрипции (Forkhead Box C2)

PROX1 - фактор транскрипции (Prospero homeobox protein 1)

ТЭЛА - тромбоэмболия легочной артерии

ОКС - открытая канальцевая система

ПТС - плотная тубулярная система

НВЛ (NETs) - нейтрофильные внеклеточные ловушки (neutrophil extracellular traps)

aMp2 (Mac-1) - интегриновый рецептор (Macrophage-1 antigen)

МСР-1 - хемотаксический белок моноцитов-1

ММР-2 - матриксная металлопротеиназа 2

ММР-9 - матриксная металлопротеиназа 9

PRP - плазма, богатая тромбоцитами

PPP - плазма, бедная тромбоцитами

PFP - бестромбоцитная плазма

БСА - бычий сывороточный альбумин

ТСБТ - трис-солевой буфер с Твин-20

ОШ - отношение шансов

ДИ - доверительный интервал

МКИ - межквартильный интервал

СЭМ - сканирующая электронная микроскопия

ТЭМ - трансмиссионная электронная микроскопия

mRS - модифицированная шкала Рэнкина (modified Rankin scale)

NIHSS - шкала инсульта национального института здоровья (National Institutes of

Health Stroke Scale)

CitH3 - цитруллинированные гистоны H3

н.д. - недостоверное отличие

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ПРИЛОЖЕНИЯ

Таблица 1. Основные демографические и клинические данные пациентов с тромбозом

глубоких вен (ТГВ) (п=13)

Демографические и клинические данные Пациенты, п (%)

Средний возраст, лет 62±6

Пол (женский) 7 (54%)

Наличие ТГВ или ТЭЛА в анамнезе 5 (38%)

Размер флотирующей части тромба > 7 см 3 (23%)

< 7 см 10 (77%)

Расположение тромба Проксимальное 8 (62%)

Дистальное 5 (38%)

Длительность симптомов > 21 дней (подострый) 3 (23%)

< 21 дней (острый) 10 (77%)

ТЭЛА Нет 6 (46%)

Да 7 (54%)

Приём антикоагулянтов и/или антитромбоцитарных препаратов Нет 11 (85%)

Да 2 (15%)

Гемостатические и гематологические параметры

Параметры (нормальные значения в скобках) Среднее ± стандартное отклонение

Фибриноген (1,8-4,0), г/л 3,8 ± 0,4

Число тромбоцитов (180-320), х109/л 285 ± 14

Эритроциты (3-5), х1012/л 4,1 ± 0,2

Гематокрит (36-48), % 37 ± 0,2

Таблица 2. Основные демографические и клинические данные пациентов с тромбоэмболией легочной артерии (ТЭЛА) (п=6)

Демографические и клинические данные Пациенты, п (%)

Средний возраст, лет 64±11

Пол (женский) 3 (50%)

Наличие ТГВ или ТЭЛА в анамнезе 5 (83%)

Коморбидные состояния Гипертензия 5 (83%)

Сахарный диабет 2 (33%)

Факторы риска ТЭЛА Онкологические заболевания 1 (17%)

Послеоперационное 3 (50%)

состояние

Иммобилизация 4 (67%)

Ожирение 2 (33%)

Посмертный интервал < 24 часов 5 (83%)

> 24 часов 1 (17%)

Причина смерти ТЭЛА 3 (50%)

Осложнения, вызванные 3 (50%)

ТЭЛА

Локализация эмбола Ствол легочной артерии 3 (50%)

Главные легочные артерии 2 (33%)

или долевая легочная

артерия

Сегментарная и субсегментарная легочная 1 (17%)

артерия

Приём антикоагулянтов и/или Да 6 (100%)

антитромбоцитарных

препаратов

Таблица 3. Основные демографические и клинические данные пациентов с острым

ишемическим инсультом (п=41)

Демографические и клинические данные Пациенты п (%)

Средний возраст, лет 72,0±1,5

Пол (женский) 17 (41%)

Этиология Атеротромботический инсульт 18 (44%)

Кардиоэмболический инсульт 23 (56%)

Тяжесть инсульта при госпитализации NIHSS < 10 2 (5%)

МШБ 11-20 30 (73%)

МШБ 21-30 9 (22%)

Тяжесть инсульта через 24 часа после поступления в стационар N1^ < 10 16 (42%)

МШБ 11-20 17 (45%)

МШБ 21-30 5 (13%)

Тяжесть инсульта через 7 дней после поступления в стационар N1^ < 10 19 (49%)

МШБ 11-20 12 (31%)

МШБ 21-30 8 (20%)

Тяжесть инсульта через 3 месяца после поступления в стационар mRS < 2 12 (30%)

шЯБ 3 8 (20%)

шЯБ 4-5 10 (25%)

шЯБ 6 10 (25%)

Тромболизис Да (Актилизе) 30 (73%)

Нет 11 (27%)

Длительность тромбоза > 240 мин 13 (34%)

< 240 мин 25 (66%)

Данные по лечению Единицы Медиана (МКИ)*

Время от появления клинических симптомов до начала внутривенного тромболизиса мин 100,0 (80,0; 123,0)

Время от появления клинических симптомов до начала цифровой субтракционной ангиографии мин 150,0 (120,0; 202,5)

Время от момента госпитализации до начала внутривенного тромболизиса мин 25,0 (20,0; 30,0)

Время от момента госпитализации до начала цифровой субтракционной ангиографии мин 60,0 (35,0; 80,0)

Длительность лечебной процедуры мин 45,0 (30,0; 65,0)

Срок реканализации мин 195,0 (170,0; 257,5)

*Медиана с межквартильным интервалом (интерквартильным размахом)

Таблица 4. Основные демографические и клинические данные пациентов, умерших от

осложнений СОУГО-19 (п=45)

Демографические и клинические данные Пациенты (п=45)

Средний возраст, лет 72±12

Пол (женский) 27 (60%)

Длительность заболевания, дней 6±3

Осложнения и сопутствующие заболевания

Артериальная гипертензия 43 (96%)

Почечная недостаточность 38 (84%)

Хроническая ишемическая болезнь сердца 25 (56%)

Ожирение 1-11 степени 19 (42%)

Печеночная недостаточность 13 (29%)

Бактериальная пневмония 12 (27%)

Первичный легочный макротромбоз 7 (16%)