Структурные и кинетические исследования образования и распада комплексов рибосомного белка L1 с РНК тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.03, кандидат биологических наук Костарева, Ольга Сергеевна
- Специальность ВАК РФ03.01.03
- Количество страниц 102
Оглавление диссертации кандидат биологических наук Костарева, Ольга Сергеевна
СОДЕРЖАНИЕ.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1.Введени е.
1.2.Явление поверхностного резонанса плазмонов.
1.3.Lr-SPR, Sr-SPR -сенсоры.
1.4.Лиганды и их иммобилизация на чипе.
1.4.1.Иммобилизация за счет физической адсорбции.
1.4.2.Бислойная иммобилизация.
1.4.3.Ковалентная иммобилизация.
1.4.4.Аффинная иммобилизация.
1.4.5. ДНК-опосредованная иммобилизация.
1.4.6.Иммобилизация малых молекул.
1.5. Виды взаимодействий, которые используются при проведении экспериментов на биосенсорах.
1.5.1 .Непосредственное взаимодействие.
1.5.2. Многослойное (sandwich) взаимодействие.
1.5.3.Взаимодействие с замещением (displacement).
1.5.4.Непрямое конкурентное ингибирование.
1.6.Определение кинетических и равновесных констант, характеризующих взаимодействие молекул.
1.6.1 .Измерение константы равновесия.
1.6.2.0пределение констант скоростей ассоциации и диссоциации.
1.7. Применение ППР биосенсоров в различных областях.
1.7.1. Исследование РНК-белковых взаимодействий.
1.7.2. Исследование ДНК-ДНК взаимодействий.
1.7.3. Изучение пептид-мембранных взаимодействий.
1.7.4. Изучение взаимодействий белок-рибосома.
1.7.5. Медицинская диагностика.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Материалы.
2.1.1. Химические реактивы и ферменты.
2.1.2. Буферы.
2.1.3.Сред ы.
2.1.4. Бактериальные штаммы и плазмиды.
2.1.5. Принадлежности.
2.1.6. Приборы.
2.2.Метод ы.
2.2.1.Методы генной инженерии и микробиологии.
2.2.1.1. Полимеразная цепная реакция.
2.2.1.2.Электрофорез ДНК в агарозном геле.
2.2.1.3.Обработка ДНК сайт-специфическими эндонуклеазами.
2.2.1.4. Очистка фрагментов ДНК.
2.2.1.5. Лигирование ДНК.
2.2.1.6. Получение компетентных клеток.
2.2.1.7.Трансформация клеток coli.
2.2.1.8. Анализ клонов с помощью ПЦР.
2.2.1.9. Выделение и очистка плазмидной ДНК.
2.2.1.9.Проведение реакции секвенирования.
2.2.1.10.Выделение и очистка больших количеств плазмидной ДНК.
2.2.1.11 .Рестрикция плазмидной ДНК для транскрипции и ее последующая очистка
2.2.1.12. Экспрессия генов белков TthLl, MjaLl и их мутантных форм в штамме-суперпродуценте Е. coli.
2.2.2.Выделение и очистка белков.
2.2.2.1. Выделение белков TthLl и IdTthLl из клеток штамма-суперпродуцента Е. coli
2.2.2.2.Катионообменная хроматография на смоле CM-Sepharose.
2.2.2.3. Аффинная хроматография на смоле Heparin- Sepharose.
2.2.2.4.Электрофорез белков в ПААГ в присутствии ДСН.
2.2.2.5. Электрофорез белков в ПААГ в неденатурирующих условиях.
2.2.2.6. Проверка отсутствия РНКазной активности в полученном препарате белка. 55 2.2.3.Выделение и очистка РНК.
2.2.3.1. Получение специфических фрагментов мРНК.
2.2.3.2. Электрофорез РНК в ПААГ в денатурирующих условиях.
2.2.3.3.Электрофорез нуклеиновых кислот в ПААГ в неденатурирующих условиях. 56 2.2.4. Получение и кристаллизация мутантных форм белка L1 и РНК-белкового комплекса.
2.2.5. Анализ РНК-белковых комплексов методом поверхностного плазмонного резонанса.
2.2.5.1. Биотинилирование фрагмента РНК.
2.2.5.2. Модификация поверхности чипа.
2.2.5.3. Определение констант ассоциации и диссоциации методом поверхностного плазмонного резонанса.
2.2.6. Проверка способности белка TthLl и его изолированного домена I регулировать синтез белка LI in vitro.
2.2.6.1. Сопряженная транскрипция-трансляция in vitro.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Конструирование фрагмента рРНК.
3.1.1.Клонирование гена специфического фрагмента рРНК.
3.1.2. Получение фрагментов РНК в препаративных количествах.
3.1.3. Электрофоретический анализ комплексов белка L1 с фрагментами РНК.
3.1.4. Подготовка фрагментов РНК для кинетических экспериментов.
3.2. Получение и характеристика изолированного домена I рибосомного белка L1 из Т. thermophilus.
3.2.1. Выделение и очистка рибосомного белка L1 и домена I белка L1 из Т. thermophilus
3.2.2. Кристаллизация IdTthLl.
3.2.3. Исследование взаимодействия IdTthLl со специфическими фрагментами РНК.
3.2.4. Кристаллизация IdTthLl в комплексе со специфическим фрагментом мРНК.
3.2.5. Проверка способности изолированного домена I регулировать синтез белка L
3.3. Получение мутантных форм белка L1 с измененными РНК-связывающими свойствами.
3.3.1. Стратегия мутагенеза.
3.3.2. Влияние конформации белка в свободном состоянии на его РНК-связывающие свойства.
3.3.2.1. Мутантные формы белка L1 с с точечными заменами в междоменной перетяжке.
3.3.2.2.Изолированный домен I белка L1.
3.3.3. Влияние изменений рельефа области связывания на РНК-связывающие свойства белка L1.
3.3.3.1. Замены треонина в строго консервативной триаде Thr-Met-Gly.
3.3.3.2. Замены метионина в строго консервативной триаде Thr-Met-Gly.
ВЫВОДЫ.
Рекомендованный список диссертаций по специальности «Молекулярная биология», 03.01.03 шифр ВАК
Структура полноразмерного L1-выступа бактериальной рибосомы. Влияние изменений поверхности контакта рибосомного белка L1 Thermus thermophilus с РНК на его РНК-связывающие свойства2014 год, кандидат наук Сарских, Алена Витальевна
Регуляторные свойства бактериальных и архейных рибосомных белков L1 и L42020 год, кандидат наук Михайлина Алиса Олеговна
5S pPHK-белковый комплекс THERMUS THERMOPHILUS: участки связывания белков L5 и L18 на 5S pPHK и пространственная структура комплекса белка L5 со специфическим фрагментом PHK2002 год, кандидат биологических наук Передерина, Анна Анатольевна
Кристаллизация и исследования структуры фактора инициации трансляции 2 из эукариот и архей2015 год, кандидат наук Архипова, Валентина Ивановна
5S рРНК-белковый комплекс Thermus thermophilus: исследование структуры белка TL5 и его взаимодействия с РНК2001 год, кандидат биологических наук Мещеряков, Владимир Александрович
Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Структурные и кинетические исследования образования и распада комплексов рибосомного белка L1 с РНК»
Определение принципов специфического взаимодействия макромолекул - одна из важнейших задач молекулярной биологии. В функциональном РНК-белковом комплексе взаимодействия между белком и РНК всегда специфичны, что делает каждый такой комплекс уникальным. Удобным объектом для выявления структурных особенностей, определяющих максимально возможную специфичность РНК-белковых взаимодействий, является рибосома, в процессе сборки которой каждый белок занимает строго определенное место на поверхности рибосомных РНК. Специфические РНК-белковые взаимодействия играют важную роль в функционировании живой клетки и определяют течение многих жизненно важных процессов. Специфичность связывания двух макромолекул выражается в их способности образовывать друг с другом стабильный функционирующий комплекс. Примером таких специфических комплексов являются комплексы регуляторных рибосомных белков с рибосомными и матричными РНК. Мерой специфичности обычно считают сродство молекул друг к другу, которое определяется величиной кажущейся равновесной константы диссоциации их комплекса. Эти величины, измеренные для различных РНК-белковых комплексов, могут отличаться на несколько порядков. Во многих случаях только функциональная значимость комплекса является тем критерием, который позволяет считать этот комплекс специфическим. Проблема специфичности приобретает особое значение при разработке лекарственных препаратов.
Рибосомные РНК-белковые комплексы характеризуются изменяющимся в широких пределах сродством белков к соответствующим участкам рРНК, и, тем не менее, в каждом из них взаимодействие всегда специфично. В рамках данной диссертационной работы проведены структурно-кинетические исследования РНК-белковых комплексов рибосомного белка L1 с целью выявления индивидуальных особенностей структуры белка и РНК, ответственных за формирование и стабильность специфических РНК-белковых комплексов. Белок L1 образует подвижный боковой выступ рибосомы, участвующий в высвобождении деацилированной тРНК из Е-сайта. Кроме того, этот белок имеет специфический участок связывания на матричной РНК и осуществляет регуляцию собственного синтеза по принципу «обратной связи». Ранее в нашей лаборатории были определены пространственные структуры белка L1 в свободном состоянии и в комплексе со специфическими фрагментами мРНК и рРНК. Проведенные в данной диссертационной работе комбинированные структурно-кинетические исследования таких комплексов, а также комплексов, образованных мутантными формами белка L1 с фрагментами рРНК и мРНК, вносят существенный вклад в понимание принципов РНК-белкового узнавания.
Целью настоящей работы было выяснение структурных основ специфического РНК-белкового взаимодействия на примере рибосомного белка L1.B связи с этим были поставлены следующие задачи:
- получение мутантных форм белка Lie измененным сродством к мРНК и рРНК,
- кристаллизация мутантных форм белка L1 в изолированном состоянии и в комплексе с РНК, получение биотинилированных специфических фрагментов мРНК и рРНК, взаимодействующих с белком L1 для их использования в кинетических исследованиях,
- кинетический анализ взаимодействия рибосомного белка L1 и его мутантных форм со специфическими фрагментами рРНК и мРНК.
Обзор литературы
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ОПТИЧЕСКИХ БИОСЕНСОРОВ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ МЕЖДУ МОЛЕКУЛАМИ
1.1.Введение
В настоящее время для исследования межмолекулярных взаимодействий макромолекул с разным уровнем сродства и в широком диапазоне температурных и химических условий широкое распространение получили оптические биосенсоры. Использование биосенсоров особенно удобно для быстрого перебора веществ, предположительно взаимодействующих с исследуемой макромолекулой. В комбинации с другими биофизическими приборами, такими как калориметр изотермического титрования, аналитическая ульцентрифуга и масс-спектрометр, они позволяют проводить очень точный термодинамический анализ процесса связывания, а также характеризовать и идентифицировать участников реакции. К преимуществам использования биосенсоров по сравнению с другими методами относятся: использование небольшого количества материала (в нанограммовом диапазоне), возможность исследования разнообразных систем (от молекул с массой от 200 Да до одноклеточных организмов), отсутствие мечения и низкие требования к чистоте препарата (можно исследовать связывающие свойства даже клеточного экстракта). Их несомненным достоинством является также возможность изучения кинетики связывания в реальном времени. Использование биосенсоров позволяет проводить скрининг потенциальных лигандов для конструирования лекарств, изучать фармокинетику медицинских препаратов, анализировать сигнальные системы клеток, исследовать взаимодействие гормон-рецептор. Прикладное использование оптических биосенсоров включает анализ продуктов питания, качества медицинских препаратов, разработку диагностических тест-систем и вакцин.
Биосенсор представляет собой компактный аналитический прибор, содержащий проточную кювету, присоединенную к оптическому устройству. Буфер и анализируемое вещество входят в кювету и покидают ее, а об их биохимическом взаимодействии судят по изменению коэффициента преломления, которое происходит из-за изменения концентрации вещества в кювете. Для измерения коэффициента преломления в кювете используются два способа. Первый основан на поверхностном плазменном резонансе, а другой - на высокочувствительной разностной интерферометрии Биохимические параметры связывания, такие как равновесная константа диссоциации, константа скорости реакции, можно рассчитать напрямую из изменений коэффициента преломления раствора, зависящих от времени (Velasco-Garcia, 2009).
Похожие диссертационные работы по специальности «Молекулярная биология», 03.01.03 шифр ВАК
Кристаллизация и структурные исследования компонентов бокового "L12-выступа" большой рибосомной субчастицы2011 год, кандидат биологических наук Кравченко, Олеся Васильевна
Глицил–тРНК синтетаза человека как неканонический фактор инициации трансляции энтеровирусных мРНК2023 год, кандидат наук Виноградова Екатерина Сергеевна
Структурные принципы взаимодействия белков-регуляторов трансляции с РНК2019 год, доктор наук Никулин Алексей Донатович
Пространственная структура комплекса рибосомного белка S15 с фрагментом 16S рибосомной РНК из Thermus thermophilus2000 год, кандидат химических наук Никулин, Алексей Донатович
Исследования структуры архейного фактора инициации трансляции 22009 год, кандидат биологических наук Столбоушкина, Елена Александровна
Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Костарева, Ольга Сергеевна
выводы
1. Домен I рнбоеомного белка L1 необходим и достаточен для специфического связывания белка с рРНК и мРНК.
2. Области контакта белка и РНК в комплексах интактного белка L1 и его домена I практически идентичны.
3. В результате замен в наиболее плотно прилегающей к РНК области поверхности белка L1 во всех случаях на поверхности белка возникает выступ величиной 1-2 А и на несколько порядков уменьшается время жизни комплексов этого белка с РНК, тогда как скорость образования комплексов меняется слабо.
4. Наличие домена II в целом белке L1 уменьшает константу скорости его ассоциации с РНК, что может быть обусловлено экранированием области РНК-белкового контакта этим доменом в некоторой части свободных молекул L1, т.е. понижением концентрации «активной» формы белка.
5. Повышение гибкости междоменной перетяжки в белке L1 из М. jannaschii отрицательно сказалось на РНК-связывающих свойствах белка, тогда как уменьшение её гибкости в белке L1 из Т. thermophilics практически не изменило эти свойства белка.
Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Костарева, Ольга Сергеевна, 2010 год
1. Сердюк И., Заккаи Н., Заккаи Дж. Методы в молекулярной биофизике. Структура. Функция. Динамика. М: КДУ. - 2010. - 736 с.
2. Abad L.W., Neumann М., Tobias L., Obenauer-Kutner L., Jacobs S., Cullen C. Development of a biosensor-based method for detection and isotyping of antibody responses to adenoviral-based gene therapy vectors // Anal Biochem. 2002. — V. 310(1).-P. 107-113.
3. Baier G., Piendl W., Redl B. and Stoffler G. Structure, organization and evolution of LI equivalent ribosomal protein gene of the archaebacteriom Methanococcus vannielii II Nucleic Acids Res. 1990. - V. 18. - P. 719-724.
4. Chung J.W., Bernhardt R. and Pyun J.C. Sequential analysis of multiple analytes using a surface plasmon resonance (SPR) biosensor // J. Immunol. Methods. 2006. - V. 311(1-2).-P. 178-188.
5. Dillon P.P., Daly S.J., Manning B.M. and O'Kennedy R. Immunoassay for the determination of morphine-3-glucuronide using a surface plasmon resonance-based biosensor // Biosens Bioelectron. 2003. - V. 18(2-3). - P. 217-227.
6. Ennifar E., Nikulin A., Tishchnko S., Serganov A., Nevskaya N., Garber M., Ehresmann В., Ehresmann C., Nikonov S. and Dumas P. The crystal structure of UUCG tetraloop // J Mol Biol. 2000. - V. 304(1). - P. 35-42.
7. Fan X., White I.M., Shopova S.I., Zhu X., Suter J.D. and Sun Y. Sensitive optical biosensors for unlabeled targets // Analitica chimica acta. — 2008. V. 620. - P. 8-26.
8. Fitzpatrick B. and O'Kennedy R. The development and application of a surface plasmon resonance-based inhibition immunoassay for the determination of warfarin in plasma ultrafiltrate // J Immunol Methods. 2004. - V. 291(1-2). - P. 11-25.
9. Gobi K.V., Iwasaka H. and Miura N. Self-assembled PEG monolayer based SPR immunosensor for label-free detection of insulin // Biosens Bioelectron. 2007. — V. 22(7).-P. 1382-1389.
10. Gourse R.L., Thurlow D.L., Gerbi S.A. and Zimmermenn R.A. Specific binding of a procaryot ribosomal protein to an eukaryotic ribosomal RNA: Implications for evolution and autoregulation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1981. - V. 78. - P. 2722-2726.
11. Hodneland C.D., Lee Y.-S., Min D.-L. and Mrksich M. Selective immobilization of proteins to self-assembled monolayers presenting active site-directed capture ligands // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. - V. 99. - P. 5048-5052.
12. Homola J. Surface plasmon resonance sensors for detection of chemical and biological species // Chem. Rev. 2008. - V. 108. - P. 462-493.
13. Homola J., Dostalek J., Chen S., Rasooly A., Jiang S. and Yee S.S. Spectral surface plasmon resonance biosensor for detection of staphylococcal enterotoxin В in milk // Int. J. Food Microbiol. 2002. - V. 75. - P. 61-69.
14. Iwasaki K., Kikukawa S., Kawamura S., Kouzuma Y., Tanaka I. and Kimura M. On the interaction of ribosomal protein L5 with 5S rRNA // Biosci. Biotechnol. Biochem. -2002.-V. 66(1).-P. 103-109.
15. Karimi R., Pavlov M.Y., Buckingham R.H. and Ehrenberg M. Novel roles for classical factors at the interface between translation termination and initiation // Mol. Cell. 1999. -V. 3(5).-P. 601-609.
16. Kohrer C., Mayer C., Neumair O., Grobner P. and Piendl W. Interaction of ribosomal LI proteins from mesophilic and thermophilic Archaea and Bacteria with specific Ll-binding sites on 23S rRNA and mRNA // Eur. J. Biochem. 1998. - V. 256. - P. 97-105.
17. Kure M., Katsura Y., Kosano H., Noritake M., Watanabe Т., Iwaki Y., Nishigori H. and Matsuoka T. A trial to assess the amount of insulin antibodies in diabetic patients by surface plasmon resonance // Intern. Med. 2005. - V. 44(2). - P. 100-106.
18. Ladd L., Boozer C, Yu Q., Chen S., Homola J. and Jiang S. DNA-Directed Protein Immobilization on Mixed Self-Assembled Monolayers via a Streptavidin Bridge // Langmuir. 2004. - V. 20. - P. 8090-8095.
19. Lata S., Reichel A., Brock R., Tampe R. and Piehler J. High-affinity adaptors for switchable recognition of histidine-tagged proteins // J. Am. Chem. Soc. 2005. - V. 127.-P. 10205-10215.
20. Lee H.J., Nedelkov D. and Corn R.M. Surface plasmon resonance imaging measurements of antibody arrays for the multiplexed detection of low molecular weight protein biomarkers // Anal. Chem. -2006. -V. 78(18). P. 6504-6510.
21. Lee T.-Z., Mozsolits H. and Aguilar M.I. Measurement of the affinity of melittin for zwitterionic and anionic membranes using immobilized lipid biosensors // J. Pept. Res. — 2002.-V. 58.-P. 464-476.
22. Lee W., Lee D.B., Oh B.K., Lee W.H. and Choi J.W. Nanoscale fabrication of protein A on self-assembled monolayer and its application to surface plasmon resonance immunosensor // Enzyme Microb. Technol. 2004. - V. 35. - P. 678-682.
23. Li Y., Kobayashi M., Furui K., Soh N., Nakano K. and Imato T. Surface plasmon resonance immunosensor for histamine based on an indirect competitive immunoreactions // Anal. Chim. Acta. 2006. - V. 576(1). - P. 77-83.
24. Li Y., Lee H J. and Corn R.M. Detection of protein biomarkers using RNA aptamer microarrays and enzymatically amplified surface plasmon resonance imaging // Anal. Chem. 2007. - V. 79 (3). - P. 1082-1088.
25. BIAcore Sensor surface handbook.
26. Mauriz E., Calle A., Abad A., Montoya A., Hildebrandt A., Barcelo D. and Lechuga L.M. Determination of carbaryl in natural water samples by a surface plasmon resonance flow-through immunosensor // Biosens. Bioelectron. 2006. - V. 21(11). - P. 21292136.
27. Meyer M.H., Hartmann M. and Keusgen M. SPR-based immunosensor for the CRP detection—a new method to detect a well known protein // Biosens Bioelectron. 2006. -V. 21(10).-P. 1987-1990.
28. Miyashita M., Shimada Т., Miyagawa H. and Akamatsu M. Surface plasmon resonance-based immunoassay for 17beta-estradiol and its application to the measurement of estrogen receptor-binding activity // Anal. Bioanal. Chem. 2005. — V. 381(3). — P. 667673.
29. Mozsolits H., Wirth HJ., Werkmeister J. and Aguilar, M.I. Analysis of antimicrobial peptide interactions with hybrid bilayer membrane systems using surface plasmon resonance // Biochim Biophys Acta. 2001. - V. 1512. - P. 64-76.
30. Nakashima Т., Yao M., Kawamura S., Iwasaki K., Kimura M. and Tanaka I. Ribosomal protein L5 has a highly twisted concave surface and flexible arms responsible for rRNA binding // RNA. 2001. - V. 7. - P. 692-701.
31. Ock K., Jang G., Roh Y., Kim S., Kim J., Koh K. Optical detection of Cu2+ ion using a SQ-dye containing polymeric thin-film on Au surface // Microchem. J. 2001. - V. 70. -P. 301-305.
32. Okumura A., Sato Y., Kyo M., Kawaguchi H. Point mutation detection with the sandwich method employing hydrogel nanospheres by the surface plasmon resonance imaging technique // Anal. Biochem. 2005. - V. 339. - P. 328-337.
33. Rojo N., Ercilla G. and Наго I. GB virus С (GBV-C)/hepatitis G virus (HGV): towards the design of synthetic peptides-based biosensors for immunodiagnosis of GBV-C/HGV infection // Curr. Protein Pept. Sci. 2003. - V. 4(4). - P. 291-8.
34. Rusmini F., Zhong Z. and Feijen J. Protein immobolozation strategies for protein biochips // Biomacromolecules. 2007. - V. 8. - P. 1775-1789.
35. Sato Y., Ikegaki S., Suzuki K. and Kawaguchi H. Hydrogel microsphere-enhanced surface plasmon resonance for the detection of a K-ras point mutation employing peptide nucleic acid // J. Biomater. Sci. Polymer Edn. 2003. - V. 14. - P. 803-820.
36. Scholler N., Garvik В., Quarles Т., Jiang S. and Urban N. Method for generation of in vivo biotinylated recombinant antibodies by yeast mating // J. Immunol. Methods. -2006. — V. 317 (1-2).-P. 132-143.
37. Selmer M., Al-Karadaghi S., Hirokawa G., Kaji A. and Liljas A. Crystal structure of Termotoga maritime ribosome recycling factor: a tRNA mimic // Science. 1999. - V. 286.-P. 2349-2352.
38. Shankaran D.R., Gobi K.V. and Miura N. Recent advancements in surface plasmon resonance immunosensors for detection of small molecules of biomedical, food and environmental interest// Sensors and Actuators B. -2007. V. 121. - P. 158-177.
39. Sonezaki S., Yagi S., Ogawa E. and Kondo A. Analysis of the interaction between monoclonal antibodies and human hemoglobin (native and cross-linked) using a surface plasmon resonance (SPR) biosensor // J. Imm. Methods. 2000. - V. 238. - P. 99-106.
40. Studier, F., Rosenberg, A., Dunn J. and Dubendorff J. Use of T7 RNA polymerase to direct expression of cloned genes // J. Methods Enzimol. 1990. - V. 185. - P. 60-89.
41. Sun X., Faucher K.M., Houston M., Grande D. and Chaikof E.L. Design and synthesis of biotin chain-terminated glycopolymers for surface glycoengineering // J. Am. Chem. Soc. 2002. - V. 124. - P. 7258-7259.
42. Takeda S., Tsukiji S., Nagamune T. Site-specific conjugation of oligonucleotides to the C-terminus of recombinant protein by expressed protein ligation // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2004. - V. 14. - P. 2407-2410.
43. Teramura Y., Iwata H. Label-free immunosensing for alpha-fetoprotein in human plasma using surface plasmon resonance // Anal. Biochem. 2007. - V. 365(2). - P. 201-207.
44. Tishchenko S., Kljashtorny V., Kostareva O., Nevskaya N., Nikulin A., Gulak P., Piendl W., Garber M. and Nikonov S. Domain II of Thermits thermophilus ribosomal protein LI hinders recognition of its mRNA // J. Mol. Biol. 2008. - V. 383(2). - P. 301-5.
45. Vaisocherova H., Mrkvova K., Piliarik M., Jinoch P., Steinbachova M. and Homola J. Surface plasmon resonance biosensor for direct detection of antibody against Epstein-Barr virus // Biosens. Bioelectron. 2007. - V. 22(6). - P. 1020-1026.
46. Velasco-Garcia M.N. Optical biosensors for probing at the ccllular level: A review of recent progress and future prospects // Seminars in Cell and Developmental Biology. -2009.-V. 20.-P. 27-33.
47. Wei J., Mu Y., Song D., Fang X., Liu X., Bu L., Zhang G., Zhang J, Ding J., Wang W„ Jin Q. and Luo G. A novel sandwich immunosensing method for measuring cardiac troponin I in sera // Anal. Biochem. 2003. - V. 321. - P. 209-216.
48. Wu L.P., Li Y.F., Huang C.Z. and Zhang Q. Visual detection of Sudan dyes based on the plasmon resonance light scattering signals of silver nanoparticles // Anal. Chem. 2006. -V. 78.-P. 5570-5577.
49. Выражаю искреннюю благодарность моему научному руководителю, Марине Борисовне Гарбер, за чуткое руководство и внимание к моей работе, за ценные советы и рекоммендации, сделанные в процессе подготовки диссертации.
50. Приношу свою глубокую благодарность Светлане Викторовне Тищенко, которая научила меня всем биохимическим методам и постоянно поддерживала меня во время выполнения данной работы.
51. Хочу поблагодарить профессора Вольфганга Пиндла (Иннсбрукский медицинский университет, Австрия) за предоставленную возможность освоить новые для меня методы, за его гостеприимность и готовность помочь в любой ситуации.
52. Благодарю всех сотрудников, лаборатории структурных исследований аппарата трансляции за дружескую обстановку, приятные посиделки и помощь.
53. Отдельно хочу поблагодарить моих родителей, мужа и друзей за понимание, поддержку и вдохновение.
Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.