Структурно-функциональные изменения некоторых транспортных белков в пленке, индуцированные ВУФИ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат биологических наук Пантявин, Андрей Александрович

• Пантявин, Андрей Александрович
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Пантявин, Андрей Александрович

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Структура и физико-химические свойства некоторых транспортных белков крови

1.1. Структурно-функциональные и физико-химические свойства сывороточного альбумина

1.1.1. Структура молекулы сывороточного альбумина

1.1.2. Оптические свойства молекул сывороточного альбумина

1.1.3. Функциональные свойства сывороточного альбумина

1.2. Структурно- функциональные и физико-химические свойства гемоглобина

1.2.1. Структура молекулы гемоглобина

1.2.2. Спектральные характеристики гемоглобина

1.2.3. Связывание и перенос лигандов гемоглобином

Глава 2. Действие вакуумного ультрафиолетового излучения на аминокислоты и белковые системы

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 3. Объекты и методы исследования

3.1. Объекты исследования

3.2. Методы исследования

3.2.1. Методика облучения тонких пленок белков

3.2.2. Регистрация спектров поглощения белковых образцов в УФ- и видимой областях

3.2.3. Регистрация ИК-спектров поглощения белковых образцов

3.2.4. Методы разделения веществ (электрофорез, гель-хроматография)

3.2.5. Флуоресцентный анализ

3.2.6. Регистрация спектров флуоресценции зонда 1-анилинонафталин-8-сульфоната (АНС)

3.2.7. Регистрация кривых диссоциации оксигемоглобина (КДО)

3.2.8. Регистрация кривых кислотно-основного титрования белков

3.3. Статистическая обработка результатов

РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Глава 4. Оптические свойства ВУФ-облученных молекул сывороточного альбумина и гемоглобина

4.1. УФ-спектры поглощения ВУФ-облученных молекул альбумина

4.2. ИК-спектры поглощения ВУФ-облученных молекул альбумина

4.3. Спектры поглощения гемоглобина в видимой области

4.4. ИК-спектры поглощения ВУФ-облученных молекул гемоглобина

Глава 5. Флуоресцентные свойства ВУФ-облученных молекул бычьего сывороточного альбумина

5.1. Флуоресцентные свойства ВУФ-облученных молекул бычьего сывороточного альбумина при рН 6,0

5.2. Флуоресцентные свойства ВУФ-облученных молекул бычьего сывороточного альбумина при рН 2,8

5.3. Флуоресцентные свойства ВУФ-облученных молекул бычьего сывороточного альбумина при рН 8,3

Глава 6. Гель - хроматографические и электрофоретические свойства ВУФ-облученных молекул белков

6.1. Гель - хроматографические свойства ВУФ-облученных молекул сывороточного альбумина

6.2. Электрофоретические свойства ВУФ-облученных молекул сывороточного альбумина

Глава 7. Функциональные свойства ВУФ-облученных молекул сывороточного альбумина и гемоглобина

7.1. Функциональные свойства ВУФ-облученных молекул сывороточного альбумина

7.1.1. Флуоресцентные свойства ВУФ-облученных молекул бычьего сывороточного альбумина в комплексе с красителем 1-анилинонафталин-8-сульфонатом (АНС)

7.1.2. Кислотно-основные свойства ВУФ-облученных молекул сывороточного альбумина

7.2. Кислород связывающие свойства ВУФ-облученных молекул ге-

моглобина

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Структурно-функциональные изменения некоторых транспортных белков в пленке, индуцированные ВУФИ»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Исследования фотопроцессов, происходящих в белках и их компонентах под влиянием вакуумного УФ-излучения (А,<200 нм), имеют важное значение для выяснения физико-химических основ его биологического действия, а также связаны с проблемой абиогенного фотосинтеза биологических молекул в космическом пространстве и в период биохимической эволюции на Земле. Основными процессами дезактивации высоковозбужденных состояний молекул после поглощения квантов ВУФ-излучения являются люминесценция, фото диссоциация (ФД), фотоионизация (ФИ). Люминесценция Si-» So связана с процессом внутренней конверсии при переходе электрона без обращения спина Sn~-»Si, конкурирующим с ФД, ФИ и др. Возможны также фотохимические реакции, связанные с деструкцией или синтезом биомолекул. Знание их эффективности, определяемой величиной квантового выхода, может быть использовано для выяснения механизмов фотопревращений биомолекул при ВУФ-облучении. Большинство работ, посвященных биологическому действию вакуумного ультрафиолета на молекулярном уровне, выполнено с использованием в качестве объектов исследования нуклеиновых кислот и их компонентов (Д.А. Сухов и соавт., 1976; N.Ya. Dodonova et al., 1982; A. Ito et al, 1986; H.M. Цыганенко и соавт., 1987; E.B. Хорошилова и соавт., 1991; НЛ. Додонова и соавт., 1994). Особенностям взаимодействия ВУФ-излучения с белковыми системами

уделено гораздо меньшее внимание со стороны исследователей. В литературе практически не обсуждался вопрос о взаимосвязи дозозависимых структурных перестроек молекул белка с изменением их функциональной активности после ВУФ-облучения, не определено соотношение вкладов тех или иных фотохимических процессов в эффектах ВУФ-модификации белковых макромолекул. Поэтому анализ экспериментальных данных, касающихся фотохимических изменений белковых молекул, индуцированных вакуумным ультрафиолетовым излучением, позволит наметить некоторые модельные подходы к установлению возможных путей эволюции структуры этих биологически важных молекул и выяснить особенности проявления белками своих функциональных свойств в условиях различного микроокружения.

Фотохимические процессы, происходящие в белках и их компонентах под действием УФ-света в спектральной области 200-400 нм, изучались многими авторами (C.B. Конев, И.Д. Волотовский, 1979; Д.И. Рощупкин, 1979; И.И. Сапежинский, 1981; Ю.А. Владимиров, А.Я. Потапенко, 1989; В.Г. Артюхов, 1995). В вакуумной УФ-области спектра с Х<200 нм эти процессы практически не исследованы. Действие УФ- и ВУФ-излучения на белковые системы может различаться первичными фотофизическими процессами, что может привести к образованию неодинаковых конечных фотопродуктов и к инактивации белковых молекул (R. Settlow, 1960). Обладая значительной энергией квантов (до 120 эВ), ВУФ-излучение способно вызывать ионизацию биологических молекул, поэтому расширение спек-

трального диапазона исследований в область вакуумного ультрафиолета позволит получить ценную информацию о механизмах биологического действия этого ионизирующего излучения при его взаимодействии с белковыми системами. Исходя из вышеизложенного, нами проведены систематические исследования структурно-функциональных фотомодификаций транспортных белков (гемоглобина и сывороточного альбумина) под влиянием вакуумного УФ-света. Это обусловлено их значительным содержанием среди всех белковых компонентов крови, известной структурной организацией молекул и важностью функции, которую выполняют эти белки,- транспорта различных низкомолекулярных лигандов.

Цель и задачи работы

Целью настоящей работы явилось изучение закономерностей действия ВУФ-излучения на структурно-функциональное состояние молекул некоторых транспортных белков крови в условиях различного микроокружения.

Задачи работы предусматривали:

1) разработку методики получения тонких пленок белков и создание установки для их ВУФ-облучения;

2) изучение влияния ВУФ-света на физико-химические свойства гемоглобина и сывороточного альбумина;

3) определение эффективности действия на белковые макромолекулы ионизирующего ВУФ-излучения с энергией квантов 6,6 - 9,4 эВ;

4) исследование природы фотопревращений молекул белков после ВУФ-облучения в условиях различного микроокружения;

5) оценку взаимосвязи между структурными изменениями, индуцированными воздействием ВУФ-квантов, и проявлением исследованными белками функциональных свойств.

Научная новизна

Работа является комплексным исследованием, посвященным анализу взаимосвязи между структурным и функциональным состояниями транспортных белков крови. Впервые изучено влияние ВУФ-света на положение и форму кривых диссоциации оксигемоглобина, степень гем-гемового взаимодействия.

Выявлен эффект инактивации молекул сывороточного альбумина вследствие дезорганизации высших типов пространственной организации белковых макромолекул.

Показано, что наряду с деструкцией ароматических аминокислот наблюдаются также нарушения вторичной структуры бычьего сывороточного альбумина. Установлено, что изменения электрофоретических свойств молекул альбумина после вакуумного ультрафиолетового облучения в уело-

виях различного микроокружения свидетельствуют о преобладании процессов ассоциации в исследуемой системе.

Влияние ВУФ-излучения на гемоглобин проявляется в изменении конформации его молекул вследствие протекания реакций фотодиссоциации и фотоионизации в изучаемой системе.

Разработаны схемы процессов ВУФ-индуцированных превращений молекул альбумина и гемоглобина.

Практическая значимость

Научные положения диссертационной работы расширяют и углубляют современные представления об особенностях фотохимических превращений транспортных белков крови под действием вакуумного ультрафиолетового излучения.

Результаты работы вскрывают первичные механизмы ответной реакции биосистем на воздействие ВУФ-света в условиях различного микроокружения. Полученные данные могут быть использованы при изучении вопроса о роли высоковозбужденных электронных состояний в белках и происходящих в них фотопроцессов.

Выявленная дозовая зависимость характера протекания тех или иных фотохимических процессов в различных компонентах крови может явиться теоретическим фундаментом эволюционной биологии, касающейся вопросов фото- и радиоустойчивости макромолекул, а также позволит регулиро-

вать степень фотомодификационных изменений макромолекул сывороточного альбумина быка и, следовательно, эффективность их функционирования в условиях различного микроокружения.

Материалы диссертационной работы используются при чтении общего курса "Биофизика" и спецкурса "Фотобиология" для студентов биолого-почвенного факультета Воронежского госуниверситета.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на: I и II Международных симпозиумах "Физико-химические основы функционирования белков и их комплексов" (Воронеж, 1995, 1998); I и II Всероссийских съездах фотобиологов (Пущино, 1996, 1998); Совещании - семинаре "Первичные фотофизические и фотохимические процессы в биосистемах различных уровней организации" (Воронеж, 1996); III Международной научно-технической конференции "Антенно-фидерные устройства. Системы и средства радиосвязи" (Воронеж, 1997); II Всероссийской научно-технической конференции с международным участием "Светоизлучающие системы. Эффективность и применение" (Саранск, 1997); Межрегиональных научных конференциях, посвященных 80-летию со дня рождения проф. А.И. Лакомкина и 80-летию Воронежского госуниверситета "Физиология и психофизиология мотиваций" (Воронеж, 1997, 1998); Межрегиональной научной конференции, посвященной памяти проф. A.A. Землянухина

"Организация и регуляция физиолого-биохимическйх процессов" (Воронеж, 1998); II съезде Украинского биофизического общества (Харьков, 1998); XII Межреспубликанской научно-практической конференции (Краснодар, 1999); Уральской конференции молодых ученых "Физика в биологии и медицине" (Екатеринбург, 1999); Научных сессиях Воронежского госуниверситета (Воронеж, 1996, 1998, 1999).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 12 статей и 3 тезисов.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Степень структурных изменений исследованных белковых молекул повышается под влиянием вакуумного ультрафиолетового излучения с энергией квантов, превышающей потенциалы ионизации белка и его компонентов.

2. Изменение функциональных свойств сывороточного альбумина при действии ВУФ-излучения в дозе 30 кДж/м2 является результатом процессов разворачивания белковой глобулы. Фоточувствительность бычьего сывороточного альбумина определяется структурным состоянием его молекулы.

3. Фотомодификация сухих белков под воздействием ионизирующего ВУФ-излучения происходит как в результате прямых химических измене-

ний в белковой макромолекуле, так и вследствие дезорганизации ее высших типов пространственной организации.

4. Схема возможных процессов фотомодификации альбумина и гемоглобина под воздействием вакуумного ультрафиолета.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа включает 142 страницы машинописного текста, 11 таблиц, 38 рисунков. Состоит из введения, семи глав, заключения и выводов. Список литературы содержит 143 работы, из них 86 отечественных и 57 зарубежных.

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Пантявин, Андрей Александрович

ВЫВОДЫ

1. Показано, что степень снижения оптической плотности бычьего сывороточного альбумина при переходе белка из раствора в состояние пленки составляет 5-16% при 190 и 280 нм, что связано с созданием регулярной пространственной структуры в молекулах белка при высушивании его образцов.

2. Установлено, что вакуумное ультрафиолетовое излучение (6 кДж/м2) вызывает спад интенсивности полосы поглощения бычьего сывороточного альбумина при 278 нм, вплоть до ее полного исчезновения с увеличением энергетической экспозиции до 144 кДж/м2, что может быть связано с глубокими деструктивными процессами в ароматических аминокислотах белка.

3. С помощью метода ИК-спектроскопии выявлено, что уменьшение соотношения интенсивности полос поглощения при 1546 см-1 к 1535 см-1 после облучения в дозе 300 кДж/м2 свидетельствует в пользу конформаци-онного перехода белка из состояния спирали в форму статистического клубка.

4. Вакуумное ультрафиолетовое облучение образцов бычьего сывороточного альбумина в дозе 30 кДж/м2 сопровождается ассоциацией молекул белка.

5. Фотофлуоресцентным методом установлено, что под влиянием вакуумного ультрафиолетового излучения (30 кДж/м2) происходит снижение интенсивности флуоресценции при 342 нм, обусловленной изменением состояния триптофанилов в составе молекулы сывороточного альбумина.

6. Показано, что ВУФ-облучение (72 кДж/м2) вызывает увеличение кажущейся молекулярной массы сывороточного альбумина.

7. Степень структурных изменений белковых молекул повышается под влиянием вакуумного ультрафиолетового излучения с энергией квантов, превышающей потенциалы ионизации белка и его компонентов (8 эВ).

8. Вакуумное ультрафиолетовое излучение (131-161 нм) в дозе 72 кДж/м2 индуцирует переход оксигемоглобина в метгемоглобин.

9. Показано, что вакуумное ультрафиолетовое облучение (6 кДж/м2) обусловливает взаимодействие молекул окси- и метгемоглобина, что проявляется в образовании ассоциатов гембелка.

10. Структурно-функциональная модификация сухих белков под воздействием ионизирующего ВУФ-излучения происходит как в результате химических изменений в макромолекуле, так и вследствие дезорганизации высших типов ее пространственной организации.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Методами спектрофотометрии, регистрации кривых диссоциации ок-сигемоглобина и кислотно-основного титрования, диск-электрофореза, гель-хроматографии, люминесцентного анализа и флуоресцентных зондов изучены структурно-функциональные изменения молекул бычьего сывороточного альбумина и гемоглобина человека, индуцированные воздействием вакуумного ультрафиолетового излучения в диапазоне длин волн 131-187 нм в дозах 6-600 кДж/м2, в условиях различного микроокружения.

В результате комплексного изучения действия ВУФ-излучения на структуру и функции альбумина и гемоглобина обнаружено, что ВУФ-свет в интервале длин волн 131-161 нм и диапазоне доз (6-400) кДж/м2 индуцирует изменение функциональных свойств белков. Степень структурно-функциональных нарушений определяется структурным состоянием белковых макромолекул, их наибольшая фотолабильность проявляется при значениях рН среды, экстремальных для проявления ими своей функциональной активности (рН 2,8 и 8,3), а также в случае предварительной инкубации молекул белков при повышенных температурах.

Под влиянием ионизирующего ВУФ-излучения наблюдается конфор-мационный переход белковых молекул из состояния спирали в форму статистического клубка, что находит отражение в изменении ИК-спектров поглощения их тонких пленок.

При ВУФ-облучении происходят конформационные превращения молекул бычьего сывороточного альбумина, что находит отражение в изменении оптических, флуоресцентных, электрофоретических, гель-хроматографических и буферных свойств фотомодифицированного белка. Нами показано, что наблюдаемые при воздействии ВУФ-света изменения структурно-функциональных свойств альбумина являются следствием разворачивания белковой глобулы, а также фотомодификации ароматических аминокислот в составе молекулы белка. Влияние ВУФ-излучения на сывороточный альбумин проявляется в ассоциации его молекул вследствие преобладания процессов фотоионизации над процессами фотодиссоциации в исследуемой системе.

Степень структурных нарушений белковых молекул больше при облучении светом криптоновой лампы с энергией квантов 7,7-9,4 эВ по сравнению с действием лампы барьерного разряда в ксеноне за счет фотодеструкции различных электронных состояний пептидных групп, а также повышения роли фотоионизационных процессов в изменении состояния аминокислотных остатков в белке.

Анализ экспериментальных данных позволил нам предложить схему процессов, приводящих к структурным перестройкам и модификации функциональных свойств транспортных белков крови (рис.38). В соответствии с этой схемой ВУФ-свет в области поглощения пептидных связей белковых молекул индуцирует нарушения высших типов их пространственной организации, что приводит к изменению функциональных свойств белковых макромолекул.

Схема возможных процессов фотомодификаций молекул транспортных белков

ВУФ-излучение (7,7-9,4 эВ) I

Интактное состояние молекулы

Поглощение энергии ВУФ-света алифатическими аминокислотами, боковыми группами ароматических аминокислот и пептидными группами белка

Конформационные изменения: разворачивание Миграция энергии на белковой молекулы за счет ослабления и разрыва слабых внутримолекулярных связей

4 4 гем (Ре+2 -> Ре+3) ж

Модификация состояния ароматических аминокислот

Ассоциация молекул белка 4

Изменение функциональных свойств белковой макромолекулы

Рис. 38.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Пантявин, Андрей Александрович, 1999 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Акопян М.Е., Логинов Ю.В. Масс-спектрометрическое исследование фотоионизации свободных а-аминокислот //Химия высоких энергий. - 1967. - Т.1, вып.2. - С.97-102.

2. Артюхов В.Г. Гемопротеиды: закономерности фотохимических превращений в условиях различного микроокружения.- Воронеж: ВГУ, 1995,- 280 с.

3. Артюхов В.Г., Бутурлакин М.С., Шмелев В.П. Оптические методы исследования биологических систем и объектов.- Воронеж: ВГУ, 1980,- 116 с.

4. Молекулярные механизмы воздействия у- и УФ-радиации на гемоглобин в растворе и в составе эритроцитарной клетки /В.Г. Артюхов, Г.А. Вашанов, И.А. Лавриненко, A.A. Пантявин //Антенно-фидерные устройства. Системы и средства радиосвязи.- Воронеж: ВГУ, 1997а.-Т.1.- С. 256-263.

5. Изменения оптических свойств молекул гемоглобина, индуцированные вакуумным ультрафиолетовым излучением /В.Г. Артюхов, A.A. Пантявин, Г.А. Вашанов, О.В. Гаврюшкин //Светоизлучающие системы. Эффективность и применение.- Саранск: МордГУ, 19976.-С. 112-114.

6. Артюхов В.Г., Путинцева О.В. Оптические методы анализа интакт-ных и модифицированных биологических систем.- Воронеж: ВГУ, 1996.- 240 с.

7. Спектрально-временные характеристики ВУФ-излучения ламп с барьерным разрядом /В.И. Баюнов, H.H. Кириллова, A.A. Кузнецов, С.С. Сулакшин //Журн. прикл. спектроскопии.- 1989.- Т.51, вып.4.-С.690-692.

8. Беллами JL Инфракрасные спектры сложных молекул. - М.: Издательство иностранной литературы, 1963,- С. 592.

9. Блюменфельд JI.A. Гемоглобин и обратимое присоединение кислорода." М.: Сов. наука, 1957,- 140 с.

Ю.Бреслер С.Е. Молекулярная биология.- Л.: Наука, 1973.- 577 с. 11 .Способы увеличения пропускания полированных окон из фтористого магния в ВУФ области спектра /А.И. Вангонен, A.M. Пухов, Л.П. Шишацкая, Т.С. Тихомиров, Т.С. Туровская //Опт.-мех. пром.-1988,-№11,- С.26-29.

12.Вашанов Г.А. Анализ структурно-функционального состояния некоторых транспортных белков крови в условиях различного микроокружения: Дис. ... канд. биол. наук. Воронеж, 1993. 157 с.

13.Вейсблут М. Физика гемоглобина / Структура и связь.- М.: Мир, 1969,-С.11-74.

14.Векшин Н.Л. Фотоника биологических структур,- Пущино: ОНТИ НЦБИ АН СССР, 1988.- 164 с.

15.Верболович П.А., Утешев А.Б. Железо в животном организме.-Алма-Ата: Наука, 1967.- 266 с.

16.Виноградов И.П., Додонова Н.Я. Спектрально-люминесцентные исследования ароматических аминокислот в вакуумной ультрафиолетовой области спектра при 90 К // Биофизика. - 1971а. - Т. 16, вып.2. -С.343-345.

П.Виноградов И.П., Додонова Н.Я. Спектры поглощения алифатических аминокислот и простых пептидов в вакуумной ультрафиолетовой области спектра //Оптика и спектроскопия. - 19716. - Т.30, вып.1,-С.27-31.

1 З.Виноградов И.П., Додонова Н.Я. Спектрально-люминесцентные исследования белков в вакуумной ультрафиолетовой области спектра при 77 К//Оптика и спектроскопия. - 1971в. - Т.30, вып.5.- С.868-871.

19.Владимиров Ю.А. Фотохимия и люминесценция белков,- М.: Наука, 1965,- 232 с.

20.Владимиров Ю.А., Бурштейн Э.А. Спектры люминесценции ароматических аминокислот и белков //Биофизика,- 1960.- Т.5, вып.4,-С.385-392.

21.Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран.- М.: Наука, 1980.- 320 с.

22.Владимиров Ю.А., Зимина Г.М. Люминесценция некоторых белков и триптофана при монохроматическом возбуждении в растворах с различными рН //Биохимия,- 1965,- Т.30, вып.6.- С. 1105-1114.

23.Владимиров Ю.А., Ли Чинь-Го. Спектры люминесценции белков и ароматических аминокислот при различных рН//Биофизика.- 1962.-Т.7, вып.З.- С.270-280.

24.Власов Ю.А., Смирнов С.М. От молекулы гемоглобина - к системе микроциркуляции.- Новосибирск, 1993,- 244 с.

25.Волькенштейн М.В. Физика ферментов.- М.: Наука, 1967,- 200 с.

26.Волькенштейн М.В. Биофизика.- М.: Наука, 1988.- С.207-219.

27.Гааль Э., Медьеши Г., Верецкеи Л. Электрофорез в разделении биологических макромолекул. - М.: Мир, 1982. - 448 с.

28.Детерман Г. Гель-хроматография.- М.: Мир, 1970.- 252 с.

29.Додонова Н.Я., Сидорова А.И. Фотосинтез аминокислот из смеси простых газов под действием вакуумной ультрафиолетовой радиации //Биофизика.- 1961,- Т.6, вып.2,- С. 149-158.

30.Додонова Н.Я., Сидорова А.И. О роли этиловых радикалов при синтезе аминокислот под действием вакуумной ультрафиолетовой радиации //Биофизика,- 1962.- Т.7, вып.1.- С.31-33.

ЗГДодонова Н.Я. К вопросу о синтезе серусодержащих соединений под действием вакуумной ультрафиолетовой радиации //Биофизика.-1962,- Т.7, вып.З.- С.367-368.

32.Додонова Н.Я., Цыганенко Н.М. Исследование процессов абиогенного синтеза и устойчивости биологически важных молекул к облучению в вакуумной ультрафиолетовой (ВУФ) области спектра //Вест. ЛГУ.- 1990,- Сер.4, вып.З.- С.22-27.

33.Абиогенный синтез уридиновых нуклеотидов под действием вакуумного ультрафиолетового излучения / Н.Я. Додонова, Н.М. Цыга-ненко, Е.А. Кузичева, М.Б. Симаков //Биофизика.- 1994.- Т.39, вып.1.-С.26-31.

34.Ивкова М.Н., Веденкина Н.С., Бурштейн Э.А. Флуоресценция триптофановых остатков сывороточных альбуминов //Молекуляр. биол,- 1971,- Т.5, вып.2.- С.214-224.

35.Иржак Л.И. Гемоглобины и их свойства,- М.: Наука, 1975,- 240 с.

36.Каверзнева Е.Д., Максимов В.И., Осипов В.И. О структурных нарушениях лизоцима и рибонуклеазы А после у-облучения в сухом виде //Биофизика.- 1971,- Т.16, вып.4.- С.581-588.

37.Кантор Ч., Шиммел П. Биофизическая химия: В 3-х т.- М.: Мир, 1985.- Т.З.- 534 с.

38.Фотолиз тотального гистона и ДНК плазмиды pBR-322 в вакуумной ультрафиолетовой области спектра /М.Н. Киселева, Н.М. Цыга-ненко , Т.М. Смирнова, Н.Я. Додонова //Биофизика,- 1989,- Т.34, вып.4. - С.536-540.

39.Конев C.B. Электронно-возбужденные состояния биополимеров.-Минск: Наука и техника, 1965.- 184 с.

40.Конев C.B., Волотовский И.Д. Введение в молекулярную фотобиологию.- Минск, 1971.- 232 с.

41.Конев C.B., Волотовский И.Д. Фотобиология,- Минск: БГУ, 1979.378 с.

42.Коржуев П.А. Гемоглобин.- М.: Наука, 1964,- 287 с.

43.Спектры поглощения и фотопроцессы в триптофане и его дипеп-тиде с глицином в вакуумной ультрафиолетовой области спектра /Е.А. Кузичева, Н.Я. Додонова, И.Л. Малько, М.Ю. Петров, М.Б. Симаков //Опт. и спектр,- 1994,-1.11, вып.4,- С.584-588.

44.Ленинджер А. Основы биохимии.- М.: Мир, 1985.- Т.1. - 365 с.

45.Локализация флуоресцентного зонда 1 - анилинонафталин - 8 -сульфоната в поверхностном монослое липопротеидов низкой плотности /В.Г. Омельяненко, А.К. Чураков, О.В. Марценюк, Э.К. Рууге //Биофизика,- 1989.- Т.34, вып.З,- С.425-429.

46.Манойлов С.Е. Первичные механизмы биологического действия проникающей радиации.- М., 1968,- 184 с.

47.Манойлов Ю.С., Комов В.П., Манойлов С.Е. Исследование инфракрасных спектров гемопротеидов и их составных частей //Биофизика,- 1965,- Т. 10, вып.5,- С.782-787.

48.Манойлов Ю.С. Изменение физических свойств гемопротеидов при действии ионизирующего излучения //Проблемы энергетики в облученном организме.- М., 1977.- С. 10-96.

49.Маурер Г. Диск-электрофорез. - М.: Мир, 1971. - 247 с.

50.Наградова Н.К., Асриянц P.A. Взаимодействие "гидрофобной пробы" - 1-анилинонафталин-8-сульфоната с глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназой //Докл. АН СССР,- 1971.- Т.199, №2.- С.474-477.

51.Никушкин Е.В., Клебанов Г.И. Изучение температурно-зависимых конформационных переходов белков методом флуоресцентных зондов //Биофизика.- 1976.- Т.31, вып.4.- С.619-623.

52.0стерман Л.А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот.- М.: Наука, 1985,- С.109-167.

53.Павловская Т.Е. Возможные пути изучения абиогенеза биологически важных соединений //В сб. "Происхождение жизни и эволюционная биохимия".- М.: Наука, 1975,- С.239-246.

54.Павловская Т.Е., Пасынский А.Г. Изменение ультрафиолетовых и инфракрасных спектров белков при действии радиации //Коллоидный журнал.- 1955.- Т. 17, №4,- С.305-314.

55.Павловская Т.Е., Пасынский А.Г. О действии ионизирующих излучений на белковые растворы на воздухе и в вакууме //Биохимия.-

1957,-Т.22.- С.266-273.

56.Павловская Т.Е., Пасынский А.Г. Действие рентгеновского излучения на белковые растворы при облучении на воздухе и в вакууме //Труды I совещания по радиационной химии.- М.: Изд-во АН СССР,

1958,- С.177-181.

57.0 структурных изменениях молекул бычьего сывороточного альбумина, индуцированных вакуумным ультрафиолетовым излучением /A.A. Пантявин, В.Г. Артюхов, Г.А. Вашанов, И.А. Лавриненко //I Всероссийская конференция фотобиологов - Пущино, 1996.- С.84.

58.Изменения гель-фильтрационных свойств молекул бычьего сывороточного альбумина, индуцированные вакуумным ультрафиолетовым излучением /А.А.Пантявин, В.Г.Артюхов, И.А. Горбунова, Г.А. Вашанов //Физиология и психофизиология мотиваций,- Воронеж: ВГУ, 1997,-С.109-111.

59.Конформационные изменения молекул сывороточного альбумина при различных значениях pH, индуцированные вакуумным ультрафиолетом /A.A. Пантявин, В.Г. Артюхов, Г.А. Вашанов, Е.В. Малю-женко //Физико-химические основы функционирования белков и их комплексов,- Воронеж: ВГУ, 1998а.- С.168-172.

60.Пантявин A.A., Вашанов Г.А., Артюхов В.Г. Спектрофотометри-ческая оценка фотопревращений ВУФ-облученных молекул гемоглобина //Материалы II съезда фотобиологов России.- Пущино, 19986.-С.246-247.

61.Флуоресцентные свойства молекул бычьего сывороточного альбумина: воздействие вакуумного ультрафиолетового излучения /A.A. Пантявин, В.Г. Артюхов, Е.В. Малюженко, Г.А. Вашанов //Организация и регуляция физиолого-биохимических процессов.- Воронеж: ВГУ, 1998в.- С.108-111.

62.Пантявин A.A., Артюхов В.Г., Вашанов Г.А. Анализ электрофоре-тических свойств молекул бычьего сывороточного альбумина после воздействия вакуумным ультрафиолетовым излучением Юколого-физиологические и физико-химические основы взаимодействия био-

систем с окружающей средой /Под общ. ред. В.Г.Артюхова.- Воронеж: ВГУ, 1998г.-С.118-123.

63.Пасынский А.Г., Павловская Т.Е. Изменения инфракрасных спектров белков при облучении ультрафиолетовыми лучами //Коллоидный журнал.- 1952.- Т.14, №4,- С.239-249.

64.Перутц М. Молекулы и клетки.- М.: Мир, 1966.- 334 с.

65.Петров М.Ю. Фотопроцессы в комплексах ДНК-белок и их компонентах в вакуумной ультрафиолетовой области спектра: Автореф. дис. ... канд. физ.-мат. наук. СПб, 1996. 15 с.

66.Рифкинд Д.М. Гемоглобин и миоглобин //Неорганическая биохимия.- М.: Мир, 1978,- Т.2.- С.256-338.

67.Рощупкин Д.И. Молекулярные механизмы повреждения биомембран, липидов и белков под действием ультрафиолетового излучения: Дис. ... д-ра биол. наук. М., 1979. 524 с.

68.Сапежинский И.И. Хемилюминесценция, индуцированная излучениями, и ее применение для изучения фото- и радиационных превращений белков и других объектов: Автореф. дис. ... д-ра хим. наук. М., 1980.45 с.

69.Соркина Д.А., Залевская И.Н. Структурно-функциональные свойства белков. - Киев: Выща школа, 1989. - С. 118.

70.Стародуб Н.Ф., Назаренко В.И. Гетерогенная система гемоглобина.- Киев, 1987.- 200 с.

71.Столяр О.Б., Петренко О.И., Коробов В.Н. Молекулярные основы кислородной диссоциации оксигемоглобина кролика при действии рентгеновского облучения в дозе 600 р //Молекулярные механизмы биологического действия ионизирующих излучений.- Львов, 1979.-С.64-75.

72.Страхов И.П., Головтеева A.A., Булгакова И.В. Действие ионизирующих излучений на глобулярные белки //Изв.вузов.- Технология легкой промышленности.- 1976.- №4.- С.58-62.

73.Сухов Д.А., Додонова Н.Я., Вилесов Ф.И. Исследование фотоэмиссии нуклеиновых кислот и родственных им соединений в области 120-250 нм //Биофизика.- 1976,- Т.21, вып.5.- С.817-819.

74.Микрокалориметрическое исследование доменной организации сывороточного альбумина/Е.И. Тиктопуло, П.Л. Привалов, С.Н. Бо-рисенко, Г.В. Троицкий //Молекуляр. биол,- 1985,- Т. 19, вып.4,-С.1072-1078.

75.Тринус Ф.П., Бравер-Чернобульская Б.С., Луйк А.И. Изменения вторичной и третичной структуры сывороточного альбумина при взаимодействии с лигандами различного строения //Вопр.мед.химии. -1984. - Вып.4. - С.48-50.

76.Харченко Л.И., Павловская Т.Е. Изменение поглощения белка в области Амид I при облучении //Радиобиология,- 1973,- Т. 13, вып.5.-С.669-673.

77.Фотосинтез пептидов при облучении тирозина вакуумным ультрафиолетовым излучением /Е.В. Хорошилова, Н.М. Цыганенко, М.Ю. Петров, Н.Я. Додонова //Докл. АН СССР. - 1991. - Т.319, вып.5. -С. 1244-1247.

78.Цыганенко Н.М., Чижик И.В., Додонова Н.Я. Исследование фотопроцессов в основаниях нуклеиновых кислот в пленках и водных растворах под действием излучения в вакуумной ультрафиолетовой области спектра //Вестн. ЛГУ. - 1987. - Сер.4, вып.4. - С.80-82.

79.Чанг Р. Физическая химия с приложениями к биологическим системам.- М.: Мир, 1980.- 664 с.

80.Чегер С.И. Транспортная функция сывороточного альбумина. -Бухарест: Изд-во Акад. соц. респ. Румынии, 1975. - 184 с. 81.Черницкий Е.А., Мажуль В.М. Исследование конформационных переходов сывороточного альбумина быка в кислой области люминесцентным методом //Биофизика,- 1970.- Т. 15, вып.З,- С.408-415. 82.Чиргадзе Ю.Н. Колебания Амид I и Амид II в пептидных группах различных конформаций //Биофизика,- 1962.- Т.7, №6,- С.657-662. 83.Чиргадзе Ю.Н. ИК-спектры и структура полипептидов и белков. -М.: Наука, 1965. - 136 с.

84.Шишацкая Л.П., Гребеньков B.C., Рейтеров В.М. Применение окон из фтористого магния в мощных дейтериевых лампах /Юптико-механич. пром.- 1988,- №6,- С.60-62.

85.Шишацкая Jl.П., Яковлев С.А., Волкова Г.А. Газоразрядные лампы для вакуумной УФ-области спектра //Оптический журнал.- 1995.-№7.- С.72-74.

86.Якубке Х.-Д., Эшкайт X. Аминокислоты. Пептиды. Белки.- М.: Мир, 1985. -С.416-419.

87.Adair G.S. The hemoglobin system. The oxygen dissociation curve of hemoglobin //J. Biol. Chem.- 1925,- V.63.- P.529-545.

88.Andersen M.E., Moffat J.K., Gibson Q.H. The kinetics of ligand binding and of the association-dissociation reactions of human hemoglobin. Properties of deoxyhemoglobin dimers //J. Biol. Chem.-1971.- V.246, N9,- P.2796-2807.

89.Equilibrium of human hemoglobin with ethylisocyanide: further evidence for co-operativity in hemoglobin dimers /N.M. Anderson, E. Antonini, M. Brunori, J. Wyman // J. Mol. Biol.- 1970.- V.47, №2,- P.205-213.

90. Anderson S.R., Weber G. Fluorescence polarization of the complexes of l-anilino-8-naphtalenesulfonate with bovine serum albumin. Evidence for preferential orientation of the ligand //Biochemistry.- 1969.- V.8.- P.371-377.

91.Antonini E., Brunori M. Hemoglobin and mioglobin in their reactions with ligands.- Amsterdam, London, 1971.- 328 p.

92.Benesch R.E., Benesch R., Macduff G. The dissociation of hemoglobins A and H in concentrated sodium chloride //Biochemistry.- 1964,- V.3, №8.-P.l 132-1135.

93.Optically active absorption bands of hemoglobin and its subunits IS. Beychok, J. Tyuma, R.E. Benesch, R. Benesch //J. Biol. Chem.- 1967.-V.242, №10,- P.2460-2462.

94.Bhattacharya B., Wolf J. The interaction of l-anilino-8-naftalene sulfmate with tubulin: a site independent of the colchicine binding site //Arch. Biochem. and Biophis.- 1975.- V.167, №1.- P.264-269.

95.Bloomfield V. The structure of bovine serum albumin at low pH //Biochemistry.- 1966,- V.5, №2,- P.684-689.

96.Bolton W., Perutz M.F. Three dimensional Fourier synthesis of horse desoxyhaemoglobin at 2,8 A resolution //Nature.- 1970,- Y.228, №5271.-P.551-552.

97.Brown J.R. Structure of bovine serum albumin //Fed. Proc.- 1975.-V.34.- P.591.

98.Chen R.F. Removal of fatty acids from serum albumin by charcoal treatment//Biol. Chem. - 1967. - V.242, №2,- P.l73-181.

99.Preparation and properties of serumand plasma proteins. IV.A system for the separation into fractionsof the protein and lipoprotein components of biological tissues and fluids /E.J. Cohn, L.E. Strong, W.L. Hughes, D.J. Mulford, J.N. Ash worth, M. Melin, H.L. Taylor //Amer. Chem. Soc. -1946. - V.68, №3. - P.459-475.

100.The vacuum ultraviolet photochemistry of nucleotides /N.Ya. Dodonova, M.N. Kiseleva, L.A. Remisova, N.M. Tsyganenko //Photochem.PhotobioL- 1982.-Y.35.- P.129-132.

101.Drabkin D.L. Spectrophotometry studies.VII. The cristalografic and optical properties of the hemoglobin of man in comparison with those of other species //Biol.Chem. - 1946. - V.164, №2. - P. 703-723.

102.Foster J.F. Plasma albumin //In F.W.Putnam, The Plasma proteins.-N.Y.: Acad. Press.- I960,- V.I.- P.179-183.

103.Franglen G. The role of plasma albumin and its relation to its structure//Proc. Roy. Soc. Med.- 1967,- V.60, №11. Part 1,- P.1072-1074.

104.Goutermann G. Spectra Porphyrins //J. Mol. Spect.- 1961,- V.6.-P.138-148.

105.Guidotti G. Studies on the chemistry of hemoglobin.2.The effect of salt on the dissociation of hemoglobin into subunits //J. Biol. Chem.- 1967.-Y.242, №16,- P.3685-3693.

106.pK change of imidazole groups in bovine serum albumin due to the conformational change at neutral pH /B.J.M. Harmsen, S.H. De Bruin, L.H.M. Janssen, J.F. Rodrigues De Miranda, J.H. Van Os //Biochemistry.-1971,-V.10, №17.- P.3217-3221.

107.Janatova J., Fuller J.K., Hunter H.J. The heterogeneity of bovine albumin with respect to sulfhydryl and dimer content //J. Biol. Chem.-1968,- V.243, №13.- P.3612-3622.

108.1to A., Taniguchi T., Ito T. Wavelength dependence for the inactivation of ATP in the vacuum ultraviolet region above 140 nm //Photochem. Photobiol.- 1986.- V.44.- P.273-277.

109.Kellet G.L., Gultfreund H. Reaction of haemoglobin dimers after ligand dissociation //Nature.- 1970,- Y.227, №5261,- P.921-926.

110.Kellet G.L., Shachman H.K. Dissociation of hemoglobin into subunits. Monomer formation and the influence of ligands //J. Mol. Biol.-1971.-Y.59, №3,- P.387-399.

111.Kendrew J.C. Myoglobin and structure of proteins //Science.- 1963.-Y.139, №3561,- P.242-249.

112.King T.P. Limited pepsin digestion of bovine plasma albumin //Arch. Biochem. Biophys.- 1973,- V.156.- P.309-313.

113.Koshland D.E., Nemethy G., Filmer D. Comparison of experimental binding data and theoretical models in protein containing subunits //Biochemistry.- 1966.- Y.5, №1,- P.365-385.

114.Leonard W.J., Yijai K.K., Foster J.F. A structural transformation in bovine and human plasma albumins in alkaline solution as revealed by rotatory dispersion studies //J. Biol. Chem.- 1963.- V.238, №6.- P. 19841988.

115.Meloun B., Moravek L., Kostka V. Complete amino acid sequence of human serum albumin //FEBS Lett.- 1975,- V.58.- P. 134-137.

116.Mono J., Wyman J., Changeux J.P. On the nature of allosteric transition: a plausible mode//J. Mol. Biol.- 1965.- V.12, №1,- P.88-118.

117.Muirhead H., Greer J. Three-dimensional Fourier synthesis of human deoxyhaemoglobin at 3,5 A resolution //Nature.- 1970.- V.228, №5273.-P.516-519.

118.Nikkei H.J., Foster J.F. A reversible sulfhydryl-catalyzed structural alteration of bovine mercaptalbumin //Biochemistry, 1971.- V.10.- P.4479-4486.

119.Noren I.B., Ho C., Cassasa E.F. A light-scattering study of the effect of sodium chloride on the molecular weight of human adult hemoglobin //Biochemistry.- 1971,- Y.10, №17,- P.3222-3229.

120.Painter L.R., Birkhoff R.D., Arakava E.T. Optical measurements of liquid water in the vacuum ultraviolet //J.Chem.Phys.- 1969.- Y.51, №1.-P.243-251.

121.Perutz M.F. Mechanism of denaturation of haemoglobin by alkali //J. Mol. Biol.- 1965.- V.13.- P.646.

122.Perutz M.F. X-ray analysis structure and function of enzymes //Europ. J. Biochem.- 1969,- V.8, №4.- P.726-739.

123.Perutz M.F. Stereochemistry of cooperativ effects in haemoglobin //Nature.- 1970,- V.228, №5273.- P.726-739.

124.Perutz M.F. Stereochemical mechanism of cooperative effects in hemoglobin //Biochemia.- 1972.- Y.54, №5-6.- P.587.

125.Perutz M.F. Regulation of oxygen affinity of haemoglobin: influence of structure of the globin on the haem-iron // Ann. Rev. Biochem.- 1979.-Y.48.- P.327-386.

126.Perutz M.F., Kendrew J.C., Watson H.C. Structure and function of hemoglobin.II.Some relation between polipeptide chain configuration and amino acid sequence HX. Mol. Biol.- 1965,- V.37.- P. 161-245.

127.Perutz M.F., Muirhead H., Mazzarella L. Identification of residues responsible for the alkaline Bohr effect in haemoglobin //Nature.- 1969.-V.222, №5200,-P. 1240-1243.

128.Peters T. Serum albumin //In: Plasma proteins /Ed. F.W. Putnam.-N.Y.: Acad. Press.- 1975,- V.I.- P.133-181.

129.Peters T. Serum albumin //Adv. Prot. Chem.- 1985.- V.37.- P. 161-245.

130.Peters T., Reed R.G. Serum albumin: conformation and active sites //Albumin structure, biosynthesis, function.- 1978.- V.50.- P.11-20.

131.Riddiford C.L., Jennings B.R. Discussion on the shape of bovine plasma albumin //Biochim. et biophys. acta.- 1966.- Y.126, №1,- P. 171173.

132.Riggs A. Functional properties of haemoglobins //Physiol. Revs.-1965,- Y.45, №4.- P.619-673.

133.Rosen C.G. Structural changes in solid proteins exposed to ionizing radiation: gamma-irradiated bovine serum albumin as a model system //Int. J. Radiat. Biol.- 1971,- Y.19, №6,- P.587-601.

134.SettIow R. The effect of ionizing ultraviolet-radiation on proteins //Radiat. Res.- 1958.- V.9.- P.179-181.

135.Settlow R. Ultraviolet wavelength-dependent effects on proteins and nucleic acids //Radiat. Res.- I960,- V.2.- P.276-279.

136.Settlow R.B., Pollard E.G. Molecular Biophysics: Addisson-Wesley, Reading. Mass., 1962.- P.225-226.

137.Settlow R., Watts G., Douglas C. Inactivation of proteins by vacuum ultraviolet radiation //Proc. 1st. Nat. Biophys. Conf. - New Haven.: Yale University Press. - 1959. - P. 174-183.

138.Smecal E., Sprindrich J. Uber einige Eigenschaften des Komplexes Albumin-Anilin-Naphtalinsulfonsaure //Stud, biophys.- 1967.- B.2, №2.-S.133-140.

139.Sogami M., Foster J.F. Isomerization reactions of charcoal-defatted bovine plasma albumin. The N-F transition and acid expansion //Biochemistry.- 1968.- V.7, №6,- P.2172-2182.

140.Stroupe S.D., Foster J.F. Further studies of the sulfhydrylcatalyzed isomerization of bovine mercaptalbumin //Biochemistry.- 1973.- V.12.-P.3824-3830.

141.On the state of the iron and the nature of the ligand in oxyhemoglobin /J.B. Wittenberg, B.A. Wittenberg, J. Peisach, W.E. Blumberg //Proc. Nat. Acad. Sci. USA.- 1970.- V.67, №4.- P. 1846-1853.

142.Wright A.K., Thompson M.R. Hydrodynamic structure of bovine serum albumin determined by transient electric birefringence //Biophys. J.-1975,- V.15.- P.137-141.

143.Zurawski Y.R., Foster J.F. The neutral transition and the environment of the sulfhydryl side chain of bovine plasma albumin //Biochemistry.-1974,-V.13.- P.3465-3471.