Структурно - функциональные изменения гипоталамо –гипофизарно – гонадной системы крыс в условиях воздействия дестабилизирующих факторов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.04, кандидат медицинских наук Логинова, Анастасия Константиновна

• Логинова, Анастасия Константиновна
• кандидат медицинских наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Логинова, Анастасия Константиновна

ОГЛАВЛЕНИЕ

11

15

18

Стр.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Гипоталамическая нонапептидергическая нейрогормо-нальная регуляция сперматогенеза в аспекте стрессорных воздей- 10 ствий и взаимоотношений про- и эукариот (обзор литературы)

1.1. Стресс, влияние стрессорных воздействий на сперматогенез и гипоталамо-гипофизарную систему млекопитающих и человека

1.2. Сперматогенез и роль гистонов и их вариантов в процессе созревания герминативных элементов

1.3. Роль гистонов как факторов врожденного иммунитета млекопитающих в построении взаимоотношений про- и эукариот ГЛАВА 2. Материал и методы исследования 29 ГЛАВА 3. Результаты собственного исследования

3.1. Структурно-функциональная реорганизация нонапептидерги-ческих нейросекреторных центров гипоталамуса и аденогипофиза 42 экспериментальных животных

3.2. Структурно-функциональная реорганизация сперматогенного эпителия и интерстициальных элементов семенников в условиях инфицирования Е.соН, в том числе и при стрессорных воздействиях

3.3. Популяционная характеристика штамма Е. coli 6В1 по степени выраженности и изменчивости антигистонового признака

ГЛАВА 4. Обсуждение полученных результатов

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

62

91

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Структурно - функциональные изменения гипоталамо –гипофизарно – гонадной системы крыс в условиях воздействия дестабилизирующих факторов»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования. Стресс, как процесс реализации неспецифических механизмов адаптации в ответ на внешнее раздражение (Селье Г., 1960) непосредственно связан с возрастанием активности гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы (ГГНС) (Поленов A.JL, Константинова М.С., Гарлов П.Е., 1994; Акмаев И.Г., 2003; Акмаев И.Г., Гриневич В.В., 2003; Стадников A.A., 1995; Стадников A.A., Бухарин О.В., 2012; Кузнецов С.Л. с соавт., 2009). Действие стрессорных факторов подразумевает не только напряжённость ГГНС, но и наличие ответа в регуляторно - зависимых органах, проявляющегося в соответствующих морфофункциональных изменениях, определяемых в рамках «болезней адаптации» (Филаретов A.A., 1987).

К стрессорным относят и инфекционные факторы, представленные как самими бактериями, так и продуктами их метаболизма (Семёнов A.B., 2000; А1у H.A.A., Lightfoot D.A., El-Shemy H.A., 2010). Успешность адаптивных реакций организма во многом определяется биологическими свойствами микроорганизмов, в частности - наличием у возбудителей персистентных характеристик (Экология микроорганизмов человека, 2006), а также участием в процессе взаимодействия про- и эукариот нонапептидов гипоталамуса (Стадников A.A., 2001; Стадников A.A., Бухарин О.В., 2012).

На сегодняшний день, большой интерес представляет изучение характера влияния стрессорных факторов на процессы реализации адаптивных реакций в интерстициальных клетках семенников и в сперматогенном эпителии, отражающейся на половой функции в целом (Bray Т.М., Taylor C.G., 1993; Steinberger, A., Klinefelter G., 1993; Bindhu M.P., Annamalai P.T., 2004; Шевлюк H.H. с соавт., 2007).

Одним из новых и весьма актуальных направлений в изучении

стрессовых воздействий является установление в клетках эукариотических

организмов специфического комплекса морфофункциональных изменений,

3

развивающихся под действием бактерий, обладающих персистентными свойствами. На данный момент имеются сведения о морфофункциональных изменениях в клетках эукариот при их взаимодействии с бактериями, обладающими антилизоцимной, антикарнозиновой или антилактоферриновой активностью (Бухарин О.В. соавт., 2000; Карташова О. Л. с соавт., 2006; Бухарин О.В. с соавт., 2005; Козлова А.Н. с соавт., 2004).

Что же касается антигистоновой активности, то имеются лишь единичные сведения, касающиеся взаимодействия бактерий (Е.соН) с одноклеточными эукариотами (инфузориями) (Бухарин О.В. с соавт., 2004).

Показанные эффекты взаимодействия бактерий с антигистоновой активностью с одноклеточными эукариотами позволили сделать предположение о возможной роли этого свойства во взаимодействии бактерий с многоклеточными организмами, в том числе с клетками млекопитающих.

Исследование процессов сперматогенеза может рассматриваться как удобная модель для исследования закономерностей клеточной и репродуктивной биологии, генетики, радиобиологии, не только благодаря тому, что гаметогенез динамично отражает развитие мужских половых клеток, находящихся под строгим генетическим и гормональным контролем, и подчиняющихся строгой пространственно-временной организации (Пальцев М.А., Кветной И.М., 2008), но и за счет высокого уровня метаболизма гистоновых белков, являющихся мишеныо антигистоновой активности бактерий (Боже-домов В.А.с соавт., 2012).

Практическая значимость подобных исследований продиктована необходимостью познания патогенетических механизмов бактериальных инфекций урогенитального тракта мужчин. Следует отметить, что изучение влияний патогенной и условно-патогенной микрофлоры на процесс сперматогенеза уделяется недостаточное внимание. В то же время, многообразие существующих неблагоприятных факторов, способных нарушать процессы пролиферации и дифференцировки мужских половых клеток, обосновывают необходимость дальнейшего изучения диапазона адаптивных и компенсатор-

4

ных возможностей семенников, особенно в аспекте гипоталамической нона-пептидергической нейроэндокринной регуляции (Шевлюк H.H., Стадников A.A., 2010).

Сегодня представляется особо важным сформировать парадигму адаптации тканевых элементов эукариот к воздействиям прокариот с учетом генетических особенностей, как бактерий, так и организма-хозяина. Все вышеизложенное послужило обоснованием проведения настоящего исследования.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целыо работы явилось установление закономерностей адаптивных структурно-функциональных изменений тканевых и клеточных элементов гипоталамо - гипофизарно - гонадной системы крыс-самцов в условиях стрессорных воздействий и бактериального инфицирования E.coli с различным персистентным потенциалом.

Для достижения цели были решены следующие задачи:

1. Определить характер цитологических изменений нейросекретор-ных клеток крупноклеточных ядер гипоталамуса крыс - самцов, а также аде-ноцитов гипофиза в условиях стресса и введения животным бактерий с различным персистентным потенциалом (E.coli с антигистоновой активностью (АГА+) и без таковой (АГА-).

2. Оценить диапазон реализации гисто- и органотипических потенций сперматогенным эпителием и клетками интерстиция семенников стрес-сированных, а также инфицированных животных в модельных экспериментах.

3. Установить связь между персистентными характеристиками исследуемых бактерий и особенностями изменений, происходящих в семенниках исследуемых животных.

4. Дать микробиологическую характеристику популяционной изменчивости штамма E.coli по признаку антигистоновой активности in vitro и in vivo.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.

Впервые проведено комплексное гистологическое исследование гипо-таламо-гипофизарно-гонадной системы стрессированных крыс в условиях бактериального инфицирования изогенными клонами E.coli с антигистоно-вой активностью (АГА+) и без таковой (АГА-). Полученные данные раскрывают закономерности изменений нонапептидергической регуляции со стороны ГГНС в условиях инфицирования животных изогенным клоном E.coli АГА+, что обосновывает механизмы структурно-функциональных нарушений сперматогенных и стромальных структур семенников крыс, связанных с разбалансировкой синтеза и транспорта нейрогормонов супраоптических и паравентрикулярных ядер гипоталамуса.

Установлены закономерности адаптивной структурно-функциональной модификации клеточных элементов гипоталамо - гипофи-зарно - гонадной системы крыс-самцов в условиях инфицирования изогенным клоном E.coli АГА- на фоне стрессорных воздействий, свидетельствующие о достаточно высоком запасе резистентности гаметогенеза к экстремальным воздействиям.

Получены новые факты о негативном влиянии E.coli АГА+ на сперма-тогенный эпителий и интерстиций семенников экспериментальных животных, проявляющемся в нарушении сперматогенеза, явлениях атипии, апопто-за, десквамации половых клеток на фоне дистрофических изменений сустен-тоцитов и собственной оболочки семенных извитых канальцев.

С помощью популяционного анализа дана оценка гетерогенности популяции штамма E.coli по антигистоновой активности, что позволило оценить адаптивную пластичность бактериальной популяции и отобрать изоген-ные клоны, пригодные для экспериментальной модели.

Впервые на экспериментально-гистологической модели показаны эффекты антигистоновой активности эшерихий, которые могут быть использованы в качестве клинико-лабораторного стандарта в прогнозировании исхода воспалительного процесса и влиянии его на фертильность мужских особей.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ.

Результаты проведенного исследования раскрывают дополнительные аспекты механизмов гипоталамической нейроэндокринной регуляции сперматогенеза с новых позиций, свидетельствующих об аффинности спермато-генного эпителия и интерстиция семенников к воздействиям Е.соП АГА+ ,проявляющейся в экспериментальных условиях (при нарушениях адекватной гипоталамической нейросекреции) в повреждениях сперматогенеза, реактивных отклонениях процессов целостности тканей гонад, их клеточного обновления, формировании апоптозной доминанты и локальных механизмов контроля межклеточных взаимодействий.

Полученные данные имеют прикладное значение для верификации и прогнозирования исходов инфицированных поражений семенников (гипос-перматогенез, азооспермия), оценки степени их обратимости, что является важным для профилактики и лечения мужского бесплодия.

Тема данного диссертационного исследования включена в план НИР кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии. Работа «Экспериментальное обоснование эффектов антигистоновой активности бактерий в клетках млекопитающих» удостоена Премии Губернатора Оренбургской области для талантливой молодёжи в 2011 г. Исследования выполнены, в том числе, при поддержке Гранта Правительства Оренбургской области для талантливой молодёжи (2012).

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Результаты исследований и выводы диссертации используются в учебном и научном процессах на кафедре гистологии, цитологии и эмбриологии Оренбургской государственной медицинской академии.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Выявлен новый аспект механизма взаимодействия организма-хозяина с микробными агентами, обладающими персистентным свойством, антигистоновой активностью, заключающийся в дискоординации между синтетической и регуляторной функциями нонапептидергической ГГЫС.

2. Комплексное воздействие стресса и инфицирования животных E.coli АГА+ приводит к нарушению резистентности пролиферации и диффе-ренцировки гамет семенников крыс к экстремальным воздействиям, что проявляется существенными дистрофическими изменениями в сперматогенном эпителии и интерстициальных структурах семенников.

3. Гетерогенность популяции эшерихий по антигистоновому признаку, способствующая персистенции бактерий в организме - хозяине с одной стороны, и обуславливающая реакцию гипоталамо-гипофизарно-гонадной системы - с другой, в совокупности позволяет оценить исход воспалительного процесса и его влияние на фертильность мужских особей.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты диссертации доложены и обсуждены на: итоговой научной конференции молодых исследователей с международным участием «Татьянин день» (г. Москва, 2010); X конгрессе Международной ассоциации морфологов (г. Ярославль, 2010); 64 конференции студентов и молодых учёных «Актуальные проблемы современной медицины» (г. Киев, Украина, 2010); конференции молодых учёных «Актуальные проблемы экологии, гигиены и эпидемиологии» в рамках Дней молодёжной науки в Оренбургской области (г. Оренбург, 2011); I Всероссийской конференции студентов и молодых учёных в рамках «Дней молодежной медицинской науки ОрГМА», посвященной памяти чл.-корр. АМН СССР, профессора Ф.М. Лазаренко (г. Оренбург, 2012); Международном конгрессе FASEB (Fédéral Association of Expérimental Biologists) «Expérimental biology 2012» (r. Сан-Диего, США, 2012); Всероссийской конференции «Персистенция микроорганизмов» (г. Оренбург, 2012); II всероссийской конференции студентов

8

и молодых учёных в рамках «Дней молодежной медицинской науки ОрГ-МА», посвященной памяти чл.-корр. АМН СССР, профессора Ф.М. Лазарен-ко (г. Оренбург, 2013).

ПУБЛИКАЦИИ.

Основные положения работы изложены в 12 печатных работах, из них 6 в изданиях, рекомендованных ВАК при Минобрнауки РФ.

СТРУКТУРА И ОБЪЁМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на 131 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы материал и методы исследования, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа содержит 22 таблицы и 34 рисунка. Список литературы содержит 193 источника, включая 109 отечественных и 84 зарубежных работ.

ГЛАВА 1. ГИПОТАЛАМИЧЕСКАЯ НОНАПЕПТИДЕРГИЧЕСКАЯ НЕЙРОГОРМОНАЛЬНАЯ РЕГУЛЯЦИЯ СПЕРМАТОГЕНЕЗА В АСПЕКТЕ СТРЕССОРНЫХ ВОЗДЕЙСТВИЙ И ВЗАИМООТНОШЕНИЙ ПРО- И ЭУКАРИОТ

(ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

Интерес к проблеме нарушения сперматогенеза диктуется необходимостью решения постоянно расширяющегося круга актуальных практических задач, имеющих большое медико-биологическое и социальное значение. К таковым относят преодоление мужского бесплодия, изучение последствий действия повреждающих факторов окружающей среды, а также усовершенствование методов искусственного оплодотворения, криоконсервации, эффективного управления размножением сельскохозяйственных животных и насекомых, планирование семьи (Захидов С.Т., 1998).

На сегодняшний день одним из немаловажных факторов, способствующих нарушению процесса сперматогенеза с последующим развитием бесплодия, все чаще становится воздействие инфекционных агентов. Имеющиеся данные о влиянии инфекций урогенитального тракта на фертильность противоречивы. Некоторые авторы отмечают, что при сравнении микрофлоры эякулятов от здоровых и инфертильных мужчин, помимо патогенных микроорганизмов, определённую роль в формировании патоспермии играют и представители условно-патогенной микрофлоры (Бухарин О.В. с соавт. 2006). Кроме того, согласно современным понятиям о развитии инфекционного процесса, очевидно, что роль в нарушении сперматогенеза бактериальные патогены играют как опосредованно, через активацию механизмов иммунной защиты, так и непосредственно, путем транслокации из других биотопов организма (Копылов В.А, 2005).

Однако взгляд на инфекцию как на единственную причину формирования бесплодия не соответствует современным представлениям о механизмах взаимодействия про- и эукариот (Стадников A.A., Бухарин О.В., 2012). Сложные биологические системы, такие как человек или млекопитающие животные,

10

находясь под влиянием факторов окружающей среды одновременно генерируют множество ответных реакций на действующие раздражители. Возможность формирования адекватной реакции и поддержания гомеостаза многоклеточного организма напрямую зависит от пороговости действующего раздражителя, а также от способности организма к адаптации. Именно изучение возможностей макроорганизма к формированию адаптивных реакций в ответ на действие внешних факторов различного генеза является одной из главнейших проблем современной биологии.

1.1. Стресс, влияние стрессорных воздействий на сперматогенез и гииоталамо-гнпофизарную систему млекопитающих и человека

Проблема нарушения фертильности является одной из актуальных проблем современной науки и медицины. Согласно современным эпидемиологическим исследованиям частота встречаемости бесплодных пар среди населения России колеблется от 8 до 15%, а в ряде регионов Российской Федерации имеет тенденцию к увеличению. При этом вклад нарушений мужской репродуктивной функции в общую структуру бесплодного брака составляет 30-40%.

В настоящее время признанной является классификация мужского бесплодия, основанная на изучении причинных факторов, основными из которых считают инфекции гениталий, варикоцеле, идиопатическую патозооспермию и эндокринный фактор. Однако, в стандартизированной программе ВОЗ (1997 г.) по обследованию и лечению бесплодных супружеских пар количество факторов, обуславливающих развитие мужского бесплодия значительно расширено (European Association of Urology Guidelines..., 2012; Rowe P.J. et al., 2000 Дол Дж. P. et al., 2010).

Причиной нарушения фертильности является увеличение числа факторов, оказывающих негативное воздействие на репродуктивную систему (Hamada А., Esteves S., Agarwal А., 2012).

Особенного внимания заслуживает выделение стресса в качестве самостоятельного социогенного фактора, оказывающего отрицательное влияние на возможность реализации репродуктивной функции (Faldicova L. et al., 2001).

Известно, что процесс сперматогенеза регулируется комплексом сложных нейроэндокринных воздействий. Главная роль в этом процессе отводится системе кора головного мозга - гипоталамус - гипофиз - семенники. Гипоталамус является образованием, высокочувствительным к действию любых, даже самых незначительных агентов, будь то травма, инфекционное или токсическое воздействие (Тиктинский O.JL, 1990).

Вегетативная система безусловно принимает участие в регуляции сперматогенеза, а также сексуальной потенции в целом (Holstein A.-F., Schulze W., Davidoff M., 2003). При этом нарушения вегетативной регуляции в результате испытываемого стресса закономерно приводят к развитию стерильности (Love-joy D. A., Barsyte D.,2011).

В результате возникающих стрессовых ситуаций особое значение приобретает работа системы: кора головного мозга - гипоталамус - гипофиз - надпочечники - семенники (Кузнецов C.JI. с соавт., 2009; Шевлюк Н.Н. с соавт., 2007).

Faldicova L. et al. (2001), Кузнецов C.JT. с соавт. (2009), Шевлюк Н. Н., Стадников А.А. (2010) показали, что воздействие потенциально стрессогенных факторов, например, социальной изоляции, изменения рациона, в комплексе с действием различных токсикантов, например, антропогенных факторов газоперерабатывающего производства, оказывают более выраженный эффект на эндокринную функцию семенника, чем каждый из них в отдельности. При этом, ими показан стрессорный эффект изоляции, а также иммобилизации на животных, в частности на крыс, проявляющийся в увеличении числа апоптотических клеток и снижении уровня тестотерона в плазме крови. Снижение секреторной активности клеток Лейдига авторы объясняли повышением активности гипота-ламо-адреналового пути, и как следствие, повышением уровня глюкокортико-

стероидов, которые в свою очередь, имея рецепторную связь с интерстициаль-

12

ными эндокриноцитами семенников, ответственны за депрессию выработки тестостерона в ответ на действие стрессора. Длительное воздействие стрессор-ных факторов по мнению авторов может приводить к полной атрофии клеток Лейдига (Сизоненко М.Л., 2006; Сизоненко М.Л., Брюхин Г.В., 2009).

Особого внимания также заслуживают эффекты, оказываемые инфекци-онно-токсическим фактором на организм животных и человека. Интересно, что данный фактор может выступать и в роли стрессогенного, и непосредственно повреждающего. Действующими единицами в данном случае является и сам инфекционный возбудитель, и его токсины, а также, провоцируемые ими общие реакции, такие как гипертермия и отёк, являющиеся характерными чертами развивающегося воспалительного процесса.

Влияние бактерий на сперматогенез

Наиболее часто среди заболеваний, вызывающих развитие бесплодия встречаются паротит, сыпной и брюшной тифы, туберкулёз, малярия, бруцеллёз, пневмония, сепсис (Ludwig М., 2008), а также инфекции, передающиеся половым путём. На сегодняшний день данные литературы с одной стороны, подтверждая факт нестерильности мужского мочеполового тракта в норме (Мавров Г.И., Никитенко И.Н., Чинов Г.П., 2004), с другой - свидетельствуют об отсутствии чётких представлений о видовом составе микрофлоры репродуктивной системы здоровых мужчин, что зачастую затрудняет диагностику патологических состояний (Бухарин О.В. с соавт., 2006). И хотя довольно часто в литературе встречаются данные о бактериальной инфекции как одной из причин нарушения процесса сперматогенеза, все ещё наблюдается дефицит сведений, позволивших сформировать чёткое понимание механизмов развития воспалительного процесса в семенниках. Недостаточно также и сведений о роли различных бактериальных компонентов и факторов (O'Bryan М. К. et al., 2000), в том числе и обуславливающих персистентные характеристики микроорганизмов, в формировании инфекционного ответа.

Особенности действия различных факторов на сперматогенез млекопитающих и человека.

Половые железы и рассматриваются как иммуннопривилегированные органы (Hedger М. Р., 1997; Lysiak J J. et al., 2001), что определяет особый интерес к изучению изменений, происходящих в семенниках млекопитающих во время воспаления, или в результате действия других дестабилизирующих факторов (тепла, травмы, стресса) (Медведев Ю.А., Турганбаев Ж.Т., 1973; Даев Е. В., 1982; Мамина В. П., Шейко Л. Д., 2004; Давыдова Ю. А., Мухачёва С. В., 2007; Михайлова И. В., 2009).

Райцина С.С. с соавт. (1970, 1990) доказали в эксперименте, что повреждение яичка сопровождается нарушением целости структур, изолирующих сперматогенный эпителий от иммунологически компетентных клеток. Контакт с последними приводит к развитию аутоиммунного процесса и характеризуется появлением в сыворотке крови животных антител к ткани яичка с цитотоксиче-скими свойствами.

Малониной Е.А., Кулибиным A.IO. (2009) был показан высокий потенциал для восстановления сперматогенеза у крыс в ответ на действие механической травмы. При этом наблюдали активную реакцию rete testis, за счет которой по мнению Райциной С.С. может происходить регенерация сперматогенного эпителия. Стрессорные воздействия вызывают ряд структурно-функциональных изменений и в семенниках: значимое снижение диаметра ИСК, нарастание деструктивных процессов в сперматогенном эпителии, возрастание доли канальцев со значительной деструкцией сперматогенного эпителия.

Полученные данные согласуются с мнением большинства исследователей, отмечавших депрессивный характер морфофункциональных сдвигов в гонадах при стрессе. Имеются сведения и о прямом торможении синтеза андроге-нов в эндокриноцитах семенников под воздействием гипоталамических нейро-пептидов (Adashi E.G., Hsuch A.J.W., 1991). Один из возможных механизмов, объясняющих угнетение функции эндокриноцитов семенников в условиях

стрессорных воздействий предложил (Knoll B.W., 1991; Yeung B.H.Y. et al.,

14

2011). Вызванную депрессию гипоталамо-гипофизарно-тестикулярной системы автор связывает с активизацией гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы и делает заключение о том, что высокий уровень кортикостероидов при стрессе отрицательно влияет на гипоталамо-гипофизарную нейросекретор-ную систему и даже прямо на гонады.

В этой связи заслуживает внимания точка зрения (Verhoven G., 1991), считающего, что в основе угнетения стероидогенеза в клетках Лейдига лежит механизм паракринного воздействия сустентоцитов на эндокриноциты, при котором в сустентоцитах снижается выработка белка, стимулирующего синтез тестостерона.

1.2. Сперматогенез и роль гистонов и их вариантов в процессе созревания герминативных элементов.

Для понимания процесса сперматогенеза прежде всего необходимы детальные сведения об организации сперматогенного эпителия, структуре и функции сперматогенных и эндокринных элементов семенника, механизмах эндокринной и паракринной регуляции.

Установление четких границ между сперматогенезом в норме при патологии, накопление знаний о регуляторных и адаптивных механизмах в процессе сперматогенеза является необходимым условием не только для диагностики нарушений, но и для разработки современных подходов к лечению и профилактике бесплодия (Hermo L. et al., 2010; Holstein A.-F., Schulze W., Davidoff M., 2003).

В литературе имеются сведения об особенностях строения гонад и созревания половых элементов для млекопитающих и для многих позвоночных животных (Leblond С., Clermont, Y., 1952; Hess R. А., 1999; Шевлюк H.H., Руди В.Н., Стадников A.A., 1999). Сравнительный анализ имеющихся данных о сперматогенезе у различных филогенетически далеких друг от друга организмов позволил сделать вывод о возможности, с определенной долей условности,

экстрапаляции эффектов, полученных у экспериментальных животных (в т.ч. крыс) на человека.

Сперматогенез - это процесс образования высокодифференцированных гаплоидных мужских гамет из диплоидных малодифференцированных половых клеток сперматогоний, в ответ на эндокринные и паракринные воздействия (За-хидов С.Т., Кулибин А.Ю., Маршак Т.Д., 2011).

Сперматогенез это, комплекс хронологически упорядоченных преобразований, в результате которых митотически делящиеся сперматогонии, поддерживая свою собственную популяцию, также дают начало сперматоцитам первого порядка, которые затем путем мейоза первращаются сначала в сперматоциты второго порядка, а затем и в ранние сперматиды. Показано, что эффективность сперматогенеза, определяемая как количество зрелых сперматозоидов на грамм паренхимы семенника, не зависит от вида животных и веса гонад (Johnson L. et al., 2000).

Мужские гонады, как правило, имеют дольчатое строение и содержат два ярко выраженных отдела: канальцевый отдел, представленный извитыми семенными канальцами (ИСК) и межканальцевый или интерстициальный отдел, представленный, в котором заключены сосуды микроциркуляторного русла и эндокринные элементы гонад - интерстициальные эндокриноциты (клетки Лейдига).

Основную роль в гормональной регуляции сперматогенеза играют клетки Лейдига. Они способны синтезировать и секретировать стероидные половые гормоны в ответ на действие гипофизарного лютропина (Шевлюк H.H., Стад-ников A.A., 2010).

Имеются сведения о том, что в процессе сперматогенеза происходят два основных события: массивный синтез гистоновых вариантов, включая и тка-неспецифические, специфические посттрансляционные модификации этих белков соответственно стадиям дифференцировки половых клеток, а также активное замещение гистоновых белков другими, транзитными белками или прота-минами (Bloch, 1969; Casas, М.Т., Ausio J., Subirana J.A., 1993). Такая напряжённость в гомеостазе гистоновых белков позволяет сделать предположение об

уязвимости клеток сперматогенного эпителия при действии факторов, способ-

16

ных нарушать процессы, связанные с синтезом и транспортом гистоновых белков и их вариантов (Божедомов В.А. с соавт., 2012).

Наиболее уязвимыми в процессе сперматогенеза по праву считаются этапы митотического и мейотического деления клеток (Lewis, J.D., Abbott, D.W. & Ausio, J., 2003; Bianco-Rodriguez J., 2006; Strahl, B.D., Allis, C.D., 2000).

Согласно современному представлению о клеточном цикле и его регуляции апоптоз во время сперматогенеза является не только допустимым, но и во многом обязательным условием формирования половых клеток. Однако при этом важно отметить, что особую роль здесь играет гомеостаз про- и антиапоп-тотических механизмов регуляции, так как смещение в сторону преобладания первых или вторых неизбежно ведет к нарушению нормального течения сперматогенеза (Астраханцев А. Ф., 2000).

Особую роль здесь играет процесс репликации ДНК (Govin J. et al., 2004). Во время репликации снимается нуклеосомный уровень компактизации ДНК, а распределение материнских гистонов по обеим цепям ДНК случайно. Вновь синтезированные гистоны дополняют нуклеосомы. Разделение нуклеосом и добавление новых гистонов, степень репликации и синтез гистонов четко координируется (Turner В.М., 2000; Tachiwana H., 2008).

Во время S-фазы кроме синтеза гистонов таюке происходит синтез ДНК, и образование нуклеосом, между этими событиями существует прямая зависимость. Так, если подавлять синтез ДНК ингибиторами, то подавляется и синтез гистонов. При ингибировании синтеза гистонов или сборки хроматина также происходит ингибирование синтеза ДНК (Божедомов В.А. с соавт., 2012).

Структура хроматина динамически меняется, делая возможной локальную деконденсацию и ремоделирование. При этом модификация гистонов играет существенную роль в регуляции процессов транскрипции, репликации и репарации ДНК (Gartier, S.M., 2004).

Гистоны участвуют не только в экспрессии генов, но некоторые из гистоновых вариантов оказывают существенное влияние на процесс конъюгации и

расхождения хромосом. Так, например, при отсутствии или повреждении гис-

17

тона НЗ наблюдается нарушение расхождения хромосом в анафазе мейоза с последующим формированием генетических нарушений или гибелью зародыша (Burlibasa L., 2005).

1.3. Роль гистонов как факторов врожденного иммунитета млекопитающих в построении взаимоотношений про- и эукариот

Согласно современным концепциям иммунологии ведущую роль в защите от инфекций и биологической агрессии играет филогенетически более древний (1,5 млрд. лет) врожденный иммунитет, который руководит запуском и последующей работой адаптивного иммунитета. Возникновение данного вида защиты связывают с моментом обособления клетки как самостоятельной формы жизни, когда стало необходимым защищать её от воздействия факторов внешней среды (McCullough К. С., Summerfield А., 2005; Ярилин A.A., 2008).

Врожденный иммунитет отвечает за первичный ответ организма на внедрение патогенна (Hancock R.E., Scott M.G., 2000). Главными чертами врожденного или видового иммунитета являются наследственная передача, напряженность, неспецифичность, действие в течение всей жизни. Другими словами, факторы естественной резистентности организма обладают активностью в отношении широкого спектра возбудителей, опыт борьбы с которыми накоплен организмом в процессе эволюции. Основной задачей факторов врожденного иммунитета является немедленное реагирование и элиминация патогенов. Механизм действия при этом основан на узнавании специфических микробных паттернов, являющихся общими для большого числа возбудителей (Ахматова Н.К., Киселевский М.В., 2008).

В результате изучения эволюционных механизмов формирования иммунной системы группой учёных было сформулировано положение о принципиальном сходстве системы врожденного иммунитета у человека, позвоночных и беспозвоночных животных (Kimbrell D. А., Beutler В., 2001; Beutler В., 2004).

Современный этап развития иммунологии предполагает необходимость

переосмысления роли некоторых хорошо известных лекарственных препаратов,

18

включая антибиотики и изменения взглядов на лечение инфекционных болезней, и о роли препаратов - активаторов иммунитета. В последние годы была установлена важная роль продуцируемых полипептидных антибиотиков как компонентов врожденной иммунной системы у многих организмов (Robinette D. W., Noga Е. J., 2001; Tossi A., Sandri L., 2002; Zasloff 2002; Schroder J.-M., 1999).

Что касается самих факторов врожденного иммунитета, то к ним относят естественные барьеры организма (кожа и слизистые), естественные киллеры, макрофаги, гранулоциты, дендритные клетки, систему комплемента, белки ци-токиновой сети, а также многочисленные антимикробные пептиды, к числу которых относят как сами гистоны, так и их производные (Ахматова Н.К., Киселевский М.В., 2008; Corrales J., 2008) (Рис. 1).

■ -..V, мэ

и, гран ы, ден/ е кл

Рисунок 1 - Положение гистонов в системе врожденного иммунитета.

Антимикробные пептиды (АМП)

Рисунок 2. Классификация антимикробных полипептидов (по данным Marshall S. Н., Arenas G., 2003; Li Ch.-H., Zhao J.-M., Song L.-Sh., 2009).

KJ

о

Изучение структуры и механизмов взаимодействия антимикробных пептидов (АМП) на сегодняшний день представляет особый интерес. В общей структура АМП гистоны и их производные занимают отдельную нишу (Рис.2).

Гистоны выполняют одну из важных задач эволюции - упаковку ДНК в микроскопическом объёме ядра у организмов от прокариот до высших эу-кариот и сохранение при этом способности в нужный момент и в нужной комбинации извлекать из ДНК необходимую информацию (Клетки, 2011).

Последнее связано с понятием «гистонового кода», под которым понимают комбинацию различных молекулярных трансформаций молекул гисто-нов, позволяющих активировать или тормозить транскрипцию тех или иных генов (Jenuwein, Т., Allis, C.D., 2001). Ещё одной особенно данных белков является высокая степень консервативности их первичной структуры, кроме HI, в ряду от простейших до высших эукариот, что свидетельствует об их филогенетической древности (Kornberg R.D.,1974).

Что касается антибактериальных свойств гистонов, то впервые они были отмечены ещё в 50-х годах XX века (Hirsch, J.G., 1958), однако из-за нехватки сведений о механизме взаимодействия этих ядерных белков с микроорганизмами, большого интереса это открытие не вызвало. Позднее, в 70-х годах были сделаны попытки обнаружения механизма антибактериального действия гистонов (Ждан-Пушкина С.М. с соавт., 1972).

Сообщалось о высокой активности гистонов в отделяемом ран (Frohm М. et al., 1996), об антибактериальной активности гистонов в слизи амфибий и костистых рыб, об активности гистонов в отношении паразитических ди-нофлагеллят (Noga Е. J., Fan Zh., Silphaduang U., 2002), вызывающих болезни промысловых рыб, а также в отношении простейших - паразитов устриц (Dorrington Т., Villamil L., Gömez-chiarri М., 2010).

В настоящее время известно, что бактерицидная активность гистонов является составляющей фагоцитарной активности ряда фагоцитирующих

клеток, например, полиморфноядерных лейкоцитов животных и человека, а также гетеротрофных простейших (Бурместер Г.-Р., Пецутто А., 2009).

В ряде исследований установлена способность гистонов богатых аргинином влиять на проницаемость биомембран, в том числе мембран митохондрий и лизосом. В зависимости от концентраций гистоны способны оказывать на мембраны митохондрий как стабилизирующее действие (0,25 - 5,00 мкг/мл), так и деструктивное (100 мкг/мл и выше) с полным высвобождением ферментов матрикса. При более высоких концентрациях (200 - 400 мкг/мл) снижается потребление кислорода вплоть до полного подавления дыхания, происходит разобщение процессов окисления и фосфорилирования (Рогов A.B., 2002). На сегодняшний день в качестве наиболее вероятного механизма антимикробного действия гистонов рассматривается их способность к амфи-фатическому формированию пор в биомембранах (McCullough К. С., Sum-merfield А., 2009).

Кроме непосредственного действия гистоновых белков на бактерии, например, при внутриклеточном паразитировании, описан также механизм формирования нейтрофильных экстрацеллюлярных сетей, в которых гистоны, закрепленные на сети из ДНК разрушенных нейтрофилов способны абсорбировать на себя бактериальные клетки, тем самым обеспечивая локализацию инфекционного процесса и обезвреживание патогенов (Brinkmann V. et al., 2004; Долгушин, И.И. и др., 2010).

Предположения о механизмах антибактриального действия гистонов строились довольно давно. Однако, существующее мнение о том, что накопления гистонов в цитоплазме эукариотических клеток не происходит (Ташкэ К., 1980), а также а также отсутствие убедительных доказательств механизма выхода цепочки ДНК с гистонами из клеточного ядра (Parseghian М.Н., Luhrs К.А., 2006) не позволяли с уверенностью говорить о гистонах как об антимикробных агентах эукариотических клеток.

Таким образом, гистоны представляют интерес в качестве одной из составляющих противоинфекционной защиты хозяина с одной стороны, и в качест-

22

ве одной из точек приложения защитного потенциала микробных агентов в процессе выживания в организме хозяина, с другой (Уеиг^ В.Н.У. е1 а1., 1998; НагпБ Р. е1 а1., 2009).

Представители не только разных видов, но и разных штаммов бактерий обладают различной чувствительностью к гистонам (Табл.1).

При взаимодействии бактерий с гистонами нарушается проницаемость мембран (Ждан-Пушкина С.М. с соавт., 1972), и во внешнюю среду вытекают низкомолекулярные компоненты, в том числе и вещества, имеющие максимум поглощения в ультрафиолете при длине волны 260 нм. Происходит также деполимеризация суммарной РНК клеток, а также увеличение активности РНКазы.

Таблица 1 - Характеристика чувствительности некоторых микроорга-

низмов к гистонам (по Плотникову А.О., 2002 с дополнениями)

Микроорганизмы Чувствительность Авторы

Ps.aeruginosa В-890 Ждан-Пушкина С.М., Дронова Н.В.

Ps.aeruginosa В-891 + //

Ps.carnua - //

Ps.liquefaciens + /г

Ps.maltophilia - //

Ps.fluorescens + //

St.aureus (коагулаза +) Анатолий С.А., Кокряков В.Н. с соавт.

St.epidermidis (коагулаза -) + //

Считается, что при действии гистонов на мембрану бактерий наряду с другими процессами происходит падение энергетического заряда. Для поддержания оптимальной величины которого клетки нередко используют про-

23

дукты дегидратации РНК. Таким образом, не исключено, что клетки, которые способны сохранять или быстро восстанавливать величину заряда, будут характеризоваться более высокой устойчивостью к действию гистонов и родственных им соединений (Ждан-Пушкина С.М., Дронова Н.В., 1976).

Гистоны способствуют вытеканию из клеток метаболического фонда, деградации суммарной РНК, а также увеличению РНК-азной, фосфатазной и ДНК-азной активности бактерий. Степень выраженности перечисленных процессов зависит от чувствительности бактерий к отдельным фракциям гистонов.

Следует отметить, что в таблице 1 представлены усреднённые данные, однако, Ждан-Пушкина С.М., Дронова Н.В. (1976) отмечают дифференциальную чувствительность микроорганизмов к различным классам гистонов. Так, например, все представленные штаммы Pseudomonas и St. epidermidis чувствительны к гистонам НЗ, кроме Ps.carnea и St.aureus, которая устойчива к этой фракции гистонов. В то же время гистоны Н1 оказывают подавляющее воздействие на штаммы Ps.liquefaciens, Ps.maltophilia ВКМВ-591 и Ps.fleorescens, но не проявляют активности в отношении штаммов Ps.aerugenosa В-890,889, Ps.carnea, Ps.fleorescens МГУ и St.aureus.

Ярким примером антибактериальной активности производного гистона Н2В, белка HLP-1, является ингибирование им юных и зрелых трофонтов эктопаразита промысловых рыб (карпа) Amyloodinium ocellatum, которыйкроме непосредственного антибиотического действия вызывал также тяжелые нарушения, включающие задержку развития паразита, как на паразитической трофонтной стадии, так и на стадии репродукции (тромонт). Кроме того, авторы отмечали эффект «отложенной смерти», который проявлялся в том, что внешне нормальные особи паразита, подвергшиеся ранее воздействию белка HLP-1 погибали позднее, на более поздних стадиях развития. Данные эффекты были схожи с теми, что были получены с применением цельного гистона Н2В из коровьего тимуса.

Антимикробный пептид HLP-1 был обнаружен в коже и в секретируе-мой слизи исследуемых рыб. Результаты исследований показывают, что в норме у животных, имеющих нормальный иммунный статус, покровы имеют высокий уровень защитных агентов, способных предотвратить проникновение паразитических микроорганизмов (Noga Е. J., Fan Zh., Silphaduang U., 2002).

По всей вероятности, эти различия связаны с присутствием в молекуле гистонов ключевых аминокислот: лизина (HI) и аргинина (НЗ), которые способствуют специфическому субстрат - ферментному взаимодействию, регулируя узнавание бактериальных белков специфической зоной гистонов (Анатолий С.А. с соавт.,1977; Rose F.R.A.J. et al., 1998).

До сих пор не существует единого мнения относительно механизма действия гистонов в этом случае. Возможно, реализуется комплексное воздействие белка, которое включает в себя изменение проницаемости мембран микробных клеток для антибиотиков, либо образование комплекса с антибиотиком, обладающего более высокой проникающей способностью и, наконец, взаимодействие самого гистона с нуклеиновыми кислотами бактерий и вирусов, приводящее к блокированию синтеза матричной РНК.

Последними исследованиями показано присутствие гистоновых белков в цитоплазме эукариотических клеток в составе липидных гранул и выполнение ими защитных функций в отношении внутриклеточных паразитов. В то же время присутствие гистонов в свободном, несвязанном виде в цитоплазме представляет для клетки потенциальную опасность (Anand P. et al., 2012). Таким образом, понимание механизма поддержания баланса между защитой клетки и её гибелью в результате активизации собственных белков в процессе взаимодействия с инфекционными агентами является одной из основных задач современной науки.

Гистоны в эукариотических клетках выполняют защитную функцию. С одной стороны, выполняя структурную функцию, они обеспечивают стабильность генома, а с другой стороны, обладают выраженным антимикроб-

25

ным действием, которое реализуется двумя путями, либо при помощи формирования нейтрофильных экстрацеллюлярных сетей (NET's) (Brinkmann V. et al., 2004), либо путем увеличения проницаемости биомембран, обеспечивая тем самым антибактериальную защиту эукариот (Mihajlovic М. М., Lazaridis Th. Т., 2012).

Основными преимуществами данных белков в качестве антимикробных пептидов можно рассматривать высокий уровень структурной консервативности среди организмов различных видов, высокая распространенность в пределах организма, высокий уровень синтеза и биодоступности, активность в отношении широкого спектра микроорганизмов (Marshall S. Н., Arenas G., 2003; Li Ch.-H., Zhao J.-M., Song L.-Sh., 2009).

Таким образом, ранее высокоспециализированные ядерные белки, первоначально описанные Косселем в 1884 г. как белки, отвечающие за конденсацию хроматина, теперь рассматриваются как стратегически важные компоненты естественной резистентности эукариотических организмов (Клетки, 2011).

Антигистоновая активность бактерий.

Наличие у гистонов антибактериальной активности закономерно предполагает наличие у бактерий механизмов, обеспечивающих им защиту от действия данных белков. Учитывая, что не все бактерии проявляют чувствительность к гистонам, и что имеется целый ряд бактериальных штаммов, устойчивых к фагоцитозу, закономерным было предположение о существовании механизма, специфически направленного на подавление активности гистонов.

Такой механизм описан Бухариным О.В. и Соколовым В.Ю. и назван антигистоновой активностью (АГА) (Бухарин О.В., Соколов В.Ю., 1999). Известно, что эукариотические эндопаразиты обладают механизмом воздействия на генетический аппарат хозяина и способны целенаправленно изменять функционирование генетического аппарата хозяина не только с помощью

гормоноподобных факторов и субстратов, но и с помощью ДНК связываю-

26

щих белков, экстраклеточных низкомолекулярных ДНК и таким образом изменять условия среды обитания, удовлетворять свои потребности.

Все это укладывается в представления Заварзина Г.А. (1974) о пространстве логических возможностей возникновения паразитизма у эукариот, в основе которых лежит межгеномная генная комплементация (Крылов Ю.М., 1998).

Антигистоновая активность (АГА) - это способность бактерий инакти-вировать бактерицидный эффект гистонов. Первые исследования антигисто-новой активности показали, что она достаточно широко распространена среди бактерий.

Наиболее часто антигистоновая активность определяли у штаммов (^.pseudotuberculosis, M.luteus, N.sicca, S.lentus, S.warneri и достигает самого высокого уровня. Среди штаммов A.calcoaceticus, S.hominis, S.epidermidis, S.xylosus, S.aureus антигистоновая активность встречали с меньшей частотой, либо не встречали вовсе.

По данным Соколова В.Ю. (1993) уровень проявления этого признака связан с патогенностью микроорганизмов: чем выше патогенность, тем выше антигистоновая активность возбудителя.

Позднее антигистоновая активность была обнаружена у свободножи-вущих микроорганизмов, ассоциантов простейших (Плотников А.О., 2002). А.О. Плотниковым (2002) и Селивановой Е. А. (2007) установлена широкая распространённость антигистоновой активности среди бактерий, выделенных из протозойно-бактериальных ассоциаций, которая составила порядка 97% случаев. Этими исследователями установлено, что антигистоновая активность значительно выше у симбионтов тех видов, которые способны к внутриклеточному паразитированию (К. pneumoniae, К. ozaenae, Е. coli, P. аега-ginoza). Установлено также, что антигистоновая активность способствует сохранению бактерий внутри клеток простейших, влияя тем самым на процессы формирования симбиотических связей. Так, изогенные штаммы клеб-

сиелл, обладающие антигистоновой активностью, сохраняются в теле про-

27

стейших и способствуют незавершённому фагоцитозу, в отличие от клебси-елл, не обладающих данным признаком.

Высказано предположение, что в системе «паразит-хозяин» прокариоты, воздействуя на генетический аппарат хозяина, способны влиять на его функционирование не только с помощью гормоноподобных факторов и субстратов, но и с помощью ДНК связывающих белков. То есть, гистоны, выполняющие в эукариотеческих клетках ряд важнейших функций, способствуют формированию функциональных связей между эу- и прокариотными партнёрами. Это влияние было продемонстрировано в экспериментальной модели при взаимодействии беспозвоночного хозяина (инфузории) с бактериями. (Бухарин О.В. с соавт., 2004; Стадников A.A., Шевлюк H.H., Козлова А.Н., 2006), а также в результате клинических исследований (Бугеро Н.В., Потатуркина-Нестерова Н.И., 2013).

Тем не менее, остаётся открытым вопрос о морфологических и цитохимических изменениях, происходящих в эукариотических клетках под действием бактерий, обладающих антигистоновой активностью. В частности, малоизученными остаются эффекты, оказываемые бактериями с антигистоновой активностью на клетки млекопитающих.

На сегодняшний день, уже имеются сведения о морфофункциональных изменениях в клетках эукариот (одноклеточных простейших Tethrahymena pyriformis) при их взаимодействии с бактериями, обладающими антигистоновой активностью, демонстрирующие явные различия в изменения происходящих в ядрах инфузорий под действием бактерий с АГА и без таковой.

Заключение диссертации по теме «Клеточная биология, цитология, гистология», Логинова, Анастасия Константиновна

выводы

1. При введении штамма E.coli АГА+ происходит дискоординация между активным синтезом нонапептидов крупноклеточных ядер гипоталамуса и их высвобождением на уровне аксовазальных комплексов нейрогипофи-за, на фоне ультраструктурных повреждений гонадотропоцитов аденогипо-физа, в отличие от реакции на введение E.coli АГА-, заключающейся в пролонгировании течения адаптивной структурно-функциональной реорганизации нонапептидергических нейросекреторных ядер гипоталамуса без существенного нарушения этапности секреторного цикла.

2. Стрессорные факторы в комплексе с антигистоновой активностью бактерий обеспечивают пролонгирование сроков пребывания E.coli в организме экспериментальных животных, а также приводят к снижению регенераторных возможностей тканей.

3. Штамм E.coli с антигистоновой активностью вызывает отклонения нормального цикла сперматогенеза, в частности, блокирование стадий размножения, роста, созревания, а также задержку спермиации через активацию процессов апоптоза.

4. Инфицирование экспериментальных животных E.coli АГА+ приводит к лимитированию запаса резистентности сперматогенеза, что проявляется явлениями атипии, формированием мегалоформ сперматоцитов и спер-матид с последующей десквамацией половых клеток на фоне дистрофических изменений сустентоцитов и собственной оболочки семенных извитых канальцев.

5. Антигистоновая активность эшерихий способствует нарастанию деструктивных процессов в сперматогенном эпителии вплоть до полного запустения в семенных извитых канальцев млекопитающих животных (крыс), апоптозной доминанты, что свидетельствует об атрофии сперматогенного эпителия, лимитирующей возможности дальнейшего восстановления репродуктивной функции.

6. Гетерогенность популяции штамма Е.соП по антигистоновому признаку обеспечивает адаптивную пластичность популяции штамма Е.соН в условиях экспериментальной инфекции, способствуя бактериальной перси-стенции.

7. Антигистоновая активность штамма Е.соН является бактериальной компетенцией, определяющей ход воспалительного процесса в органах урогенитального тракта позвоночных животных, и может быть использована в качестве клинико-лабораторного стандарта в прогнозировании исхода воспалительного процесса и влиянии его на фертильность мужских особей.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Логинова, Анастасия Константиновна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Автандилов Г.Г. Основы количественной патологической анатомии: Учебное пособие. М.: Медицина, 2002. - 240 е., ил.;

2. Акмаев И. Г., Гриневич В. В. Нейроиммуноэндокринология гипоталамуса. М.: Медицина, 2003. 168 с.

3. Акмаев И.Г. Взаимодействие основных регулирующих систем (нервной, эндокринной и иммунной) и клиническая манифестация их нарушений // Клиническая медицина, 1997. № 11. С. 8-13;

4. Акмаев И.Г. Нейроиммуноэндокринные взаимодействия: их роль в диерегу-ляторной патологии //Патол. физиол. эксп. тер. — 2003. №4. С. 3-10;

5. Акмаев И.Г. Нейроиммуноэндокринные взаимодействия: экспериментальные и клинические аспекты // Сахарный диабет. 2002. № 1. р. 2-10;

6. Акмаев И.Г., Механизмы обратных связей в гипоталамо-гипофизарной системе // Механизмы гормональной регуляции и роль обратных связей в явлениях развития и гомеостаза. М.: Наука, 1981. С. 115-139;

7. Анатолий С.А., Кокряков В.Н., Юнусова М.И. Влияние катионных белков клеточного происхождения на выживаемость стафилококков // ЖМЭИ. 1977. №3. Р. 71-75;

8. Апсалямов В.Х., Бажанов А.Н., Савенко В.А. Многоядерные клетки сперма-тогенного пласта у крыс как критерий гипоксического повреждения семенника//Морфология. 1993. № 1-2. Т. 104. С. 102-106;

9. Астраханцев А.Ф. Программированная клеточная гибель сперматогенных клеток у человека // Материалы VI Всероссийской конференции по патологии клетки (с международным участием). 28-30 ноября, 2000 год. - М., 2000. -С. 101;

10. Ахматова Н.К., Киселевский М.В. Врожденный иммунитет: противоопухолевый противоинфекционный. М.: Практическая медицина, 2008.256 е.: ил.;

11. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Медгиз, 1962. 180 е.;

12. Бисерова Н.М. Методы визуализации биологических ультраструктур. Подготовка биологических объектов для изучения с помощью электронных и флуоресцентных конфокальных лазерных микроскопов. Практическое руководство для биологов. М.: КМК Scientific Press Ltd., 2013. 104 е.;

13. Блинова Т.С. Об изменении гландулоцитов семенников крыс при глубокой гипотермии. Арх. Анат. 1976. Т. 70, Вып. 9-10, С. 7-20;

14. Божедомов В.А., Липатова H.A., Спориш Е.А., Рохликов И.М. Виноградов И.В. Роль структурных нарушений хроматина и ДНК сперматозоидов в развитии бесплодия // Андрология и генитальная хирургия. 2012. №3. С. 82-92;

15. Боков Д.А., Маленкова O.A., Абдильданова A.M. Структурные основы интрагонадной гетерофункциональности локалитетов в определении адаптивных свойств репродуктивного режима самцов лесной мыши (Sylvaemus uralensis Pallas, 1811) в условиях техногенно преобразованных территорий // Экология, эволюция и систематика животных. Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. Рязань, 1719 ноября 2009 г. - Рязань: НП «Голос губернии», 2009. - С. 185-186;

16. Бугеро Н.В., Потатуркина-Нестерова Н.И. Изменение биологических свойств энтерококков в условиях межмикробного взаимодействия с простейшими бластоцистами // Проблемы современной науки и образования. 2013. № 1 URL: http://www.science-education.ru/! 07-8138;

17. Бурместер Г.-Р., Пецутто А. Наглядная иммунология (пер. с англ. 2-е изд., испр.) / М.: Бином. Лаборатория знаний, 2009. 320 е.: ил.;

18. Бухарин О.В., Плотников А.О., Немцева Н.В., Ковбык Л.В. Взаимодействия «гистон-антигистон» в сообществе бактерий Escherichia coli и инфузорий Tetrahymena pyriformis // Микробиология. 2008. Т. 77. №2. С. 219-225;

19. Бухарин О.В., Валышев A.B., Гильмутдинова Ф.Г. и др. Экология микроорганизмов человека / Екатеринбург.: УрО РАН. 2006. С. 291-336;

20. Бухарин О.В., Кузьмин М.Д., Иванов Ю.Б. Коррекция микробиоценоза урогенитального тракта мужчин на фоне гормональной терапии // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2000. № 4. С. 188—192;

21. Бухарин О.В., Соколов В.Ю. Антигистоновая активность бактерий. Перси-стенция патогенных бактерий. М.: Медицина; Екатеринбург: УрО РАН, 1999. С. 99;

22. Бухарин О.В., Карташова O.JT., Киргизова С.Б., Валышева И.В. Антилакто-ферриновая активность микроорганизмов // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2005. № 6. С. 7-10;

23. Вахитов Э.М., Безносик Р.В., Лабутин И.В., Козлова А.Н. Характеристика бронхоассоциированной лимфоидной ткани лёгких крыс при их инфицировании бактериями с антилактоферриновой активностью // Вестник уральской медицинской академической науки. 2012. №4 (41). С.21;

24. Вахитов Э.М. Нейроэндокринная регуляция морфофункциональной реорганизации эпителия внутрилёгочных бронхов крыс при действии стресса и бактериальных патогенов: Автореф. ... дис. канд. мед. наук. Оренбург, 2011. 26 е.;

25. Гланц С. Медико-биологическая статистика: пер. с англ. М.: Практика, 1999. 459 е.;

26. Голубева И.В., Килессо В.А., Киселёва Б.С. и др. Энтеробактерии: (Руководство для врачей) / Под ред. В.И. Покровского. - М.: Медицина, 1985, 32 с. ил.;

27. Гриневич В.В., Должников A.A., Ишунина Т.А. Активность вазопрессиновых нейронов в супраоптическом ядре гипоталамуса у человека: ингибирующий эффект эстрогенов // Успехи физиологических наук. 2001. N 1. С.48-59;

28. Давыдова Ю.А., Мухачёва C.B. Морфофункциональное состояние семенников рыжей полёвки в градиенте химического загрязнения // Териофауна России и сопредельных территорий (VIII съезд Териологического общества). Материалы международного совещания. 31 января-2 февраля 2007 г., г. Москва. М.: Товарищество научных изданий КМК, 2007. С. 116;

29. Даев Е.В. Нарушения мейоза у молодых самцов домовых мышей при воздействии экзогенными метаболитами половозрелых животных // Зоологический журнал. 1982. Том LXI. Вып. 8. С. 1269-1272;

30. Долгушин И.И., Шишкова Ю.С., Савочкина А.Ю. и др. Технологии определения и роль нейтрофильных внеклеточных ловушек в антимикробной защите // Вестник РАМН. 2010. № 4. С. 26 - 30;

31. Ждан-Пушкина С.М., Авенирова Е.Л., Архипченко И. А., Ашмарин И.П. Поиски механизмов антибиотического действия гистонов // Антибиотики. 1972. №12. С. 1080-1085;

32. Ждан-Пушкина С.М., Дронова Н.В. О дифференциальной чувствительности бактерий к гистонам //Микробиология. 1976. Т. ХЬУ. С.61-65;

33. Заварзин Г.А. Фенотипическая систематика бактерий. Пространство логических возможностей. М., 1974. 141 е.;

34. Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захария Е.А. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте: Изд. 2. Издательское объединение «Вища школа», 1974. 304 е.;

35. Захидов С.Т. Современные достижения в исследованиях проблемы сперматогенеза // Проблемы репродуктивной биологии в трудах профессора С.И. Кулаева и его последователей. М.: МГУ, 1998. С. 234-259;

36. Захидов С.Т., Кулибин А.Ю., Маршак Т.Л. Биология стволовых клеток зародышевого пути. М.: Издательство МГУ и УРАН ИБР им. Н.К. Кольцова РАН, 2011. 141 е.;

37. Иванов Ю. В. Многоядерные половые клетки в сперматогенезе крыс в норме и после воздействия ксенобиотиков // Гигиена труда и профессиональные заболевания. 1989. №3. С. 54-55;

38. Калиниченко Л. С. Цитокины в регуляции окислительных и антиоксидант-ных процессов в структурах головного мозга у крыс при остром эмоциональном стрессе: Автореф. ... дисс. канд. биол. наук. М., 2012. С. 22;

39. КарташоваО. Л. [и др.] Антикарнозиновая активность стафилококков как критерий оценки их персистентного потенциала // Журн. микробиол., эпиде-миол. и иммунобиол. 2006. № 4. С. 13-16;

40. Киясов А.П. Современные технологии морфологических исследований: методическое пособие для студентов, аспирантов и врачей-патологов. Казань, 2001.38 с.;

41. Клетки / под ред. Б. Лыоина и др.; пер. с англ. М.: Бином. Лаборатория знаний, 2011. 951 е.: цв. ил.;

42. Козлова А.Н., Стадников A.A., Безносик Р.В., Шевлгок H.H. Гисто- и цитологические аспекты гипоталамической нейроэндокринной регуляции взаимодействий про- и эукариот, реализуемых в эпителиальных структурах трахеи и бронхов крыс //Вестник Уральской мед. акад. науки. 2011. Т. № 1-2. С. 69-70;

43. Козлова А.Н., Стадников А.А, Ковбык Л.В. Гипоталамические нонапептиды как модуляторы гомеостаза про- и эукариот // Морфологические ведомости. 2004. № 1-2. С. 99-100;

44. Копылов В.А. Значение феномена транслокации бактерий из желудочно-кишечного тракта в патогенезе хирургической инфекции при повреждениях (экспериментально-клиническое исследование): Автореф. ... дис. канд. мед. наук., 2005. С.;

45. Крылов Ю.М. Возникновение и эволюция системы «паразит-хозяин» у эукариот: метаболические аспекты// Тезисы докл. Всерос. науч. конф. «Взаимоотношения паразита и хозяина». М., 1998. С. 38.;

46. Кузнецов С.Л., Капитонова М.Ю., Дегтярь Ю.В. и др. Нейроэндокринология стресса в раннем постнатальном онтогенезе. М.; Ульяновск: УлГУ, 2009. 171 е.;

47. Лакин Г. Ф. Биометрия: Учебное пособие для биол. спец. вузов / 4-е изд., перераб. и доп. М.: Высш. шк., 1990. 352 е.: ил.;

48. Мавров Г.И., Никитенко И.Н., Чинов Г.П. Особенности микрофлоры уроге-нитального тракта при воспалительных заболеваниях мочеполовых органов. Украинский журнал дерматологии, венерологии, косметологии. 2004. № 2. с. 64-68;

49. Малонина Е.А., Кулибин А.Ю. Возможные регенерационные потенции rete testis после механической травмы семенника крыс и мышей // Материалы

конференции JIomohocob-2009. Подсекция «Цитология». С. 14-15. http://lomonosov-msu.ru/archive/Lornonosov_2009/cytol-2009.pdf;

50. Мамина В.П., Шейко Л.Д. Влияние ионизирующего излучения и ксенобиотиков на сперматогенный эпителий лабораторных животных // Гигиена и санитария. 2004. №6. С. 24-27;

51. Медведев Ю.А., Турганбаев Ж.Т. Изменения в семенниках крыс при кислородном голодании // Арх. Пат. 1973. Т. 35. № 7. С. 56-59;

52. Меркулов Г.А. Курс патологической техники. Ленинград.: Медгиз, 1961. 543 е.;

53. Черствый Е.Д., Летковская Т.А., Портянко A.C., Захарова В.А. Метод определения послеоперационного прогноза у больных раком простаты на основе иммуногистохимического выявления в опухоли биомолекулярных маркеров (инструкция по применению) / Минск, 2008. Министерство здравоохранения Республики Беларусь. 27 июня 2008 г. Регистрационный № 088-1107;

54. Михайлова И.В., Смолягин А.И., Ермолина Е.В.,. Боев М.В, Боев В.М. Особенности биологического действия бихромата калия и бензола на крыс Вис-тар // Вестник Оренбургского Государственного Университета. -2005. №12. С.85-88;

55. Козлова А.Н,. Вахитов Э.М., Безносик Р.В. и др. Морфофункциональная реорганизация эпителия воздухоносных путей крыс при их интратрахеаль-ном инфицировании бактерими с антилактоферриновой активностью // Вестник ОГУ. 2012. №1 (137). Р. 185-188;

56. Васильева С.Г., Мхитаров В.А., Косырева A.M., Макарова О.В. Морфофункциональная характеристика семенников крыс Wistar при воздействии липо-полисахарида в условиях гиперандрогенемии // Российский медико-биологический вестник, 2011. № 2. С. 1-6. (http://www.vestnik.rzgmu.ru);

57. Науменко Е.В. Модификация функций гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы взрослых животных, вызванные воздействиями в раннем онтогенезе //Нейроэндокринология. СПб: Изд-во РАН. 4.2. 1994. С. 152-181;

58. Никитин А.И. Вредные факторы среды и репродуктивная система человека. СПб.: «Элби-СПб», 2005. 216 е.;

59. Нишлаг Э., Бере Г.М. Андрология. Мужское здоровье и дисфункция репродуктивной системы. М., 2005. 551 е.;

60. Новиков Д.А., Новочадов В.В. Статистические методы в медико-биологическом эксперименте (типовые случаи). Волгоград: Издательство ВолГМУ, 2005. 84 е.;

61. Пальцев М.А., Кветной И.М. Руководство по нейроиммуноэндокринологии. М.: Медицина, 2008. 512 е.;

62. Пат. 2203956 Российская Федерация, МПК C12Q1/02. Способ определения антигистоновой активности / Бухарин О.В., Плотников А.О., Немцева Н.В., Сгибнев A.B.; заявитель и патентообладатель Институт КВС УрО РАН. - № 2001133150/13; заявл. 16.12.2001; опубл. 10.05.2003, Бюл. №3.-Зс.: илл.

63. Петров C.B., Райхлина Н.Т. Руководство по иммуногистохимиче-ской диагностике опухолей человека. Казань: Титул, 2003. 456 е.;

64. Пирс Э. Гистохимия теоретическая и прикладная. Пер. с англ. М., 1962. 962 е.;

65. Плотников А.О. Механизмы формирования протозойно-бактериальных ассоциаций в водных экосистемах (экспериментальное исследование) Авто-реф. ... дис. канд. мед. наук. Оренбург, 2002. 22 е.;

66. Подковкин В.Г., Иванов Д.Г. Изменение показателей метаболизма коллагена у крыс с различным эмоциональным статусом при остром стрессе // Успехи современного естествознания. 2008. №11. URL: http://www.rae.rU/use/pdff2008/ll/3.pdf;

67. Поленов A.JT. Константинова М.С., Гарлов П.Е. Гипоталамо-гипофизарный нейроэндокринный комплекс. Нейроэндокринология. СПб.: Издат-во РАН, 1994. 4.2. С.139-186;

68. Поленов A.JI. Нейроэндокринология. СПб.: Изд-во РАН, 1993. 4.1. 229 е.;

69. Потапов В.А., Ивах В.И., Пащенко С.А., Куликовская C.B. Оценка влияния комбинированного орального контрацептива Линдинет 20 на механизмы ре-

гуляции пролиферативных процессов при эндометриоидной болезни // Укр. Мед. Часопис., 2012. № 5 (91) 1Х/Х URL: http://www.umj.com.ua/wp-content/uploads/2012/10/2987.pdf?upload=;

70. Правила проведения лабораторных исследований в области ветеринарии: приказ Минсельхоза РФ от 5 ноября 2008 г. № 490;

71. Приказ от 23 августа 2010 г. N 708н Об утверждении правил лабораторной практики Министерство здравоохранения и социального развития Российской Федерации (Зарегистрировано в Минюсте РФ 13 октября 2010 г. N 18713);

72. Райцина С.С. Сперматогенез и структурные основы его регуляции. М.: Наука, 1990.207с.;

73. Райцина С.С. Травма семенника и аутоиммунитет. - М.: Медицина, 1970. 183 е.;

74. Рогов A.B. Обоснование поиска стресс-протективных веществ среди объектов растительного происхождения // Материалы II Всесоюзной конференции «Химия и технология растительных веществ». Казань, 2002. С. 130-131;

75. Саркисов Д.С. Общие закономерности компенсаторно- приспособительных реакций и их структурного обеспечения. Материальные основы надёжности биологических систем / В кн. Структурные основы компенсации и адаптации нарушенных функций. М.: Медицина, 1987. С. 36-57;

76. Саркисов Д.С., Петрова Ю.Л. Микроскопическая техника: руководство. М.: Медицина, 1996. 544 е.;

77. Саркисов Д.С., Ремизов П.И. Воспроизведение болезней человека в эксперименте. М., 1960. 780с.;

78. Селиванова Е.А. Симбиотические связи микроорганизмов в планктонных сообществах соленых водоемов: Автореф. ... дис. канд. мед. наук. Оренбург, 2007. 22 е.;

79. Селье Г. Очерки об адаптационном синдроме — М.: Медгиз, 1960. 254 е.;

80. Семенов A.B. Характеристика антагонистической активности бактерий при межмикробных взаимодействиях: Автореф ... канд. биол. наук. Оренбург. 2009. 22 е.;

81. Семченко В.В., Барашкова С.А., Ноздрин В.И., Артемьев В.Н. Гистологическая техника. Омск-Орел: Омская областная типография, 2006. 272 е.;

82. Сизоненко M.J1. Морфофункциональная характеристика семенников потомства самок крыс с хроническим поражением гепатобилиарной системы различного генеза: Автореф ... канд. биол. наук. Оренбург. 2006. 22 е.;

83. Сизоненко M.JL, Брюхин Г.В. Становление генеративной функции семенников потомства самок крыс с хроническим поражением печени // Проблемы репродукции. 2009. № 1. С. 16-19;

84. Соколов В.Ю. Изменение структуры хроматина под влиянием внутриядерных бактерий с антигистоновой активностью // Бюлл. экспер. биолог, и мед.-1993,-№ П.- С. 536-538.

85. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. М. О. Биргера. - 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1982. - 464 с.

86. Стадников A.A., Шевлюк H.H. Морфофункциональная характеристика гипоталамо-гипофизарно-гонадной системы крыс-самцов в условиях эмоционально-болевого стресса (ЭБС). Морфология. 1996. № 5. 38-42 с.

87. Стадников A.A. Нейробиологические аспекты регуляции репаративных гистогенезов //Морфология. 1995. Т. 108. № 2. С. 16-19;

88. Стадников A.A., Бухарин О.В. Гипоталамическая нейрорегуляция и структурно-функциональный гомеостаз про- и эукариот (морфологические основы реактивности, пластичности, регенерации). - Оренбург: ОрГМА, 2012. - 296 е.;

89. Стадников A.A., Бухарин О.В. Гипоталамическая нейросекреция и структурно-функциональный гомеостаз про- и эукариот (морфологические основы реактивности, пластичности и регенерации). Оренбург: ОрГМА, 2012. 296 е.;

90. Стадников A.A., Гипоталамические факторы регуляции процессов роста, пролиферации и цитодифференцироки эпителия аденогипофиза. Екатеринбург: УрО РАН, 1999. 140 е.;

91. Стадников A.A., Ковбык J1.B., Карташова O.J1. Фундаментальные и прикладные аспекты нейроэндокринной регуляции про- и эукарот // Вестник росс, акад. мед. наук. 2002. № 3. С. 48-51;

92. Стадников A.A., Роль гипоталамических нейропептидов во взаимодействии про- и эукариот. Структурно-функциональные аспекты. Екатеринбург: УрО РАН. 2001.244 е.;

93. Стадников A.A., Шевлюк H.H., Козлова А.Н. О реализации апоптозной доминанты нейросекреторных клеток крупноклеточных ядер гипоталамуса млекопитающих в условиях инфицирования организма // Сб. научных трудов 8-й Всероссийской конф. по патологии клетки. М.: МДВ, 2010. С. 238-240;

94. Стадников A.A., Шевлюк H.H., Козлова А.Н. Эндоцитосимбиоз микроорганизмов в эукариотических клетках млекопитающих и факторы его регуляции // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2006. №4. С. 4649;

95. Сухоруков B.C. Восстановление сперматогенного пласта // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1988. № 5. Том XCIV. С. 76-83;

96. Ташкэ К. Введение в количественную цито-гистологическую морфологию. Бухарест.: Изд-во Академии наук СРР, 1980. 192 е.;

97. Тер-Аванесов Г.В. Андрологические аспекты бесплодного брака: Автореф. дисс. докт. мед. наук. М., 2002. 45 е.;

98. Тер-Аванесов Г.В. Современные аспекты диагностики и лечения мужского бесплодия // Бесплодный брак. Под ред. В.И. Кулакова. — М: ГЭОТАР - Медиа, 2005. С. 279;

99. Тиктинский O.JI. Руководство по андрологии. Л.: Медицина, 1990. 416 с.: ил.;

100. Уикли Б. Электронная микроскопия для начинающих. Изд. Мир. 1975 324с.;

101. Утеыин В.В. Гигиеническая характеристика хрома и бензола и морфофунк-циональные аспекты их воздействия на организм в условиях эксперимента. Автореф. дис.... канд. мед. наук. - Оренбург, 2002. - 24 е.;

102. Уткина Т.М. Динамика факторов персистенции микроорганизмов под влиянием соединений с антиоксидантной активностью. Дис. ... канд. биол. наук. -Оренбург, 2010;

103. Ухов Ю.И., Астраханцев А.Ф. Морфометрические методы в оценке функционального состояния семенников. Архив анатомии, гистологии и эмбриологии, 1983. Т. LXXXTV. №3. с. 66-72;

104. Филаретов А.А. Принципы и механизмы регуляции гипофизарно - адрено-кортикальной системы. Д.: Наука, 1987. 166 е.;

105. Шевлюк Н.Н., Стадников А.А., Боков Д.А., Блинова Е.В. Гипоталамо-гипафизарно-гонадная система млекопитающих при воздействии на организм дестабилизирующих факторов различной интенсивности // Вестн. Оренб. гос. ун-та. 2007. № 78. С. 185-187;

106. Шевлюк Н.Н., Стадников А.А. Интерстициальные эндокриноциты (клетки Лейдига) семенников в постнатальном онтогенезе млекопитающих // Вопросы морфологии XXI века. Вып. 2. СПб.: Издательство ДЕАН. 2010. С. 192195;

107. Шевлюк Н.Н., Руди В.Н., Стадников А.А. Биология размножения наземных грызунов из семейства бельчьих (морфологические, физиологические и экологические аспекты). Екатеринбург: УрО РАН, 1999. 146 е.;

108. Шевлюк Н.Н., Стадников А.А. Клетки Лейдига семенников позвоночных (онтогенез, ультраструктура, цитофизиология, факторы и механизмы регуляции). Оренбург: Издательство ОрГМА, 2010. 484 е., илл.;

109. Ярилин А.А. Иммунология. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. 752 е.; Adashi E.G., Hsuch A J.W. Direct inhibition of testicular androgen biosynthesis revealing anti-gonadal activity of neurohypophysial hormones. Nature, 1991, v. 293, № 5834, p. 650-652.

111. Aly H.A.A., Lightfoot D.A., El-Shemy H.A. Bacterial lipopolysaccharide-induced oxidative stress in adult rat Sertoli cells in vitro Toxicology in Vitro. 2010. № 24. P. 1266-1272;

112. Anand P. [et al.] A novel role for lipid droplets in the organismal antibacterial response//eLife, 2012. № l:e00003.p. 1-18;

113. Andreu D., Rivas L. Animal Antimicrobial Peptides: An Overview // Biopolymers (Peptide Science), 1998. Vol. 47. P. 415-433 URL: http://www.upf.edu/uprot/_pdf/biopol_peptsci_rev98.pdf;

114. Anton E. Arrested apoptosis without nuclear fragmentation produced by efferent duct ligation in round spermatids and multinucleated giant cells of rat testis // Reproduction, 2003. № 125. P. 879-887;

115. Beutler B. Innate immunity: an overview Molecular Immunology. 2004. № 40 p. 845-859;

116. Bindhu M.P., Annamalai P.T. Combined effect of alcohol and cigarette smoke on lipid peroxidation and antioxidant status in rats // Indian J. Biochem. Biophys. 2004. №41. P. 40-44;

117. Bianco-Rodriguez J. Keep cycling or die: the role of germ cell apoptosis in spermatogenesis // Department of Cell Biology, School of Medicine, Valladolid University, Spain, 2006. http://www.androIogy.org/library/downloads/BR_full.pdf;

118. Bloch D.P. A catalog of sperm histones / Genetics, suppl., 1969.- № 61.- p. 93-111;

119. Bray T.M., Taylor C.G., Tissue glutathione, nutrition, and oxidative stress // Can. J. Physiol. Pharmacol. 1993. № 71. P. 746-751;

120. Brinkmann V. [et al.] Neutrophil Extracellular Traps Kill Bacteria. Science. 2004. №303. P. 1532-1535;

121. Burlibasa L. Chromatin architecture in spermatogenesis of some species of amphibians. / L. Burlibasa, L. Gavrila // Travaux du Museum national d'Histoire Naturelle «Grigore Antipa», 2005. - Vol. XLVIII. - p. 531-540;

122. Casas M.T., Ausio J., Subirana J.A. Chromatin fibers with different protamine and histone compositions. Experimental Cell Research, 1993,204 p. 192-197;

123. Cheung W.L. et al. Apoptotic phosphorylation of histone H2B is mediated by mammalian sterile twenty kinase // Cell. 2003. № 16; 113(4). p. 507- 517;

124. Clermont Y., Perey B. The stage of the cycle of the seminiferous epithelium of the rat: practical definitions in PA-Shiff-hematoxylin and hematoxilin-eosin stained sections. Rev. Canad. Biol., 1957. V.16. p. 451-526;

125. Corrales J. Antimicrobial Polypeptides, Piscidins and Histone-Like Proteins, in Important Aquacultured Fish and the Effect of Nutrition on their Expression and Susceptibility to Infection in Hybrid Striped (Sunshine) Bass (Morone saxatilis <$ x M. chrysops 9): A dissertation submitted in partial fulfillment of the Requirements for the degree of Doctor of Philosphy / North Carolina State University. Raleigh, North Carolina, 2008. URL: http://repository.lib.ncsu.edU/ir/bitstream/l 840.16/3541/1/etd.pdf;

126. Corriero A., Desantis S., Bridges C. R. et al. Germ cell proliferation and apoptosis during different phases of swordfish (Xiphias gladius L.) spermatogenetic cycle // Journal of Fish Biology, 2007. № 70. P. 83-99;

127. Dohle G.R., Diemer Т., Giwercman A., Jungwirth А., Кора Z., Krausz С. Мужское бесплодие / Пер.: K.A. Ширанов. Европейская ассоциация урологов. 2010. 68 е.; http://www.uroweb.org/gls/pdffrussian/9_Male_Infertility.pdf;

128. Dorrington Т., Villamil L., Gomez-chiarri М. Upregulation in response to infection and antibacterial activity of oyster histone H4 // Fish& Shellfish Immunology. 2010. P. 1-8;

129. European Association of Urology Guidelines on Male Infertility: The 2012 Update. Arnhem, Netherlands: European Association of Urology. http://www.uroweb.org/guidelines/online-guidelines. Accessed July 20, 2012;

130. Faldicova L. et al. Effects of nutrition, social factors and chronic stress on the mouse Leydig cell testosterone production // Vet. Med. 2001. Vol. 46. № 6. p. 160168;

131. Fernandes J.M.O. et al. Anti-microbial properties of histone H2A from skin secretions of rainbow trout, Oncorhynchus mykiss // Biochem. J. 2002. № 368. P. 611620;

132. Flickinger Ch. J., Baran M.L., Howards S.S., Herr J.C. Degeneration of the Seminiferous Spithelium Following Epididymal Obstruction in Prepubertal Rats // The Anatomical Record, 1999. № 254. P. 76-86;

133. Frey K.A. Male reproductive health and infertility. Primary Care Clinics Office Practice. 2010. №37. P. 643;

134. Frohm M. et al. Biochemical and antibacterial analysis of human wound and blister fluid // Eur. J. Biochem., 1996. № 237. p.86-92;

135. Gartler, S.M. Normal histone modifications on the inactive X chromosome in ICF and Rett syndrome cells: implications for methyl-CpG binding proteins. BMC Biology, 2004. Vol.2 №21. p.(www.biomedicalcentral.com);

136. Govin J. The role of histones in chromatin remodelling during mammalian spermi-ogenesis // Eur. J. Biochem. 2004. № 271. p. 3459-3469;

137. Hamada A., Esteves S., Agarwal A. Unexplained Male Infertility - Looking Beyond Routine Semen Analysis. European Urological Review. 2012. №7 (1). p. 90-96;

138. Hancock R.E., Scott M.G. The role of antimicrobial peptides in animal defenses. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2000 Vol. 97. № 16. 8856-8861;

139. Harris F., Dennison S.R., Phoenix D.A. Anionic Antimicrobial Peptides from Eukaryotic Organisms // Current Protein and Peptide Science, 2009. № 10. P. 585606;

140. Hedger M.P. Testicular leukocytes: what are they doing? // Rev. Reprod., 1997, № 2, p. 38-47;

141. Hermo L. et al. Surfing the Wave, Cycle, Life History, and Genes / Proteins Expressed by Testicular Germ Cells. Part 1: Background to Spermatogenesis, Spermatogonia, and Spermatocytes // Microscopy research and technique. 2010. № 73. P.243-278;

142. Hess R.A. Spermatogenesis, Overview // Encyclopedia of Reproduction. V.4. University of Illinois atUrbona. Academic Press. 1999. p.539-545;

143. Hirsch J.G. Bactericidal action of histone // J. Exp. Med. 1958. № 108. P. 925-944;

144. Holstein A.-F., Schulze W., Davidoff M. Understanding spermatogenesis is a prerequisite for treatment // Reproductive Biology and Endocrinology 2003, 1:107 (http://www.rbej .com/content/1/1/107);

145. Hooley R.P., Paterson M., Brown P. et al. Intra-testicular injection of adenoviral constructs results in Sertoli cell-specific gene expression and disruption of the seminiferous epithelium / Reproduction, 2009. № 137. p. 361-370;

146. Jenuwein T., Allis C.D. Translating the histone code. Science, 2001. №10. p. 10741080;

147. Johnson L., Varner D.D., Roberts M.E., et al. Efficiency of spermatogenesis: a comparative approach // Animal Reproduction Science, 2000. № 60-61. P. 471480;

148. Kapil N., Chowdhury A.R., Swarup A. Role of ACTH on the cytomorphology of testes of the immature rat. Experientia, 1979. V. 35. №12, p. 1606-1607;

149. Kaya M. Sertoli cells and various types of multinucleates in the rat seminiferous tubules following temporary ligation of the testicular artery // J. Anat., 1986, № 144, P. 15-29;

150. Kerr J.B., Sharpe R.M. Macrophage activation enhances the human chorionic gonadotrophin-induced disruption of spermatogenesis in the rat. J Endocrinol, 1989. № 121. p. 285-292;

151. Khattab F.I.Kh. Histological and Ultrastructural Studies on the Testis of Rat after Treatment with Aluminium Chloride // Australian Journal of Basic and Applied Sciences, 2007. № 1(1). P. 63-72;

152. Kimbrell D.A., Beutler B. The evolution and genetics of innate immunity. 2001 Nature. V.2 p.256-267;

153. Knoll B.W. Stress and the endocrine hypothalamus-pituitaiy-testis system: a review. Vet. Q., 1991, v. 13, № 2, p. 104-114;

154. Kon Y., Endoh D. Morphological Study of Metaphase-Specic Apoptosis in MRL Mouse Testis // Anat. Histol. Embryol, 2000. № 29. P. 313-319;

155. Kornberg R.D. Chromatin structure: a repeating unit of histones and DNA // Science.- 1974.-V. 184.-P. 868-871;

156. Leblond C., Clermont, Y. Definition of the stages of the cycle of the seminiferous epithelium in the rat // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1952. № 55, p. 548-573;

157. Lewis J.D., Abbott, D.W. & Ausio, J. A haploid affair: core histone transitions during spermatogenesis. Biochem. Cell Biol. 2003. № 81, 131-140;

158. Li Ch.-H., Zhao J.-M., Song L.-Sh. A review of advances in research on marine molluscan antimicrobial peptides and their potential application in aquaculture // Molluscan Res. 2009. № 29(1). P. 17-26;

159. Lovejoy D.A., Barsyte D. Sex, stress and reproductive success. Wiley-Blackwell, 2011.P. 188;

160. Ludwig M. Diagnosis and therapy of acute prostatitis, epididymitis and orchitis // Andrologia, 2008. № 40. P. 76-80;

161. Lysiak J J. et al. Essential role of neutrophils in germ cell-specific apoptosis following ischemia/reperfusion injury of the mouse testis // Biology of Reproduction, 2001. №65. p. 718-725;

162. Marshall S.H., Arenas G. Antimicrobial peptides: A natural alternative to chemical antibiotics and a potential for applied biotechnology // Electronic Journal of Biotechnology. 2003. Vol. 6 № 2. URL: http://www.ejbiotechnology.info/content/vol6/issue3/full/l/l.pdf;

163. McCullough K.C., Summerfield A. Basic Concepts of Immune Response and Defense Development // ILAR Journal. 2005. V. 46. №. 3. p. 230-240;

164. Mihajlovic M.M., Lazaridis Th.T. Charge distribution and imperfect amphipathici-ty affect pore formation by antimicrobial peptides. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Bioenergetics. 2012. № 1818(5). P.1274-83. doi: 10.1016;

165. Mori Ch., Nakamura N., Dix D.J., et al. Morphological Analysis of Germ Cell Apoptosis During Postnatal Testis Development in Normal and Hsp70-2 Knockout Mice //Developmental dynamics, 1997. № 208. P.125-136;

166. Mortons D., Weisbrodew E., Wyder E. et al. Spermatid Giant Cells, Tubular Hypospermatogenesis, Spermatogonial Swelling, Cytoplasmic Vacuoles, and Tubular Dilatation in the Testes of Normal Rabbits // Vet. Pathol, 1986. № 23. P. 176183;

167. Nagaosa K., Nakashima Ch., Kishimoto A., Nakanishi Y. Immune response to bacteria in seminiferous epithelium // Society for Reproduction and Fertility. 2009. P. 1470-1626;

168. Noga E.J., Fan Zh., Silphaduang U. Host site of activity and cytological effects of histone-like proteins on the parasitic dinoflagellate Amyloodinium ocellatum // Dis Aquat Org, 2002. Vol. 52. p. 207-215;

169. O'Bryan M. K. et al. Bacterial lipopolysaccharide-induced inflammation compromises testicular function at multiple levels in vivo // Endocrinology, 2000. Vol. 141, № 1. p. 238-246. http://www.mayoclinic.com/health/male-infertility/DS01038;

170. Parseghian M.H., Luhrs K.A. Beyond the walls of the nucleus: the role of histones in cellular signaling and innate immunity // Biochem. Cell Biol. - 2006. - № 84. -P. 589-604;

171. Patel Z.P. et al. Male factor assessment in infertility. Medical Clinics of North America. 2011. № 95. P. 223;

172. Rashed R.-M.A., El-Alfy Sh.H., Mohamed I.K. Electron microscopic Study on the Effects of Melatonin on Early Spermatids in the Rat Testis // J. Animal and Veterinary Advances, 2011. № 10 (16). P. 2140-2148;

173. Robinette D. W., Noga E. J. Histone-like protein: a novel method for measuring stress in fish // Dis Aquat Org. 2001.Vol. 44. p. 97-107;

174. Rose F.R.A.J. [et al.] Potential role of epithelial cell-derived histone HI proteins in innate antimicrobial defense in the human gastrointestinal tract // Infection and immunity, 1998. Vol. 66. № 7. p. 3255 - 3263;

175. Rowe PJ. [et al.] WHO Manual for the Standardized Investigation, Diagnosis and Management of the Infertile Male. Cambridge: Cambridge University Press. 2000. 91 p.;

176. Schroder J.-M. Fatty Acids & Inflammation. Skin Diseases. Switzerland: Birkhauser Verlag AG, 1999. 250 p.;

177. Selye H. The stress of life. N.Y.: Mc Craw-Hill Book, 1976:

178. Shalaby N.M., Afifi O. K. Effect of experimentally induced ischemic-reperfusion on the testis and the possible protective role of L-carnitine in the adult albino rat; histological, histochemical and immunihistochemical study. Egypt. J. Histol., 2008. N. 2. Vol. 31. p. 233-244.

179. Smith V. J., Desbois A. P., Dyrynda E. A. Conventional and Unconventional Antimicrobials from Fish, Marine Invertebrates and Micro-algae // Mar. Drugs. 2010. №8. p. 1213-1262;

180. Steinberger A., Klinefelter G. Sensitivity of Sertoli and Leydig cells to xenobiotics in in-vitro models //Reproductive Toxicol. 1993. № 7(Suppl. 1). P. 23-37;

181. Steinman R.M., Banchereau J. Taking Dendritic Cells into Medicine. Nature, 2007. №449. P. 419-426;

182. Steinstraesser L. et al., Host defense peptides and their antimicrobial-immunomodulatoiy duality. Immunobiology (2010), doi:10.1016/j.imbio.2010.07.003. URL: http://glutoxim.ru/literat/Steinstraesser%20Immunobiology%202010.pdf;

183. Strahl B.D., Allis C.D. The language of covalent histone modifications. Nature, 2000. №43. p.41-45;

184. Stumpp T., Sasso-Cerri E., Freymueler E., Miraglia S.M. Apoptosis and Testicular Alterations in Albino Rats Treated With Etoposide During the Prepubertal Phase // The anatomical record. Part A, 2004. № 279A. P. 611-622;

185. Tachiwana H., Osakabe A., Kimura H., Kurumizaka H. Nucleosome formation with the testis-specific histone H3 variant, H3t, by human nucleosome assembly proteins in vitro //Nucleic Acids Research. 2008. Vol. 36. № 7. p. 2208-2218;

186. Tossi A., Sandri L. Molecular diversity in gene-encoded, cationic antimicrobials polypeptides // Current Pharmaceutical Design. 2002. Vol. 8. № 9. p. 743-761;

187. Tsao H.S., Spinella S. A., Lee A.T., Elmore D.E. Design of novel histone-derived antimicrobial peptides // Peptides. - 2009. - № 30. - p. 2168-2173

188. Turner B.M. Histone acetilation and an epigenetic code. Cell & Molecular Biology BioEssays, 2000. Vol.22. №9. p.836-845;

URL: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3319260/;

190.

191.

192.

193.

Verhoven G. Paracrine interaction between the interstitial and tubular compartment

of the testis. Bull. Assoc. anat., 1991, v. 75, № 228, p. 167-169;

Wang H.H., Schaffner D.W. Antibiotic Resistance: How Much Do We Know and

Where Do We Go from Here? Appl Environ Microbiol. 2011. N.77(20). p.7093-

7095;

Wyllie A.H., Kerr J.F.R., Currie A.R. Cell death: the significance of apoptosis. Int. Rev. Cytol. 1980. № 68. P. 251-307;

Yeung B.H.Y., Wan H.T., Law A.Y.S., Wong Ch.K.C. Endocrine disrupting chemicals multiple effects on testicular signaling and spermatogenesis // Spermatogenesis, 2011.№ 1:3. P. 231-239;

Zasloff M. Antimicrobial peptides of multicellular organisms //Nature. 2002. Vol. 415. №6870. p. 389-395.