Структура поверхности эпителиальных клеток шейки матки, инфицированных вирусом папилломы человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, кандидат биологических наук Яковлева, Валерия Анатольевна

• Яковлева, Валерия Анатольевна
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Яковлева, Валерия Анатольевна

СОДЕРЖАНИЕ.

Список используемых сокращений

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПАПИЛЛОМАВИРУСОВ. 1О

1.1. Общие сведения о вирусе папилломы.Ю

1.2. Структура и организация генома.

1.3.Репликация вируса в эпителиальных клетках.

ГЛАВА 2. ИЗМЕНЕНИЕ МОРФОЛОГИИ КЛЕТКИ ПОД ВЛИЯНИЕМ

ПАПИЛЛОМАВИРУСОВ.

2.1. Цитоморфология и гистоморфология нормального плоского эпителия.

2.2. Цитоморфология и гистоморфология клеток плоского эпителия, инфицированных вирусом папилломы.

2.3. Цитологические и гистологические критерии злокачественности.

ГЛАВА 3. УЛЬТРАСТРУКТУРА КЛЕТОК В НОРМЕ ПАТОЛОГИИ.

3.1. Просвечивающая электронная микроскопия клеток плоского эпителия в норме и при вирусной патологии.

3.2. Сканирующая электронная микроскопия. Плоский эпителий.

3.3. Атомно-силовая микроскопия.

3.3.1. Принцип метода атомно-силовой микроскопии.

3.3.2. Атомно-силовое исследование биологических объектов.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

1.1. Материалы.

1.2. Кольпоскопия.

1.3. Цитоморфологический метод.

1.3.1. Традиционный цитологический метод.

1.3.2. Метод жидкостной цитологии с применением системы «Цитоспин».

1.4. Гистоморфологический метод.

1.4.1. Подготовка препаратов для гибридизации in situ.

1.5. Подготовка материала для исследования методом полимеразной цепной реакции.

1.6. Подготовка препаратов для исследования методом просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ).

1.7. Подготовка препаратов для исследования методом сканирующей электронной микроскопии.

1.8. Подготовка препаратов для исследования поверхности клеток методом атомно-силовой микроскопии.

1.8.1. Использование окрашенного материала.

1.8.2. Использование неокрашенного материала.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

ГЛАВА 2. ЦИТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

В СОПОСТАВЛЕНИИ С КЛИНИЧЕСКИМИ ДАННЫМИ.

2.1. Характеристика клинических данных исследуемых пациенток и выявляемость койлоцитоза.

2.2. Анализ способов получения материала.

2.3. Выявление цитоморфологических признаков ПВИ и сопоставление с результатами молекулярно-биологических методов.

2.4. Определение степени патологических изменений плоского эпителия.

ГЛАВА 3. ЦИТОМОРФОЛОГИЯ КЛЕТОК ПЛОСКОГО ЭПИТЕЛИЯ

В СОЧЕТАНИИ С АТОМНО-СИЛОВЫМ ИССЛЕДОВАНИЕМ.

3.1. Контрольные образцы - цитология, атомно-силовая микроскопия, сканирующая электронная микроскопия.

3.2. Плоский эпителий, измененный папилломавирусной инфекцией -цитология, атомно-силовая микроскопия.

3.3. Клетки плоскоклеточного рака с ороговением - цитология,

АСМ-исследование.

ГЛАВА 4. ГИСТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И УЛЬТРАСТРУКТУРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ БИОГГГ АТОВ.

4.1. Гистологическое исследование биопсий.

4.2. Ультраструктурное исследование биопсий.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Структура поверхности эпителиальных клеток шейки матки, инфицированных вирусом папилломы человека»

Актуальность проблемы Папилломавирусные инфекции (ПВИ) широко распространены среди людей, животных, вызывая тяжелые патологии слизистой оболочки и кожи. В основном это кондиломы и папилломы слизистых оболочек, бородавки и папилломы кожи, опухоли или опухолеподобные образования различной локализации. Как было установлено Н. Цурхаузеном в 1976 году [30], именно инфицирование эпителия шейки матки вирусом папилломы человека (ВПЧ) 16 типа создает условия развития рака этого органа.

По данным Международного агенства по изучению рака, ежегодно в мире регистрируется более 370 ООО новых случаев рака шейки матки, умирает от него около 190000 женщин [48]. Каждый день в России от рака шейки матки умирает 17 человек [60]. Наряду с доброкачественными опухолеподобными разрастаниями, вызываемыми папилломавирусами низкой онкогенной группы (6, 11 типы и другие), папиллома-вирусы, вызывающие развитие рака шейки матки, относятся к высокоонкогенным вирусам (16, 18, 31, 45 типы) [39]. Еще в 1996 году в информационном бюллетене Всемирной организации здравоохранения было официально отмечено, что вирусы папилломы человека 16 и 18 типов являются особо канцерогенными [48], поэтому диагностика папиллома вирусной инфекции (ПВИ) была и остается актуальной.

Существуют различные методы диагностики ПВИ, среди которых особое место занимает скрининговый цитологический метод, получивший широкое распространение, как в России, так и за рубежом, который позволяет выявлять как морфологические признаки ПВИ, дисплазии и рак. Метод прост в исполнении, не требует длительного времени для постановки диагноза и дорогостоящей аппаратуры. Цитологический метод высокоспецифичен, то есть в цитологическом препарате при выявлении койло-цитов, наличие ПВИ подтверждалось в 95-98% случаев (51). Однако выявляемость койлоцитоза — основного морфологического признака ПВИ, низкая - до 30% [15, 95].

С другой стороны, существующие в настоящее время молекулярно-биологические методы диагностики ПВИ: полимеразная цепная реакция (ПЦР), метод Hybrid Capture («Digene-TecT») и другие выявляют наличие ДНК ВПЧ в материале, от больных с высокой точностью и чувствительностью [58, 16], но при этом теряется информация, как о локализации отдельных клеток, несущих вирусную ДНК, так и о степени патологических изменений эпителия. Поэтому следует иметь в виду, что молекулярно-биологические методы не заменяют цитологический метод, а применяются комплексно, в-сочетании с ним, что позволяет поставить наиболее полный и обоснованный диагноз. Вместе с тем, сами, морфологические методы диагностики ПВИ- цитологический и, в меньшей! степени, гистологический метод не дают полную информацию об изменении клеточных структур под воздействием вируса: Это связано с тем, что анализу подвергается двухмерное изображение клеток эпителия, пораженного вирусом, и не включается в рассмотрение объемное изменение поверхности таких клеток, что могло бы дать дополнительные морфологические критерии оценки. Поэтому возникает необходимость в модификации цитологического метода, с целью получения дополнительных критериев характеристики исследуемого объекта. Очевидно, чтобы улучшить качество диагностики необходимо углублять наши знания по объекту исследования, а именно по топографии эпителиальной клетки, инфицированной вирусом.

Как известно, для исследования поверхности клетки используют сканирующую электронную микроскопию [82, 113], однако это дорогостоящий метод и к тому же к-1* требующий длительной подготовки образцов, что затрудняет его широкое использование в практической медицине. В настоящее время все большее применение находит, метод атомно-силовой микроскопии, позволяющий получить трехмерное изображение клетки, и изучить топографию ее поверхности. Этот метод, несомненно, было бы целесообразно использовать для исследования поверхности эпителиальных клеток с

Гц . цитоморфологическими признаками ПВИ:

Цели и задачи исследования

Цитоморфологическое исследование клеток плоского эпителия шейки матки в норме и при папилломавирусной патологии, структурное изучение их поверхности с помощью метода атомно-силовой микроскопии.

Исходя из этого, были поставлены следующие задачи: 1. Проведение цитологического анализа мазков с шейки матки пациенток, инфицированных вирусом папилломы человека (ВПЧ) и выявление клеток с морфологическими? признаками ПВИ: койлоциты, дискератоциты, паракератоциты, элементы пшеркера-тоза (чешуйки плоского эпителия, клетки с «тающими» ядрами) и сопоставление их с контрольными клетками при- учете клинических данных. Использование при этом в контрольными клетками при учете клинических данных. Использование при этом в материале для контроля на наличие ВПЧ методов молекулярной биологии: полиме-разной цепной реакции, гибридизации in situ.

2. Получение АСМ-изображений поверхности клеток с морфологическими признаками ПВИ и нормальных клеток плоского эпителия.

3. Создание усредненных моделей структуры поверхности клеток с морфологическими признаками ПВИ и клеток без признаков патологии по результатам АСМ-исследования и сопоставление их с данными цитологического анализа.

4. Получение АСМ-изображений поверхности клеток с морфологическими признаками плоскоклеточного рака с ороговением и создание усредненной модели структуры поверхности этих клеток.

5. Изучение гистоморфологии и ультраструктуры клеток поверхностного и промежуточного слоев плоского эпителия шейки матки, инфицированного ВПЧ.

Научная новизна работы Нами впервые применен и адаптирован к клеткам плоского эпителия в норме и патологии метод АСМ, позволивший исследовать структуру поверхности клеток нормы, с цитоморфологическими признаками вирусной и раковой патологии. Обнаружены существенные топографические различия структуры поверхности таких клеток, по которым можно определять степень поражения клетки.

Практическая значимость работы В работе показана важность способа и зоны получения материала для цитологической диагностики ПВИ гениталий. При этом цитоморфологические признаки ПВИ (койлоцитоз, дискератоз, паракератоз, гиперкератоз) можно дополнить анализом тех же самых цитологических препаратов методом АСМ. Разработаны трехмерные модели структуры поверхности клеток с цитоморфологическими признаками ПВИ, которые позволяют сопоставлять исследуемые клетки с ними и выявлять клетки с вирусной патологией.

Апробация работы Результаты работ были представлены на следующих съездах и пленумах:

- 3-й съезд Клинических цитологов России (Самара, июнь 1999 г);

- Международная конференция «Microbicides», (Вашингтон, 13-16 марта 2000 г);

- 3-й Всероссийская научно-практическая конференция «Генодиагностика в современной медицине» отдела молекулярной биологии (г. Москва, 25 - 27 января 2000 г);

- Заседание Пленума Ассоциации клинических цитологов России (Москва, 2006 г.);

- Заседание Первой Всероссийской Школы-семинара «Современные достижения био-наноскопии» (Москва, МГУ, 11-17 июня 2007 г.);

- Заседание Пленума Центрального Исполнительного Совета Ассоциации Клинических цитологов России (г. Черноголовка, 6 -7 декабря 2008 г);

- Заседание Форума по нанотехнологии (Москва, 3-5 декабря 2008 г).

В завершенном виде результаты диссертационной работы были доложены и обсуждены на совместном заседании отдела молекулярной вирусологии и совета по предварительной экспертизе диссертационных работ ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН от 29 января 2009 г.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Оптимизация и адаптация метода АСМ к исследованию поверхности клеток плоского эпителия в норме и при вирусной патологии.

2. Изучение и сопоставление топографических изменений клеток плоского эпителия в норме и при патологии.

3. Разработка трехмерных моделей структуры поверхностей клеток с цитоморфологи-ческими признаками ПВИ: койлоцит, дискератоцит, паракератоцит, безъядерная чешуйка — элемент гиперкератоза

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 17 работ, в том числе 7 статей в реферируемых российских научных журналах и тезисы докладов в сборниках российских и международных конференций, три из которых причисляются к списку ВАК.

Объем и структура диссертации Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания использованных материалов и методов, 3 глав собственных исследований, заключения и выводов. Список литературы включает в себя 117 отечественных и зарубежных источников. Диссертация изложена на 108 страницах машинописного текста, включая 14 таблиц и 64 рисунка.

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Яковлева, Валерия Анатольевна

ВЫВОДЫ

1. При цитологическом исследовании соскобов с шейки матки выявлены клетки с морфологическими признаками ПВИ: койлоциты, дискератоциты, паракератоци-ты, элементы гиперкератоза. Осуществлена модификация способа получения материала, позволяющая обогатить его такими клетками.

2. Койлоцитоз отмечается чаще у ВПЧ-инфицированных пациенток с сочетан-ной патологией матки в 55,0% от общего числа исследуемых пациенток.

3. Выявлено, что койлоцитоз, в зависимости от онкогенности типов ВПЧ (данные ИТ TP), встречается достоверно чаще у пациенток с высокоонкогенными типами (44%) , чем с низкоонкогенными типами (27%) (п=191).

4. Впервые метод атомно-силовой микроскопии был применен и адаптирован к изучению структуры поверхности клеток плоского эпителия в норме и с папиллома-вирусной патологией.

5. Получены АСМ-изображения поверхности клеток с морфологическими признаками ПВИ, которые были сопоставлены с данными цитологического анализа. Впервые построены усредненные модели структуры поверхности таких клеток, которые дают дополнительную информацию о патологических изменениях клеток.

6. При цитологическом исследовании были выявлены клетки плоскоклеточного рака с ороговением. Получены АСМ-изображения поверхности этих клеток, создана усреднённая модель структуры поверхности.

7. Показано, что сигнал гибридизации in situ на гистологических препаратах, свидетельствующий о наличии вирусной ДНК, отмечался как в клетках с морфологическими признаками ПВИ, так и без них. Последнее свидетельствует о том, что процесс патологических изменений в этих клетках находится в начальной стадии.

8. Установлено, что метод просвечивающей электронной микроскопии, как скрининговый при диагностике ПВИ, малоперспективен, так как вирионы, по которым определяют инфекцию, созревают на завершающей стадии дифференцировки клетки эпителия, в тот момент, когда начинается активная деструкция последней. Это приводит к потере материала, необходимого для анализа.

99

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Мы показали в нашей работе, что при исследовании цитологическим методом мазков с шейки матки койлоцитоз отмечался в 34%, дискератоз в 4%, паракератоз в 1% и гиперкератоз в 4% случаев от общего количества исследуемых пациенток (п-191). Сравнивая наши данные с литературными, мы можем отметить, что по выявляемое™ койлоцитоза полученные результаты коррелируют с опубликованными [15, 95], в то время как по другим цитоморфологическим критериям ПВИ статистической информации мало опубликовано и поэтому ее трудно сопоставлять. При этом для того, чтобы получить адекватный мазок с выраженными признаками койлоцитоза, мы проводили забор материала с зоны стыка шейки матки и цервикального канала с использованием «жесткого» соскоба. Впервые нами это было отмечено в 1999 году и доложено на 3-м Всероссийском съезде Ассоциации Клинических цитологов России в Самаре. Позднее аналогичные результаты были опубликованы другими авторами [49, 59]. Характерным моментом, влияющим на выявление койлоцитов, является, как известно из литературы, тип ВПЧ.

Одни авторы утверждают, что койлоциты характерны для поражений с низким онкогенным типом ВПЧ [3], по результатам других авторов койлоцитоз чаще отмечался при высокоонкогенных типах ВПЧ [86]. Наши данные говорят о том, что особенно сильное влияние на этот процесс оказывает онкогенность конкретного типа ВПЧ. Для высокоонкогенных типов койлоциты выявлены в 44%, а для низкоонкоген-ных типов — 27% от общего количества обследованных пациенток. В целом, как показывают наши данные, койлоцитоз выявляется чаще пе только при высокой онкоген-ности, но и при сочетанной патологии матки.

Примененный нами метод атомно-силовой микроскопии к анализу поверхности с морфологическими признаками ПВИ позволил получить оригинальные результаты по структуре поверхности таких клеток и построить их трехмерные модели. Из литературы известно о применении атомно-силовой микроскопии к изучению клеток крови, кардиомиоцитов крыс [24, 29, 35, 46]. Однако нами впервые был применен этот метод к клеткам эпителиальной ткани с вирусной и раковой патологией. В результате этих исследований впервые появилась возможность сопоставить топографические изменения эпителиальной клетки с ее плоскостными изменениями, которые наблюдаются в цитологических препаратах. Развитие таких исследований дальше может повысить качество морфологической диагностики ПВИ и предрака шейки матки за счет дополнительной информации об исследуемом объекте.

Наши ультраструктурные исследования клеток плоского эпителия поверхностного и промежуточного слоев при вирусной патологии четко показали поэтапное появление околоядерного гало и значительную деформацию ядра. Нам не удалось выявить зрелые вирионы ВПЧ в таких искаженных ядрах, однако, в литературе есть единичные работы, авторы, которых наблюдали вирусоподобные частицы [84, 114]. На основании полученных нами результатов, а также анализа литературы, мы пришли к заключению, что скрининговая диагностика ПВИ, основанная на выявлении вирио-нов ВПЧ, с помощью ПЭМ, не может быть эффективной, так как зрелые вирионы появляются в клетке в момент её активной деструкции, что ведет к потере материала.

Полученные нами результаты показывают эффективность применения АСМ-метода при исследовании структуры поверхности эпителиальных клеток при вирусной и раковой патологии. В дальнейшем потребуется продолжение таких исследований, для того чтобы улучшить качество цитологической диагностики ПВИ за счет включения объемных характеристик патологически измененной клетки.

98

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Яковлева, Валерия Анатольевна, 2009 год

1. Башмакова М.А. Папилломавирусная инфекция.// Н. Новгород, 2002, 5-8.

2. Башмакова М.А., Савичева A.M. Папилломавирусная инфекция//. Москва, 2004,15.

3. Бебнева Т.Н., Прилепская В.Н. Папилломавирусная инфекция и патология шейки матки.// http://old.consolium-medicum.cjm/media/gynecology/01 -ОЗ/77/shtml/ 2001.

4. Бойчук Н.В., Исламов P.P. и другие Гистология.//Москва, Геотар-Мед, 2001, 78102, 466-483.

5. Болотова JI.C., Туганова Т.Н., Воробьева Л.И. и др. Цитологический скрининг рака шейки матки// Киев, 2007, стр.65-75, 110-115.

6. Большакова А.В. Сканирующая зондовая микроскопия бактериальных клеток// [e-mail]. Сборник тезисов. Первая Всероссийская Школа-семинар, Москва, МГУ, 11-17 июня 2007, 7.

7. Боровик А.С., Тарасова А.С., Яминский И.В. Использование атомно-силовой микроскопии для изучения живых клеток. Успехи современной биологии//, 2000, Т. 120, 2,217-224.

8. Васильев М.М., Богатырева ИИ, Котова JI.K., Белавин А.С. Современные аспекты папилломавирусной инфекции урогенитального тракта (клиника, диагностика, лечение)// ЦНИКВИ МЗ РФ, Москва, [e-mail]. Сентябрь 2001.

9. Гуменюк Е.К., д.м.н., зав. кафедры акушерства и гинекологии Петербургского ГУ. Роль вируса папилломы человека в возникновении гинекологической и онкологической naTonorHH.//ttp://roddom.oncgo.ru/doc/lee.htm. 09.05.2005.

10. Дубровин Е.В., Яминский И.В., Дрыгин Ю.Ф. Использование атомно-силовой микроскопии для исследования вирусов.// [e-mail], 2007, 9.

11. Заварзин А.А., Харазова А.Д. Основы общей цитологии.// Ленинград, 1982, 37-54.

12. Исаакян В.А. Микроскопия вчера, сегодня, завтра. Материал для конференций.// Москва, 2001.

13. Калантаевская К.А. Морфология и физиология кожи человека.// Киев, Здоровья, 1972, 30-52.

14. Киселев В.И. Вирусы папилломы человека в развитии рака шейки матки.// Москва, 2004., 28-32.

15. Киселев Г.А. Микромеханические биосенсоры на основе атомно-силовой микро-cKonHH//[e-mail], 2007, 11.

16. Клинов Д.В. Зондовая микроскопия ДНК и ДНК-белковых комплексов [e-mail], 2007, 12.

17. Кравченко А.Т. (редакция). Атлас морфологии вирусов//Москва, 1951, 47.

18. Краевский Н.А. и др. (редакция) Патолого-анатомическая диагностика опухолей человека.//Москва, Медицина, 1993, 198-259.

19. Краевский С.В., Волошин А., Дубровин Е.В. Изучение влияния бактериофагов на бактерии с помощью АСМ// [e-mail], 2007, 29.

20. Кухаренко JI.B., Гелис Л.Г., Лазарева И.В. Визуализация процессов адгезии и агрегации тромбоцитов методами// АСМ. [e-mail], 2007, 30.

21. Кухаренко JI.B., Циркунова Н. Г., Шман Т.В. Исследование поверхностной морфологии эритроцитов методами АСМ при остром лимфобластном лейкозе.// [e-mail], 2007, 60.

22. Лисицын Ф.В. Индикация ДНК вируса папилломы человека при кондиломатозе гениталий, папилломатозе гортани и мочевого пузыря, а также в опухолях этих органов// Диссертация, Москва, 2002, 42-45.

23. Мазуренко Н.Н. Роль вирусов папиллом в канцерогенезе шейки матки; Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва. // http://www.con-med.rU/media/onkology/0301/7.shtml

24. Маныкин А.А. Папилломавирусы. Медицинская вирусология. //Под ред. Д.К. Львова Москва, 2008, 269-276.

25. Маныкин А.А., Цилинский Я.Я., Ефимов А.Е., Лисицын Ф.В., Яковлева В.А. Изучение поверхности фибробластов человека методом атомной силовой микроскопии.// Новости клинической цитологии России, М., 2002, т.6, 3-4, 15-16.

26. Масюкова С.А., д.м.н., вед.науч.сотр. ЦНИКВИ. Инфекции, передаваемые половым путем// Фармацевтический вестник, май 2000, 17, 168,.

27. Матюхина Т.Г., Пантелей С.О., Кузнецова Т.А. Атомно-силовая микроскопия эритроцитарных мембран//БелСЗМ-6, Минск, 12-15 октября 2004, 97-101.

28. Мацко Н. Б. Исследование вирусов и антивирусных препаратов методами атомной силовой и просвечивающей электронной микроскопии.// Диссертация, Москва, 2001, 23-24, 47-50.

29. Меркулов Г.А. Курс патолого-гистологической техники//Ленинград, 1960, 5-20.

30. Михайлов А.Г., Демин В.В., Прохоров В.В. и др. Измерение персистентных длин молекул ДНК методами сканирующей зондовой микроскопии.// [e-mail], 2007,39.

31. Молочков В.А., Киселев В.И, Рудых И.В Папилломавирусная инфекция, пособие для врачей.// Москва, 2005, 5-29.

32. Невзорова Т.А., Коновалова О.А., Городничева Е.С. Исследование взаимодействия ДНК-гидролизиругощих антител с нуклеиновыми кислотами методом атомно-силовой микроскопии// [e-mail], 2007, 42.

33. Никитина И.А., Стародубцева М.Н., Кузнецова Т.Г. Исследование атомно-силовой микроскопии для изучения структур поверхностных слоев лимфоцитов человека.// [e-mail], 2007, 54.

34. Павлович С.А. Основы вирусологии.//Минск 2001, 171-172.

35. Петрова А.С., Птохова М.П. Руководство по цитологической диагностике опухолей человека// Москва, Медицина, 1976 , 8-9, 126-134.

36. Петрова А.С. Цитологическая диагностика опухолей и предопухолевых процессов.//Москва, Медицина, 1985, 5-6, 158-165.

37. Петрова А.С., Полонская Н.Ю. Практическая клиническая цитология.// Москва, 1997, 5-15.

38. Петрова С.В., Райхлина Н.Т. Руководство по иммунно-гистохимической диагностике опухолей человека// Казань, 2000, 26-30.

39. Пирс Э. Гистохимия.//Москва, 1956, 5-437.

40. Прилепская В.Н., Козаченко В.П. Роль вирусной инфекции в возникновении рака шейки матки// Сборник статей, Москва, 2004, 103-125.

41. Прилепская И.Н., Кондриков Н.И., Бебнева Т.Н. Папилломавирусная инфекция.// http://forum.womantalk.ru/index.php. 2005.

42. Райчев Р., Андреев В. Злокачественные опухоли кожи.// София, Медицина и физкультура, 1965., 5-6.

43. Савватеев М.Н. Особенности исследования биологических макромолекул методом атомно-силовой микроскопии// [e-mail], 2007, 47.

44. Саликова С.П., Стадников А.А., Никиян А.Н. Атомно-силовая микроскопия новая возможность в изучении кардиомиоцитов.//Вестник ОГУ, 1, 2003, 59-62.

45. Сальников А.С., Зайцев Б.Н., Рыжиков А.Б. Изучение взаимодействия вируса гриппа с аналогом клеточного рецептора белком фетуином с помощью атомно-силовой микроскопии.// sassalnicov@mailru, 2007, 49.

46. Саркисова Д.С., Перова Ю.Л. Микроскопическая техника, руководство.// Москва, 1996, 544.

47. Сахарова О.В., Нечушкин М.И. Роль вирусов папиллом человека в патогенезе шейки матки// http://images.nature.ru/pubd/2001/01/05/0001158683.

48. Сенчук АЛ., Дубоссарская З.М. Перинатальные инфекции// Москва, 2005, 159161.

49. Сопко Н.И., Максимова В.В. Современные представления о папиллломавирусной инфекции.// ttp://woman.health.ua.com/article\30.html/ 2006/

50. Союз педиаторов России. Злокачественные новообразования в России в 2006 году (заболеваемость и смертность.)// Москва, 2008, www.hpv-vaccine.ru.

51. Токарчук А. Вирусы папилломы человека, Copyright 2005.\\ Berk.msk.ru@ all rights reserved

52. Улумбекова Э.Г. Челышева Ю.А., Гистология.// 2001. 5-19, 40-44.

53. Цветкова Г.М., Мордовцева В.Н. Пато-морфологическая диагностика заболеваний кожи.// Москва, Медицина, 1986, 42-43, 262.

54. Ченцов Ю.С. Общая цитология// Москва, Издательство МГУ, 1995, 182-346.

55. Чиссов В.И. Давыдов М.И. Старинский В.В. Методология и организация скрининга рака шейки матки// Пособие для врачей, Москва, 2004, 3-29.

56. Шабалова И.П. Критерии диагностики заболеваний шейки матки.// Цитологический атлас, Москва, 2001, 69-73, 74-93.

57. Шабалова И.П., Касоян К.Т. Цитологическая диагностика заболеваний шейки матки.// Москва, Триада, 2006, 94-135.

58. Шапиро Н.А. Принципы цитологической диагностики злокачественных опухолей.//Москва, 2008, 168-170.

59. Шиллер-Волкова Н.Н., Никитина Н.И., Агамова К.А., Брин M.JI. Атлас Цитологическая диагностика злокачественных новообразований// Медицина, Москва, 1964., 9-16.

60. Яковлева В.А., Лисицын Ф.В., Маныкин А.А., Завалишина Л.Э. Анализ цитологических препаратов пациенток с различной патологией матки методом атомно-силовой микроскопии//. Новости клинической цитологии России, М., 2004, т.8, № 3-4, 70-71.

61. Яковлева В.А., Маныкин А.А. Эволюция цитоморфологического метода индикации вируса папилломы человека// Новости клинической цитологии России, 2005, т.9, №1-2,41-46.

62. Яковлева В.А., Маныкин А.А., Лисицын Ф.В., Конышева А.А. Возможности использования световой микроскопии в сочетании с атомно- силовой микроскопией для цитологической диагностики папилломавирусной инфекции// Медицина экстремальных проблем, 2008.

63. Яковлева В.А., Маныкин А.А., Лисицын Ф.В., Конышева Т.А. Использование атомно-силовой микроскопии для исследования цитоморфологических признаков папилломавирусной инфекции.// Вопросы вирусологии, 2009, №4.

64. Яковлева В.А., Маныкин А.А., Лисицын Ф.В., Гущина Е.А., Худицкая В.Н. Электронно-микроскопическое изучение клеток плоского эпителия шейки матки, пораженных папилломавирусной инфекцией, 2009, 1-2.

65. Яковлева В.А., СамсоноваЛ.В., КонышеваТ.А., Демкин В.В. Возможности цитологической диагностики папилломавирусной инфекции.// Новости клинической цитологии России, Том 3, №1-2/1999, 77.

66. Яминский И.В., Филонов А.С., Галлямов М.О. и др. Зондовая микроскопия: методы аппаратура и построение изображений. Сканирующая зондовая микроскопия биополимеров.//Москва, 1997 , Выпуск 1, 13-80.

67. Arakawa, М., Edanaga , М. and Tocunaga, J. The application of scanning electron microscopy to the histological diagnosis of renal biopsy specimens. In Scanning Electron Microscopy.// Chicago, IIT Research Institute, 1977, 171-178.

68. Boon Mathilde E.,Cecil H. Fox. Simultaneous Condyloma Acuminatum and Dysplasia of the Uterine Cervix// Acta Cytologica, 1981, v.25, n.4, 393-399.

69. M. Casas-Cordero and other. Origin of the Koilocyte in Condylomata of the Human Cervix.// Acta Cytologica, 1981, v. 25, 387-391.

70. Colin R. Laverty and other. The Significance of Noncondylomatous Wart Virus Infection of the Cervical Transformation Zone. A Review with Discussion of Two Illustrative Cases.//Acta Cytologica, 1978, v. 22, 195-201.

71. Cramer Hervey M., M.D., Skinner-Wannemuehler, B.S., C.T. (ASCP) and other. Cyto-morphologic Corrrelates of Human Papillomavirus Infection in the Normal Cervicovaginal Smear.//Acta Cytologica, 1999, V41, N.2, 261-268.

72. Saul Friedlander, M.D., New Method for Detecting Changes in the Surfaces of Human Exfoliated Cervical Cells with the Scanning Electron Microskope against Cervical Cance.r// Acta cytologyca, 1969, v 13, 288-281.

73. Georg Feichter, M.D., MIAC. Professor of Pathology, Specialist of Pathology. International Consensus Conference on the Figh. Obstetrics and Gynecology, Division of Gynecology.// Institute of Pathology ,Universitu Clinics, Basel, Swidzerland, 1999.

74. Grace T Mc Kee Ba, MB, B.S.Head of the Departament of Cytopathology Cytopatholo-gy Royal Surrey// County Hospital Coildhord, Surrey. 1997, Mosby-Wolfe.

75. Hills Ellen, B. Sc., Laverty Colin R, M.B., B.Sc., M.I.A.C. Electron Microscopic Detection of Papilloma Virus Particles in Selected Koilocytotic Cells in a Routine Cervical Smear.//Acta Cytologica, 1979, v.23, 53-56.

76. Howley P.M., Lowy D.R. Papillomaviruses and Their Replication.// Fied's Virology. 2001. Vol 2, Chapter 65. 2197-2228.

77. Howley P.M., Lowy D.R. Papillomaviruses.// Fied's Virology. 2001. Vol. 2, Chapter 66. 2229-2264.

78. Kaneshima S., M.D., F.I.A.C. An Application of Scanning Electron Microscopy to Cy-todiagnosis of Pleural and Peritoneal Fluids.// Acta Cytologica, 1978, v. 22, 490-499.

79. Kjaergaard J., M.D., Poulsen E.F., M.D. Scanning Electron Microscopy of Cotton Swab Smears From Ectocervix.// Acta Cytologica, 1977, v.21, p.68-71.

80. Dr. H.A.Kremer. Von der Displasie zum Carcinoma in situ. Referat 17.06.99 UFK Bo-chum.// http://www.zyto-labor.de/publicationen/hpv-informationen/hpv-rererat-bochum.html

81. Kusnetsov Y, Gershon P.D. and Mcpheterson A. Atomic Forse Microscopy Investigation of Vaccina Virus Structure Y.// Virol., August 1, 2008, 82(15), 7551.

82. Kuznetsov Yu.G., Malkin A.Y., Lucas R.W. Imaging of viruses by atomic forse microscopy.// Yurnal of General Virologi (2001), 82, 2025-2034. 2001. Society for General Microbiology.

83. Lai R, Laird S.A., Arnsdorf M.F. Heart gap junction preparation reveal hemiplaques by atomic forse microscopy.// J. Amer. Physiol. Society. 1995., Vol. 68, 967-977.

84. Landosch Milde K; Riethdorf S; Park TW Naturlicher Verlauf der HPV-Infektion. Nut-zen der HPV-Analitik in der Zervixdiagnostik.// Abt. Ginakopathogie, Universitetskranken-haus Eppendorf, Hamburg. Phatologe 1999 Jan; 20(1), 15-24.

85. Llanes A.T., M.D., Farre C.B., M.D. and other. Scanning Electron Microscopy of Normal Exfoliated Squamous Cervical Cells.// Acta Cytologyca, 1973, v.17, 507-509.

86. Letters to the Editors. Human Papilloma Virus Infection of the Uterine Cervix.// Acta Cytologica, 1980, v. 1980, 82-84.

87. Meisels A., Roy M. and other. Human Papillomavirus Infection of the Cervix.//Acta Cytologica, 1981, v. 25, n.l, 7-16.

88. Alexander Meisels, M.D., FIAC. Internacional Consensuns Conference on the Fight against Cervical Cancer.// Treasurer,International Academy of Cytology, Professor Emeritus of Pathology, Laval University, Quebec, Canada, 1999.

89. Meisels A., Morin C. Morpfology of lesions of the uterine cervix related tu human papillomavirus (HPV).//http://www.aixcyto.de/Literatur/literatur.html., 2001.

90. Maria Odete o. Carvalbo, Ricardo W. Almeida, and other. Detection of human papillomavirus DNA by the hybrid capture assay.// http:// www.scielo. Braz J Jnfekt Dis vol. 7 no 2. Salvador Apr. 2003.

91. Oliveira M.C., Andrade M. and other Aspectos Morfologicos que Sugerem a Presenca do Papilomavirus Humano (HPV) em Lesoes do Epitelio De Revestimento da Mucosa Oral.// http://www.patologiaoral.com.br/texto25.asp, 2004.

92. Acta Ralf M.Richart,Shahla Masood et al. Human papillomavirus.// Cytologica 1998, 42, 50-58.

93. Ann Roman and Kenneth H. Fife. Human Papillomaviruses: Are We Ready to Type?.// Clinical Microbiologi Reviews. Apr. 1989., p 166-190. 1893-8512/89/020166-25502.00/0. Copyright @ 1989, American Society for Microbiology.

94. C.A. Rubio, M.D., F.I.A.C., and I. Kranz . The Exfoliating Cervical Epithelial Surface in Dysplasia, Carcinoma in situ and Squamous Carcinoma. Scanning Electron Microscopic Study.//Acta Cytologica, 1976,v 20, 144-150.

95. Sanjeev G. Shroff, Donald R. Saner et al. Dinamic micromechanical properties of cu-tured rat atrial myocytes measured by atomic forse microscopy.// Am Physiol. Society.-1995. 269. Cell Physiol. 38, 286-329.

96. Steven N. Beker, M.D., Jick Y. Wong, M.S. and other. Skanning Electron Microskopi of Alcohol-Fixed Cytopatology Specimens.// Acta Cytologika, 1981, 578-584.

97. Takashi Okagaki, M.D., Ph.D., Barbara A. Clark and other. Koilocytosis in Displastic and Reactive Cervical Squamous Epithelium. An Ultrastructural Stud.// Acta Cytologica, 1978, v.22, 95-98.

98. Tarantul V., Kruglova A., Yakovleva V., Karlina V., Demkin V. Citological and PCR analysis of genital papilloma virus infection.// Microbicides 2000, Conference Abstracts, March 13-16, Hilton Alexandria Mark Center, Washington, DC, 2000, 30.

99. The Association of Reproductive Health Professionals. Management of the abnormal Pap.WUpdated on March 30, 2000.http://www.arhp.org/healthcarcproviders/onlinepublications/clinicalproceedings.108

100. The Medical University of South Carolina // Human papilloma Virus: Cytologic Features and Differential Diagnosis.W ttp://www.musc.edu/chp/cyto/downloads/humanpap.pdf, 1999.