Сравнительный анализ структурной организации кластера рибосомных генов ракообразных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Загоскин, Максим Владимирович

• Загоскин, Максим Владимирович
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Загоскин, Максим Владимирович

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Организация кластера рибосомных генов эукариот.

1.1. Структурные и функциональные особенности организации рДНК

1.2. Явление ядрышкового доминирования.

1.3. Избыточность числа копий рДНК в геноме эукариот.

1.4. Направленные изменения количества копий рибосомной ДНК в геноме эукариот.

1.5. Молекулярная эволюция рДНК и ее использование в филогенетических исследованиях.

2. Краткая характеристика микросателлитных (SSR) и межмикросателлитных (1SSR) последовательностей.

3. Феномен диминуции хроматина.

3.1. Диминуция хроматина у нематод (Nematodes).

3.2. Элиминация хромосом (на примере двукрылых).

3.3. Диминуция хроматина при созревании вегетативных ядер (макронуклеусов) у инфузорий.

3.4. Диминуции хроматина у пресноводных копепод (Cyclopoida, Copepoda, Crustacea).

3.5. Диминуция хроматина у Cyclops kolensis.

4. Состав элиминируемой ДНК и молекулярные механизмы диминуции хроматина.

4.1. «Молекулярная свалка» в геноме Ми представителей отряда

Hypotricha.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Сбор материала.

Выделение тотальной ДНК циклопов.

Полимеразная цепная реакция.

Электрофорез.

Получение очищенных продуктов ПЦР.

Лигирование фрагментов ДНК.

Трансформация клеток Е. coli и селекция колоний.

Приготовление компетентных клеток E.coli.

Трансформация компетентных клеток E.coli.

Выделение плазмидной ДНК методом быстрого лизиса для идентификации истинных рекомбинантов.

Выделение плазмидной ДНК для секвенирования.

Скрининг клонов со вставкой и определение размеров клонированного фрагмента с помощью ПЦР.

Секвенирование.

Real-time PCR.

Измерение концентрации нуклеиновых кислот.

Методы биоинформатического анализа.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

1. Анализ эволюционной изменчивости рибосомной ДНК отряда

Cyclopoida (Crustacea).

1.1. Исследование филогенетических взаимоотношений между представителями отряда Cyclopoida (Crustacea) на основе последовательностей 28S гена рРНК.

1.2. Исследование филогенетических взаимоотношений между представителями семейства Cyclopidae (Crustacea) на основе внутренних транскрибируемых спейсеров рДНК- ITS1 и 1TS2.

1.3. Исследование изменчивости рДНК двух близкородственных видов циклопов рода Cyclops: С. insignis и С. kolensis.

1.4. Характеристика степени эволюционной изменчивости внутренних транскрибируемых спейсеров (ITS1, ITS2) и участка 28S гена рРНК двух географически отдаленных популяций Cyclops kolensis.

2. Исследование изменений структуры кластера рДНК в процессе диминуции хроматина С. kolensis.

2.1. Разработка маркера диминуции хроматина на основе межмикросателитных последовательностей (ISSR- inter simple sequence repeats).

2.1.1. Характеристика ISSR-последовательностей геномной ДНК бластомеров С. kolensis до диминуции хроматина.

2.1.2. Характеристика описанных ISSR-фрагментов в геноме соматических клеток С. kolensis.

2.2. Определение уровня внутригеномной изменчивости рДНК С. kolensis посредствомсравнения последовательностей нуклеотидов рДНК соматических клеток и бластомеров до диминуции хроматина.

2.3. Определение числа копий,рДНК в геноме соматических клеток и бластомеров до диминуции хроматина С. kolensis.9Ф

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сравнительный анализ структурной организации кластера рибосомных генов ракообразных»

Ракообразные (Crustacea), в частности планктонные формы, составляющие основную массу зоопланктона, играют чрезвычайно важную роль в морских и пресноводных экологических системах [Монаков, 1976]. Известно, что веслоногие ракообразные (подкласс Copepoda) имеют морское происхождение представители морской фауны преобладают почти во всех 10 отрядах этого подкласса [Монченко, 2001]. Исключением является отряд циклопообразных копепод (Cyclopoida), преобладающее большинство представителей которого -пресноводные виды. Из трех свободноживущих семейств этого отряда семейство циклопы (Cyclopidae) самое многочисленное - насчитывает 650-670 видов, на его долю приходится большая часть всех пресноводных видов. Другие два свободноживущих семейства (Oithonidae' и Cyclopinidae) представлены исключительно морскими видами [Монченко, 2001].

Таксономия циклопообразных копепод достаточно подробно разработана на основе сравнения морфологических признаков [Gurney, 1933; Рылов, 1948; Dussart, 1969; Монченко, 1974], в то же время исследователи часто сталкиваются с трудностями систематики циклопообразных вследствие высокого уровня полиморфизма видов пресноводных копепод. Зоологи и гидробиологи отмечают острую потребность в использовании новых методов для таксономических исследований, которые позволят дифференцировать виды-двойники и понять экологическое значение близких видов циклопов [Wyngaard, Chinnappa, 1982]. Таким образом, становится очевидной актуальность привлечения современных методов молекулярной генетики для оценки филогенетического родства различных видов пресноводных копепод, а также для оценки скорости микроэволюционных процессов у географически изолированных популяций циклопов.

Сравнительный анализ последовательностей нуклеотидов рибосомной ДНК (рДНК) эукариот может рассматриваться как эффективный подход к определению генетических дистанций между видами и изучению эволюционного процесса [Hwang, Kim, 1999]. Характерной особенностью рДНК является то, что различные структурные, элементы данного участка генома эволюционируют с различной; скоростью. Наиболее эволюционно консервативны гены рибосомных РНК (18S, 5.8S и 28S) — их сравнительный анализ эффективен при сравнении генетических дистанций между эволюционно отдаленными таксонами: Внешний и внутренние транскрибируемые спейсеры (ETS, ITS1 и ITS2) эволюционируют более активно - их сравнительный анализ эффективен при исследовании филогенетических взаимоотношений между близкородственными видами. К>" началу наших исследований, относительно мало видов циклопообразных копепод было представлено в базе данных GenBank, еще меньше'оказалось видов, для которых были представлены последовательности рДНК.

Для некоторых родов семейства Gyclopidae, в частности рода Cyclops, представители которого исследовались в данной работе, сведения о рибосомной; ДНК в GenBank отсутствовали. К настоящему времени, в GenBank представлены сведения только для четырех: видов циклопообразных копепод - Acanthocyclops vernalis [Grishanin et al., 2005], Acanthocyclops robustus [Silva, Matsumura-Tundisi, 2005], Mesocyclops edax [Allan, Unpublished] и Cyclops kolensis [Degtyarev et al., 2004] (сведения о последовательностях рДНК отсутствовали), в. онтогенезе которых встречается явление диминуции хроматина (ДХ). Однако, в работе [Grishanin et al., 2005] изучалась популяция A. vernalis, у которой ДХ отс^ггствует [Dorward; Wyngaard, 1997], а имеющиеся в GenBank последовательности рДНК А robustus и M. edax представлены разными участками и не пригодны для сравнения. В общей сложности насчитывается около 20 видов пресноводных копепод, у которых в онтогенезе встречается ДХ [Einsle, 1962; Beermann, 1959, 1977; Einsle, 1964; Акифьев, 1974; Einsle, 1993, 1996; Chinnappa, 1980; Dorward, Wyngaard, 1997; Гришанин, Акифьев, 1993; Гришанин A.K. и др., 1996].

Одним- из типов генетических маркеров, основанных на ПЦР, являются ISSR-маркеры (inter simple sequence repeat) [Zietkiewicz et al., 1994]. Однако информация о нуклеотидном составе данного типа последовательностей отсутствует в базе данных GenBank для подавляющего большинства видов. В связи с этим, с нашей точки зрения, актуальным является определение нуклеотидного состава и изучение структуры ISSR последовательностей.

Диминуция хроматина (ДХ) представляет собой ' процесс программированного удаления части генома из презумптивных соматических клеток в ходе раннего эмбриогенеза некоторых видов животных. Молекулярные механизмы, обеспечивающие процесс диминуции и тип элиминируемой ДНК в настоящее время остаются во многом неизученными. В частности, до начала наших исследований отсутствовали данные об изменениях в структуре кластера рДНК циклопообразных копепод вызванных диминуцией хроматина.

Очевидно, что для изучения преобразований структуры кластера рДНК в процессе ДХ необходим молекулярный маркер, не связанный с рДНК, свидетельствующий о прохождении диминуции хроматина. Для циклопообразных копепод ранее были выявлены повторяющиеся последовательности, частично удаляющиеся из генома в ходе диминуции хроматина [Degtyarev et al., 2004; Зоткевич и др., 2008; Drouin, 2006], однако удаления последовательностей, которые могли бы служить молекулярным маркером диминуции хроматина, не было показано.

Цели и задачи исследования

Целью данной работы являлось изучение структурной организации и эволюционной изменчивости кластера рибосомной ДНК ракообразных семейства Cyclopidae.

В соответствии с целью были обозначены следующие задачи исследования:

1) Определить степень эволюционной' изменчивости протяженных фрагментов (-ЮООп.н.) 28S гена и внутренних транскрибируемых спейсеров (ITS1 и ITS2) рибосомной РНК 11 видов отряда Cyclopoida. На основании полученных данных построить филогенетические деревья и' определить генетические дистанции между представителями изучаемого отряда.

2) Посредством сравнительного анализаполноразмерных копий 5.8S-, 18S-и 28S генов рРНК и* внутренних транскрибируемых спейсеров (ITS1' и ITS2) определить степень изменчивости рДНК двух, обитающих в сходных экологических нишах, близкородственных видов циклопов рода Cyclops (С. insignis и С. kolensis).

3) Для изучения изменений структуры кластера рДНК в процессе диминуции хроматина С. kolensis, на основе сравнительной характеристики межмикросателлитных последовательностей (ISSR), получить молекулярный маркер прохождения диминуции хроматина, не связанный с рДНК.

4) Методом «ПЦР в реальном времени» (real-time PCR) определить число i копий рДНК в геноме С. kolensis до и после диминуции хроматина.

Научная новизна и практическая ценность работы

Впервые определены последовательности нуклеотидов полноразмерных генов (18S, 5.8S, 28S) и.спейсерных последовательностей (ITS1 и ITS2) рДНК двух представителей отряда Cyclopoida: С. kolensis и С. insignis.

Проведен сравнительный анализ эволюционной изменчивости I протяженного фрагмента (~1000 п.н.) 28S гена и спейсерных последовательностей (ITS1 и ITS2) рДНК 11 видов и двух популяций одного вида циклопообразных копепод. Показано, что полученные в ходе исследования данные могут быть использованы для молекулярной систематики отряда Cyclopoida и определения видов циклопов.

Определен нукпеотидный состав 58 межмикросателлитных последовательностей С. kolensis. Впервые показано, что сравнительный структурный анализ межмикросателлитных последовательностей позволяет делать заключения относительно молекулярных механизмов формирования этого типа структурных элементов генома эукариот. В частности, анализ сходства описанных последовательностей позволил выявить группы схожих последовательностей, которые, вероятно, образовались в результате магнификации исходной уникальной геномной, последовательности с последующей дивергенцией образовавшихся копий.

Показано, что большая часть из исследуемых межмикросателлитных последовательностей сохраняется в геноме С. kolensis после прохождения процесса диминуции, то есть после удаления ~94% геномной ДНК, что может свидетельствовать об их важной структурно-функциональной роли.

Разработан молекулярный маркер диминуции хроматина С. kolensis. Подход, использованный при разработке маркера, может быть использован при изучении других объектов, в онтогенезе которых встречается ДХ.

Впервые показано значительное изменение числа копий рДНК в ходе диминуции хроматина у циклопообразных копепод.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Генетика», Загоскин, Максим Владимирович

выводы

1. Проведен анализ эволюционной изменчивости фрагментов рДНК протяженностью около 2000 п.н. каждый, содержащих в своем составе внутренние транскрибируемые спейсеры (ITSTh ITS2), ген 5.8S рРНК и.часть генов 18S и 28S рРНК, 11 видов отряда Cyclopoida:

Показано, что генетическая изменчивость фрагмента гена 28S рРНК, отражает филогенетические дистанции между эволюционно удаленными видами изучаемого отряда, в то время как изменчивость ITS1 и. ITS2' с высокой достоверностью отражает филогенетические дистанции между видами в пределах отдельных семейств. На основании полученных данных построены филогенетические деревья и< определены генетические дистанции между представителями изучаемого отряда. I

2. Проведен сравнительный анализ структуры клонированных и секвенированных 58 межмикросателитных последовательностей [(GA)gC] С. kolensis общей протяженностью ~22000 п.н. Показано, что исследуемые фрагменты ДНК содержат в своем составе вырожденные субповторы, отражающие эволюционную преемственность между различными группами межмикросателитных последовательностей этого вида циклопа.

3. Для 11 межмикросателитных последовательностей созданы пары праймеров, позволяющие амплифицировать индивидуальные фрагменты этого типа геномной ДНК. Показано, 8 из исследуемых 11 межмикросателитных последовательностей сохраняются в геноме С. kolensis после завершения диминуции хроматина, что может свидетельствовать об их важной функциональной роли. На основе межмикросателлитной последовательности, удаляемой в ходе диминуции хроматина, впервые получен специфический молекулярный маркер, позволяющий методом ПЦР идентифицировать до- и после- диминуционные геномы С. kolensis.

4. Определено количество копий генов рРНК, содержащихся в геномах клеток С. kolensis до и после прохождения диминуции хроматина (4844 и 26 копий на диплоидный геном, соответственно) и в геноме С. insignia у которого диминуция хроматина отсутствует (6846 копий на диплоидный геном).

Впервые показано, что в ходе диминуции хроматина у С. kolensis происходит уменьшение количества копий генов рРНК примерно в 190 раз.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Изучение филогенетических взаимоотношений между представителями циклопообразных копепод с использованием молекулярно-генетических методов начато относительно недавно и охватывает пока малое число видов. Однако интерес к данному направлению исследований растет.

Проведенные нами исследования^ позволили расширить список видов циклопообразных копепод, изучение филогенетических взаимоотношений между которыми проводится на основе последовательностей' рибосомной ДНК. Нами были-определены и проанализированы протяженные (~2000 п.н.) участки рДНК 11 видов'циклопообразных копепод. Кроме того, нами, впервые были определены последовательности нуклеотидов полноразмерных генов (18S, 5.8S, 28S) и спейсерных последовательностей (ITS1 и ITS2) рДНК двух видов рода Cyclops.

Сравнительный анализ эволюционной изменчивости' протяженного фрагмента-28S гена и. спейсерных-последовательностей (ITS1 и ITS2) рДНК 11 видов циклопообразных копепод позволил дать научное обоснование выбора спейсерных последовательностей ITS1 и ITS2 для проведения филогенетического анализа циклопообразных копепод на уровне семейства и последовательностей 28S гена для филогенетического анализа на уровне отряда. Полученные данные имеют практическое значение в молекулярной систематике отряда Cyclopoida и в определении видов циклопов.

В' результате сравнительного анализа двух географически отдаленных популяций Cyclops kolensis - озера Байкал и пруда г. Москва по исследуемому участку рДНК была: выявлена высокая степень сходства, нуклеотидных последовательностей (ITS1 - 98.9%, ITS2 - 98.5%, 28S - 99.2%). Эти данные могут свидетельствовать либо о недавнем образовании одной из популяций, либо о поддержании? высокого уровня консервативности данного участка генома. С. kolensis.

Сравнительный анализ полноразмерных .последовательностей; генов рДНК и внутренних транскрибируемых спейсеров ITS1 и ITS2 Cyclops kolensis и Cyclops /ns/gn/s позволил выявить высокий уровень сходства (ITS1 - 92.7%; ITS2 - 96.4%, 28S - 98.7%, 18S - 99.5%), подтверждающий статус близкородственных, видов, определенный по морфологическим признакам.

Проведенный нами анализ динамики изменения вторичной структуры ITS1 и ITS2 С. kolensis и С. insignis с ростом температуры указывает на наличие связи, между особенностями^укладкишторичной структуры предшественника рибосомной РНК и экологической, пластичностью вида: Так, нарушения;вторичной структуры: ITS1 и- ITS2 С. insignis;. обитающего при. более низкой, чемг С. kolensis температуре; с ростом^температурывозникают раньше; чем;у С. kolensis; Более: существенно эти .близкородственные^ виды; отличаются? по наличию диминуции хроматина. У С. /со/ens/'s в ходе диминуции хроматина:удаляется-~ 94% геномной ДНК соматических клеток, в то: время как; у С. insignis диминуция хроматина отсутствует. В ходе; работы было- определено, что: диплоидный геном С. insignis содержит около 7000 копий рДНК, а диплоидный геном бластомеров до диминуции хроматина С. /со/ens/s около,5000 копий. Также было:установлено, что в результате диминуции хроматина? в: геноме соматических клеток С: kolensis сохраняется лишь около 30 копий, рДНК. Таким образом, впервые показано уменьшение числа копий генов рРНК в результате диминуции хроматина почти в 190 раз. Сравнительный анализ исследуемого участка рДНК С. kolensis до и после диминуции хроматина указывает на то, что изменений в первичной структуре рДНК в ходе диминуции хроматина, по всей видимости, не происходит.

Чистота материала используемого в экспериментах, касающихся диминуции хроматина, была проверена с помощью специфического молекулярного маркера, свидетельствующего о прохождении диминуции хроматина. Этот маркер был разработан нами на основе последовательностей, локализованных между*микросателлитами, - ISSR- фрагментов.

При разработке маркера была определена^ последовательность нуклеотидов 58 ISSR-фрагментов генома бластомеров до диминуции хроматина С. kolensis, сравнительный анализ которых позволил выявить эволюционную преемственность между различными- группами межмикросателитных последовательностей этого вида циклопа. Среди исследованных ISSR- -фрагментов^ выявлены группы- последовательностей, которые содержали определенный, набор схожих субповторов. Можно предполагать, что. образование ISSR-фрагментов, имеющих схожую структуру, произошло в результате магнификации^ исходной уникальной* геномной последовательности с последующей дивергенцией образовавшихся копий.

Кроме того, 11 из 58 ISSR-последовательностей было^ проверено на присутствие4 в геноме соматических клеток С. kolensis. Выяснилось, что большая часть (8 из 11) ISSR-последовательностей сохраняется в геноме соматических клеток С. kolensis после прохождения диминуции хроматина. Учитывая размер доли, удаляемой ДНК (~94%), можно предположить, что данные ISSR-последовательности играют важную роль в геноме соматических клеток С. kolensis, что представляет интерес для дальнейшего исследования этих последовательностей.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Загоскин, Максим Владимирович, 2009 год

1. Акифьев А.П. "Молчащая" ДНК и ее роль в эволюции // Природа. 1974. Т.9. С. 49-54.

2. Акифьев А.П., Гришанин А.К. Некоторые биологические аспекты диминуции хроматина //Журн. общей биол. 1993. Т. 54. С. 5—15.

3. Алешин В.В., Владыческая Н.С., Кедрова О.С., Милютина И.А., Петров Н.Б. Сравнение генов 18S рРНК в филогении бесповоночных // Молекуляр. Биология. 1995. Т. 29. С. 1408-1426.

4. Банникова А.А. Молекулярные маркеры и современная филогенетика млекопитающих //Журнал Общей биологии. 2004. Т. 65. №4. С. 278-305.

5. Башкиров В.Н. Регуляция числа генов рибосомных РНК у дрозофила // Генетика. 1980. Т. 16. С. 7-29.

6. Гришанин А.К. Сравнительное электронно-микроскопическое изучение хромосом и интерфазных ядер в клетках зародыша Cyclops kolensis (Copepoda, Crustacea) до и после диминуции хроматина // Онтогенез. 1995. Т. 26. С. 188—195.

7. Гришанин А.К., Акифьев А.П. Диминуция хроматина и организация хромосом у Cyclops strenuus strenuus // Генетика. 1993. Т. 29(7). С. 1099 -1107.

8. Гришанин А.К., Бойкова Т.В., Маршак Т.Л., Акифьев А.П., Жимулев И.Ф. Сравнительный анализ размера генома и особенностей диминуции хроматина у байкальской и московской популяций Cyclops kolensis // Докл. РАН. 2006. Т. 408. Н. 5. С. 684-687.

9. Гришанин А.К., Бродский В.Я., Акифьев А.П. Соматические клетки Cyclops strenuus (Copepoda, Crustacea) теряют при диминуции хроматина более 90% генома//Докл. РАН. 1994. Т. 338. С. 708—710.

10. Дегтярев С.В., Гришанин А.К., Белякин С.Н., Рубцов Н.Б., Жимулев И.Ф., Акифьев А.П. Нуклеотидные последовательности ДНК, элиминируемые в процессе диминуции хроматина их хромосом соматических клеток С. kolensis//Цокл. РАН. 2002. Т. 384. С. 255—258.

11. Жарская О.О., Зацепина О.В. Динамика и механизмы реорганизации ядрышка в митозе // Цитология. 2007. Т. 49. Н. 5. С. 355 369.

12. Зоткевич Е.А., Бойкова Т.В., Акифьев А.П., Тереза Е.П., Помазкова Г.И., Мельник Н.Г., Тимошкин О.А., академик Жимулёв И.Ф. Консерватизм в структуре повторенной избыточной ДНК у двух видов рода Cyclops II ДАН. 2008. Т. 420. Н. 5. С. 691-694:

13. Монаков А.В. Питание и пищевые взаимоотношения пресноводных копепод II. Л., Наука. 1976. С. 170.

14. Монченко В.И. Челюстноротые циклопообразные. Циклопы // (Фауна Украины; Т. 27, вып. 3). Киев, «Наукова думка». 1974. -450 с.

15. Монченко В.И. О дифференциальной галопатии семейств свободноживущих CopepodaCyclopoida// Vestnik zoologii; 2001. Т. 35. Н. 5 С. 3—7.

16. Муха Д.В., Лазебная И:В., Сидоренко А.П. Внутривидовая структурная вариабельность рибосомной ДНК рыжего таракана Blattella germanica И Генетика. 2000. Т. 36. С. 11-15.

17. Муха^ Д.В., Сидоренко А.П. Выявление и анализ доменов последовательности 26S рибосомной ДНК Tetrahymena pyriformis, различающихся по степени эволюционного консерватизма // Молекулярная биология. 1995. Т. 29. С. 529-537.

18. Муха Д.В., Сидоренко А.П. Выявление высококонсервативных доменов в последовательности 17S рибосомальной ДНК Tetrahymena pyriformis II Генетика. 1996. Т. 32. С. 1494-1497.

19. Рылов В.М. Cyclopoida пресных вод. Фауна СССР. Ракообразные // Т. 3., вып. 3. М.; Л.: Изд-во АН СССР. 1948. — 318 с.

20. Сулимова Г.Е. ДНК-маркеры в генетических исследованиях: типы маркеров, их свойства и области применения // Успехи современной биологии. 2004. Т. 124. Н. 3. С. 260.

21. Хемлебен В., Беридзе Т.Г., Бахман Л., Коварик Я., Торрес Р. Сателлитные ДНК//Успехи биологической химии. 2003. Т. 43. С. 267—306.

22. Adoutte A., Balavoine G., Lartillot N., deRosa R. The end of intermedia taxa? // Animal Evol. 1999. V. 15. P. 104-108.

23. Aeby P., Spicher A., de Chastonay Y., MGIIer F., Tobler H. Structure and genomic organization of proretrovirus-like elements partially eliminated from the somatic genome of Ascaris lumbricoides // EMBO J. 1986. V. 5. P. 3353-3360.

24. Albertson D., Nwaorgu O.C., Sulstons J.E. Chromatin diminution and chromosomal mechanism of sexual differentiation in Strongyloides papillosus // Chromosoma. 1979. V. 75. P. 75-87.

25. Andersen J.S., Lam Y.W., Leung A.K., Ong S.E., Lyon C.E., Lamond A.I., Mann M. Nucleolar proteome dynamics // Nature. 2005. V. 433 P. 77—83.

26. Arnheim N. Concerted evolution of multigene families. In: Evolution of Genes and Proteins (Eds. Nei M. and Koehn R. K.) // Sinauer, Sunderland. 1983. P. 38-61.

27. Arnheim N.M., Krystal M., Schmickel R., Wilson G., Ryder O., Zimmer E. Molecular evidence for genetic exchanges among ribosomal genes on nonhomologous chromosomes in man and ape // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1980. V. 77. P. 7323-7327.

28. Arnheim N., Treco D., Taylor В., Eicher E. Distribution of ribosomal gene length variants among mouse chromosomes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1982. V. 79. P. 4677-4680.

29. Ashley C.T., and Warren S.T. Trinucleotide repeat expansion and' human disease //Annu. Rev. Genet. 1995. V. 29. P. 703-728.

30. Atwood K.C. Some aspects of the bobbed problem in Drosophila II Genetics.-1969. V. 61. P. 319-324.

31. Baird S.E., Fino G.M., Tausta S.L., Klobutcher L.A. Micronuclear genome organization is Euplotes crassus: a transposonlike element is removed during macronuclear development// Mol. Cell. Biol. 1989. V. 9. Pi 3793—3807.36.