Сравнительный анализ нуклеотидной последовательности аттенуированного штамма ВТМ V-69 и его патогенных ревертантов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Истомина, Екатерина Александровна

• Истомина, Екатерина Александровна
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Истомина, Екатерина Александровна

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

Актуальность проблемы.• • •.-

Цель работы, задачи.

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Характеристика и организация вируса табачной мозаики.

1.1.1. История открытия ВТМ.

1.1.2. Организация генома вируса табачной мозаики.

1.1.3. Регуляторные области.

1.1.4. Субгеномные мРНК.

1.1.5. Репликация и трансляция.

1.1.6. Сборка вирионов.

1.1.7. Транспорт вируса в растении.

1.2. Векторы на основе вируса табачной мозаики.

1.2.1. Дефектные РНК ВТМ.

1.2.2. Основные подходы к получению вектора на основе генома ВТМ.

1.2.3. Применение ВТМ-векторов.

1.3. Замолкание генов, индуцируемое РНК.

1.3.1. Отличия TGS от PTGS.

1.3.2. Постранскрипционное замолкание генов.

1.3.3. Вирус-индуцируемое замолкание генов.

1.3.4. Замолкание генов, обусловленное ВТМ-вектором.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сравнительный анализ нуклеотидной последовательности аттенуированного штамма ВТМ V-69 и его патогенных ревертантов»

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Большинство вирусов растений относятся к фитопатогенам, поражающим многие сельскохозяйственные культуры. Для борьбы с вирусными инфекциями используют сорта с генами устойчивости, устойчивые трансгенные растения и вакцинацию растений ослабленными штаммами вирусов. Создание вакцин основывается на том, что среди природных популяций патогенных вирусов спонтанно возникают мутанты со сниженной патогенностью, в том числе, не вызывающие на растениях видимых симптомов. Ослабленные штаммы используются для перекрестной защиты от близкородственых патогенов. Сравнение структуры геномов авирулентных и патогенных штаммов способствует пониманию тонких механизмов, регулирующих размножение вируса и его взаимодействие с хозяином.

В последнее время все большее распространение получают работы по созданию трансгенных растений, устойчивых к патогенам. Следует иметь в виду, что до сих пор нет однозначного мнения о безвредности использования трансгенных растений. Во многих странах мира существует запрет на выращивание подобных растений.

На основе геномов растительных вирусов создаются векторы для экспрессии в растениях гетерологических генов. Применение подобных векторов, в отличие от использования трансгеных растений, получаемых в результате агробактериальной трансформации, позволяет избежать интеграции трансгена в геном растения, вследствие чего чужеродная вставка не нарушает хромосомной организации растительного генома, и не происходит инактивации экспрессии данного трансгена, часто наблюдаемой в трансгенных растениях (Mason and Arntzen, 1995). Использование вирусных векторов позволяет получать значительные количества чужеродного белка. Кроме того, химерные вирусы, полученные с помощью генно-инженерных методов, можно использовать для защиты растений от более широкого круга патогенов.

Данная работа является продолжением работ по изучению особенностей первичной структуры атгенуированного штамма ВТМ V-69 и посвящена сравнению его первичной структуры со спонтанными патогенными ревертантами и выяснению значения обнаруженных в ревертантах аминокислотных замен.

Цель работы: Определить и сравнить нуклеотидные последовательности патогенных ревертантов (Rl, R2, R2-76 и R3) с исходным атгенуированным штаммом ВТМ V-69, и выявить нуклеотидные замены ответственные за патогенность путем введения обнаруженных в ревертантах замен' в полноразмерную кДНК-копию ВТМ V-69.

При этом были поставлены следующие задачи:

1. Создать плазмидные конструкции, содержащие полноразмерные кДНК-копии аттенуированного штамма ВТМ V-69 под контролем Т7-промотора и получить in vitro инфекционные транскрипты.

2. Определить нуклеотидные последовательности геномов патогенных ревертантов провести их сравнение с исходным атгенуированным штаммом V-69.

3. Ввести обнаруженные мутации в структуру кДНК бессимптомного штамма ВТМ V-69, получить инфекционные транскрипты и проверить их патогенность.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Истомина, Екатерина Александровна

выводы.

1. Получены плазмидные конструкции, содержащие полноразмерные кДНК-копии аттенуированного штамма вируса табачной мозаики V-69 под контролем Т7-промотора, позволяющие получать in vitro инфекционные транскрипты, соответствующие исходной кДНК.

2. Введены нуклеотидные замены в кДНК-копию генома вируса, инактивирующие #ш<ЛП-сайт' в положении 1449 и служащие маркером для вирусного потомства РНК

3. Определены нуклеотидные последовательности геномов четырех патогенных ревертантов аттенуированного штамма V-69, и обнаружена высокая консервативность первичной структуры РНК ВТМ V-69 и его ревертантов.

4. Установлено, что все ревертанты характеризуются общей нуклеотидной заменой в положении 1654, восстанавливающей в структуре белков репликазы 528-ой аминокислотный остаток гистидина (Arg—»His528), характерный для дикого штамма L.

5. Показано, что введение единственной общей для ревертантов мутации в полноразмерную кДНК копию генома ВМТ V-69 приводит к усилению его патогенности.

6. Подтверждено, что ответственные за патогенность аминокислотные замены у всех известных аттенуированных штаммов тобамовирусов, находятся в неконсервативной области белков репликазы между метилтрансферазным и геликазным доменами.

7. Показана возможность введения мутаций в кДНК конструкции для изучения влияния введенных мутаций на функции вирусных белков.

1.4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Геномная РНК ВТМ, содержит единственную плюс цепь, кодирующую информацию о четырех белках, которые осуществляют все основные функции вируса в растении: репликацию геномной РНК, синтез субгеномных мРНК, транспорт вирусной РНК от клетки к клетке нераспространение системной инфекции. Установлено, что для выполнения этих основных функций и достижения максимального уровня размножения вируса в растении необходимо взаимодействие вирусных белков, как между собой, так и взаимодействие их со многими факторами хозяина. Многие факты тонкой регуляции функций вирусных белков стали известны в результате молекулярного клонирования кДНК как отдельных генов, так и полноразмерных кДНК, соответствующих вирусным геномам. В клонированные вирусные гены вводили мутации, сплавляли вирусные гены с репортерными генами, и получали с химерных конструкций трансгенные растения или инфекционные РНК и выясняли, как мутантные и химерные белки ведут себя в растении-хозяине.

Кроме того, на основе генома ВТМ можно создавать вектора для экспрессии гетерологических генов, как для синтеза различных белков, так и для получения вакцин против различных патогенов. В первом случае для экспрессии генов используют субгеномный промотор белка оболочки тобамовирусов. Во втором случаи - для получения вакцин экспрессируют антигенные детерминанты (короткие пептиды - эпитопы) слитые с С-концевым участком БО, который находится на поверхности вирусных частиц. Вектора на основе РНК ВТМ не нарушают хромосомную организацию растения-хозяина и позволяют получать значительные количества чужеродного белка (до 10% от общего количества белка).

Вирусные вектора открывают дополнительные возможности для создания клонетек кДНК растительных генов для изучения их функций. Кроме того, на основе вирусных векторов получают вирусные вакцины нового поколения для защиты растений от патогенов, используя механизм вирус-индуцируемого замолкания генов.

Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. МАТЕРИАЛЫ.

Растительный материал. Препарат вирусных частиц получали из листьев зараженных вирусом растений Nicotiana tabacum cv. Samsun (генотип nri). Инфекционность очищенных препаратов геномной РНК проверяли на листьях сверхчувствительного хозяина - гибрида Терновского (Nicotiana tabacum х Nicotiana glutinosa, генотип NN). Системную инфекцию наблюдали на табаках Nicotiana tabacum cv. Samsun и на томатах сорта "Белый налив". Рассаду выращивали в климокамере 'Fisons Fitotron' при фотопериоде 16 ч день и 8 ч ночь при температуре 24°С.

Бактериальный штамм. Для трансформации плазмидными конструкциями использовали клетки Е. coli штамм DH 5а [ F", gyr А96 (Nal1), rec Al, rel Al, end Al, thi-1, hsdRll (rk-, mk+), glnV44, deo R, D (lac ZYA-arg F)U169|^80dA(focZ)M15]].

Плазмидный вектор. Для создания конструкций использовали плазмидный вектор pBluescript (+) (pBS+).

Олигонуклеотидньге праймеры. Специфические праймеры синтезировались фирмой Синтол (Москва) (Табл. 1), а также использовались коммерческие препараты праймеров: Dir. (17mer) pUC/M13 и Rev. (17mer) pUC/M13 фирмы Fermentas (Литва).

Ферментативные препараты. В работе использовались следующие наборы: набор для синтеза кДНК - RiboClone cDNA Synthesis System AMV RT фирмы Promega (США); набор для определения нуклеотидной последовательности - Cycle Reager™ DNA Sequencing Kit, набор для обратной транскрипции (ОТ-ПЦР) - Fipst Strand cDNA Synthesis Kit, набор для проведения транскрипции in vitro - Т7 Transcription Kit фирмы Fermentas (Литва) в присутствии т7СрррО-кеп-аналога фирмы Promega (США).

Ферменты: фрагмент Кленова ДНК-полимеразы IЕ. coli, щелочная фосфотаза, ДНК-лигаза фага Т4, эндонуклеазы рестрикции, полинуклеотидкиназа фага Т4, Taq-ДНК-полимераза, Р/м-ДНК-полимераза, фирмы Fermentas (Литва). 7>/ьДНК-полимераза фирмы Силекс (Москва). Ферментные реакции проводили в буферах и при условиях, соответствующих рекомендациям фирм.

Для мечения ДНК использовали [у-32Р]АТР (Изотоп, Обнинск).

Химические реактивы. Акриламид (Sigma, Serva), Метилен-бис-акриламид (Serva), персульфат аммония (BioRad), додецилсульфат натрия (Sigma), трис-НС1 (Sigma), гуанидинтиоционат (ГТЦ) (Merck), ЭДTA(Sigma), трипгон (Difco), пептон (Difco), бакто-агар (Difco), агар Триптоза (Difco), хлорид кальция (Sigma), хлорид магния (Sigma), гидроксид натрия (Chemapol), полиэтилен гликоль (ПЭГ-6000) (Serva), сульфат аммония- (Serva),-fi-меркаптоэтанол^ (Reanal), бромистый этидий (Sigma), ИПТГ (Sigma), X-gal (Sigma), ТЕМЕД (Ы,К,К',К'-тетраметилэтилендиамин) (Reanal), у-метакрилоксипропилтриметоксилан (LKB), диметилдихлорсилан (LKB), диметилсульфоксид (ДМСО) (Merck), ионообменная смола Serdolit MB (Serva), формамид (Fluka), тритон Х-100 (Sigma), пиперазин-1,4-бис-2-этансульфоновая кислота (PIPES) (Fluka), диетилпирокарбонат (DEPC).(Serva).

Среды. Клетки E.coli, содержащие нужные плазмиды, выращивали на агаризованных средах LB: Дрожжевой экстракт 5г

Бактотриптон Юг

NaCl Юг

Бакто-агар 15г ,

Вода дистилированная до 1л. ■

Фотоматериалы. Для получения авторадиограмм использовали рентгеновскую пленку РМ-В (ПО 'Тасма', Казань) и Сгопех 4 (Sterling Diagnostic Imaging, США). Пленки после экспозиции с. радиоактивным материалом обрабатывали: в проявителе:

Метол 2.2г

Сульфит натрия безводный 72. Ог

Гидрохинон 8.8г

Сода безводная 48.0г

Калий бромистый 4.0г

Вода дистилированная до 1л.

Гипосульфит натрия 250г

Сульфит натрия безводный 25г

Кислота уксусная (ледяная) 5мл

Вода дистилированная до 1л.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Истомина, Екатерина Александровна, 2004 год

1. Атабеков И.Т. (1981). Практикум по общей вирусологии. Изд. Московского университета. С. 60-73.

2. Беленович Е.В., Новиков В.К., Завриев С.К. (2000). Биологические свойства и структура генома Казахского изолята К1 вируса табачной мозаики. Мол. Биол. Т.34, №1. С. 172-176.

3. Вартепитян А.Б. (1991). Полимеразная цепная реакция. Молекулярная биология, Т. 25 № 4. С. 926-936.

4. Гусев А.А. (1997). Простой метод выделения и очистки РНК. Биорганическая химия, Т. 23. № 9. С. 763-765.

5. Грибанов О.Г., Щербаков А.В., Перевозчикова Н.А., Гусев А.А. (1996). Использование аэросила А-300 и фильтров GF/F (GF/C) для очистки фрагментов ДНК, ДНК плазмид и РНК. Биохимия, Т. 61. № 6. С. 1064-1070.

6. Дьяков Ю.Т. (1996). Пятьдесят лет теории ген-на-ген. Усп. Совр. Биол. Т. 116. С. 293-305.

7. Маниатис Т., Фрич, Э., Сэмбрук, Дж. (1984). Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. М.: Мир. 480 с.

8. Мэтьюз Р. (1973). Вирусы растений: М: Мир. 600 с.

9. Стент Г. и Келиндар Р. (1981). Молекулярная генетика. М.: Мир. С. 474-479.

10. Снегирева П.Б. (1999). Изучение особенностей первичной структуры генома вакцинного штамма вируса табачной мозаики V-69. Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Москва. 134 с.

11. Снегирева П.Б., Шиян А.Н., Истомина Е.А. (1999). Полная нуклеотидная последовательность вакцинного штамма вируса табачной мозаики V-69. Генетика, Т.35, №7, С. 878-885.

12. Сухов К.С., Подъяпольская, Т.С., Извекова, Л.И., Андреева Э.Н., Вострова, Н.Г., Иванова, Е.С. (1982). Вакцинный штамм вируса табачной мозаики V-69: получение, свойства и практическое применение. Известия АН СССР. Серия биол. 1. С. 113-125.

13. Реунов А.В. (1999). Вирусный патогенез и защитные механизмы растений. Владивосток: Дальнаука. 215 с.

14. Шиян А.Н., Мильшина Н.В., Снегирева П.Б., Пухальский В.А. (1994). Изучение первичной структуры вакцинного штамма вируса табачной мозаики V-69. Генетика 30:1626-1629.

15. Anandalakshmi R, Pruss G.J., Ge X., Marathe R., Mallory A.C., Smith Т.Н., Vance V.B. (1998). A viral suppressor of gene silencing in plants. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A, V. 95(22). P.13079-13084.

16. Agrawal N., Dasaradhi P.V., Mohmmed A.,- Malhotra P., Bhatnagar R.K., Mukheijee S.K. (2003). RNA interference: biology, mechanism, and applications. Microbiol Mol. Biol. Rev., V. 67(4). P.657-685.

17. Ahlquist P., Noueiry A.O., Lee W.M., Kushner D.B., Dye B.T. (2003). Host factors in positive-strand RNA virus genome replication. J. Virol., V .77(15). P.8181-8186.

18. Assaad F.F., Tucker K.L., Signer E.R (1993). Epigenetic repeat-induced gene silencing (RIGS) in Arabidopsis. Plant Mol. Biol., V22. P.1067-1085.

19. Asurmendi S., Berg RH., Koo J.C., Beachy R.N. (2004). Coat protein regulates formation of replication complexes during tobacco mosaic virus infection. PNAS, V. 101(5). P.1415-1420.

20. Atkins D., Hull R, Wells В., Roberts K., Moore P., Beachy RN. (1991). The tobacco mosaic virus 30K movement protein in transgenic tobacco plants is localized to plasmodesmata. J. Gen. Virol., V.72 (1). P. 209-211.

21. Beck D.L. and Dawson, W.O (1990). Deletion of repeated sequences from tobacco mosaic virus mutants with two coat protein genes. Virology, V. 177, P. 462-469.

22. Berna A., Gafny R., Wolf S., Lucas W.J., Holt C.A., Beachy R.N. (1991). The TMV movement protein: role of the C-terminal 73 amino acids in subcellular localization and function. Virology, V. 182(2). P.682-689.

23. Bao Y., Carter S.A., Nelson R.S. (1996). The 126- and 183-kilodalton proteins of tobacco mosaic virus, and not their common nucleotide sequence, control mosaic symptom formation in tobacco. J. Virol., V.70(9). P.6378-6383. :

24. Batschelet E., Domingo E., Weissmann C. (1976).The proportion of revertant andmutant phage in a growing population, as a function of mutation and growth rate. Gene, V. 1(1). P.27-32.

25. Bendahmane M., Fitchen J.H., Zhang G., Beachy R.N. (1997). Studies of coat protein-mediated resistance to tobacco mosaic tobamovirus: correlation between assembly of mutant coat proteins and resistance. J. Virol., V.71 (10). P.7942-7950.

26. Bendahmane M., Koo M., Karrer E., Beachy R.N. (1999). Display of epitopes on the surface of tobacco mosaic virus: impact of charge and isoelectric point of the epitope on virus-host interactions. J. Mol. Biol., 290(1). P.9-20.

27. Bendahmane M, Szecsi J, Chen I, Berg RH, Beachy RN. (2002). Characterization of mutant tobacco mosaic vims coat protein that interferes with virus'cell-to-cell movement. PNAS, V. 99(6). P.3645-3650.

28. Воуко V., van der Laak J., Ferralli J., Suslova E., Kwbn M.O., Heinlein M.2000). Cellular targets of functional and dysfunctional mutants of tobacco mosaic virus movement protein fused to green fluorescent protein. J. Virol., V. 74(23). P.l 1339-11346.

29. Brigneti G., Voinnet O., Li W.X, Ji L.H., Shou-Wei Ding S.W. and Baulcombe D.C. (1998). Viral pathogenicity determinants are suppressors of transgene silencing in Nicotiana benthamiana. J. EMBO, V. 17. P.6739-6746.

30. Bucher G.L., Tarina C., Heinlein M., Di Serio F., Meins F.Jr., Iglesias V.A.2001). Local expression of enzymatically active class I beta-1, 3-glucanase enhances symptoms of TMV infection in tobacco. J. Plant, V. 28(3). P.361-369.

31. By Kary В., Mullis A. and Falloona F. (1987). Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-catalezed Chain Reaction. Methods in enzymology, V.155. P. 335-350.

32. Carr J.P., Marsh L.E., Lomonossoff G.P., Sekiya M.E., Zaitlin M. (1992). Resistance to tobacco mosaic vims induced by the 54-kDa gene sequence requires expression of the 54-kDa protein. Mol. Plant Microbe Interact., V. 5(5). P.397-404.

33. Chen M.H., Sheng J., Hind G., Handa A.K., Citovsky V. (2000). Interactionbetween the tobacco mosaic virus movement protein and host cell pectin methylesterases is required for viral cell-to-cell movement. J. EMBO, V. 19(5). P. 913-920.

34. Chen M.H. and Citovsky V. (2003). Systemic movement of a tobamovirus requires host cell pectin methylesterase. J. Plant, V. 35 (3). P. 386-392.

35. Cheng N.H., Su C.L., Carter S.A., Nelson R.S. (2000). Vascular invasion routes and systemic accumulation patterns of tobacco mosaic virus in Nicotiana benthamiana. J. Plant, V. 23(3). P.349-362.

36. Citovsky V., Knorr D., Schuster G., and Zambryski P. (1990). The P30 movement protein of tobacco mosaic virus is a single-strand nucleic acid binding protein. Cell, V. 60. P.637-647.

37. Citovsky V., Wong M.L., Shaw A.L., Prasad B.V., Zambryski P. (1992). Visualization and characterization of tobacco mosaic virus movement protein binding to single-stranded nucleic acids. Plant Cell., V. 4(4). P. 397-411.

38. Citovsky V., McLean B.G., Zupan J.R., Zambryski P. (1993). Phosphorylation of tobacco mosaic virus cell-to-cell movement protein by a developmentally regulated plant, cell wall-associated protein kinase. Genes Dev., V. 7(5). P.904-910.

39. Chalfie M., Tu Y., Euskirchen G., Ward W.W., Prasher D.C. (1994). Green fluorescent protein as a marker for gene expression. Science, V.263. P.802-805.

40. Canto Т., Palukaitis P. (2002). Novel N gene-associated, temperature-independent resistance to the movement of tobacco mosaic virus vectors neutralized by a cucumber mosaic virus RNA1 transgene. J. Virol., V. 76(24). P.12908-12916.

41. Carter M.J. and Milton I.D. (1993). An inexpensive and simple method for DNA purification on silica particles. Nucleic Acids Res., V. 21. P. 1044.

42. Carrington J.C., Kasschau K.D., Mahajan S.K., Schaad M.C. (1996). Cell-to-Cell and Long-Distance Transport of Viruses in Plants. Plant Cell, V. 8(10). P.1669-1681.

43. Casper S.J., Holt C.A. (1996). Expression of the green fluorescent protein-encoding gene from a tobacco mosaic virus-based vector. Gene, V. 173. P. 69-73.

44. Cowan G.H., Lioliopoulou F., Ziegler A., Torrance L. (2002). Subcellular localisation, protein interactions, and RNA binding of Potato mop-top virus triple gene block proteins. Virology, V. 298(1). P.106-115.

45. Chiu Y.L., Rana T.M. (2002). RNAi in human cells: basic structural and functional features of small interfering RNA. Mol. Cell, V. 10(3). P.549-561.

46. Cline J., Braman J.C., Hogrefe H.H. (1996). PCR fidelity of pfu DNA polymerase and other thermostable DNA polymerases. Nucleic Acids Res., V. 24(18). P.3546-3551.

47. Dawson W.O., Beck D.L., Knorr D.A. and Grantham, G.L. (1986). CDNA cloning of the complete genome of tobacco mosaic virus and prediction of infectious transcript. PNAS, V. 83. P. 1832-1836.

48. Dawson W.O., Bubrick C., and Grantham G.L. (1988). Modifications of the tobacco mosaic virus coat protein gene affecting replication, movement, and symptomatology. Phytopathology, V. 78. P. 783-789.

49. Dawson W. O. (1992). Tobamovirus-plant interactions. Virology, 186. P. 359-367.

50. Dawson W. O. (1999). Tobacco mosaic virus virulence and avirulence. Phil. Trans. R. Soc. Lond., V. 354. P. 645-651.

51. Dehio C., and Schell J. (1994). Identification of plant genetic loci involved in a posttranscriptional mechanism for meiotically reversible transgene silencing. Proc. Natl. Acad. Sci. USA., V. 91. P.5538-5542.

52. Deom C.M., Oliver M.J., and Beachy R.N. (1987). The 30-kilodalton gene product of tobacco mosaic virus potentates virus movement. Science, V.237. P. 389-394.

53. Ding X.S., Shintaku M.H., Carter S.A. and Nelson R.S. (1995). Accumu-lation of mild and severe strains of tobacco mosaic virus in minor veins of tobacco. Mol. Plant Microbe. Interact., V.8. P. 32^40.

54. Donson J., Kearney C.M., Hilf M.E. and Dawson O.W.(1991) Systemic expression of a bacterial gene by a tobacco mosaic virus-based vector. PNAS, Vol. 88. P.7204-7208.

55. Dunigan D.D. and Zaitlin M. (1990). Capping of tobacco mosaic virus RNA. Analis of viral-encoded gyaniltransferase-like activity. J. Biol. Chem., V. 265. P. 7779-7786.

56. Dunoyer P., Pfeffer S., Fritsch C., Hemmer O., Voinnet O., Richards K.E. (2002). Identification, subcellular localization and some properties of a cysteine-rich suppressor of gene silencing encoded by peanut clump virus. J. Plant, V. 29(5). P.555-567.

57. Elmayan Т., and Vaucheret H. (1996). Expression of singl copies of a strohgly expressed 35S transgene can be silenced posttranscriptionally. J. Plant, V. 9. P.767-797.

58. Erickson F.L., Holzberg S., Calderon-Urrea A., Handley V., Axtell M., Corr C., Baker B. (1999). The helicase domain of the TMV replicase proteins induces the N-mediated defence response in tobacco. J. Plant, V. 18(1). P.67-75.

59. Escobar N.M., Haupt S„ Thow G., Boevink P., Chapman S., Oparka K. (2003).

60. High-throughput viral expression of cDNA-green fluorescent protein fusions reveals novel subcellular addresses and identifies unique proteins that interact with plasmodesmata. Plant Cell., V.15(7). P.1507-1523.

61. Fitchen J., Beachy RN., Hein M.B. (1995). Plant virus expressing hybrid coat protein with added murine epitope elicits autoantibody response. Vaccine, V. 13(12). P.1051-1057.

62. Gafny R, Lapidot M., Berna A., Holt C.A., Deom C.M., Beachy R.N. (1992). Effects of terminal deletion mutations on function of the movement protein of tobacco mosaic virus. Virology, V. 187(2). P. 499-507.

63. Gallie D.R, Feder J.N., Schimke RT., Walbot V. (1991). Functional analysis of the tobacco mosaic virus tRNA-like structure in cytoplasmic gene regulation. Nucleic Acids Res., V. 19(18). P.5031-5036.

64. Gallie D.R., Walbot V. (1992). Identification of the motifs within the tobacco mosaic virus 5 '-leader responsible for enhancing translation. NAR, V.20. P.4631 -463 8.

65. Giesman-Coormeyer D., Silver S., Vaewhongs A.A., Lommel S.A., Deom C.M. (1995). Tobamovirus and diantovirus movement proteins are Functionally homologous. Virology, V. 213. P. 38-45.

66. Goelet P., Lomonossoff G.P., Butler P.J., Akam M.E., Gait M. J. and Karn J. (1982). Nucleotide sequence of tobacco mosaic virus RNA. PNAS, V.79. P.5818-5822.

67. Gorbalenya A.E., and Koonin E.V. (1989). Viral proteins containing the purine NTP-binding sequence pattern. Nucleic Acids Res., 17. P.8413-8440.

68. Goregaoker S.P., Eckhardt L.G., Culver J.N. (2000).Tobacco mosaic virusreplicase-mediated cross-protection: contributions of RNA and protein-derived mechanisms. Virology, V. 273(2). P.267-275.

69. Goregaoker S.P., Culver J.N. (2003). Oligomerization and activity of the helicase domain of the tobacco mosaic virus 126- and 183-kilodalton replicase proteins. J Virol., V.77(6). P.3549-3556.

70. Golemboski D.B., Lomonossoff G.P., Zaitlin M. (1990). Plants transformed with a tobacco mosaic virus nonstructural gene sequence are resistant to the virus. PNAS, V. 87(16). P.6311-6315.

71. Grant S.R (1999). Dissecting the mechanisms of posttranscriptional gene silencing: divide and conquer. Cell, V. 96(3). P.303-306.

72. Grdzelishvili V.Z., Chapman S.N., Dawson W.O., Lewandowski D.J. (2000). Mapping of the Tobacco mosaic virus movement protein and coat protein subgenomic RNA promoters in vivo. Virology, V. 275(1). P.177-192.

73. Gossele V., Fache I., Meulewaeter F., Cornelissen M., Metzlaff M. (2002). SVISS a novel transient gene silencing system for gene function discovery and validation in tobacco plants. J. Plant, V. 32(5). P.859-866.

74. Guilley H., Jonard G., Kukla В., Richards K.E. (1979). Sequence of 1000 nucleotides at the 3' end of tobacco mosaic virus RNA. Nucleic Acids Res., V. 6(4). P. 12871308.

75. Hamacher J., Wettern M., Schulz M. (2003). Ubiquitination of TMV coat protein aggregates in infected tobacco leaves. J. Phytopathology, V. 151. P.652-659.

76. Hamilton A.J., Baulcombe D.C. (1999). A species of small antisense RNA inposttranscriptional gene silencing in plants. Science, V. 286.P. 950-952.

77. Hamilton A., Voinnet O., Chappell L., Baulcombe D. (2002). Two classes of short interfering RNA in RNA silencing. J. EMBO, V. 21(17). P. 4671-4679.

78. Hammond S.M., Bernstein E., Beach D., Hannon G. (2000). An RNA-directed nuclease mediates post-transcriptional gene silencing in Drosophila cells. Nature, V.404 (6775). P.293-296.

79. Hagiwara Y., Komoda K., Yamanaka Т., Tamai A., Meshi Т., Funada R., Tsuchiya Т., Naito S. and Ishikawa M. (2003). Subcellular localization of host and viral proteins associated with tobamovirus RNA replication. J. EMBO, Vol. 22. P. 344-353.

80. Hills G.J., Plaskitt К.А., Young N.D., Dunigan D.D., Watts J.W., Wilson T.M., Zaitlin M. (1987). Immunogold localization of the intracellular sites of structural and nonstructural tobacco mosaic virus proteins. Virology, V. 161(2). P.488-496.

81. Hirashima K., Watanabe Y. (2001). Tobamovirus replicase coding region is involved in cell-to-cell movement. J. Virol., V. 75(18). P.8831-8836.

82. Hirashima K., Watanabe Y. (2003). RNA helicase domain of tobamovirus replicase executes cell-to-cell movement possibly through collaboration with its nonconserved region. J. Virol., V. 77(22). P.12357-12362.

83. Heinlein M., Epel B.L., Padgett H.S., Beachy RN. (1995). Interaction of tobamovirus movement proteins with the plant cytoskeleton. Science, V. 270 (5244). P. 19831985.

84. Hilf M.E., and Dawson W.O. (1993). The tobamovirus capsid protein functions as a host-specific determinant of long-distance movement. Virology, V.l93. P. 106-114.

85. Himber C., Dunoyer P., Moissiard G., Ritzenthaler C., Voinnet O. (2003). Transitivity-dependent and -independent cell-to-cell movement of RNA silencing. J. EMBO, V. 22(17). P.4523-4533.

86. Hiriart J.B., Lehto K., Tyystjarvi E., Junttila Т., Aro E.M. (2002). Suppressionof a key gene involved in chlorophyll biosynthesis by means of virus-inducing gene silencing. Plant Mol. Biol., V. 50(2). P.213-224.

87. Hobbs S.L., Warkentin T.D., DeLong C.M. (1993). Transgene copy number can be positively or negatively associated with transgene expression. Plant Mol. Biol., V. 21(1). P. 17-26.

88. Hu W.Y., Myers C.P., Kilzer J.M., Pfaff S.L., Bushman F.D. (2002). Inhibition of retroviral pathogenesis by RNA interference. Curr Biol., V. 12(15). P.1301-1311.

89. Ingelbrecht I., Van Houdt H., Van : Montagu M., Depicker A. (1994). Posttranscriptional silencing of reporter transgenes in tobacco correlates with DNA methylation. PNAS, V. 91(22). P.10502-10506.

90. Ishikawa M., Meshi Т., Motoyoshi F., Takamatsu N. and Okada Y. (1986). In vitro mutagenesis of the putative replicase genes of tobacco mosaic virus. Nucleic Acids Res. V.14. P. 8291-8305. ;

91. Ishikawa M., Meshi Т., Ohno T. and Okada Y. (1991). Specific cessation of minus-strand RNA accumulation at an early stage of tobacco mosaic virus infection. J. Virol., V. 65. P.861-868.

92. Ishihama A. and Barbier P. (1994). Molecular anatomy of viral RNA-directed RNA polymerases. Arch. Virol., V.134. P.235-258.

93. Ivanov P.A., Karpova O.V., Skulachev M.V., Tomashevskaya O.L., Rodionova N.P., Dorokhov Y.L., Atabekov J.G. (1997). A tobamovirus genome that contains an internal ribosome entry site functional in vitro. Virology, V. 232(1). P.32-43.

94. Joshi RL., Chapeville F., Haenni A.L. (1985). Conformational requirements oftobacco mosaic virus RNA for aminoacylation and adenylation. Nucleic Acids Res., V. 13(2). P.347-354.

95. Hunter T.R., Hunt Т., Knowland J., Zimmern D. (1976). Messenger RNA for the coat protein of tobacco mosaic virus. Nature, V. 260(5554). P. 759-764.

96. Hunter T.R., Jackson R., Zimmern D. (1983). Multiple proteins and subgenomic mRNAs may be derived from a single open reading frame on tobacco mosaic virus RNA. Nucleic Acids Res., V. 11(3). P.801-821.

97. Kahn T.W., Lapidot M., Heinlein M., Reichel C., Cooper В., Gafny R., Beachy R.N. (1998). Domains of the TMV movement protein involved in subcellular localization. J. Plant, V. 15(1). P. 15-25.

98. Kapadia S.B., Brideau-Andersen A., Chisari F.V. (2003). Interference of hepatitis С virus RNA replication by short interfering RNAs. PNAS, V. 100(4). P.2014-2018.

99. Karrer E.E., Beachy R.N., Holt C.A. (1998). Cloning of tobacco genes that elicit the hypersensitive response. Plant Mol. Biol., V. 36(5). P.681-690.

100. Kearney C.M., Donson J., Jones G.E., Dawson W.O. (1993). Low level of genetic drift in foreign sequences replicating in an RNA virus in plants. Virology, V.192 (1). P.ll-17.

101. Kiselyova O.I., Yaminsky I.V., Karger E.M., Frolova O.Y., Dorokhov Y.L.,

102. Atabekov J.G. (2001). Visualization by atomic force microscopy of tobacco mosaic virus movement protein-RNA complexes formed in vitro. J. Gen. Virol., V.82(6). P.1503-1508.

103. Kubota K., Tsuda S., Tamai A., Meshi T. (2003). Tomato mosaic virus replication protein suppresses virus-targeted posttranscriptional gene silencing. J. Virol., V. 77(20). P. 11016-11026.i

104. Kumagai M.H., Donson J., Della-Cioppa G., Harvey D., Hanley K., Grill K.L. (1995). Cytoplasmic inhibition of caretenoid biosynthesis with virus-derived RNA. PNAS, V. 92. P. 1679-1683.

105. Lacomme C. and Cruz S. (1999). Bax-induced cell death in tobacco is similar to the hypersensitive response. Proc. Natl. Acad. Sci., V. 96(14). P.7956-7961.

106. Lacomme С., Hrubikova К., Hein I. (2003). Enhancement of virus-induced gene silencing through viral-based production of inverted-repeats. J. Plant, V. 34(4). P.543-553.

107. Leathers V., Tanguay R., Kobayashi M., Gallie D.R. (1993). A phylogenetically conserved sequence within viral 3' untranslated RNA pseudoknots regulates translation. Mol. Cell Biol., V. 13(9). P. 5331-5347.

108. Lehto K., Bubrick P., Dawson W.O. (1990a). Time course of TMV 30K protein accumulation in intact leaves. Virology, V. 174(1). P.290-293.

109. Lehto K. and Dawson W.O. (1990в). Replication, stability, and gene expression of tobacco mosaic virus mutants wits a second 30K ORF. Virology, V.175. P.30-40.

110. Lewandowski D.J., Dawson W.O. (1993). A single amino acid in tobacco mosaic vims replicase prevents symptom production. Mol. Plant Microbe. Interact., V. 6. P. 157-160.

111. Lewandowski D.J., Dawson W.O. (1998). Deletion of internal sequences results in tobacco mosaic vims defective RNAs that accumulate to high levels without interfering with replication of the helper vims. Virology, V.251. P.427-437.

112. Lewandowski D.J., Dawson W.O. (2000). Functions of the 126- and 183-kDa proteins of tobacco mosaic vims. Virology, V. 271(1). P. 90-98.

113. Li H.W., Lucy A.P., Guo H.S., Li W.X., Ji L.H., Wong S.M., Ding S.W. (1999). Strong host resistance targeted against a viral suppressor of the plant gene silencing defence mechanism. J. EMBO, V. 18(10). P.2683-2691.

114. Lu В., Stubbs G., Culver J.N. (1998a). Coat protein interactions involved in tobacco mosaic tobamovirus cross-protection. Virology, V. 248(2). P.188-198.

115. Lu В., Taraporewala F., Stubbs G., Culver J.N. (19986). Intersubunit interactions allowing a carboxylate mutant coat protein to inhibit tobamovims disassembly. Virology, V. 244(1). P.13-19.

116. Ogawa Т., Watanabe Y., Okada Y. (1991). cis-acting elements for in trans complementation of replication-defective mutant of tobacco mosaic virus. Virology, V. 191(1). P.454-458.

117. Ogawa Т., Watanabe Y., Meshi Т., Okada Y. (1992). Trans complementation ofvirus-encoded replicase components of tobacco mosaic virus. Virology, V. 185(2). P.580-584.

118. Osman T.A.M., and Buck K.W. (1996). Complete replication in vitro of tobacco mosaic virus RNA by a template-dependent, membrane-bound RNA polymerase. J. Virol., V. 70. P. 6227-6234.

119. Osman T.A. and Buck K.W. (1997). The tobacco mosaic virus RNA polymerase complex contains a plant protein related to the RNA-binding subunit of yeast elF-3. J. Virol., V. 71(8). P.6075-6082.

120. Osman T.A.M. and Buck K.W. (2003). Identification of a Region of the Tobacco Mosaic Virus 126- and 183-Kilodalton Replication Proteins Which Binds Specifically to the Viral З'-Terminal tRNA-Like Structure. J. Virology, V. 77 (16). P. 8669-8675.

121. Osman T.A., Hemenway C.L., Buck K.W. (2000). Role of the 3' tRNA-like structure in tobacco mosaic virus minus-strand RNA synthesis by the viral RNA-dependent RNA polymerase In vitro. J. Virol., V. 74(24). P. 11671-11680.

122. Ohno Т., Aoyagi M., Yamanashi Y., Saito H., Ikawa I., Meshi Т., and Okada Y. (1984). Nucleotide sequence of the TMV (tomato strain) genome and comparison with the common strain genome. J. Biochem., V.96. P.1915-1923.

123. Namba K., Pattanayek R, Stubbs G. (1989). Visualization of protein-nucleic acid interactions in a virus. Refined structure of intact tobacco mosaic virus at 2.9 A resolution by X-ray fiber diffraction. J. Mol. Biol., V. 208(2). P.307-325.

124. Napoli C., Lemieux C., Jorgensen R (1990). Introduction of a Chimeric Chalcone Synthase Gene into Petunia Results in Reversible Co-Suppression of Homologous Genes in trans. Plant Cell., V.2(4). P.279-289.

125. Nemchinov L.G., Liang T.J., Rifaat M.M., Mazyad H.M., Hadidi A., Keith J.M. (2000). Development of a plant-derived subunit vaccine candidate against hepatitis С virus. Arch. Virol., V. 145(12). P.2557-2573.

126. None H. J., Nojima H., Okayma H. (1990). High efficiency transformation of E.coli withplasmids. Gene, V. 96. P. 23-28.

127. Nishiguchi M., Kikuchi S., Kiho Y., Ohno Т., Meshi Т., Okada Y. (1985). Molecular basis of plant viral virulence; the complete nucleotide sequence of an attenuated strain of tobacco mosaic virus. Nucleic Acids Res., V. 13(15). P.5585-5590.

128. Nykanen A., Haley В., Zamore P.D. (2001). ATP requirements and small interfering RNA structure in the RNA interference pathway. Cell, V. 107(3).P.309-321.

129. Malpica J.M., Fraile A., Moreno I., Obies C.I., Drake J.W., Garcia-Arenal F. (2002). The rate and character of spontaneous mutation in an RNA virus. Genetics, V.162 (4). P.1505-1511.

130. Marathe R., Smith Т.Н., Anandalakshmi R., Bowman L.H., Fagard M., Mourrain P., Vaucheret H., Vance V.B. (2000). Plant viral suppressors of post-transcriptional silencing do not suppress transcriptional silencing. J. Plant, V. 22(1). P.51-59.

131. Mas P., Beachy R.N. (1999). Replication of tobacco mosaic virus on endoplasmic reticulum and role of the cytoskeleton and virus movement protein in intracellular distribution of viral RNA. J. Cell Biol., V. 147(5). P.945-958.

132. Mas P., Beachy R.N. (2000). Role of microtubules in the intracellular distribution of tobacco mosaic virus movement protein. PNAS, V. 97(22). P. 12345-12349.

133. Mason H.S. and Arntzen CJ. (1995). Transgenic plants as vaccine production systems. Trends. Biotechnol., V.13(9). P.388-392.

134. McCaffrey A.P., Meuse L., Pham T.T., Conklin D.S., Hannon G.J., Kay M.A. (2002). RNA interference in adult mice. Nature, V. 418(6893). P.38-39.

135. McLean B.G., Zupan J., Zambryski P.C. (1995). Tobacco mosaic virus movement protein associates with the cytoskeleton in tobacco cell. Plant Cell, V. 7(12). P .2101-2114.

136. McKinney H.H. (1929). Mosaic disease in the Canary Islands, West Africa, and Gibraltar. J. Agricultural Research, V.39. P. 557-578.

137. Merits A., Kettunen R., Makinen K., Lampio A., Auvinen P., Kaariainen L., Ahola T. (1999). Virus-specific capping of tobacco mosaic virus RNA: methylation of GTP prior to formation of covalent complex pi26-m7GMP. FEBS Lett., V. 455. P. 45-48.

138. Meshi Т., Isnikawa M., Semba K., Okada Y. (1986). In vitro transcription of infectious RNAs from full-length cDNAs of tobacco mosaic virus. PNAS, V. 83. P. 5043-5047.

139. Meshi Т., Watanabe Y., Saito Т., Sugimoto A., Maeda T. and Okada Y. (1987). Function of the 30 kd protein of tobacco mosaic virus: involvement in cell-to-cell movement and dispensibility for replication. J. EMBO, V. 6. P.2557-2563.

140. Meyer P., Heidmann I., Neiedenho F.I. (1993). Differences in DNA-methylation are associated with a paramutation phenomenon in transgenic petunia. J. Plant, V. 4. P.89-100.

141. Pelham H.R.B. (1978). Leaky UAG termination codon in tobacco mosaic virus

142. RNA. Nature, V. 272. P.469-471.

143. Powell-Abel P., Nelson R.S., De В., Hoffmann N., Rogers S.G., Fraley R.T., and Beachy R.N. (1986). Delay of disease development in transgenic plants that express the tobacco mosaic virus coat protein gene. Science, V. 232. P. 738-743.

144. Raffo A.J., Dawson W.O. (1991). Construction of tobacco mosaic virus subgenomic replicons that are replicated and spread systemically in tobacco plants. Virology, V. 184(1). P.277-289.

145. Rabindran S., Dawson W.O. (2001). Assessment of recombinants that arise from the use of a TMV-based transient expression vector. Virology, V. 284(2). P. 182-189.

146. Ratcliff F.G., MacFarlane S.A., and Baulcombe D.C. (1999). Gene silencing without DNA rna-mediated cross-protection between viruses. Plant Cell, V. 11 (7). P. 12071216.

147. Reed J.C, Kasschau K.D., Prokhnevsky A.I., Gopinath K., Pogue G.P., Carrington J.C., Dolja V.V. (2003). Suppressor of RNA silencing encoded by Beet yellows virus. Virology, V. 306(2). P.203-209.

148. Reichel C., Mas P., Beachy RN. (1999).The role of the ER and cytoskeleton in plant viral trafficking. Trends Plant Sci., V. 4(11). P.458-462.

149. Rozanov M.N., Koonin E.V., Gorbalenya A.E.(1992). Conservation of the putative methyltransferase domain: a hallmark of the 'Sindbis-like' supergroup of positive-strand RNA viruses. J. Gen. Virol., V.73 (8). P. 2129-2134.

150. Ruiz M.T., Voinnet O., Baulcombe D.C. (1998). Initiation and maintenance of virus-induced gene silencing. Plant Cell, V. 10(6). P.937-946.

151. Ryabov E.V., Oparka K.J., Santa Cruz S., Robinson D.J., Taliansky M.E. (1998). Intracellular location of two groundnut rosette umbravirus proteins delivered by PVX and TMV vectors. Virology, V. 242(2). P.303-313.

152. Ryabov E.V., Robinson D.J., Taliansky M.E. (1999). A plant virus-encodedprotein facilitates long-distance movement of heterologous viral RNA. PNAS, V. 96(4). P. 1212-1217.

153. Saito Т., Yamanaka K., Okada Y. (1990). Long-distance movement and viral assembly of tobacco mosaic virus mutants. Virology, V. 176(2). P.329-336.

154. Sameer P., Goregaoker S.P., Culver J.N. (2003). Oligomerization and Activity of the Helicase Domain of the Tobacco Mosaic Virus 126- and 183-Kilodalton Replicase Proteins .Virol о gy, V. 77 (6). P.3549-3556.

155. Skuzeski J.M., Nichols L.M., Gesteland R.F., Atkins J.F. (1991). The signal for a leaky UAG stop codon in several plant viruses includes the two downstream codons. J. Mol. Biol., V. 218(2). P.365-373.

156. Sulzinski M.A., Gabaro K.A., Palukaitis P. and Zaitlin M. (1985). Replication of tobacco mosaic virus. VII. Characterization of a third subgenomic TMV RNA. Virology, V. 145. P.132-140.

157. Siegel А., Нал V. and Kolacz K. (1978). The effects of tobacco mosaic virus infection on host and virus-specific protein synthesis in protoplasts. Virology, V. 85. P.494-503.

158. Sijen Т., Fleenor J., Simmer F., Thijssen K.L., Parrish S., Timmons L., Plasterk R.H., Fire A. (2001). On the role of RNA amplification in dsRNA-triggered gene silencing. Cell, V. 107(4);Т.465-476.

159. Sherwood J.L. (1987). Demonstration of the specific involvement of coat protein in tobacco mosaic virus (TMV) crosses protection using a TMV coat protein mutant. J. Phytopathology, V. 118. P. 358-362.

160. Shivprasad S., Pogue G.P., Lewandowski D.J., Hidalgo J., Donson J., Grill L.

161. KL, Dawson W. О. (1999). Heterologous sequences greatly affect foreign gene expression in tobacco mosaic virus-based vectors. Virology, V. 255. P. 312-323.

162. Sugiyama Y., Hamamoto H., Takemoto S., Watanabe Y., Okada Y. (1995). Systemic production of foreign peptides on the particle surface of tobacco mosaic virus. FEBS Lett., V. 359. P. 247-250.

163. Shaw J.G., Plaskitt K.A., Wilson T.M.A. (1986). Evidence that tobacco mosaic virus particles disassemble contranslationally in vivo. Virology, 148. P. 326-336.

164. Shintaku M.N., Carter S.A., Bao Y., Nelson R.N. (1996). Mapping nucleotides in the 126-kDa protein gene that control the differential symptoms induced by two strains of tobacco mosaic virus. Virology, V. 221. P.218-225.

165. Szittya G., Silhavy D., Molnar A., Havelda Z., Lovas A., Lakatos L., Banfalvi Z., Burgyan J. (2003). Low temperature inhibits RNA silencing-mediated defence by the control of siRNA generation. J. EMBO, V. 22(3). P.633-640.

166. Taliansky M.E., Malyshenko S.I., Pshennikova E.S., Kaplan I.B., Ulanova E.F., Atabekov J.G. (1982). Plant virus-specific transport function. Virus genomic control required for sistemic spread. Virology, V.122. P. 318-326.

167. Takebe I., Otsuki Y. (1969). Infection of tobacco mesophyll protoplasts by tobacco mosaic virus. Proc Natl Acad Sci U S A, V. 64(3). P. 843-848.

168. Takamatsu N., Watanabe Y., Iwasaki Т., Shiba Т., Meshi, T. and Okada Y. (1991). Deletion analysis of the 5' untranslated leader sequence of tobacco mosaic virus RNA. J. Virol., V.65. P.1619-1622.

169. Takamatsu N., Watanabe Y., Meshi T. and Okada Y. (1990). Mutational analysis of the pseudoknot region in the 3' noncoding region of tobacco mosaic virus RNA. J. Virol., V.64. P.3686-3693.

170. Takamatsu N., Watanabe Y., Yanagi H., Meshi Т., Shiba Т., Okada Y. (19906). Production of enkephalin in tobacco protoplasts using tobacco mosaic virus RNA vector. FEBS Lett., V. 269:73-76.

171. Taylor D.N., Carr J.P. (2000). The GCD10 subunit of yeast eIF-3 binds the methyltransferase-like domain of the 126 and 183 kDa replicase proteins of tobacco mosaic vims in the yeast two-hybrid system. J. Gen. Virol., V. 81. P. 1587-1591.

172. Toth R.L., Pogue G.P., Chapman S. (2002). Improvement of the movement and host range properties of a plant virus vector through DNA shuffling. J. Plant, V. 30(5). P.593-600.

173. Tomenius K., Clapham D., Meshi T. (1987). Localization by immunogold cytochemistry of the virus-coded 30R protein in plasmodesmata of leavel ihfected with tobacco mosaic virus. Virology, V. 160. P. 363-371.

174. Tuschl Т., Zamore P.D., Lehmann R, Bartel D.P., Sharp P.A. (1999). Targeted mRNA degradation by double-stranded RNA in vitro. Genes Dev., V. 13(24). P.3191-3197.

175. Turpen Т.Н., Reinl S.J., Charoenvit Y., Hoffman S.L., Fallarme V., Grill L.K. (1995). Malarial epitopes expressed on the surface of recombinant tobacco mosaic virus. Biotechnology, 13(1). P.53-57.

176. Van Belkum A., Abrahams J. P., Pleij C. W. A. and Bosch L. (1985). Five pseudoknots at the 204 nucleotides long 3' noncoding region of tobacco mosaic virus RNA. Nucleic Acids Res., V. 13. P.7673-7686.

177. Vaucheret H., Beclin C., Elmayan Т., Feuerbach F., Godon C., Morel J.B., Mourrain P., Palauqui J.C., Vernhettes S. (1998). Transgene-induced gene silencing in plants. J. Plant, V. 16(6). P.651-659.

178. Voinnet 0., Lederer C., Baulcombe D.C. (2000). A viral movement protein prevents spread of the gene silencing signal in Nicotiana benthamiana. Cell, V. 103. P.157-167.

179. Waigmann E., Lucas W.J., Citovsky V., Zambryski P. (1994). Direct functional " assay for tobacco mosaic virus cell-to-cell movement protein and identification of a domaininvolved in increasing plasmodesmal permeability. PNAS, V. 91(4). P.1433-1437.

180. Watanabe Y., Morita N., Nishiguchi M., Okada Y. (1987). Attenuated strains of tobacco mosaic vims. Reduced synthesis of a viral protein with a cell-to-cell movement1 function. J. Mol. Biol., V. 194(4). P. 699-704.

181. Wanatabe Y., Ohnishi J., Saitoh H., Hosokawa D., Okada Y. (1996). Addition of nucleotides similar to deleted CAA repeats in the 5' non-coding region of tomato mosaic virus RNA following propagation. J. Gen. Virol., V.77. P.2353-2357.

182. Waterhouse P.M., Graham M.W., Wang M.B. (1998). Virus resistance and gene silencing in plants can be induced by simultaneous expression of sense and antisense RNA. PNAS, V. 95(23) P.13959-13964.

183. Weber H., Haeckel P., Pfitzner A.J. (1992). A cDNA clone of tomato mosaic virus is infectious in plants. J. Virol., 66(6). P.3909-3012.

184. Wilson T.M.A. (1993). Strategies to protect crop plant against virus: pathogen-derived resistance blossoms. PNAS, V. 90. P. 3134-3141. r

185. Wilson T.M.A. (1984). Cotranslational disassambly of tobacco mosaic virus in vitro. Virology, V.137. P.255-265.

186. Wolf S., Deom C., Beachy R.N., Lucus W. J. (1989). Movement protein of tobacco mosaic vims modifies plasmodesmatal size exclusion limit. Science, V. 246.P. 377379. :

187. Wu L., Fan J., Jiang L., Wang H., Song R., Zhang Q., Zhu H., Li N., Liu Z., Xu Z. (2003a). A specific cis-hairpin ribozyme facilitates infection of a TMV-based DNA vector in tobacco protoplasts. J. Virol. Methods., V. 111(2). P. 101-109.

188. Wu L., Jiang L., Zhou Z., Fan J., Zhang Q., Zhu H., Han Q., Xu Z. (20036). Expression of foot-and-mouth disease vims epitopes in tobacco by a tobacco mosaic vims-based vector. Vaccine, V. 21(27-30). P.4390-4398.

189. Wu X. and Shaw J.G. (1997). Evidence that a viral replicase protein is involved in the disassembly of tobacco mosaic vims particles in vivo. Virology, V. 239(2). P. 426-434.

190. YamanakaТ., Ohta Т., Takahashi M., Meshi N. Schmidt R., Dean C., Naito S. and Ishikawa M. (2000). TOM1, an Arabidopsis gene required for efficient multiplication of a tobamovims, encodes a putative transmembrane protein. PNAS, V. 97. P. 10107-10112.

191. Yang D., Lu H., Erickson J.W. (2000). Evidence that processed small dsRNAs may mediate sequence-specific mRNA degradation during RNAi in Drosophila embryos. Curr Biol., V. 10(19). P.l 191-1200.

192. Yang G„ Qiu B.S., Liu X.G., Li Y., Wang X.F. Nonsense mutations of replicase and movement protein genes contributes to the attenuation of an avirulent tomato mosaic vims. Vims Res., V. 87. P. 119-128.

193. Yusibov V., Loesch-Fries L.S. (1995). High-affinity RNA-binding domains ofalfalfa mosaic virus coat protein are not required for coat protein-mediated resistance. Proc. Natl. Acad. Sci., V. 92(19). P.8980-8984.

194. Yusibov V., Modelska A., Steplewski K., Agadjanyan M., Weiner D., Hooper D. C., Koprowski H. (1997). Antigens produced in plants by infection with chimeric plant viruses immunize against rabies virus and HIV-l. Proc Natl Acad Sci, V. 94. P.5784-5788.

195. Zamore P.D., Tuschl Т., Sharp P.A., Bartel D.P. (2000). RNAi: double-stranded RNA directs the ATP-dependent cleavage of mRNA at 21 to 23 nucleotide intervals. Cell, V. 101(1). P.25-33.

196. Zeyenko V. V., Ryabova L. A., Gallie D. R., Spirin A. S. (1994). Enhancing effect of the 3'-untranslated region of tobacco mosaic virus RNA on protein synthesis in vitro. FEBS Lett., V. 354. P. 271-273.1. БЛАГОДАРНОСТИ.

197. Автор выражает благодарность за поддержку и помощь в осуществлении представленной диссертационной работы своему научному руководителю с.н.с., к.б.н. Шияну Александру Николаевичу.

198. Елизаровой Елене Васильевне и Коростылевой Татьяне Викторовне за помощь в культивировании растений Табаков и томатов.

199. Сотрудникам лаборатории генетики растений за очень доброе благожелательное отношение.

200. Сотрудникам ИОГен за интерес к работе и к диссертанту.