Сравнительный анализ экспрессии нативного и модифицированного генов cry3a Bacillus thuringiensis в прокариотических и эукариотических клетках тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Салехи Джузани Голам Реза

• Салехи Джузани Голам Реза
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Салехи Джузани Голам Реза

Введение.

Глава I. Обзор литературы.

1. Bacillus thuringiensis (Bt) и 5-эндотоксины.

1.1. Общая характеристика бактерий Bt.

1.2. Виды токсинов, образующихся в бактериях Bt.

Классификация штаммов и cry-генов Bt.

1.4. Частные вопросы генетики и молекулярной биологии Bt.

2. Экспрессия сту-генов и синтез протоксинов.

2.1. Транскрипционные механизмы.

2.2. Посттранскрипционные механизмы.

2.3. Посттрансляционные механизмы.

2.4. Кристаллизация инсектицидных белков.

2.5. Структура ifr-токсинов.

2.6. Структурные сходства среди токсинов.

2.7. Функционально- структурная интерпретация Я*-токсинов

3. Механизм действия Cry-токсинов.

3.1. Общая характеристика.

3.2. Роль петель домена II.

3.3. Роль домена III в закреплении рецептора.

3.4. Интеграция в мембрану.

3.5. Образование ионных каналов.

3.6. Получение мутантов для повышения токсичности.

4. Использование Bt- генов в биотехнологии и генной нженерии.

4.1. Использование Cry-белков для контроля численности вредителей и защиты растения.

4.2. Разработка новых биопестицидов, основанных на Bt.

4.3. Экспрессия c/j-генов Bt в растениях.

4.4. Устойчивость насекомых к ^-токсинам.

4.5. Управление устойчивостью насекомых к ^-токсинам.

5. Новые репортерные системы на основе лихеназы Clostridium thermocellum.

Глава II. Материалы и методы.

Глава III. Результаты и обсуждение.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сравнительный анализ экспрессии нативного и модифицированного генов cry3a Bacillus thuringiensis в прокариотических и эукариотических клетках»

Открытие в начале XX века инсектицидного действия токсинов Bacillus thuringiensis (Bt) имело важные последствия в вопросе защиты растений от насекомых-вредителей. В последующие десятилетия для защиты растений от насекомых применялись, и по настоящее время применяются, биологические препараты, основой которых являются эти микроорганизмы и/или их метаболиты. Действующие агенты биопрепаратов являются компонентами природных биоценозов, что объясняет их относительную безопасность для окружающей среды, человека, животных, птиц, рыб и полезной энтомофауны. Следующим знаменательным событием, предопределившим ход событий в защите от насекомых, было создание растений, которые сами продуцировали данные токсины (Cry-белки). В настоящее время получены трансгенные растения кукурузы, картофеля, хлопка, риса, экспрессирующие сгу-гены. Экспрессия нативных cry-генов Bacillus в растениях, даже при переносе делеционных вариантов нативных генов, которые кодируют только токсическую часть белка, малоэффективна. Причина низкого уровня экспрессии этих генов в эукариотических системах обусловлена рядом факторов. Во-первых, относительное содержание А+Т в "ДНК Bacillus значительно выше, чем таковое в эукариотах, и в растениях в частности. Высокое содержание А+Т характерно для сайтов сплайсинга, полиаденилирования (polyA), сигналов деградации мРНК, и сайтов терминации транскрипции. Во-вторых, частоты использования кодонов в генах, которые кодируют токсины Bacillus, значительно отличаются от таковых для эукариот (дрожжей, растений). При замене . нуклеотидов в последовательностях Bacillus синонимичными кодонами растений экспрессия -модифицированных генов в растениях значительно увеличивается.

В настоящее время для идентификации трансгенов используется целый арсенал молекулярно-биологических методов: Нозерн- или Вестерн-блот гибридизация, визуализация РНК или белка in situ, определение ферментативной активности белкового продукта (если таковая имеется), и ряд других. Однако эти методы исследований в большинстве случаев требуют больших затрат времени, реагентов, а также специального оборудования, и исследователи для изучения структурно-функциональных характеристик интересующих их последовательностей часто используют стратегию репортерных систем. Используя репортерные системы, можно определять как уровень экспрессии исследуемых генов (транскрипционные репортеры), так и локализацию их продуктов (трансляционные репортеры). Такие исследования проводятся с использованием гибридных последовательностей, которые состоят из последовательности интересующего исследователя гена, слитого в рамке считывания с последовательностью репортерного гена. Это значительно облегчает проведение исследований, поскольку зачастую проще определить продукт репортерного гена, нежели продукт исследуемого гена.

Ранее в нашей лаборатории была разработана репортерная система на основе термостабильной лихеназы Clostridium thermocellum (Piruzian et al, 1985, 1998, 2000, 2002). Свойства лихеназы соответствуют многим требованиям, предъявляемым к репортерным белкам. Лихеназа - термостабильный белок с температурным оптимумом 70°С, имеет небольшой размер (28 кДа), высокую удельную активность. Эти свойства позволяют тестировать ее активность простыми, и чувствительными методами. Помимо этого, лихеназа сохраняет свои основные свойства - активность и термостабильность - при значительных достройках в N- и С-концевых областях белка, что позволяет ее использовать как трансляционный репортер.

В настоящее время проблемы биобезопасности трансгенных растений, в том числе экспрессирующих cry гены, являются актуальными. Cry белки изучаются достаточно долго, и не являются токсичными для млекопитающих, птиц, амфибий, рептилий, и очень специфично влияют на определенные группы насекомых и беспозвоночных вредителей. В то же время, наиболее острым остается вопрос неконтролируемого переноса генетической информации от трансгенов в окружающую среду, в дикорастущие растения, в том числе сорные. Несмотря на многочисленные исследования, этот вопрос пока не до конца разработан. В связи с этим разработка новых подходов, позволяющих производить такие исследования быстро, точно и с минимальными затратами является актуальной.

Цель исследования: провести сравнительное изучение экспрессии нативного и модифицированного генов сгуЪа. в клетках про- и эукариот. Исходя из цели работы, были поставлены следующие задачи:

1. Клонирование нативного гена сгуЪа, определение его нуклеотидной последовательности и анализ последовательности сгуЪа. гена.

2. Модификация последовательности гена сгуЪа. с помощью компьютерных программ для эффективной экспрессии в клетках эукариотах (дрожжи и растения).

3. Химический синтез и клонирование фрагментов модифицированного гена с последующей проверкой корректности сборки последовательности модифицированного гена стуЗаМ секвенированием.

4. Конструирование бактериальных и дрожжевых экспрессионных векторов, в которых нативный и синтетический гены слиты с новым универсальным репортерным геном licBMl, кодирующим термостабильную лихеназу.

5. Сравнительное изучение экспрессии нативного, модифицированного и гибридных генов в клетках Е. coli и дрожжей.

6. Проведение биотестов на личинках первого возраста колорадского жука (Leptinotarsa disemlineata) с использованием белковых экстрактов, полученных из дрожжевых трансформантов.

7. Конструирование растительных экспрессионных векторов, в которых сгуЪаМ и гибридный с/уЗаМ-//сВМ2 гены находятся под контролем светоиндуцибильного промотора малой субъединицы гена РБФК Arabidobsis thaliana и последовательности лидерного пептида гена РБФК гороха.

8. Получение и молекулярно-биологический анализ первичных трансформантов растений картофеля, экспрессирующих стуЪаМ и с/>ваМ-/гсВМ2 гены.

9. Проведение биотестов первичных трансформантов растений картофеля, экспрессирующих сгуЪаМ и стуЗаМ-ИсВМ2 гены, с использованием личинок колорадского жука.

Научная новизна работы. Впервые термостабильную лихеназу (LicBM2) успешно использовали в качестве трансляционного репортерного для проведения сравнительных исследований экспрессии нативного и синтетического белков СтуЗа в клетках про- и эукариот. Показано, что термостабильная лихеназа может использоваться в качестве удобного репортера для отбора трансгенных организмов, определения молекулярной массы гибридных белков и уровня их экспрессии. Для эффективной экспрессии в клетках эукариот ген сгуЪъ. (сгуЗаМ) был модифицирован, и проведены его синтез и клонирование с использованием новой стратегии. Показано, что модификация последовательности сгуЪа гена позволила значительно увеличить уровень его экспрессии в клетках эукариот (дрожжи, растения) с сохранением биологической активности белкового продукта. Впервые для экспрессии модифицированного оуЗаМ и гибридного сгуЪ аМ-//сВМ2 генов в растениях картофеля был использован светоиндуцибильный промотор малой субъединицы гена РБФК Arabidobsis thaliana, который обусловливает преимущественную экспрессию контролируемого им гена только в зеленых тканях растения (листьях) - органах-мишенях для личинок колорадского жука. Апробация результатов работы. Результаты работы были представлены на XVII European Association for Research on Plant Breeding Conference on "Genetic Variation for Plant Breeding" (Tulln, Austria, 2004); International Organization for Biological and Integrated Control of Noxious Animals and Plants (IOBC) Conference on "Breeding for plant resistance to insects, mites and pathogens" (Bialowieza, Poland, 2004); 9th Iranian Students Seminar in Europe (Birmingham, UK, 2002); 2th International Seminar presentation on "Innovational scientific- technical projects of Biotechnology" (Pushino, Russia, 2003); 3th Iran- Russia International Conference on " Agriculture and natural resources" (Moscow, Russia, 2002); 12th Iranian Researchers

Conference in Europe (IRCE) (Manchester, United Kingdom, 2004); 4th International Iran and Russia Conference on " Agriculture and Natural recourses" (Sharekord, Iran, 2004); 3th international scientific conference on "Biotechnology in plant and animal production, and veterinary" (Moscow, Russia, 2004); International scientific conference on "Molecular genetics, Genomics and Biotechnology" (Minsk, Belarus, 2004); 11th International Congress on "Molecular Plant-Microbe Interactions" (Saint-Petersburg, Russia, 2003); Международной конференции "Современное состояние проблем и достижений в области генетики и селекции" (Almata, Kazakhstan, 2003); III съезде ВОГиС "Генетика в XXI веке, Современное состояние и перспективы развития" (Москва, Россия, 2004); Международной конференции "Клеточные ядра и пластиды растений: биохимия и биотехнология" (Minsk, Belarus, 2004); II Конференции Московского общества генетиков и селекционеров им. Н.И. Вавилова "Актуальные проблемы генетики" (Москва, Россия, 2003); Конференции, посвященной 100-летию научной селекции в России (Москва, Россия, 2003); на заседании научного семинара Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН и на семинарах лаборатории функциональной геномики Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Салехи Джузани Голам Реза

Выводы

1. Анализ последовательности нативного гена сгуЪг. с использованием компьютерных программ позволил сделать заключение, что для эффективной экспрессии в эукариотах необходимо модифицировать нуклеотидную последовательность и кодоновый состав этого гена, поскольку: он содержит более 50% кодонов, которые редко используются эукариотическими системами (дрожжи, растения), в его составе выявлено 24 потенциальные области полиаденилирования и 12 сигналов деградации мРНК; его G+C содержание составляет 37%, что значительно ниже, чем у эукариот.

2. Модификация последовательности сгуЪъ. гена позволила значительно увеличить уровень его экспрессии в клетках эукариот (дрожжи, растения) с сохранением биологической активности белкового продукта.

3. Впервые нативный, синтетический и гибридные гены сгуЪа экспрессированы в клетках дрожжей Saccharomyces cerevisiae и показано что дрожжи могут использоваться в качестве модельного организма для проверки и предсказания уровня экспрессии генов в высших эукариотах.

4. Показано, что в составе гибридных Cry3aM-LicBM2 и Cry3a-LicBM2 белков СгуЗаМ и СгуЗа белки сохраняют свою биологическую активность -инсектицидное действие на личинки колорадского жука, а лихеназа сохраняет свои основные свойства репортерного белка - термостабильность и активность.

5. Лихеназа (LicBM2) может использоваться в качестве удобного репортера для отбора трансгенных организмов и определения молекулярной массы гибридных белков и уровня их экспрессии. Метод зимограмм (метод качественного определения активности термостабильной лихеназы) позволяет точно определять молекулярные массы гибридных белков, в состав которых входит лихеназа. Этот метод предлагается вместо Вестерн-блот гибридизации при использовании лихеназы в качестве репортерного белка.

6. На основании молекулярно-биологического анализа и результатов биотестов первичных трансформантов растений картофеля предлагается новая система экспрессии СгуЗа белков в растениях, основанная на использовании гибридных сгуЗа. генов, в состав которых входит лихеназа, и светоиндуцибельного промотора гена rbcS, который обеспечивает высокий уровень экспрессии модифицированного и гибридного генов в трансгенных растениях.

Заключение

Таким образом, представленные результаты исследования позволяют заключить следующее: нуклеотидная последовательность, а также кодоновый состав генов значительно влияет на их экспрессию в разных организмах, поскольку проведенная нами модификация последовательности сгуЪа. гена значительно увеличила уровень его экспрессии в клетках эукариот - дрожжей и картофеля.

Продемонстрировано, что в составе гибридных Cry3aM-LicBM2 и СгуЗа-LicBM2 белков СгуЗаМ и СгуЗа белки сохраняют свою биологическую активность - инсектицидное действие на личинки колорадского жука, а лихеназа сохраняет основные свойства трансляционного репортерного белка термостабильность и активность. Полученные результаты свидетельствует о возможности использования ее в качестве трансляционного репортера при изучении экспрессии генов, кодирующих продукты с высокой молекулярной массой. Метод зиммограм - метод качественного определения активности лихеназы - может использоваться как альтернативный методу Вестерн-блот гибридизации, при использовании лихеназы в качестве трансляционного репортера, поскольку молекулярные массы гибридных белков, определенные методом Вестерн-блот гибридизации, соответствует молекулярным массам этих белков на зимограммах. Показано, что присутствие лихеназы в составе гибридных белков облегчает проведение отбора и анализа экспрессии рекомбинантных белков в трансгенных организмах, что является важным при проведении поисковых исследований.

В результате работы сконструированы экспериментальные модели первичных трансформантов картофеля, экспрессирующие гибридный ген стуЗаМ-/г'сВМ2. Молекулярно-биологический анализ и биотесты экспериментальных моделей позволяют предложить новую систему экспрессию cry генов в растениях. Эта система основана на экспрессии гибридных генов, в состав которых входит последовательность репортерного гена лихеназы, и использовании в качестве регуляторного элемента светоиндуцибельного промотора, который обеспечивает преимущественную экспрессии контролируемых генов только в зеленых тканях растения (листьях) — органах-мишенях для насекомых-вредителей. Основываясь на свойствах репортерного белка лихеназы, входящего в состав гибридных белков, представляется возможным использовать эту репортерную систему для мониторинга трансгенов в агроценозах, поскольку эта система является достаточно простой и точной, и не требует больших материальных и временных затрат.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Салехи Джузани Голам Реза, 2005 год

1. Евстратова В.В., Калиев А.Б., Андрианов В.М., и Пирузян Э.С. (1988), Использование векторных плазмид Agrobacterium для переноса в растения генов делта-эндотоксина из Bacillus thuringiensis. Вестник с. х. наук, № 384, с.71-77.

2. Гулина И.В., Шульга О.А., Миронов М.В., и др. (1994), Экспрессия частично модифицированного гена делта-эндотоксина из В. t var. tenebrionis в трансгенных растениях картофеля, Молекулярная биология, Т.28, № 5, С.1166-1175.

3. Мусийчук К.А., Голденкова И.В., Абдеев P.M., Кобец Н.С., Пирузян Э.С., (2000), Получение и свойства делеционных вариантов лихеназы Clostridium thermocellum и создание на их основе бифункциональных гибридных белков. Биохимия, том 65, № 12, с. 1659-1665.

4. Adams, L. F., Mathewes S., Ohara P., Petersen A., and Guertler H., (1994), Elucidation of the mechanism of СгуЗА overproduction in a mutagenized strain of Bacillus thuringiensis var. tenebrionis. Mol. Microbiol., V. 14, P. 381-389.

5. Agaisse H., and Lereclus D., (1994), Expression in Bacillus subtilis of the Bacillus thuringiensis cryiz. toxin gene is not dependent on a sporulation specific sigma factor and is increased in a spoOA mutant. J. Bacterid., V. 176, P. 4734-4741.

6. Agaisse H., and Lereclus D., (1995), How does Bacillus thuringiensis produce so much insecticidal crystal protein? J. Bacteriol., V. 177, P. 6027-6032.

7. Agaisse H., and Lereclus D., (1996), STAB-SD: a Shine-Dalgarno sequence in the 59 untranslated region is a determinant of mRNA stability. Mol. Microb., V. 20, P. 633-643.

8. Agaisse H., and Lereclus D., (1994), Structural and functional analysis of the promoter region involved in full expression of the сгуЗа toxin gene of B.t. Mol. Microbiol., V.13, P. 97-107.

9. Alliote Т., Zhu L.H., Van Montagu M., Inze D., (1988), Plant expression vectors with the origin of replication of the wild type plasmid Sa, Plasmid, V. 19, P. 251-254.

10. Alstad D. N., and Andow D. A., (1995), Managing the evolution of insect resistance to transgenic plants. Science., V. 268, P. 1894-1896.

11. Aronson A. I., Wu D., and Zhang C., (1995), Mutagenesis of specificity and toxicity regions of a Bacillus thuringiensis protoxin gene. J. Bacterid., V.177, P. 4059—4065.

12. Aronson A., (2002), Sporulation and delta-endotoxin synthesis by Bacillus thuringiensis. Cell.Mol. Life Sci., V. 59, P. 417-425.

13. Baum, J. A., (1994), Tn5401, a new class II transposable element from Bacillus thuringiensis. J. Bacterid., V. 176, P. 2835-2845.

14. Beard. С. E, Ranasinghe C., and Akhurst R.J., (2001), Screening for novel cry genes by hybridization. Letters in Applied Microbiology, V. 33, P. 241-245.

15. Bietlot H.P.L., Vishmuthala J., CareyP.R., (1990), Characterization of the cysteine residues and disulfide linkage in the protein crystal of B.t. Biochem.J., V. 267, P. 309-315.

16. Bradford M. M., (1976), A rapid sensitive method for quantification of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding, Anal. Biochem., V. 72, P. 248-254.

17. Bravo A., (1997), Phylogenetic relationships of Bacillus thuringiensis delta-endotoxin family proteins and their functional domains. J. Bacterid., V. 179, P. 2793-2801.

18. Bravo A., Agaisse H., Salamitou S., and Lereclus D., (1996), Analysis of crylAo. expression in sigE and sigK mutants of B.t. Mol. Gen. Genet., V. 250, P. 734—741.

19. Bravo A., Jansens S., and Peferoen M., (1992), Immunocytochemical localization of B.t insecticidal crystal proteins in intoxicated insects. J. Invertebr. Pathol., V. 60, P. 237-246.

20. Brown К. L., (1993), Transcriptional regulation of the Bacillus thuringiensis subsp. thompsoni crystal protein gene operon. J. Bacterid., V. 175, P. 7951-7957.

21. Brown K. L., and Whiteley H. R., (1990), Isolation of the second B.t RNA polymerase that transcribes from a crystal protein gene promoter. J. Bacteriol., V. 172, P. 6682-6688.

22. Burges H. D., and Hurst J. A., (1977), Ecology of Bacillus thuringiensis in storage moths. J. Invertebr. Pathol., V. 30, P. 131-139.

23. Butko P., Huang F., Pusztai-Carey M., and Surewicz W. К. K., (1997), Interaction of the delta-endotoxin CytA from B.t var. israelensis with lipid membranes. Biochemistry, V. 36, P. 12862-12868.

24. Candas M., Loseva O., Oppert В., Kosaraju P., and Lee A, (2002), Insect Resistance to B.t Alterations in the Indian Moth Larval Gut Proteome, Research, V. 4, P.234-238.

25. Cao J., Zhao J.Z., Tang J. D., Shelton A. M., Earle E. D., (2002), Broccoli plants with pyramided crylAcand cry\CBi genes control diamondback moths resistant to CrylA and Cry 1С proteins, Theor. Appl. Genet., V. 105, P. 258-264.

26. Carlson C. R., T. Johansen, M., M. Lecadet, and A. Kolst. 1996. Genomic organization of the entomopathogenic bacterium B.t subsp. berliner 1715. Microbiology 142:1625-1634.

27. Carroll J., and Ellar D. J., (1997), Analysis of the large aqueous pores produced by a Bacillus thuringiensis protein insecticide in Manduca sexta midgut-brush-border-membrane vesicles. Eur. J. Biochem., V. 245, P. 797-804.

28. Chaufaux J., Muller-Cohn J., Buisson C., Sanchis V., Lereclus D., and Pastuer N., (1997), Inheritance of resistance to the Bacillus thuringiensis CrylC toxin in Spodoptera littoralis (Lepidoptera: Noctuidae). J. Econ. Entomol., V. 90, P. 873-878.

29. Cheng Bai, Brady A. Vick, Shu-Xia Yi., (2002), Characterization of a New B.t Isolate Highly Active Against Cochylis hospes, Current Microbiology, V. 44, P. 280-285.

30. Chestukhina G. G., Kostina L. I., Mikhailova A. L., Tyurin S. A., Klepikova F. S., and Stepanov V. M., (1982), The main features of Bacillus thuringiensis delta-endotoxin molecular structure. Arch. Microbiol., V. 132, P. 159-162.

31. Choma С. Т., and Kaplan H., (1990), Folding and unfolding of the protoxin from B.t.: evidence that the toxic moiety is present in an active conformation, Biochemistry, V. 29, P.10971-10977.

32. Choma С. Т., Surewicz W. К., Carey P. R., Pozsgay M., and Kaplan H., (1990), Secondary structure of the entomocidal toxin from B.t subsp. kurstaki HD-73. J. Protein Chem., V. 9, P. 87-94.

33. Conner Anthony J., Travis R. Glare and Jan-Peter Nap, (2003), The release of genetically modified crops into the environment, Part II. Overview of ecological risk assessment. The Plant Journal, V. 33, P. 19-46.

34. Crawford D. N., and Harvey W. R., (1988), Barium and calcium block Bacillus thuringiensis subspecies kurstaki delta-endotoxins inhibition of potassium current across isolated midgut of larval Manduca sexta. J. Exp. Biol., V. 137, P. 277-286.

35. Crickmore N., Zeigler D. R., Feitelson J., Schnepf E., Van Rie J., Lereclus D., Baum J., and Dean D. H., (1998), Revision of the nomenclature for the Bacillus thuringiensis pesticidal crystal proteins. Microbiol. Mol. Biol. Rev., V. 62, P. 807-813.

36. Delecluse A., Rosso M., and Ragni A., (1995), Cloning and expression of a novel toxin gene from Bacillus thuringiensis subsp. jegathesan encoding a highly mosquitocidal protein. Appl. Environ. Microbiol., V. 61, P. 4230-4235.

37. Denolf P., Hendrickx K., Van Damme J., Degheele D., and Van Rie J., (1997), Cloning and characterization of Manduca sexta and Plutella xylostella midgut aminopeptidase N enzymes related to B.t toxin-binding proteins. Eur. J. Bioch., V. 248, P. 748-761.

38. Dervyn E., Poncet S., Klier A., and Rapoport G., (1995), Transcriptional regulation of the crylVD gene operon from B.t subsp. israelensis. J. Bacteriol., V. 177, P. 2283-2291.

39. De Souza M. Т., Lecadet M. M., and Lereclus D., (1993), Full expression of the сгуЗа toxin gene of Bacillus thuringiensis requires a distant upstream DNA sequence affecting transcription. J. Bacteriol., V. 175, P. 2952-2960.

40. Erirington J., (1993), Bacillus subtilis sporulation, regulation of gene expression and control of morphogenesis. Microbiol. Rev., V. 57, P. 311-315.

41. Estrella H., (1999), Transgenic plants for tropical regions: Some considerations about their development and their transfer to the small farmer, PNAS, V. 96, P. 5978-5981.

42. Estruch J. J., Carozzi N. В., Desai N., Duck N. В., and Koziel M. G., (1997), Transgenic plants: an emerging approach to pest control. Nat. Biotechnol., V. 15, P. 137-141.

43. Federici B.A., Luthy P. and Ibarra J.E., (1990), Parasporal body of B.t israelensis .structure, protein composition and toxicity. In bacterial Control of Mosquitoes and Black flies., P.l6-44.

44. Fedoroff N. V., and Cohen Joel E., (1999), Plants and population: Is there time?, PNAS, V. 96, P. 5903-5907

45. Feitelson J. S., (1993), The Bacillus thuringiensis family tree, In L. Kim (ed.), Advanced engineered pesticides. Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., P. 63-71.

46. Ferre J., Escriche В., Bel Y., and Van Rie J., (1995), Biochemistry and genetics of insect resistance to B.t insecticidal crystal proteins. FEMS Microbiol. Lett., V. 132, P. 1-7.

47. Flores H., Soberon X., Sanchez J., and Bravo A., (1997), Isolated domain II and III from the B.t CrylAb delta-endotoxin binds to lepidopteran midgut membranes. FEBS Lett., V. 414, P. 313-318.

48. Francis, B. R., and Bulla L. A. Jr., (1997), Further characterization of Bt-Rl, the cadherin-like receptor for CrylAb toxin in tobacco hornworm (Manduca sexta) midguts. Insect Biochem. Mol. Biol., V. 27, P. 541-550.

49. Ge A. Z., Fister R. M., and Dean D. H., (1990), Hyper expression of a B.t delta-endotoxin encoding gene in Escherichia coli: properties of the product. Gene, V. 93, P. 49-54.

50. Gilbert H. F., (1997), Protein disulfide isomerase and assisted protein folding, J. Biol. Chem., V. 272, P. 29399-29402.

51. Gould F., (1998), Sustainability of transgenic insecticidal cultivars: integrating pest genetics and ecology. Annu. Rev. Entomol., V. 43, P. 701-726.

52. Harry A., Kleter Gijs A., Noteborn Hub P. J. M., and Kok Esther J., (2001), Assessment of the food safety issues related to genetically modified foods. The Plant Journal, V. 27(6), P. 503-528.

53. Helgason E., Okstad 0. A., Caugant D.A., ( 2000), Bacillus anthrasis, B. cereus and Bt — one species on the basis of genetic evidence. Appl. Environ. Microbiol., V. 66:2627-2630.

54. Himeno M., and Ihara H., (1995), Mode of action of delta-endotoxin from Bacillus thuringiensis var. aizawai and molecular action of insecticides on ion channels. American Chemical Society, P. 129-135.

55. Hodgman Т. C., and Ellar D. J., (1990), Models for the structure and function of the B.t delta-endotoxins determined by compilational analysis, DNA Seq., V. 1, P. 97-106.

56. Hofte H., and Whiteley H. R., (1989), Insecticidal crystal proteins of Bacillus thuringiensis. Microbiol. Rev., V. 53, P. 242-255.

57. Ho San Kim, Saitoh H., Yamashita S., Акао Т., Park Y. S., Maeda M., Tanaka R., Mizuki E., (2003), Cloning and Characterization of Two Novel Crystal Protein Genes from a Bacillus thuringiensis serovar Dakota. Current Microbiology, V. 46, P. 33-38.

58. Ho San Kim, and Ming Shun Li. 2001. Molecular Cloning of a New Crystal Protein Gene cryl Afl of B.t from Korean Sericultural Farms, Curr. Microbiol., V. 43, P. 408-413

59. Ihara H., Kuroda E., Wadano A., and Himeno M., (1993), Specific toxicity of delta-endotoxins from B. t to Bombyx mori. Biosci. Biotechnol. Biochem., V. 57, P. 200-204.

60. Ives A. R., and Andow D. A., (2002), Evolution of resistance to Bt crops: directional selection in structured environments, Ecology Letters, V. 5, P. 792-801.

61. Johnson D. E., and McGaughey W. H., (1996), Contribution of Bacillus thuringiensis spores to toxicity of purified Cry proteins towards Indianmeal moth larvae. Curr. Microbiol., V. 33, P. 54-59.

62. Keeton T. P., and Bulla L. A., (1997), Ligand specificity and affinity of BT-R1 , the Bacillus thuringiensis Cryl A toxin receptor from Manduca sexta, expressed in mammalian and insect cell cultures. Appl. Environ. Microbiol., V. 63, P. 3419-3425.

63. Laemmli U. K., (1970), Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, V. 227, P. 680-685.

64. Lecadet M. M., and Frachon E., (1994), Presented at the XXVIIth Annual Meeting of the Society for Invertebrate Pathology, Montpellier, France.

65. Lee M. K., Aguda R. M., Cohen M. В., Gould F. L., and Dean D. H., (1997), Determination of binding of Bacillus thuringiensis delta-endotoxin receptors to rice stem borer midguts. Appl. Environ. Microbiol., V. 63, P.1453-1459.

66. Lee M. K., Curtiss A., Alcantara E., and Dean D. H., (1996), Synergistic effect of the B.t toxins CrylAa and CrylAc on the gypsy moth, Lymantria dispar. Appl. Envir. Microbiol., V. 62, P. 583-586.

67. Leonard C., Chen Y., and Mahillon J., (1997), Diversity and different distribution of IS231, IS232 and IS240 among B. cereus, B. thuringiensis and B. mycoides. Microbiology, V. 143, P. 2537-2547.

68. Lereclus D., Agaisse H., Gominet M., and Chaufaux J., (1995), Overproduction of encapsulated insecticidal crystal proteins in a B. thuringiensis spOA mutant. Bio/Technology, V. 13, P. 67-71.

69. Lereclus D., Vallade M., Chaufaux J., Arantes O., and Rambaud S., (1992), Expansion of the insecticidal host range of Bacillus thuringiensis by in vivo genetic recombination. Bio/Technology, V. 10, P. 418-421.

70. Leroy Т., Herry A.M., Royer M., Altosaar I., Frutos R., Duris D., Philippe R., (2000), Genetically modified coffee plants expressing the Bacillus thuringiensis cry 1 Ac gene for resistance to leaf miner, Plant Cell Report, V. 19, P. 382-389.

71. Li M. S., Je Y.H., Lee I.H., Chang J.H., Roh J.Y., Kim H.S., Oh H.W., Boo K.S., (2002), Isolation and characterization of a strain of Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki containing a new delta-endotoxin gene, Current Microbiology, V. 45, P. 299-302.

72. Li J., Koni P. A., and Ellar D. J., (1996), Structure of the mosquitocidal delta-endotoxin CytB from B.t sp. kyushuensis and implica-tions for membrane pore formation. J. Mol. Biol., V. 257, P. 129-152.

73. Liu Y. В., and Tabashnik В. E., (1997), Experimental evidence that refuges delay insect adaptation to Bacillus thuringiensis. Proq. R. Soc. Lond. Ser., V. 264, P. 605-610.

74. Liu Y. В., and Tabashnik В. E., (1997), Inheritance of resistance to the B. thuringiensis toxin CrylC in the diamondback moth. Appl. Environ. Microbiol., V. 63, P. 2218-2223.

75. Liu Y. В., Tabashnik В. E., and Pusztai-Carey M., (1996), Field-evolved resistance to B.t toxin CrylC in diamondback moth (Plutellidae). J. Econ. Entomol., V. 89, P. 798-804.

76. Loevgren A., Cathrine R. Carlson, Daiwu Kang, Katarina Eskils, Anne-Brit Kolsto, (2002), Physical mapping of the Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki and alesti Chromosomes. Current Microbiology, V. 44, P. 81-87.

77. Luo K., Lu Y. J., and Adang M. J., (1996), A 106 kDa form of aminopeptidase is a receptor for Bacillus thuringiensis CrylC delta-endotoxin in the brush border membrane of Manduca sexta. Insect Biochem. Mol. Biol., V. 26, P. 783-791.

78. Mallet J., and Porter P., (1992), Preventing insect adaptation to insect-resistant crops: are seed mixtures or refugia the best strategy? Proc. R. Soc. ond. Ser., V. 250, P. 165-169.

79. Malvar Т., and Baum J. A., (1994), Tn5401 disruption of the spoOF gene, identified by direct chromosomal sequencing, results in СгуЗА overproduction in B.t. J. Bacterid., V. 176, P. 4750-4753.

80. Malvar Т., Gawron-Burke C., and Baum J. A., (1994), Overexpression of Bacillus thuringiensis HknA, a histidine protein kinase homolog, bypasses early Spo 2 mutations that result in СгуЗА overproduction. J. Bacterid., V. 176, P. 4742-4749.

81. Martinez C., and Caballero P., (2002), Contents of cry genes and insecticidal toxicity of B.t strains from terrestrial and aquatic habitats, J. Appl. Microbiol., V. 92, P. 745-752.

82. Masson L., Mazza A., Brousseau R., and Tabashnik В., (1995), Kinetics of Bacillus thuringiensis toxin binding with brush border membrane vesicles from susceptible and resistant larvae of Plutella xylostella. J. Biol. Chem., V. 270, P. 11887-11896.

83. McGaughey W. H., (1985), Evaluation of B.t for controlling Indianmeal moths (Pyralidae) in farm grain bins and elevator silos. J. Econ. Entomol., V. 78, P. 1089-1094.

84. McGaughey W. H., and Johnson D. E., (1994), Influence of crystal protein composition of Bacillus thuringiensis strains on cross-resistance in Indian-meal moths (Lepidoptera: Pyralidae). J. Econ. Entomol., V. 87, P. 535-540.

85. Meadows M. P., (1993), Bacillus thuringiensis in the environment: ecology and risk assessment, In P. F. Entwistle, J. S. Cory, M. J. Bailey, and S. Higgs (ed.), B.t an environmental biopesticide: theory and practice. Wiley, New York, P. 193-220.

86. Menou G., Mahillon J., Lecadet M. M., and Lereclus D., (1990), Structural and genetic organization of IS232, a new insertion sequence of Bacillus thuringiensis. J. Bacterid., V. 172, P. 6689-6696.

87. Metz T. D., Roush R. Т., Tang J. D., Shelton A. M., and Earle E. D., (1995), Transgenic broccoli expressing a Bacillus thuringiensis insecticidal crystal protein: implications for pest management strategies. Mol. Breed., V. 1, P. 309-317.

88. Nagamatsu Y., Itai Y., Hatanaka C., and Hayashi K., (1984), A toxic fragment from the entomocidal crystal protein of B.t Agric. Biol. Chem., V. 48, P. 611-619.

89. Naimov N., Dukiandjiev S., and De Maagd Ruud A., (2003), A hybrid Bacillus thuringiensis delta-endotoxin gives resistance against a coleopteran and a lepidopteran pest in transgenic potato, Plant Biotechnology Journal., V. 1, P. 51-57.

90. Nayak P., Basu D., Das S.,. Basu A, Ghosh D., Ramakrishnan N. A., Ghosh M., and Sen S. K., (1997), Transgenic elite indica rice plants expressing CrylAc delta-endotoxin of B.t are resistant against yellow stem borer. PNAS, V. 94, P. 2111- 2116.

91. Nierlich D. P., and Murakawa G. J., (1996), The decay of bacterial messenger RNA. Prog. Nucl. Acid Res. Mol. Biol., V. 52, P. 153-216.

92. Novillo C., Castan P., and Ortego F., (1997), Characterization and distribution of chymotrypsin-like and other digestive proteases in Colorado potato beetle larvae. Arch. Insect. Biochem. Physiol., V. 36, P. 181-201.

93. Oppert В., Kramer K. J., Beeman R. W., and Mc-gaughey W. H., (1997), Proteinase-mediated insect resistance to B.t toxins. J. Biol. Chem., V. 272, P. 23473-23476.

94. Park Hyun-Woo, Baoxue Ge, Leahs Bauer, and Federisi Brian A., (1998), Optimization of СгуЗА Yields in B.t by Use of Sporulation-Dependent Promoters in Combination with the STAB-SD mRNA Sequence, V. 64(10), P. 3932-3938.

95. Parker M. W., Postma J. P. M., Pattus F., Tucker A. D., and Tsernoglou D., (1992), Refined structure of pore-forming domain of colicin A at 2.4 E resolution. J. Mol. Biol., V. 224, P. 639-657.

96. Peferoen M., (1997), Progress and prospects for field use of Bt genes in crops. Trends Biotechnol., V. 15, P. 173-177.

97. Perez C. J., and Shelton A. M., (1997), Resistance of Plutella xylostella (Lepidoptera: Plutellidae) to B.t Berliner in Central America. J. Econ. Entomol., V. 90, P. 87-93.

98. Perlak F. J., Fuchs R. L., Dean D. A., McPherson S. L., and Fischhoff D. A., (1991), Modification of the coding sequence enhances plant expression of insect control protein genes. PNAS, V. 88, P. 3324-3328.

99. Piruzian E. S., Monzavi-Karbassi В., Darbinian N.S., Goldenkova I.V., Kobets N.S., Mochulsky A.V., (1998), The use of a thermoactive -glucanase gene from Clostridium thermocellum as a reporter gene in plants. Mol. Gen. Genet., V. 257, P. 561-567

100. Poncet S., Delercluse A., Anello G., Klier A., and Rapoport G., (1994), Transfer and expression of the cryIVВ and cryIVD genes of Bacillus thuringiensis subsp. israelensis in Bacillus sphaericus 2297. FEMS Microbiol. Lett., V.l 17, P. 91-96.

101. Poncet S., Dervyn E., Klier A., and Rapoport G., (1997), SpoOA represses transcription of the cry toxin genes in B.t. Microbiology, V. 143, P. 2743-2751.

102. Pray Carl E. , Jikun Huang, Ruifa Hu and Scott Rozelle, (2002), Five years of Bt cotton in China the benefits continue. The Plant Journal, V. 31(4), P. 423-430.

103. Ragni A., Thierry I., and Delercluse A., (1996), Characterization of six highly mosquitocidal B. thuringiensis strains that do not belong to the H-14 serotype. Curr. Microbiol., V. 32, P. 48-54.

104. Rajamohan F., Alzate O., Cotrill J. A., Curtiss A., and Dean D. H., (1996), Protein engineering of B.t delta-endotoxin: mutations at domain II of CrylAb enhance receptor affinity and toxicity towards gypsy moth larvae. PNAS, V. 93, P. 14338-14343.

105. Rajamohan F., Lee M. K., and Dean D. H., (1998), Bacillus thuringiensis insecticidal proteins: molecular mode of action. Progress in Nucleic Acid Research and Molecular Biology, Academic Press, New York, V. 60, P. 335-339.

106. Rezsohazy R., Mahillon J., and Delcour J., (1993), IS231V and W from B.t subsp. israelensis, two distant members of the IS231 family of insertion sequences. Plasmid, V. 30, P. 141-149.

107. Richard S. V. and Playford C. L., (2001), Abundance of Helicoverpa (Lepidoptera: Noctuidae) pupae under cotton and other crops in central Queensland: Implications for resistance management, Australian J. Entomol., V. 40, P. 264-269.

108. Robertson J. L., Preisler H. K., Hickle L. A., and Gelernter W. D., (1995), Natural variation: a complicating factor in bioassays with chemical and microbial pesticides. J. Econ. Entomol., V. 88, P. 1-10.

109. Rosso M. L., and Delercluse A., (1997), Distribution of the insertion element IS240 among Bacillus thuringiensis strains. Curr. Microbiol., V. 34, P. 348-353.

110. Roush R. Т., (1996), Can we slow adaptation by pests to insect transgenic crops?, In G. J. Persley (ed.), Biotechnology and integrated pest management. CAB International, UK. P. 242-263.

111. Salamitou S., Agaisse H., Bravo A., and Lereclus D., (1996), Genetic analysis of сгуЗА gene expression in Bacillus thuringiensis. Microbiology, V. 142, P. 2049-2055.

112. Sambrook J., Fritch E.F. and Maniatis Т., (1989), Molecular cloning- A laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York.

113. Sayyed A. H., Hugo C., and Denis J., (2003), Could Bt transgenic crops have nutritionally favorable effects on resistant insects?, Ecology Letters, V. 6, P. 167-169.

114. Shelton A. M., and Mark K. S., (2001), The monarch butterfly controversy: scientific interpretations of a phenomenon. Plant Journal, V. 27(6), P. 483-488.

115. Schnepf E., Crickmore N., Vanrie J., Lereclus D., Baum J., Feitelson J., Zeigler D. R., and Dean D. H., (1998), Bacillus thuringiensis and Its Pesticidal Crystal Proteins, Microbiology and Molecular Biology Reviews, V. 62(3), P. 775-806.

116. Schuler Т. H., Van Emden H. F., (2000), Degradation of the CrylAb protein within transgenic Bacillus thuringiensis corn tissue in the field, Agricultural and furest Entomology, V. 2, P. 3-28.

117. Schwartz J. L., Lu Y. J., Sohnlein P., Brousseau R., Laprade R., Masson L., and Adang M. J., (1997), Ion channels formed in planar lipid bilayers by B.t toxins in the presence of Manduca sexta midgut receptors. FEBS Lett., V. 412, P. 270-276.

118. Schwartz J. L., Garneau L., Masson L., and Brousseau R., (1991), Early response of cultured Iepidopteran cells to exposure to delta-endotoxin from B.t: involvement of calcium and anionic channels. Biochim. Biophys. Acta., V. 1065, P. 250-260.

119. Sekar V., (1988), The insecticidal crystal protein gene is expressed in vegetative cells of Bacillus thuringiensis var. tenebrionis. Curr. Microbiol., V. 17, P. 347- 349.

120. Sekar V., Held В., Tippett J., Amirhusin В., Robert P., Wang K., and Wilson H. M., (1997), Biochemical and molecular characterization of the insecticidal fragment of CryV. Appl. Environ. Microbiol., V. 63, P. 2798-2801.

121. Shelton A. M., Roush R. Т., Tang J. D., Perez C. J., and Earle E. D., (1995), Presented at the XXVIIIth Annual Meeting of the Society for Invertebrate Pathology, Cornell University.

122. Shimizu Т., and Morikawa К., (1996), The b-prism: a new folding motif. Trends Biochem. Sci., V. 21, P. 3-6.

123. Sims S. R., and Holden L. R., (1996), Insect bioassay for determining soil degradation of Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki CrylA(b) protein in corn tissue. Environ. Entomol., V. 25, P. 659-664.

124. Sims S. R., and Ream J. E., (1997), Soil inactivation of the Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki Cry2A insecticidal protein within transgenic cotton tissue: laboratory microcosm and field studies. J. Agric. Food Chem., V. 45, P. 1502-1505.

125. Slatin S. L., Abrams С. K., and English L., (1990), Delta-endotoxins form cation selective channels in planar lipid bilayers. Biochem. Biophys. Res Commun., V. 169, P. 765-772.

126. Smith G. P., and Ellar D. J., (1994), Mutagenesis of two surface exposed loops of the B.t CrylC endotoxin affects insecticidal specificity. Biochem. J., V. 302, P. 611-616.

127. Soltes-Rak E., Kushner D. J., Williams D. D., and Coleman J. R., (1993), Effect of promoter modification on mosquitocidal cry4B gene expression in Synechococcus sp. strain 7942. Appl. Environ. Microbiol., V. 59, P. 2404-2410.

128. Stephens J. M., (1952), Disease in codling moth larvae produced by several strains of Bacillus cereus. Can. J. Zool., V. 30, P. 30-40.

129. Stewart C. N., Raymer P. L., and Ramachandran S., (1997), Increased fitness of transgenic insecticidal rapeseed under insect selection pressure. Mol. Ecol., V. 6, P. 773779.

130. Stock C. A., McLoughlin T. J., Klein J. A., and Adang M. J., (1990), Expression of a. B.t crystal protein gene in Pseudomonas cepacia. Can. J. Microbiol., V. 36, P. 879-884.

131. Tabashnik В. E., Patin A. L., Dennehy T. J., Yong-Biao Liu, Yves Carriere, Sims M. A., and Larry A., (2000), Frequency of resistance to Bacillus thuringiensis in field populations of pink bollworm, PNAS, V. 97(24), P. 12980-12987.

132. Tabashnik В. E., (1992), Evaluation of synergism among Bacillus thuringiensis toxins. Appl. Environ. Microbiol., V. 58, P. 3343-3346.

133. Tabashnik В. E., (1994), Evolution of resistance to B. thuringiensis. Annu. Rev. Entomol., V. 39, P. 47-79.

134. Tang J. D., Gilboa S., Roush R. Т., and Shelton A. M., (1997), Inheritance, stability, and lack-of-fitness costs of field-selected resistance to B.t in diamondback moth (Lepidoptera: Plutellidae) from Florida. J. Econ. Entomol., V. 90, P. 732-741.

135. Те Giffel M. C., Beumer R. R., Klijn N. Wagendoф A., and Rombouts F. M., (1997), Discrimination between Bacillus cereus and Bacillus thuringiensis using specific DNA probes based on variable regions of 16S rRNA. FEMS Microbiol. Lett., V. 146, P. 4751.

136. TeatherR., and Wood P., (1982), Appl.Environm.Microbiol., V. 43, P. 777-780.

137. Thomas W. E., and Ellar D. J., (1983), Mechanism of action of Bacillus thuringiensis var. israelensis insecticidal delta-endotoxin. FEBS Lett., V. 154, P. 362-368.

138. Trisyono A., and Whalon M. E., (1997), Fitness costs of resistance to B.t in Colorado potato beetle (Coleoptera: Chrysomelidae). J. Econ. Entomol., V. 90, P. 267-271.

139. Vadlamudi R. K., Ji Т. H., and Bulla L. A., (1993), A specific binding protein from Manduca sexta for the insecticidal toxin of B.t subsp. berliner. J. Biol. Chem., V. 268, P. 12334-12340.

140. Valaitis A. P., Mazza A., Brousseau R., and Masson L., (1997), Interaction analyses of Bacillus thuringiensis Cryl A toxins with two aminopeptidases from gypsy moth midgut brush border membranes. Insect Biochem. Mol. Biol., V. 27, P. 529-539.

141. Van Aarssen R., Soetaert P., Stam M., Dockx J., Gossele V., Seurinck J., Reynaerts A., and Cornelissen M., (1995), c/jlA(b) transcript formation in tobacco is inefficient. Plant Mol. Biol., V. 28, P. 513-524.

142. Van Rie J., McGaughey W. H., Johnson D. E., and Van Mellaert H., (1990), Mechanism of insect resistance to the microbial insecticide B. t. Science, V. 247, P. 72-74.

143. Von Tersch M. A., Slatin S. L., Kulesza C. A., and English L. H., (1994), Membrane-permeabilizing activities of Bacillus thuringiensis coleopteran-active toxin Cry3B2 and Cry3B2 domain I peptide. Appl. Environ. Microbiol., V. 60, P. 3711-3717.

144. Whalon M. E., Miller D. L., Hollingworth R. M., Grafius E. J., and Miller J. R., (1993), Selection of a Colorado potato beetle (Coleoptera: Chrysomelidae) strain resistant to Bacillus thuringiensis. J. Econ. Entomol., V. 86, P. 226-233.

145. Wie I. S., and De Vos P., (2003), Properties of Bacillus thuringiensis isolated from bank voles. Journal of Applied Microbiology, V. 94, P. 60-64.

146. Williams S., Friedrich L., Dincher S., Carozzi N., Kessmann H., Ward E., and Ryals J., (1992), Chemical regulation of Bacillus thuringiensis delta-endotoxin expression in transgenic plants. Bio/Technology, V. 10, P. 540-543.

147. Wolfersberger M. G., (1990), The toxicity of two Bacillus thuringiensis delta-endotoxins to gypsy moth larvae is inversely related to the affinity of bindingsites on midgut brush border membranes for the toxins. Experientia, V. 46, P. 475—477.

148. Wong H. C., Schnepf H. E., and Whiteley H. R., (1983), Transcriptional and translational start sites for the Bacillus thuringiensis crystal protein gene. J. Biol. Chem., V. 258, P. 1960-1967.

149. Wood, T.M., and Bhat K.M., (1988), Methods for measuring cellulose activities. Methods Enzymology, V. 160, P. 87-112.

150. Wraight C. L., Zangerl A. R., Carroll M. J., and Berenbaum M. R., (2001), Absence of toxicity of Bacillus thuringiensis pollen to black swallowtails under field conditions, Appl. Environ. Microbiol., V. 85, P. 1601-1610

151. Wu G., Cui H., Ye G., Xia Y., Sardana R., Cheng X., Li Y., Altosaar I., Shu Q., (2002), Inheritance and expression of the cryl Abgene in B.t transgenic rice, Theor. Appl. Genet., V. 104, P. 727-734.

152. Wu D., and Aronson A. I., (1992), Localized mutagenesis defines regions of the Bacillus thuringiensis delta-endotoxin involved in toxicity and specificity. J. Biol. Chem., V. 267, P. 2311-2317.

153. Wu S. J., and Dean D. H., (1996), Functional significance of loops in the receptor binding domain of B.t СгуЗА delta-endotoxin. J. Mol. Biol., V. 255, P. 628-640.

154. Yaoi К., Kadotani Т., Kuwana H., Shinkawa A., Takahashi Т., Iwahana H., and Isato R., (1997), Aminopeptidase N from Bombyx mori as a candidate for the receptor of Bacillus thuringiensis CrylAa toxin. Eur. J. Biochem., V. 246, P. 652-657.

155. Yi S., Pang A. S. D., and Van Frankenhuyzen K., (1996), Immunocytochemical localization of Bacillus thuringiensis Cryl toxins in the midguts of three forest insects and Bombyx mori. Can. J. Microbiol., V. 42, P. 634-641.

156. Yong W. K., and Kim D. S., (2001), Herbicide-resistant genetically-modified crop: its risks with an emphasis on gene flow. Weed Biology and Management, V. 1, P. 42-52.

157. Yool A. J., (1994), Block of the inactivating potassium channel by clofilium and hydroxylamine depends on the sequence of the pore region. Mol. Pharmacol. V. 46, P. 970-976.

158. Yoshisue H., Шага К., and Komano Т., (1995), Expression of the genes for crystal proteins in B.t: cryAA, not сгуАЪ, is transcribed by RNA polymerase containing Sigma H and that containing Sigma E. FEMS Microbiol. Lett., V. 127, P. 65- 72.

159. Yu C. G., Mullins M. A., Warren G. W., Koziel M. G., and Estruch J. J., (1997), The Bacillus thuringiensis vegetative insecticidal protein Vip3A lyses midgut epithelial cells of susceptible insects. Appl. Environ. Microbiol., V. 63, P. 532-536.

160. Zhan H., Choe S., Huynh P. D., Finkelstein A., Eisenberg D., and Collier R. J., (1994), Dynamic transitions of the transmembrane domain of diphtheria toxin: disulfide trapping and fluorescence proximity studies. Biochemistry, V. 33, P. 11254-11263.

161. Zhang J., Schairer H. U., Schnetter W., Lereclus D., and Agaisse H., (1999), Bacillus popilliae crylSAa. operon is transcribed by Sigma E and Sigma К forms of RNA polymerase from a single initiation site. Nucleic Acid., V. 12, P. 562-570.

162. Zhu Y. C., Oppert В., Kramer K. J., McGaughey W. H., (2000), cDNA sequence, mRNA expression and genomic DNA of tripsinogen from the Indianmeal moth, Plodia Interpunctella, Insect molecular Biology, V. 9(1), P. 19—26.

163. Zques R. I., Moreno Fierros L., Neri-Baza L. Dela Riva N, G. A., Lopez Revilla R., (1999), Bacillus thuringiensis CrylAc Protoxin is a Potent Systemic and Mucosal Adjuvant, Scand. J. Immunol., V. 49, P. 578-584.

164. Zusheng L., and Piggot P. J., (2001), Development of a two-part transcription probe to determine the completeness of temporal and spatial compartmentalization of gene expression during bacterial development. PNAS., V. 98 (22), P. 12538-12543.