Сравнительное изучение новых фотосенсибилизаторов на основе разработанных методических подходов в системе in vitro тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.12, кандидат биологических наук Плютинская, Анна Дмитриевна

• Плютинская, Анна Дмитриевна
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Плютинская, Анна Дмитриевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Молекулярные основы метода ФДТ.

1.2. Фотосенсибилизаторы, применяемые в онкологии.

1.3. Изучение фотосенсибилизаторов различных классов in vitro.

Производные природного хлорофилла а и бактериохлорофилла а.

Синтетические тетрагидро- и тетраазапорфирины.

1.4. Этапы и биологические модели при изучении фотосенсибилизаторов

1.5. Критерии оценки выживаемости клеток в экспериментах in vitro.

1.6. Накопление и локализация фотосенсибилизаторов в опухолевых клетках.

1.7. Пути гибели опухолевых клеток при ФДВ: некроз и апоптоз.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ СОБСТВЕННЫХ

ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Разработка методических подходов к изучению новых экзогенных ФС в системе in vitro на опухолевых клетках человека.

3.2. Изучение новых экзогенных фотосенсибилизаторов.

3.2.1. Производные природного хлорофилла а.

3.2.1.1. Производные пирофеофорбида а.

3.2.1.2. Производные хлорина.

Производные хлорина е6.

Производные хлоринарв.

3.2.2. Производные природного бактериохлорофилла а.

Производные бактериохлорина р.

3.2.3. Синтетические тетрагидропорфирины.

3.2.4. Тетраазапорфирины (фталоцианины).

Отрицательно заряженные производные фталоцианина.

Положительно заряженные производные фталоцианина.

3.3. Изучение внутриклеточной локализации ряда красителей методом КОМИРСИ.

3.3.1. Пурпуринимиды.

3.3.2. Отрицательно заряженные фталоцианины.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сравнительное изучение новых фотосенсибилизаторов на основе разработанных методических подходов в системе in vitro»

1. Актуальность темы

Фотодинамическая терапия (ФДТ) - перспективное направление лечения злокачественных новообразований. В онкологии метод ФДТ эффективен при тяжелых дисплазиях, начальных поверхностно расположенных опухолях различной локализаций, первичного рака у больных с тяжелой сопутствующей патологией [9, 26, 60, 81, 90]. Используется интраоперационная ФДТ для лечения глубокорасположенных опухолей, профилактики рецидивов заболевания и улучшения результатов хирургического лечения, применяется внутритканевой вариант метода при местно распространенном и диссеминированном раке органов брюшной полости.

Сфера применения фотодинамической терапии не ограничивается онкологией. В настоящее время проходят исследования по использованию метода ФДТ при лечении псориаза, лишая, болезни Дариера, микозов [43, 44, 53, 95, 147], применяют в лечении длительно-незаживающих гнойных ран и трофических язв, при резистентности микроорганизмов к антибиотикам [4, 14, 15, 80, 114]. Продолжаются доклинические и клинические испытания метода в стоматологии [77, 88, 98], офтальмологии [6, 87], кардиологии [2, 3, 8, 99].

Как за рубежом, так и в России создан ряд лекарственных средств для ФДТ злокачественных новообразований («Фотофрин» (США), «Фотогем» (Россия), «Фотосенс» (Россия), «Радахлорин» (Россия), «Фотолон» (Беларусь), «Фотодитазин» (Россия), «Фоскан» (Великобритания)), характеризующихся высокой противоопухолевой эффективностью [10, 29, 96]. Однако используемые в настоящее время препараты имеют максимум поглощения в области 630 - 675 нм, где проницаемость биологических тканей незначительна и составляет не более 1 см, что ограничивает широкое использование метода ФДТ. Кроме того, наряду с высокой активностью, препараты на основе порфиринов и фталоцианинов обладают длительной кожной токсичностью. Создание и внедрение новых фотосенсибилизаторов, поглощающих в красной области спектра, может расширить сферу применения ФДТ. В настоящее время активно исследуются на экспериментальных моделях экзогенные фотосенсибилизаторы различных классов: производные фталоцианинов, хлоринов и бактериохлоринов [57,107, 149]. По мере накопления экспериментального и клинического материала были сформулированы основные требования к идеальному фотосенсибилизатору, включающие биологические, фотофизические и химико-технологические критерии. Прежде всего это: максимальное поглощение в спектральном диапазоне, где биологические ткани имеют наибольшее пропускание (красный и ближний ИК диапазоны);

- высокий квантовый выход синглетного кислорода;

-высокая селективность накопления в тканях злокачественных новообразований по сравнению с окружающими нормальными тканями;

- доступность получения или синтеза, однородный химический состав;

- стабильность при световом воздействии и хранении;

- сравнительно быстрая элиминация из организма;

- низкая токсичность (кожная и общая);

Параллельно с поиском новых фотосенсибилизаторов решаются вопросы расширения выбора оптимальных режимов светового воздействия [11].

Во многом успех этих направлений обусловлен развитием экспериментальной ФДТ и, в частности, исследованиями в системе in vitro, в рамках которого могут быть решены ряд вопросов, касающихся поиска веществ, обладающих фототоиндуцированной противоопухолевой 6 активностью, а также изучение механизма действия этих соединений на клеточном уровне и отбор наиболее перспективных из них для дальнейшего изучения в системе in vivo.

К настоящему времени синтезированы десятки веществ как природного, так и синтетического происхождения, относящихся к различным классам (хлоринов, бактериохлоринов, фталоцианинов и др.), которые, благодаря своим структурным особенностям, физико-химическим и фотофизическим свойствам, могут рассматриваться как перспективные фотосенсибилизаторы для диагностики и терапии онкологических заболеваний. Однако сравнение и выбор наиболее перспективных соединений представляют большие сложности вследствие отсутствия единой методологии их изучения в системе in vitro.

В связи с этим, актуальной задачей на сегодняшний день является не только поиск фотосенсибилизаторов с улучшенными свойствами, но и разработка системы скрининга новых субстанций для ФДТ, позволяющая адекватно оценивать свойства красителей, сравнивать их и отбирать наиболее перспективные соединения для дальнейшего исследования.

2. Цели и задачи

Целью настоящей работы является сравнительное изучение и отбор активных экзогенных фотосенсибилизаторов в системе in vitro на основе разработанной методики скрининга.

Для достижения поставленной цели сформулированы следующие задачи:

1. Разработать методику скрининга, включающую анализ физико-химических, фотофизических и биологических свойств фотосенсибилизаторов.

2. Разработать мультипараметрическую систему адекватной оценки фотоиндуцированной противоопухолевой активности фотосенсибилизаторов относительно опухолевых клеток различного гистогенеза, используя 7 официнальные препараты «Фотогем», «Фотосенс», «Радахлорин».

3. Изучить растворимость и стабильность (без светового воздействия и при облучении) соединений различных классов в бесклеточной среде с применением абсорбционного и флуоресцентного методов анализа.

4. Провести сравнительное исследование фотоиндуцированной активности новых производных природного хлорофилла а и бактериохлорофилла а, синтетических тетрагидро- и тетраазапорфиринов на опухолевых клетках человека в культуре. Оценить корреляцию между структурой фотосенсибилизаторов и их эффективностью при фотодинамическом воздействии (ФДВ).

5. По результатам изучения физико-химических, фотофизических и биологических свойств отобрать наиболее перспективные фотосенсибилизаторы для дальнейшего изучения in vivo.

6. Изучить внутриклеточную локализацию ряда красителей с целью выявления и идентификации внутриклеточных мишеней.

3. Научная новизна исследования

Разработана методика скрининга фотосенсибилизаторов, включающая оценку их физико-химических и фотофизических свойств, а также фотоиндуцированной противоопухолевой активности с использованием мультипараметрической системы, позволяющей выявлять зависимость выраженности фототоксического эффекта от различных параметров.

Впервые, с применением этой методики, проведено сравнительное изучение новых оригинальных соединений (п=61): производных природного хлорофилла а (пирофеофорбид а, хлорин ев и хлорин рв, пурпуринимиды), бактериохлорофилла а (бактериопурпуринимиды), синтетических тетрагидро- и тетраазапорфиринов (фталоцианины) с различными боковыми заместителями и центральными атомами металлов, и выявлено их значительное преимущество по эффективности при ФДВ in vitro и физико8 химическим свойствам перед ^модифицированными аналогами. Показана вариабельность фотоиндуцированной цитотоксичности соединений в зависимости от природы боковых заместителей.

Впервые проведено сравнительное изучение внутриклеточной локализации производных хлорина рв и фталоцианинов и показана ее зависимость от химической структуры и физико-химических свойств соединений.

4. Практическая значимость

Разработанная и апробированная многопараметрическая система оценки эффективности новых соединений in vitro позволяет эффективно отбирать перспективные фотосенсибилизаторы и, таким образом, существенно снижать затраты на проведение дальнейших скрининговых исследований in vivo. С использованием данной системы по совокупности свойств и технологичности получения выбраны перспективные красители из классов хлорина ре, бактериохлорина и фталоцианина для дальнейшего изучения противоопухолевой эффективности в системе in vivo. Производные фталоцианина явились основой для создания препаратов «Фталосенс-лио» и «Холосенс-лио», предназначенных для ФДТ злокачественных новообразований, доклиническое изучение которых завершено к настоящему моменту. Результаты исследований включены в «Методические указания по изучению фотоиндуцированных противоопухолевых свойств фармакологических веществ и лекарственных средств» для издания в «Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» под редакцией Р.У.Хабриева.

5. Апробация работы

Апробация диссертации состоялась на межотделенческой конференции ФГБУ «МНИОИ им. П.А.Герцена» Минздравсоцразвития России 6 сентября 2012г.

6. Публикации

По материалам диссертации опубликовано 17 печатных работ, в том числе 8 в журналах, рекомендованных ВАК. По теме диссертации получен патент РФ: «Фотосенсибилизаторы для фотодинамической терапии» (№ 2282646, per. 27.08.2006), поданы заявки на патенты № 2012105449 и № 2012105450 от 17.02.2012.

7. Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 121 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 2 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Список литературы включает 163 источника. Работа содержит 49 рисунков, 25 таблиц.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Плютинская, Анна Дмитриевна

выводы

1. Разработанная методика скрининга новых экзогенных фотсенсибилизаторов in vitro включает два этапа: 1-й - изучение физико-химических и фотофизических свойств фотосенсибилизаторов с целью выявления красителей, растворимых в биосовместимых средах и устойчивых как без воздействия, так и при облучении; 2-й - оценка фотоиндуцированной противоопухолевой активности соединений с применением мультипараметрической системы с целью отбора наиболее эффективных красителей для дальнейшего изучения при ФДТ in vivo.

2. Оригинальная мультипараметрическая система изучения эффективности фотосенсибилизаторов при ФДВ позволяет адекватно оценивать и сравнивать их по фотоиндуцированной противоопухолевой активности, а также выявлять зависимости выраженности фотоиндуцированного цитотоксического эффекта от концентрации соединений в среде инкубации, времени инкубации соединения с клетками до светового воздействия, дозы света, присутствия фотосенсибилизатора в среде во время облучения, от его удаления перед облучением.

3. На первом этапе скрининга в результате изучения физико-химических свойств из 70 производных природных хлорофилла а и бактериохлорофилла а, синтетических тетрагидро- и тетраазпорфиринов выявлено 61 соединение, характеризующееся хорошей растворимостью в биосовместимых гидрофильных и амфифильных средах, из которых стабильность в темновых условиях в бесклеточной среде в динамике проявляли 59 красителей. При оценке фотофизических свойств выявлено, что 50% фотосенсибилизаторов оказались фотонеустойчивыми.

4. На втором этапе оценена фотоиндуцированная противоопухолевая активность 59 субстанций и показано, что эффективность соединений при

ФДВ зависела от их химической структуры, природы боковых заместителей, центрального атома металла и увеличивалась в следующем

101 ряду: сульфированные производные фталоцианина < синтетические тетрагидропорфирины « пурпуринимиды < бактериопурпуринимиды.

5. По сочетанию физико-химических, фотофизических и биологических свойств отобраны наиболее активные соединения и переданы для дальнейшего изучения в системе in vivo:

- из класса хлоринов - пурпуринимид с гидроксигруппой в имидном цикле (ИК50 равна 35±10 нМ, 715 нм);

- из класса производных природного бактериохлорофилла а:

- бактериопурпуринимид с гидроксильным заместителем в пирроле А (ИК5о равна 30±10 нМ, 780 нм) и О-пропилоксим -N-пропоксициклоимид (ИК50 равна 500±75 нМ, Хт^- 800 нм), из класса синтетических тетрагидропорфиринов: безметальное тетрабромидное и октабромидное производные (ИК50 равны 0,34±0,07мкМ и 0,37±0,08 мкМ, Ящах- 765 нм, соответственно);

- из класса фталоцианинов - сульфированное безметальное производное и холиновое производное цинкового металлокомплекса (ИК5о равны 0,19±0,3 мкМ, Ащах" 665 и 692 нм и 0,3±0,08 мкМ, Я-шах- 685 нм, соответственно).

На основе стандартных субстанций безметального сульфированного и холинового производных фталоцианина разработаны препараты, получившие названия «Фталосенс-лио» и «Холосенс-лио», соответственно.

6. Сравнительная оценка внутриклеточной локализации пурпуринимидов и производного фталоцианина показала, что различия во внутриклеточном накоплении определялись химической структурой красителей и их физико-химическими свойствами. Пурпуринимиды накапливались в клеточных органеллах (аппарате Гольджи, митохондриях, липидных каплях), а отрицательно заряженные производные фталоцианина - в плазматической мембране и цитоплазме опухолевых клеток. Накопление фотосенсибилизаторов в аппарате Гольджи и митохондриях ассоциировано с высокой фотоиндуцированной активностью in vitro.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Сравнительное изучение новых фотосенсибилизаторов рекомендуется начинать с изучения физико-химических свойств соединений, включающего определение растворимости в биосовместимых средах с учетом гидрофильности, амфифильности и гидрофобности соединений, выбор оптимального растворителя, оценку и отбор наиболее стабильных в растворах без воздействия светом в динамике и при облучении.

2. В биологических тестах целесообразно начинать исследования с выбора клеточной линии и посевной концентрации, при которой опухолевые клетки на момент воздействия находятся в логарифмической фазе роста. При первичной оценке фотоиндуцированной активности соединений возможно ограничиться одной клеточной линией при варьировании концентраций соединений в широком диапазоне (от 5 нМ до 300 мкМ), временем до воздействия (от 30 минут до 6 часов), дозой света, облучением в присутствии фотосенсибилизатора в среде и с его удалением непосредственно перед воздействием для выявления активных красителей.

3. При расширенном скрининге рекомендуется использовать несколько клеточных линий (3-4 клеточные культуры) при варьировании тех же параметров, с целью выбора наиболее перспективных фотосенсибилизаторов для дальнейшего исследования in vivo.

4. При оценке фотоиндуцированной активности фотосенсибилизаторов целесообразно проводить эксперименты в трех повторах во избежание получения недостоверных результатов или некорректной их интерпретации.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Плютинская, Анна Дмитриевна, 2012 год

1. Аксенов A.A., Себякнн Ю.Л., Миронов А.Ф. Синтез и изучение свойств О- и S- гликозилированных проиизводных пирофеофорбида all Биоорганическая химия. 2001. - V. 27. - № 2. - Р. 145-150.

2. Андреева Е.Р., Кузьмин С.Г., Возовиков И.Н. Фотодинамические подходы к устранению и предотвращению атеросклеротических изменений в сосудах// Российский физиологический журнал. 2004. - № 5.-С.569-576.

3. Андреева Е.Р., Ударцева О.О., Возовиков И.Н., Кузьмин С.Г., Тарарак

4. М. Влияние фотодинамического воздействия на эндотелиальные клетки в модели in vitro// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -2010. т. 149 (2).

5. Белый Ю.А., Терещенко A.B., Плахотний М.А., Юдина H.H., Соловьев Д.К. Фотодинамические эффекты в лечении гнойной язвы роговицы (клинические исследования)// Сибирский Консилиум медико-фармачевтический журнал . 2007. - №3 (58). - С.55-58.

6. Ботабекова Т.К., Касимов Э.М., Прокофьева М.И., Егоров А.Е., Егоров Е.А. Сочетание лазерной и фотодинамической терапии в лечении сосудистых заболеваний глаза// Клиническая офтальмология. -2002. — Т. 3. -№3.

7. Бурмистрова Н.В., Каплан М.А., Бродский P.A., Мардынская В.П. Сравнительная оценка эффективности фотосенсибилизаторов («Фотогем», «Фотосенс», «Фотодитазин») для ФДТ в экспериментальных условиях//.104

8. Мат. IV Всерос. научно-практич. конф. «Отечественные противоопухолевые препараты», Москва, 16—18 марта 2005 г.

9. Возовиков И.Н., Андреева Е.Р., Янцен Е.С., Кузьмин С.Г., Тарарак Э.М. Возможности использования фотодинамической терапии для лечения и профилактики сердечно-сосудистых заболеваний//Кардиологический вестник. -2006. т.13- №1.

10. Ганцев Ш.Х., Юсупов A.C. Плоскоклеточный рак кожи// «Практическая онкология». 2012. - Т. 13. - №2. - С. 80-91

11. Гейниц A.B., Сорокатый А.Е., Ягудаев Д.М., Трухманов P.C. Фотодинамическая терапия. История метода и ее механизмы // Лазерная медицина. 2007. - т.11. - вып.З.

12. Гейниц A.B., Цыганова Г.И Аналитический обзор НИР, выполненных в 2006 году в учреждениях хдравоохранения РФ по проблемам лазерной медицины // Лазерная медицина. 2007. - т.11. - вып.4.

13. Гельфонд М.Л. Фотодинамическая терапия в онкологии// «Практическая онкология».- 2007.- Т. 8.- № 4.- С. 204-210.

14. Долгих В.Т. Опухолевый рост. Ростов-на-Дону: «Феникс», 2007. -153с.

15. Дуванский В. А. Фотодинамическая терапия в комплексном лечении больных с острыми гнойными заболеваниями мягких тканей // Лазерная медицина. 2003. - Т.7. - Вып. 3-4. - С. 41-45.

16. Дуванский В. А. Фото динамическая терапия и NO-терапия в комплексном лечении больных с трофическими язвами венозного генеза // Лазерная медицина. 2004. - Т.8. - Вып. 1-2. - С. 5-8.

17. Зорин В. П., Хлудеев И. И., Зорина Т. Е. Роль белков и клеточных элементов в механизмах транспорта тетрапирольных фотосенсибилизаторов в крови//Биофизика.-2000.-Т.45, вып.2.-с.313-319.

18. Красновский A.A. Синглетный молекулярный кислород и первичные механизмы фотодинамического действия оптического излучения // Итогинауки и техники. Соврем. Проблемы лазерной физики. ВНИТИ. - 1990. -№3. - С. 63-135.

19. Красновский A.A. Фотодинамическое действие и синглетный кислород/ТБиофизика. 2004. - т.49. - вып.2. - С.305-321.

20. Культура животных клеток. Практическое руководство //Под ред. Р.Фрешни. М.: БИНОМ, 2011.

21. Лушников Е.Ф., Абросимов А.Ю. Гибель клетки (апоптоз)// М: «Медицина». 2001.

22. Медведев И.Б., Беликов М.П., Сямичев М.П. Фотодинамическая терапия в офтальмологии// Москва. 2006. - С. 45-65.

23. Миронов А.Ф. Фотодинамическая терапия рака новый эффективный метод диагностики и лечения злокачественных опухолей // Соровский образовательный журнал. - 1996. - №8. - С. 32-40.

24. Миронов А.Ф. Фотосенсибилизаторы на основе порфиринов и родственных соединений для ФДТ рака // Итоги науки и техники. 1990. -т.З.-С. 5-63.

25. Морозова Н.Б. Экспериментальное изучение нового фотосенсибилизатора «Фталосенс» для фотодинамической терапии злокачественных новообразований // Дис. на соиск. уч. ст. к.б.н. Москва, 2007.

26. Олюшин В. Е. Новый способ ФДТ в комплексном лечении глиальных опухолей головного мозга// Российский Биотерапевтический журнал. -2007. №1. - т.6. - С.23.

27. Онкология. Национальное руководство// Под ред. Чиссова В.И., Давыдова М.И. М.: «ГЭОТАР-Медиа», 2008.

28. Пальчун В.Т., Лапченко A.C., Лапченко A.A., Гуров A.B., Кучеров А.Г. A.C. Современный взгляд на антимикробную фотодинамическую терапию// Вестник оториноларингологии. 2077. - № 3. - С. 4-6.

29. Петровский В.Ю., Титова В.А. Фотодинамическая терапия с применением препарата Фотолон при плоскоклеточном раке различных локализаций // Росс, биотер. Журнал. 2007. - т.6. - №1. - С.23.

30. Рузиев Р. Д. Синтез и изучение свойств гидроксилсодержащих циклоимидных производных хлорина рб II Дис. на соиск. уч. ст. к.х.н. -Москва, 2005

31. Соболев A.C., Розенкранц A.A., Ахлынина Т.В. Направленный внутриклеточный транспорт фотосенсибилизаторов//Росс. хим. журнал -2004.-Т. 42.-С. 84-88.

32. Ударцева О.О., Андреева Е.Р., Гринаковская О.С., Баравкова Л.Б. Использование культивируемых клеток для изучения эффектов ФДВ// Цитология. 2008. - Т.50. - №9. - С.827.

33. Хомяк О.Г., Сидоренко М.В. Модель сфероидообразования иее использование в онкологии// Экспериментальная онкология. 2001. - № 23.-С.23 6-241

34. Цой A.M., Зайцева-Зотова Д.С., Марквичева Е.А. Микрокапсулированные мультиклеточные опухолевые сфероиды как новая модель для экспериментальной онкологии// Цитология. 2008. -Т.50. - №9. - С.829.

35. Черняева Е.Б., Степанова Н.В., Литинская Л.Л. Механизмы взаимодействия фотосенсибилизаторов с клетками (вклад лазерных и оптических методов исследования) // Итоги науки и техники. 1990. - Т.З. -С. 301-314.

36. Abels С., Fickweiler S., Weiderer P., Baumler W. et Al. Indocyanine green (ICG) and laser irradiation induce photooxidation//Arch Dermatol Res. 2000. -V. 292(8).-P. 404-411.

37. Ahmed S., Davoust E., Savoie H., Boa A.N., Boyle R.W. Thioglycosylated cationic porphyrins — convenient synthesis and photodynamic activity in vitro // Tetrahedron Letters. 2004. - V. 45 (31). - P. 6045-6047.

38. Agostinis P., Berg K., Cengel K.A., Foster Т.Н., Girotti A.W. et al. Photodynamic therapy of cancer: an update// CA Cancer J Clin. 2011. - V. 61(4).-P. 250-281.

39. Ali S.M., Olivo M. Bio-distribution and subcellular localization of Hypericin and its role in PDT induced apoptosis in cancer cells// Int J Oncol. 2002. - V. -21(3).-P. 531-540.

40. Allison R.R., Downie G.H., Cuenca R., Ни X.H., Childs C., Sibata C. Photosensitizers in clinical PDT // Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. -2004. №1. - P.27-42.

41. Aspiroz C., Fortuno Cebamanos В., Rezusta A. et. al. Photodynamic therapy for onychomycosis, case report and review of the literature//.Rev Iberoam Micol. 2011. - V. 28(4). - P. 191-193.

42. Babilas P, Szeimies RM The use of photodynamic therapy in dermatology//G Ital Dermatol Venereol. 2010. -V.145(5). - P.613-630.

43. Ball D.J., Mayhew S., Wood S.R., Griffiths J., Vernon D.I., Brown S.B. A comparative study of the cellular uptake and photodynamic efficacy of three novel zinc phthalocyanines of different charge. // Photochem Photobiol. 1999. -V. 69(3). -P.390-396.

44. Bae S.M., Kim Y.W., Lee J.M., Namkoong S.E., Han S.J. et al. Photodynamic effects of Radachlorin on cervical cancer cells// Cancer Res Treat. 2004.- V. 36(6). - P. 389-394.

45. Banfi S., Caruso E., Caprioli S. et al. Photodynamic effects of porphyrin and chlorin photosensitizers in human colon adenocarcinoma cells// Bioorganic& Medicinal chemistry. -2004. V. 12(18). -P. 4853-4860.

46. Binder S., Kolarova H., Tomankova K., Bajgar R., Daskova A., Mosinger J. Phototoxic effect of TPPS4 and MgTPPS4 on DNA fragmentation of HeLa cells//Toxicol In Vitro. 2011. - V.25(6). - P. 1169-1172.

47. Blinder KJ, Blumenkranz MS, Bressler NM et al. Treatment of choroidal melanoma using photodynamic therapy // Am J Ophthalmol. 2003. - Vol. 135. -No. 6.-P. 898-899.

48. Borenfreund E, Babich H, Martin-Alguacil N. Rapid chemosensitivity assay with human normal and tumor cells in vitro// In Vitro Cell Dev Biol. 1990. -V. 26(11). P. 1030-1034.

49. Calzavara-Pinton P., Rossi M.T., Sala R., Venturini M. Photodynamic antifungal chemotherapy// Photochem Photobiol. 2012. - V .88(3). - P. 512522.

50. Camerin M., Rodgers M.A., Kenney M.E., Jori G. Photothermal sensitization: evidence for the lack of oxygen effect on the photosensitizing activity // J. Photochem. Photobiol. Sei. 2005. - V. 4 (3). - P. 251-253.109

51. Castro Pazos M, Pacheco-Soares C, Soares da Silva N, DaMatta RA, Pacheco MT. Ultrastructural effects of two phthalocyanines in CHO-K1 and HeLa cells after laser irradiation/ZBiocell. 2003. - V. 27(3). - P. 301-309.

52. Chen J.Y., Mak N.K., Wen J.M. et al. A comparison of the photodynamic effects of temoporfin (mTHPC) and MC540 on leukemia cells: efficacy and apoptosis // J. Photochem. and Photobiol. 1998. - V. 68(4). - P. 2571-2580.

53. Cheng J, Liang H. et al. Hematoporphyrin monomethyl ether-mediated photodynamic effects on THP-1 cell-derived macrophages//! Photochem Photobiol B. 2010. - V.101(l). - P. 9-15.

54. Chiba K., Kawakami K., Tohyama K. Simultaneous evaluation og cell viability by red, VNN and crystal violet staining assays of the same cells// Toxicology in vitro. 1998. - №12. - P.251-258.

55. Chissov V., Vashakmadse L., Butenko A., Sokolov V. Er al Laparoscopic intraperitoneal photodynamic diagnosis(PDD) and photodynamic therapy(PDT) in oncology. // Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 2008.- V. 5 - № 1 -P. 86-87.

56. Davila ML. Photodynamic therapy// Gastrointest Endosc Clin N Am. -2011. -V. 21(1).-P.67-79.

57. Delaey EM, Obermueller R, Zupko I, De Vos D, Falk H, de Witte PA. In vitro study of the photocytotoxicity of some hypericin analogs on different cell lines//PhotochemPhotobiol.-2001.-V. 74(2).-P. 164-171.110

58. Diez B, Ernst G, Teijo MJ, Batlle A, Hajos S, Fukuda H. Combined chemotherapy and ALA-based photodynamic therapy in leukemic murine cells// Leuk Res. 2012. - V. 36(9). - P. 1179-1184.

59. Dougherty T.J., Gomer C.J. et al. Photodynamic therapy // J. Natl. Cancer I.1998. V. 90 (12). - P. 889-905.

60. Douillard S., Olivier D., Patrice T. In vitro and in vivo evaluation of Radachlorin(R) sensitizer for photodynamic therapy//Photochem Photobiol Sci. 2009. -V. 8(3). -P. 405-413.

61. Durmu§ M, Ahsen V. Water-soluble cationic gallium(III) and indium(III) phthalocyanines for photodynamic therapy// J Inorg Biochem. 2010. - V. 104(3).-P. 297-309.

62. Feofanov A., Grichine A., Karmakova T., Plyutinskaya A., Lebedeva V. et al. // Photochemistry and Photobiology. 2002. - V. 74. - P. 633-643.

63. Feofanov A., Grichine A., Shitova L., Karmakova T., Yakubovskaya R. Intracellular distribution and states of a new anticancer agent teraftal as investigated with confocal Raman imaging technique// Asian J. Spectrosc.1999.-№3.-P. 23-31.

64. Feofanov A., Karmakova T., Grichine A. Distribution and interactions of photosens in murine ehrlich carcinoma fluorescent spectral imaging approach // Conference on fluorescence microscopy and fluorescent probes. - 1999.

65. Feofanov A., Sharonov G., Grichine A., Karmakova T., Pljutinskaya A. et al. Comparative study of photodynamic properties of 13,15-N-cycloimide derivatives of chlorinp6// Photochem. Photobiol.-2004. V.79. №2.- P. 172188.

66. Fisher F., Maier-Borst W., Lorenz W. Photodynamic therapy as a tool for suppressing the haematogenous dissemination of tumour cells // J. Photochem. and Photobiol. 1998. - V. 43 (1). - P. 27-33.

67. Foote C.S. Definition of type I and type II photosensitized oxidation // J. Photochem. Photobiol. 1991. - V. 54. - P.659.

68. Freshney R.I. Culture of animal cells//Wiley-liss, Fifth Edition. P. 360373.

69. Garcez A.S., Nunez S.C., Hamblin M.R., Ribeiro M.S. Antimicrobial effects of photodynamic therapy on patients with necrotic pulps and periapical lesion//J Endod. 2008. -V.34(2). -P. 138-142.

70. Gillenwater A., Xu X.C., EINaggar A.K., dayman G.L., Lotan R. Expression of galectins in head and neck squamous cell carcinoma // Head Neck-J. Sci. Spec. 1996. - V. 18 (5). - P. 422 - 432.

71. Giuliani F., Martinelli M., Cocchi A., Arbia D., Fantetti L., Roncucci G. Gold MH. Photodynamic therapy. //Curr Probl Dermatol. 2011. - V.42. -P. 181-192.

72. Gold MH. Photodynamic therapy// Curr Probl Dermatol.- 2011. V.42. -P.181-192.

73. Goodell T., Muller P. Photodynamic therapy: a novel treatment for primary brain malignancy//J Neurosci Nurs. 2001. - V.33(6). - P. 296-300.

74. Haddad R, Blumenfeld A, Siegal A, Kaplan O, Cohen M, Skornick Y, Kashtan H. In vitro and in vivo effects of photodynamic therapy on murine malignant melanoma//Ann Surg Oncol. 1998. - V.5(3). - P. 241-247.

75. Hao E., Jensen T. et al. Synthesis of porphyrin-carbohydrate conjugates using "click" chemistry and their preliminary evalution in human Hep2 cells // J. Porphyrins Phthalocyanines. 2009. - V. 13. - P. 51-59.

76. Herrera D. Photodynamic therapy for chronic periodontitis// Evid Based Dent.-201 l.-V. 12(3).- P. 78-79.

77. Huang HF, Chen WZ, Chen YC, Lin DH, Lin XL. Killing effect of ZnPcH(l)-PDT on lymphoma cells// Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi. -2009.-V. 17(3).-P. 588-591.

78. Ikeda N., Usuda J., Kato H., Ishizumi T. et al. New aspects of photodynamic therapy for central type early stage lung cancer// Lasers Surg Med. 2011. - V. - 43(7). - P.749-754.

79. Jori G. Photodynamic therapy of microbial infections: state of the art and perspectives// J Environ Pathol Toxicol Oncol. 2006. - V.25. - P. 505-519.

80. Juarranz A., Jaén P., Sanz-Rodríguez F., Cuevas J., González S. Photodynamic therapy of cancer. Basic principles and applications// Clin Transí Oncol.-2008.-V. 10(3).-P. 148-154.

81. Kadish K.M., Smith K. M., Guilard R. The Porphyrin Handbook // Acad. PressN.Y. -2000. -V. 6.-P. 158-159.

82. Kamoshima Y., Terasaka S., Kuroda S., Iwasaki Y. Morphological and histological changes of glioma cells immediately after 5-aminolevulinic acid mediated photodynamic therapy// Neurol Res. 2011. - V.33(7). - P. 739-746.

83. Karrer S., Szeimies R.M. Photodynamic therapy: non-oncologic indications// Hautarzt. 2007. - V. 58(7). - P. 585-596.

84. Kochneva EV, Filonenko EV, Vakulovskaya EG, Scherbakova EG, Seliverstov OV, Markichev NA, Reshetnickov AV. Photosensitizer Radachlorin®: Skin cancer PDT phase II clinical trials // Photodiagnosis Photodyn Ther. 2010. - V. 7(4). - P. 258-267.

85. Kolarova H, Nevrelova P, Bajgar R, Jirova D, Kejlova K, Strnad M. In vitro photodynamic therapy on melanoma cell lines with phthalocyanine/ZToxicol In Vitro. 2007. - V.21(2). - P.249-253.

86. Konopka K., Goslinski T. Photodynamic therapy in dentistry//Dent Res. -2007. V.86(8). - P.694-707.

87. Kossodo S., LaMuraglia G.M. Clinical potential of photodynamic therapy in cardiovascular disorders // J Cardiovasc Drugs. 2001. - V.l. - P. 15-21.

88. Kostron H. Photodynamic diagnosis and therapy and the brain// Methods Mol Biol. -2010. -V. 635. P. 261-280.

89. Krammer B. Vascular effects of photodynamic therapy// Anticancer Res. -2001. -V. 21(6B). P. 4271-4277.

90. Kruft B.I., Greer A. Photosensitization reactions in vitro and in vivo// Photochem Photobiol. 2011. - V.87(6). - p. 1204-1213.

91. Lahm H., Andre S., Hoeflich A., Kaltner H., Siebert H.C., Sordat B., Lieth C.W., Wolf E. and Gabius H.J. Tumor galectinology: Insights into the complex114network of a family of endogenous lectins // Glycoconjugate Journal. 2004. -V. 20.-P. 227-238.

92. Li B.H., Xie S.S., Lu Z.K. Spectral properties of new photosensitizers for photodynamic diagnosis and therapy// Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi. -2002. V.22(6). - P.902-904.

93. Li H., Jensen T.J., Fronczek F.R., Vicente M.G. Syntheses and properties of a series of cationic water-soluble phthalocyanines// J Med Chem. 2008. -V.14.-P. 502-11.

94. Llewellyn C.A., Fauzi R., Mantoura C., Brereton R.G. Products of chlorophyll photodegradation-2. Structural identification. // Photochem. Photobiol. -1990. V. 52. - № 5. - p. 1043-1047.

95. Longo JP, Lozzi SP, Simioni AR, Morais PC, Tedesco AC, Azevedo RB. Photodynamic therapy with aluminum-chloro-phthalocyanine induces necrosis and vascular damage in mice tongue tumors// J Photochem Photobiol B. 2009. -V. 94(2).-P. 143-146.

96. Lyon JP, Moreira LM, de Moraes PC, Dos Santos FV, de Resende MA.9 Machado A.H., Braga F.M., Soares C.P., Beltrame M., Da Silva N.S. Photodynamic therapy with a new photosensitizing agent // Photomed Laser Surg. 2007. - V. 25(3). - P. 220-228.

97. Lyon J.P., Moreira L.M., de Moraes P.C., Dos Santos F.V., de Resende M.A. Photodynamic therapy for pathogenic fungi //Mycoses. 2011. - V. 54(5). -P. 265-271.

98. Maas AL, Carter SL, Wileyto EP, Miller J et al.Tumor vascular microenvironment determines responsiveness to photodynamic therapy// Cancer Res. 2012. - V. 72(8). - P. 2079-2088.115

99. Machado AH, Moraes KC, Pacheco Soares C, Junior MB, da Silva NS. Cellular changes after photodynamic therapy on HEp-2 cells using the new ZnPcBr(8) phthalocyanine// Photomed Laser Surg. 2010. - V.28. - P. 143149.

100. Maduray K, Odhav B, Nyokong T. In vitro photodynamic effect of aluminum tetrasulfophthalocyanines on melanoma skin cancer and healthy normal skin cells// Photodiagnosis Photodyn Ther. 2012. - V. 9(1). - P. 32-39.

101. Maisch T. A new strategy to destroy antibiotic resistant microorganisms: antimicrobial photodynamic treatment//. Mini Rev Med Chem. 2009. -V.9(8). -P.974-983.

102. Mantareva V., Kussovski V., Ivan Angelov I. et al Photodynamic activity of water-soluble phthalocyanine zinc(II) complexes against pathogenic microorganisms//Bioorg Med Chem. 2007. - V. 15(14). - P. 4829-4835.

103. Medina R.A., Owen G.I. Glucose transporters: expression, regulation and cancer II Biol. Res. 2002. - V. 35 (1). - P. 9-26.

104. Mironov A.F. Synthesis and properties of new chlorin and bacteriochlorin photosensitizers // Proc. SPIE. 1996. - V. 2625. - P. 23-33.

105. Mlkvy P, Majek J, Jurgos L, Makovnik P, Durdik S. Endoscopic treatment of praecancerous colorectal lesions and early colorectal cancer// Bratisl Lek Listy. -2010.-V.ll 1(1).-P.50-53.

106. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survivals: application to proliferation and cytotoxity assay// Journal of Immunological Methods. 1983. - №65. - P.55-63.

107. Ongarora BG, Hu X, Li H, Fronczek FR, Vicente MG. Syntheses and properties of trimethylaminophenoxy-substituted Zn((II))-phthalocyanines// Medchemcomm. 2012. - V.3(2). - P.179-194.

108. Pandey R.K., Sumlin A.B., Constantine S., Aoudia M. et al. Alkyl ether analogs of chlorophyll a derivatives, Part 1: synthesis, photophysical properties and photodynamic efficacy // Photochem. Photobiol. 1996. - V. 64. - P. 194— 204.

109. Pandey S.K., Zheng X., Morgan J., Missert J.R. et al. Purpurinimide carbohydrate conjugates: Effect of the position of the carbohydrate moiety in photosensitizing efficacy // Molecular Pharmaceutics. 2007. - V. 4 (3), - P. 448-464.

110. Pantelides ML, Moore JV, Forbes E, Truscott TG, Blacklock NJ. The uptake of porphyrin and zinc-metalloporphyrin by the primate prostate// Photochem Photobiol. 1993.-V. 57(5).-P. 838-841.

111. Park Y.K., Bold B., Cui B.C.,. Bai J.Q, Lee W. and Shim Y.K. Binding Affinities of Carbohydrate-Conjugated Chlorins for Galectin-3 // Bull. Korean Chem. Soc. -2008. V. 29 (1). - P. 130-134.

112. Puliafito C.A., Rogers A.H., Martidis A., Greenberg P.B. Ocular Photodynamic therapy// Slack Inc. 2002. - P. 144.

113. Ramaswamy B., Manivasager V., Chin W.W., Soo K.C., Olivo M. Photodynamic diagnosis of a human nasopharyngeal carcinoma xenograft model using the novel Chlorin e6 photosensitizer Fotolon//Int J Oncol. 2005. -V. 26(6).-P. 1501-1506.

114. Rozenkranz A., Jans D., Sobolev A. Targeted intracellular delivery of photosensitizers to enhance photodynamic efficiency// Immunology and Cell Biology. 2000. - V.78. - P. 452-464.

115. Saczko J., Kulbacka J., Chwilkowska A., Lugowski M., Banas T. Levels of lipid peroxidation in A549 cells after PDT in vitro//Rocz Akad Med Bialymst. -2004.-V.49.-P. 82-84.

116. Saczko J., Mazurkiewicz M., Chwilkowska A. et al. Intracellular distribution of Photofrin in malignant and normal endothelial cell lines //Folia Biol (Praha). 2007. - V. 53(1). - P. 7-12.

117. Saggiorato E., Cappia S., De Giuli P. Galectin-3 as a presurgical immunocytodiagnostic marker of minimallyinvasive follicular thyroid carcinoma // J. Clin. Endocrinol. Metab. 2001. - V. 86 (11). - P. 5152-5158.

118. Savitskiy V., Zorin V., Potapnev M. Accumulation of chlorine e6 derivatives in cells with different level of expression and function activity of multidrug resistance protein P-gr 170 // J. Experimental Oncology. 2005. - V. 27(1).-P. 47-51.

119. Schastak S., Jean B., Handzel R., Kostenich G. et al. Improved pharmacokinetics, biodistribution and necrosis in vivo using a new near infrared photosensitizer: tetrahydroporphyrin tetratosylat// J Photochem Photobiol B. -2005. -V. 78(3). -P. 203-213.

120. Serra W, Zamarron A, Faustino MA, Cruz MC, et al. New porphyrin amino acid conjugates: synthesis and photodynamic effect in human epithelial cells// Bioorg Med Chem. 2010. - V. 16. - P. 6170-6178.

121. Singh G, Espiritu M, Shen XY, Hanlon JG, Rainbow AJ. In vitro induction of PDT resistance in HT29, HT1376 and SK-N-MC cells by various photosensitizers//Photochem Photobiol. -2001. -V. 73(6). -P.651-656.

122. Soergel P., Loning M., Staboulidou I., Schippert C., Hillemanns P. Photodynamic diagnosis and therapy in gynecology// J Environ Pathol Toxicol Oncol. 2008. - V.27(4). - P. 307-320.

123. Song K., Kong B.H., Li L., Qu X., Yang X.S., Wang B. et al Photodynamic effect of hematoporphyrin monomethyl ether on ovarian cancer cell line SKOV3// Ai Zheng. 2006. - V. 25(9). - P. 1108-1112.

124. Song K., Li J., Li L., Zhang P., Geng F. et al. Intracellular metabolism, subcellular localization and phototoxicity of HMME/HB in ovarian cancer cells// Anticancer Res. 2011. - V. 31(10). - P. 3229-3235.

125. Szurko A., Rams M., Sochanik A. et al. Spectroscopic and biological studies of a novel synthetic chlorin derivative with prospects for use in PDT//Bioorg Med Chem. 2009. -V.17(24). - P. 8197-8205.119

126. Taub A.F., Photodynamic therapy: other uses//Dermatol Clin. 2007. -V. 25(1). -P.101-109.

127. Wang K.K. Photodynamic therapy of Barrett's esophagus// Gastrointest Endosc Clin N Am. 2000. - V. 10. - P. 409-419.

128. Wang X, Liu W, Zhang Y, Ke X, Jing X, Chen J. et al. Synthesis and photobiological study of a novel chlorin photosensitizer BCPD-18MA for photodynamic therapy // Bioorg Med Chem. -2011.- V. 18. P.5520-5528.

129. Wilson B. C., Patterson M. S. The physics, biophysics and technology of photodynamic therapy // Phys Med Biol. 2008. - V.53(9). - P.61-109.

130. Wolun-Cholewa M., Piedel B. In vitro photodynamic therapy of cervical cancer//Ginekol Pol. 2011. - V.82(7). - P. 503-507.

131. Wu S.M., Ren Q.G., Zhou M.O., Wei Y., Chen J.Y. Photodynamic effects of 5-aminolevulinic acid and its hexylester on several cell lines// Sheng Wu Hua Xue Yu Sheng Wu Wu Li Xue Bao (Shanghai). 2003.- V. 35(7). - P. 655-660.

132. Webber J., Kessel D., Fromm D. On-line On-line fluorescence of human tissues after oral administration of 5-aminolevulinic acid// J Photochem Photobiol B. -.1997. -V. 38(2-3). -P. 209-214.

133. Xu D., Ke Y., Jiang X., Cai Y., Peng Y., Li Y. In vitro photodynamic therapy on human U251 glioma cells with a novel photosensitiser ZnPcS4-BSA // Br J Neurosurg. 2010. - V. 24(6). - P. 660-665.

134. Yang X.M., Ma H.J., Geng X.Z., Zhang X.R. Hematoporphyrin derivative-mediated photodynamic therapy for human colon carcinoma: a comparative study with LoVo and CoLo205 cells in vitro.// Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 2007. - V. 27(8). - P.1251-1253.

135. Yavari N., Andersson-Engels S., Segersten U., Malmstrom P.U. An overview on preclinical and clinical experiences with photodynamic therapy for bladder cancer//Can J Urol. -2011.-V.18(4).-P. 5778-5786.

136. Yoshinaga S, Gotoda T, Kusano C, Oda I, Nakamura K, Takayanagi R. Clinical impact of endoscopic submucosal dissection for superficial120adenocarcinoma located at the esophagogastric junction// Gastrointest Endosc. -2008. V. 67(2). - P. 202-209.

137. Yslas E.I., Durantini E.N., Rivarola V.A. Zinc-(II) 2,9,16,23-tetrakis (methoxy) phthalocyanine: potential photosensitizer for use in photodynamic therapy in vitro. // Bioorg Med Chem. 2007. - V. 15(13). - P. 4651-4660.

138. Zelenkov P., Baumgartner R., Bise K., Heide M., Meier R. et al. Acute morphological sequelae of photodynamic therapy with 5-aminolevulinic acid in the C6 spheroid model// J Neurooncol. 2007. - V. 82(1). - P. 49-60.