Сравнительное исследование ферментативных механизмов резистентности к пиретроидам у насекомых тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Романова, Ирина Геннадьевна

• Романова, Ирина Геннадьевна
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Романова, Ирина Геннадьевна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1 Современное состояние биохимической проблемы резистентности.

1.1. Исследование механизмов резистентности к пиретроидам.

1.1.1. Развитие резистентности к пиретроидным инсектицидам.

1.1.2. Развитие резистентности у колорадского жука.

1.1.3. Развитие резистентности у тараканов.

1.1.4. Развитие резистентности у других членистоногих.

1.2. Ферментативные механизмы резистентности.

1.2.1. Оксидоредуктазы широкого спектра действия.

1.2.2. Трансферазные механизмы резистентности.

1.2.3. Гидролитические механизмы резистентности.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Материал для исследования.

2.2. Приготовление экстрактов растворимых белков.

2.3. Электрофоретические методы определения активности ферментов.

2.3.1. Малатдегидрогеназа.

2.3.2. Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа.

2.3.3. Сукцинатдегидрогеназа.

2.3.4. Эстеразный комплекс ферментов.

2.3.4.1. Спектрофотометрический метод измерения эстеразной активности.

2.3.5. Щелочная фосфатаза.

2.3.6. Активность кислых фосфатаз.

2.4. Обработка полученных данных.

2.4.1. Определение активности множественных форм ферментов, расчёт денситограмм.

2.4.2. Определение и расчёт относительной электрофоретической подвижности белковых фракций.

2.4.3. Статистическая обработка полученных данных.

Глава 3. Сравнительное исследование активности дегидрогеназного, эстеразного и фосфатазного комплекса ферментов у чувствительных и резистентных популяций рыжего таракана.

3.1. Сравнительное исследование активности дегидрогеназного комплекса ферментов у чувствительных и резистентных популяций рыжего таракана.

3.2. Сравнительное исследование активности эстеразного комплекса ферментов у чувствительных и резистентных популяций рыжего таракана.

3.3. Сравнительное исследование активности фосфатазного комплекса ферментов у чувствительных и резистентных популяций рыжего таракана.

Глава 4. Сравнительное исследование активности дегидрогеназного, эстеразного и фосфатазного комплекса ферментов у трёх популяций колорадского жука.

4.1. Сравнительное исследование активности дегидрогеназного комплекса ферментов общего гомогената у чувствительных и резистентных особей имаго колорадского жука.

4.2. . Сравнительное исследование активности эстеразного комплекса ферментов общего гомогената у чувствительных и резистентных особей имаго колорадского жука.

4.3. Сравнительное исследование активности фосфатазного комплекса ферментов общего гомогената у чувствительных и резистентных особей имаго колорадского жука.

4.4. Сравнительный анализ активности ферментов у чувствительных и резистентных популяций рыжего таракана и колорадского жука.

4.4.1. Сопоставление суммарной активности дегидрогеназного, эстеразного и фосфатазного комплекса ферментов у высокорезистентных к перметрину и резистентных к циперметрину популяций колорадского жука.

4.4.2. Сравнительный анализ суммарной активности дегидрогеназ, эстераз и фосфатаз у чувтвительных и резистентных к перметрину популяций рыжего таракана и колорадского жука.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сравнительное исследование ферментативных механизмов резистентности к пиретроидам у насекомых»

Актуальность темы.

Резистентность вредных организмов к инсектоакарицидам, фунгицидам и гербицидам является глобальной проблемой. В настоящее время борьба с резистентностью или предотвращение её возникновения включает химические, агротехнические, биологические и биотехнологические мероприятия. Резистентность динамический феномен, развивающийся в весьма различных пределах у разных видов и даже у одного и того же вида при различном давлении отбора (Рославцева, 2003). Интенсивное применение химических средств борьбы с вредителями сельскохозяйственных культур привело к возникновению у них резистентности к пестицидам, что является причиной резкого снижения их эффективности в настоящее время. Отмечают, что более половины всех резистентных видов вредителей сельскохозяйственных культур сформировали устойчивые популяции к 2-м или более инсектицидам, принадлежащим к пяти основным их группам (хлорорганические инсектициды, пиретроиды, карбаматы, фосфорорганические, регуляторы роста насекомых гормональной и антигормональной природы). Для того чтобы противостоять катастрофической перспективе потери чувствительности основных вредителей растений к пестицидам необходимо знать, каким образом возникают механизмы резистентности. Основным стратегическим методом в борьбе с резистентностью является ротация пестицидов, имеющих различные механизмы действия, открытие новых классов инсектицидов, а также разработка смесевых композиций (инсектицид -синергист) и внедрение их в практику сельского хозяйства наряду с уже используемыми препаратами.

Пиретроиды - синтетические аналоги природного пиретрина, занимают в настоящее время одно из первых мест по масштабам производства и применения химических средств защиты растений. Основной мишенью действия пиретроидов являются натриевые каналы мембран нервных клеток. Характер и скорость метаболизма зависит от структуры пиретроида, его пространственного строения и отличается у разных видов и популяций насекомых (Филиппович и др. 1988; Рославцева, 2003). Применение пиретроидов, как и других препаратов, как правило, приводит к формированию у насекомых резистентности к инсектицидам. Явление резистентности характеризуется комплексом отдельных физико-химических, физиологических и биохимических показателей.

Анализ литературных данных свидетельствует о том, что наибольший вклад в метаболизм инсектицидов и механизм формирования устойчивых к ним популяций членистоногих вносят монооксигеназы, эстеразы и глутатион-8-трансферазы (Баканова,1993; Рославцева, 1997, 2003). Деградация ксенобиотиков, осуществляемая, в основном, тремя отмеченными путями - окислительно-восстановительным, гидролитическим и трансферазным, играет важную роль на определенной стадии развития организмов, тесно взаимосвязана со структурными особенностями применяемых соединений и видом насекомых.

Универсальным способом обезвреживания токсинов и ксенобиотиков в организме животных является их окислительное разрушение микросомальными оксигеназами. Повышение каталитической активности оксигеназ у резистентных членистоногих связывают с изменением соотношения отдельных множественных молекулярных форм цитохрома Р-450, индуцируемого генамирегуляторами, или с увеличением общего количества содержания цитохрома Р-450 вследствие амплификации структурных генов, детерминирующих его синтез (Agosin, 1985; 1984; Rose, Walbant, 1986).

При сравнительном исследовании активности монофенолмонооксигеназы (тирозиназы) у чувствительных и резистентных рас комнатных мух, селектируемых карбаматами и пиретроидами, показано участие этого фермента в развитии устойчивости и формировании у них видоизмененных покровов и сдвигов в содержании медиаторов в нервной системе (Животенко, 1989).

Более специализированный эстеразный комплекс ферментов может участвовать в метаболизме всех трех наиболее используемых в настоящее время классов инсектицидов - фосфорорганических соединений, карбаматов и пиретроидов (Еремина и др., 1992, 1996; Рославцева, 1997,2003). Молекулы этих соединений содержат сложноэфирные связи, которые могут быть гидролизованы эстеразами. Показано, что детоксикация пиретроидов с помощью эстераз носит видо- и тканеспецифичный характер.

Сравнительное исследование активности АТФазного комплекса ферментов у чувствительной и резистентных к ФОС, карбаматам и пиретроидам рас комнатных мух продемонстрировало существенную активацию Na+, К+ - АТФазы на фоне ингибирования других АТФаз, что позволило сделать заключение автору об универсальности влияния инсектицидов разных групп на ферменты АТФазного комплекса насекомых и, следовательно, о сходстве механизмов их действия, а также об участии отдельных АТФаз в формировании резистентсности у изученного тест-объекта (Козлова, 1991). Важнейшим механизмом регуляции ферментных систем в клетке, является существование у ферментов множественных форм, отличающихся по физико -химическим свойствам, что обеспечивает пластичность обменных процессов, детерминирует адаптационные возможности организма, популяций и вида в целом и, таким образом, представляет собой один из основополагающих принципов регуляции жизнедеятельности животных организмов. Детальное исследование роли кислых фосфатаз дегидрогеназного комплекса ферментов американского и рыжего таракана в выработке устойчивости к перметрину позволило сделать заключение о существовании в тканях этого вида насекомого молекулярных форм тестируемых ферментов, реагирующих на воздействие этого инсектицида (Кометиани, 1995; Сёмина, 2000). Установленный усиленный синтез определённых форм испытанных энзимов определяет степень устойчивости рыжего таракана к пиретроидам и тесно взаимосвязан с формированием ферментативных механизмов резистентности.

Исходя из изложенного, представляется возможным в качестве биохимического критерия оценки развития резистентности у насекомых к инсектицидам использовать показатель, как суммарной активности ферментов, так и активности их отдельных молекулярных форм.

Цели и задачи исследования:

Основной целью нашего исследования явилось сравнительное изучение ферментативных механизмов резистентности к пиретроидным инсектицидам у двух видов насекомых с полным и неполным превращением (колорадский жук и рыжий таракан), равно как и выяснение роли эстераз, фосфатаз и дегидрогеназ в выработке устойчивости к перметрину и циперметрину.

Для достижения этой цели были поставлены следующие основные задачи:

1. Исследовать активность дегидрогеназного, фосфатазного и эстеразного комплекса ферментов в общем гомогенате, грудных мышцах и жировом теле чувствительных и резистентных к перметрину популяций рыжего таракана.

2. Изучить в сравнительном аспекте активность дегидрогеназ, фосфатаз и эстераз у трёх популяций колорадского жука: чувствительных и устойчивых к перметрину и циперметрину, отличающихся биологическим показателем резистентности к испытанным инсектицидам.

3. Провести сравнительный анализа суммарной активности тестируемых ферментов, а также активности их молекулярных форм в общем гомогенате двух видов насекомых, представителей разных отрядов - колорадского жука (отряд Coleoptera) и рыжего таракана (отряд Blattodea), с целью выяснения роли малатдегидрогеназы, сукцинатдегидрогеназы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназ, эстеразного комплекса ферментов, щелочных и кислых фосфатаз в выработке устойчивости к пиретроидным инсектицидам.

4. Установить корреляционные отношения между исследованными биохимическими характеристиками различных популяций рыжего таракана и колорадского жука и биологическим показателем резистентности к пиретроидам, а также разработать предложения по применению ферментативных методов тестирования резистентности у представителей различных отрядов насекомых.

Научная новизна работы;

Впервые получены комплексные экспериментальные данные, демонстрирующие участие дегидрогеназного, эстеразного и фосфатазного комплекса ферментов в формировании ферментативных механизмов резистентности к пиретроидным инсектицидам у колорадского жука. Впервые проведён сравнительный анализ ферментативного механизма устойчивости к перметрину у двух представителей различных отрядов - Coleoptera -колорадского жука и

Blattodea - рыжего таракана. Показано, что имаго колорадского жука более устойчивы к действию пиретроидов по сравнению с тараканами. Обнаружено, что детоксикация перметрина с помощью эстераз носит видо - и тканеспецифический характер. Анализ отзывчивости отдельных эстераз к действию перметрина позволил установить участие в формировании резистентности контрастных по подвижности ацетилхолинэстераз и карбоксилэстераз. Практическое значение работы:

Осуществлено детальное изучение ферментативных механизмов резистентности к пиретроидным инсектицидам у колорадского жука и рыжего таракана и проведено сопоставление полученных биохимических показателей с биологическим уровнем устойчивости у исследованных насекомых. Знание биохимических механизмов резистентности необходимо учитывать при ротации пестицидов, а также при подборе ингибиторов ферментов, ответственных за её развитие. Исходя из различий в уровне суммарной активности тестируемых ферментов, а также активности их молекулярных форм у чувствительных и устойчивых популяций насекомых и корреляции биохимических показателей с уровнем резистентности, предложен энзиматический способ тестирования её развития. Полученные данные вносят значительный вклад в развитие концепции биохимических механизмов действия пиретроидных инсектицидов и формирование к ним устойчивости у насекомых, особенно колорадского жука и могут быть использованы в ВНИИ защиты растений при скрининге инсектицидов. Результаты исследований включены в лекционные курсы кафедры органической и биологической химии, а также применяются при проведении семинарских занятий, спецкурсов студентов биолого-химического факультета МПГУ.

Апробация работы:

Материалы диссертации докладывались на межвузовской научно - практической конференции «Актуальные проблемы экологии и безопасности жизнедеятельности» (Москва 2003), а также были неоднократно представлены на научных конференциях МПГУ (Москва 2003,2004) и научных семинарах кафедры органической и биологической химии биолого-химического факультета МПГУ (Москва, 2003,2004). Публикации:

По материалам диссертации опубликовано 5 работ и 2 статьи находятся в печати. Структура и объём работы:

Диссертация состоит из введения, обзора литературы (Глава1), освещающего степень изученности ферментативных механизмов резистентности к пиретроидам у насекомых; описания объектов и методов исследования (Глава 2);изложения и обсуждения полученных экспериментальных результатов (Главы 3-4); заключения; выводов и списка литературы. Работа изложена на 150 страницах машинописного текста и включает таблицы, рисунки и схемы.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Романова, Ирина Геннадьевна

Выводы

1. Сравнительное исследование активности дегидрогеназного, эстеразного и фосфатазного комплекса ферментов у чувствительных и устойчивых к пиретроидам популяций рыжего таракана и колорадского жука свидетельствует о том, что в выработке биохимических механизмов резистентности принимают участие все три исследованные ферментативные системы, связанные с энергетическим и пластическим обменом у насекомых.

2. Показан значительный вклад в развитии резистентности эстеразного комплекса ферментов у исследованных насекомых, особенно контрастных по электрофоретической подвижности ацетилхолинэстераз и карбоксилэстераз, что позволяет сделать заключение об универсальности влияния инсектицидов у разных видов насекомых и, следовательно, сходстве в механизме их действия, а также об участии отдельных эстераз в формировании резистентности у изученных тест - объектов.

3. Установлена роль дегидрогеназного комплекса ферментов в механизме резистентности к пиретроидам у рыжего таракана и колорадского жука и показано, что малатдегидрогеназа, сукцинатдегидрогеназа и глюкоза-6-фосфатдегидрогеназа являются универсальными энзиматическими системами, принимающими участие в обеспечении энергетического обмена и деструкции ксенобиотиков, в том числе и пиретроидов.

4. Наличие ясно выраженной корреляции активности сукцинатдегидрогеназы и кислой фосфатазы тканей рыжего таракана и колорадского жука и токсикологическим показателям позволяет обосновать биохимический способ оценки состояния резистентности, а также осуществлять с помощью ферментативных тестов скрининг перспективных препаратов.

5. Результаты сравнительного изучения изменения деятельности кислой и щелочной фосфатазы у резистентных популяций рыжего таракана и колорадского жука показали, что происходит активация литических процессов, эти ферменты вносят значительный вклад в развитие устойчивости у тест - объектов, показатель их активности взаимосвязан с биологическим уровнем резистентности и может быть рекомендован в качестве биохимического критерия при селекции инсектицидов.

6. Анализ участия исследованных ферментативных спектров в формировании резистентности у тараканов и колорадского жука свидетельствуют о наличии видовой и тканевой специфичности, проявляющейся как на уровне суммарной активности тест-ферментов, так и молекулярных форм малатдегидрогеназы, сукцинатдегидрогеназы, глюкоза-6-фосфатдегидрогеназы, индивидуальных фосфатаз и эстераз. Также, энзиматические системы имаго колорадского жука оказались более устойчивыми к нагрузке пиретроидными инсектицидами.

Суммируя наши эксперементальные данные можно сделать следующие выводы: во-первых, сравнительно более высокой уровень суммарной активности эстеразного комплекса ферментов наблюдается у резистентных особей насекомого; во-вторых, обнаружена тканевая специфичность участия эстераз в формировании устойчивости к инсектицидам у особей рыжего таракана; в-третьих, отмечен значительный вклад определённых эстераз в феномен резистентности, существенную роль, в которой играют эстеразы жирового тела Blattella germanica L. В изучение роли щелочных и кислых фосфатаз рыжего таракана в выработке устойчивости к перметрину позволило сделать заключение о существовании в тканях этого вида насекомого форм ферментов, чутко реагирующих на воздействие этого инсектицида. Нами показано, что в общем гомогенате и двух изученных тканях выявляются на энзимограммах с помощью синтетического субстрата (а-нафтилфосфат и нафтол AS-BS) неспецифические формы фосфатаз с высокой анодной подвижностью, активность которых существенно возрастает у резистентных популяций рыжего таракана в целом от 50 до 85%.

Отмеченные формы фосфатаз, а также малоподвижные фосфатазы вносят значительный вклад в формирование механизма устойчивости рыжего таракана к пиретроидным инсектицидами. Именно отмеченные молекулярные формы исследованных ферментов, по-видимому, определяют степень резистентности рыжего таракана к перметрину, что связано с его гидролизом или косвенным воздействием на усиленный синтез именно этих форм ферментов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Романова, Ирина Геннадьевна, 2004 год

1. Баканова Е.И. Сравнительный анализ некоторых биохимических систем детоксикации ксенобиотиков у комнатных мух и тараканов // Автореф. дис. к.б.н., Москва. Тип. МПГУ им. Ленина. 1993. 16 с.

2. Баканова Е.И., Ерёмина О.Ю., Кутузова Н.М., Рославцева С.А. /Свойства и функции глутатион-8-трансферазы членистоногих. //Известия РАН. Сер.биологическая, 1992а,- № 4. с. 537-545.

3. Балакина О.В., Романова И.Г.,Кутузова Н.М., Филиппович Ю.Б. Сравнительное исследование эстераз чувствительных особей рыжего таракана. Сборник научных статей биолого-химического факультета, 2002, 5-18, М.Прометей.

4. Богданов М. Р., Мигранов М.Г., Николенко А.Г. Почвообитающие беспозвоночные нецелевой объект пиретроидных обработок //Агрохимия, 1997, №7, с. 89-94.

5. Бресткин А.П., Кузнецова Л.П., Моралев С.М. Холинэстеразы наземных животных и гидробионтов. Владивосток.: ТИНРО-центр. 1997. 466 с.

6. Волкова Р.И., Титова Э.В. Эстеразы нервных ганглиев таракана: множественные молекулярные формы и ингибиторная специфичность // Биохимия. 1985. Т.50. Вып.З. С.475-484.

7. Грицай О.Б., Пилипенко В.Э., Дубинин В.А. Поведение таракана Periplaneta americana при тесте «горячая пластина» на фоне действия анальгетиков различных классов //Журнал эволюционной биохимии и физиологии т.34., 1988., с.28-36.

8. З.Егорова Т.А. Изучение полиморфизма ферментных систем тутового шелкопряда (В теоретических и практических аспектах) // Дис. д.б.н. М. 1983.386с.

9. Ерёмина О.Ю. Изыскание новых фосфоорганических синергистовпиретроидов и исследование механизмов их дейсвия //Автореф. Дисс.д.б.н.- ВИЗР. Санкт-Петербург. 1996- с.35.

10. Еремина О.Ю., Баканова Е.И., Костырко И.Н. Изучение эстеразных механизмов резистентности нескольких рас комнатных мух // Науч. основы дезинфекции и стерилизации /ВНИИ профилакт.f. токсикол. и дезинфекции. М. 1991. С. 90-93.

11. ЕрёминаО.Ю. / Изыскание новых фосфорорганических синергистовЧпиретроидов и исследование механизмов их действия. //Автореферат. Дисс. К.б.н.- ВИЗР.- Санкт.- Петербург.- 1996.35с.

12. Касида Дж. Агрохимия, 1983.- №5, с. 102-110.

13. Козлова Е.В. АТФазный комплекс ферментов Musca domestica L. в норме и под влиянием роста и развития /Автореф. К.б.н.-Москва 1991.

14. Колесниченко Л.С., Кулинский В.И. Глутатионтрансферазы // Успехи современной биологии. 1989 т. 107. вып.2.

15. Кометиани И.Б. / Исследование дегидрогеназного комплекса ферментов некоторых насекомых в норме и под влиянием регуляторов роста//Дисс. К.б.н.- 1995.-Москва.-с. 183.

16. Кулиева A.M. Сравнительное исследование ферментов медиаторного обмена и метаболизма ксенобиотиков у хлопковой совки Heliothis armigera // Автореф. дис. д.б.н. С-Пб., 1995. 36 с.

17. Кулиева A.M., Кугушева Л.И., Розенгарт Е.В. Карбоксилэстераза гусеницы хлопковой совки Heliothis armigera: субстратная и ингибиторная специфичность // Ж. Эвол. биохимии и физиологии. 1996. Т. 32. №2. С. 204-211.

18. Кутузова Н.М., Шамшина Г.А., Борзаковская Б.В.Активность глюкозо -6-фосфатдегидрогеназы в грене пород и гибридов тутового шелкопряда//Биохимия насекомых М. 1981, с. 51-59.

19. Леонова И.Н. Биохимические механизмы резистентности насекомых к инсектицидам и пути ее преодоления // Автореф. дис. к.б.н., Новосибирск, Тип. Инст. цитологии и генетики СО АН СССР. 1986.15 с.

20. Леонова И.Н., Неделькина С.В., Наумова Н.Б. и др. //Биохимия.-1986.-51, вып. 9. с.420-425.

21. Леонова И.Н., Слынько Н.М., Применение токсикологических методов в изучении механизмов резистентности к инсектицидам у насекомых // Агрохимия, 1988 № 8, Москва, с. 130-140.

22. Лукашина Н.С. Роль генетической регуляции активности ЮГ-эстеразы в устойчивости Drosophila virilis к высокой температуре // Автореф. дис. к.б.н., М., Тип. Инст. цитологии и генетики СО АН СССР. 1985. 16 с.

23. Раушенбах И.Ю. Генетический контроль нейроэндокринной регуляции метаморфоза Drosophila в экстремальных условиях среды // Автореф. дис. д.б.н., М., Тип. Инст. цитологии и генетики СО АН СССР. 1987. 36с.

24. Рославцева С.А. О возникновении популяций членистоногих, резистентных к химическим и микробиологическим средствам регуляции их численности // Состояние проблемы резистентности вредителей и возбудителей болезней растений к химическим

25. Ф средствам защиты и её преодоление. Тезисы докладов 7-го совещания14.18 ноября 1988г., Рига с. 16-17.

26. Рославцева С.А. Выяснение основного пути детоксикации карбофоса в организме рыжего таракана//Науч. основы дезинфекции истерилизации /ВНИИ профилакт.токсикол.идезинфекции. М 1991. С. 88-90.

27. Рославцева С.А. Проблема резистентности членистоногих к инсектоакарицидам (по материалам восьмого международного конгресса по химии пестицидов) // Агрохимия. 1997. №3. С. 89-92.

28. Рославцева С.А. Резистентность членистоногих к инсектоакарицидам //Агрохимия, 2003,№7, с. 83-87.

29. Рославцева С.А., Баканова Е.И., Еремина О.Ю. Эстеразы членистоногих и их роль в механизмах детоксикации инсектоакарицидов//Известия АН. Сер. Биол. 1993.№3.C.386-375.

30. Санкт-Петербург, 20, 22дек., 2000,- СПб, 2000.-C.18-19. СИД ВО 1150432.

31. Сазонова И.Н. Проблема избирательности действия инсектицидов и акарицидов и её значение в защите растений.- Д., 1986.- с. 23-32.

32. Сазонова И.Н., Никанорова Е.В., Швец Е.К. и др. // Там же.- с. 48-59.

33. Сазонова И.Н., Моралев С.Н., Швец Е.К. и др. Токсичность инсектицидов для колорадского жука и его энтомофагов // Бюл. ВНИИ защиты раст. 1988 №70. С. 69-73.

34. Сёмина Н.В. Исследование влияния пептидных гормонов и биогенных аминов на активность ферментов углеводного и липидного обмена Periplaneta americana и Tenebrio тоШог//Дис. к.б.н. М. 2000. 151с.

35. Спирина Т.А. Специфичность резистентности двух видов членистоногих к фосфорорганическим. пестицидам // Автореф. Дис.канд.наук.-М.:ВНИИХСЗР, 1981, с.26.

36. Сухорукова О.В. Участие ферментов фенолоксидазного комплекса в защитных реакциях насекомых /Автореферат к.б.н. Уфа 2002

37. Успенский И.И., Людвиг М.Э., Корочкин Л.И. Сравнительный анализ карбоксилэстераз в различных органах половой системы самцов Drosophila подгруппы Melanogaster//Ж.oбщ.биoл.l988.T.49.№ 5.С.601-608.

38. Фасулати С.Р. Анализ структуры попопуляций колорадского жука и его значение для разработки зональных систем защиты картофеля //Бюлл. ВИЗР.Т.бЗ. 1987а, с. 38-43.

39. Фасулати С.Р. Внутривидовая структура колорадского жука и популяционно биологические аспекты устойчивости к нему сортов картофеля //Автореф. дисс. К.б.н., Всеросс. ин-т защиты растений. СПб. 19876, с.20.

40. Фасулати С.Р. (1987в) Фенегеографическое разделение основных групп популяций колорадского жука в Европейской части СССР //Бюлл. ВИЗР. Т. 67 1987в, с.46-49.

41. Фасулати С.Р. Полиморфизм, экологические группировки и микроэволюция колорадского жука Leptinotarsa decemlineata Say (Coleoptera, Chrysomelidae) // Материалы VI совещ. «Вид и егоу продуктивность в ареале». С. Пб. 1993, с. 260-262.

42. Фасулати С.Р. Методические принципы селекции и сортоиспытания картофеля на устойчивость к колорадскому жуку Leptinotarsa decemlineata Say //Актуал. пробл. соврем/ Картофелеводства. Минск. 1997, С. 40-42.

43. Фасулати С.Р., Вилкова Н.А. (2000) Адаптивная микроэволюция колорадского жука и его внутривидовая структура в современном ареале //Современные системы защиты и новые направления в

44. Ч повышении устойчивости картофеляs к колорадскому жуку.

45. Сер.'Тенетическая инженерия и экология". М. Т.1. с.19-25.

46. Фасулати С.Р., Карасёва Н.А. (1998) Устойчивость овощных паслёновых растений к колорадскому жуку и принципы её оценки в связи с внутривидовой изменчивостью вредителя //Агро ХХ1.№2с.14-16.

47. Филиппович Ю.Б., Коничев А.С.,Множественные формы ферментов насекомых и проблемы сельскохозяйственной энтомологии // Моногр. 1987, Москва, с.86-89.

48. Филиппович Ю.Б. Основы биохимии: Учеб. для хим. и биол. спец. пед. унтов и ин-тов. 4-е изд., перераб. и доп. М.: Изд. Агар. 1999. С. 129.

49. Филиппович Ю.Б. Основы биохимии: Учеб. Для хим. и биол. спец. пед. ун-тов и ин-тов. 4-е изд., перераб. и доп. М.: Изд. Агар. 1999 с.459.

50. Филиппович Ю.Б., Рославцева С.А., Кутузова и др. Физиолого -биохимические основы действия средств борьбы с членистоногими. Итоги науи и техники. М.: ВНИТИ, 1988. Сер. Энтомология Т. 8.C.8-193.

51. Филиппович Ю.Б., Рославцева С.А., Кутузова Н.М., Барыбкина М.Н., Перегуда Т.А., Иванова Г.Б. Физиолого-биохимические основы действия средств борьбы с вредными членистоногими // Итоги науки и техники. Энтомология ВИНИТИ- 1988.-т.8.-с.163.

52. Филиппович Ю.Б., Щёголева Л.И. Исследование растворимых белков тканей тутового шелкопряда методом электрофореза в полиакриламидном геле //Доклады АН ССР. 1967. Т. 174. № I.e.240-242.

53. Хейман В.А. Применение люциферин-люциферазного метода для оценки энергетического состояния насекомых при действии инсектицидов и регуляторов развития //Исследования в области пестицидов. Москва. 1981. С. 52-59.

54. Хрунин А.В. Особенности взаимодействия эстераз насекомых и млекопитающих с производными 1,3,2- дигетер'афосфоринана и тио-и дитиокислот фосфора, содержащими фрагменты N-ацилированных аминокислот // Автореф. Дис. К.б.н., М. Тип МГПУ. 2000. 16с.

55. Чарыков А.К. Математическая обработка результатов химического анализа.-М.: Химия, 1984.- с.22-26.

56. Шамшина Т.Н. Участие неспецифичкских эстераз насекомых в обмене ювенильных гормонов и их аналогов. // Дис. К.б.н. М. 1986. С. 158.

57. Шапиро И.Д., Вилкова Н.А., Рябченко Н.А. Устойчивость растений к вредным организмам с эколого-генетических позиций //Вестн. С.-х. Науки. М. Т.4. 1991, с.151-154.

58. Шапиро И.Д., Фасулати С.Р., Иващенко JI.C. Иммуногенетические барьеры и источники устойчивости картофеля к ко орадскому жуку //Науч. техн. бюлл. ВИЗР. С-Пб. 1992, с.51-56.

59. Шустова В.П. Изучение специфичности действия некорых новых групп фосфорорганических соединений на холинэстеразы насекомых и теплокровных.//Автореф. Дис. к.б.н. М.1987.

60. Abbassy М.А , Eldefrawi М.Е., Eldefrawi А.Т. // Pestic. Biochem. Physiol.- 1983.-19, № 3.P.299-308.

61. Abdel-Aal Y.A.I., Woiff M.A., Roe R.M., Lambert E.P. Aphidcarboxyiesterases:biochemicai aspects and importance in the diagnosis of insecticide resistance // Pestic. Biochem. Physiol. 1990. V. 38. № 3.P.255-266.

62. Agosin M. Multiple forms of insect cytochrome P-450: role in insecticide resistance // Cytochrome P-450. Pap. Biochtm., Biophys. and Environ. Imlic. Proc. 4th Intern. Conf., Amsterdam, 1982. P. 661-669.

63. Argentine J.A., James A.A. Characterization of salivary gland- specific esterase in the vector mosquito, Aedes aegypti // Insect Biochem. Molec. Biol. 1995. V.25. .№ 5. P. 621- 630.

64. Brattsten LB.// Pestic. Biochem. Physiol.- 1987.-27, № l.-p. 1-12.

65. Brown T.M., Bryson P.K. Selective inhibitors of methyl parsthionresistant acetylcholinesterase from Heliothis virescens // Pestic. Biochem. Physiol. 1992. V. 22. № 2. P. 155- 164.

66. Casteels H., De Clercq R.The impact of some commonly used pesticides on the epigeal arthropod fauna in winter wheat // Meded. Fac. Landbouw. Rijksuniv. Gent. 1990. V. 55. № 28. P. 477-482.

67. Chang C.P., Plapp F.W. Jr. // Pestic. Biochem. Physiol.1983. 20. № 1. P. 1206-1210.

68. Chang C.P., Plapp F.W. Jr. // Pestic. Biochem. Physiol.1983. 20. № 1. P. 76-91.

69. Claudianos C.,Russell RJ. Oakeshott J.G. The sam acid substitution in orthologous esterases conferers organopho'sphate resistance on the house fly and a blowfly // Insect. Biochem. Molec. Biol. 1999. V.29. № 8. P. 675- 686.

70. Croft В.A., Whalon M.E. Selective toxicity of pyrethroid insecticides to arthropod natural enemies and pests of agricultural crops // Entomophaga. 1982. V.27. № 1. P.3-21.

71. Crouse G.D. Chemistry and insecticidal' activity of the spinosyns // Abstracts 9th Intern. Congr. Pesticide Chemistry. London, 1998. S. 3.1.

72. Crouse G.D. et al. Chemistry and insecticidal activity of the spinosyns // Pesticide and bioscience. The Food-Environment Challenge / Ed. by G.T. Brooks and T.R. Roberts. Cambridg:Royal Sosaiety Chemistry, 1999. P. 155-166.

73. Dauterman W.C. Insect metabolism: extramicrosomal // Comprehensive Insect Physiology, Biohemistry and pharmacology (Kerkut G.A., Gilbert L.I.). Pergamon Press. Oxford. New York. 1985. V.12. №10. P.713-730.

74. Davis J.R. /Disk electrophpresis. Method and application to humanserum proteins. // Ann. N-Y. Аса. Sci. 1964.- vol.121 № 2.-p. 404-427.

75. Delorme R., Fournier D., Chaufaux J. Esterase metabolism Redyced penetration are causes of resistabce to deltametrin in Spodoptera exigua Hub. (Noctuidea: Lepidoptera) //Pestic. Biochem. Physiol 1988.V.32.№ 3. P. 240-246.

76. Delorme R. //Phytoma.-1985. № 365.-p. 45, 47-48.

77. Doherty J.D., Nishimura K., Kurihara N., et al. // Pestic. Biochem.

78. Physiol 1987a. V 27. № l.-p. 123-131.// Pestic. Biochem. Physiol 1986.25. № 3.-p. 295-305.

79. Dowd P.F. Sparks T.C. Comparative hydrolysis of permetrin and fenvalerate in Pseudoplusia includens (Walker) and Heliothis virescens (F.) // Pestic. Biochem. Physiol 1987a. V 27. № l.-p. 123-131.

80. Dowd P.P. Sparks T.C. Characterization of a trans-permethrin hydrolysing enzyme from the midgut of Pseudoplusia includens (Walker) // Pestic. Biochem. Physiol 1986 V 25. № l.-p. 73-81.

81. Dunning R.A., Cooper J.M., Wardman J.M., Winger G.H. Suceptibility of the carabid Pterostichus melanarius (Illiger) to the aphicide sprays applied to the suugar-beet crop // Ann. Appl. Biol. 1982. V. 100. Suppl. P. 32-33.

82. Endo J., Nishiitswfsujo-Uwo I. // J. Invert. Pathol. 1980. - 36. P. 90103.

83. Feyereisen R, SabouraultC., Guzov V.M. et al. Overproduction of a P-450 that metabolizes diazinon is linked to a loss-of-function in the chromosome 2 aili-es-terase gene inresistant house flies // Ibb. 2002. 3c. 35.

84. Field L.M., Javel N., Devonshire A.L. Myzus persicae esterases and their amplified genes // Book of Abstracts 8-th IUPAC International Congress of Pesticide Chem. July 4-9, 1994: Washington, USA. 1994. V. l.P. 180.

85. Forgash A.J. // Pestic. Biochem. Physiol 1984- 22. № 1 .-p. 178-186.

86. Georghion G.P., Taylor C.E. // Trsns. 15th Intern. Congr. Entomol. -Canberra. 1977. -P. 759-785.

87. Goh D.K.S., Anspaugh D.D., Motoyama N., Rock G.C., Roe R.M. Isolation and characterization of an insecticide resistance associatedesterase in the tobacco budworm, Heliothis virescens (F.) // Pestic. Biochem. Physiol 1995 V.51. № 2.-p. 192-204.

88. Gunninr R.V., Balfe Me. Spinosad resistance in Australian Helicopteratharmigera (Hubner) (Lepidoptera: Noctuidae) // Books of Abstracts 101.tern. Congr. on the Chemistry of Crop Protect. Basel, 2002. V. 1.3c. 08. P. 290.

89. Hagley E.A.C., Pree D.J., Holiday N.J. Toxicity of insecticides to some orchard carabids (Coleoptera: Carabidea) // Can. Entmol. 1980. V. 112. P. 457- 462.

90. Harold J., Ottea J.A. characterization of esterases associated with profenofos resistance in the tobacco budworm Heliothis virescens (F.) // Arch. Insect. Biochem. and Physiol. 2000. V. 45. № 2. P. 47-59.

91. Harold J.,Ottea J.A. Characterization of esterases associated with profenofos resistance in the tobacco budworm, Heliothis virescens (F.)//Arch. Insect. Biochem. and Physiol 2000 V 45. № 2.-p. 47-59.

92. Heimbach U., Wehling A., Sprick P. Mehriahrise Untersuchungen zur 4 Wirkung eineger Blattlausinsektizide auf epigaische Raubarthropoden:

93. Vortr. 48. Dtsch. Pflanzenschuts Tag., Gottingen, 5-8 Okt., 1992 // Mitt. Biol. Bundesanst. Land- und Forstwirt. Berlin; Dehlem, 1992. H.283. S. 98.

94. Inglesfield Ch. The effcts of the Pyrethroid insecticide WL-85871 on non-target arthropods: Field Studies // Pestic. Sci. 1985. V. 16. № 2. P. 211.

95. Kagabu Sh. Imidacloprid: discavery and development // Proc. XX к Intern. Congr. Of Entomology. Firence. August 25-31. 1996. 19-015.

96. Kandil M., Belal M., Abdala M., Ayoub S. Identification of themechanism of resistance in the white fly Bemisia tabaci by using enzymeinhibition // Book of Abstracts 8- th IUPAC Congress of Peticide Chem. Washington, USA. 1994. V. 1. P. 179.

97. Khambay B.P.S., Boyes A., Williamson M.S. et al. Difining type I andthtyp II in insecticide pyrethroids // Books of Abstracts 10 Intern. Congr. Pesticide Chemistry of Crop Protect. Basel, 2002. V. 1.3c. 49. P. 331.

98. Kim H.J., Clark J.M. Evaluation of resistance management in recombinant acetylholinesterase ofcolorado beetl // Ibb. 2002. 3c. 17.p.299.

99. Konno Т.Е., Hodgson E., Dauterman W.C. Purification and characterization of phosphorotriester hydrolysis from metthy parathion -resistant Heliothis virescens // Pest. Biochem. Physiol. 1990. V.36.№ l.P.l-13.

100. Leopold R.A., Marks E.P., Eaton J.K.,et al. // // Pest. Biochem. Physiol.1985. 24, №1. P.267-283.

101. Ley S.V. // Recent adv. In chemicals of insect control.- 1984.-p. 307322.

102. Lowry O.H., Rosenbrough N.J.,Farr A.L., Randall R.J. /Protein measurement with the Folinphenul reagent.-1951.-vol 193., № l.-p. 265272.

103. Moores G.D., Devine G.J., Devonshire A.L. Insecticide-insensitive acetylcholinesterase can enhanse esterase-based resistance in Muzus persicae n Muzus nicotianae // Pest. Biochem. Phisiol. 1994. V. 49. № 2. P. 114-120.

104. Moores G.D., Devine G.J., Devonshire A.L. Insecticide-insensitive acetylcholinesterase can enhance esterase-based resistance in Muzus persicae vs. Muzus nicotianae // Pest. Biochem. Physiol. 1994. V. 49. № 3.P. 114-120.

105. Ono M., Siegfreid B.D. Role of greenbug esterases in parathion resistance // Books of Abstracts 9th IUPAC Congr. of Pesticide Chemistry. July 4-9,1994. Washington, USA. 1994. V.I.p. 185.

106. Perrin R.M., Wege P.J. Mode action and its role to resistanceiLmanagement // Books of Abstracts 9 Intern. Congr. Pesticide Chemistry. London, 1998. Topics 1-4. 4D-002.

107. Prabhakaran S.K., Kamble S.T. Purification and characterization of esterase isozyme from insecticide resistant and susceptible strains of the german cockroach, Blattella germanisa (L) // Insec Biochtm. Molec. Biol. 1995. V. 25. №4. P. 519-524.

108. Reidy G.E., Rose H.A., Visetson S., Murray M./Increased glutatione-S-transferase activity and glutatione congetin in an insecticide-resistant strain of Tribolium castaneum (Herbst). // Pestic. Biochem. and Physiol.-1990.-36, n.3.-p. 269-276.

109. Roelofs W.L. Chemistry of sex attraction // Proc. Nat. Acad. Sci. USA.1995. V. 92. №1. P. 44-49.

110. Rzehak H., Basedow Т. Die auswirkungen verschiedener Insektizide auf die epigaischen Raubarthropoden in Winterrapsfeldem // Anz. Schadlingsk., Pflanzenschuts Umweltschutz. 1992. V. 55. № 5. S. 71-75.

111. Samsoe-Petersen L. Effects of 45 insecticides, acaricides and molluscocides on the rove beetle Aleochara bilineata (Coleoptera: Staphylinidae) in the laboratory // Entomophaga. 1993. V.38. № 3. P. 371382.

112. Scharf M.E., Hemingway J., Small G.J., Bennett G.W. Examination of esterases from insecticide resistant and susceptible strains of the german cockroach, Blattella germanica (L) // Insect Biochem. Molrc. Biol. 1997. V.27. №.6. p. 489-497.

113. Schoknecht U., Otto D. Enzymes involvet in the metabolism of organophosphorus, carbamate and pyrethroid insecticides // Insecticides -mechanism of action and resistance. (D. Otto). INTERCEPT. Andover. England. 1991. P. 119-155.

114. Scott Z.G., Susanna S.T., Shono Т./ Biochemical changes in the cytochome p-450 monooxygenases of seven insectide resistant hous flies (Musca domestica) Strains. //Pest. Biochem. Physiol.-1990.-36, n.2,-127-134.

115. Singh G.S.P., Orchard L. // Pest. Biochem. Physiol.-1982.-17, №.2.-p. 232-242.

116. Small G.J., Hemingway J. Differential glycosylation produces heterogeneity in elevated esterases associated with insecticides resistancein the brown planthoppera Nilaparvata lugens Stal // Insect Biochem. Molec. Biol. 2000. V.30. № 6. P. 443-453.

117. Soderlund D.M., Sanborn J.K., Lee P.W. // Progress in Biochem. and Toxicol.-1983.-3-P. 401-435.

118. Suzuki K., Hama H., Konno Y., Saito T. Carboxylesterase of the cotton phid Aphis gossypii: Properties and role Fenitrothion resistance // Book of Abstract 8-th IUPAC Congress of Pesticide Chem. July 4-9, 1994. Washington, USA. 1994. V.l. P. 187.

119. Vav Asperen K.A. study of housefly esterase by means of sensitivecolorimetric method //J. Insect. Physiol. 1962. V.8. № 3.-p. 401-416.

120. Villate F., Ziliane P., Marcel V., Menozzi P., Foimier D. A high number of mutations in insect acetylcholinesterase may provide insecticide resistance //Pestic. Biochem. And Physiol. 2000. V. 67. № 2. P. 95-102.

121. Wolff M.A., Abdelaal Y.A.I., Goh D.K.S. Organophosphate resistance in the tobacco aphid (Homoptera, Aphididae) purification and characterization of a resistance- associated esterase // J. Econ. Entomol, 1994. V.87. № 5.-p. 1157-1164.

122. Энзимограммы эстеразного комплекса ферментов общего гомогената имаго рыжего таракана.

123. Условные обозначения: S- чувствительные особи R- резистентные особи1. Рисунок 2

124. Энзимограммы кислофосфатазного комплекса ферментов общего гомогената имаго рыжего таракана. Условные обозначения: S- чувствительные особи R- резистентные особи1. Рисунок 3

125. Энзинограммы эстеразного комплекса ферментов общего гомогената колорадского жука.

126. Условные обозначения: S- чувствительные особи Ri резистентные особи R2- высокорезистентные особи1. Ri

127. Энзинограммы глюкозо-6-фосфатдегидрогеназного комплекса ферментов общего гомогената колорадского жука. Условные обозначения: S- чувствительные особи Ri резистентные особи R2- высокорезистентные особи1. Рисунок 5

128. Энзинограммы кислофосфатазного комплекса ферментов общего гомогената колорадского жука. Условные обозначения: S- чувствительные особи Ri резистентные особи R2- высокорезистентные особи1. Рисунок 6

129. Энзимограммы кислофосфатазного комплекса ферментов общего гомогената имаго рыжего таракана. Условные обозначения: S- чувствительные особи R- резистентные особи