Сравнительное исследование биологических и продуктивных особенностей свиней, трансгенных по гену релизинг-фактора гормона роста, 3-го и 9-го поколений тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Пархоменко, Елена Григорьевна

• Пархоменко, Елена Григорьевна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Пархоменко, Елена Григорьевна

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Генная инженерия - оптимальное решение проблем животноводства.

1.2. Методы получения трансгенных животных.

1.3. Разведение трансгенных животных.

1.4. Особенности иммунного статуса свиней.

1.5. Общая характеристика гормона роста.

1.6. Влияние гормона роста на обмен веществ в организме.

1.7. Действие гормона роста в организме.

1.8. Особенности фенотипа свиней, трансгенных по гену mMTl-hGRF.

1.9. Идентификация трансгенности и определение экспрессии рекомбинантных генных конструкций.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сравнительное исследование биологических и продуктивных особенностей свиней, трансгенных по гену релизинг-фактора гормона роста, 3-го и 9-го поколений»

Актуальность темы. Современное развитие животноводства немыслимо без использования последних достижений молекулярной биологии и молекулярной генетики, благодаря которым получили развитие новые направления биотехнологии сельскохозяйственных животных -генная, клеточная инженерия (29). Основной целью работ по генной инженерии является создание и изучение уникальных племенных животных с измененной и устойчивой наследственностью, используемых в больших популяциях для их совершенствования, повышения продуктивности и качества продукции (68). Особое внимание уделяется трансгенным животным, включающих в геном чужеродных последовательностей ДНК (трансгенов) с последующей их устойчивой наследуемостью в ряде поколений (146). Вместе с тем, экспрессия трансгенов может обуславливать изменения в системе тканевой специфичности, физиологических реакциях, а иногда и во всем развитии организма (122).

Целями создания трансгенных животных являются повышение продуктивности и устойчивости к инфекционным заболеваниям, использование их как продуцентов биологически-активных веществ, в качестве биомоделей и как потенциальных доноров для ксенотрансплантации органов и тканей (70,127,145, 148).

Опыты по получению и изучению трансгенных животных проводятся во многих странах мира. Несмотря на многочисленность и многообразие этих исследований, многие факторы, определяющие эффективность экспрессии чужеродных генов в организме остаются мало изученными. В этой связи, изучение экспрессии введенных генов и ее влияние на физиолого-морфологические признаки трансгенных животных является актуальной задачей современной биотехнологии в животноводстве.

Совместными усилиями российско-германских ученых (Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства,

Россия; Институт молекулярного животноводства, Ун иверситет имени Людвига-Максимилиана, Г. Мюнхен) были получены свиньи, трансгенные по рекомбинантной генной конструкции mMTl-hGRF, содержащей структурную часть гена релизинг-фактора гормона роста человека (hGRF) и металлотионеиновый промотор 1 мыши (mMTl). Исследование таких животных в ряде поколений показало, что интеграция и экспрессия трансгена оказывала заметное влияние на биологические и продуктивные особенности трансгенных животных. Однако в ряде поколений наблюдалось нивелирование действия трансгенов. В этой связи, изучение физико-биохимических процессов и хозяйственно- полезных признаков у трансгенных свиней девятого возрастного поколения является актуально задачей биологии и биотехнологии животных, решение которой позволит выявить ряд закономерностей во взаимодействии интегрированных генов с организмом трансгенных животных.

Цель и задачи. Целью настоящей работы явилось изучение физиолого-биохимических процессов и продуктивных качеств свиней, трансгенных по генной конструкции mMTl-hGRF, 3-го и 9-го поколений.

Для достижения указанной цели, были поставлены следующие задачи:

1. Выполнить сравнительное исследование уровня соматотропина в крови трансгенных и контрольных свиней.

2. Изучить особенности роста и развития экспериментальных групп свиней, в том числе под воздействием вакцинации.

3. Изучить клиническую картину крови и особенности иммунного ответа опытных групп свиней на раздражение возбудителями острых кишечных заболеваний.

4. Выявить особенности биохимических процессов, протекающих в организме трансгенных свиней, в сравнении с животными-аналогами.

5. Определить показатели мясной и откормочной продуктивности трансгенных свиней и их аналогов.

6. Изучить весовые характеристики, гистологичесие и цитоморфологические особенности органов и тканей трансгенных свиней.

7. Изучить систему морфологических корреляций в организме трансгенных и контрольных свиней.

Научная новизна работы. Впервые выполнена оценка действия интеграции трансгена на организм свиней, трансгенных по mMTl-hGRF, разных поколений. В одинаковых условиях внешней среды (кормление, содержание и т.п.) изучены особенности физиолого-биохимических процессов, мясная и откормочная продуктивность, цитоморфологические показатели органов и тканей, иммунный ответ при вакцинации бактериальной вакциной у трансгенных свиней 3-го восстановленного и 9-го поколений в сравнении с животными-аналогами.

Практическая значимость работы. По результатам исследований трансгенных свиней 3-го и 9-го поколений и их аналогов определены биологические особенности развития трансгенных свиней разных поколений; изучены особенности гематологических показателей и иммунологического ответа организма трансгенных свиней на раздражение возбудителями острых кишечных заболеваний; определены показатели мясной и откормочной продуктивности при убое в 120-130 кг живой массы; изучены цитоморфологические особенности органов и тканей трансгенных свиней; выявлена корреляционная зависимость уровня соматотропина в крови с другими физиологическими и хозяйственно-полезными признаками.

Положения, выносимые на защиту.

• Повышенный уровень соматотропина в крови трансгенных свиней 3-го и 9-го поколений как результат интеграции и экспрессии гена релизинг-фактора гормона роста.

• Изменения в динамике роста трансгенных свиней по сравнению с аналогами.

• Лучшая иммунологическая реактивность трансгенных свиней 3- и 9-го поколений по результатам вакцинации к возбудителям острых кишечных заболеваний.

• Изменение морфометрических показателей внутренних органов (щитовидной железы, поджелудочной железы, печени) у трансгенных свиней 3- и 9-го поколений как реакция организма на интеграцию трансгена.

• Изменение некоторых морфологических корреляций в организме трансгенных свиней.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы были представлены на научных конференциях центра биотехнологии и молекулярной диагностики ВИЖ в 2005, 2006 гг., на 5-й международной школе-конференции «Новые методы генодиагностики и генотерапии: современное состояние и перспективы использования в сохранении генофонда сельскохозяйственных животных», Дубровицы, 2005.

По материалам диссертации опубликовано 5 работ, в том числе 2 - в журналах «Свиноводство» и «Зоотехния», рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Пархоменко, Елена Григорьевна

5. Выводы

1. Синтез соматотропина в крови трансгенных свиней 3-й 9-го поколений в среднем составил 1,8 и 0,85 нг/мл, что, соответственно, в 4,5 и 2,1 раза выше по сравнению с контрольными свиньями.

2. Установлено, что трансгенные свиньи 9-го поколения характеризовались более высокими темпами роста на поздних стадиях развития (начиная с 215-го дня). Максимальная разница по отношению к контрольной группе составила 16,2% (225-ый день), к группе 3-го поколения - 53,7% (215-ый день).

3. По результатам вакцинации свиней к возбудителям острых кишечных заболеваний показано, что трансгенные животные характеризуются не только высокой степенью специфического иммунного ответа к бактериальным возбудителям, но и лучшей по сравнению с контролем готовностью к специфической защите при встрече с любым инфекционным агентом на ранней стадии вакцинации.

4. Биохимический анализ крови экспериментальных групп свиней показал соответствие всех биохимических показателей крови, за исключением глюкозы (во всех группах), физиологической норме. Концентрация глюкозы в крови трансгенных свиней 9-го поколения составила 7,6±3,2 ммол/л, что было, соответственно, на 38,2 и 24,6% выше, чем в контрольной группе и в группе свиней 3-го поколения. Активность ACT и AJ1T в группе 9-го поколения составила, соответственно, 87,4±23,6 и 63,3±2,5 МЕ/л, что было на 63,1 и 23,4% выше по сравнению с группой свиней 3-го поколения и на 24,3 и 11,8% выше по сравнению с контрольной группой. Содержание общего белка и глобулинов в крови свиней 9-го поколения составило, соответственно, 84,2±0,1 и 43,1±1,9 г/л, что было выше на 13,9 и 31,4% по сравнению с контролем и на 10,6 и 31,0% - по сравнению с группой 3-го поколения.

5. Выявлена тенденция к увеличению содержания мяса и снижения содержания сала в тушах трансгенных свиней 9-го поколения по сравнению с контролем (соответственно, на 2,8 и 6,1%) и группой трансгенных свиней 3-го поколения (соответственно, на 5,5 и 10,0%). Анализ показателей мясной продуктивности выявил снижение веса сала у трансгенных животных 9-го поколения по сравнению с контролем и группой 3-го поколения, соответственно, на 6,1% и 10,0%. Выявлена тенденция повышенного содержания белка в мясе трансгенных свиней: 17,4% у свиней 3-го поколения и 17,6% у свиней 9-го поколения по сравнению с 17,1% у контрольных свиней.

6. Установлено изменение морфометрических показателей некоторых внутренних органов у трансгенных свиней 3- и 9-го поколений. Средний диаметр фолликулов щитовидной железы у трансгенных свиней 3- и 9-го поколений был выше и составил, соответственно, 223,6 и 193,4 мкм против 188,2 мкм в контроле. Плотность размещения клеток в островках Лангерганса в поджелудочной железе трансгенных животных 3-й 9-го поколений снизилась и составила, соответственно, 24 и 27 клеток на 100 мкм2 площади против 32 клеток на 100 мкм2 в контроле. Выявлено увеличение толщины печеночных балок у трансгенных животных по сравнению с контрольными: 25,4 и 24,9 мкм в группах свиней 3-го и 9-го поколений против 20,7 мкм в контроле.

7. Показано изменение некоторых морфологических корреляций в организме трансгенных свиней по сравнению с контрольными животными.

6. Практические предложения.

Лабораториям, занимающимся вопросами трансгенеза в животноводстве, рекомендуем учитывать полученные нами данные, при создании стабильных линий трансгенных сельскохозяйственных животных.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Пархоменко, Елена Григорьевна, 2007 год

1. Андреева, JIB. Микроинъекция гена релизинг фактора гормона роста человека в зиготы и эмбрионы свиней / J1.B. Андреева, Н.В. Хайдарова // Доклады ВАСХНИЛ.- 1990.- №.7.- С.46 -51.

2. Аршавский, И. А. Биология периода новорожденности у млекопитающих / И.А. Аршавский.- Москва, Наука, 1968, с.7-16.

3. Балаболкин, М.И. Секреция гормона роста в норме и патологии / М.И. Балаболкин.- М.: Медицина, 1978.- 173 с.

4. Балаболкин, М.И. Эндокринология / М.И. Балаболкин.- М.: Медицина, 1989.-416 с.

5. Берман, В.М. Возрастная реактивность в инфекционных процессах. В кн.: Вопросы возрастной реактивности в инфекционных и иммунологических процессах / В.М. Берман.- Л.: Медицина, 1955, с.5-12.

6. Блинов, Н.П. Основы биотехнологии / Н.П. Блинов.- СПб: Наука, 1995.- 600 с.

7. Богатырев, А.Н. Генная инженерия сельскохозяйственных животных -мощный рычаг селекции XXI века/ А.Н. Богатырев, Л.К. Эрнст// Генноинженерные сельскохозяйственные животные /Сб. науч. тр. -1995.- Вып.1.- С. 3-13.

8. Брем, Г. Генные формы новый путь производства биологически активных протеинов трансгенными животными / Г. Брем, Н.А. Зиновьева, Л.К. Эрнст // Сельскохозяйственная биология.- 1993.- №.6-С.З- 27.

9. Брем, Г. Трансгенные свиньи (mMTl- hGRF ): оценка качества туш и химического состава мяса при убое животных / Г. Брем, Л.К. Эрнст, Л.А. Андропов // Генноинженерные сельскохозяйственные животные / Сб. науч. тр.- 1995.- Вып.1,- С.26- 33.

10. Ю.Брондз, Б.Д. Иммунологическое распознавание и реакции клеточного иммунитета / Б.Д. Брондз // Успехи современной биологии, 1972, т.73, вып.1, с.42-58.

11. Верховский, О.А., Федоров Ю.Н., Сологуб В.К. Использование моноклональных антител для оценки антигенных свойств иммуноглобулинов животных / О.А. Верховский, Ю.Н. Федоров, В.К. Сологуб //Сельскохозяйственная биология.- 1995,-№.4.- С.94-100.

12. Волкова, О.В., Основы гистологии с гистологической техникой / О.В. Волкова, Ю.К. Елецкий.- М.: Медицина, 1982.

13. Волкова, О.В. Гистология, цитология и эмбриология: Атлас / О.В. Волкова, Ю.К. Елецкий, Т.К. Дубовая.- М.: Медицина, 1996.

14. Воловинская, В.П. Определение влагоудерживающей способности мяса

15. В.П. Воловинская, Б.Я. Кельман // Мясная индустрия СССР. 1960. -№ 6. - с.47.

16. Газарян, К. Трансгенные животные: перспективы использования в животноводстве / К. Газарян // Сельскохозяйственная биология.- 1988.-№.2.- С.31-39.

17. Гоголевский, П. Исследование экспрессии гена В галактозидазы в трансгенных ранних эмбрионах кроликов / П. Гоголевский, И. Гольдман, В. Гусев // Доклады ВАСХНИЛ.-1991.- №.10.- С.38-42.

18. Гольдман, И.Л. Прогрессивная технология получения трансгенных овец / И.Л. Гольдман, Е.Д. Башкеев, П.А. Гоголевский // Доклады РСХА 1992.- №.9-10.- С.25-30.

19. Гольдман, И.Л. Теоретические вопросы получения трансгенных животных. Эксперименты на кроликах / И.Л. Гольдман, Л.К. Эрнст,

20. П.А. Гоголевский // Генноинженерные сельскохозяйственные животные / Сб. науч.тр.-Вып. 1.-1995.-С.93-102.

21. ГОСТ 19496-93. Мясо. Метод гистологического анализа. М., «Стандарты», 1993.

22. Дворянчиков, Г.А. Идентификация и анализ интегрированного в геном животных трансгена методом ПЦР- амплификации и с помощью блот-гибридизации / Г.А. Дворянчиков, Л.Ю. Иванов, Н.П. Рудько // Сельскохозяйственная биология.- 1993.- №.4.- С.39- 46.

23. Доклад научной группы ВОЗ №448. Факторы, регулирующие иммунный ответ.// Женева, 1971.

24. Држевицкая, И.А. Основы физиологии обмена веществ и эндокринной системы / И.А. Држевицкая.- М.: Высшая школа, 1983.- 272 с.

25. Дыбан, А.П. Трансгенные млекопитающие: изучен: фенотипических эффектов гормона роста человека, индуцированного животным / А.П. Дыбан, С.И. Городецкая // Биотехнология.- 1987.-№.3.- С.352-357.

26. Зиновьева, Н.А. Методические рекомендации по использованию метода полимеразной цепной реакции в животноводстве / Н.А. Зиновьева, А.Н. Попов, J1.K. Эрнст.- Дубровицы, 1998.- 47 с.

27. Зиновьева, Н.А. Проблемы биотехнологии и селекции сельскохозяйственных животных / Н.А. Зиновьева, JI.K. Эрнст.-Дубровицы,2004.- 316с.

28. Зиновьева, Н.А. Трансгенные животные и возможности их использования: молекулярно- генетические аспекты трансгенеза в животноводстве / Н.А. Зиновьева, JI.K. Эрнст, Г. Брем.- ВИЖ, 2000.128 с.

29. Иванов, И.Ф. Цитология, гистология, эмбриология / И.Ф. Иванов, П.А. Ковальский.- М.: Колос, 1969.- 695 с.

30. Калашникова, JI.A. Получение и размножение трансгенных животных / JI.A. Калашникова // Современные аспекты селекции, биотехнологии, информатизации в племенном животноводстве /Сб. ВНИИПЛЕМ.-1997.- С.257-264.

31. Калашникова, JI.A. Проблемы и перспективы использования генетически модифицированных сельскохозяйственных животных / JI.A. Калашникова // Аграрная Россия.- 2000.- №5.- С.11-19.

32. Карпуть, И.М. Динамика Т и В - лимфоцитов у свиней в онтогенезе / И.М. Карпуть // Ветеринария, 1977.- №4.

33. Карпуть, И.М. Кроветворение и иммунологическая реактивность у свиней / И.М. Карпуть // Ветеринария, 1975, №2.

34. Карпуть, И.М. Возрастная реактивность кроветворно лимфоидных органов у вакцинированных и больных паратифом поросят и влияние на нее антибиотиков / И.М. Карпуть // Тр. 5 Всесоюз. Конф. по патологической анатомии с/х. жив., 1973, с.268-271.

35. Кленовицкий, П.М. Мутационные изменения у трансгенных животных / П.М. Кленовицкий, А.А. Некрасов // Актуальные проблемы развития животноводства. Дубровицы, 1998, с. 184-191.

36. Кудрявцев, А.А. Клиническая гематология животных / А.А. Кудрявцев, JI.A. Кудрявцева.- М.: Колос, 1974.- 405 с.

37. Лапшин, С.А. Особенности жирнокислотного состава тканей трансгенных свиней / С.А. Лапшин, Л.К. Эрнст, В.И. матяев // Генноинженерные сельскохозяйственные животные / Сб. науч. тр.-1995.- Вып.1.- С.58- 61.

38. Лашас, Л.В. Соматотропин человека / Л.В. Лашас, Д.Г. Лашене.-Вильнюс: Мокслас, 1981.- 143 с.

39. Медведев, С.Ю. Рост и развитие трансгенных кроликов и свиней с перенесенным геном релизинг- фактора гормона роста человека / С.Ю. Медведев, Л.В. Козикова, В.Г. Бавин, А.Ф. Яковлев // Сельскохозяйственная биология,- 1995.- №.6.- С. 43- 48.

40. Меркурьева, Е. К. Биометрия в селекции и генетике е.- х. животных / Е.К. Меркурьева.- М.: Колос, 1970.- 424 с.43 .Мертвецов, Н.П. Гормональная регуляция экспрессии генов / Н.П. Мертвецов.- М.: Наука, 1986.- 207 с.

41. Методические указания по изучению качества туш, мяса и подкожно-то жира убойных свиней. М., 1978.- 26 с.

42. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: справочник / Под ред. проф. И. П. Кондрахина.- М.: КолосС, 2004.- 520 е., 4. л. ил.: ил.

43. Петров, Р.В. Иммунология и иммуногенетика / Р.В. Петров.- М.: Медицина, 1976.

44. Петров, Р.В. Иммунология / Р.В. Петров.- М.: Медицина, 1978.

45. Попов, А.Н. Экспресс- метод тестирования новорожденных поросят на интеграцию в геном чужеродных генов / А.Н. Попов, Н.А. Зиновьева, Г.Брем // Сельскохозяйственная биология.- 1995.- №6.- С. 136- 138.

46. Росохатский, С. Повышение скорости роста кроликов, трансгенных по гену РФГР человека/ С. Росохатский, А.Ф. Смирнов, А.Ф. Ефимов // Доклады РАСХН.- 1994.- №.2.- С.24-26.

47. Рядчиков, В. Трансгенные свиньи с геном mMTl- hGRF и перспективыих использования в селекции / В. Рядчиков, JL Солодухина, Н. Соколов // Генноинженерные сельскохозяйственные животные / Сб. науч. тр.- 1995.- Вып.1С.73- 84.

48. Сиротинин, Н.Н. Реактивность и резистентность организма: многотомное руководство по патологической физиологии / Н.Н. Сиротинин,- Москва, Медицина, 1966.

49. Скалинский, Е.И. Микроструктура мяса / Е.И. Скалинский, А.А. Белоусов.- М.:Пищевая промышленность, 1978.

50. Тейлор, Д. Биология / Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут.- М.: Мир, 2002.-Т.З.- С.234- 235.

51. Томмэ, М.Ф. Методика изучения убойных выходов и мяса / М.Ф. Томмэ.- М., 1956,- 16 с.

52. Учитель, И.Я. Макрофаги в иммунитете / И.Я. Учитель,- М.: Медицина, 1978.

53. Фаворская, Ю.Н. Поверхностная структура макрофагов и лимфоцитов при их взаимодействиях / Ю.Н. Фаворская, Л.Д. Крымский, Г.В. Нестойко // Архив патологии, 1975.- № 8.- С.33-39.

54. Федоров, Н.А. Полимеразная цепная реакция (ПЦР): методическое пособие / Н.А. Федоров, Ю.С. Суханов, А.Х. Асади Мобархан, М.И. Артемьев.- М., 1996.

55. Фриденштейн, А.Я. Клеточные основы иммунитета / А.Я. Фриденштейн, H.J1. Чертков.- М.: Медицина, 1969.

56. Хвыля, С.И. Практическое применение гистологических методов анализа / С.И. Хвыля, В.В. Авилов, Т.Г. Кузнецова // Мясная промышленность.- 1994.- №.6. С. 9-11.

57. Хвыля, С.И. Компьютерная приставка к человеческому глазу / С.И. Хвыля, В.В. Авилов, Т.Г. Кузнецова, Е.Н. Тимин // Мясная промышленность.- 1995.- №.1.- С.23-25.

58. Хвыля, С.И. Оценка мясного сырья и определение состава мясопродуктов микроструктурными методами / С.И. Хвыля, Т.Г. Кузнецова, В.В. Авилов.- РАСХН. М.,1998.-с.38.

59. Чабан И.М. Продуктивные и биологические особенности свиней с интегрированным в геном чужеродным геном релизинг-фактора соматотропного гормона : дис.канд. биол. наук, п. Дубровицы Моск. обл., 2000.- 141 е.- Библиогр.: с. 129-141.

60. Шатайло В.Н. Продуктивные и физиолого-биохимические качества трансгенных свиней : дис.канд. биол. наук, п. Дубровицы Моск. обл., 2001.- 163 е.-Библиогр.: с. 152-163.

61. Эрнст, JI.K. Проблемы селекции и биотехнологии сельскохозяйственных животных / JI.K. Эрнст.- М.,1995.- 359 с.

62. Эрнст, JI.K. Генно-инженерные технологии новый путь развития животноводства / JI.K. Эрнст, Г. Брем, Н.А. Зиновьева // Зоотехния.-1994.- №.5.- С.2-4.

63. Эрнст, JI.K. Генная инженерия в животноводстве: трансгенные животные, кормовые растения, микроорганизмы рубца / JI.K. Эрнст, И.Л. Гольдман, С.Г. Кадулин // Биотехнология.- 1993.- №5.- С.2-14.

64. Эрнст, Л.К. Современное состояние и перспективы использования трансгенных технологий в животноводстве / Л.К. Эрнст, Н.А. Зиновьева, Г. Брем.- М., РАСХН, 2002.- 341 с.

65. Agellon, L.B., Davies S.L., Chen Т.Т., Powers D.A. Structure of fish (rainbow trout) grows hormone gene and its evolutionary implications // Proc.Nat.Acad.Sci. USA., 1988

66. Ausubel, F.M., Brent R., Kingston R.E. et al. Current protocols in molecular biology // Join Wiley and Sons.- New York.- 1987.

67. Baker, A.R., Hellingshead P.G., et al. Osteoblastspecific expression of growth hormone stimulates bow growth in transgenic mice // Moll. And Cell. Biol.- 1992.- V.12.-P.5541- 5547.

68. Behringer, R.R., Ryan T.M., Reilly M.P. et al. Synthesis of functional hyman hemoglobin in transgenic mice // Science 245.- 1989.- P.971-973.

69. Bennis, R.M. /Cellular immunology in the pig.// Proc. Roy. Soc. Med., 1963, v.66, №12, p.l 155-1160.

70. Bishop, J., Smith R. Mechanism of chromosomal integration of microinyection DNA // Mol. Biol. Med. 1989.- V.6.- P.283-298.

71. Brameld, J.M., Weller P.A., et al. Hormonal control of insulin- like growth factor-1 and growth hormone receptor mRNK expression by porcine hepatocytes in culture // J. Endocrinol.- 1995.- 146.- P.239- 245.

72. Brem, G. lnterifance and tissue-specific expression of transgenes in rabbits and pigs // Mol. Deprod. and Dev.- 1993.- 36.- N.2.- P.242-244.

73. Brem, G. Production of transgenic mice, rabbit and pigs by microinjection into pronuclei // Zuchtyniene.- 1995.- V.20.- N.5.- P.134-139.

74. Brem, G. Transgene Nutztiere // Zuchtungkunde.- 1988.- V.60.- N.3.-P.248-262.

75. Brem, G. Transgenic animals In Biotechnology. A Multy Volume Comprehensive Treatise. Edited by H.J.Rehm and G.Reed in cooperation with A.Puhler and. P.Stadtler. VCH. Weinhein,New York, Basel, Cambridge. P.745-832.

76. Brem, G., Brening В., Goodman H.M. et.al. Production of transgenic mice, rabbits and pig by microinjection into pronuclei // Zuchthug.- 1985.- V.20.-P.251-252.

77. Brem, G., Brenning В., Salamons B. et al. Unerwartets transgene Expression eines gesaengespezifischen Wachstumshormon Genkonstruktes in den Bergmann- Gliazellen der Maus // Tiwrarztl. Prax.-1991.- V. 19. P.l- 6.

78. Brem, G., Muller M. Large transgenic mammals // Animals with novel genes / by Ed.N.Maclean,- Cambridge University Press.- 1994,- P. 179-224.

79. Cantor, H., Simpson E. /Regulation of the immune response by subclasses T lymphocytes.//EuropJ. Immunol., 1975, v.5, №4, p.330-336.

80. Church, R.B. / Possibilities for genetic engineering of animals // Inf. J. Anim. Sci. 1989.- V.4.-H.1-6.

81. Church, R.B. Embryo manipulation and gene transfer in domestic animal. Trends Biotechnol. 5.- 1987.- P. 13-19.

82. Clark, A., Bissinger P., Bullock D. et.al. Chromosomal position effects and modulation of transgene expression // Reprod. Fertil. Dev. 1994.-V.6.- N.5.- P.589-598.

83. Eriksen, E.F., Kassem M., et al. Growth hormone, insulin-like growth factors and bone remodulling // Braz. J.Med, and Biol. Res.- 1996.- 29.-№6.- P.525- 534.

84. Erlich, H.A. PCR technology: principles and application for DNA amplification. Stocton press, New york. 1989.

85. Eva, D., Hans Т., Hans E., et al. Growth hormone signaling in hepatocytes // (Abstr.) Keystone Symp. "Adipose Cell".- Park City. Utah.- Jan. 14- 21.1994.- J.Cell.Biochem.- Suppl.l8a.- P. 152.

86. Evans, M.J., Bradley A., Robertson E.J. Genetic manipulation of the mammalian ovum and early embryos // Bandbury Report.- Gold Spring Harbor, New York, 1985.

87. Evans, M.J., Kaufman M.H. Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos //Nature 292.- 1981.- P. 154- 156.

88. Fuh, G., Cunningham B.C., et al. Rational design of potent antagonists to the human growth hormone receptor // Science.- 1992.- V.256.- N.5064.-P.1677- 1680.

89. Gavora, J.S., Benkel В., Sasada H. et.al. An attempt at sperm mediated gene transfer in mice and chikens //Can.J. Anim.Sci. 71.- 1991.- P.287-291.

90. Glosser, A., Doetschman Т., Korn R. et.al. Transgenessis by means of blastocyst derived embrionic stem cell lines // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986.-V.83.-P.9065-9069.

91. Good, R.A. et al. /The role of the thimus in development of immunologic capacity in rabbits and mice.//Exp. Med., 1962, v. 116, №5, p.773-781.

92. Gordon, J.W., Ruddle F. Integration and stable germ line transmission of genes injected into mouse pronuclei // Science.-1981.- V.214.- P. 12441246.

93. Grumet, F.C., McDevitt H.O. / Nature of the represponding organism. // Contemp. Topics Immunobiol., 1973, v.2, p.63-76.

94. Hammer, R.E., Palmiter R.D., Brinster R.L. Partial correction of murine hereditary growth disorder by germ line incorporation of a new gene // Nature.-V.311.-1984.-P.65-67.

95. Hammer, R.E., Pursel V., Rexroad С et.al. Production of transgenic rabbits, sheep and pigs by microinjection// Nature.- 1985.- V.315.- P.680-683.

96. Hammerling, G.J., McDevitt H.O. /Antigen binding T and В -lymphocytes.// Immunol., 1974.- V. 112.- №5.-P.1726-1733.

97. Hettiarachchi, M., Watkinson A., et al. Growth hormone- induces insulin resistance and its relationship to lipid aviability in the rat // Diabetes.- 1996.- 45,- N4.- P.415- 421.

98. Huzar, D., Balling R., Kothary R. et al. Insertion of a bacterial gene into the mouse germ line using an infections retro virus vector // Proc. Natl. Acad. Sci. 82.- 1985.- P.8587- 8591.

99. Jaehner, D., Haase K., Mulligan R. et al. Insertion of the bacterial gpt gene into germ of mice by retro viral infection // Proc. Natl. Acad. Sci. 82.1985.- P.6927- 6931.

100. Jaroskova, L. et al. /Immunoglobulin determinants on lymphocytes in germfree piglets.// Eur. J. Immunol., 1973, v.3.- №12.- P.818- 824.

101. Kostyo, L.J. Rapid effect of growth hormone on amino acid transport and protein synthesis // Ann. N.Y. Acad.Sci.- V.148.- P. 284- 312.

102. Kostyo, L.J., Nutting D.K. Grows hormone and protein metabolism. In: Handbook of physiology.- 1979.- P. 187- 210.

103. Lavitrano, M., Camaioni A., Fazio V.M. et.al. Sperm cells as vectors for introducing foreign DNA into eggs: genetic transformation of mice. Cell 57. 1989.- P.717-723.

104. Mannino, R.J. and Gould-Fogerite S. Liposome mediated gene transfer // Bio Technigues 6.- 1988.- P.682-690.

105. Manon, K., Overbeek P. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1988, 85, p.l 165-1168.

106. Mansour, S.L. Gene targeting in mouse embryonic stem cells: introduction of specific alteration into the mammalian genome // Gene-Anal. Tech. 7,- 1990.- P.219- 227.

107. Mansour, S.L., Thomas K.R. and Capecchi M.R. Diruption of the proto- oncogene int -2 in the mouse embrio derived stem calls; a general strategy for targeting mutations to nonselectable genes // Nature 336.-1988.- P.348-352.

108. Mehtali, N., LeMeur V., Lathe R. The methylationfree ststus of a houskeeping transgene is lost at high copy number // Gene.- 1990.-V.91.-P. 179- 184.

109. Nazario, E. Petits on glands: Une histoire d'hormone? // Rev. Palais decouv.- 1996.- V.24.- N. 237.- P.53- 60

110. Okada, S., Kopchich J.J. Anti- diabetogenic effect of growth hormone antagonists //J. Cell. Biochem.- 1994.- P.171-178.

111. Palmiter, R.D., Brinster R.L. Germ- line transformation of mice // Ann. Rev. Genet.- 1986.- V.20.- P.465- 499.

112. Palmiter, R.D., Brinster R.L., Hammer R.E. et al. Dramatic growth of mice that develop from eggs microinjected with metallothionein-growth hormone fusion genes//Nature.- 1982.- V.306.-P.611-615.

113. Palmiter, R.D., Norstedt R.E., Gelinas R.E. et al. Metallothionein-human GH fusion genes stimulate growt of mice // Science.- 1983.- V.222.-P.809-814.

114. Panthier, J .J., Condamine H. and Jacob F. Inoculation of newborn SWR/J gemales nith an ecotropic murine llucemia virus can produce transgenic mice//Proc. Natl.Acad. Sci. 85.- 1988.-P.I 156-1160.

115. Pohja, M.S., Niinivaara F.P. Determination of the water holding of meat by constant pressure method.// Fleischwirtschaft/ 1957. - v. 9. - N 4 -p. 193.

116. Pursel, V.G. et al. II- th International Congress on Animal Reproduction and Artificial Insemination, Dublin, 1988.

117. Pursel, V.G., Bolt D.J., Mileer K. Expression and performance in transgenic pigs // J.Reprod. Fert. Suppl.- 1990.- V.40.- P.235-245

118. Pursel, V.G., Pincert C, Mileer K. et al. Genetic engineering of livestock //Science.-1989.- V.244.- P.1281-1288.

119. Pursel, V.G., Pinkert C, Rexroad C, Mileer K. Animal growth regulation // Et by D.K.Campion, C.J.Hausman, KJ.Martin. New York.-London. 1989.

120. Pursel, V.G., Rexroad C, Pincert C. et al. Progress on gene transfer in animals // Vet.Immunol. Immunopathol.- 1987.- V. 17.- P.303-312.

121. Pursel, V.G., Rexroad C. Status of research with transgenic farm animals //J. Anim.Sci,- 1993 .-V.71 .-P. 10-19.

122. Rexroad, C.E. Transgenic technology in animal agriculture // Animal Biotechnology.- 1992,-V.3.-N. l.-P. 1 -13.

123. Rexroad, C.E., Pursel V.G. Status of gene transfer in domestic animals

124. Proc. of 11th inter, congress on animal reproduction and artifical insemination. Dublin, 1988.-V.5.-P.28-35.

125. Saiki, R.K., Gelfand D.H., Stoffel S., et al. Primer- directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA- polymerase // Science. -1988.-V.239.- P.487- 491.

126. Saiki, R.K., Scharf S., Faloona F. et al. Enzymatic amplification of B-globulin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia// Science.- 1985.- V.230.- P. 1350- 1354.

127. Schoenenberger, C.F., Andres A.C., Groner B. et.al. Targeted c-mys gene expression in mammary glands of transgenic mice induces mammar у tumors with constitutive milk protein gene transcription//EMBO J.- 1988.7.- P. 169-175.

128. Sippel, A.E., Saueressing K, Winter D. et.al. Transgenic animals. N.Y.L: Academic Press Inc.- 1992.- P.3-26.

129. Taussing, M.J. /Т cell factor which can replace T cells in vivo.// Nature, 1974.-V.248.- №5445.- P.234-236.

130. Thompson, S., Clarke A.R., Row A.M. et. all. Germ line transmission and expression of corrected HPRT gene produced by gene targeting in embryonic stem cells//Cell 56.- 1989.-P.313-321.

131. Tyrreil, H.F., Brown A.C., Peynolds P.J. Effect of bovinesomatotropin on metabolism of lactating dairy cows: energy and nitrogenutilization as determined by respiration calorimetry // J.Nutr. 1988. -V.118.-N.8.-P.1024- 1030.

132. Vernon, R.G. Influence of somatotropin on metabolism // Use Somatotropin Livestock -Prod. Semin. Brussels.- 27-29 Sept.- 1988.-London.- 1989,- P.31-50.

133. Wagner, E .F. Of transferring genes into sprem cells and mice // EMBOJ.9.-1990.-P.3025-3052.

134. Wall, R.J., Hawk H.W., Nel Neil. Varking transgenic livestok: genetic engineering on a large seale // J.Cell. Biochem.- 1992.- 49.- N.2.- P.I 13-120.

135. Wall, R.J., Pursel V.G. et al. High- level synthesis of a heterologous milk protein in the mammary glands of transgenic swine // Proc. Natl. Acad. Science USA.-1991.- P. 1696- 1700.

136. Ward, K.A., Nancarrow CD. The genetic engineering of production traits in domestic animals // Experienta.-1991.- V.47.- P.913-922.

137. Wilmut, I., Archibald A.L. et al. Production pharmaceutical proteins in milk // Experientia.-1991.- V.47.- P.905- 912.

138. Wilmut, I., Archibald A.L., Harris S. et.al. Metods of gene transfer and their and their potential use to modify milk composition // Theriogenology.- 1990.- V.33.-N.l.-P. 113-123.