Сравнительное исследование антимикробных белков нейтрофилов собаки и человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Берлов, Михаил Николаевич

• Берлов, Михаил Николаевич
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Берлов, Михаил Николаевич

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Нейтрофил в защитных реакциях организма.

1.1.1. Пути активации нейтрофила.

1.1.2. Гранулярный аппарат нейтрофилов.

1.1.3. Респираторный взрыв.

1.1.4. Миграция активированных нейтрофилов.

1.1.5. Фагоцитоз.

1.2. Кислород-зависимые механизмы инактивации микробов нейтрофилами.

1.2.1. Активные формы кислорода.

1.2.2. МПО-система.

1.3. Кислород-независимые механизмы инактивации микробов нейтрофилами

1.3.1. Катионные антимикробные пептиды.

1.3.2. Лизоцим.

1.3.3. Серпроцидины.

1.3.4. Лактоферрин.

1.4. Кооперативные взаимодействия антимикробных белков нейтрофилов.

2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Получение биологического материала.

2.1.1. Получение экссудата.

2.1.2. Получение кишечного сока.

2.2. Выделение антимикробных белков из нейтрофилов экссудата собаки.

2.2.1. Экстракция катионных белков из целых лейкоцитарных клеток.

2.2.2. Ионообменная хроматография.

2.2.3. Гель-фильтрационная хроматография.

2.3. Электрофоретические методы.

2.3.1. Электрофорез в кислой буферной системе.

2.3.2. Электрофорез в присутствии додецилсульфата натрия.

2.4. Секвенирование М-концевого фрагмента белков.

2.5. Определение молекулярной массы белков.

Ь 2.6 Определение углеводного компонента в белках.

2.7. Спектрофотометрические исследования.

2.7.1. Определение степени чистоты миелопероксидазы.

2.7.2. Определение степени насыщения ЛФ железом.

2.7.3. Установление спектров поглощения ЛФ и МПО в видимой области

2.8. Изучение связывания ЛФ с железом.

2.8.1. Получение апоЛФ.

2.8.2. Получение холоЛФ.

2.8.3. Диссоциация комплекса ЛФ-железо.

2.9. Определение активности ферментов.

2.9.1. Определение пероксидазной активности.

2.9.2. Определение эстеразной активности эластазы.

2.9.3. Определение эстеразной активности катепсина О.

2.9.4. Определение активности лизоцима.

2.9.5. Ингибиторный анализ.

2.10. Иммунохимические исследования.

2.10.1. Получение антисывороток к белкам.

2.10.2. Выделение из сыворотки фракции белков, обогащенной ф иммуноглобулинами, методом высаливания.

2.10.3. Иммуноаффинная хроматография.

2.10.4. Конъюгация антител с пероксидазой хрена.

2.10.5. Твердофазный иммуноферментный анализ.

2.11. Определение антимикробной активности белков.

2.12. Статистическая обработка результатов.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Выделение антимикробных белков из нейтрофилов собаки.

3.2. Определение N-концевой аминокислотной последовательности белков.

3.3. Физико-химические свойства белков.

3.3.1. Молекулярная масса белков.

3.3.2. Определение углеводного компонента в белках.

3.3.3. Спектрофотометрические исследования.

3.3.4. Связывание ЛФ с железом.

3.4. Энзимологические исследования.

3.4.1. МПО.

3.4.2. Эластаза и катепсин G.

3.4.3. Лизоцим.

3.5. Иммунохимические исследования.

3.6. Изучение антимикробной активности белков.

3.6.1. Определение минимальной ингибирующей концентрации белков.

3.6.2. Изучение кооперативных взаимодействий белков.

3.6.3. Изучение ферментативной активности белков в присутствии других белков.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

4.1. Выделение антимикробных белков.

4.2. Свойства выделенных белков.

4.3. Иммунохимические исследования.

4.4. Антимикробная активность белков.

5. ВЫВОДЫ.П

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сравнительное исследование антимикробных белков нейтрофилов собаки и человека»

Актуальность проблемы

Выживание всех видов животных в среде, изобилующей потенциально патогенными микроорганизмами, стало возможным только благодаря формированию у них в процессе эволюции механизмов, обеспечивающих невосприимчивость к инфекционным болезням (иммунитет).

В настоящее время принято выделять системы врожденного и приобретенного (клонального) иммунитета. В работах прошлых лет использовали как синонимичные данным понятия неспецифического и специфического (или адаптивного) иммунитета, однако в последнее время эта терминология мало употребляема. Термин "приобретенный иммунитет" подразумевает формирование ("приобретение") в онтогенезе (в процессе соматической рекомбинации) генетических структур, отсутствовавших в половых клетках. Очевидно, что из двух рассматриваемых систем иммунитета, эволюционно более древней является система врожденного иммунитета. Также она первой появляется в онтогенезе и первой вступает в действие при проникновении инфекции в организм, поэтому о ней часто говорят как о первой линии защиты. Ряд эффекторных механизмов врожденного иммунитета были адаптированы в ходе эволюции системой приобретенного иммунитета.

Двумя основными способами защиты организма от инфекции являются поглощение микробных клеток путем фагоцитоза и выделение антимикробных веществ во внеклеточную среду организма, зараженную патогеном. У млекопитающих нейтрофилы (нейтрофильные гранулоциты, полиморфноядерные лейкоциты) способны выполнять функцию защиты организма обоими указанными способами. Нейтрофилы могут быть мобилизованы как системой врожденного, так и системой приобретенного иммунитета.

Теория, объясняющая морфофизиологические предпосылки формирования фагоцитарной функции клеток в эволюции, была разработана Мечниковым еще в позапрошлом веке (Мечников, 1892). Защитная функция фагоцитов возникла на основе способности простейших поглощать и инактивировать бактерии, используемые ими как объект питания. Таким образом, уже на заре развития животных перед ними стояла задача инактивации потенциально патогенных микроорганизмов, являющихся для них источником пластических веществ и энергии.

Помимо нейтрофилов, к профессиональным фагоцитам млекопитающих относятся моноциты и их тканевые формы - макрофаги, а также эозинофилы. Эти клетки объединены в единый функциональный тип благодаря наличию у них ряда общих структурно-метаболических свойств и стереотипности поведения в фагоцитарном процессе. Морфобиохимическая специализация фагоцитов заключается в наличии у них развитого гранулярного аппарата, являющегося депо физиологически активных веществ антибиотического действия. Среди фагоцитов именно нейтрофилы играют ключевую роль в защите организма от инфекции. Об их огромной роли свидетельствуют некоторые количественные данные. Общий вес нейтрофилов у одного человека составляет около 1,5 кг (Бшишак ег а!., 1995). В костном мозге 55-60% клеток являются предшественниками нейтрофилов (ВатЮп, 1999).

Функционирование нейтрофила в организме не исчерпывается лишь поглощением и умерщвлением микробной клетки, нейтрофил активно взаимодействует с другими компонентами иммунной системы и участвует в поддержании гомеостаза в самом широком смысле. Тем не менее, основное внимание исследователей привлекает именно микробоцидная функция нейтрофила, и особенно ее молекулярные основы. Изучение молекулярных механизмов микробоцидной функции нейтрофила представляет несомненный фундаментальный интерес и может быть полезно в прикладных целях, в частности в медицинской области.

Для понимания механизмов каких-либо явлений очень важную роль играют сравнительно-биохимческие исследования. Обнаруженное в таких исследованиях сходство позволяет делать вывод об универсальности тех или иных механизмов, и, следовательно, об их высокой функциональной значимости. Найденные различия, например, в структуре молекул, дают возможность судить о взаимосвязи структуры и функции, приводя таким образом к более глубокому пониманию механизмов. В лаборатории химии белка Санкт-Петербургского государственного университета уже на протяжении многих лет ведутся сравнительно-биохимические работы по изучению антимикробных белков и пептидов, являющихся компонентами гранулярного аппарата нейтрофилов.

Выбранный в данной работе объект исследования — нейтрофилы собаки — представляет интерес поскольку к настоящему времени ни один представитель отряда хищных не получил комплексную характеристику в отношении молекулярных факторов нейтрофилов, обеспечивающих защиту от инфекции. Между тем, представители этого отряда, в том числе и собака, являются традиционными объектами во многих областях биологических исследований, в первую очередь в физиологии. Поэтому изучение молекулярных основ иммунитета собаки представляется важной задачей. Гранулярный аппарат нейтрофилов млекопитающих содержит целый ряд белков, выполняющих антимикробную функцию -миелопероксидаза, лактоферрин, эластаза, катепсин G, лизоцим (Кокряков, 1999; Levy, 1996; Elsbach et al., 1999). У собаки из перечисленных белков детально охарактеризована только миелопероксидаза (Agner, 1958; Ehrenberg, Agner, 1958; Harrison et al., 1977).

Несмотря на то, что свойства указанных белков, в частности, антимикробное действие, хорошо изучены для белков человека и других млекопитающих, малоизученными остаются механизмы их совместного действия на микробы, которое имеет место в естественных условиях. Между тем, антимикробная активность белка

• может существенно возрастать в присутствии других белков. Изучение кооперативного действия антимикробных белков несомненно является актуальной проблемой, требующей повышенного внимания.

Цели и задачи исследования

Целью работы явилось проведение сравнительного исследования молекулярных факторов нейтрофилов собаки и человека, обеспечивающих защиту от инфекции. Для выполнения цели были поставлены следующие задачи:

1. Совершенствование методической базы, обеспечивающей проведение сравнительных исследований антимикробных белков нейтрофилов разных видов животных, включая методы выделения белков, характеристики основных физико-химических и энзиматических (для ферментов) свойств, исследования антимикробной активности белков.

2. Выделение, очистка и характеристика свойств миелопероксидазы, лактоферрина, эластазы, катепсина G и лизоцима из нейтрофилов собаки и человека.

3. Разработка тест-систем для количественного определения миелопероксидазы и лактоферрина собаки методом иммуноферментного анализа, измерение содержания указанных белков в биологических жидкостях собаки.

4. Изучение антимикробных свойств анализируемых белков, включая их кооперативное действие на бактерии.

Научная новизна работы

В настоящей работе предложен ряд методических подходов для проведения сравнительных исследований антимикробных белков нейтрофилов. В частности,

• впервые описано одновременное выделение пяти белков (МПО, ЛФ, эластаза, катепсин G, лизоцим) с использованием катионного детергента ЦТАБ в качестве экстрагирующего агента. Предложено использование ресазурина в опытах по определению антимикробной активности кооперативных систем белков.

Впервые выделен и охарактеризован по ряду физико-химических свойств ЛФ из нейтрофилов собаки.

Показано различие эластазы собаки и человека по константе Михаэлиса в реакции гидролиза синтетического субстрата (NBA).

Впервые разработаны системы иммуноферментного анализа для определения МПО и ЛФ собаки. Установлено наличие ЛФ в молоке собаки.

Показан сложный немонотонный характер зависимости антимикробной активности миелопероксидазной системы от концентрации МПО.

Впервые определены некоторые сочетания белков, проявляющие синергический эффект при совместном действии на бактерии in vitro. Показан синергизм действия миелопероксидазной системы и аполактоферрина по отношению к грамотрицательным бактериям, а также хололактоферрина и лизоцима. Впервые установлено, что МПО, помимо хорошо изученного ферментативного механизма, может проявлять свою антимикробную активность с помощью неферментативному механизму, вступая в кооперативные взаимодействия с катепсином G и лизоцимом.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Антимикробные белки нейтрофилов собаки (МПО, ЛФ, эластаза, катепсин G, лизоцим) сходны по основным физико-химическим и энзиматическим свойствам с гомологичными белками человека. Эластаза собаки отличается от эластазы человека по константе Михаэлиса в реакции гидролиза синтетического субстрата (NBA).

2. МПО, ЛФ, эластаза, катепсин G, лизоцим собаки и человека сходны по своим антимикробным свойствам.

3. При совместном действии на бактерии антимикробные белки нейтрофилов вступают в кооперативные взаимодействия, которые в ряде случаев носят синергический характер. Наблюдаемые эффекты в основном сходны для белков собаки и человека, за исключением эластазы собаки, которая проявляет синергические эффекты при кооперации с катепсином G и лизоцимом, в отличие от эластазы человека.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Берлов, Михаил Николаевич

117 ВЫВОДЫ

1. Усовершенствована методическая база, позволяющая проводить комплексные сравнительные исследования антимикробных белков нейтрофилов млекопитающих разных видов, включая выделение белков, характеристику их основных физико-химических и энзиматических свойств, изучение антимикробной активности.

2. Получены высокоочищенные препараты миелопероксидазы, лактоферрина, эластазы, катепсина G и лизоцима нейтрофилов собаки. Секвенирование N-концевой аминокислотной последовательности выделенных белков подтвердило их принадлежность к соответствующим гомологическим семействам.

3. Определены основные физико-химические и энзиматические свойства полученных белков (молекулярная масса, содержание углеводов, спектры поглощения для миелопероксидазы и лактоферрина, зависимость ферментативной активности от рН и концентрации субстратов). Установлено, что миелопероксидаза, лактоферрин, эластаза, катепсин G и лизоцим нейтрофилов собаки и человека в основном сходны по указанным свойствам. Вместе с тем, эластаза собаки отличается от эластазы человека по значению константы Михаэлиса в реакции гидролиза синтетического субстрата NBA. Км эластазы собаки равна 0,10 мМ, а Км эластазы человека - 0,35 мМ.

4. Созданы высокочувствительные и специфичные тест-системы для определения миелопероксидазы и лактоферрина собаки методом твердофазного иммуноферментного анализа. Определено содержание миелопероксидазы и лактоферрина в различных биологических жидкостях собаки (сыворотке крови, молоке, кишечном соке).

5. Исследована антимикробная активность миелопероксидазы, лактоферрина, эластазы, катепсина G и лизоцима собаки и человека против Е. coli и L. monocytogenes. Определены минимальные ингибирующие концентрации белков. Антимикробные свойства миелопероксидазы, лактоферрина, эластазы, катепсина G и лизоцима сходны для белков собаки и человека.

6. Установлен сложный характер зависимости антимикробной активности системы, состоящей из миелопероксидазы, Н2О2 и хлорида, от концентрации фермента. При некоторых концентрациях Н2О2 существует оптимум концентрации миелопероксидазы, при ее увеличении активность системы снижается. Такая зависимость наблюдается как в случае миелопероксидазы собаки, так и в случае миелопероксидазы человека.

Обнаружены синергические эффекты при совместном действии на микробы in vitro для следующих сочетаний белков: миелопероксидазная система и аполактоферрин, миелопероксидаза и лизоцим, аполактоферрин и лизоцим, хололактоферрин и лизоцим, эластаза и катепсин G, эластаза и лизоцим (против Е. coli) и те же сочетания, а также миелопероксидазная система и катепсин G, миелопероксидаза и катепсин G (против L. monocytogenes) для белков собаки. Для белков человека не проявляли синергического эффекта сочетания эластаза и катепсин G, эластаза и лизоцим против обоих микробов. Установлено, что обнаруженные синергические эффекты не связаны с повышением ферментативной активности белков.

119

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Берлов, Михаил Николаевич, 2004 год

1. Ашмарин И. П., Кокряков В. Н., Лызлова С. Н., Раменская Н. П. Взаимодействие катионных белков гранул и миелопероксидазы лейкоцитов // Вопр. мед. химии, 1977, № 4, с. 534-537.

2. Борисов А. И. Выделение, идентификация и сравнительное биохимическое исследование лейкоцитарных пероксидаз млекопитающих // Автореф. дисс. на соискание ученой степени канд. биол. наук. Л., 1982.

3. Канышкова Т. Г., Бунева В. Н., Невинский Г. А. Лактоферрин и его биологические функции // Биохимия, 2001, т. 66, 1, с. 5-13.

4. Карпенко Л. Ю. Иммунобиохимические характеристики организма собак разных возрастов и при гломерулонефрите // Автореф. дисс. на соискание ученой степени докт. биол. наук. М., 2002.

5. Кокряков В. Н., Ротова Г. М., Мазинг Ю. А. Морфобиохимические основы функциональной активности нейтрофилов млекопитающих // Морфофункциональные основы неспецифической резистентности и демиелинизирующих заболеваний. Л., 1981, с. 31-44.

6. Кокряков В. Н., Борисов А. И., Слепенков С. В., Лызлова С. Н. Сранительное исследование некоторых физико-химических свойств миелопероксидаз свиньи и коровы // Биохимия, 1982, т. 47,1, с. 100-107.

7. Кокряков В. Н., Алешина Г. М., Слепенков С. В., Яковлева М. Ф., Пигаревский В. Е. О степени структурной гомологии лактоферринов молока и нейтрофильных гранулоцитов//Биохимия, 1988, т. 53, И, с. 1837-1843.

8. Кокряков В. Н. Физико-химические и функциональные свойства антимикробных белков нейтофилов. Автореф. дисс. на соискание ученой степени докт. биол. наук. СПб, 1995.

9. Кокряков В. Н. Биология антибиотиков животного происхождения. СПб: Наука, 1999, 162 с.

10. Краева Jl. Н. Эластаза и катепсин G из нейтрофилов свиньи: выделение, очистка, физико-химические и бактерицидные свойства. Автореф. дисс. на соискание ученой степени канд. биол. наук. JL, 1989.

11. Краева Jl. Н., Кокряков В. Н., Чесноков И. Н, Яковлева М. Ф., Лызлова С. Н. Некоторые свойства катепсина G и эластазы из нейтрофилов периферической крови свиньи // Биохимия, 1988, т. 53, с. 655-662.

12. Кудряшов А. А. Патологоанатомическая диагностика инфекционных болезней кошек и собак. СПб, 2004,206 с.

13. Кэтти Ф., Райкундалиа Ч. Антитела. Методы. М.: Мир, 1991, 289 с.

14. Маянский А. Н., Маянский Д. Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге, 2ое изд. Новосибирск: Наука, 1989, 344 с.

15. Мечников И.И. Лекции о сравнительной патологии воспаления. СПб: Издание К. Л. Риккера, 1892.

16. Нешкова Е. А., Доценко В. Л., Ларионова Н. И., Яровая Г. А. Эффективный одноэтапный метод получения эластазы и катепсина G из лейкоцитов человека на гордокс-сефарозе//Биохимия, 1993, т. 58, с. 1886-1892.

17. Остерман Л. А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. М.: Наука, 1985. 536 с.

18. Семенов Д. В., Канышкова Т. Г., Акимжанов А. М., Бунева В. Н., Невинский Г. А. Взаимодействие лактоферрина молока человека с АТФ // Биохимия, 1998, т. 63, с. 11071115.

19. Сперанская Е. Н. Методики операций на собаках и проведения хронических опытов в физиологии. М.-Л.: Изд-во АН СССР, 1953. 240 с.

20. Янковский О. Ю., Раменская Н. П., Кокряков В. Н., Слепенков С. В., Петрова Т. А., Лызлова С. Н., Пигаревский В. Е. Метод выделения миелопероксидазы из полиморфноядерных лейкоцитов кролика и коровы // Вестн. ЛГУ, 1978, N 15, вып. 3, с. 99-103.

21. Янковский О. Ю., Довнар Т. Е., Ткаченко А. А. К механизму антимикробного действия миелопероксидазы. Роль адсорбции фермента на поверхности клетки-мишени // Журн. Микробиол., 1981, N6, с. 58-61.

22. Abraham Е., Gyetko М. R., Kuhn К., Arcaroli J., Strassheim D., Park J. S., Shetty S., Idell S. Urokinase-type plasminogen activator potentiates lipopolysaccharide-induced neutrophil activation // J. Immunol., 2003, vol. 170, p. 5644-5651.

23. Agner K. Verdoperoxidase. A ferment isolated from leukocytes // Acta Physiol. Scand., 1941, vol.2, p. 1-62.

24. Agner K. Crystalline myeloperoxidase // Acta Chem. Scand., 1958, vol. 12, p. 89-94.

25. Agner K. Studies on myeloperoxidase activity: I. Spectrophotometry of the MPO-H2O2 compound // Acta Chem. Scand., 1963, vol. 17, p. 332-338.

26. Agner K. Biological effects of hypochlorous acid formed by "MIIO" peroxidation in the presence of chloride ions // Structure and function of oxidation-reduction enzymes / Ed. A. A. Akeson, A. Ehrenberg. Oxford: Pergamon Press, Inc, 1972, p. 329-335.

27. Aisen P., Listowsky I. Iron transport and storage proteins // Ann. Rev. Biochem., vol. 49, 1980, p. 357-393.

28. H 30. Allen R. C. Halide dependence of the myeloperoxidase-mediated antimicrobial system of thepolymorphonuclear leukocyte in the phenomenon of electronic excitation // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1975, vol. 63,3, p. 675-683.

29. Andersen M. R., Atkins C. L., Eyre H. J. Intact form of myeloperoxidase from normal human neutrophils // Arch. Biochem. Biophys, 1982, vol. 214, 1, p. 273-283.

30. Anderson B. F., Baker H. M., Norris G. E., Rice D. W., Baker E. N. Structure of human lactoferrin: crystallographic structure analysis and refinement at 2.8 A resolution // J. Mol. Biol., 1989, vol. 209, p. 711-734.

31. Anderson C. L., Shen L., Eicher D. M., Wewers M. D., Gill J. K. Phagacytosis mediated by three distinct Fey receptor classes on human leukocytes // J. Exp. Med., 1990, vol. 171, p. 1333-1345.

32. Arnhold J., Furtmiiller P. G., Obinger C. Redox properties of myeloperoxidase // Redox Report, 2003, vol. 8, 5, p. 179-186.

33. Arnold R. R., Cole M. F., McGhee J. R. A bactericidal effect for human lactoferrin // Science, 1977, vol. 197, p. 263-265.

34. Arnold R. R., Brewer M., Gauthier J. J. Bactericidal activity of human lactoferrin. Sensitivity of a variety of microorganisms // Infect. Immun., 1980, vol. 28, 3, p. 893-898.

35. Arnold R. R:, Russell J. S., Champion W. J., Gauthier J. J. Bactericidal activity of human lactoferrin: influence of physical condition and metabolic state of the target microorganism // Infect. Immun., 1981, vol. 32, 2, p. 655-660.

36. Axelsson L., Bergenfeldt M., Bjork P., Olsson R., Ohlsson K. Release of immunoreactive canine leukocyte elastase normally and in endotoxin and pancreatitic shock // Scand. J. Clin. Lab. Invest., 1990, vol. 50, 1, p. 35-42.

37. Azari P., Baugh R. F. A simple and rapid procedure for preparation of large quantities of pure ovotransferrin//Arch. Biochem. Biophys, 1967, vol. 118, 1, p. 138-144.

38. Babior B. M., Kipnes R. S., Curnutte J. T. Biological defence mechanisms: the production by leukocytes of superoxide, a potential bactericidal agent // J. Clin. Invest., 1973, vol. 52, p. 741-744.

39. Bainton D. F., Ullyot J. L., Farquhar H. The development of neutrophilic polymorphonuclear leukocytes in human bone marrow. Origin and content of azurophil and specific granules // J. Exp. Med., 1971, vol. 134, 4, p. 907-934.

40. Bainton D. F. Developmental biology of neutrophils and eosinophils // Inflammation: Basic principles and clinical correlates, 3rd ed. / Eds. Gallin J. I., Shydermann R. Lippincott Philadelphia: Williams & Wilkins, 1999, p. 13-34.

41. Baker H. M., Anderson B. F., Kidd R. D., Shewry S. C., Baker E. N. Lactoferrin three-dimensional structure: a framework for interpreting function // Lactoferrin: Structure, Function and Applications, 2000, p. 3-15.

42. Baldridge C.W., Gerard W. The extra respiration of phagocytosis // Amer. J. Physiol., 1933, vol. 103,6, p. 235-236.

43. Banfi E., Scialino G., Monti-Bragadin C. Development of a microdilution method to evaluate Mycobacterium tuberculosis drug susceptibility // J. Antimicrob. Chemother., 2003, vol. 52, 5, p. 796-800.

44. Bannister J. V., Bannister W. H., Hill H. A. O, Thornally P. J. Enhanced production of hydroxyl radicals by the xanthine-xanthine oxidase reaction in the presence of lactoferrin // Biochim. Biophys. Acta., 1982, vol. 715, 1, p. 116-120.

45. Bauer S., Kirschning C. J., Hacker H., Redecke V., Hausmann S., Akira S., Wagner H., Lipford G. B. Human TLR9 confers responsiveness to bacterial DNA via species-specific CpG motif recognition // Proc. Natl Acad. Sci. USA, 2001, vol. 98, p. 9237-9242.

46. Baugh R., Travis J. Human leukocyte granule elastase: rapid isolation and characterization // Biochemistry, 1976, vol. 15, p. 836-841.

47. Bellamy W., Takase M., Yamauchi K., Wakabayashi H., Kawase K., Tomita M. Identification of the bactericidal domain of lactoferrin // Biochim. Biophys. Acta, 1992, vol. 1121, p. 130-136.

48. Bennet R. M., Davis J., Campbell S., Portnoff S. Lactoferrin binds to cell membrane DNA: association of surface DNA with an enriched population of B cells and monocytes // J. Clin. Invest., 1983, vol. 71, p. 611-618.

49. Berton G. Degranulation // Inflammation: Basic principles and clinical correlates, 3rd ed. / Eds. Gallin J. I., Shydermann R. Lippincott Philadelphia: Williams & Wilkins, 1999, p. 703719.

50. Bhide S. F., Khandapkar S. V., Talageri V. R., Palekar M. S., Sirsat S. M. Effect of Iysozyme on sialic acid levels of normal and malignant cells grown in vitro // Indian J. Exp. Bio., 1977, vol. 15, p. 815-820.

51. Bjork P., Axcelsson L., Ohlsson K. Release of dog polymorphonuclear leukocyte cathepsin G normally and in endotoxin and pancreatitic shock // Biol. Chem. Hoppe-Seyler, 1991, vol. 372, 6, p. 419-426.

52. Blake C. C. F., Mair G. A., North A. C. T., Phillips D. C., Sarma V. R. On the conformation of the hen egg-white Iysozyme molecule // Proc. Roy. Soc. Lond. Series B: Biol. Sci., 1967a, vol. 167, 9, p. 365-377.

53. Blake C. C. F., Johnson L. N., Mair G. A., North A. C. T., Phillips D. C., Sarma V. R. Crystallographic studies of the activity of hen egg-white Iysozyme // Proc. Roy. Soc. Lond. Series B: Biol. Sci., 1967b, vol. 167, 9, p. 378-388.

54. Blondin J., Janoff A. The role of lysosomal elastase in the digestion of Escherichia coli proteins by human polymorphonuclear leukocytes // J. Clin. Invest., 1976, vol. 58, 6, p. 971979.

55. Boman H. G. Peptide antibiotics and their role in innate immunity // Annu. Rev. Immunol., 1995, vol. 13, p. 61-92.

56. Borregaard B. N., Cowland J. B. Granules of the human neutrophilic polymorphonuclear leukocyte //Blood, 1997, vol. 89, 10, p. 3503-3521.

57. Bos A., Wever R., Roos D. Characterization and quantification of the peroxidase in human monocytes // Biochim. Biophys. Acta, 1978, vol. 525, p. 37-44.

58. Britigan B. E., Lewis T. S., Waldschmidt M., McCormic M. L., Krieg A. M. Lactoferrin binds CpG-containing oligonucleotides and inhibits their immunostimulatory effects on human B cells //J. Immunol., 2001, vol.167, p. 2921-2928.

59. Broxmeyer H. E., Smithyman A., Eger R. R., Meyers P. A., de Sousa M. Identification of lactoferrin as the granulocyte-derived inhibitor of colony-stimulating activity production // J. Exp. Med., 1978, vol. 148, 4, p. 1052-1067.

60. Burner U., Jantschko W., Obinger C. Kinetics of oxidation of aliphatic and aromatic thiols by myeloperoxidase compounds I and II // FEBS Lett., 1999, vol. 443, p. 290-296.

61. O) 63. Cardell L.-O., Gusti C. A., Takeyama K., Stjarne P., Nadel J. A. LTB4-induced nasal glandserous cell secretion mediated by neutrophil elastase // Am. J. Respir. Crit. Care Med., 1999, vol. 160, 2, p. 411-414.

62. Cech P., Lehrer R. I. Phagolysosomal pH of human neutrophils // Blood, 1984, vol. 63, p. 8895.

63. Chang K. S., Trujillo J. M., Cook R. G., Stass S. A. Human myeloperoxidase gene: molecular cloning and expression in leukemic cells // Blood, 1986, vol. 68, p. 1411-1414.

64. Claesson R., Karlsson M., Zhang Y., Carlsson J. Relative role of chloramines, hypochlorous acid, and proteases in the activation of human polymorphonuclear leukocyte collagenase // Journal of Leukocyte Biology, 1996, vol. 60, 5, p. 598-602.

65. Clark R. A., Klebanoff S. J. Myeloperoxidase-mediated platelet release reaction // J. Clin. Invest., 1979, vol. 63, p. 177-183.

66. Cohn Z. A., Hirsch J. G. The isolation and properties of the specific cytoplasmic granules of rabbit polymorphonuclear leucocytes // J. Exp. Med., 1960, vol. 112, 6, p. 983-1005.

67. Cowland J. B., Johnsen A. H., Borregaard N. hCAP, a cathelin/probactenecin-like protein of human neutrophil specific granules // FEBS Lett., 1995, vol. 368, p. 173-176.

68. De Lillo A., Tejerina J. M., Fierro J. F. Interaction of calmodulin with lactoferrin // FEBS Lett., 1992, vol. 298, p. 195-198.

69. Delshammar M., Ohlsson K. Isolation and partial characterization of elastase from dog granulocytes // Eur. J. Biochem., 1976, vol. 69, 1, p. 125-131.

70. Desser R. K., Himmelhoch S. R., Evans W. H., Januska M., Mage M., Shelton E. Guinea pig heterophil and eosinophil peroxidase // Arch. Biochem. Biophys., 1972, vol. 148, p. 452-465.

71. During K., Porsch P., Mahn A., Brinkmann O., Gieffers W. The non-enzymatic microbicidal activity of lysozymes // FEBS Lett., 1999, vol. 449, p. 93-100.

72. Ehrenberg A., Agner K. The molecular weight of myeloperoxidase // Acta Chem. Scand., 1958, vol. 12, 1, p. 95-100.

73. Ellison R. T., Giehl T. J., LaForce F. M. Damage to the outer membrane of enteric Gramnegative bacteria by lactoferrin and transferrin // Infect. Immun., 1988, vol. 56, p. 2774-2781.

74. Ellison R. T., Giehl T. J, Killing of Gram-negative bacteria by lactoferrin and lysozyme // J. Clin. Invest., 1991, vol. 88, p. 1080-1091.

75. Elrod K. C., Moore W. R:, Abraham W. M., Tanaka R. D. Lactoferrin, a potent tryptase inhibiotr, abolishes late-phase airway responses in allergic sheep // Amer. J. Respir. Crit. Care Med., 1997, vol. 156, p. 37-381.

76. Elsbach P., Weiss J. Prospects for the use of recombinant BPI in the treatment of Gramnegative bacterial infections // Infect. Agents Dis., 1995, vol. 4, p. 102-109.

77. Elsbach P., Weiss J., Levy O. Oxygen-independent antimicrobial systems of phagocytes // Inflammation: Basic principles and clinical correlates, 3rd ed. / Eds. Gallin J. I., Shydermann R. Lippincott Philadelphia: Williams & Wilkins, 1999, p. 801-817

78. Ermolieff J., Duranton J., Petitou M., Bieth J. G. Heparin accelerates the inhibition of cathepsin G by mucus proteinase inhibitor: potent effect of O-butyrylated heparin // Biochemical Journal, 1998, vol. 330, 3, p. 1369-1374.

79. Feinstein G., Janoff A. Rapid method of purification of human granulocyte cationic neutral proteases: purification and further characterization of human granulocyte elastase // Biochim. Biophys. Acta, 1975, vol. 403, p. 493-505.

80. Fenton H. J. H. Oxidation of tartaric acid in the presence of iron // J. Chem. Soc. Trans., * 1894, vol. 65, p. 899-910.

81. Fleming A. On a remarkable bacteriolytic ferment found in tissues and secretions // Proc. Roy Soc. Lond., 1922, vol. 93, p. 306-317.

82. Frank R. W., Gennaro R., Schneider K., Przybylski M., Romeo D. Amino acid sequences of two proline-rich bactenecins // J. Biol. Chem., 1990, vol. 265,31, p. 18871-18874.

83. Fraser I. P., Ezekowitz R. A. B. Receptors for microbial products: carbohydrates // Inflammation: Basic principles and clinical correlates, 3rd ed. / Eds. Gallin J. I., Shydermann R. Lippincott Philadelphia: Williams & Wilkins, 1999, p. 515-522.

84. Frohlich D., Eiber R. M, Jochum M., Billing A. Perioperative pattern of peritoneal interleukin 8, tumour necrosis factor-alpha, and granulocyte elastase release in human secondary peritonitis // Cytokine, 1997, vol. 9, 4, p. 288-292.

85. Furtmiiller P. G., Burner U., Jantschko W., Regelsberger G., Obinger C. Two-electron reduction and one-electron oxidation of organic hydroperoxides by human myeloperoxidase // FEBS Lett., 2000, vol. 484, p. 139-143.

86. Gabay J. E., Heiple J. M., Cohn Z. A., Nathan C. F. Subcellular location and properties of bactericidal factors from human neutrophils // J. Exp. Med., 1986, vol. 164, p. 4107-1421.

87. Gabay J. E., Almeida R. P. Antibiotic peptides and serine protease homologs in human polymorphonuclear leukocytes: defensins and azurocidin // Curr. Opin. Immunol., 1993, vol. 5, 1, p. 97-102.

88. Gahr M., Speer C. P., Dameran B., Sawatzki G. Influence of lactoferrin on the function of human polymorphonuclear leukocytes and monocytes // J. Leukocyte Biol., 1991, vol. 49, 5, p. 427-433.

89. Ganz T., Selsted M. E., Szklarek D., Harwig S. S., Daher K., Bainton D. F., Lehrer R. I. Defensins. Natural peptide antibiotics of human neutrophils // J.Clin.Invest., 1985, vol. 76, p. 1427-1435.

90. Ganz T., Gabayan V., Liao H. I., Liu L., Oren A., Graf T., Cole A. M. Increased inflammation in lysozyme M-deficient mice in response to Micrococcus luteus and its peptidoglycan // Blood, 2003, vol. 101, p. 2388.

91. Garcia R., Gusmani L., Murgia R., Guarnaccia C., Cinco M., Rottini G. Elastase is the only human neutrophil granule protein that alone is responsible for in vitro killing of Borrelia burgdorferi // Infection & Immunity., 1998, vol. 6,4, p. 1408-1412.

92. Garre C., Bianchi-Scarra G., Sirito M., Musso M., Ravazzolo R. Lactoferrin binding sites and nuclear localization in K562(S) cells // J. Cell Physiol., 1992, vol. 153, p. 477-482.

93. Gebicki J. M., Bielski B. H. J. Comparison of the capacities of the superoxide radicals to initiate chain oxidation of linoleic acid // J. Am. Chem. Soc., 1981, vol. 103, p. 7020-7022.

94. Gilbert S. J., Wotton P. R., Tarlton J. F., Duance V. C., Bailey A. J. Increased expression of promatrix metalloproteinase-9 and neutrophil elastase in canine dilated cardiomyopathy // Cardiovascular Res., 1997, vol. 34, p. 377-383.

95. Ginsburg I. The role of bacteriolysis in the pathopisiology of inflammation, infection and post-infectious sequelae // APMIS, 2002, vol. 110, p. 753-770.

96. Eds. Gallin J. I., Shydermann R. Lippincott Philadelphia: Williams & Wilkins, 1999, p. 681701.

97. Grobler J. A., Rao K. P., Pervaiz S., Brew K. Sequences of two highly divergent canine lysozymes: Implications for the evolutionary origins of the lysozyme/a-lactalbumin superfamily // Arch. Biochem. Biophys., 1994, vol. 313, p. 360-366.

98. Haber F., Weiss J. The catalytic decomposition of hydrogen peroxide by iron salts // Proc. Roy. Soc. Lond., 1934, vol. A147, p. 332-351.

99. Hailman E., Vasselon T., Kelley M. Stimulation of macrophages and neutrophils by complexes of lipopolysaccharide and soluble CD14 // J. Immunol., 1994, vol. 56, p. 43844390.

100. Harrison J. E., Pabalan S., Schultz J. The subunit structure of crystalline canine myeloperoxidase // J. Biol. Chem., 1977, vol. 493, p. 247-259.

101. Harwig S. S. L., Kokryakov V. N., Swiderek K. M„ Aleshina G. M., Zhao Ch., Lehrer R. I. Prophenin-1, an exceptionally proline-rich antimicrobial peptide from porcine leukocytes // FEBS Lett., 1995, vol. 362, l,p. 65-69.

102. Havemann K., Gramse M. Physiology and pathophysiology of neutral proteinases of humangranulocytes // Proteases: potent role in health and desease. Int. Symp. Wursburg., 1984, p. 1»20.

103. Haversen L., Ohlsson B. G., Hahn-Zoric M., Hanson L. A., Mattsby-Baltzer I. Lactoferrin down-regulates the LPS-induced cytokine production in monocytic cells via NF-kappaB // Cell Immunol., 2002, vol. 220, p. 83-95.

104. Hayashi F., Smith K. D., Ozinsky A., Hawn T. R., Yi E. C., Goodlett D. R., Eng J. K., Akira S., Underhill D. M., Aderem A. The innate immune response to bacterial flagellin is mediated by Toll-like receptor 5 // Nature, 2001,vol. 410, p. 1099-1103.

105. Hayashi F., Means T. K., Luster A. D. Toll-like receptors stimulate human neutrophil function// Blood, 2003, vol. 102, p. 2660-2669.

106. He J., Furmanski p. Sequence specificity and transcriptional activation in the binding of lactoferrin to DNA//Nature, 1995, vol. 373, p.721-724.

107. Heinecke J. W., Li W., Francis G. A., Goldstein J. A. Tyrosyl radical generated by myeloperoxidase catalyzes the oxidative cross-linking of proteins // J. Clin. Invest., 1993, vol. 91, p. 2866-2872.

108. Hekman A. Association of lactoferrin with other proteins, as demonstrated by changes in electrophoretic mobility// Biochim. Biophys. Acta, 1971, vol. 251, p. 380-387.

109. Hill C. P., Yee J., Selsted M. E., Eisenberg D. Crystal structure of defensin HNP-3, an amphiphilic dimer: mechanisms of membrane permeabilization // Science, 1991, vol 251, p. 1481-1485.

110. Hoffman J. A. Innate immunity of insects // Curr. Opin. Immunol., 1995, vol. 7, p. 4-10.

111. Holtje J.-V. Bacterial lysozymes // Lysozymes: Model enzymes in biochemistry and biology / ed. by P. Jolles. Basel; Boston; Berlin: Birkhauser, 1996a, p. 65-74.

112. Holtje J.-V. Lysozyme substrates // Lysozymes: Model enzymes in biochemistry and. biology / ed. by P. Jolles. Basel; Boston; Berlin: Birkhauser, 1996b, p. 105-110.

113. Hornbeck J. Antibody detection and preparation // Current protocols in immunology / ed. by Coligan J. E., Kruisbeek A. M., Margulies D. H., Shevach E. M., Strober W., 1992.

114. Hummel B. C. W. A modified spectrophotometry determination of chymotrypsin, trypsin and trombin // Canadian J. Biochem. Physiol, 1959, vol. 37, p. 1393-1399.

115. Ibrahim H. R. On the novel catalytically-independent antimicrobial function of hen egg-white lysozyme: a conformation-dependent activity // Nahrung, 1998, vol. 42, p. 187-193.

116. Ibrahim H. R., Matsuzaki T., Aoki T. Genetic evidence that antibacterial activity of lysozyme is independent of its catalytic function // FEBS Lett., 2001a, vol. 506, 1, p. 27-32.

117. Ikeda K., Sannoh T., Kawasaki N., Kawasaki T., Yamashina I. Serum lektin with known structure activates complement through the classical pathway // J. Biol. Chem., 1987, vol. 262, p. 7451-7454.

118. Imoto T. Engineering of lysozyme // Lysozymes: Model enzymes in biochemistry and biology / ed. by P. Jolles. Basel; Boston; Berlin: Birkhauser, 1996 , p. 163-181.

119. Irwin D. M., Yu M., Wen Y. Isolation and characterization of vertebrate lysozyme genes // Lysozymes: Model enzymes in biochemistry and biology / ed. by P. Jolles. Basel; Boston; Berlin: Birkhauser, 1996 , p. 225-241.

120. Isberg R. R., Leong J. M. Multiple pi chain integrins are receptors for invasin, a protein that promotes bacterial penetration into mammalian cells // Cell, 1990, vol. 60, p. 861-871.

121. Ito Y., Hirashima M., Yamada H., Imoto T. Colonic lysozymes of rabbit (Japanese White): Recent divergence and functional conversion // J. Biochem., 1994, vol. 116, p. 1346-1353.

122. Iyer G. Y. N., Islam D. M. F., Quastel J. H. Biochemical aspects of phagocytosis // Nature, 1961, vol. 192, p. 535-541.

123. Iyer S., Lonnerdal B. Lactoferrin, lactoferrin receptors and iron metabolism // Eur. J. Clin. m Nutrition, 1993, vol. 47, p. 232-241.

124. Jacobs A. A., Lew J. E., Paul B. B Mycoplasmacidal activity of peroxidase-F^Ch-halide systems // Infect. Immun., 1972, vol. 5, 1, p. 127-131.

125. Janeway C. A. J. The immune system evolved to discriminate infectious nonself from noninfectious self//Immunol. Today, 1992, vol. 13, p. 11-16.

126. Jenne D. E. Structure of the azurocidin, proteinase 3, and neutrophil elastase genes. Implications for inflammation and vasculitis // American Journal of Respiratory & Critical Care Medicine, 1994, vol. 150, 6, p. 147-154.

127. Jensen M. S., Bainton D. F. Temporal changes in pH within the phagocytic vacuole of the polymorphonuclear leukocyte//J. Cell Biol., 1973, vol. 56, p. 379-388.

128. Johnson U., Ohlsson K., Olsson I. Effects of granulocyte neutral proteases on complement components // Scand. J. Immunol., 1976, vol. 5, p. 421-435.

129. Kanyshkova T. G., Semenov D. V., Buneva V. N., Nevinsky G. A. Human milk lactoferrin binds two DNA molecules with different affinities // FEBS Lett., 1999, vol. 451, p. 235-237.

130. Karplus M., Post C. B. Simulations of lysozyme: Internal motions and the reaction mechanism // Lysozymes: Model enzymes in biochemistry and biology / ed. by P. Jolles. -Basel; Boston; Berlin: Birkhauser, 1996, p. 111-141.

131. Katen L. J., Aprikyan A. G., Dale D. C., Osborne W. R. A. Cloning and sequencing of the canine neutrophil elastase cDNA // DNA Seq., 2002, vol. 13,4, p. 221-223.

132. Kettle A. J., Winterbourn C. C. A kinetic analysis of the catalase activity of myeloperoxidase // Biochemistry, 2001, vol. 40, p. 10204-10212.

133. Khan A. U. Activated oxygen: singlet molecular oxygen and superoxide anion // Photochem Photobiol., 1978, vol. 28, p. 615-627.

134. Klebanoff S. J., Luebke R. G. The antilactobacillus system of saliva. Role of salivary peroxidase // Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1965, vol. 118, p. 483-486.

135. Klebanoff S.J. Iodination of bacteria: a bactericidal mechanism // J. Exp. Med., 1967, vol. 126, p. 1063-1078.

136. Klebanoff S. J., Clark R A. The neutrophil: function and clinical disorder. Amsterdam: North-Holland, 1978.

137. Klebanoff S. J. Myeloperoxidase: occurrence and biological function // Peroxidases in chemistry and biology / Eds. Everse J., Everse K. E., Grisham M. B. Boca Raton, FL: CRC Press., 1991, p. 1-35.

138. Klebanoff S. J. Oxygen metabolites from phagocytes // Inflammation: Basic principles and m clinical correlates, 3rd ed. / Eds. Gallin J. I., Shydermann R. Lippincott Philadelphia: Williams

139. Wilkins, 1999, p. 721-768.

140. Klickstein L. B., Kaempfer C. E., Weintraub B. U. The granulocyte angiotensin system: angiotensin 1 converting activity of cathepsin G // J. Biol. Chem., 1982, vol. 257, p. 15041506.

141. Kokoshis P.L., Williams D.L., Cook J.A., Di Luzio N.R. Increased resistance to Staphylococcus aureus infection and enhancement in serum lysozyme activity by glucan // Science, 1978, vol. 199, p. 1340-1342.

142. Lehrer R. I. Antifungal effects of peroxidase systems // J. Bacterid., 1969, vol. 99, 2, p. 361-365.

143. Lehrer R. I., Lichtenstein A. K., Ganz T. Defensins: antimicrobial and cytotoxic peptides of mammalian cells //Annu. Rev. Immunol., 1993, vol. 11, p. 105-128.

144. Leitch E. C., Willcox M. D. Synergic antistaphylococcal properties of lactoferrin and ^ lysozyme // J Med Microbiol., 1998, vol. 47, 9, p. 837-842.

145. LeMarbre P., Rinehart J.J., Kay N.E., Vesella R., Jacob H.S. Lysozyme enhances monocytemediated tumoricidal activity: a potential amplifying mechanism of tumor killing // Blood, 1981, vol. 58, p. 994-999.

146. Leonova L., Kokryakov V. N., Aleshina G., Hong T., Nguyen T., Zhao Ch., Waring A. J., Lehrer R. I. Circular minidefensins and posttranslational generation of molekular diversity // J. Leukocyte Biol., 2001, vol. 70, p. 461 -464.

147. Leto T. L. The respiratory burst oxidase // Inflammation: Basic principles and clinical correlates, 3rd ed. / Eds. Gallin J. I., Shydermann R. Lippincott Philadelphia: Williams & Wilkins, 1999, p. 769-786.

148. Levy O., Weiss J., Zarember K., Ooi C. E., Elsbach P. Antibacterial 15-kDa protein 6< isoforms (pi 5s) are members of a novel family of leukocyte proteins // J. Biol. Chem., 1993,vol. 268, p. 6058-6063.

149. Levy O. Antibiotic proteins of polymorphonuclear leukocytes // Eur. J. Haematol., 1996, vol. 56, 3, p. 263-277.

150. Liepke C., Adermann K., Raida M., Magert H.-J., Forssmann W.-G., Zucht H.-D. Human milk provides peptides stimulating the growth of bifidobacteria // Eur. J. Biochem., 2002, vol. 269, p. 712-718.

151. Lowry O. H., Rosebrough N. J., Farr A. L., Randall R. J. Protein measurement with the Folin phenol reagent// J. Biol. Chem., 1951, vol. 193, 1, p. 265-275.

152. Maeda H., Matsu-ura S., Yamauchi Y., Ohmori H. Resazurin as an electron acceptor in glucose oxidase-catalyzed oxidation of glucose // Chem. Pharm. Bull., 2001, vol. 49, 5, p. 622-625.

153. Maity P., Mitra A., Basu A. Inhibition of growth of Dalton's lymphoma by modification of the cell surface with lysozyme // ICRAS Med. Sci., 1985, vol. 13, p. 1101-1102.

154. Mantel C., Miyazawa K., Broxmeyer H. E. Physical characterization and polymerization during iron saturation of lactoferrin, a myelopoetic regulatory molecule with supressor activity // Adv. Exp. Med. Biol., 1994, vol. 357, p. 121-132.

155. Marquez L. A., Huang J. T., Dunford H. B. Spectral and kinetic studies on the formation of MPO Compound I and II: roles of hydrogen peroxide and superoxide // Biochemistry, 1994, vol. 33, p. 1447-1454.

156. Marquez L. A., Dunford H. B. Kinetics of oxidation of tyrosine and dityrosine by myelopreoxidase compounds I and II. Implications for lipoprotein peroxidation studies // J. Biol. Chem., 1995, vol. 270, p. 30434-30440.

157. Masschalk B., Van Houdt R., Van Haver G. R., Michiels C. W. Inactivation of gramnegative bacteria by lysozyme, denatured lysozyme, and lysozyme-derived peptides under high hydrostatic pressure // Appl. Envir. Microbiol., 2000, vol. 67, 1, p. 339-344.

158. Masschalck B., Deckers D., Michiels C. W. Lytic and nonlytic mechanism of inactivation of gram-positive bacteria by lysozyme under atmospheric and high hydrostatic pressure // J Food Prot., 2002, 65,12, p. 1916-1923.

159. Masson P. L., Heremans J. F., Schonne E. Lactoferrin, an iron-binding protein in neutrophilic leukocytes // J. Exp. Med., 1969, vol. 130, 3, p. 643-658.

160. Masson P. L., Heremans J. F. Lactoferrin in milk from different species // Comp. Biochem. Physiol., 1971, vol. 39B, p. 119-129.•) 173. McEver R. P. Leukocyte-endothelial cell interactions // Curr. Opin. Immunol., 1992, vol. 4,p. 840-849.

161. McGuire M. J., Lipsky P. E., Thiele D. L. Generation of active myeloid and lymphoid granule serine proteases requires processing by the granule thiol protease dipeptidyl peptidase I // Journal of Biological Chemistry, 1993, vol. 268,4, p. 2458-2467.

162. McKenzie H. A. a-Lactalbumins and lysozymes // Lysozymes: Model enzymes in biochemistry and biology / ed. by P. Jolles. Basel; Boston; Berlin: Birkhauser, 1996, p. 365409.

163. McPhail L.C., Snyderman R. Mechanisms of regulating the respiratory burst in leukocytes // Contemp. Top. Immunobioi:, 1984, vol. 14, p. 247-281.

164. Medzhitov R., Janeway C. A. J. Innate immunity: the virtues of a non-clonal system of recognition// Cell, 1997, vol. 91, p. 295-298.

165. Medzhitov R., Janeway C. A. J. An ancient system of host defense // Curr. Opin. Immunol., 1998, vol. 10, p. 12-15.

166. Medzhitov R., Preston-Hurlburt P., Kopp E., Stadlen A. Chen C., Ghosh S., Janeway C. A. J. MyD88 is an adaptor protein in the hToll/IL-1 receptor family signaling pathway // Mol. Cell, 1998, vol. 2, p. 253-258.

167. Metz-Boutigue M. N., Jolles J., Mazurier J., Schoentgen F., Legrand D., Spik J., Montreuil J., Jolles P. Human lactotransferrin: amino acid sequence and structural comparisons with other transferrins//Eur. J. Biochem., 1984, vol. 145, 3, p. 659-666.

168. Moguilevsky N., Retegui L. A., Masson P. L. Comparison of human lactoferrins from milk and neutrophilic leucocytes // Biochem. J., 1985, vol. 229, p. 353-359.

169. Molloy A. L., Winterboum C. C. Release of iron from phagocytosed Escherichia coli and uptake by neutrophil lactoferrin // Blood, 1990, vol. 75, 4, p. 984-989.

170. Momohara S., Kashiwazaki S., Inoue K., Saito S., Nakagawa T. Elastase from polymorphonuclear leukocyte in articular cartilage and synovial fluids of patients with rheumatoid arthritis// Clinical Rheumatology, 1997, vol. 16, 2, p. 133-140.

171. Morishita K., Kubota N., Asano S., Kaziro Y., Nagata S. Molecular cloning and characterization of cDNA for human myeloperoxydase // J. Biol. Chem., 1987, vol. 262, p. 3844-3851.

172. Nathan C., Xie Q. W., Halbwachs-Mecarelli L., Jin W. W. Albumin inhibits neutrophil spreading and hydrogen peroxide release by blocking the shedding of CD43 (sialophorin, leukosialin) // J. Cell Biol., 1993, vol. 122, p. 243-256.

173. Nauseef W. M., Olsson I., Arnljots K. Biosynthesis processing of myeloperoxidase a marker for myeloid cell differentiation // Eur.J.Haematol., 1988, vol. 40, p. 97-100.

174. Nepomuceno R. R., Henschen-Edman A. H., Burgess W. H., Tenner A. J. CDNA cloning and primary structure analysis of ClqRp, the human CIq/MBL/SPA receptor that mediates enhanced phagocytosis in vitro // Immunity, 1997, vol. 6, p. 119-129.

175. Nichols B. I., McKee K. S., Henry J. F., Putman M. Human lactoferrin stimulates thymidine incorparation into DNA of rat crypt cells // Pediatr. Res., 1987, vol. 21, p. 563-567.

176. Oda T., Hotta O., Taguma Y., Kitamura H., Sudo K., Horigome I., Chiba S., Yoshizawa N., Nagura H. Involvement of neutrophil elastase in crescentic glomerulonephritis // Human Pathology, 1997, vol. 28, 6, p. 720-728.

177. Odajima T., Yamazaki I. Myeloperoxidase of the leukocyte of normal blood: I. Reaction of myeloperoxidase with hydrogen peroxide // Biochim. Biophys. Acta, 1970, vol. 87, p. 71-77.

178. Odeberg H., Olsson I. Microbicidal mechanisms of human granulocytes: Synergistic effects of granulocyte elastase and myeloperoxidase or chymotrypsin-like cationic protein // Infect. Immun., 1976, vol. 14, 6, p. 1276-1283.

179. O'Donnell R. T., Andersen B. R. Characterization of canine neutrophil granules // Infect. Immun., 1982, vol. 38, 1, p. 351-359.

180. Ohlsson K. Purification and properties of granulocyte collagenase and elastase // Neutral proteases of human polymorphonuclear leukocytes / Ed. K. Havemann, A.Janoff. Urban and Schwarzenberg: Baltimore-Munich, 1978, p. 89-101.

181. Olsson I. Biochemical properties of neutral proteases of human neutrophils // Movement, metabolism and bactericidal mechanisms of phagocytes. / Ed. F. Rossi, P. L. Patriarca, D. Romeo Padua: Piccin medical books., 1977, p. 103-114.

182. Olsson I., Odeberg H., Weiss J., Elsbach P. Bactericidal cationic proteins of human granulocytes // Neutral proteases of human polymorphonuclear leukocytes / Ed. K. Havemann, A. Janoff. Urban and Schwarzenberg: Baltimore-Munich, 1978, p. 18-32.

183. Ossermann E. F., Klockras M., Halper J., Fischel R. E. Effects of lysozyme on normal and transformed mammalian cells //Nature, 1973, vol. 243, p. 331-335.

184. Panyutich A. V., Hiemstra P. S., Van Vetering S., Ganz T. Human neutrophil defensin and serpins form complexes and inactivate each other // Amer. J. Respirat. Cell Molec. Biol., 1995, vol. 12, p. 351-357.

185. Parry R. M., Jr, Chandan R. C., Shahani K. M. A rapid and sensitive assay of muramidase // Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1965, vol. 119, p. 384-386.

186. Pellegrini A., Thomas U., Wild P., Schraner E., von Fellenberg R. Effect of lysozyme or modified lysozyme fragments on DNA and RNA synthesis and membrane permeability of Escherichia coli // Microbiol Res., 2000, vol. 155,2, p. 69-77.

187. Phillips D. C. The three-dimensional structure of an enzyme molecule // Sci. Amer., 1966, vol. 215, p. 78-90.

188. Phillips D. C. The hen egg-white lysozyme molecule // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1967, vol. 57, p. 484-495.

189. Pierce A., Colavizza D., Benaissa M., Maes P., Tartar A., Montreuil J., Spik G. Molecular cloning and sequence analysis of bovine lactotransferrin // Eur. J. Bkochem., 1991, vol. 196, p. 177-184.

190. Pikuta E., Cleland D., Tang J. Aerobic growth of Anoxybacillus pushchinoensis K1(T): emended descriptions of A. pushchinoensis and the genus Anoxybacillus // Int. J. Syst. Evol. Microbiol., 2003, vol. 53, p. 1561-1562.

191. Plow E. F. The contribution of leukocyte proteases to fibrinolisis // Blut., 1986, vol. 53, 1, p.1-9.

192. Prager E. M., Jolles P. Animal lysozymes c and g: An overview // Lysozymes: Model enzymes in biochemistry and biology / ed. by P. Jolles. Basel; Boston; Berlin: Birkhäuser, 1996, p. 9-31.

193. Prager E. M. Adaptive evolution of lysozyme // Lysozymes: Model enzymes in biochemistry and biology / ed. by P. Jolles. Basel; Boston; Berlin: Birkhäuser, 1996, p. 323345.

194. Pryzwansky K. B., Martin L. E., Spitznagel J. K. Immunocytochemical localization of myeloperoxidase, lactoferrin, lysozyme and neutral proteases in human monocytes andmeutrophilic granulocyte // J. Reticuloendothel. Soc., 1978, vol. 24, p. 295-310.

195. Pulina M. O., Zakharova E. T., Sokolov A. V., Shavlovski M. M., Bass M. G., Solovyov K. V., Kokryakov V. N., Vasilyev V. B. Studies of the ceruloplasmin-lactoferrin complex // Biochem Cell Biol., 2002, vol. 80,1, p. 35-39.

196. Qiu J., Hendrixon D. R., Baker E. N., Murphy T. F., Gerne J. W. S., Plaut A. G. Human milk inactivates two putative colonization factors expressed by Haemophilus influenzae // Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1998, vol. 95, p. 12641-12646.

197. Reiter B. The biological significance of lactoferrin // Int. J. Tiss. Reac., 1983, vol.1, p. 8796.

198. Rinehart J. J., Cerilli J. G., Jacob H. S., Ossermann E. F. Lysozyme stimulates lymphocyte proliferation in monocyte-depleted mixed lymphocyte cultures // J. Lab. Clin. Med., 1982, vol. 99, p. 370-381.

199. Ritonja A., Kopitar M., Jerala R., Turk V. Primary structure of a new cysteine proteinase inhibitor from pig leucocytes // FEBS Lett., 1989, vol. 255, 2, p. 211-114.

200. Romeo D., Skerlavaj B., Bolognesi M., Gennaro R. Structure and bactericidal activity of an antibiotic dodecapeptide purified from bovine neutrophils // J. Biol. Chem., 1988, vol. 263,20, p. 9573-9575.

201. V 219. Rosen H., Klebanoff S. J. Oxidation of Escherichia coli iron centers by themyeloperoxidase-mediated system// J. Biol. Chem., 1982, vol. 257, p. 13725-13731.

202. Ross G. D., Lambris J. D. Identification of a C3bi-specific membrane complement receptor that is expressed on lymphocytes, monocytes, neutrophils, and erythrocytes // J. Exp. Med., 1982, vol. 155, p. 96-110.

203. Saito H., Miyakawa H., Tamura Y., Shimamura S., Tomita M. Potent bactericidal activity of bovine lactoferrin hydrolysate produced by heat treatment at acidic pH // J. Dairy Sci., 1991, vol. 74, p. 3724-3730.

204. Sakata K., Maeda T., Nakagawa H. Activation by cathepsin G of latent gelatinase secreted from rat polymorphonuclear leukocytes // Chem. Pharm. Bull., 1989, vol. 37, 5, p. 1321-1323.

205. Sandborg R. R., Smolen J. E. Early biochemical events in leukocyte activation // Lab.1.vest., 1988, vol. 59, 3, p. 300-320.

206. Santinone M. Kinetic evidence of horseradish peroxidase oxidation by Compound I // Biochimie, 1975, vol. 57, 3, p. 265-270.

207. Sarfati I., Lopes D., Murphy E. A., Rao S., Cohen J. R. Inhibition by protease inhibitors of chemotaxis induced by elastin-derived peptides // Journal of Surgical Research, 1996, vol. 61, 1, p. 84-88.

208. Schagger, Von Jagow Tricine-sodium dodecyl sulphate-polyacrilamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1-100 kDa // Annal. Biochem., 1987, vol. 166, p. 368-379.

209. Schmidt W., Havemann K. Chymotrypsin-like neutral proteases from lysosomes of human polymorphonuclear leukocytes // Neutral proteases of human polymorphonuclear leukocytes /

210. Ed. K. Havemann, A. Janoff. Urban and Schwarzenberg: Baltimore-Munich, 1978, p. 150160.

211. Schweinle J., Ezekowitz R. A. B., Tenner A., Joiner K. Human mannose-binding protein activates the alternative pathway and enhances serum bactericidal activity on a mannose-rich isolate of Salmonella//J. Clin. Invest., 1989, vol. 84, p. 1821-1829.

212. Segal A. W., Geisow M., Garcia R., Harper A., Miller R. The respiratory burst of phagocytic cells is associated with a rise in vacuolar pH // Nature, 1981, vol. 290, p. 406-409.

213. Segelmark M., Persson B., Hellmark T., Wieslander J. Binding and inhibition of myeloperoxidase (MPO): a major function of ceruloplasmin? // Clin. Exper. Immunol., 1997, vol. 108, p. 167-174.

214. Selsted M. E., Novotny M. J., Morris W. L. et al. Indolicidin, a novel bactericidalm tridecapeptide amide from neutrophils // J. Biol. Chem., 1992, vol. 267, p. 4292-4295.

215. Selsted M. E. Investigational approaches for studying the structures and biological functions of myeloid antimicrobial peptides // Genetic Engineering, 1993, vol. 15, p. 131-147

216. Selvaraj R. J., Paul B. B., Strauss R. R. Oxidative peptide cleavage and decarboxylation by the MPO- H202-C1 antimicrobial system // Infect. Immun., 1974, vol. 9, p. 255-260.

217. Sengelov H., Follin p., Kjeldsen L., Lollike K., Dahlgren C., Borregaard N. Mobilization of granules and secretory vesicles during in vivo exudation of human neutrophils // J. Immunol.,1995, vol. 154, p. 4157-4165.

218. Shafer W. M., Shepherd M. E., Boltin B., Wells L., Pohl J. Synthetic peptides of human lysosomal cathepsin G with potent antipseudomonal activity // Infection & Immunity, 1993, vol. 61, 5, p. 1900-1908.

219. Shafer W. M., Onunka V. C., Martin L. E. Antigonococcal activity of human* neutrophil cathepsin G // Infect. Immun., 1986, vol. 54, 1, p. 184-188.

220. Shamova O., Brodgen K. A., Zhao Ch., Nguyen T., Kokryakov V. N., Lehrer R. I. Purification and properties of proline-rich antimicrobial peptides from sheep; and goat leukocytes // Infect. Imun., 1999, vol. 67, 8, p. 4256-4259.

221. Shau H., Kim A., Golub H. Modulation of natural killer and lymphokine-activated killer cell cytotoxicity by lactoferrin//J. Leukocyte Biol., 1992, vol. 51, p. 343-349.

222. Shiloh M. U., Ruan J., Nathan C. Evaluation of bacterial survival and phagocyte functionft'with a fluorescence-based microplate assay // Infect. Immun., 1997, vol. 65, 8, p. 3193-3198.

223. Shinoda I., Takase M., Fukuwatari Y., Shimamura S., Koller M., Konig W. Effects of lactoferrin and lactoferricin on the release of interleukin 8 from human polymorphonuclear leukocytes // Biosci. Biotech. Biochem., 1996,vol. 60, p. 21-523.

224. Siminiak T., Flores N. A.Sheridan D. J. Neutrophil interactions with endothelium and platelets: possible role in the development of cardiovascular injury // Eur. Heart. J., 1995,vol. 16, p. 160-170.

225. Simon S. I., Burns A. R., Taylor A. D. L selectin (CD62L) cross linking signals neutrophil adhesive functions via the Mac 1 (CDllb/CD18) beta 2 integrin // J. Immunol., 1995, vol. 155, p. 1502-1514.

226. Sinha S., Watorek W., Karr S., Giles J., Bode W., Travis J. Primary structure of human neutrophil elastase // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1987, vol. 84, 6, p. 2228-2232.

227. Skerlavaj B., Romeo D., Gennaro R. Rapid membrane permeabilization and inhibition of vital functions of gramnegative bacteria by bactenecins // Infect. Immun., 1990, vol. 58, 11, p. 3724-3730.

228. Song H., Inaka K., Maenaka K., Matsushima M. Structural changes of active site cleft and different saccharide binding modes in human lysozyme co-crystallized with hexa-N-acetyl-chitohexaose at pH 4.0 // J Mol Biol., 1994, vol. 244, p. 522-540.

229. Sorensen M., Sorensen S. P. L. The proteins in whey // C. R. Trav Lab. Carlsberg, 1939, vol. 23, l,p. 55-99.

230. Soukka T., Tenovuo J., Rundegren J. Agglutination of Streptococcus mutans serotype C cells but inhibition of Porphyromonas gingivalis autoaggregation by human lactoferrin //

231. Arch. Oral. Biol., 1993, vol. 38, p. 227-232.

232. Spielberg S. P., Boxer L. A., Oliver J. M., Allen J. M., Schulman J. D. Oxidative damage to neutrophils in glutatione synthesis deficiency // Br. J. Haematol., 1979, vol. 42, p. 215-223.

233. Stendahl O., Molin L., Lindroth M. Granulocyte-mediated release of histamine from mast cells. Effect of myeloperoxidase and its inhibition by antiinflammatory sulfone compounds // Int. Arch. Allergy Appl. Immunol., 1983, vol. 70, p. 277-284.

234. Strauss R. G., Bove K. E., Jones J. R., Mauer A. M:, Fulgimti V. A. An anomaly of neutrophil morphology with impaired function // N. Engl. J. Mrd., 1974, vol. 290, p. 478-484.

235. Suzuki Y. A., Shin K., Lonnerdal B. Molecular cloning and functional expression of a human intestinal lactoferrin receptor // Biochemistry, 2001, vol. 40, p. 15771-15779.:

236. Tabachnik E., Schuster A., Gold W. M., Nadel J. A. Role of neutrophil elastase in allergen-induced lysozyme secretion in the dog trachea // J Appl Physiol., 1992, vol. 73, 2, p. 695-700.

237. Takeuchi O., Hoshino K., Kawai T., Sanjo H., Takada H., Ogawa T., Takeda K., Akira S. Differential role of TLR2 and TLR4 in recognition of gram-negative and gram-positive bacterial cell wall ccomponents // Immunity, 1999, vol. 11, p. 443-451.

238. Tang Y-Q., Yuan J., Osapay G., Osapay K., Tran D., Miller C. J., Ouellette A. J., Selsted M. E. A cyclic antimicrobial peptide produced in primate leukocytes by the ligation of two truncated a-defensins // Science, 1999, vol. 286, p. 498-502.

239. Taylor J. C., Crawford I. P. Purification and preliminary characterization of human leukocyte elastase // Arch. Biochem. Byophys., 1975, vol. 169, p. 91-101.

240. Thomas E. L., Aune T. M. Cofactor role of iodide in peroxidase antimicrobial action againast Escherichia colill Antimicrob. Agents Chemother., 1978, vol. 13, p. 1000-1005.

241. Thomas L. L., Xu W., Ardon T. T. Immobilized lactoferrin is a stimulus for eosinophil activation // J. Immunol., 2002, vol. 169, p. 993-999.

242. Thorne K. J. I., Oliver R. C., Barrett A J. Lysis and killing of bacteria by lysosomal proteinases // Infect. Immun., 1976, vol. 14,2, p. 555-563.

243. Tomita S., Hagiwara K., Matsuyama J., Kiyosawa I. Binding of lactoferrin to bacterial cells of the Clostridium species and their agglutination // Biosci. Biotechnol. Biochem., 1998, vol.m 62, p. 1471-1475.

244. Tonnessen T., Ilebekk A., Naess P. A., Christensen G. Inhibition of granulocyte-derived proteases reduces the increase in plasma endothelin associated with myocardial ischemia in the pig // Basic Research in Cardiology, 1996, vol 91,4, p. 289-295.

245. Tsuge H., Ago H., Noma M., Nitta K., Sugai S., Miyano M. Crystallographic studies of a calcium binding lysozyme from equine milk at 2.5 A resolution // J. Biochem., 1992, vol. Ill, 2, p. 141-143.

246. Uehara A., Muramoto K., Takada H., Sugawara S. Neutrophil serine proteinases activate human nonepithelial cells to produce inflammatory cytokines through protease-activated receptor 2 // J. Immunol., 2003, vol. 170, p. 5690-5696.

247. Uhing R. J., Snyderman R. Chemoattractant stimulus-response coupling // Inflammation: Basic principles and clinical correlates, 3 rd ed. / Eds. Gallin J. I., Shydermann R. Lippincott Philadelphia: Williams & Wilkins, 1999, p. 607-626.

248. Valore E., Ganz T. Posttranslational processing of defensins in immature human myeloid cells//Blood, 1992, vol. 79, 6, p. 1538-1544.

249. Visser L., Blaut E. The use of p-nitrophenyl N-butylcarbonyl-L-alanin as substrate for elastase // Biochim.Biophys.Acta, 1972, vol. 268, p. 257-260.

250. Voetman A. A., Roos D. Endogenous catalase protects human blood phagocytes against oxidative damage by extracellularly generated hydrogen peroxide // Blood, 1980, vol. 56, p. 846-852.

251. Watanabe, T., A Nagura, H., A Watanabe, K., A Brown, W.R. The binding of human milk lactoferrin to immunoglobulin A// FEBS Lett., 1984, vol. 168, 2, p. 203-207.

252. Weisbart R. H., Kacena A., Schun A., Golde D. W. GM-CSF induces human neutrophil IgA-mediated phagocytosis by an IgA Fc receptor activation mechanism // Nature, 1988, vol. 332, p. 647-648.

253. Weiss L. The cell periphery // Int. Rev. Cytol., 1969, vol. 26, p. 63-105.

254. Wright S. D., Rao P. E., Van Voorhis W. C. Identification of the C3bi receptor of human monocytes and macrophages by using monoclonal antibodies // Proc. Natl. Acad; Sci. USA, 1983, vol. 80, p. 5699-56703.

255. Yamada Y., Amagasaki T., Jacobson D. W., Green R. Lactoferrin binding to leukemia cell lines // Blood, 1987, vol. 70, p. 264-270.

256. Yamazaki T., Aoki Y. Cathepsin G enhances human natural killer cytotoxicity // Immunology, 1998, vol. 93, 1, p. 115-121.

257. Yan H., Hancock R. E. W. Synergistic interactions between mammalian antimicrobial defense peptides // Antimicrob. Agents Chemother., 2001, vol. 45, 5, p. 1558-1560.

258. Yang R. B., Mark M. R., Gray A., Huang A., Xie M. H., Zhang M., Goddard A., Wood W. I., Gurney A. L., Godowski P. J. Toll-like receptor-2 mediates lipopolysaccharide-induced cellular signalling//Nature, 1998, vol. 395, p. 284-288.

259. Zacharius R. M., Zell T. E., Morrison J. H., Woodlock J. J. Glycoprotein staining following electrophoresis on acrylamide gels. // Anal. Biochem., 1969, vol. 31, p. 148-152.

260. Zanetti M., Gennaro R., Romeo D. Cathelicidins: a novel protein family with a common proregion and a variable C-terminal antimicrobial domain//FEBS Lett., 1995, vol.374, p. 1-5.

261. Zeng J, Fenna R E. X-ray crystal structure of canine myeloperoxidase at 3 A resolution. // J. Mol. Biol., 1992, vol. 226, 1, p. 185-207.

262. Zeya H. I., Spitznagel J. K. Antibacterial and enzymatic basic protein from leukocyte lysosomes: separation and identification // Science, 1963, vol. 142, p. 1085-1087.

263. Zeya H. I., Spitznagel J. K. Antimicrobial specificity of leukocyte lysosomal cationic proteins//Science, 1966, vol. 154, p. 1049-1051.

264. Zhou Q., Salvesen G. S. Activation of pro-caspase-7 by serine proteases includes a non-canonical specificity // Biochem. J., 1997, vol. 324, p. 361-364.

265. Автор диссертации благодарит своих коллег, принявших участие в выполнении работы:

266. Андреева Ю. В. (НИИ физиологии им. И. П. Павлова) Кораблева Е. С. (каф. биохимии, СПбГУ) Краснодембская А. Д. (каф. биохимии, СПбГУ) Лодыгин П. А. (каф. биохимии, СПбГУ)

267. Руководитель работы д. б. н., проф. Кокряков В. Н. (лаборатория химии белка, каф. биохимии, СПбГУ; лаборатория общей патологии, НИИ экспериментальной медицины РАМН)