Сравнительная оценка безопасности, реактогенности и иммуногенности двухкомпонентной векторной вакцины для профилактики коронавирусной инфекции на основе Ad26 и Ad5 при интраназальном и внутримышечном путях введения тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Зуев Евгений Васильевич

• Зуев Евгений Васильевич
• кандидат наук
• 2024

Оглавление диссертации кандидат наук Зуев Евгений Васильевич

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Характеристика адаптивного иммунного ответа при естественном течении СОУГО-19

1.2 Иммунная система слизистых оболочек и ассоциированная лимфоидная ткань

1.3 Методы оценки ВНА к SARS-CoV-2

1.4 Характеристика вакцин для профилактики COVID-19. Опыт разработки мукозальных вакцин

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Общий дизайн и план-описание исследования

2.2 Описание добровольцев, критерии отбора в исследование

2.3 Исследуемая терапия

2.4 Предшествующая и сопутствующая терапия

2.5 План обследования и наблюдения

2.6 Лабораторное обследование

2.7 Оценка безопасности

2.8 Анализ данных и запланированные методы статистического анализа

2.9 Общая характеристика добровольцев и принципы формирования выборок добровольцев

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1 Оценка безопасности и реактогенности

3.2 Оценка иммуногенности

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

ЛИТЕРАТУРА

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сравнительная оценка безопасности, реактогенности и иммуногенности двухкомпонентной векторной вакцины для профилактики коронавирусной инфекции на основе Ad26 и Ad5 при интраназальном и внутримышечном путях введения»

Актуальность темы исследования

Пандемия новой коронавирусной инфекции СОУГО-19 явилась глобальным вызовом для системы здравоохранения страны, ответом на который стала массовая вакцинация эффективными вакцинами [1]. В РФ коллективом ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи Минздрава России» в 2020 году была разработана инновационная векторная вакцина Гам-КОВИД-Вак для профилактики коронавирусной инфекции, вызываемой вирусом SARS CoV2 [18]. Данная вакцина продемонстрировала свою эффективность и безопасность в ходе клинических исследований. На производственных площадях АО «ГЕНЕРИУМ» была оптимизирована технология производства и налажен массовый выпуск как субстанции, так и готовой лекарственной формы [2].

В рамках реагирования на пандемию ВОЗ активизировала работу Программы научных исследований и разработок, в задачи которой входит ускоренная разработка средств диагностики, вакцин и лекарственных средств, предназначенных для борьбы с новым коронавирусом. Так, на сегодняшний день 382 вакцины находится в разработке, из них 1 83 препаратов в стадии клинических исследований, и 199 препаратов проходит доклинические испытания [19].

Важное направление в разработке вакцин - разработка препаратов, воздействующих на слизистые оболочки организма (мукозальные вакцины). Поскольку входными воротами для возбудителя COVID-19 являются слизистые оболочки дыхательных путей, индукция мукозального иммунитета представляется обоснованной. При этом, по данным литературы, применение мукозальных вакцин приводит к индукции в том числе системного иммунного ответа [20, 21]. В дополнение к этому применение мукозальных форм препаратов представляется менее травматичным и требует меньшего вовлечения медицинского персонала, что играет значительную роль в условиях неблагополучной эпидемиологической обстановки с необходимостью проведения массовых мероприятий по иммунизации населения.

Первичной мишенью для интраназальных вакцин является лимфоидная ткань, которая состоит из лимфоидных фолликулов, расположенных непосредственно под эпителиальными клетками слизистых оболочек, наиболее значимой частью которой является лимфоэпителиальное кольцо Пирогова. Вакцины, вводимые интраназально, вызывают наработку нейтрализующего IgA, предотвращающего колонизацию слизистой оболочки, и наработку системного IgG. Иммунокомпетентные клетки лимфоидной ткани миндалин, реснитчатые и нересничные клетки также играют роль в формировании иммунитета. Производство IgA как аденоидной тканью, так и слизистой оболочкой носа вносит значительный вклад в иммунную защиту от вдыхаемых вирусов [22, 23, 3].

Таким образом, интраназальное применение вакцины имеет ряд потенциальных преимуществ перед парентеральными вакцинами:

• Выраженная секреция мукозального IgA на слизистой оболочке «входных ворот» респираторных инфекций при интраназальном применении препарата имеет очевидное преимущество [24].

• Слизистая оболочка богата Т- и В-клеточными компонентами, плазматическими клетками, что приводит к стимуляции как системного, так и мукозального антиген-специфического адаптивного иммунитета.

• Применение интраназальных вакцин проводится с применением менее инвазивных методов, что снижает риски выполнения медицинских процедур.

Важно отметить, что при иммунизации вакцинами на основе аденовирусных векторов возможно развитие иммунного ответа, в частности в виде нейтрализующих антител, на сам вектор вакцины, то есть аденовирусы серотипов 5 и 26. Нейтрализующие антитела могут препятствовать эффективному инфицированию целевых клеток аденовирусным вектором. В качестве преодоления этого барьера может быть предложено изменение пути введения вакцины. Известно, что уровень нейтрализующих аденовирус антител в слизистых оболочках экспонированных индивидуумов низок и не долговечен по сравнению с уровнем антител, системно циркулирующих в крови. На доклинических моделях было успешно показано, что интраназальное введение (капли или спрей)

аденовирусной вакцины обходит существовавший ранее иммунитет к вектору вакцины и вызывает высокий иммунный ответ [25].

Недавние исследования показали, что внутримышечные вакцины плохо контролируют репликацию вируса на слизистой оболочке верхних дыхательных путей, что приводит к бессимптомному вирусовыделению или более легкой симптоматической инфекции. Напротив, интраназальные вакцины обладают потенциалом индуцировать стерилизующий иммунитет против патогенов слизистых оболочек. Таким образом, иммунный ответ при внутримышечном введении останавливает развитие инфекции в легких, но не является «стерилизующим». В доклинических исследованиях интраназальные аденовирусные вакцины показали именно стерилизующий иммунитет, формируя не только циркулирующие антитела класса IgG, но и присутствующие в слизистых антитела класса ^А, а также специфические для коронавируса Т-клетки -резиденты слизистых оболочек, в добавление к циркулирующим антителам и Т-клеткам в лимфоузлах и легких. В опубликованных работах показано, что если у животных в эксперименте внутримышечная иммунизация снижала размножение вируса в легких, то интраназальная иммунизация полностью предотвращала инфекцию в легких и верхних дыхательных путях [26-28].

Наличие вирус-нейтрализующих антител (ВНА) против SARS-CoV-2 в крови является важным показателем защитного иммунитета, формируемого вакциной. Следовательно, для доклинических и клинических исследований вакцин необходимы методы надежного, чувствительного и быстрого обнаружения пАЬ против SARS-CoV-2. Кроме того, количественная оценка ВНА у переболевших COVID-19 пациентов может быть полезна для выявления потенциальных доноров для пассивной иммунизации и терапевтического применения иммуноглобулинов класса G. Достижение коллективного иммунитета против SARS-CoV-2 естественным путем или путем вакцинации является конечной долгосрочной целью, которая позволит отменить применяемые в настоящее время меры социального контроля. Скрининг на наличие ВНА также необходим для оценки

коллективного иммунитета против SARS-CoV-2 и эффективности программ вакцинации, развернутых во многих странах с конца 2020 г [4].

Классические методы оценки ВНА на сегодняшний день представляются очень трудоемкими, и требуют значительных ограничений от задействованных лабораторий по причине использования вирулентного возбудителя в своей работе. На сегодняшний день актуальным направлением является разработка новых методов определения ВНА, включая метода на основе псевдовирусных частиц [4].

Степень разработанности темы исследования

Учитывая социальную и медицинскую значимость коронавирусной инфекции, целесообразность и польза разработки и изучения альтернативных форм вакцинопрофилактики данного заболевания, включая мукозальный способ применения, представляется вполне обоснованной. Однако ее безопасность и иммунологическая эффективность остаются в зоне пристального внимания в аспекте поиска оптимальных средств и схем иммунизации.

Интерес к интраназальному способу иммунизации у ряда компаний достаточно высок. В соответствии с опубликованными данными, на сегодняшний день в мире на различных стадиях разработки находятся 19 мукозальных вакцин для профилактики СОУГО-19, включая 16 интраназальных. В литературе встречаются отдельные данные клинических исследований по изолированной оценке интраназальных форм, или применение различных способов введения одного препарата не в идентичных дозах. Ряд работ посвящено интраназальной бустерной вакцинации препаратами на основе аденовирусных векторов после первичной вакцинации внутримышечным способом. Отсутствуют полноценные данные о сравнительной оценке иммуногенности одного и того же препарата двухкомпонентной вакцины (на основе Ad 26 и Ad5) при его интраназальном и внутримышечном применении.

Несмотря на давний интерес к мукозальной иммунизации, до эпидемии COVID-19 в мире была зарегистрирована только одна вакцина с интраназальным путем введения - вакцина для профилактики Гриппа А и Гриппа B FluMist/Fluenz [29].

В 2022 году на территории РФ зарегистрированы две вакцины для профилактики коронавирусной инфекции, вызываемой вирусом SARS-CoV-2 (Салнавак, спрей назальный и Гам-КОВИД-Вак, капли назальные), в основе которых использованы действующие вещества вакцины Гам-КОВИД-Вак (комбинированная векторная вакцина для профилактики коронавирусной инфекции, вызываемой вирусом SARS-СoV-2), раствора для внутримышечного введения [5].

Данные вакцины состоят из двух компонентов: компонент I и компонент II. В состав компонента 1 входит рекомбинантный аденовирусный вектор на основе аденовируса человека 26 серотипа, несущий ген S-белка вируса SARS-CoV-2, в состав компонента II входит рекомбинантный аденовирусный вектор на основе аденовируса человека 5 серотипа, несущий ген S-белка вируса SARS-CoV-2. Рекомбинантные псевдоаденовирусные частицы получены методом гомологичной рекомбинации с использованием культуры клеток эмбриональной почки человека, трансформированных Е1 областью аденовируса человека 5-го серотипа (НЕК293). Используемые рекомбинантные частицы на основе псевдоаденовирусных частиц обеспечивают синтез S-белка вируса SARS-CoV-2 в клетках человека [6, 7].

Для оценки перспектив применения новых вакцин и иных препаратов на основе аденовирусных векторов (в том числе Ad26 и Ad5) с интраназальном способом введения актуальным является сравнительная оценка реактогенности, безопасности и иммуногенности двухкомпонентной векторной вакцины для профилактики коронавирусной инфекции при интраназальном и внутримышечном путях введения.

Цель исследования

Оценить параметры безопасности, реактогенности и иммунного ответа при интраназальной иммунизации комбинированной векторной вакциной на основе Ad26 и Ad5 для профилактики COVID-19 в сравнении с внутримышечным способом введения у здоровых добровольцев.

Задачи исследования

1. Изучить параметры безопасности и реактогенности вакцин Салнавак и Гам-КОВИД-Вак.

2. Оценить иммуногенность векторной вакцины для профилактики COVID-19 при интраназальном и внутримышечном пути введения.

3. Сравнить напряженность гуморального поствакцинального иммунного ответа по данным определения ВНА и анти-RBD-IgG-антител в группах реципиентов вакцин Салнавак и Гам-КОВИД-Вак.

4. Провести сравнительную оценку мукозального иммунного ответа при разных способах вакцинации по данным титра мукозальных IgA, специфичных к S-белку SARS-CoV-2.

5. Изучить параметры Т-клеточного поствакцинального иммунного ответа к различным белкам вируса SARS-CoV-2 в исследуемых группах.

Научная новизна

Впервые представлена сравнительная характеристика иммунного ответа при интраназальном и внутримышечном применении двухкомпонентной векторной вакцины для профилактики коронавирусной инфекции, вызываемой SARS-CoV-2, с оценкой сывороточного (IgG, IgA в сыворотке крови) и мукозального (IgA слизистой оболочки носа) гуморального иммунитета, Т-клеточного иммунитета на репрезентативной выборке добровольцев в режиме двойного слепого рандомизированного клинического исследования с применением препаратов на основе одного и того же действующего вещества в равных дозах.

Впервые охарактеризованы клинические и лабораторные показатели безопасности и иммунологической эффективности интраназального применения вакцины на основе Ad26 и Ad5 для профилактики коронавирусной инфекции, вызванной SARS-CoV-2, в прямом сравнении с внутримышечным способом введения у здоровых добровольцев. Примечательно то, что интраназальная векторная вакцина на основе обезьяньего аденовируса ChAdOxl (Astra Zeneca) оказалась недостаточно иммуногенной.

Впервые представлена сравнительная оценка уровня вирус-нейтрализующих антител для препаратов на основе Ad26 и Ad5 в двойном слепом клиническом исследовании при интраназальном и внутримышечном применении с использованием псевдовирусных частиц; охарактеризован Т-клеточный ответ на антигены SARS-COV-2 (на белки S, N, M, ORF3a и ORF7a), с использованием технологии IGRA-ELISPOT. Показан достаточный уровень сероконверсии при интраназальной иммунизации.

Получена информация о более благоприятном соотношении риска и пользы при интраназальной иммунизации. Вовлечение мукозального иммунитета позволяет снизить распространение возбудителя среди населения.

Полученные научные данные позволяют корректно планировать разработку новых препаратов на основе аденовирусных векторов Ad26 и Ad5 для иммунопрофилактики, прогнозировать эффективность и безопасность новых методов лечения.

Теоретическая значимость исследования

Доказаны положения, вносящие вклад в углубление представлений о применении интраназальной иммунизации, расширяющие границы возможностей иммунопрофилактики COVID-19;

Применительно к проблематике диссертации результативно применен набор современных лабораторных методик, включая оценку вирус-нейтрализующих антител методом псевдовирусной нейтрализации, оценку мукозальных IgA ИФА-методом и оценку специфической Т-клеточной сенсибилизации методом IGRA;

Изложены доказательства снижения частоты нежелательных реакций при интраназальной вакцинации векторной вакциной по сравнению с внутримышечным введением; причинно-следственные связи типов нежелательных реакций со способом введения вакцины; тенденции к росту титров мукозальных IgA при интраназальной иммунизации;

Раскрыты существенные проявления теории: выявлены новые проблемы, связанные с менее выраженным гуморальным иммунным ответом при интраназальной иммунизации по сравнению с внутримышечной; со сложностями

стандартизации методик оценки мукозального иммунитета; наличием предсуществующего мукозального и системного иммунного ответа к аденовирусным векторам; с методиками доставки интраназальных вакцин;

Изучены дополнительные факторы иммунологической защиты, включающие мукозальный иммунитет по данным оценки IgA слизистой оболочки и специфический Т-клеточный иммунитет в ответ на проведение иммунизации;

Проведена модернизация лабораторных алгоритмов, позволяющих оценить уровни вирус-нейтрализующих антител в высокопроизводительном формате.

Научно-практическая значимость исследования

Разработана и внедрена в практику интраназальная форма двухкомпонентной векторной вакциной для профилактики коронавирусной инфекции, расширяющая возможности иммунопрофилактики СОУГО-19; по итогам проведенных исследований применение вакцины для профилактики СОУГО-19 в виде спрея назального Салнавак было одобрено Минздравом России (ЛП-008297 от 04.07.2022);

Определены пределы и перспективы разработки новых вакцин с интраназальным путем введения;

Создан и валидирован высокопроизводительный усовершенствованный метод оценки специфических к антигену SARS-CoV-2 вирус-нейтрализующих антител в сыворотке крови добровольцев в реакции нейтрализации на культуре клеток НЕК 293-Г-ЬАсе2 с использованием псевдовирусных частиц в соответствии с ГОСТ Р 53079 «Обеспечение качества клинических лабораторных исследований» и ГОСТ Р 53922 «Требования к качеству клинических лабораторных исследований» с последующим внедрением в практику лабораторной диагностики иммунного ответа к SARS-CoV-2; подобный подход позволяет масштабировать метод для использования в рутинной клинической практике;

Представлены рекомендации применять вакцину Салнавак с целью иммунопрофилактики COVID-19 у взрослых 18-60 лет во временных методических рекомендациях Минздрава России «Профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (СОУГО-19» актуальной версии.

Методология и методы исследования

Методология исследования спланирована в соответствии с поставленной целью с использованием современных аналитических методов и системного подхода, которые обеспечили достоверность и обоснованность полученных результатов и полностью соответствовали принципам доказательной медицины. Научная работа проводилась с соблюдением всех правил научных исследований, основывалась на принципах биоэтики. Исследование одобрено Советом по Этике при Минздраве России, а также независимыми этическими комитетами учреждений, в которых проводилось исследование. Все документы исследования были одобрены экспертами ФГБУ НЦЭСМП и независимыми этическими комитетами исследовательских центров. Разрешение Минздрава России на проведение настоящего исследования было получено компанией АО «ГЕНЕРИУМ» (РКИ №869 от 20.12.2021). Теоретическая и методологическая основа работы состояла в поиске и анализе фундаментальных и прикладных исследований по изучаемой проблеме. Для реализации поставленной цели были использованы клинические и современные лабораторные методы исследования гуморального и клеточного иммунитета, позволяющие объективно оценить напряженность иммунного ответа при вакцинопрофилактике COVID-19. Выполнен сбор и систематизация материалов исследования, проведен адекватный статистический анализ данных, позволяющий сделать обоснованные выводы.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Интраназальное применение двухкомпонентной векторной вакцины на основе 26 и 5 серотипов в режиме «прайм-буст» с трехнедельным интервалом между введением компонентов обеспечивает активацию системного гуморального и клеточного иммунитета, включая мукозальный иммунитет респираторного тракта, достаточного для иммунопрофилактики коронавирусной инфекции, вызываемой вирусом SARS-CoV-2.

2. Интраназальный путь введения векторной вакцины обеспечивает снижение частоты нежелательных реакций по сравнению с внутримышечным введением.

Апробация результатов

Основные результаты исследования представлены:

• Доклады на международных и российских конференциях: международная научно-практическая конференция «Новое в диагностике, лечении и профилактике социально значимых инфекций» (Уфа, 27-28 октября 2022 года); VII Съезд биохимиков, молекулярных биологов и физиологов России, III Объединенный научный форум физиологов, биохимиков и молекулярных биологов (Сочи, 3-7 октября 2022 года);

• Публикации статей и материалов научных конференций (см. перечень авторских публикаций и тезисов в конце документа); 4 научных работы в журналах, входящих в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК.

Диссертация прошла обсуждение и была рекомендована к защите на заседании Научно-технического Совета АО «ГЕНЕРИУМ» (протокол заседания №01-2023 от 10.07.2023).

Внедрение

Интраназальная форма вакцины для профилактики коронавирусной инфекции, вызываемой вирусом SARS-CoV-2, (компонент I: рекомбинантные аденовирусные частицы 26 серотипа, содержащие ген белка S вируса SARS-CoV-2; компонент II: рекомбинантные аденовирусные частицы 5 серотипа, содержащие ген белка S вируса SARS-CoV-2) одобрена Минздравом России к применению на территории РФ (Регистрационный номер ЛП-008297 от 04.07.2022).

Применение вакцины Салнавак рекомендовано с целью иммунопрофилактики COVID-19 у взрослых 18-60 лет Временными методическими рекомендациями Минздрава России «Профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (COVID-19» версии 18 от 26.10.2023 г.

Достоверность результатов исследования

Диссертационная работа выполнена с использованием современных и высоко технологичных методов клинической иммунологии. Так, с целью оценки RBD-специфических IgG к SARS-CoV-2 в сыворотке крови определяли методом ИФА с использованием коммерческого набора SARS-CoV-2 IgG ARCHITECT (Abbott,

США). Методика выявления и определения титра специфических антител класса IgA к рецептор-связывающему домену поверхностного гликопротеина S (spike) коронавируса SARS-CoV-2 в образцах сыворотки крови и назальных мазках человека, основана на непрямом иммуноферментном анализе. С целью оценки Т-клеточного иммунитета был использован коммерческий набор ТиграТест® SARS-CoV-2 (АО ГЕНЕРИУМ, Россия) для выявления in vitro в крови Т-лимфоцитов, специфически отвечающих на антигены вируса SARS-COV-2 (на белки S, N, M, ORF3a и ORF7a), на основе технологии IGRA-ELISPOT (Interferon-Gamma Release Assay - Enzyme Linked Spot analysis, анализ высвобождения IFNy -иммуноферментный анализ пятен), предназначенный для качественной оценки T -клеточного иммунного ответа и позволяющий подсчитать в условиях in vitro число активированных эффекторных Т-лимфоцитов, выделяющих цитокин IFNy, в ответ на стимуляцию антигенами вируса SARS-CoV-2. Наличие специфических к антигену SARS-CoV-2 ВНА в сыворотке крови добровольцев оценивали в реакции нейтрализации на культуре клеток НЕК 293-T-hAce2, стабильно экспрессирующей ACE2 и с использованием псевдовирусных частиц, который был разработан для проведения настоящего исследования. Псевдотипированные вирусы представляют собой нереплицирующиеся генетически модифицированные вирионы, имеющие структурное и ферментативное ядро лентивируса, несущие S-белок SARS-CoV-2, и кодируют репортерный ген люциферазы светлячка (FLUC). ВНА, содержащиеся в исследуемых положительных сыворотках, способны к нейтрализации спайкового белка на поверхности применяемых псевдовирусных частиц, тем самым препятствуют проникновение псевдовируса в клетку и инициацию экспрессии люциферазы.

Высокая степень достоверности результатов исследования обеспечивается использованием современных методов сбора и обработки исходной информации, репрезентативным объемом выборки добровольцев, рандомизированным двойным слепым плацебо-контролируемым (методом «double dummy») дизайном исследования, обработкой полученных результатов с применением адекватных методов статистики, внутренней непротиворечивостью результатов исследования,

принципиальной согласованностью данных по отдельным разделам с результатами предыдущих исследований в смежных областях.

Личный вклад автора в проведенное исследование

Личный вклад соискателя состоит во включенном участии на всех этапах процесса; непосредственном участии в обработке, интерпретации и апробации результатов исследования, подготовке основных публикаций по выполненной работе; при участии автора в получении исходных данных и во всех ключевых экспериментах.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 150 страницах печатного текста, состоит из введения, четырех глав, заключения, выводов и практических рекомендаций, содержит 21 таблицу и 16 рисунков. Библиографический указатель включает 146 источников (17 отечественных и 129 зарубежных).

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Характеристика адаптивного иммунного ответа при естественном

течении СОУГО-19

Коронавирусы представляют собой разнообразную группу вирусов,

поражающих множество различных животных, и они могут вызывать легкие или тяжелые респираторные инфекции у людей. В 2002 и 2012 годах соответственно два высокопатогенных коронавируса зоонозного происхождения, коронавирус тяжелого острого респираторного синдрома (SARS-CoV) и коронавирус ближневосточного респираторного синдрома (MERS-CoV), появились у людей и вызвали смертельное респираторное заболевание, что сделало новые коронавирусы новой проблемой общественного здравоохранения в двадцать первом веке. В конце 2019 года в городе Ухань, Китай, появился новый коронавирус, обозначенный как SARS-CoV-2, и вызвал вспышку необычной вирусной пневмонии. Будучи высококонтагиозным, это новое коронавирусное заболевание, также известное как коронавирусное заболевание 2019 (COVID-19), быстро распространилось по всему миру [30].

SARS-CoV-2 использует тот же рецептор, что и SARS-CoV, ангиотензинпревращающий фермент 2 (ACE2). Субъединица S1 коронавируса состоит из двух функциональных доменов: К-концевой домен и ^концевой домен. Структурный и биохимический анализы выявили область из 211 аминокислот в С-концевом домене S1 SARS-CoV-2 как RBD, который играет ключевую роль в проникновении вируса в клетку хозяина и является мишенью нейтрализующих антител [30].

В организме человека в ответ на репликацию SARS-CoV-2 регистрируется образование специфичных для SARS-CoV-2 иммуноглобулинов, CD4+ и CD8+ Т-клеток [31-33].

У пациентов с COVID-19 ответ CD4+ Т-клеток на SARS-CoV-2, который связан с контролем первичной инфекции, более выражен, чем ответ CD8+ Т-клеток [13]. Особый интерес представляют реакции Т-клеток против белка S SARS-CoV-2, который является основной мишенью для разработки вакцин. Индукция антител

против S-белка зависит от S-специфичных CD4+ Т-клеток с возможным вкладом CD4+ Т-клеток, специфичных для других структурных белков вириона. В исследовании, изучавшем реакцию CD4+ Т-клеток на все белки SARS-CoV-2 у выздоравливающих пациентов с COVID-19, в группе субъектов были обнаружены ответы почти на все белки SARS-CoV-2 (21/24), причем CD4+ Т-клеточные реакции не обнаруживается только для самых малых белков. Распространенность и масштаб CD4+ Т-клеточных ответов SARS-CoV-2 коррелируют с уровнем экспрессии каждого белка SARS-CoV-2. S, M и N-белки являются наиболее заметными мишенями для CD4+ Т-клеток, специфичных для SARS-CoV-2. Хотя S-белок является наиболее часто распознаваемым антигеном SARS-CoV-2, «мегапул» прогнозируемых эпитопов класса II содержат ~50% CD4+ Т-клеток, специфичных для иных белков (кроме S). Паттерны распознаваемых CD4+ Т-клеточных антигенов SARS-CoV-2, по-видимому, схожи во время острой инфекции, фазы выздоровления и на этапе памяти [33].

SARS-CoV-2-специфичные CD4+ Т-клетки можно обнаружить уже на 2-4-й день после появления симптомов. При этом данные клетки имели наиболее сильную связь со снижением тяжести заболевания COVID-19 по сравнению с антителами и CD8+ Т-клетками. Быстрая индукция SARS-CoV-2-специфичных CD4+ Т-клеток при остром течении COVID-19 была связана с легким течением заболевания и ускоренным клиренсом вируса. Напротив, продолжительное отсутствие CD4+ Т-клеточного ответа было связано с тяжелым или фатальным течением COVID-19 [13, 33].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Зуев Евгений Васильевич, 2024 год

ЛИТЕРАТУРА

1. Спасенников Б.А. COVID-19: уроки вакцинации // Бюллетень Национального научно-исследовательского института общественного здоровья имени Н. А. Семашко. 2021. №3. [Электронный источник] // URL: https://cyberleninka.rU/article/n/covid-19-uroki-vaktsinatsii (дата обращения: 16.03.2024).

2. Морозов А.Н., Яхин И.Р., Стратонова Н.В., Куцкир М.В., Потеряев Д.А., Хамитов Р.А. Опыт масштабирования и интенсификации промышленного производства векторной аденовирусной вакцины Гам-КОВИД-Вак в лимитирующих условиях пандемии. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2022;22(4):382-391. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2022-22-4-382-391

3. Гудима Г.О., Хаитов Р.М., Кудлай Д.А., Хаитов М.Р. Молекулярно-иммунологические аспекты диагностики, профилактики и лечения коронавирусной инфекции. Иммунология. 2021; 42 (3): 198-210. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-3-198-210

4. Фунтиков А.А., Литвинова Н.А., Зуев Е.В., Кулемзин С.В., Шукуров Р.Р. Оценка уровня вируснейтрализующих антител, индуцированных новой коронавирусной инфекцией COVID-19: Разработка анализа быстрой оценки протективных антител с использованием реакции на основе псевдовируса // Инфекция и иммунитет. - 2023. - Т. 13. - №3. - C. 457-468. doi: 10.15789/2220-7619-EOV-4336

5. Перечень вакцин для профилактики коронавирусной инфекции, вызванной COVID-19 на территории РФ: [Электронный ресурс] // Государственный реестр лекарственных средств. URL: https: //grls.rosminzdrav.ru/GRL S.aspx?RegNumber=&MnnR=covid&lf=&TradeNmR= &OwnerName=&MnfOrg=&MnfOrgCountry=&isfs=0&regtype=1 %2c6&pageSize= 10 &order=RegDate&orderType=desc&pageNum=1 (дата обращения 04.03.2024).

6. Инструкция по медицинскому применению лекарственного препарата Салнавак, комбинированной векторной вакцины для профилактики коронавирусной инфекции, вызываемой вирусом SARS-CoV-2: [Электронный

ресурс] // Государственный реестр лекарственных средств. URL: https: //grls.rosminzdrav.ru/Grls_View_v2. aspx?routingGuid=41a7f369-79af-42b 1 -a127-b931153fc750 (дата обращения 04.03.2024).

7. Инструкция по медицинскому применению лекарственного препарата Гам-КОВИД-Вак (капли назальные), комбинированной векторной вакцины для профилактики коронавирусной инфекции, вызываемой вирусом SARS-CoV-2: [Электронный ресурс] // Государственный реестр лекарственных средств. URL: https://grls.rosminzdrav.ru/Grls_View_v2. aspx?routingGuid=c9b0af9a-2d86-4ad 1 -8c53-9a0087b6c270 (дата обращения 04.03.2024).

8. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., Пащенков М.В. Эпителиальные клетки дыхательных путей как равноправные участники врожденного иммунитета и потенциальные мишени для иммунотропных средств. Иммунология. 2020; 41 (2): 107-113. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2020-41-2-107-113.

9. Пинегин Б.В., Пащенков М.В., Пинегин В.Б., Хаитов Р.М. Эпителиальные клетки слизистых оболочек и новые подходы к иммунопрофилактике и иммунотерапии инфекционных заболеваний. Иммунология. 2020; 41 (6): 486-500. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2020-41-6-486-500.

10. Андреев И.В., Нечай К.О., Андреев А.И., Зубарёва А.П., Есаулова Д.Р., Аленова А.М., Николаева И.А., Чернявская О.П., Ломоносов К.С., Шульженко

A.Е., Курбачева О.М., Латышева Е.А., Шартанова Н.В., Назарова Е.В., Романова Л.В., Черченко Н.Г., Смирнов В.В., Аверков О.В., Мартынов А.И., Вечорко В.И., Гудима Г.О., Кудлай Д.А., Хаитов М.Р., Хаитов Р.М. Поствакцинальный и постинфекционный гуморальный иммунный ответ на инфекцию SARS-CoV-2. Иммунология. 2022; 43 (1): 18-32. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2022-43-1-18-32.

11. Нечай К.О., Андреев А.И., Андреев И.В., Есаулова Д.Р., Баклакова О.С., Шадыжева М.Б., Романова Л.В., Гегечкори В.И., Черченко Н.Г., Вечорко

B.И., Кофиади И.А., Гудима Г.О., Мартынов А.И., Смирнов В.В., Кудлай Д.А., Хаитов М.Р. Динамическая оценка напряженности иммунного ответа на SARS-

CoV-2-инфекцию и иммунизацию против COVID-19 вакциной "Спутник V". Иммунология. 2023; 44 (2): 157-166. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2023-44-2-157-166.

12. Андреев А.И., Андреев И.В., Нечай К.О., Есаулова Д.Р., Баклакова О.С., Вечорко В.И., Шиловский И.П., Кофиади И.А., Гудима Г.О., Мартынов А.И., Смирнов В.В., Кудлай Д.А., Хаитов М.Р. Взаимосвязь между возрастом и напряженностью поствакцинального гуморального иммунного ответа у лиц, ранее переболевших COVID-19. Иммунология. 2022; 43 (5): 583-92. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2022-43-5-583-592

13. Пащенков М.В., Хаитов М.Р. Иммунный ответ против эпидемических коронавирусов. Иммунология. 2020; 41 (1): 5-18. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2020-41-1-5-18

14. Астахова Е.А., Бязрова М.Г., Миляев С.М., Сухова М.М., Михайлов А.А., Морозов А.А., Прилипов А.Г., Филатов А.В. Анализ методом проточной цитометрии антител против шиповидного белка SARS-CoV-2 в сыворотке вакцинированных добровольцев. Иммунология. 2022; 43 (4): 447-57. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2022-43-4-447-457

15. Информация о регистрационном клиническом исследовании РКИ№869. [Электронный ресурс] // Государственный реестр лекарственных средств. URL: https://grls.rosminzdrav.ru/CIPermissionMini.aspx?CIStatementGUID=f6524838-2077-4b6d-b9aa-168a0aee6596&CIPermGUID=B52F67BB-11EB-41DB-AAFF-0CB8CC1CED61 (дата обращения 03.04.2024).

16. [Неопубликованный источник] ОБЗОР ПРОВЕДЕННЫХ КЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ Гам-КОВИД-Вак, Вакцина векторная для профилактики коронавирусной инфекции, вызываемой вирусом SARS^oV-2, 31.08.2021.

17. Фитилёв С.Б и соавт. Значение референтных интервалов лабораторных показателей при проведении клинических исследований ранних фаз с участием

здоровых добровольцев. КАЧЕСТВЕННАЯ КЛИНИЧЕСКАЯ ПРАКТИКА № 2 2018 г. DOI: 10.24411/2588-0519-2018-10046

18. Logunov D.Y. et al. Safety and immunogenicity of an rAd26 and rAd5 vector-based heterologous prime-boost COVID-19 vaccine in two formulations: two open, non-randomized phase 1/2 studies from Russia. Lancet. 2020;396(10255):887-97. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)31866-3

19. WHO COVID-19 vaccine tracker and landscape: [Электронный источник] // World Health Organization. URL: https://www.who.int/publications/m/item/draft-landscape-of-covid-19-candidate-vaccines (дата обращения: 04.03.2024).

20. Almeida A.J., Alpar H.O. Nasal delivery of vaccines. J Drug Target. 1996;3(6):455-67.

21. Boyaka P.N., Tafaro A., Fischer R., Leppla S.H., Fujihashi K., McGhee J.R. Effective mucosal immunity to anthrax: neutralizing antibodies and Th cell responses following nasal immunization with protective antigen. J Immunol. 2003;170(11):5636-43.

22. Neutra M.R., Kozlowski P.A. Mucosal vaccines: the promise and the challenge. Nature Rev Immunol. 2006;6:149-158

23. Kiyono H., Fukuyama S. NALT- versus Peyer's-patch-mediated mucosal immunity. Nat Rev Immunol. 2004;4:699-710

24. Watson D.S., Endsley A.N., Huang L. Design considerations for liposomal vaccines: influence of formulation parameters on antibody and cell-mediated immune responses to liposome associated antigens. Vaccine. 2012;30(13):2256-2272.

25. Ahmed O. Hassan et al., A Single-Dose Intranasal ChAd Vaccine Protects Upper and Lower Respiratory Tracts against SARS-CoV-2. Cell. 2020 Oct 1; 183(1): 169-184.e13 doi: 10.1016/j.cell.2020.08.026

26. Hassan A.O. et al. A single-dose intranasal ChAd vaccine protects upper and lower respiratory tracts against SARS-CoV-2. Cell. 2020; 183: 169-184.e13. DOI: 10.1016/j.cell.2020.08.026.

27. Du Y. et al. Intranasal administration of a recombinant RBD vaccine induced protective immunity against SARS-CoV-2 in mouse. Vaccine. 2021;39(16):2280-2287. doi:10.1016/j.vaccine.2021.03.006 DOI: 10.1016/j.vaccine.2021.03.006.

28. van Doremalen N. et al. Intranasal ChAdOx1 nCoV-19/AZD1222 vaccination reduces shedding of SARS-CoV-2 D614G in rhesus macaques. bioRxiv. 2021 Jan 11;2021.01.09.426058 doi: 10.1101/2021.01.09.426058.

29. Lavelle E.C., Ward R.W. Mucosal vaccines - fortifying the frontiers [published correction appears in Nat Rev Immunol. 2021 Aug 3. Nat Rev Immunol. 2022;22(4):236-250. doi:10.1038/s41577-021-00583-2

30. Hu, B., Guo, H., Zhou, P. et al. Characteristics of SARS-CoV-2 and COVID-19. Nat Rev Microbiol 19, 141-154 (2021). https://doi.org/10.1038/s41579-020-00459-7

31. Maucourant C. et al. Natural killer cell immunotypes related to COVID-19 disease severity. Sci. Immunol. 2020;5:eabd6832.

32. Krämer B. et al. Early IFN-a signatures and persistent dysfunction are distinguishing features of NK cells in severe COVID-19. Immunity 2021;54: 2650-2669.e14.

33. Sette A. et al. Adaptive immunity to SARS-CoV-2 and COVID-19. Cell. 2021;184(4):861-880. doi:10.1016/j.cell.2021.01.007

34. Long Q.-X. et al. Antibody responses to SARS-CoV-2 in patients with COVID-19. Nat. Med. 2020;26:845-848.

35. Yaugel-N. et al. Role of the humoral immune response during COVID-19: guilty or not guilty?. Mucosal Immunol 15, 1170-1180 (2022). https://doi.org/10.1038/s413 85-022-00569-w

36. Piccoli L. et al. Mapping Neutralizing and Immunodominant Sites on the SARS-CoV-2 Spike Receptor-Binding Domain by Structure-Guided High-Resolution Serology. Cell. 2020;183:1024-1042.e21.

37. Brouwer P.J.M. et al. Potent neutralizing antibodies from COVID-19 patients define multiple targets of vulnerability. Science. 2020;369:643-650.

38. Wajnberg A. et al. Robust neutralizing antibodies to SARS-CoV-2 infection persist for months. Science. 2020;370:1227-1230.

39. Suthar M.S. et al. Rapid generation of neutralizing antibody responses in COVID-19 patients. Cell Rep Med. 2020;1:100040.

40. Isa M.B. et al. Comparison of immunoglobulin G subclass profiles induced by measles virus in vaccinated and naturally infected individuals. Clin. Diagn. Lab Immunol. 2002;9, 693-697.

41. Maslowski K.M., Mackay C.R. Diet, gut microbiota and immune responses. Nat Immunol. 2011 Jan;12(1):5-9. doi: 10.1038/ni0111-5. PMID: 21169997.

42. Kau A.L., Ahern P.P., Griffin N.W., Goodman A.L., Gordon J.I. Human nutrition, the gut microbiome and the immune system. Nature. 2011 Jun 15;474(7351):327-36. doi: 10.1038/nature10213. PMID: 21677749; PMCID: PMC3298082.

43. Garrett W.S., Gordon J.I., Glimcher L.H. Homeostasis and inflammation in the intestine. Cell. 2010 Mar 19;140(6):859-70. doi: 10.1016/j.cell.2010.01.023. PMID: 20303876; PMCID: PMC2845719.

44. Brenchley J.M., Douek D.C. Microbial translocation across the GI tract. Annu Rev Immunol. 2012;30:149-73. doi: 10.1146/annurev-immunol-020711-075001. Epub 2012 Jan 3. PMID: 22224779; PMCID: PMC3513328.

45. Nagler-Anderson C. Man the barrier! Strategic defences in the intestinal mucosa. Nat Rev Immunol. 2001 Oct;1(1):59-67. doi: 10.1038/35095573. PMID: 11905815.

46. Salzman N.H. et al. Enteric defensins are essential regulators of intestinal microbial ecology. Nat Immunol. 2010 Jan;11(1):76-83. doi: 10.1038/ni.1825. Epub 2009 Oct 22. PMID: 19855381; PMCID: PMC2795796.

47. Cheroutre H., Lambolez F., Mucida D. The light and dark sides of intestinal intraepithelial lymphocytes. Nat Rev Immunol. 2011 Jun 17;11(7):445-56. doi: 10.1038/nri3007. PMID: 21681197; PMCID: PMC3140792.

48. Kiyono H., Kunisawa J., McGhee J.R., Mestecky J. (2008) The mucosal immune system. In: Paul WE, editor. Fundamental immunology. pp. 983-1030. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins.

49. Campbell D.J., Butcher E.C. Rapid acquisition of tissue-specific homing phenotypes by CD4(+) T cells activated in cutaneous or mucosal lymphoid tissues. J Exp Med. 2002 Jan 7;195(1):135-41. doi: 10.1084/jem.20011502. PMID: 11781372; PMCID: PMC2196018.

50. Iwata M., Hirakiyama A., Eshima Y., Kagechika H., Kato C., Song S.Y. Retinoic acid imprints gut-homing specificity on T cells. Immunity. 2004 Oct;21(4):527-38. doi: 10.1016/j.immuni.2004.08.011. PMID: 15485630.

51. Izcue A., Coombes J.L., Powrie F. Regulatory lymphocytes and intestinal inflammation. Annu Rev Immunol. 2009;27:313-38. doi: 10.1146/annurev.immunol.021908.132657. PMID: 19302043.

52. Brandtzaeg P. Induction of secretory immunity and memory at mucosal surfaces. Vaccine. 2007 Jul 26;25(30):5467-84. doi: 10.1016/j.vaccine.2006.12.001. Epub 2006 Dec 15. PMID: 17227687.

53. Brandtzaeg P. Function of mucosa-associated lymphoid tissue in antibody formation. Immunol Invest. 2010;39(4-5):303-55. doi: 10.3109/08820131003680369. Erratum in: Immunol Invest. 2010;39(7):780. PMID: 20450282.

54. Fujihashi K., Boyaka P.N., McGhee J.R. (2008) Host defenses at mucosal surfaces. In: Rich RT, et al.., editors. Clinical immunology. pp 287-304. Philadelphia: Mosby Elsevier.

55. Macpherson A.J., Uhr T. Induction of protective IgA by intestinal dendritic cells carrying commensal bacteria. Science. 2004 Mar 12;303(5664):1662-5. doi: 10.1126/science.1091334. PMID: 15016999.

56. Chi X. et al. A neutralizing human antibody binds to the N-terminal domain of the Spike protein of SARS-CoV-2. Science,2020, vol. 369, no. 6504, pp. 650-655. doi: 10.1126/science.abc6952

57. Duong D. Alpha, Beta, Delta, Gamma: What's important to know about SARS-CoV-2 variants of concern? CMAJ,2021, vol. 193, no. 27, pp. E1059-E1060. doi: 10.1503/cmaj .1095949

58. Liu L. et al. Potent neutralizing antibodies against multiple epitopes on SARS-CoV-2 spike. Nature,2020, vol. 584, no. 7821, pp. 450-456. doi: 10.1038/s41586-020-2571-7

59. Nie J. et al. Quantification of SARS-CoV-2 neutralizing antibody by a pseudotyped virus-based assay. Nat. Protoc.,2020, vol. 15, no. 11, pp. 3699-3715. doi: 10.1038/s41596-020-0394-5

60. Zhao H. et al. Tocilizumab combined with favipiravir in the treatment of COVID-19: a multicenter trial in a small sample size. Biomed. Pharmacother.,2021, vol. 133: 110825. doi: 10.1016/j.biopha.2020.110825.

61. Campi-Azevedo A.C. et al. Collaborative Group for Studies of Yellow Fever Vaccine. 17DD yellow fever revaccination and heightened long-term immunity in populations of disease-endemic areas, Brazil. Emerg. Infect. Dis.,2019, vol. 25, no. 8, pp. 1511-1521. doi: 10.3201/eid2508.181432

62. Cohen B.J., Doblas D., Andrews N. Comparison of plaque reduction neutralisation test (PRNT) and measles virus-specific IgG ELISA for assessing immunogenicity of measles vaccination. Vaccine,2008, vol. 26, no. 50, pp. 6392-6397. doi: 10.1016/j.vaccine.2008.08.074

63. Eyal O. et al. Development of a tissue-culture-based enzyme-immunoassay method for the quantitation of anti-vaccinia-neutralizing antibodies in human sera. J. Virol. Methods,2005, vol. 130, no. 1-2, pp. 15-21. doi: 10.1016/j.jviromet.2005.05.027

64. Cohen B.J. et al. WHO working group on measles plaque reduction neutralization test. Plaque reduction neutralization test for measles antibodies: description of a standardised laboratory method for use in immunogenicity studies of aerosol vaccination. Vaccine,2007, vol. 26, no. 1, pp. 59-66. doi: 10.1016/j.vaccine.2007.10.046

65. Rogers T.F. et al. Isolation of potent SARS-CoV-2 neutralizing antibodies and protection from disease in a small animal model. Science,2020, vol. 369, no. 6506, pp. 956-963. doi: 10.1126/science.abc7520

66. Ma B, Tao M, Li Z, Zheng Q, Wu H, Chen P. Mucosal vaccines for viral diseases: Status and prospects. Virology. 2024 May;593:110026. doi: 10.1016/j.virol.2024.110026. Epub 2024 Feb 15. PMID: 38373360.

67. Pormohammad A, Zarei M, Ghorbani S, Mohammadi M, Razizadeh MH, Turner DL, Turner RJ. Efficacy and Safety of COVID-19 Vaccines: A Systematic Review and Meta-Analysis of Randomized Clinical Trials. Vaccines (Basel). 2021 May 6;9(5):467. doi: 10.3390/vaccines9050467. PMID: 34066475; PMCID: PMC8148145.

68. Frey W H.III. Neurologic agents for nasal administration to the brain 1991. [Электронный источник] // URL: https://patentscope.wipo.int/search/en/detail.jsf?docId=W01991007947&tab=PCTBIB LIO (дата обращения 03.04.2024).

69. Vidgren M.T., Kublik H. Nasal delivery systems and their effect on deposition and absorption. Adv Drug Deliv Rev. 1998 Jan 5;29(1-2):157-177. doi: 10.1016/s0169-409x(97)00067-7. PMID: 10837586.

70. Djupesland P.G. Nasal drug delivery devices: characteristics and performance in a clinical perspective-a review. Drug Deliv Transl Res. 2013 Feb;3(1):42-62. doi: 10.1007/s13346-012-0108-9. Epub 2012 Oct 18. PMID: 23316447; PMCID: PMC3539067.

71. Pires A., Fortuna A., Alves G., Falcao A. Intranasal drug delivery: how, why and what for? J Pharm Pharm Sci. 2009;12(3):288-311. doi: 10.18433/j3nc79. PMID: 20067706.

72. Salib R.J, Howarth P.H. Safety and tolerability profiles of intranasal antihistamines and intranasal corticosteroids in the treatment of allergic rhinitis. Drug Saf. 2003;26(12):863-93. doi: 10.2165/00002018-200326120-00003. PMID: 12959630.

73. Janssens M.M., Vanden Bussche G. Levocabastine: an effective topical treatment of allergic rhinoconjunctivitis. Clin Exp Allergy. 1991 May;21 Suppl 2:29-36. doi: 10.1111/j.1365-2222.1991.tb01755.x. PMID: 1680536.

74. Barnes P.J. Molecular mechanisms of glucocorticoid action in asthma. Pulm Pharmacol Ther. 1997;10(1):3-19. doi: 10.1006/pupt.1997.0074. PMID: 9344828.

75. Ghadiri M., Young P.M., Traini D. Strategies to Enhance Drug Absorption via Nasal and Pulmonary Routes. Pharmaceutics. 2019 Mar 11;11(3): 113. doi: 10.3390/pharmaceutics11030113. PMID: 30861990; PMCID: PMC6470976.

76. Costantino H.R., Illum L., Brandt G., Johnson P.H., Quay S.C. Intranasal delivery: physicochemical and therapeutic aspects. Int J Pharm. 2007 Jun 7;337(1-2):1-24. doi: 10.1016/j.ijpharm.2007.03.025. Epub 2007 Mar 25. PMID: 17475423.

77. Grassin-Delyle S. et al. Intranasal drug delivery: an efficient and noninvasive route for systemic administration: focus on opioids. Pharmacol Ther. 2012 Jun;134(3):366-79. doi: 10.1016/j.pharmthera.2012.03.003. Epub 2012 Mar 23. PMID: 22465159.

78. Battaglia L. et al. Lipid nanoparticles for intranasal administration: application to nose-to-brain delivery. Expert Opin Drug Deliv. 2018 Apr;15(4):369-378. doi: 10.1080/17425247.2018.1429401. Epub 2018 Jan 22. PMID: 29338427.

79. Keller L.A., Merkel O., Popp A. Intranasal drug delivery: opportunities and toxicologic challenges during drug development. Drug Deliv Transl Res. 2022; 12(4):735-757. doi: 10.1007/s13346-020-00891-5

80. Landau A.J., Frishman W.H., Alturk N., Adjei-Poku M., Fornasier-Bongo M., Furia S. Improvement in exercise tolerance and immediate beta-adrenergic blockade with intranasal propranolol in patients with angina pectoris. Am J Cardiol. 1993 Nov 1;72(14):995-8. doi: 10.1016/0002-9149(93)90851-3. PMID: 8213600.

81. Landau A.J., Eberhardt R.T., Frishman W.H. Intranasal delivery of cardiovascular agents: an innovative approach to cardiovascular pharmacotherapy. Am Heart J. 1994 Jun;127(6):1594-9. doi: 10.1016/0002-8703(94)90391-3. PMID: 8197988.

82. Illum L et al. Intranasal delivery of morphine. J Pharmacol Exp Ther. 2002 Apr;301(1):391-400. doi: 10.1124/jpet.301.1.391. PMID: 11907197.

83. Fortuna A., Alves G., Serralheiro A., Sousa J., Falcao A. Intranasal delivery of systemic-acting drugs: small-molecules and biomacromolecules. Eur J Pharm Biopharm. 2014 Sep;88(1):8-27. doi: 10.1016/j.ejpb.2014.03.004. Epub 2014 Mar 28. PMID: 24681294.

84. EMA C. Assessment report Nyxoid International non-proprietary name: naloxone. EMA/CHMP/690823/2017

85. Scott R.T. Jr., Ross B., Anderson C., Archer D.F. Pharmacokinetics of percutaneous estradiol: a crossover study using a gel and a transdermal system in

comparison with oral micronized estradiol. Obstet Gynecol. 1991 May;77(5):758-64. PMID: 2014092.

86. Mattsson L.A. et al. Clinical equivalence of intranasal and oral 17beta-estradiol for postmenopausal symptoms. Am J Obstet Gynecol. 2000 Mar;182(3):545-52. doi: 10.1067/mob.[phone]. PMID: 10739506.

87. Illum L. Nasal drug delivery - recent developments and future prospects. J Control Release. 2012 Jul 20;161(2):254-63. doi: 10.1016/j.jconrel.2012.01.024. Epub 2012 Jan 24. PMID: 22300620.

88. Graff C.L., Pollack G.M. Functional evidence for P-glycoprotein at the nose-brain barrier. Pharm Res. 2005 Jan;22(1):86-93. doi: 10.1007/s11095-004-9013-3. PMID: 15771234.

89. Khan A.R., Liu M., Khan M.W., Zhai G. Progress in brain targeting drug delivery system by nasal route. J Control Release. 2017 Dec 28;268:364-389. doi: 10.1016/j.jconrel.2017.09.001. Epub 2017 Sep 6. PMID: 28887135.

90. Wolak D.J., Thorne R.G. Diffusion of macromolecules in the brain: implications for drug delivery. Mol Pharm. 2013 May 6;10(5):1492-504. doi: 10.1021/mp300495e. Epub 2013 Jan 31. PMID: 23298378; PMCID: PMC3646902.

91. Malhotra M., Tomaro-Duchesneau C., Saha S., Prakash S. Intranasal, siRNA Delivery to the Brain by TAT/MGF Tagged PEGylated Chitosan Nanoparticles. J Pharm (Cairo). 2013;2013:812387. doi: 10.1155/2013/812387. Epub 2013 Sep 12. PMID: 26555995; PMCID: PMC4590831.

92. Rodriguez M. et al. Intranasal drug delivery of small interfering RNA targeting Beclin1 encapsulated with polyethylenimine (PEI) in mouse brain to achieve HIV attenuation. Sci Rep. 2017 May 12;7(1):1862. doi: 10.1038/s41598-017-01819-9. Erratum in: Sci Rep. 2018 Mar 14;8(1):4778. PMID: 28500326; PMCID: PMC5431946.

93. van Woensel M. et al. Formulations for Intranasal Delivery of Pharmacological Agents to Combat Brain Disease: A New Opportunity to Tackle GBM? Cancers (Basel). 2013 Aug 14;5(3):1020-48. doi: 10.3390/cancers5031020. PMID: 24202332; PMCID: PMC3795377.

94. Balyasnikova I.V. et al. Intranasal delivery of mesenchymal stem cells significantly extends survival of irradiated mice with experimental brain tumors. Mol Ther. 2014 Jan;22(1):140-8. doi: 10.1038/mt.2013.199. Epub 2013 Sep 3. PMID: 24002694; PMCID: PMC3978787.

95. Yu-Taeger L. et al. Intranasal Administration of Mesenchymal Stem Cells Ameliorates the Abnormal Dopamine Transmission System and Inflammatory Reaction in the R6/2 Mouse Model of Huntington Disease. Cells. 2019 Jun 15;8(6):595. doi: 10.3390/cells8060595. PMID: 31208073; PMCID: PMC6628278.

96. Romeo V.D., deMeireles J., Sileno A.P., Pimplaskar H.K., Behl C.R. Effects of physicochemical properties and other factors on systemic nasal drug delivery. Adv Drug Deliv Rev. 1998 Jan 5;29(1-2):89-116. doi: 10.1016/s0169-409x(97)00063-x. PMID: 10837582.

97. Dokuyucu R. et al. Systemic side effects of locally used oxymetazoline. Int J Clin Exp Med. 2015 Feb 15;8(2):2674-8. PMID: 25932218; PMCID: PMC4402865.

98. Dotiwala F, Upadhyay AK. Next Generation Mucosal Vaccine Strategy for Respiratory Pathogens. Vaccines (Basel). 2023 Oct 12;11(10):1585. doi: 10.3390/vaccines11101585. PMID: 37896988; PMCID: PMC10611113.

99. Lavelle E.C., Ward R.W. Mucosal vaccines—Fortifying the frontiers. Nat. Rev. Immunol. 2022;22:236-250. doi: 10.1038/s41577-021-00583-2

100. Randall T.D., Mebius R.E. The development and function of mucosal lymphoid tissues: A balancing act with micro-organisms. Mucosal Immunol. 2014;7:455-466. doi: 10.1038/mi.2014.11.

101. Kleinnijenhuis J., Quintin J., Preijers F., Benn C.S., Joosten L.A., Jacobs C., Van Loenhout J., Xavier R.J., Aaby P., Van Der Meer J.W. Long-lasting effects of BCG vaccination on both heterologous Th1/Th17 responses and innate trained immunity. J. Innate Immun. 2014;6:152-158. doi: 10.1159/000355628.

102. Lund N., Andersen A., Hansen A.S.K., Jepsen F.S., Barbosa A., Biering-S0rensen S., Rodrigues A., Ravn H., Aaby P., Benn C.S. The effect of oral polio vaccine at birth on infant mortality: A randomized trial. Clin. Infect. Dis. 2015;61:1504-1511. doi: 10.1093/cid/civ617.

103. Rieckmann A., Villumsen M., Sorup S., Haugaard L.K., Ravn H., Roth A., Baker J.L., Benn C.S., Aaby P. Vaccinations against smallpox and tuberculosis are associated with better long-term survival: A Danish case-cohort study 1971-2010. Int. J. Epidemiol. 2017;46:695-705. doi: 10.1093/ije/dyw120.

104. Schrum J.E., Crabtree J.N., Dobbs K.R., Kiritsy M.C., Reed G.W., Gazzinelli R.T., Netea M.G., Kazura J.W., Dent A.E., Fitzgerald K.A., et al. Cutting Edge: Plasmodium falciparum Induces Trained Innate Immunity. J. Immunol. 2018;200:1243-1248. doi: 10.4049/jimmunol.1701010.

105. Hong M., Sandalova E., Low D., Gehring A.J., Fieni S., Amadei B., Urbani S., Chong Y.S., Guccione E., Bertoletti A. Trained immunity in newborn infants of HBV-infected mothers. Nat. Commun. 2015;6:6588. doi: 10.1038/ncomms7588.

106. Ifrim D.C., Quintin J., Joosten L.A., Jacobs C., Jansen T., Jacobs L., Gow N.A., Williams D.L., Van Der Meer J.W., Netea M.G. Trained immunity or tolerance: Opposing functional programs induced in human monocytes after engagement of various pattern recognition receptors. Clin. Vaccine Immunol. 2014;21:534-545. doi: 10.1128/CVI.00688-13.

107. Wang S., Liang B., Wang W., Li L., Feng N., Zhao Y., Wang T., Yan F., Yang S., Xia X. Viral vectored vaccines: Design, development, preventive and therapeutic applications in human diseases. Signal Transduct. Target. Ther. 2023;8:149. doi: 10.1038/s41392-023-01408-5.

108. How nasal-spray vaccines could change the pandemic. Nature. News feature. 06 September 2022. https://www.nature.com/articles/d41586-022-02824-3

109. WHO R&D Blueprint novel Coronavirus COVID-19 Therapeutic Trial Synopsis. Draft February 18, 2020. © World Health Organization 2020

110. Khoury D.S. et al. Neutralizing antibody levels are highly predictive of immune protection from symptomatic SARS-CoV-2 infection. Nat Med. 2021 Jul;27(7): 1205-1211. doi: 10.1038/s41591-021-01377-8. Epub 2021 May 17. PMID: 34002089.

111. Kiyono H., Fukuyama S. NALT- versus Peyer's-patch-mediated mucosal immunity Kiyono H., Fukuyama S. NALT- versus Peyer's-patch-mediated mucosal immunity. Nat Rev Immunol. 2004; 4: 699-710. DOI: https://doi.org/10.1038/nri1439

112. Channappanavar R., Zhao J., Perlman S. T cell-mediated immune response to respiratory coronaviruses. Immunol Res. 2014; 59 (1-3): 118-28. DOI: https://doi.org/10.1007/s12026-014-8534-z

113. Tan W., Lu Y., Zhang J., Wang J., Dan Y., Tan Zh., He X., Qian Ch., Sun Q., Hu Q., Liu H., Ye S., Xiang X., Zhou Y., Zhang W., Guo Y., Wang X, He W., Wan X., Sun F., Wei Q., Chen C., Pan G., Xia J., Mao Q., Chen Y., Deng G. Viral kinetics and antibody responses in patients with COVID-19. MedRxiv. 2020.

114. Ibarrondo F.J., Fulcher J.A., Goodman-Meza D., Elliott J., Hofmann C., Hausner M.A., Ferbas K.G., Tobin N.H., Aldrovandi G.M., Yang O.O. Rapid decay of anti-SARSCoV-2 antibodies in persons with mild Covid-19. N Engl J Med. 2020; 383 (11): 1085-7. DOI: https://doi.org/10.1056/NEJMc2025179

115. COVID19 vaccine tracker: [Электронный ресурс] URL: https://covid19.trackvaccines.org/vaccines/ (дата обращения 04.03.2024).

116. Kuldeep D. et al. COVID-19 intranasal vaccines: current progress, advantages, prospects, and challenges, Human Vaccines & Immunotherapeutics, 18:5, 2045853, DOI: 10.1080/21645515.2022.2045853.

117. Aqu A. et al. Intranasal COVID-19 vaccines: From bench to bed. VOLUME 76, 103841, FEBRUARY 01, 2022, 2022 DOI: https://doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.103841.

118. Pilapitiya D. et al. Mucosal vaccines for SARS-CoV-2: triumph of hope over experience. eBioMedicine, Volume 92, 104585. DOI:https: //doi.org/10.1016/j .ebiom.2023.104585

119. Singh C., Verma S., Reddy P. et al. Phase III Pivotal comparative clinical trial of intranasal (iNCOVACC) and intramuscular COVID 19 vaccine (Covaxin®). npj Vaccines 8, 125 (2023). https://doi.org/10.1038/s41541-023-00717-8

120. Tang R. et al. Safety and immunogenicity of aerosolised Ad5-nCoV, intramuscular Ad5-nCoV, or inactivated COVID-19 vaccine CoronaVac given as the

second booster following three doses of CoronaVac: a multicentre, open-label, phase 4, randomised trial. The Lancet Respiratory Medicine, Volume 11, Issue 7, 613 - 623

121. Li J.X. et al. Safety and immunogenicity of heterologous boost immunisation with an orally administered aerosolised Ad5-nCoV after two-dose priming with an inactivated SARS-CoV-2 vaccine in Chinese adults: a randomised, open-label, single-centre trial. Lancet Respir Med. 2022, vol. 10, no. 8, pp. 739-748.

122. Madhavan M. et al. Tolerability and immunogenicity of an intranasally-administered adenovirus-vectored COVID-19 vaccine: An open-label partially-randomized ascending dose phase I trial. EBioMedicine. 2022, vol. 85, pp. 104298.

123. China and India approve nasal COVID vaccines — are they a game changer? // [Электронный источник] // Nature. News. 07 September 2022. https://www.nature.com/articles/d41586-022-02851-0 (дата обращения: 04.03.2024)

124. Russell M.W., Moldoveanu Z., Ogra P.L., Mestecky J. Mucosal Immunity in COVID-19: A Neglected but Critical Aspect of SARS-CoV-2 Infection. Front. Immunol. 2020;11:611337. doi: 10.3389/fimmu.2020.611337.

125. Guidelines on clinical evaluation of vaccines: regulatory expectations. WHO/BS/2016.2287 [Электронный источник] // URL: https://www.who. int/biologicals/BS2287_Clinical_guidelines_final_LINE_NOs_20_Jul y_2016.pdf (дата обращения 04.03.2024)

126. Tukhvatulin A.I. et al. An open, non-randomised, phase 1/2 trial on the safety, tolerability, and immunogenicity of single-dose vaccine "Sputnik Light" for prevention of coronavirus infection in healthy adults. The Lancet Regional Health -Europe 11 (2021) 100241. DOI:https://doi.org/10.1016/j.lanepe.2021.100241

127. Callegaro A. et al. Antibody response to SARS-CoV-2 vaccination is extremely vivacious in subjects with previous SARS-CoV-2 infection. J Med Virol. 2021;93:4612-4615. https://doi.org/10.1002/jmv.26982

128. [Неопубликованный источник] AeroPump 11701000 Test Report, eff date 18.08.2021

129. Gorchakov A.A. et al. Isolation of a panel of ultra-potent human antibodies neutralizing SARS-CoV-2 and viral variants of concern. Cell Discovery, 2021, vol. 7, no. 1, pp. 1-15. doi: 10.1038/s41421-021-00340-8

130. ICH Topic E 2 A Clinical Safety Data Management: Definitions and Standards for Expedited Reporting. June 1995 CPMP/ICH/377/95 // [Электронный источник] URL: https://www.ema.europa.eu/en/documents/scientific-guideline/international-conference-harmonisation-technical-requirements-registration-pharmaceuticals-human-use_en-15.pdf (дата обращения 04.03.2024)

131. Food and Drug Administration. Guidance for industry: Toxicity grading scale for healthy adult and adolescent volunteers enrolled in preventive vaccine clinical trials. Rockville, MD: U.S. Department of Health and Human Services; 2007b // [Электронный источник] URL: http://www.fda.gov/downloads/BiologicsBloodVaccines/GuidanceComplianceRegulato rylnform ation/Guidances/Vaccines/ucm091977.pdf (дата обращения 04.03.2024)

132. Common Terminology Criteriafor Adverse Events (CTCAE)Version 5.0. Published: November 27, 2017. U.S. DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES // [Электронный источник] URL: https://ctep.cancer.gov/protocoldevelopment/electronic_applications/docs/ctcae_v5_qui ck_reference_5x7.pdf (дата обращения 04.03.2024)

133. R Core Team. R: A Language and Environment for Statistical Computing [Электронный источник] // R Foundation for Statistical Computing. 2020. URL: https://www.R-project.org (дата обращения: 04.03.2024)

134. Wassmer G. and Pahlke F. (2022). rpact: Confirmatory Adaptive Clinical Trial Design and Analysis. R package version 3.2.1. [Электронный источник] // R Foundation for Statistical Computing. 2020. https://CRAN.R-project.org/package=rpact (дата обращения: 04.03.2024)

135. Jennison C and Turnbull BW (2000), Group Sequential Methods with Applications to Clinical Trials. Boca Raton: Chapman and Hall.

136. Zhu, Fengcai et al. Safety and efficacy of the intranasal spray SARS-CoV-2 vaccine dNS1-RBD: a multicentre, randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 3 trial. The Lancet Respiratory Medicine, Volume 11, Issue 12, 1075 - 1088

137. Kehagia E, Papakyriakopoulou P, Valsami G. Advances in intranasal vaccine delivery: A promising non-invasive route of immunization. Vaccine. 2023 Jun 1;41(24):3589-3603. doi: 10.1016/j.vaccine.2023.05.011. Epub 2023 May 11. PMID: 37179163; PMCID: PMC10173027.

138. Jiang Y., Wu Q., Song P., You C. The Variation of SARS-CoV-2 and Advanced Research on Current Vaccines. Front. Med. 2021, vol. 8: pp. 806641

139. Heinz F.X., Stiasny K. Distinguishing features of current COVID-19 vaccines: Knowns and unknowns of antigen presentation and modes of action. NPJ Vaccines. 2021; vol. 6, no. 1, pp. 1-13.

140. Lombardi A. et al. Mini Review Immunological Consequences of Immunization with COVID-19 mRNA Vaccines: Preliminary Results. Front. Immunol. 2021; vol. 12, pp. 657711

141. Gilbert P.B. et al. Immune Assays Team§; Moderna, Inc. Team§; Coronavirus Vaccine Prevention Network (CoVPN)/Coronavirus Efficacy (COVE) Team§; United States Government (USG)/CoVPN Biostatistics Team§. Immune correlates analysis of the mRNA-1273 COVID-19 vaccine efficacy clinical trial. Science, 2022375(6576), 43-50. vol. 375, no. 6576 pp. 43-50.

142. Chen SC, Eiting K, Cui K, Leonard AK, Morris D, Li CY, Farber K, Sileno AP, Houston ME Jr, Johnson PH, Quay SC, Costantino HR. Therapeutic utility of a novel tight junction modulating peptide for enhancing intranasal drug delivery. J Pharm Sci. 2006 Jun;95(6):1364-71. doi: 10.1002/jps.20510. PMID: 16625659.

143. Ozsoy, Y.; Gungor, S.; Cevher, E. Nasal Delivery of High Molecular Weight Drugs. Molecules 2009, 14, 3754-3779

144. Harrison, A.G.; Lin, T.; Wang, P. Mechanisms of SARS-CoV-2 Transmission and Pathogenesis. Trends Immunol. 2020, 41, 1100-1115.

145. Nian, X.; Zhang, J.; Huang, S.; Duan, K.; Li, X.; Yang, X. Development of Nasal Vaccines and the Associated Challenges. Pharmaceutics 2022, 14, 1983. https://doi.org/ 10.3390/pharmaceutics14101983

146. Logunov D.Y. et al. Safety and efficacy of an rAd26 and rAd5 vector-based heterologous prime-boost COVID-19 vaccine: an interim analysis of a randomized controlled phase 3 trial in Russia [published correction appears in Lancet. 2021 Feb 20;397(10275):670]. Lancet. 2021;397(10275):671-681. doi:10.1016/S0140-6736(21)00234-8