Сравнение нормальных и опухолевых CD5-положительных B-клеток человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.04, кандидат наук Поташникова, Дарья Марковна

• Поташникова, Дарья Марковна
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Поташникова, Дарья Марковна

ГЛАВА 1. ВВЕДЕНИЕ......................................................................................................................................................................................................4

1.1 Актуальность проблемы..........................................................................................................................................4

1.2 Цель и задачи исследования................................................................................................................................5

1.3 Научная новизна и практическая значимость работы..................................................................6

1.4 Апробация работы..........................................................................................................................................................7

ГЛАВА 2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ....................................................................................................................................................8

2.1 В-лимфоциты в норме. Дифференцировка, созревание и иммунофенотип В-клеток..................................................................................................................................................................................................8

2.1.1 Дифференцировка В-клеток............................................................................................................................................8

2.1.2 Синтез иммуноглобулинов. Антиген-независимый этап созревания В-

клеток........................................................................................................................................................................................................................11

2.1.3 Антиген-зависимоый этап созревания В-клеток................................................................................13

2.1.4 В-клеточный рецептор и сигнальный каскад от него....................................................................15

2.1.5 Иммунофенотип В-клеток..............................................................................................................................................18

2.2 В-клеточные опухоли. Дифференциальная диагностика. Гетерогенность в

группе СБ5-положительных В-клеточных лимфом..................................................................................22

2.2.1 Не-Ходжкинские лимфомы..............................................................................................................................................22

2.2.2 Дифференциальная диагностика лимфом......................................................................................................24

2.2.3 Возможные предшественники СИ5-положительных лимфом............................................25

2.3 Биология передачи сигнала в СЭ5-положительных лимфомах............................................29

2.3.1 Строение В-клеточного рецептора СИ5-положительных лимфом..............................29

2.3.2 Строение ВСЯ-каскада СБ5-положительных лимфом................................................................30

2.4 Методические подходы к исследованию В-клеточных популяций..................................32

2.4.1 Клеточная сортировка чистых субпопуляций для анализа уровней

экспрессии генов............................................................................................................................................................................................32

2.4.2 Подходы к исследованию В-клеток при помощи ПЦР в реальном времени.

Проблема нормализации данных при анализе уровней экспрессии мРНК..............................34

ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ..............................................................................36

3.1 Пациенты и контроли..................................................................................................................................................36

3.2 Гистология и иммуногистохимия....................................................................................................................37

3.3 Проточная цитофлуориметрия............................................................................................................................37

3.4 Клеточная сортировка................................................................................................................................................38

3.5 Получение РНК и кДНК..........................................................................................................................................39

3.6 Подбор праймеров..........................................................................................................................................................39

3.7 ПЦР в реальном времени..........................................................................................................................................41

3.8 Нормализация и статистический анализ....................................................................................................42

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ..............................................................................................43

4.1 Классификация исследованных в работе опухолевых тканей и реактивных контролей........................................................................................................................................................................................43

4.2 Определение уровней экспрессии мРНК генов сигнальных белков BCR-

каскада в опухолевой и реактивной лимфоидной ткани......................................................................51

4.3 Описание CD5+CD19+ популяции неопухолевых лимфоцитов миндалин..............58

4.4 Сортировка нормальных и опухолевых В-клеток. Определение уровней экспрессии мРНК генов сигнальных белков BCR-каскада в чистых субпопуляциях..........................................................................................................................................................................62

4.5 Совместный анализ данных по экспрессии мРНК генов сигнальных белков BCR-каскада в отсортированных и неотсортированных лимфоидных образцах..........68

4.6 Анализ экспрессии ZAP-70 в CD5+CD19+ В-клетках миндалин методом

проточной цитофлуориметрии....................................................................................................................................71

ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ..................................................................................................73

5.1 Опухолевые В-клетки В-ХЛЛ и ЛКМЗ имеют уникальный профиль экспрессии сигнальных белков....................................................................................................................................73

5.2 Клетки лимфом из «серой зоны» между В-ХЛЛ и ЛКМЗ отличаются как по экспрессии поверхностных антигенов, так и по уровням экспрессии сигнальных компонентов BCR-каскада..............................................................................................................................................74

5.3 Характеристика CD5-положительных клеток миндалин............................................................77

5.4 Уровни экспрессии генов сигнальных молекул BCR-каскада в норме и при

патологии........................................................................................................................................................................................78

ГЛАВА 6. ЗАКЛЮЧЕНИЕ..............................................................................................................................................80

ВЫВОДЫ....................................................................................................................................................................................................................................................82

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ..............................................................83

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ................................................................................................................................................................................................85

ПРИЛОЖЕНИЯ........................................................................................................................................................................106

ГЛАВА 1. ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сравнение нормальных и опухолевых CD5-положительных B-клеток человека»

1.1 Актуальность проблемы

В-клетки - потомки общего лимфоидного предшественника, прошедшего в процессе дифференцировки и созревания ряд стадий с последовательной сменой поверхностного иммунофенотипа, эпигенетического и транскрипционного профилей. Основополагающую роль в выживании и дифференцировке B-лимфоцита играет сигнал фосфорилирования, получаемый через B-клеточный рецептор (BCR): митогенные и антиапоптотические сигналы передаются в ядро через BCR и ко-рецепторные комплексы. В зависимости от привлеченных ко-рецепторов сигнал может изменяться и приводить к разным последствиям для B-клетки. Помимо специфического комплекса BCR на поверхности B-клетки находится большой набор различных молекул, являющихся рецепторами, ко-рецепторами, лигандами, транспортерами или молекулами адгезии. Вместе они обеспечивают активацию B-клеток, их миграцию в организме по сложным траекториям и, в конечном счете, выполнение их функции в составе иммунной системы.

Набор поверхностных молекул на мембране B-лимфоцита позволяет дать развернутую характеристику его происхождения и функционального состояния. Значительный объем информации о структуре, функциях и паттернах экспрессии поверхностных антигенов, накопленный на сегодняшний день, позволяет описывать многообразие В-клеточных субпопуляций в норме, а также при патологических состояниях. Так, диагностика В-клеточных лимфом базируется на развернутом описании поверхностных антигенов. Однако поиск сходств и различий между нозологическими группами зачастую ограничивается анализом поверхностных маркеров и мутационного статуса B-клеточного рецептора, и не касается экспрессии проводящих элементов сигнального BCR-каскада, расположенных в цитоплазме.

Передача сигнала от зрелого BCR обеспечивается BCR-ассоциированными тирозинкиназами и тирозинфосфатазами (SYK, LYN, SHP-1, ZAP-70), которые активируют универсальные сигнальные молекулы - PI3K, PLC, РКВ и РКС (DeFranco, 1997; Geisberger et al., 2003; Harwood, Batista, 2010). Эффекторными молекулами BCR-каскада являются транскрипционные факторы, обеспечивающие размножение и выживание клеток. Так как важнейшие характерные свойства опухолевых клеток обусловлены аномальным функционированием сигнальных путей, контролирующих клеточный цикл и апоптоз (Hanahan, Weinberg, 2000; Hanahan, Weinberg, 2011), актуальным представляется изучение экспрессии сигнальных белков BCR-каскада в различных В-клеточных лимфомах.

В гетерогенной группе не-Ходжкинских лимфом выделяется значительная подгруппа В-зрелоклеточных лимфом с неканонической экспрессией маркера CD5. Наибольшую часть случаев в Восточной Европе составляет B-клеточный хронический лимфолейкоз (B-XJ1JI) (Sant et al., 2010), более редким и более агрессивным заболеванием является лимфома из клеток мантийной зоны (J1KM3). Кроме того, выделяется ряд промежуточных форм между B-XJIJI и JIKM3, представляющих трудность для современной диагностики (Zhao, 2009). Отправной точкой в исследовании сигналинга CD5+ B-клеточных опухолей стало разделение группы В-XJ1JI на две подгруппы по способности запускать BCR-каскад (Lankester et al., 1995; Chiorazzi et al., 2005). На сегодняшний день для клеток B-XJIJI были показаны аберрантные уровни экспрессии верхних проводящих компонентов BCR сигнального каскада: CD79b (Cajiao et al., 2007), тирозинкиназ SYK и LYN, а также добавление к общему опухолевому фенотипу неканонической тирозинкиназы ZAP-70 (Chen et al., 2002, Seda, Mraz, 2015). Исследований BCR-ассоциированных сигнальных белков для других CD5+ B-клеточных лимфом проводилось сравнительно мало. На основании данных об гиперэкспрессии циклина D1 и общем высоком уровне активации клеток JIKM3 при общем низком уровне фосфорилирования сигнальных компонентов был сделан вывод об их неспособности проводить сигнал извне (de Boer et al., 1997). Исследования методом microarray показали значительно повышенные уровни компонентов PI3K-Akt и Wnt сигнальных путей при JIKM3, но данные о BCR-ассоциированных молекулах в них отсутствовали (Rizzatti et al., 2005).

Проблема клеток-предшественников CD 5-положительных лимфом также представляет значительный интерес: ведется поиск субпопуляции нормальных B-клеток, наиболее близкой к B-XJIJI по фенотипу (Klein, Dalla-Favera, 2005). CD5+ B-клетки миндалин человека являются важными претендентами на роль опухолевых предшественников (Dono et al., 2004), хотя степень сходства этих групп опухолевых и нормальных клеток требует дальнейшего изучения.

1.2 Цель и задачи исследования

Целью данной работы было разделение B-клеточных лимфом и нормальных В-лимфоцитов по уровню экспрессии генов сигнальных BCR-ассоциированных белков.

Для выполнения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Подробно охарактеризовать и разбить на подгруппы выборку первичных CD5+ В-

клеточных лимфом с использованием ключевых диагностических методов.

2. Определить уровни экспрессии мРНК генов сигнальных компонентов BCR-каскада

ОCD79A, CD79B, LYN, SYK, ZAP70, SHP1) в неотсортированных пробах CD5+ В-

клеточных лимфом для выявления различий между разными нозологическими формами с известным фенотипом.

3. Составить подробное иммунофенотипическое описание наиболее похожей на клетки В-XJ1JI субпопуляции нормальных CD5+ B-лимфоцитов человека, локализующейся в миндалинах.

4. Отсортировать чистые популяции нормальных CD5- B-лимфоцитов периферической крови и CD5+ B-лимфоцитов миндалин человека, а также опухолевых лимфоцитов В-ХЛЛ.

5. Определить и сравнить уровни экспрессии мРНК генов сигнальных компонентов BCR-каскада (CD79A, CD79B, LYN, SYK, ZAP70, SHP1) в отсортированных пробах опухолевых и неопухолевых лимфоцитов человека.

1.3 Научная новизна и практическая значимость работы

Для исследования были выбраны образцы CD5+ B-клеточных опухолей 102 пациентов;

впервые с помощью современных диагностических методов удалось выделить группу лимфом

«серой зоны» с фенотипом, промежуточным между В-ХЛЛ и ЛКМЗ.

1. Таким образом, выборка CD5+ лимфом человека была разделена на 3 подгруппы для последующего исследования экспрессии генов сигнальных белков.

2. Использование корректной стратегии нормализации данных ПЦР в реальном времени позволило найти различия между 3 группами CD5+ B-клеточных лимфом по уровням экспрессии РНК генов сигнальных белков BCR-каскада.

3. В качестве нормальных конторлей рассматривались B-клеточные популяции с разным фенотипом и локализацией в организме. Был получен подробный иммунофенотип малой субпопуляции CD5+ неопухолевых B-клеток миндалин человека.

4. Сравнение отсортированных опухолевых клеток В-ХЛЛ и нормальных В-лимфоцитов показало пониженный уровень экспрессии генов сигнальных белков за исключением гена CD79A в опухоли по сравнению со всеми нормальными контролями.

5. Сравнение чистых популяций неопухолевых B-лимфоцитов из разных источников позволило установить, что профиль экспрессии генов сигнальных белков в нормальных В-клетках универсален и достоверные различия имеются только в уровнях экспрессии мРНК гена ZAP 70.

Полученные результаты могут быть применены в дифференциальной диагностике лимфоидных опухолей. Данные об экспрессии сигнальных белков, участвующих в проведении

сигнала от B-клеточного рецептора, в субпопуляциях опухолевых и нормальных В-лимфоцитов могут быть использованы в курсах лекций по иммунологии, гематологии и клеточной биологии.

1.4 Апробация работы

Материалы диссертации доложены на международных конференциях: международной конференции «Experimental Hematology Association» (2010), второй Международной Школе по практической проточной цитометрии (Москва, 2011) и 18-й международной конференции «18th Leipziger Workshop on Cytomics and Congenital Heart Disease» (Лейпциг, 2013), а также обсуждены 1 апреля 2015 года на специализированном семинаре кафедры клеточной биологии и гистологии Московского Государственного Университета имени М.В. Ломоносова. Работа поддержана 1-месячной стипендией ICRETT Union for International Cancer Control (UICC).

ГЛАВА 2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 B-лимфоциты в норме. Дифференцировка, созревание и иммунофенотип В-клеток

B-лимфоциты являются клетками системы адаптивного иммунитета. В норме у человека они составляют от 5% до 15% от циркулирующего пула лимфоцитов и отвечают за обеспечение гуморального ответа на инфекцию (Roitt, 2001). От остальных клеток иммунной системы их отличает способность секретировать молекулы иммуноглобулинов (Ig) в свободном состоянии (антитела) (Benner et al., 1981; Van Furth et al., 1966) или в составе плазматической мембраны (B-клеточный рецептор, BCR) (Pernis et al., 1971; Wilson, Nossal, 1971). Регулировка специфичности и аффинности синтезируемой молекулы иммуноглобулина - ключевой процесс для B-лимфоцита, включающий набор последовательных генетических перестроек локусов иммуноглобулинов, экспрессию белкового продукта на поверхности лимфоцита в виде рецептора, формирование ко-рецепторных комплексов и сигнального каскада для обеспечения обратной связи, а также клональную селекцию B-лимфоцитов с оптимальной реакцией на связывание поверхностного иммуноглобулина.

2.1.1 Дифференцировка В-клеток

Экспрессия иммуноглобулинов, а также ряда других специфических поверхностных белков, исторически стала первым критерием для выделения субпопуляции B-лимфоцитов, а последовательность их появления легла в основу критериев степени зрелости В-клеток в норме и при различных патологических состояниях (Davis, 1975; Janossy, Pizzolo, 1979). Используемые для изучения B-лимфоцитов методы традиционно включали иммуноферментное и иммунофлуоресцентное окрашивания (Janossy, Pizzolo, 1979; Hoffmann-Fezer et al., 1981), а также проточную цитофлуориметрию (Loken et al., 1987), которая удобна для проведения мультипараметрического анализа клеточных суспензий. Так как для начала синтеза иммуноглобулинов (как тяжелых IgH, так и легких IgL цепей) B-клеткам необходимо провести серию продолжительных и сложных перестроек в локусах этих генов, анализ стадии рекомбинации генов IG(VDJ)H и IG(VJ)L методом полимеразной цепной реакции с последующим секвенированием предоставляет еще один популярный маркер зрелости В-лимфоцита, который коррелирует с его поверхностным иммунофенотипом (Ghia et al., 1996).

С использованием перечисленных методов было показано, что топологически развитие В-клеток человека в эмбриогенезе идет в нескольких органах (Gathings et al., 1977; Nunez et al.,

1996), однако в постнатальном периоде оно ограничивается центральным органом иммуногенеза - костным мозгом (Nunez et al., 1996, Rossi et al., 2003). В-лимфоциты являются потомками стволовой клетки крови (Notta et al., 2011), которая последовательно проходит несколько стадий гемопоэтических предшественников, теряющих способность к самообновлению и постепенно ограничивающих свои дифференцировочные потенции (Doulatov et al., 2012). Для описания последовательности событий при формировании В-клетки была предложена модель индукции В-клеточного фенотипа in vitro (Fluckiger et al., 1998) для выделенных CD34+CD38- ранних гемопоэтических предшественников, описанных впервые Galy и соавторами в 1995 году для взрослого и эмбрионального костного мозга (Galy et al., 1995), а затем Нао и соавторами - для пуповинной крови человека (Нао et al., 1995; Нао et al., 1998). Эта модель позволила охарактеризовать стадии развития В-клетки, начиная с про-В, опираясь в основном на состояние и экспрессию генов В-клеточного рецептора, а также на наличие экспрессии генов, отвечающих за функциональные перестройки в локусах генов иммуноглобулинов. После получения ряда дополнительных данных об иммунофенотипе разных стадий В-клеточной дифференцировки (Ryan et al., 1997) была сформулирована классическая модель В-лимфопоэза (LeBien, 2000), где гемопоэтические предшественники подвергаются однонаправленной универсальной дифференцировке и условно делятся на группы до стадии ранней В-клетки включительно, так как не несут специфических В-клеточных маркеров на поверхности в отличие от про-В и последующих стадий (Imamura et al., 2005).

К сожалению, данная модель уделяет мало внимания свойствам ранних субпопуляций и возможностям их взаимного перехода и встречается с некоторыми экспериментальными противоречиями. С одной стороны, работы разных лет указывают на высокую дифференцировочную пластичность в культуре гемопоэтических предшественников, которая сохраняется довольно долго, даже после ряда событий специфической В-клеточной дифференцировки (Imamura et al., 2005; Reynaud et al., 2003; Doulatov et al., 2010). С другой стороны, в своих работах Sanz и соавторы (Sanz et al., 2003; Sanz et al., 2010) описывают субпопуляцию неканонических В-клеток из пуповинной крови человека, которые рано дифференцируются, демонстрируют иной паттерн экспрессии поверхностных маркеров и ряд физиологических отличий от канонических про-В-клеток. Вместе эти данные осложняют поиск первой необратимо коммитированной В-клетки и предполагают наличие сложной «дорожной карты» В-лимфопоэза (Doulatov et al., 2012).

С методической точки зрения уточнение карты В-лимфопоэза требует расширения панели исследуемых поверхностных маркеров, а также смещения акцента на генетические методы исследования, так как выбор пути дифференцировки необходимо связан с соответствующим изменением профиля экспрессии генов, а ранее - с соответствующими эпигенетическими

изменениями. Особенного внимания заслуживают факторы транскрипции, играющие важнейшую роль в дифференцировке и транс-дифференцировке клеток (Graf, Enver, 2009). Так, современные модели дифференцировки В-клеток сосредоточены на поиске последовательных генетических изменений и выделении «фаз нестабильности», в которых дихотомический выбор судьбы гемопоэтических предшественников определяется взаимодействием пары транскрипционных факторов (Zandi et al., 2010). На сегодняшний день выделены несколько транскрипционных факторов, определяющих судьбу В-лимфоцита: более ранние Е2А и EBF (de Pooter, Kee, 2010; Hagman et al., 2012) и более поздний Pax-5{BSAP) (Cobaleda et al., 2007; Medvedovic et al., 2011). Транскрипционный фактор Axyo(BSAP) является одним из кандидатов на роль необратимо коммитирующего фактора для В-клетки человека в норме (Sanz et al., 2003) и важнейшим опухолевым регулятором при образовании В-клеточных лейкозов (Medvedovic et al., 2011; Familiades et al., 2009).

В недавних работах были выявлены различия в общем профиле экспрессии РНК и микроРНК в В-клеточных предшественниках, коррелирующем со статусом реарранжировки генов иммуноглобулинов и позволяющих достоверно различить стадии развития В-лимфоцитов, включая ранние В-клетки (van Zelm et al., 2005; Hystad et al., 2007; Jensen et al., 2013). Кроме изменений экспрессии различных РНК для дифференцирующихся В-клеточных предшественников было также показано изменение карты метилирования ДНК при прохождении стадий дифференцировки (Lee et al., 2012). Помимо создания общего генетического «портрета» каждой субпопуляции эти исследования отдельно фокусируются на выделении и установлении иерархии транскрипционных факторов, отвечающих за дифференцировку В-клеток. Данный подход весьма перспективен при анализе различных гемопоэтических субпопуляций, включая самые ранние. Карты иммунофенотипов гемопоэтических предшественников и кластеров транскипционных факторов, используемых ими, значительно расширяют представления о дифференцировке кроветворных клеток (Novershtern et al., 2011).

На сегодняшний день при комбинировании фенотипического и генетического подходов к анализу данных о В-клеточной дифференцировке можно достоверно различить стадии общего лимфоидного предшественника, раннего В-клеточного предшественника, про-В-клетки, пре-В-I-клетки, крупной пре-В-Н-клетки, мелкой постмитотической пре-В-П-клетки, и зрелого ■< наивного В-лимфоцита (Blom, Spits, 2006).

Таким образом, В-клетки - потомки общего лимфоидного предшественника, прошедшего в процессе дифференцировки ряд «би-потенциальных» стадий с последовательной сменой поверхностного иммунофенотипа, эпигенетического и транскрипционного профилей. Современные методы исследования В-клеточных

субпопуляций предполагают комбинацию морфологических и молекулярнобиологических подходов.

2.1.2 Синтез иммуноглобулинов. Антиген-независимый этап созревания В-клеток

Несмотря на то, что механизм дифференцировки B-лимфоцита запускается задолго до начала синтеза иммуноглобулинов, именно они играют ведущую роль в его созревании начиная со стадии про-В-клетки. Без экспрессии иммуноглобулинов дальнейшее развитие В-клеток оказывается заблокированным на этой стадии (Yel et al., 1996; Meffre et al., 2001). Сходный эффект наблюдается при мутации ряда других генов, кодирующих поверхностные и внутриклеточные сигнальные белки (Minegishi et al., 1998; Minegishi et al., 1999; Ferrari et al., 2007; Schiff et al., 2000). Причиной такого блока в развитии служит необходимость синтезировать, экспрессировать на поверхности и проверить на функциональность сложный белковй комплекс -B-клеточный рецептор и его сигнальный каскад, - состоящий из молекулы тяжелой цепи иммуноглобулина, двух молекул легкой цепи иммуноглобулина (варианта к или X) или суррогатной легкой цепи иммуноглобулина и гетеродимера трансмембранных адапторных белков CD79a и CD79b. С комплексом ассоциируются тирозинкиназы, которые обеспечивают проведение сигнала от рецептора внутрь клетки и снятие запрета на дальнейшую дифференцировку B-лимфоцита (Zhang et al., 2004).

Молекула иммуноглобулина имеет Y-образную форму и состоит из двух тяжелых цепей (варианта ц, у, 8, а или в) и двух лёгких цепей (варианта к или X), связанных между собой дисульфидными мостиками (Migita, Putnam 1963). Структура молекулы иммуноглобулина, за исключением концевых участков, всегда относительно неизменна (константна). Константные участки тяжелых цепей иммуноглобулинов определяют их класс, структуру и особые свойства. У человека различают пять различных классов иммуноглобулинов (IgM, IgG, IgD, IgA и IgE) (Black, 1997; Harlow, Lane, 1988). Изначально B-клетки экспрессируют молекулы IgM, но в результате сдвига изотипа могут переключаться на другие классы (Gathings et al., 1977; Tangye et al., 2002; Saiki et al., 1980); одновременно одна B-клетка может экспрессировать несколько классов иммуноглобулинов с идентичными сайтами связывания антигенов (Gathings et al., 1977).

Концевые участки легких и тяжелых цепей иммуноглобулина отвечают за специфичное связывание с антигеном и, в отличие от константных участков, демонстрируют крайне высокую вариабельность структуры. Подобная структура белковой молекулы долгое время вызывала споры о механизме ее образования. Для объяснения этого феномена была предложена модель «два гена - один полипептидный продукт», подразумевающая объединение разрозненных

участков на стадии ДНК или РНК для синтеза полноценной белковой молекулы (Dreyer, Bennett, 1965).

Впоследствии Hozumi и Tonegawa (Hozumi, Tonegawa, 1976) сравнивая ДНК из эмбриональных клеток мышей Balb/c и клеток плазмацитомы этих же мышей МОРС321 продемонстрировали пространственное разделение двух фрагментов - V (от английского "variable") и С (от английского "constant") - в исходной последовательности ДНК и «создание» полноценного гена иммуноглобулина в процессе дифференцировки B-клетки. Эта работа, доказывающая перестройки в ДНК соматических клеток млекопитающих, была удостоена Нобелевской премии в 1987 году. Дальнейшие исследования л оку сов иммуноглобулинов показали, что вариабельные участки ДНК кодируются набором из трёх разных генов для тяжелой и двух разных генов для легкой цепи иммуноглобулина соответственно. Гены, кодирующие концевые участки тяжелой цепи иммуноглобулинов, получили названия V- (от английского "variable"), D- (от английского "diversity") и J- (от английского "joining"). Концевые участки лёгкой цепи иммуноглобулина кодируются только V- и J-генами. Каждый из этих генов, в свою очередь, представлен несколькими вариантами, расположенными кластерами на большом расстоянии друг от друга. Особенно велико разнообразие V-генов: у человека их существует около сотни вариантов для каждой цепи иммуноглобулина (Cook, Tomlinson, 1995). Сборка функционального гена иммуноглобулина осуществляется путем рекомбинации на ранних этапах жизни B-лимфоцита (Reth, Nielsen, 2014). К С-гену (от английского "constant"), кодирующему неизменную часть цепи иммуноглобулина, присоединяется случайная комбинация из V- D- и J-генов (для тяжелой цепи) или V- и J-генов (для лёгкой цепи). Таким образом, иммуноглобулины индивидуальны для каждого клона В-лимфоцитов. Подобная изменчивость обеспечивает огромное разнообразие репертуара молекул иммуноглобулинов в иммунной системе организма (Rajewsky, 1996).

Генетические перестройки, необходимые для начала синтеза иммуноглобулинов, начинаются в B-лимфоците очень рано - на стадии ранней В и про-В клетки (Ghia et al., 1996, Imamura et al., 2005, Davi et al., 1997). Перестройка генов иммуноглобулинов происходит в несколько этапов. На стадии ранней В и про-В клетки путем последовательной рекомбинации формируется DJ-фрагмент тяжелой цепи иммуноглобулина, затем к нему присоединяется V-фрагмент.

Представление синтезированных иммуноглобулинов на плазматической мембране происходит на стадии пре-В клетки (Zouali, 2014). Крупная пре-В-Н-клетка способна экспрессировать на поверхности всю тяжелую цепь иммуноглобулина в составе пре-В-рецептора (Zouali, 2014). От зрелого B-клеточного рецептора его отличает отсутствие легких цепей иммуноглобулинов, так как их рекомбинация происходит позже. Вместо них в составе

пре-В-рецептора присутствует так называемая суррогатная легкая цепь, состоящая из продуктов генов VpreB и Х5/14.1.

С подмембранной частью пре-В-рецептора ассоциируются тирозинкиназы, формирующие сигнальный каскад. Пре-В-рецептор стимулируется связыванием с белками стромы костного мозга или перекрестным взаимодействием суррогатных легких цепей (Zouali, 2014) и запускает сигнальный каскад. Таким образом проходит проверка функциональности рецептора. Не получающие сигнала клоны B-клеток погибают, а прошедшие селекцию клоны переходят к перестройке легких цепей иммуноглобулина. Первой перестройку, как правило, проходит к-цепь, при неудачной рекомбинации перестраивается Х-цепь. Готовый В-клеточный рецептор экпрессируется на поверхности наивных зрелых лимфоцитов костного мозга. Перед выходом из костного мозга он проходит проверку на аутореактивность. Чрезмерно сильный сигнал в ответ на связывание с аутоантигенами вводит клетки в состояние анергии (Cambier, Getahun, 2010). Поиск аутоантигенов, участвующих в селекции пре-В-клеток, в строме костного мозга все еще ведется, однако предполагается, что ведущую роль на этом этапе играют конформационные изменеия рецептора и так называемый «тонический» сигнал через него (Melhers, 1999; Tolar, Pierce, 2010).

Таким образом, молекула иммуноглобулина, связываясь адапторными белками CD79a и CD79b и подмембранными тирозинкиназами, формирует сигнальную структуру - В-клеточный рецептор, - которая дважды играет определяющую роль в выживании и дифференцировке B-лимфоцита: первый раз сигнал передается через пре-В-клеточный рецептор в антиген-независимую фазу созревания, а второй раз - через зрелый В-клеточный рецептор в антиген-зависимую фазу созревания В-клетки.

2.1.3 Антиген-зависгшоый этап созревания В-клеток

Дальнейшее созревание B-лимфоцита происходит после его выхода из костного мозга на периферии иммунной системы и подразумевает стимулирование зрелого В-клеточного рецептора антигеном для его более тонкой настройки. Этот этап формирования В-клетки является антиген-зависимым и также может быть связан с модификацией гена иммуноглобулина. Помимо описанных механизмов изменчивости, обуславливающих разнообразие молекул иммуноглобулинов, отдельные области V-региона гена тяжелой цепи отличаются гипервариабельностью, что обуславливает такое явление как соматическая гипермутация генов иммуноглобулинов (MacLennan, 1994) в зрелых В-лимфоцитах.

Для наивной В-клетки, покинувшей костный мозг, связывание B-клеточного рецептора (BCR) с антигеном обеспечивает активацию и окончательное созревание. В зрелом

терминально дифференцированном состоянии B-клетки могут существовать в виде клеток памяти, экспрессирующих иммуноглобулины в виде рецепторов, или плазматических клеток, экспрессирующих иммуноглобулины в виде антител (Berkowska et al., 2011; Pieper et al., 2011).

Существуют два пути созревания B-лимфоцита: оно может проходить по Т-зависимому или Т-независимому пути (Owens, Zeine, 1989). Т-независимыми (T-Independent, TI) антигенами двух типов (TI-1 и TI-2), как правило, являются устойчивые к деградации бактериальные белки, полисахариды и липополисахариды бактериальной стенки, вирусные частицы. В случае с подобными антигенами активация происходит напрямую в результате их связывания с рецептором B-лимфоцита. В процессе задействован только комплекс BCR и его ко-рецепторы, первичный иммунный ответ в среднем слабее, чем при активации Т-зависимыми антигенами (Pieper et al., 2011). Также, преимущественно секретируемым иммуноглобулином во время TI-ответа является онтогенетически самый ранний IgM и, таким образом, можно говорить, что у Т-независимой популяции B-клеток при активации созревание не проходит до конца.

Активация B-клеток Т-зависимыми антигенами включает кооперацию с Т-лимфоцитами, презентацию антигена Т-клетке с участием как BCR, так и других сигнальных поверхностных молекул. Важнейшую сигнальную роль в этом процессе выполняют молекулы плазматической мембраны CD40, CD80 и CD86 (Gruss et al., 1997; Mir, Agrewala, 2008). Так же, как и комплекс В CR, эти рецепторы ассоциированы с цитоплазматическими тирозинкиназами и тирозинфосфатазами (Kehry, 1996; Slavik et al., 1999). Сигнальные каскады от них дополняют и моделируют сигнал фосфорилирования, получаемый от BCR, и обуславливают запуск в В-клетках программ выживания и пролиферации. В процессе Т-зависимой активации В-клетка мигрирует в лимфатические узлы и включается в терминальный центр фолликула, где проходит соматическую гипермутацию вариабельных участков генов тяжелых цепей иммуноглобулинов (VH-генов).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Поташникова, Дарья Марковна, 2015 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Abrantes J.L., Tornatore T.F., Pelizzaaro-Rocha K.J., de Jesus M.B., Cartaxo R.T., Milani R., Ferreira-Halder C.V. Crosstalk between kinases, phosphatases and miRNAs in cancer. // Biochemie. -2014. -V.107 PtB. -P. 167-187.

2. Almamun M., Schnabel J.L., Gater S.T., Ning J., Taylor K.H. Isolation of precursor B-cell subsets from umbilical cord blood. // J Vis Exp. -2013. -V.74. - e50402.

3. Acharya M., Borland G., Edkins A.L., MacLellan L.M., Mateson J., Ozanne B.W., Cushley W. CD23/FceRII: molecular multi-tasking. // Clin Exp Immunol. -2010. -V.162. №1. - P.12-23.

4. Andersen C.L., Ledet-Jensen J., Orntoft T. Normalization of real-time quantitative RT-PCR data: a model based variance estimation approach to identify genes suited for normalization - applied to bladder- and colon-cancer data-sets. // Cancer Research. -2004. -V.64. .№15. -P.5245-5250.

5. Andreasson U., Eden P., Peterson C., Hogerkorp C.M., Jerkeman M., Andersen N., Berglund M., Sundstrom C., Rosenquist R., Borrebaeck C.A., Ek S. Identification of uniquely expressed transcription factors in highly purified B-cell lymphoma samples. // Am J Hematol. - 2010. -V.85. №6. -P.418-425.

6. Arman M., Calvo J., Trojanowska M.E., Cockerill P.N., Santana M, Lopez-Cabrera M., Vives J., Lozano F. Transcriptional regulation of human CD5: important role of Ets transcription factors in CD5 expression in T cells. // J Immunol. -2004. -V.172. №12. -P.7519-7529.

7. Azzam H.S., Grinberg A., Lui K., Shen H., Shores E.W., Lowe P.E. CD5 expression is developmentally regulated by T-cell receptor (TCR) signals and TCR avidity. // J Experim Med. -1998. -V.188. №12. -P.2301-2311.

8. Barna G., Reiniger L., Tatrai P., Kopper L., Matolcsy A. The cut-off levels of CD23 expression in the differential diagnosis of MCL and CLL. // Hematol Oncol. -2008 -V.26. №3. -P. 167-170.

9. Barteneva N.S., Ketman K., Fasler-Kan E., Potashnikova D., Vorobjev I.A. Cell sorting in cancer research—diminishing degree of cell heterogeneity. // Biochim Biophys Acta. -2013. -V.1836. №1. -P.105-122.

10. Bas A., Forsberg G., Hammarstrom S., Hammarstrom M.L. Utility of the housekeeping genes 18S rRNA, beta-actin and glyceraldehyde-3-phosphate-dehydrogenase for normalization in realtime quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction analysis of gene expression in human T lymphocytes. // Scand J Immunol. -2004. -V.59. №6. -P.566-573.

11. Baumgarth N., Tung J.W., Herzenberg L.A. Inherent specificities in natural antibodies: a key to immune defense against pathogen invasion. // Springer Semin Immunopathol. -2005. -V.26. №4. -P.347-362.

12. Benner R., Hijmans W., Haaijman J.J. The bone marrow: the major source of serum immunoglobulins, but still a neglected site of antibody formation. // Clin Exp Immunol. —1981. — V.46. №1. -P. 1-8.

13. Bergler W., Adam S., Gross H.J., Hormann K., Schwartz-Albiez R. Age-dependent altered proportions in subpopulations of tonsillar lymphocytes. // Clin Exp Immunol. -1999. -V.116. №1. -P.9-18.

14. Berkowska M.A., Driessen G.J., Bikos V., Grosserichter-Wagener C., Stamatopoulos K., Cherutti A., He B., Bierman K., Lange J.F., van der Burg M., van Dongen J.J.M., van Zelm M.C. Human memory B cells originate from three distinct germinal center-dependent and -independent maturation pathways. // Blood -2011. -V.l 18. №8. -P.2150-2158.

15. Berland R., Wortis H.H. Origins and functions of B-l cells with notes on the role of CD5. // Annu Rev Immunol. -2002. -V.20. -P.253-300.

16. Bernard A., Boumsell L. The clusters of differentiation (CD) defined by the First International Workshop on Human Leucocyte Differentiation Antigens. // Hum Immunol. -1984. -V.ll. №1. -P. 1-10.

17. Bienenstock J. Gut and bronchus associated lymphoid tissue: an overview. // Adv Exp Med Biol. -1982. -V.149. -P.471-477.

18. Black C.A. A brief history of the discovery of the immunoglobulins and the origin of the modern immunoglobulin nomenclature. // Immunol Cell Biol. -1997. -V.75. №1. -P.65-68.

19. Blom B., Spits H. Development of human lymphoid cells. // Annu Rev Immunol. -2006. -V.24. -P.287-320.

20. Bofill M., Janossy G., Janossa M., Burford G.D., Seymour G.J., Wernet P., KelemenE. Human B cell development. II Subpopulations in the human fetus. // J Immunol. -1985. -V.134. №3. -P.1531-1538.

21. Boyd R.S., Jukes-Jones R., Walewska R., Brown D., Dyer M.J., Cain K. Protein profiling of plasma membranes defines aberrant signaling pathways in mantle cell lymphoma. // Mol Cell Proteomics. -2009. -V.8. J>T°7. -P.1501-1515.

22. Bubien J.K., Zhou L.J., Bell P.D., Frizzell R.A., Tedder T.F. Transfection of the CD20 cell surface molecule into ectopic cell types generates a Ca2+ conductance found constitutively in B lymphocytes. // J Cell Biol. -1993. -V. 121. №5. -P. 1121 -1131.

23. Bustin S.A., Benes V., Garson J.A., Hellemans J., Huggett J., Kubista M., Mueller R., Nolan T., Pfaffl M.W., Shipley G.L., Vandesompele J., Wittwer C.T. The MIQE guidelines: minimum information for publication of quantitative real-time PCR experiments. // Clin Chem. -2009. -V.55. №4. —P.611-622.

24. Cajiao I., Sargent R., Elstrom R., Cooke N.E., Bagg A., Liebhaber S.A. Igbeta(CD79b) mRNA expression in chronic lymphocytic leukaemia cells correlates with immunoglobulin heavy chain gene mutational status but does not serve as an independent predictor of clinical severity. // Am J Hematol. -2007. -V.82. №8. -P.712-720.

25. Caligaris-Cappio F., Gobbi M., Bofill M., Janossy G. Infrequent normal B lymphocytes express features of B-chronic lymphocytic leukemia. // J Exp Med. -1982. -V.155. №2. -P.623-628.

26. Cambier J.C., Getahun A. B cell activation versus anergy; the antigen receptor as a molecular switch. // Immunol Lett. -2010. -V.128. №1. -P.6-7.

27. Cesano A., Perbellini O., Evensen E., Chu C.C., Cioffi F., Ptacek J., Damle R.N., Chignola R., Cordeiro J., Yan X.J., Hawtin R.E., Nichele I., Ware J.R., Cavallini C., Lovato O., Zanotti R., Rai K.R., Chiorazzi N., Pizzolo G., Scupoli M.T. Association between B-cell receptor responsiveness and disease progression in B-cell chronic lymphocytic leukemia: results from single cell network profiling studies. // Haematologica. -2013. -V.98. №4. -P.626-634.

28. Chaturvedi A., Martz R., Dorward D., Waisberg M., Pierce S.K. Endocytosed BCRs sequentially regulate MAPK and Akt signaling pathways from intracellular compartments. // Nat Immunol. -201 l.-V.12.№ll.-P.l 119-1126.

29. Chen Y.H., Heller P. Lymphocyte surface immunoglobulin density and immunoglobulin secretion in vitro in chronic lymphocytic leukemia (CLL). // Blood. -1978. -V.52. №3. -P.601-608.

30. Chen L., Widhopf G., Huynh L., Rassenti L., Rai K.R., Weiss A., Kipps T.J. Expression of ZAP-70 is associated with increased B-cell receptor signaling in chronic lymphocytic leukemia. // Blood.-2002. -V.100. №13-P.4609-4614.

31. Chiorazzi N., Ferrarini M. B cell chronic lymphocytic leukemia: lessons learned from studies of the B cell antigen receptor. // Annu Rev Immunol. -2003. -V.21. -P.841-894.

32. Chiorazzi N., Rai K.R., Ferrarini M. Chronic lymphocytic leukemia. // N Engl J Med. -2005. -V.352. -P.804-815.

33. Claus R., Lucas D.M., Ruppert A.S., Williams K.E., Weng D., Patterson K., Zucknick M., Oakes C.C., Rassenti L.Z., Greaves A.W., Geyer S., Wierda W.G., Brown J.R., Gribben J.G., Barrientos J.C., Rai K.R., Kay N.E., Kipps T.J., Shields P., Zhao W., Grever M.R., Plass C., Byrd J.C. Validation of ZAP-70 methylation and its relative significance in predicting outcome in chronic lymphocytic leukemia. // Blood -2014. -V.124. №1 -P.42-48.

34. Cobaleda C., Schebesta A., Delogu A., Busslinger M. Pax5: the guardian of B cell identity and function. // Nat Immunol. -2007. -V.8. №5. -P.463-470.

35. Contri A., Brunati A.M., Trentin L., Cabrelle A., Miorin M., Cesaro L., Pinna L.A., Zambello R., Semenzato G., Donella-Deana A. Chronic lymphocytic leukemia B cells contain anomalous

LYN tyrosine kinase, a putative contribution to defective apoptosis. // J Clin Invest. -2005. -V.l 15. №2. -P.369-378.

36. Cook G.P., Tomlinson I.M. The human immunoglobulin VH repertoire. // Immunol Today. -1995. -V.l6. №5. -P.237-242.

37. Cyster J.G., Goodnow C.C. Tuning antigen receptor signaling by CD22: integrating cues from antigens and the microenvironment. // Immunity -1997. -V.6. №5. -P.509-517.

38. Dadi S., Le Noir S., Asnafi V., Beldjord K., Macintyre E.A. Normal and pathological V(D)J recombination: contribution to the understanding of human lymphoid malignancies. // Adv Exp Med Biol -2009. -V.650. -P. 180-194.

39. Davi F., Faili A., Gritti C., Blanc C., Laurent C., Sutton L., Schmitt C., Merle-Beral H. Early onset of immunoglobulin heavy chain gene rearrangements in normal human bone marrow CD34+ cells. // Blood. -1997. -V.90. №10. -P.4014-4021.

40. Davis S. Hypothesis: differentiation of the human lymphoid system based on cell surface markers. // Blood. -1975 -V.45. №6. -P.871-880.

41. Davis R.E., Ngo V.N., Lenz G., Tolar P., Young R.M., Romesser P.B., Kohlhammer H., Lamy L., Zhao H., Yang Y., Xu W., Shaffer A.L., Wright G., Xiao W., Powell J., Jiang J.K., Thomas C.J., Rosenwald A., Ott G., Muller-Hermelink H.K., Gascoyne R.D., Connors J.M., Johnson N.A., Rimsza L.M., Campo E., Jaffe E.S., Wilson W.H., Delabie J., Smeland E.B., Fisher R.I., Braziel R.M., Tubbs R.R., Cook J.R., Weisenburger D.D., Chan W.C., Pierce S.K., Staudt L.M. Chronic active' B-cell-receptor signalling in diffuse large B-cell lymphoma. // Nature. -2010. -V.463. -P.88-92.

42. Davis B.H., Schwartz M. ZAP-70 expression is low in normal precursor B cells or hematogones. // Cytometry B Clin Cytom. -2006. -V.70. №4. -P.315-319.

43. Deaglio S., Vaisitti T., Aydin S., Bergui L., DArena G., Bonello L., Omede P., Scatolini M., Jaksic O., Chiorino G., Efremov D., Malavasi F. CD38 and ZAP-70 are functionally linked and mark CLL cells with high migratory potential. // Blood. -2007 -V.l 10. №12. -P.4012-4021.

44. Deaglio S., Mehta K., Malavasi F. Human CD38: a (Revolutionary story of enzymes and receptors. // Leukemia Res -2001. -V.25. №1. -P.1-12.

45. Deaglio S., Morra M., Mallone R., Ausiello C.M., Prager E., Garbarino G., Dianzani U., Stockinger H., Malavasi F. Human CD38 (ADP-ribosyl cyclase) is a counter-receptor of CD31, an Ig superfamily member. // J Immunol. -1998. -V.l60. №1. -P.395-402.

46. Deans J.P., Polyak M.J. FMC7 is an epitope of CD20. // Blood. -2008. -V.l 11. №4. -P.2492.

47. De Boer C.J., van Krieken J.H., Kluin-Nelemans H.C., Kluin P.M., Schuuring E. Cyclin D1 messenger RNA overexpression as a marker for mantle cell lymphoma. // Oncogene. -1995. -V.10. №9.-P. 1833-1840.

48.

49.

50.

51.

52.

53.

54.

55.

56.

57,

58

59

60

De Boer C.J., van Krieken J.H., Schuuring E., Kluin P.M. Bcl-l/cyclin D1 in malignant lymphoma. // Ann Oncol. -1997. -V.8. Suppl 2. -P. 109-117.

DeFranco A.L. The complexity of signaling pathwats activated by the BCR. // Curr Opin Immunol. -1997. -V.9. №3. -P.296-308.

Delgado J., Matutes E., Morilla A.M., Morilla R.M., Owusu-Ankomah K.A., Rafig-Mohammed F., del Guidice I., Catovsky D. Diagnostic significance of CD20 and FMC7 expression in B-cell disorders. // American J Clin Pathol. -2003. -V.120. №5. -P.754-759.

De Oliveira M.S., Jaffe E.S., Catovsky D. Leukaemic phase of mantle zone (intermediate) lymphoma: its characterisation in 11 cases. // J Clin Pathol. -1989. -V.42. №9. -P.962-972. de Pooter R.F., Kee B.L. E proteins and the regulation of early lymphocyte development. // Immunol Rev. -2010. -V.238. №1. -P.93-109.

Dighiero G. Autoimmunity and B-cell malignancies. // Hematol Cell Ther. -1998. -V.40. №1. -P.1-9.

Domingo-Domenech E., Domingo-Claros A., Gonzalez-Barca E., Beneitez D., Alonso E., Romagosa V., De Sanjos S., Petit J., Granena A., Fernandez de Sevilla A. CD38 expression in B-chronic lymphocytic leukemia: association with clinical presentation and outcome in 155 patients. // Haematologica. -2002. -V.87. №10. -P.1021-1027.

Donella-Deana A., Cesaro L., Ruzzene M., Brunati A.M., Marin O., Pinna L.A. Spontaneous autophosphorylation of LYN tyrosine kinase at both its activation segment and C-terminal tail confers altered substrate specificity. // Biochemistry. -1998. -V.37. №5. -P.1438-1446. Dong H.Y., Shahsafaei A., Dorfman D.M. CD 148 and CD27 are expressed in B cell lymphomas derived from both memory and naive B cells. // Leuk Lymphoma. -2002. -V.43. №9. -P. 18551888.

Dono M., Burgio V.L., Tacchetti C., Favre A., Augliera A., Zupo S., Taborelli G., Chiorazzi N., Grossi C.E., Ferrarini M. Subepithelial B cells in the human palatine tonsil. I. Morphologic, cytochemical and phenotypic characterization. // Eur J Immunol. -1996. -V.26. №9. -P.2035-2042.

Dono M., Zupo S., Leanza N., Melioli G., Fogli M., Melagrana A., Chiorazzi N., Ferrarini M. Heterogeneity of tonsillar subepithelial B lymphocytes, the splenic marginal zone equivalents. // J Immunol. -2000. -V.164. №11. -P.5596-5604.

Dono M., Cerruti G., Zupo S. The CD5+ B-cell. // Int J Biochem Cell Biol. -2004. -V.36. №11. -P.2105-2111.

Dono M., Burgio V.L., Colombo M., Sciacchitano S., Reverberi D., Tarantino V., Cutrona G., Chiorazzi N., Ferrarini M. CD5+ B cells with the features of subepithelial B cells found in human tonsils. // Eur J Immunol. -2007. -V.37. №8. -P.2138-2147.

61. Doulatov S., Notta F., Eppert K., Nguyen L.T., Ohashi P.S., Dick J.E. Revised map of the human progenitor hierarchy shows the origin of macrophages and dendritic cells in early lymphoid development. //Nat Immunol. -2010. -V.l 1. №7. -P.585-593.

62. Doulatov S., Notta F., Laurenti E., Dick J.E. Hematopoiesis: a human perspective. // Cell Stem Cell. -2012. -V.10. №2. -P.120-136.

63. Dreyer W.J., Bennett J.C. The molecular basis of antibody formation: a paradox. // Proc Natl Acad Sci USA. -1965. -V.54. №3. -P.864-869.

.64. Duan B., Morel L. Role of B-la cells in autoimmunity. // Autoimmun Rev. -2006. -V.5. №6. -P.403-408.

65. Duhren-von Minden M., Ubelhart R., Schneider D., Wossning T., Bach M.P., Buchner M., Hofmann D., Surova E., Folio M., Kohler F., Wardemann H., Zirlik K., Veelken H., Jumaa H. Chronic lymphocytic leukaemia is driven by antigen-independent cell-autonomous signalling. // Nature. -2012. -V.489. -P.309-312.

66. Dundas J., Ling M. Reference genes for measuring mRNA expression. // Theory Biosci. -2012. -V.131.-P.215-223.

67. Eisenberg E., Levanon E.Y. Human housekeeping genes, revisited. // Trends Genet. -2013. -V.29.№10.-P.569-574.

68. Engel H., Drach J., Keyhani A., Jiang S., Van N.T., Kimmel M., Sanchez-Williams G., Goodacre A., Andreeff M., Quantitation of minimal residual disease in acute myelogenous leukemia and myelodysplastic syndromes in complete remission by molecular cytogenetics of progenitor cells. // Leukemia. -1999. -V.13. №4. -P.568-577.

69. Familiades J., Bousquet M., Lafage-Pochitaloff M., Bene M.C., Beldjord K., De Vos J., Dastugue N., Coyaud E., Struski S., Quelen C., Prade-Houdellier N., Dobbelstein S., Cayuela J.M., Soulier J., Grardel N., Preudhomme C., Cave H., Blanchet O., Lheritier V., Delannoy A., Chalandon Y., Ifrah N., Pigneux A., Brousset P., Macintyre E.A., Huguet F., Dombret H., Broccardo C., Delabesse E. PAX5 mutations occur frequently in adult B-cell progenitor acute lymphoblastic leukemia and PAX5 haploinsufficiency is associated with BCR-ABL1 and TCF3-PBX1 fusion genes: a GRAALL study. // Leukemia. -2009. -V.23. №11. -P.1989-1998.

70. Faragasan S., Honjo T. T-independent immune response: new aspects of B cell biology. // Science. -2000. -V.290. №5489. -P.89-92.

71. Fernandez V., Salamero O., Espinet B., Sole F., Royo C., Navarro A., Camacho F., Bea S., Hartmann E., Amador V., Hernandez L., Agostinelli C., Sargent R.L., Rozman M., Aymerich M., Colomer D., Villamor N., Swerdlow S.H., Pileri S.A., Bosch F., Piris M.A., Montserrat E., Ott G., Rosenwald A., Lopez-Guillermo A., Jares P., Serrano S., Campo E. Genomic and gene

expression profiling defines indolent forms of mantle cell lymphoma. // Cancer Res. -2010. -V.70. №4. -P.1408-1418.

72. Ferguson B.S., Nam H., Hopkins R.G., Morrison R.F. Impact of reference gene selection for target gene normalization on experimental outcome using real-time qRT-PCR in adipocytes. // PLoS One. -2010. -V.5. №12. el5208.

73. Ferrari S., Lougaris V., Caraffi S., Zuntini R., Yang J., Soresina A., Meini A., Cazzola G., Rossi C., Reth M., Plebani A. Mutations of the Igbeta gene cause agammaglobulinemia in man. // J Exp Med. -2007. -V.204. №9. -P.2047-2051.

74. Flippakopulos P., Mueller S., Knapp S. SH2 domains: modulators of non-receptor tyrosine kinase activity. // Curr Opin Struct Biol. -2009. -V.19. №6. -P.643-649.

75. Fluckiger A.C., Sanz E., Garcia-Lloret M., Su T., Hao Q.L., Kato R., Quan S., de la Hera A., Crooks G.M., Witte O.N., Rawlings D.J. In vitro reconstitution of human B-cell ontogeny: from CD34(+) multipotent progenitors to Ig-secreting cells. // Blood. -1998. -V.92. №12. -P.4509-4520.

76. Fuda F.S., Karandikar N.J., Chen W. Significant CD5 expression on normal stage 3 hematogones and mature B Lymphocytes in bone marrow. // Am J Clin Pathol. -2009. -V.132. №5. -P.733-737.

77. Fung-Leung W.P. Phosphoinositide 3-kinase delta in leukocyte signaling and function. // Cell signal. -2011. -V.23. №4. -P.603-608.

78. Galton D.A. The pathogenesis of chronic lymphocytic leukemia. // Can Med Assoc J. -1966. -V.94. №19. -P.1005-1010.

79. Galy A., Travis M., Cen D., Chen B. Human T, B, natural killer, and dendritic cells arise from a common bone marrow progenitor cell subset. // Immunity. -1995. -V.3. №4. -P.459-473.

80. Gathings W.E., Lawton A.R., Cooper M.D. Immunofluorescent studies of the development of pre-B cells, B lymphocytes and immunoglobulin isotype diversity in humans. // Eur J Immunol. -1977. -V.7. №11. -P.804-810.

81. Geisberger R., Crameri R., Achatz G. Models of signal transduction through the B-cell antigen receptor. // Immunology. -2003. -V.l 10. №4. -P.401-410.

82. Getahun A., Hjelm F., Heyman B. IgE enhances antibody and T cell responses in vivo via CD23+ B cells. //J Immunol. -2005. -V.175 №3. -P. 1473-1482.

83. Ghia P., ten Boekel E., Sanz E., de la Hera A., Rolink A., Melchers F. Ordering of human bone marrow B lymphocyte precursors by single-cell polymerase chain reaction analyses of the rearrangement status of the immunoglobulin H and L chain gene loci. // J Exp Med. -1996. -V. 184. №6. -P.2217-2230.

84. Ginzinger D.G. Gene quantification using real-time quantitative PCR: an emerging technology hits the mainstream. // Exp Hematol. -2002. -V.30. №6. -P.503-512.

85. Gladkikh A., Potashnikova D., Korneva E., Khudoleeva 0., Vorobjev I. Cyclin D1 expression in B-cell lymphomas. // Exp Hematol. -2010. -V.38. №11 -P.1047-1057.

86. Gobessi S., Laurenti L., Longo P.G., Sica S., Leone G., Efremov D.G. ZAP-70 enhances B-cell-receptor signaling despite absent or inefficient tyrosine kinase activation in chronic lymphocytic leukemia and lymphoma B cells. // Blood. -2007. -V.109. №5 -P.2032-2039.

87. Gobessi S., Laurenti L., Longo P.G., Carsetti L., Berno V., Sica S., Leone G., Efremov D.G. Inhibition of constitutive and BCR-induced SYK activation downregulates Mcl-1 and induces apoptosis in chronic lymphocytic leukemia B cells. // Leukemia. -2009. -V.23. №4 -P.686-697.

88. Gorzelniak K., Janke J., Engeli S., Sharma A.M. Validation of endogenous controls for gene expression studies in human adipocytes and preadipocytes. // Horm Metab Res. -2001. -V.33. №10. -P.625-627.

89. Graf T., Enver T. Forcing cells to change lineages. // Nature. -2009. -V.462. №7273. -P.587-594.

90. Green T.M., de Strieker K., Moller M.B. Validation of putative reference genes for normalization of Q-RT-PCR data from paraffin-embedded lymphoid tissue. // Diagn Mol Pathol. -2009. -V.18. №4. -P.243-249.

91. Grey H.M., Rabellino E., Pirofsky B. Immunoglobulins on the surface of lymphocytes. IV. Distribution in hypogammaglobulinemia, cellular immune deficiency, and chronic lymphatic leukemia. // J Clin Invest. -1971. -V.50. №11. -P.2368-2375.

92. Gretsov E.M., Churakova Zh.V., Sheval E.V., Vorob'ev I.A. [Comparative characteristics of immunological, clinical and morphological features of human lymphoid tumors in respect with tumor genesis and progression]. // Ontogenez. -2004. -V.35. №3. -P.229-238.

93. Griffin D.O., Holodick N.E., Rothstein T.L. Human B1 cells in umbilical cord and adult peripheral blood express the novel phenotype CD20+ CD27+ CD43+ CD70-. // J Exp Med. -2011. -V.208. №1. -P.67-80.

94. Gruss H.J., Herrmann F., Gattei V., Gloghini A., Pinto A., Carbone A. CD40/CD40 ligand interactions in normal, reactive and malignant lympho-hematopoietic tissues. // Leuk Lymphoma. -1997. -V.24. №5-6. -P.393-422.

95. Guo S., Ferl G.Z., Deora R., Riedinger M., Yin S., Kerwin J.L., Loo J.A., Witte O.N. A phosphorylation site in Bruton's tyrosine kinase selectively regulates B cell calcium signaling efficiency by altering phospholipase C-gamma activation. // Proc Natl Acad Sci USA. -2004. -V.101. №5. -P.14180-14185.

96. Hagman J., Ramirez J., Lukin K. B lymphocyte lineage specification, commitment and epigenetic control of transcription by early B cell factor 1. // Curr Top Microbiol Immunol. -2012. -V.356. -P.17-38.

97. Hamblin T. Historical aspects of chronic lymphocytic leukaemia. // Br J Haematol. -2000. -V.l 11. №4.-P. 1023-1034.

98. Hanahan D., Weinberg R.A. Hallmarks of cancer. // Cell. -2000. -V.100. №1. -P.57-70.

99. Hanahan D., Weinberg R.A. Hallmarks of cancer: the next generation. // Cell. -2011. -V.144. №5. -P.646-674.

100. Hannet I., Erkeller-Yuksel F., Lydyard P., Deneys V., DeBruyere M. Developmental and maturational changes in human blood lymphocyte subpopulations. // Imm Today. -1992. -V.13. №6. -P.215-218.

101. Hansen A., Reiter K., Doerner T., Pruss A., Cryopreserved human B cells as an alternative source for single cell mRNA analysis. // Cell Tissue Bank. -2005. -V.6. №4. -P.299-308.

102. Hao Q.L., Shah A.J., Thiemann F.T., Smogorzewska E.M., Crooks G.M. A functional comparison of CD34 + CD38- cells in cord blood and bone marrow. // Blood. -1995. -V.86. №10. -P.3745-3753.

103. Hao Q.L., Smogorzewska E.M., Barsky L.W., Crooks G.M. In vitro identification of single CD34+CD38- cells with both lymphoid and myeloid potential. // Blood. -1998. -V.91. №11.-P.4145-4151.

104. Hardy R.R., Hayakawa K. B cell development pathways. // Annual Rev Immunol. -2001. -V.l9. -P.595-621.

105. Harlow E., Lane D. Antibodies: A Laboratory Manual. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988. 731 c.

106. Harwood N.E., Batista F.D. Early events in B cell activation. // Annual Rev Immunol. -2010. -V.28. -P.185-210.

107. Hermiston M.L., Xu Z., Weiss A. CD45: A Critical Regulator of Signaling Thresholds in Immune Cells. // Annual Rev Immunol. -2003. -V.21. -P.107-137.

108. Herzenberg L.A., Parks D., Sahaf B., Perez O., Roederer M., Herzenberg L.A.. The history and future of the fluorescence activated cell sorter and flow cytometry: a view from Stanford. // Clin. Chem. -2002. -V.48. №10. -P. 1819-1827.

109. Hoffmann-Fezer G., Lohrs U., Rodt H.V., Thierfelder S. Immunohistochemical identification of T- and B-lymphocytes delineated by the unlabelled antibody enzyme method. III. Topographical and quantitative distribution of T- and B-cells in human palatine tonsils. // Cell Tissue Res. -1981. -V.216. №2. -P.361-375.

110. Hozumi N., Tonegawa S. Evidence for somatic rearrangement of immunoglobulin genes coding for variable and constant regions. // Proc Natl Acad Sci USA. -1976. -V.73. №10. -P.3628-3632.

111. Hruz T., Wyss M., Docquier M., Pfaffl M.W., Masanetz S., Borghi L., Verbrugghe P., Kalaydjieva L., Bleuler S., Laule O., Descombes P., Gruissem W., Zimmermann P. RefGenes: identification of reliable and condition specific reference genes for RT-qPCR data normalization. // BMC Genomics. -2011. -V.12. №156.

112. Huggett J., Dheda K., Bustin S., Zumla A. Real-time RT-PCR normalisation; strategies and considerations. // Genes Immun. -2005. -V.6. №4. -P.279-284.

113. Hulett H.R., Bonner W.A., Barrett J., Herzenberg L.A. Cell sorting: automated separation of mammalian cells as a function of intracellular fluorescence. // Science. -1969. -V.166. №3906. -P.747-749.

114. Hultin L.E., Hausner M.A., Hultin P.M., Giorgi J.V. CD20 (pan-B cell) antigen is expressed at a low level on a subpopulation of human T lymphocytes. // Cytometry. -1993. -V.14. №2. -P.196-204.

115. Hystad M.E., Myklebust J.H., Bo T.H., Sivertsen E.A., Rian E., Forfang L., Munthe E., Rosenwald A., Chiorazzi M., Jonassen I., Staudt L.M., Smeland E.B. Characterization of early stages of human B cell development by gene expression profiling. // J Immunol. -2007. -V.179. №6. -P.3662-3671.

116. Imamura R., Miyamoto T., Yoshimoto G., Kamezaki K., Ishikawa F., Henzan H., Kato K., Takase K., Numata A., Nagafuji K., Okamura T., Sata M., Harada M., Inaba S. Mobilization of human lymphoid progenitors after treatment with granulocyte colony-stimulating factor. // J Immunol. -2005. -V.175. №4. -P.2647-2654.

117. Jaffe E.S., Harris N.L., Stein H., Vardiman J.W. Pathology and Genetics of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. Lyon: IARC Press, 2001. 351c.

118. Janossy G., Pizzolo G.( Lymphocytes. 2. Differentiation. Differentiation of lymphoid precursor cells. // J Clin Pathol Suppl (R Coll Pathol). -1979. -V.13. -P.48-58.

119. Jares P., Colomer D., Campo E. Molecular pathogenesis of mantle cell lymphoma. // J Clin Invest. -2012. -V.122. №10. -P.3416-3423.

120. Jensen K., Brusletto B.S., Aass H.C., Olstad O.K., Kierulf P., Gautvik K.M. Transcriptional profiling of mRNAs and microRNAs in human bone marrow precursor B cells identifies subset-and age-specific variations. // PLoS One. -2013. -V.8. №7. -e70721.

121. Kaplan D., Meyerson H.J., Li X., Drasny C., Liu F., Costaldi M., Barr P., Lazarus H.M. Correlation between ZAP-70, phospho-ZAP-70, and phospho-SYK expression in leukemic cells from patients with CLL. // Cytometry B Clin Cytom. -2010. -V.78. №2. -P.l 15-122.

122. Kehry M.R. CD40-mediated signaling in B-cells. Balancing cell survival, growth, and death. // J Imm. -1996. -V.156. №7. -P.2345-2348.

123. Kheirelseid E.A., Chang K.H., Newell J., Kerin M.J., Miller N. Identification of endogenous control genes for normalisation of real-time quantitative PCR data in colorectal cancer. // BMC Mol Biol. -2010. -V.ll. №12.

124. Klein U., Dalla-Favera R. New insights into the phenotype and cell derivation of B cell chronic lymphocytic leukemia. - b Caligaris-Cappio F., Dalla-Favera R. Chronic Lymphocytic Leukemia. Curr Top Microbiol Immunol 2005. Berlin Heidelberg: Springer-Verlag, 2005. 200 c.

125. Klein U., Rajewsky K., Kueppers R. Human immunoglobulin (Ig)M+IgD+ peripheral blood B Cells expressing the CD27 cell surface antigen carry somatically mutated variable region genes: CD27 as a general marker for somatically mutated (memory) B Cells. // J Exp Med. -1998. -V.188. №9. -P.1679-1689.

126. Korac P., Dotlic S., Dominis M. "Double hit" lymphoma or secondary MYC translocation lymphoma. // Periodicum Biologorum. -2012. -V.l 14. №4. -P.527-537.

127. Lankester A.C., van Schijndel G.M., van der Schoot C.E., van Oers M.H., van Noesel C.J., van Lier R.A. Antigen receptor nonresponsiveness in chronic lymphocytic leukemia B cells. // Blood. -1995. -V.86. -P.1090-1097.

128. Laurenti L., Petlickovski A., Rumi C., Gobessi S., Piccioni P., Tarnani M., Puggioni P., Marietti S., Sica S., Leone G., Efremov D.G. Comparison of ZAP-70/SYK mRNA levels with immunoglobulin heavy-chain gene mutation status and disease progression in chronic lymphocytic leukemia. // Haematologica. -2005. -V.90. №11. -P. 1533-1540.

129. Law C.L., Chandran K.A., Sidorenko S.P., Clark E.A. Phospholypase C-gammal interacts with conserved phosphotyrosyl residues in the linker region of SYK and is a substrate for SYK. // Mol Cell Biol. -1996. -V.l6. №4. -P.1305-1315.

130. LeBien T.W. Fates of human B-cell precursors. // Blood. -2000. -V.96. №1. -P.9-23.

131. Ledderose C., Heyn J., Limbeck E., Kreth S. Selection of reliable reference genes for quantitative real-time PCR in human T cells and neutrophils. // BMC Res Notes. -2011. -V.4. №427.

132. Lee P.S., Beneck D., Weiserberg D., Gorczyca W. Coexpression of CD43 by benign B cells in the terminal ileum. // Appl Immunohistochem Mol Morphol. -2005. -V.13. №2. -P.138-141.

133. Lee S.T., Xiao Y., Muench M.O., Xiao J., Fomin M.E., Wicncke J.K., Zheng S., Dou X., de Smith A., Chokkalingam A., Buffler P., Ma X., Wiemels J.L. A global DNA methylation and gene expression analysis of early human B-cell development reveals a demethylation signature and transcription factor network. //Nucleic Acids Res. -2012. -V.40. №22. -P. 11339-11351.

134. Lee J.H., Noh J., Noh G., Choi W.S., Lee S.S. IL-10 is predominantly produced by CD19(low)CD5(+) regulatory B cell subpopulation: characterisation of CD19 (high) and CD19(low) subpopulations of CD5(+) B cells. // Yonsei Med J. -2011. -V.52. №5. -P.851-855.

135. Lennert K. History of the European Association for Haematopathology. Berlin, Heidelberg: Springer-Verlag, 2006. 131 c.

136. Li H.L., Davis W.W., Whiteman E.L., Birnbaum M.J., Pure E. The tyrosine kinases SYK and LYN exert opposing effects on the activation of protein kinase Akt/PKB in B lymphocytes. // Proc Natl Acad Sci USA. -1999. -V.96. №12. -P.6890-6895.

137. Llinas L., Lazaro A., de Salort J., Matesanz-Isabel J., Sintes J., Engel P. Expression profiles of novel cell surface molecules on B-cell subsets and plasma cells as analyzed by flow cytometry. // Immunol Lett. -2011. -V. 134. №2. -P. 113-121.

138. Loken M.R., Shah V.O., Dattilio K.L., Civin C.I. Flow cytometric analysis of human bone marrow. II. Normal B lymphocyte development. // Blood. -1987. -V.70. №5. -P.1316-1324.

139. Lugton I. Mucosa-associated lymphoid tissues as sites for uptake, carriage and excretion of tubercle bacilli and other pathogenic mycobacteria. // Immunol Cell Biol. -1999. -V.77. №4. -P.364-372.

140. Maas A., Hendriks R.W. Role of Bruton's tyrosine kinase in B cell development. // Dev Immunol. -2001. -V.8. №3-4. -P.171-181.

141. MacLennan I.C. Germinal centers. // Annual Rev Immunol. -1994. -V.12. -P.l 17-139.

142. Malavasi F., Deaglio S., Funaro A., Ferrero E., Horenstein A.L., Ortolan E., Vaisitti T., Aydin S. Evolution of the ADP ribosyl cyclase/CD38 gene family in physiology and pathology. // Physiol Rev. -2008. -V.88. №3. -P.841-886.

143. Martin V.A., Wang W.H., Lipchik A.M., Parker L.L., He Y., Zhang S., Zhang Z.Y., Geahlen R.L. Akt2 inhibits the activation of NFAT in lymphocytes by modulating calcium release from intracellular stores. // Cell Signal. -2012. -V.24. №5. -P. 1064-1073.

144. Matesanz-Isabel J., Sintes J., Llinas L., de Salort J., Lazaro A., Engel P. New B-cell CD molecules. // Immunol Lett. -2011. -V.134. №2. -P.104-112.

145. Matsuo T., Hazeki K., Tsujimoto N., Inoue S., Kurosu H., Kontani K., Hazeki O., Ui M., Katada T. Association of phosphatidylinositol 3-kinase with the proto-oncogene product Cbl upon CD38 ligation by a specific monoclonal antibody in THP-1 cells. // FEBS Letters. -1996. -V.397. №1. -P.l 13-116.

146. Maul R.W., Gearhart P.J. Controlling somatic hypermutation in immunoglobulin variable and switch regions. // Immunol Res. -2010. -V.47. №1-3. -P.l 13-122.

147. Medvedovic J., Ebert A., Tagoh H., Busslinger M. Pax5: a master regulator of B cell development and leukemogenesis. // Adv Immunol. -2011. -V. 111. -P. 179-206.

148. Meffre E., Milili M., Blanco-Betancourt C., Antunes H., Nussenzweig M.C., Schiff C. Immunoglobulin heavy chain expression shapes the B cell receptor repertoire in human B cell development. // J Clin Invest. -2001. -V. 108. №6. -P.879-886.

149. Melchers F. Fit for life in the immune system? Surrogate L chain tests H chains that test L chains. // Proc Natl Acad Sci USA. -1999. -V.96. №6. -P.2571-2573.

150. Migita S., Putnam F.W. Antigenic relationships of Bence Jones proteins, myeloma globulins, and normal human gama-globulin. // J Exp Med. -1963. -V.l 17. -P.81-104.

151. Minegishi Y., Coustan-Smith E., Wang Y.H., Cooper M.D., Campana D., Conley M.E. Mutations in the human lambda5/14.1 gene result in B cell deficiency and agammaglobulinemia. // J Exp Med. -1998. -V.l87. №1. -P.71-77.

152. Minegishi Y., Coustan-Smith E., Rapalus L., Ersoy F., Campana D., Conley M.E. Mutations in Igalpha (CD79a) result in a complete block in B-cell development. // J Clin Invest. -1999. -V.104. №8. -P.1115-1121.

153. Mir M.A., Agrewala J.N. Signaling through CD80: an approach for treating lymphomas. // Expert Opin Ther Target. -2008. -V.l2. №8. -P.969-979.

154. Monroe J.G. Ligand-independent tonic signaling in B-cell receptor function. // Curr Opin Immunol. -2004. -V.16. №3. -P.288-295.

155. Moshaver B., van Rhenen A., Kelder A., van der Pol M., Terwijn M., Bachas C., Westra A. H., Ossenkoppele G. J., Zweegman S., Schuurhuis G. J. Identification of a small subpopulation of candidate leukemia-initiating cells in the side population of patients with acute myeloid leukemia. // Stem Cells. -2008. -V.26. №12. -P.3059-3067.

156. Nolz J.C., Tschumper R.C., Pittner B.T., Darce J.R., Kay N.E., Jelinek D.F. ZAP-70 is expressed by a subset of normal human B-lymphocytes displaying an activated phenotype. // Leukemia. -2005. -V.l9. №6. -P. 1018-1024.

157. Notta F., Doulatov S., Laurenti E., Poeppl A., Jurisica I., Dick J.E. Isolation of single human hematopoietic stem cells capable of long-term multilineage engraftment. // Science. -2011. -V.333. №6039. -P.218-221.

158. Novershtern N., Subramanian A., Lawton L.N., Mak R.H., Haining W.N., McConkey M.E., Habib N., Yosef N., Chang C.Y., Shay T., Frampton G.M., Drake A.C., Leskov I., Nilsson B„ Preffer F., Dombkowski D., Evans J.W., Liefeld T., Smutko J.S., Chen J., Friedman N., Young R.A., Golub T.R., Regev A., Ebert B.L. Densely interconnected transcriptional circuits control cell states in human hematopoiesis. // Cell. -2011. -V. 144. №2. -P.296-309.

159. Numaga T., Nishida M., Kiyonaka S., Kato K., Katano M., Mori E., Kurosaki T., Inoue R., Hikida M., Putney J.W. Jr, Mori Y. Ca2+ influx and protein scaffolding via TRPC3 sustain PKCbeta and ERK activation in B cells. // J Cell Sci. -2010. -V.123 Pt6. -P.927-938.

160. Nunez C., Nishimoto N., Gartland G.L., Billips L.G., Burrows P.D., Kubagawa H., Cooper M.D. B cells are generated throughout life in humans. // J Immunol. -1996. -V.156. №2. -P.866-872.

161. Okkenhaug K., Vanhaesebroeck B. PI3K in lymphocyte development, differentiation and activation. // Nat Rev Immunol. -2003. -V.3. №4. -P.317-330.

162. Orchard J.A., Ibbotson R.E., Davis Z., Wiestner A., Rosenwald A., Thomas P.W., Hamblin T.J., Staudt L.M., Oscier D.G. ZAP-70 expression and prognosis in chronic lymphocytic leukaemia. // Lancet. -2004 -V.363. №9403. -P. 105-111.

163. Orfao A., Ruiz-Arguelles A. General concepts about cell sorting techniques. // Clin Biochem. -1996.-V.29. №l.-P.5-9.

164. Owens T., Zeine R. The cell biology of T-dependent B cell activation. // Biochem Cell Biol. -1989. -V.67. №9. -P.481-489.

165. Pao L.I., Cambier J.C. SYK, but not LYN, recruitment to B cell antigen receptor and activation following stimulation of CD45- B cells. // J Immunol. -1997. -V.158. №6. -P.2663-2669.

166. Pao L.I., Famiglieti S.J., Cambier J.C. Asymmetrical phosphorylation and function of immunoreceptor tyrosine-based activation motif tyrosines in B-cell antigen receptor signal transduction. // J Immunol. -1998. -V.160. №7. -P.3305-3314.

167. Perez-Villar J.J., Whitney G.S., Bowen M.A., Hewgill D.H., Aruffo A.A. CD5 Negatively Regulates the T-Cell Antigen Receptor Signal Transduction Pathway: Involvement of SH2-Containing Phosphotyrosine Phosphatase SHP-1. // Mol Cell Biol. -1999. -V.19. №4. -P.2903-2912.

168. Pernis B., Forni L., Amante L. Immunoglobulins as cell receptors. // Annals of New York Academy of Sciences. -1971. -V. 190. -P.420-431.

169. Pers J.O., Jamin C., Predine-Hug F., Lydyard P., Youinou P. The role of CD5-expressing B cells in health and disease (review). // Int J Mol Med. -1999. -V.3. №3. -P.239-245.

170. Petrosyan K., Tamayo R., Joseph D. Sensitivity of a Novel Biotin-free Detection Reagent (Powervision+) for Immunohistochemistry. // Journal of Histotecnol. -2002. -V.25. №4. -P.247-250.

171. Pfaffl M.W., Tichopad A., Prgomet C., Neuvians T.P. Determination of stable housekeeping genes, differentially regulated target genes and sample integrity: BestKeeper—Excel-based tool using pair-wise correlations. // Biotechnol Lett. -2004. -V.26. №6. -P.509-515.

172. Pieper K., Grimbacher B., Eibel H. B-cell biology and development. // J Allergy Clin Immunol. -2011.-V.131. №4. -P.959-971.

173. Pierce S.K. Lipid rafts and B-cell activation. // Nat Rev Immunol. -2002. -V.2. №2. -P.96-105.

174. Potashnikova D., Gladkikh A., Vorobjev I.A. Selection of Superior Reference Genes' Combination for Quantitative Real-time PCR in B-cell Lymphomas. // Ann Clin Lab Sci. -2015. -V.45. №1. -P.64-72.

175. Preud'homme J.L., Brouet J.C., Clauvel J.P., Seligmann M. Surface IgD in immunoproliferative disorders. // Scand J Immunol. -1974. -V.3. №6. -P.853-858.

176. Pritsch O., Maloum K., Dighiero G. Basic biology of autoimmune phenomena in chronic lymphocytic leukemia. // Semin Oncol. -1998. -V.25. №1. -P.34-41.

177. Provenzano M., Mocellin S. Complementary techniques: validation of gene expression data by quantitative real time PCR. // Adv Exp Med Biol. -2007. -V.593. -P.66-73.

178. Raffeld M., Jaffe E.S. bcl-1, t(ll;14), and mantle cell-derived lymphomas. // Blood. -1991. -V.78. №2. -P.259-263.

179. Rajewsky K. Clonal selection and learning in the antibody system. // Nature. -1996. -V. 381. №6585.-P.751-758.

180. Raman C., Knight K.L. CD5+ B cells predominate in peripheral tissues of rabbit. // J Immunol. -1992. -V.149. №12. -P.3858-3864.

181. Reinoso-Martin C., Jantus-Lewintre E., Ballesteros C.G., Campos C.B., Ferrer J.R., Garcia-Conde J. ZAP-70 mRNA expression provides clinically valuable information in early-stage chronic lymphocytic leukemia. // Haematologica. -2008. -V.93. №9. -P.1422-1424.

182. Reth M., Nielsen P. Signaling circuits in early B-cell development. // Adv Immunol. -2014. -V.122. -P.129-175.

183. Reynaud D., Lefort N., Manie E., Coulombel L., Levy Y. In vitro identification of human pro-B cells that give rise to macrophages, natural killer cells, and T cells. // Blood. -2003. -V.101. №11. -P.4313-4321.

184. Rizzatti E.G., Falcao R.P., Panepucci R.A., Proto-Sigueira R., Anselmo-Lima W.T., Okamoto O.K., Zago M.A. Gene expression profiling of mantle cell lymphoma reveals aberrant expression of genes from the PI3K-AKT, WNT and TGFbeta signalling pathways. // Br J Haematol. -2005. -V. 130. №4.-P.516-526.

185. Roitt I.M., Brostoff J., Male D.K. Immunology 6th ed. Maryland Heights: Mosby, 2001. 480 c.

186. Rosenwald A., Alizadeh A.A., Widhopf G., Simon R., Davis R.E., Yu X., Yang L., Pickeral. O.K., Rassenti L.Z., Powell J., Botstein D., Byrd J.C., Grever M.R., Cheson B.D., Chiorazzi N., Wilson W.H., Kipps T.J., Brown P.O., Staudt L.M. Relation of gene expression phenotype to immunoglobulin mutation genotype in B cell chronic lymphocytic leukemia. // J Exp Med. -2001. -V. 194. №11. -P. 1639-1647.

187. Rossi M.I., Yokota T., Medina K.L., Garrett K.P., Comp P.C., Schipul A.H. Jr, Kincade P.W. B lymphopoiesis is active throughout human life, but there are developmental age-related changes. // Blood. -2003. -V.101. №2. -P.576-584.

188. Rossi F.M., Del Principe M.I., Rossi D., Irno Consalvo M., Luciano F., Zucchetto A., Bulian P., Bomben R., Dal Bo M., Fangazio M., Benedetti D., Degan M., Gaidano G., Del Poeta G., Gattei V. Prognostic impact of ZAP-70 expression in chronic lymphocytic leukemia: mean fluorescence intensity T/B ratio versus percentage of positive cells. // J Transl Med. -2010. -V.8. №23.

189. Ryan D.H., Nuccie B.L., Ritterman I., Liesveld J.L., Abboud C.N., Insel R.A. Expression of interleukin-7 receptor by lineage-negative human bone marrow progenitors with enhanced lymphoid proliferative potential and B-lineage differentiation capacity. // Blood. —1997. -V.89. №3. -P.929-940.

190. Said J.W. Aggressive B-cell lymphomas: how many categories do we need? // Mod Pathology. -2013. -V.26 Suppl 1. -P.S42-S56.

191. Saiki O., Kishimoto T., Kuritani T., Muraguchi A., Yamamura Y. In vitro induction of IgM secretion and switching to IgG production in human B leukemic cells with the help of T cells. // J Immunol. -1980. -V.124. №6. -P.2609-2614.

192. Sanchez-Navarro I., Gamez-Pozo A., Gonzalez-Baron M., Pinto-Marin A., Hardisson D., Lopez R., Madero R., Cejas P., Mendiola M., Espinosa E., Vara J.A. Comparison of gene expression profiling by reverse transcription quantitative PCR between fresh frozen and formalin-fixed, paraffin-embedded breast cancer tissues. // Biotechniques. -2010. -V.48. №5. -P.389-397.

193. Sant M., Allemani C., Tereanu C., De Angelis R., Capocaccia R., Visser O., Marcos-Gragera R., Maynadie M., Simonetti A., Lutz J.M., Berrino F. HAEMACARE Working Group. Incidence of hematologic malignancies in Europe by morphologic subtype: results of the HAEMACARE project. // Blood. -2010. -V.116. №19. -P.3724-3734.

194. Santamaria-Martinez A., Barguinero J., Barbosa-Desongles A., Hurtado A., Pinos T., Seoane J., Poupon M.F., Morote J., Reventos J., Munell F. Identification of multipotent mesenchymal stromal cells in the reactive stroma of a prostate cancer xenograft by side population analysis. // Exp Cell Res. -2009. -V.315. №17. -P.3004-3013.

195. Sanz E., Alvarez-Mon M., Martinez-A C., de la Hera A. Human cord blood CD34+Pax-5+ B-cell progenitors: single-cell analyses of their gene expression profiles. // Blood. -2003. -V.101. №9. -P.3424-3430.

196. Sanz E., Munoz-A N., Monserrat J., Van Den Rym A., Escoll P., Ranz I., Alvarez-Mon M., de la Hera A.. Ordering human CD34+CD10-CD19+ pre/pro-B-cell and CD19- common lymphoid

progenitor stages in two pro-B-cell development pathways. // Proc Natl Acad Sci USA. -2010. -V.107. №13. -P.5925-5930.

197. Scheid M.P., Woodgett J.R. Unravelling the activation mechanisms of protein kinase B/Akt. // FEBS Letters. -2003. -V.546. №1. -P. 108-112.

198. Schiff C., Lemmers B., Deville A., Fougereau M., Meffre E. Autosomal primary immunodeficiencies affecting human bone marrow B-cell differentiation. // Immunol Rev. -2000. -V.178. -P.91-98.

199. Scielzo C., Camporeale A., Geuna M., Alessio M., Poggi A., Zocchi M.R., Chilosi M., Caligaris-Cappio F., Ghia P. ZAP-70 is expressed by normal and malignant human B-cell subsets of different maturational stage. // Leukemia. -2006. -V.20. №4. -P.689-695.

200. Seda V., Mraz M. B-cell signalling and its crosstalk with other pathways in normal and malignant cells. // Eur J Haermotol. -2015. -V.94. №3. -P.193-205.

201. Shapiro H.M. Practical flow cytometry. 4th Edition. Hoboken: Willey, 2003. 736 c.

202. Shirai T., Hirose S., Okada T., Nishimura H. CD5+ B cells in autoimmune disease and lymphoid malignancy. // Clin Immunol Immunopathol. -1991. -V.59. №2. -P. 173-186.

203. Sindhava V.J., Bondada S. Multiple regulatory mechanisms control B-l B cell activation. // Front Immunol. -2012. -V.3. №372.

204. Skibola S.M. Obesity, diet and risk of non-Hodgkin lymphoma. // Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. -2007. -V.16. №3. -P.392-395.

205. Slavik J.M., Hutchcroft J.E., Bierer B.E. CD28/CTLA-4 and CD80/CD86 families. // Immunol Res. -1999. -V.19. №1. -P.l-24.

206. Somani A.K., Yuen K., Xu F., Zhang J., Branch D.R., Siminovitch K.A. The SH2 domain containing tyrosine phosphatase-1 down-regulates activation of LYN and LYN-induced tyrosine phosphorylation of the CD 19 receptor in B cells. // J Biol Chem. -2001. -V.276. №3. -P. 19381944.

207. Sorby L.A., Andersen S.L., Bukholm I.R., Jacobsen M.B. Evaluation of suitable reference genes for normalization of real-time reverse transcription PCR analysis in colon cancer. // J Exp Clin Cancer Res. -2010. -V.29. №144.

208. Su W., Yeong K.F., Spencer J. Immunohistochemical analysis of human CD5 positive B cells: mantle cells and mantle cell lymphoma are not equivalent in terms of CD5 expression. // J Clin Pathol -2000. -V.53. №5. -P.395-397.

209. Sugie K., Minami Y., Kawakami T., Uchida A. Stimulation of NK-like YT cells via leukocyte function-associated antigen (LFA)-l. Possible involvement of LFA-1-associated tyrosine kinase in signal transduction after recognition of NK target cells. // J Immunol -1995. -V.154. №4. -P.1691-1698.

210. Suzuki T., Higgins P.J., Crawford D.R. Control selection for RNA quantitation. // Biotechniques. -2000. -V.29. №2. -P.332-337.

211. Swerdlow S.H., Campo E., Harris N.L., Jaffe E.S., Pileri S.A., Stein H., Theile J., Vardiman J.W. WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues 4th ed. Lyon: World Health Organization Press, 2008. 439 c.

212. Tanaka-Harada Y., Kawakami M., Oka Y., Tsuboi A., Katagiri T., Elisseeva O.A., Nishida S., Shirakata T., Hosen N., Fujiki F., Murao A., Nakajima H., Oji Y., Kanda Y., Kawase I., Sugiyama H. Biased usage of BV gene families of T-cell receptors of WT1 (Wilms' tumor gene)-specific CD8+ T cells in patients with myeloid malignancies. // Cancer Sci. -2010. -V.101. №3. -P.594-600.

213. Tangye S.G., Ferguson A., Avery D.T., Ma C.S., Hodgkin P.D. Isotype switching by human B cells is division-associated and regulated by cytokines. // J Immunol. -2002. -V.169. №8. -P.4298-4306.

214. Taylor S., Wakem M., Dijkman G., Alsarraj M., Nguen M. A practical approach to RT-qPCR-Publishing data that conform to the MIQE guidelines. // Methods. -2010. -V.50. №4. -P.S1-5.

215. Tolar P., Pierce S.K. A conformation-induced oligomerization model for B cell receptor microclustering and signaling. // Curr Top Microbiol Immunol. -2010. -V.340. -P.155-169.

216. Trentin L., Frasson M., Donella-Deana A., Frezzato F., Pagano M.A., Tibaldi E., Gattazzo C., Zambello R., Semenzato G., Brunati A.M. Geldanamycin-induced LYN dissociation from aberrant Hsp90-stabilized cytosolic complex is an early event in apoptotic mechanisms in B-chronic lymphocytic leukemia. // Blood. -2008. -V.112. №12. -P.4665-4674.

217. Tricarico C., Pinzani P., Bianchi S., Paglierani M., Distante V., Pazzagli M., Bustin S.A., Orlando C. Quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction: normalization to rRNA or single housekeeping genes is inappropriate for human tissue biopsies. // Anal Biochem. -2002. -V.309. №2. -P.293-300.

218. True L.D., Zhang H., Ye M., Huan C.Y., Nelson P.S., von Haller P.D., Tjoelker L.W., Kim J.S., Qian W.J., Smith R.D., Ellis W.J., Liebeskind E.S., Liu A.Y. CD90/TH1 is overexpressed in prostate cancer-associated fibroblasts and can serve as a cancer biomarker. // Mod Pathol. -2010. -V.23. №10. -P.1346-1356.

219. Tsubata T. Role of inhibitory BCR co-receptors in immunity. // Infect Disord Drug Targets. -2012. -V.12. №3. -P. 181-190.

220. Tung J.W., Parks D.R., Moore W.A., Herzenberg L.A., Herzenberg L.A. Identification of B-cell-subsets: an exposition of 11-color (Hi-D) FACS methods. // Methods Mol Biol. -2004. -V.271. -P.37-58.

221. Valceckiene V., Kontenyte R., Jakubauskas A., Griskevicius L. Selection of reference genes for quantitative polymerase chain reaction studies in purified B cells from B cell chronic lymphocytic leukaemia patients. // Br J Haematol. -2010. -V.l 51. №3. -P.232-238.

222. Vandesompele J., De Preter K., Pattyn F., Poppe B., Van Roy N., De Paepe A., Speleman F. Accurate normalization of real-time quantitive RT-PCR data by geometric averaging of multiple internal control genes. // Genome Biol. -2002. -V.3. RESEARCH0034.

223. Van Furth R., Schuit H.R., Hijmans W. The formation of immunoglobulins by human tissues in vitro. 3. Spleen, lymph nodes, bone marrow and thymus. // Immunology. -1966. —V.ll. №1. -P. 19-27.

224. van Lochem E.G., van der Velden V.H., Wind H.K., Marvelde J.G., Westerdaal N.A., van Dongen J.J. Immunophenotypic differentiation patterns of normal hematopoiesis in human bone marrow: Reference patterns for age-related changes and disease-induced shifts. // Cytometry. -2004. -V.60. №1. -P. 1-13.

225. van Oers M.H., Pals S.T., Evers L.M., van der Schoot C.E., Koopman G., Bonfrer J.M., Hintzen R.Q., von dem Borne A.E., van Lier R.A. Expression and release of CD27 in human B-cell malignancies.//Blood-1993.-V.82. №11.-P.3430-3436.

226. van Zelm M.C., van der Burg M., de Ridder D., Barendregt B.H., de Haas E.F., Reinders M.J., Lankester A.C., Revesz T., Staal F.J., van Dongen J.J. Ig gene rearrangement steps are initiated in early human precursor B cell subsets and correlate with specific transcription factor expression. // J Immunol. -2005. -V.175. №9. -P.5912-5922.

227. Veneri D., Franchini M., Vella A., Tridente G., Semenzato G., Pizzolo G., Ortolani R. Changes of human B and B-la peripheral blood lymphocytes with age. // Hematology. -2007. -V.12. №4. -P.337-341.

228. Vossenkamper A., Blair P.A., Safinia N., Fraser L.D., Das L., Sanders T.J., Stagg A.J., Sanderson J.D., Taylor K., Chang F., Choong L.M., D'Cruz D.P., Macdonald T.T., Lombardi G., Spencer J. A role for gut-associated lymphoid tissue in shaping the human B cell repertoire. // J Exp Med. -2013. -V.210. №9. -P. 1665-1674.

229. Vroblova V., Smolej L., Krejsek J. Pitfalls and limitations of ZAP-70 detection in chronic lymphocytic leukemia. // Hematology. -2012. -V.l7. №5. -P.268-274.

230. Vuillier F., Dumas G., Magnac C., Prevost M.C., Lalanne A.I., Oppezzo P., Melanitou E., Dighiero G., Payelle-Brogard B. Lower levels of surface B-cell-receptor expression in chronic lymphocytic leukemia are associated with glycosylation and folding defects of the mu and CD79a chains. // Blood. -2005. -V.105. №7. -P.2933-2940.

231. Walker J.A., Smith K.G.C. CD22: an inhibitory enigma. // Immunology. -2008. -V.123. №3. -P.314-325.

232. Watanabe N., Takahashi S., Ishige M., Ishii Y., Ooi J., Tomonari A., Tsukada N., Konuma T., Kato S., Sato A., Tojo A., Nakauchi H. Recipient-Derived Cells after Cord Blood Transplantation: Dynamics Elucidated by Multicolor FACS, Reflecting Graft Failure and Relapse. // Biol Blood Marrow Transplant. -2008. -V.14. №6. -P.693-701.

233. Wiestner A., Rosenwald A., Barry T.S., Wright G., Davis R.E., Henrickson S.E., Zhao H., Ibbotson R.E., Orchard J.A., Davis Z., Stetler-Stevenson M., Raffeld M., Arthur D.C., Marti G.E., Wilson W.H., Hamblin T.J., Oscier D.G., Staudt L.M. ZAP-70 expression identifies a chronic lymphocytic leukemia subtype with unmutated immunoglobulin genes, inferior clinical outcome, and distinct gene expression profile. // Blood. -2003. -V.101. №12. -P.4944-4951.

234. Wilson J.D., Nossal G.J. Identification of human B lymphocytes in normal peripheral blood and in chronic lymphocytic leukaemia. // Lancet. -1971. -V.2. №7728. -P.788-791.

235. Wong M.L., Medrano J.F. Real-time PCR for mRNA quantitation. // Biotechniques. -2005. -V.39. №1. -P.75-85.

236. Xu Y., Beavitt S.J., Harder K.W., Hibbs M.L., Tarlinton D.M. The activation and subsequent regulatory roles of LYN and CD 19 after B cell receptor ligation are independent. // J Immunol. -2002. -V.169. №12. -P.6910-6918.

237. Yel L., Minegishi Y., Coustan-Smith E., Buckley R.H., Trubel H., Pachman L.M., Kitchingman G.R., Campana D., Rohrer J., Conley M.E. Mutations in the mu heavy-chain gene in patients with agammaglobulinemia. // N Engl J Med. -1996. -V.335. №20. -P.1486-1493.

238. Yokota A., Kikutani H., Tanaka T., Sato R., Barsumian E.L., Suemura M., Kishimoto T. Two species of human Fc receptor II (Fc RII/CD23): tissue-specific and IL-4-specific regulation of gene expression. // Cell. -1988. -V.55. №4. -P.611-618.

239. Youinou P., Mackenzie L.E., Lamour A., Mageed R.A., Lydyard P.M. Human CD5-positive B cells in lymphoid malignancy and connective tissue diseases. // Eur J Clin Invest. -1993. -V.23. №3.-P. 139-150.

240. Youinou P., Renaudineau Y. CD5 expression in B cells from patients with systemic lupus erythematosus. // Crit Rev Immunol. -2011. -V.31. №1. -P.31-42.

241. Zaidi M.R., Day C.P., Merlino G. Fluorescent protein-assisted purification for gene expression profiling. // Methods Mol Biology. -2011. -V.699. -P.393-405.

242. Zandi S., Bryder D., Sigvardsson M. Load and lock: the molecular mechanisms of B-lymphocyte commitment. // Immunol Rev. -2010. -V.238. №1. -P.47-62.

243. Zanesi N., Balatti V., Bottoni A., Croce C.M., Pekarsky Y. Novel insights in molecular mechanisms of CLL. // Curr Pharm Des. -2012. -V.18. №23. -P.3363-3372.

244. Zhao X.F. Pitfalls in Diagnostic Hematopathology: Part I. // Int J Clin Exp Pathol. -2009. -V.2. №1.-P. 11-20.

245. Zhao X.F. Pitfalls in Diagnostic Hematopathology: Part II. // Int J Clin Exp Pathol. -2010. -V.3. №l.-P.39-46.

246. Zhang Y., Meyer-Hermann M., George L.A., Figge M.T., Khan M., Goodall M., Young S.P., Reynolds A., Falciani F., Waisman A., Notley C.A., Ehrenstein M.R., Kosco-Vilbois M., Toellner K.M. Germinal center B cells govern their own fate via antibody feedback. // J Exp Med. -2013. -V.210. №3. -P.457-464.

247. Zhang M., Srivastava G., Lu L. The pre-B cell receptor and its function during B cell development. // Cell Mol Immunol. -2004. -V.l. №2. -P.89-94.

248. Zhao H., Peehl D.M. Tumor-promoting phenotype of CD90hi prostate cancer-associated fibroblasts. // Prostate. -2009. -V.69. №9. -P.991-1000.

249. Zola H., Swart B. The human leucocyte differentiation antigens (HLDA) workshops: the evolving role of antibodies in research, diagnosis and therapy. // Cell Res. -2005. -V.15. №9. -P.691-694.

250. Zouali M. Transcriptional and metabolic pre-B cell receptor-mediated checkpoints: Implications for autoimmune diseases. // Mol Immunol. -2014. -V.62. №2. -P.315-320.

251. Zupo S., Dono M., Massara R., Taborelli G., Chiorazzi N., Ferrarini M. Expression of CD5 and CD38 by human CD5- B cells: requirement for special stimuli. // Eur J Immunol. -1994. -V.24. №6.-P. 1426-1433.

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение 1. Таблица 10: Описание выборки образцов ЛКМЗ. Данные по транслокации ^11; 14) доступны для 7 случаев из 27, н/д - нет данных. ССЫВ1 - относительное нормализованное количество кДНК гена циклина В1. Для солидных опухолей приведен гистологический вариант.

№ Возрас т Тип ткан и г (11;14) ссш 1 Клон Иммунофенотип опухоли Уровен ь активац ИИ Гистоло гически й вариант

1 74 кровь 1(11;14) 55,35 к СЕ) 19+/С05+/СЭ20 +/С022+/СЭ23-/РМС7+/СЭ43- СБ38 1о\у

2 40 л/у 1(11;14) 9,15 к С019+/С05+/СБ20 +/СВ22+/СВ23-/РМС7-/СЭ431ОЛ¥ СБ38 1ош бластоид ный

3 76 кровь н/д 5,61 к С019+/С05+/СЭ20 +/С022+/СБ23-/РМС7-/С043- С038 1ош

4 59 кровь 1(11;14) 0,47 X СБ19+/С05+/СВ20 +/СЭ22+/СВ23-/РМС71О\¥/СЭ43- СБ38 Ыgh

5 64 л/у н/д 26,29 X СБ19+/СБ5+/С020 +1С022+/Стъ-/РМС7+/СЭ43+ С038 Ы^ бластоид ный

6 45 кровь н/д 0,22 к СВ19+/СЭ5+/С020 +/С022+/С023-/РМС7-/СБ43+ СБ38

7 70 кровь 1(11;14) 7,98 к С019+/С05+/С020 С038

+/СВ22+/СБ231о\¥/ РМС7+/СЭ431о XV 1ош

8 53 селез енка н/д 0,0145 СВ19+/СВ5+/СБ20 +/С022+/СБ23-/РМС7-/СБ431о\у СБ38 1^11 бластоид ный

9 47 л/у н/д 6,12 к СВ19+/С05+/С020 +/СВ22+/СБ23-/РМС7+/С043+ СБ38 ы^ диффузн ый

10 66 селез енка н/д 5,94 X СВ19+/СВ5+/СЭ20 +/С022+/С023-/РМС71о\у/С043- СБ38 нодуляр ный

11 74 кровь н/д 0,21 X С019+/С05+/С020 +/СВ22+/СБ23-/FMC71ow/CD431o \у СБ38 1ош

12 77 кровь н/д 0,102 к С019+/С05+/С020 +/С022+/С0231о\у/ РМС7+/С043- СБ38 1^11

13 54 кровь н/д 5,18 X С019+/С05+/С020 +/CD22+/CD231ow/ РМС7+/С043- СБ38

14 48 кровь н/д 2,17 к СБ19+/С05+/С020 +/СЭ22+/С023-/РМС7+/СБ43- СВ38 ы^

15 44 кровь 1(11;14) 65,257 4 к С019+/СБ5-1СтЪ+1Сй22+1СТ> 23-/РМС7+/СЭ43- СБ38

16 27 кровь н/д 6,8639 7 СБ19+/СБ5+/СВ20 +/СЭ22+/С023- СБ38

/¥ма+/стз-

17 58 кровь н/д 1,1821 X СЭ^+ЛЖ+ЛЖО +/СВ22+/СВ23-/РМС71о\¥/С043+ СЭ38

18 75 л/у 1(11;14) 1,4977 X СВ19+/СВ5+/СБ20 +/СВ22+1СВ23Ш/ РМС7+/СЭ43+ СЭ38 ^Ь бластоид ный

19 58 костн ый мозг н/д 25,371 4 к С019+/С05+/С020 +/СВ22+/СВ23-/РМС7+/СБ43- СЭ38 \iigh

20 69 кровь н/д 4,4136 X С019+/С05+/СВ20 +/СБ22+/СВ231ош/ РМС7+/СБ43+ СБ38 high

21 53 кровь 1(11;14) 3,78 к С019+/С05+/С020 +/СВ22+/СБ23-/РМС7+/СБ43- СЭ38

22 55 костн ый мозг н/д 0,078 к СБ19+/СЭ5+/СВ20 +/СВ22+/СВ23-/FMC7+/CD431ow СЭ38

23 76 кровь н/д 0,67 X С019+/С05+/С020 +/СБ22+/СБ23-/FMC7-/CD431ow СБ38

24 34 кровь н/д 3,48 X С019+/С05+/СБ20 +/С022+/СЭ23-/РМС7+/СЭ43- С038 1о\у

25 70 кровь н/д 107,19 к С019+/СЭ5+/С020 +/СВ22+/СВ23-/РМС7+/СБ43- СЭ38

26 53 кровь н/д 6,15 X С019+/СБ5+/С020 СЭ38

+/CD22+/CD23-/FMC7+/CD431ow high

27 52 л/у н/д' 1,06 X CD19+/CD5+/CD20 +/CD231ow н/д диффузн ый

Приложение 2. Таблица 11: Описание выборки образцов В-ХЛЛ. ССЖ)7 - относительное нормализованное количество кДНК гена циклина Б1, н/д - нет данных. В 1 случае из 28 экспрессия легких цепей иммуноглобулина не детектировалась ни внутри, ни снаружи клеток. Для солидных опухолей приведен гистологический вариант.

№ Возраст Тип ткани CCND1 Клон Иммунофенотип опухоли Уровен ь активац ИИ Гистолог ический вариант

1 63 л/у 0,015 к low CD 19+/CD5+/CD20+ /CD22+/CD23+/FMC 7-/CD43+ CD38 low диффузн ый

2 85 кровь 0,0002 к CD 19+/CD5+/CD201o w/CD22+/CD231ow/F MC7-/CD43+ CD38 low

3 н/д кровь 0,001 к low CD19+/CD5+/CD201o W/CD22+/CD23+/FM C7-/CD43+ CD38 high

4 74 кровь 0,002 к CD 19+/CD5 low/CD2 01ow/CD22+/CD231o w/FMC7-/CD43+ CD38 low

5 н/д кровь 0,0004 к CD19+/CD5+/CD201o w/CD22+/CD23 low/F MC7-/CD43+ CD38 low

6 70 л/у 0,006 к CD19+/CD5+/CD20+ /CD22+/CD23+/FMC CD38 low диффузн ый

7-/СВ43+

7 61 кровь 0,1044 X СВ19+/СВ5+/СБ20+ /СБ22+/С023+/РМС 7-/СЭ43+ СБ38 1ош

8 39 костны й мозг 0,001 к 1о\м С019+/СВ5+/СБ20+ /СБ22+/С023+/РМС 7-/С043+ СБ38 ЫеЬ

9 78 кровь 0,005 X С019+/СБ5+/С020+ /С022+/С023+/РМС 7-/С043+ СБ38 low

10 48 кровь 0,01 к С019+/С05+/СВ20+ /С022+/С0231ош/РМ С7-/С043+ СБ38 1ош

11 65 кровь 0,0277 X С019+/СВ5+/СБ201о \у/С022+/С023+/РМ С7-/СБ43+ С038

12 71 кровь 0,028 к 1о\л/ СБ19+/С05+/С020+ /С022+/СЭ23+/РМС 7-/С043+ СБ38 low

13 56 кровь 0,003 X CD19+/CD51ow/CD2 01ош/С022+/С023+/ РМС7-/С043+ СЭ38 low

14 52 селезен ка 0,0024 X С019+/С05+/С023+ С038 ЫБЬ

15 62 кровь 0,057 к 1о\м С019+/С05+/С020+ /СВ22+/С023+/РМС 7-/СЭ43+ СВ38

16 55 кровь 0,1055 к 1о\л/ С019+/СВ5+/СВ201о \у/С022+/С023+/РМ СБ38 ЫеЬ

C7-/CD43+

17 56 л/у 0,01 к CD 19+/CD5+/CD201o w/CD22+/CD23+/FM C7-/CD43+ CD38 high диффузн ый

18 60 кровь 0,065 к CD 19+/CD5+/CD20+ /CD221ow/CD231ow/ FMC7-/CD43+ CD38 low

19 58 кровь 0,077 X CD19+/CD5+/CD20+ /CD22+/CD23+/FMC 7-/CD43+ CD38 low

20 81 кровь 0,012 легкие цепи не экспре ссирую тся CD19+/CD5+/CD20+ /CD22+/CD23+/FMC 7-/CD43- CD38 low

21 65 кровь 0,07 к low CD19+/CD5+/CD201o W/CD22+/CD23+/FM C7-/CD43+ CD38 low

22 56 кровь 0,049 к low CD19+/CD5+/CD201o w/CD22+/CD23+/FM C7-/CD43+ CD38 low

23 48 кровь н/д к CD19+/CD5+/CD20+ /CD22+/CD23+/FMC 7-/CD43+ CD38 low

24 59 кровь н/д к CD 19+/CD5+/CD20+ /CD22+/CD23+/FMC 7-/CD431ow CD38 low

25 64 кровь н/д к low CD 19+/CD5+/CD20+ /CD22+/CD23+/FMC CD38

7-/СЭ43+ 1оу/

26 54 кровь н/д к СВ19+/СБ5+/С020+ / С022+/СЭ23 +/РМС 7-/СЭ43+ СБ38

27 76 кровь н/д к СБ19+/СВ5+/СВ20+ 1С022+1С02Ъ+1¥ЪАС 7-/СЭ43+ СБ38 1о\¥

28 57 кровь н/д к СБ19+/СВ5+/С020+ /С022+/СБ23+/РМС 7-/СЭ43+ С038 1олу

Приложение 3. Таблица 12: Описание выборки образцов лимфом «серой зоны». ССМ£)1 -относительное нормализованное количество кДНК гена циклина £>/, н/д - нет данных. Для солидных опухолей приведен гистологический вариант.

№ Возраст Тип ткани СС1ЧВ1 Клон Иммунофенотип опухоли Уровеи ь активац ии Гистологи ческий вариант

1 71 кровь 0,29 н/д н/д н/д

2 43 селезен ка 0,08 к 2 популяции: СБ19+/СВ5+/СБ20-1С022+1СтЪ+1?МС 7-/СЭ43+ СЭ38 low нодулярны й

СБ19+/СВ5-/СБ20+/СВ22+/СВ23 1о\у/РМС7-/СВ43-

3 50 кровь 0,044 а, СО19+/СВ5+/'СВ20+ /CD22+/CD231ow/FM С7+/СВ43- ПГ\Л о low

4 87 селезен ка 0,0008 к СБ19+/С05+/СВ20+ /СВ22+/СВ23-/ЕМС7+/СБ43- СЭ38 ЩЬ. нодулярны й

5 41 кровь 0,54 к 1о\м СБ19+/С05+/С020+ /С022+/С0231О\У/РМ С71ош/СЭ43- СБ38 ^Ь

6 54 кровь 0,087 X СБ19+/С05+/СВ20+ /С022+/СБ231о\у/РМ C7+/CD431ow СЭ38 ЫеЬ

7 63 л/у 0,74 X СБ19+/СВ51О\У/СВ2 0+/С022+/С0231О\¥/ РМС71О\У/С0431О\У СБ38 ЫеЬ диффузный (ЛКМЗ?)

8 н/д кровь 1,807 к С019+/С05-/СВ20+/СБ22+/С023 -/РМС71ош/С043- С038 ЫеЬ

9 н/д кровь 3,22 Н/д н/д н/д

10 64 кровь 0,25 X СВ19+/С05+/СБ20+ /CD22+/CD231ow/FM С7-/С043- СБ38 low

11 56 кровь 0,089 X С019+/С05+/С0201о \у/СБ22+/СВ231О\у/Р МС7-/СБ43+ СЭ38 ЫеЬ

12 71 кровь 0,047 к 1о\« С019+/СВ5+/СБ201о \у/СБ22+/СВ23-/РМС7-/СБ43+ С038 ы^

13 46 кровь 0,55 к 1о\м СБ 19+/СЭ5 +/СЭ20+ /СЭ22+/С023+/РМС 71ош/С0431о\у СБ38 ЫёЬ

14 53 кровь 5,64 к СВ19+/С051О\У/С02 СБ38

0+/СВ22+/СВ23- /¥мс1-1стъ- 10ЛУ

15 59 кровь 0,26 к С019+/СБ51о\¥/СВ2 0+/С022+/СБ231ош/ РМС7-/СЭ43- СЭ38 1о\¥

16 47 кровь 0,042 X СБ19+/СБ5+/СВ201о ™1С022+1СТ>2Ъ\о^1? МС7-/С043+ СБ38 ЫёЬ

17 62 кровь 0,018 к С019+/СБ5+/С020+ /СВ22+/СЭ231О\У/РМ C7-/CD431ow СЭ38

18 68 костны й мозг 0,0006 к СЭ19+/СБ5+/С020+ /СВ22+/С0231олу/РМ С71О\У/С043- С038 low

19 63 кровь 0,011 к СО19+/С05+/СБ20+ /С022+/СБ23-/РМС7-/С0431о\у СБ38 low

20 55 кровь 0,027 X СВ19+/С051о\у/С02 0+/С022+/СБ23-/ТМС7-/СВ43- СЭ38 low

21 75 кровь 2,18 к СВ19+/С05+/С0201о ш/СБ22+/СВ23-/РМС7-/С043- СБ38 ы§ь

22 н/д кровь 1Д4 К 1с»№ С019+/СБ51ош/С02 0+/С022+/СБ23-/РМС71о\у/СВ43- СБ38 1о\¥

23 47 кровь 0,004 X С019+/СВ5+/СБ20+ /С022+/СЭ231ош/РМ С7+/СЭ43- СБ38

24 73 кровь 0,0005 % СЭ19+/СБ5+/С020+ СЭ38

/ст2+1стъ- 1о\у

/РМС7-/СЭ43+

Приложение 4. Таблица 13: Описание выборки образцов реактивной лимфоидной ткани.

ССЫй1 — относительное нормализованное количество кДНК гена циклина £)7, н/д - нет данных.

№ Возраст Тип ткани ссга 1 Клон Иммунофе нотип опухоли Уровен ь активац ИИ Гистологический вариант

1 64 селезен ка 0,0003 2 Не выявлен Не выявлен СЭ38 ЫеЬ гистологическая картина соответствует реактивному процессу

2 39 кровь 0,0007 8 Не выявлен Не выявлен СЭ38 ЫеЬ

3 26 селезен ка 0,0001 8 н/д Не выявлен н/д гистологическая картина соответствует реактивному процессу

4 37 селезен ка 0,0003 9 Не выявлен Не выявлен СЭ38 ЫбЬ гистологическая картина соответствует реактивному процессу

5 60 кровь 0,0002 Не выявлен Не выявлен С038 1^11

6 н/д селезен ка 0,0002 7 Не выявлен Не выявлен СБ38 гистологическая картина соответствует реактивному процессу

7 21 селезен ка 0,0046 н/д Не выявлен н/д гистологическая картина соответствует реактивному процессу

8 58 селезен ка 0,0002 2 н/д Не выявлен н/д гистологическая картина соответствует реактивному процессу

9 49 селезен ка 0,0004 3 н/д Не выявлен н/д гистологическая картина соответствует реактивному процессу

10 26 селезен ка 0,0007 5 н/д Не выявлен н/д гистологическая картина соответствует реактивному процессу

11 37 селезен ка 0,0003 н/д Не выявлен н/д гистологическая картина соответствует реактивному процессу

12 59 селезен 0,0004 н/д Не выявлен н/д гистологическая

ка картина соответствует реактивному процессу

13 23 селезен ка 0,0003 3 н/д Не выявлен н/д гистологическая картина соответствует реактивному процессу

14 52 селезен ка 0,001 н/д Не выявлен н/д гистологическая картина соответствует реактивному процессу

15 39 селезен ка 0,0001 Не выявлен Не выявлен СБ38 \\igh гистологическая картина соответствует реактивному процессу