Способы повышения эффективности эритроцитарных диагностикумов для оценки иммунореактивности организма в реакции пассивной гемагглютинации тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат биологических наук Сердюк, Людмила Викторовна

• Сердюк, Людмила Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Сердюк, Людмила Викторовна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Диагностические системы в иммунологии

1.2. Адъюванты, механизм действия, применение

1.3. Современные представления об иммунореактивности организма 41 к микробам-симбионтам

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.1 .Объекты исследований

2.2.Методы исследований

ГЛАВА III. КОНСТРУИРОВАНИЕ ЭРИТРОЦИТАРНЫХ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ СИСТЕМ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ИММУНОРЕАКТИВНОСТИ ОРГАНИЗМА К СИМБИОНТНОЙ МИКРОФЛОРЕ В РЕАКЦИИ ПАССИВНОЙ

ГЕМАГЛ ЮТИНАЦИ И

3.1.Технология изготовления антигенных эритроцитарных 68 диагностических систем

3.2. Выделение фракций бифидобактерий и оценка их функциональной активности

3.3. Испытание конъюгирующих компонентов в технологии 35 приготовления эритроцитарных диагностических систем

3.4.Получение высокотитражных иммунных сывороток для 92 проведения контроля эритроцитарных диагностикумов

3.5.0ценка активности эритроцитарных иммунодиагностикумов для 95 РПГА на основе антигенов Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium adolescentis

ГЛАВА IV. АПРОБАЦИЯ ЭРИТРОЦИТАРНЫХ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ СИСТЕМ ПРИ ОЦЕНКЕ

ПОПУЛЯЦИОННОЙ ИММУНОРЕАКТИВНОСТИ

НАСЕЛЕНИЯ К СИМБИОНТНОЙ МИКРОФЛОРЕ

4.1. Изучение антибактериального популяционного иммунитета по уровню антител к нетоксигенным С.сИрЫкеНае

4.2. Изучение системного и локального иммунитета по уровню антител 104 к бифидобактериям в сыворотках крови и копрофильтратах

ГЛАВА V. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Способы повышения эффективности эритроцитарных диагностикумов для оценки иммунореактивности организма в реакции пассивной гемагглютинации»

Актуальность исследования

В диагностике заболеваний инфекционной и неинфекционной патологии особое значение придаётся наличию качественных диагностических систем, сочетающих в себе высокую чувствительность, специфичность и простоту выполнения исследования. Следует отметить, что эти качества присущи реакции пассивной гемагглютинации (РПГА), которой часто не хватает чувствительности. Предполагается, что невысокая чувствительность тест-систем в РПГА может быть связана либо с низкой концентрацией антигена на поверхности эритроцита-носителя, либо с неполным раскрытием антигенных структур для связи с антителами (авидностью) [Патрушев JL И., 2004]. В связи этим, особую актуальность приобретает проблема поиска перспективных соединений, сочетающих в себе как высокую конъюгирующую активность с антигеном, так и способность обеспечивать стабильность полученного препарата.

Другим важным компонентом при конструировании тест—систем является получение контрольных высокотитражных сывороток, производство которых также зависит от наличия высокоиммуногенных комплексов антиген-адъювант [Хаитов P.M. и др., 1996; Петров Р.В., Хаитов P.M., 2003; Tagliabue A., Rappuoli R., 2008]. Спектр имеющихся качественных адъювантов в настоящее время невелик, к тому же, они, не всегда полноценно выполняя свою главную задачу — повышать иммуногенность антигена, часто обладают рядом нежелательных характеристик: вызывают аутоиммунные осложнения, образование кист, свищевых абсцессов и гранулём [Медуницин Н. В., 1993].

Всё возрастающий интерес к адъювантам на основе полимеров был обусловлен новыми открытиями в иммунологии. Интенсивное развитие органической химии в этом направлении позволило предложить исследователям широкий спектр полимерных соединений в качестве конъюгирующих компонентов и низкотоксичных адъювантов [Петров Р.В., Хаитов P.M., Атауллаханов Р.И., 1993; Анненков В.В., Лещук С.И.,2002].

Комплексирование синтетических полимеров с вирусными или бактериальными антигенами позволяло существенно усилить их иммунизирующие свойства [Хаитов P.M., Зверев В.В. и др., 2005]. При конъюгировании с полимерами, выполняющими роль биологически активного иммуноадъюванта, слабо антигенные белки различного происхождения превращаются в высоко иммуногенные препараты, что позволяет резко снизить иммунизирующие дозы антигена [Krupers M.J., Van Der Gaag F.J., Feijen J., 1996]. Имеющиеся достижения в области синтеза полимерных структур [Allcock Н., 1990; Annenkov V.V.et al., 2001; Анненков В.В., 2002], способных прочно связываться с белком (антигеном), весьма актуальны, поскольку они дают перспективу создания нового класса иммунодиагностикумов для РПГА, отвечающих современным требованиям.

Цель исследования

Определить оптимальные условия и способы повышения функциональной активности эритроцитарных диагностикумов, используемых в РПГА, для оценки общей иммунореактивности организма. В соответствии с целью решались следующие задачи:

1. Подобрать эффективный метод извлечения специфических антигенов из культуральной биомассы бактерий для использования их в качестве компонентов диагностических систем;

2. Провести сравнительную оценку функциональной активности разных фракций микробных клеток бифидобактерий в технологии получения ЭД;

3. Оценить конъюгирующие свойства «синтетических полимеров» с бактериальными антигенами при изготовлении эритроцитарных диагностикумов для РПГА;

4. Оценить адъювантную активность «синтетических полимеров» в сочетании с микробными антигенами;

5. С помощью разработанных ЭД исследовать иммунореактивность организма человека, к симбионтной микрофлоре по уровню специфических: антител в биологических субстратах организма (сыворотки крови,, копрологические пробы).

Научная новизна

Осуществлена научно — методическая разработка технологии конструирования эритроцитарных диагностических систем с помощью; новых конъюгирующих компонентов и высокоактивных белковых фракций, способствующих повышению их функциональной активности: чувствительности, специфичности и стабильности. • Показана возможность ' создания узкоспецифичных (видовых) иммунодиагностикумовг для оценки иммунореактивности организма к разным, видам бифидобактерий. С помощью эритроцитарных диагностикумов отработан: метод изучения локального иммунитета организма человека по уровню интестинальных антител, к; бифидобактериям в копрофильтратах. Показана) возможность оценки; специфической и неспецифической иммунорезистентности по уровню антител к симбионтной микрофлоре - нетоксигеннным коринебактериям дифтерии.

Теоретическая значимость

1. Научно - обоснована и экспериментально доказана принципиальная. возможность совершенствования: технологии! конструирования иммунодиагностикумов для РПГА на основе комплексов бактериальных антигенов^ с водорастворимыми; полимерами-конъюгатами;

2. Доказана перспектива применения водорастворимых полимеров (ПВИ, АК-ВИ, ПМАЕ) в качестве адъювантов в; составе современных вакцинных препаратов. ,

Практическая значимость

1. Эритроцитарная иммунодиагностическая система для оценки специфической и неспецифической иммунорезистентности населения по уровню антибактериальных антител к нетоксигенным коринебактериям дифтерии была апробирована в практическом здравоохранении (инновационный проект 2005-2006 «Внедрение нового иммунодиагностикума для оценки антибактериального противодифтерийного иммунитета с целью предупреждения заболеваний (вспышек) дифтерии у населения Иркутской области);

2. С помощью диагностических тест-систем в РПГА по концентрации антител определяется уровень реактивности организма к представителям симбионтной микрофлоры (бифидобактериям) кишечника на видовом уровне, что даёт дополнительную информацию о состоянии микроэкологического статуса организма (популяции);

3. Неинвазивный метод исследования локального иммунитета организма к симбиотной микрофлоре по уровню антител в копропробах позволяет расширить диагностику микроэкологического статуса у детей и взрослых. Оформляется медицинская технология по оценке системного и локального иммунитета к индигенной микрофлоре;

4. Материалы выполненных исследований легли в основу четырёх патентов РФ на изобретение: Патент РФ №2142807; Патент РФ №2205408(72); Патент РФ.№ 220280; Per. заявка № 2009144839(РФ);

5. Усовершенствованные эритроцитарные иммунодйагностикумы используются в практической деятельности Института эпидемиологии и микробиологии и гастроэнтерологического отделения клиники НЦ ПЗСРЧ СО РАМН, материалы диссертации внедрены в учебный процесс ИГУ на кафедре физико-химических исследований.

Положения, выносимые на защиту

1. Конструирование эритроцитарных диагностических систем с помощью конъюгирующих компонентов (синтетических полимеров ПВИ, ПМАК и АК-ВИ) и антигенов фракции клеточных стенок бактерий позволяет улучшить качественные характеристики диагностикумов: чувствительность, специфичность, стабильность и воспроизводимость результатов;

2. Подобранные оптимальные концентрации полимеров (ПВИ, ПМАК и АК-ВИ) в комплексе с антигенами значительно повышают их иммуногенную активность, что делает полимеры перспективными в качестве адъювантов при получении высокотитражных сывороток, используемых для контроля эритроцитарных диагностикумов;

3. Высокая чувствительность и специфичность усовершенствованных эритроцитарных диагностикумов позволяет изучать особенности микробной экологии человека в современных условиях по уровню иммунореактивности макроорганизма к симбионтной микрофлоре.

Апробация материалов диссертации

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на Ассамблее «Здоровье человека в Сибири», (Новосибирск, 1994); Научной конференции с международным участием: «Экология и общественное здоровье», (Новокузнецк 1994); Научно-практической конференции «Состояние и перспективы разработки препаратов для диагностики вирусных гепататов и инфекций управляемых специфическими средствами профилактики», (Пермь 1998); На VIII Съезде Всеросс. Общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, (Москва, 2002); II научной конференции с международным участием «Проблемы инфекционной патологии Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера. Новые технологии в медицине», (Новосибирск, 2002); Международной научно-практической конференции «Пробиотические микроорганизмы — современное состояние вопроса и перспективы использования, (Москва, 2002); Российской научно-практической конференции «Оценка современного состояния микробиологических исследований в Восточно - Сибирском регионе», (Иркутск, 2002); Международной конференции: «Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания», (Москва, 2004); Международных, научно-практических конференциях «Актуальные проблемы права, экономики и управления в Сибирском регионе», (Иркутск, 2005, 2008); Межрегиональной научно-практической конференции «Итоги, проблемы и перспективы государственной санитарно-эпидемиологической службы Иркутской области», (Иркутск, 2007); Форуме «Роснанотех», (декабрь 2008, Москва).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 37 работ, в том числе в изданиях, рекомедованных ВАК, 11. Материалы исследований защищены четырьмя патентами.

Структура и объём диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы», двух глав собственных исследований, главы «Обсуждение результатов», выводов, практических рекомендаций и списка цитированной, литературы.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Сердюк, Людмила Викторовна

выводы

1. Конструирование эритроцитарных диагностикумов на основе конъюги-рующих компонентов (синтетических полимеров) и фракции клеточных стенок бактерий позволяет улучшить функциональные характеристики диагностических систем: чувствительность (в 10 раз выше аналогичных тест - систем с традиционными конъюгатами и антигенами), специфичность, стабильность и воспроизводимость (хранение до трёх лет и более без снижения чувствительности);

2. Эффективное комплексообразование водорастворимых синтетических полимеров с белками (антигенами) повышает иммуногенность антигенов по сравнению с классическим адъювантом Фрейнда более чем в 2 раза (р<0,05), что обосновывает перспективность использования полимеров в качестве им-муноадъювантов при получении высокотитражных сывороток;

3. Специфичность, чувствительность и информативность разработанных эритроцитарных иммунодиагностикумов подтверждается лабораторными и клиническими испытаниями, определившими предельный нормальный уровень иммунореактивности к бифидобактериям от нуля до log2=3-4 более чем у 80% обследованных;

4. Эритроцитарные диагностикумы, изготовленные на основе антигенов не-токсигенных коринебактерий дифтерии позволяют давать скрининговую оценку популяционной реактивности организма, подтверждением чего является обоснованность критерия нормы титров нормальных антител 1:8 — 1:32 (log2 = 3-5) более чем у 60% населения;

5. Высокая чувствительность и специфичность полученных эритроцитарных диагностикумов позволяет дифференцировать наличие антител к бифидобактериям не только на родовом, но и на видовом уровне. Диагностическая эффективность видоспецифичных тест-систем подтверждается результатами исследований системного и мукозного иммунитетов, выявивших общую закономерность формирования иммунореактивности к разным видам бифидобактерий, заключающуюся в выявлении высоких титров антител (1о§2 = 6 и выше) чаще к В. Ьфйит (от 17 до 47%) и реже к ВЛоп^т (от 0 до 12%).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Тест-система по определению антител к нетоксигенным коринебактериям дифтерии может быть использована в скрининговых исследованиях при оценке популяционной иммунорезистентности;

2. Разработанный неинвазивный способ определения специфических антибактериальных антител в копрофильтратах человека по информативности не уступает исследованиям сывороток крови и может быть использован при выявлении уровня мукозных антител для последующей адекватной коррекции дисбиозов;

3. Использование узкоспецифичных (видовых) антигенов в качестве сенси-тинов при изготовлении ЭД позволит оценивать иммунореактивность организма в соответствии с современными требованиями.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Сердюк, Людмила Викторовна, 2011 год

1. Авдеева Ж.И., Акользина С.Е., Алпатова H.A. и др.// Цитокины и воспаление—2007.-Т. 6.-№ 2. -С.46-50.

2. Аковбян В.А., Дмитриев Г.А. Эволюция лабораторной диагностики сифилиса: Комментарии к Приказу Минздрава РФ № 87 от 26.03.01 г. «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» // Здравоохранение. -2001. -№6. -С.103-106.

3. Алешукина A.B. Способ диагностики выраженности дисбактериоза кишечника // Патент № 2338197, 2006.

4. Андронова Т.А., Пинегин Б.В. Мурамилпептиды — иммунотропные лекарственные средства нового поколения //Медицинская картотека—1999.— №3.

5. Анненков В.В., Даниловцева E.H., Михалева А.И. Синтез и свойства сополимеров 1-винил-4,5,6,7-тетрагидроиндола с малеиновой кислотой // Высокомол. Соед. Сер. Б. -1998. Т.40, №2. -С.366-368.

6. Анненков В.В., Круглова В.А., Мазяр Н.Л. Применение теории «эффекта соседа» в потенциометрическом титровании полиэлектролитов // Высокомол. Соед. Сер. А. -1998. -Т.40, №3. -С.466-471.

7. Анненков В.В., Мазяр Н.Л., Круглова В.А. и др. Взаимодействие бычьего сывороточного альбумина с поли-Ы-винилазолами// Высокомол. соед. — Сер. А. -2000. -Т. 42, №11. — С. 1804-1810.

8. Барановский А.Ю., Кондрашина З.А. Дисбактериоз и дисбиоз кишечника. -С-Пб., 2000. -24 с.

9. Бароян О.В., Лепин П. А. Эпидемиологические аспекты современной иммунологии. М.: Медицина, 1972. - 265 с.

10. Басова H.H. Системы серологических реакций, основанных на феномене гемагглютинации // Матер. Всероссийской н-п конф. Пермь, 1993. -С.26-27.

11. Берестецкая Т.З. Водорастворимые полимеры и их применение. // Тезисы докл. III Всерос.конф. -Иркутск, 1987. -С.12.

12. Билибин А.Ф. Проблема дисбактериоза в клинике // Терапевтический архив. -1967. -№11- С. 21-28.

13. Большаков А.М, Осипова В.Н., Романовская Е.Ю. и др. Оценка риска влияния загрязнения атмосферного воздуха бензолом на здоровье населения // Гигиена и санитария. —2000. -№6. -С.24-28.

14. Бондаренко В.М., Петровская В.Г. Ранние этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофлоры // Вестн. РАМН. -1997.-№3.-С.7-10 .

15. Бочков И.А., Овчарова Н.М. Бактериальная колонизация и сукцессия у новорожденных детей в аспекте проблемы госпитальных инфекций // Журн. эпидемиол. -1991. -№ 8. -С. 71-75.

16. Вавилова В.П., Черных Н.С., Перевощикова Н.К. Профилактика нарушений местных факторов защиты у детей в экологически неблагоприятных условиях. Экологические и гигиенические проблемы педиатрии // Материалы III конгресса педиатров России. -М., 1998. С. 65

17. Верткий А.Л. Фармакотерапия дисбактериоза кишечника // Мед. картотека. -1998.-№ 8.-С. 26-31.

18. Вершинина В.И. Характеристика растворимых антигенов бифидобактерий // ЖМЭИ. -1981. -№2. -С.81-83.

19. Воеводин Д.А., Розанова Г.Н., Стенина М.А. и др. Роль дисбактериоза в формировании хронической неинфекционной патологии у детей // Журн. Микробиол. 2001. - № 6. - С. 88-93.

20. Воробьев A.A., Бондаренко В.М., Шендеров Б.А. и др. Дисбактериозы -актуальная проблема медицины // Вестник РАМН. — 1997. -№ 3. С. 4 - 7.

21. Гарсон Н., Гольдман М. Вакцины во всей их мощи // В мире науки. -2009. -№12. -С.45-51.

22. Гевондян B.C., Шишков В.П., Шмелева Е.А. / Способ определения иммунореактивности животных, инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота: A.C. № 1320930 от 1.03.87. / (СССР).

23. Грачева Н.М. Дисбактериозы и суперинфекции, причины их возникновения, диагностика, лечение // Лечащий врач. — 1998. С. 18-21.

24. Даутов Ф.Ф., Яруллин А.Х., Гончаров А.Г. и др. Заболеваемость детей, проживающих в районах с разным уровнем загрязнения атмосферного воздуха // Гигиена и санитария. 1998. -№11. -С. 3-5.

25. Даниловцева E.H., Анненков В.В., Михалева А.И. и др. Сополимеры 1-винилимидазола и акриловой кислоты для биосепарации //Высокомолекулярные соединения. — Серия А. —2004. —Т.46, №2. С.1-6.

26. Денисова Т.Г. Эритроцитарные реагенты в иммунодиагностике сальмонеллезов: Автореф. дисс. . канд. мед. наук-Алматы, 1993. -24с.

27. Дерябин П.Н. Совершенствование иммунодиагностики гнойно-воспалительных и септических заболеваний при помощи новых эритроцитарных реагентов: Автореф. дисс. .докт. мед. наук. Алма-Ата, 1992. -42 с.

28. Додина Л.Г. К проблеме влияния атмосферного загрязнения на состояние здоровья населения // Гигиена и санитария. -1999. -№3. -С.9-13.

29. Дудникова Э.В. Современный взгляд на кишечный дисбактериоз у детей // Южно-Российский медицинский журнал. 2002. —№ 2.

30. Жуматов К.Х., Багашева С.С. Способ приготовления антительных эритроцитарных диагностикумов для индикации вирусов // Вопросы вирусологии.- 1995. №5. - С.235-237.

31. Зезин А.Б. Полиакриловая кислота // Химическая энциклопедия. — М.: «Большая российская энциклопедия», 1992. Т.З. - С.602.

32. Ипатова М.Г., Шумилов П.В., Мухина Ю.Г. и др. Дисрегуляция иммунного ответа на индигенную микрофлору у детей и подростков с воспалительными заболеваниями кишечника // Педиатрия. — 2010. -Т.89, №2. — С. 45-49.

33. Кабанов В.А. Интерполимерные комплексы нуклеиновых кислот как средство доставки генетического материала в клетку // Высокомол. Соед. Сер. А. -1994. -Т.36, №2. -С.198-211.

34. Кабанов В.А. Физико-химические основы и перспективы применения растворимых гентерополимерных комплексов // Высокомол. Соед. 1994. -Т.36, №2. - С.183-197.

35. Кабанов В.А., Петров Р.В., Хаитов Р.Н. Искусственные антигены и вакцины на основе неприродных электролитов // Итоги науки и техники. Иммунология. -М.: ВИНИТИ, 1998. -Т.13. С.6-53.

36. Казначеев В.П. Очерки теории и практики экологии человека. М., 1983. -146 с.

37. Калиакбарова Г.Т. Особенности иммунного статуса жителей отдельных естественных и техногенных биогеохимических провинций Казахстана: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Алма-Ата, 1991. -21с.

38. Каральник Б.В. Варианты реакции агглютинации: настоящее и будущее // ЖМЭИ.-1989. №8. - С.84-89.

39. Каральник Б.В. Научные основы изготовления эритроцитарных диагностикумов. // Ж.микробиол. —1977. —№4. -С.29.

40. Каральник Б.В. Эритроцитарные реагенты в клинической иммунологии // Иммунология. 1995. —№ 6. - С. 4- 6.

41. Каральник Б.В., Царевский Ю.П., Шамардин В.А. Приготовление антительных диагностикумов с помощью амидола // Эритроцитарные белковые диагностикумы. Алма-Ата, 1982. — С.82-84.

42. Кижняев В.Н. Поливинилтетразолы. Синтез и свойства: дис. .докт. хим. наук. Иркутск: ИГУ, 1997.

43. Кижняев В.Н., Круглова В.А., Анненков В.В. и др. Особенности поведения поли-с-винилтетразолов в водных средах // Высокомол. Соед. Сер. Б. -1989. Т.31, №6. - С.420-423.

44. Ковалев И.Е., Полевая О.Ю. «Биохимические основы иммунитета к низкомолекулярным химическим соединениям». М., Наука, -1985.

45. Копанев Ю.А. Значение кишечной микрофлоры для здоровья человека. Роль пробиотиков и пребиотиков для коррекции и профилактики нарушений микробиоценоза // Трудный пациент. 2008. -№11. - С.39-43.

46. Корнева Т.К. Дисбактериозы кишечника у проктологических больных: микробиологические аспекты // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. -1999. —№3. -С. 55-60.

47. Коршунов В.М., Смеянов В.В., Ефимов Б.А. Рациональные подходы к проблеме коррекции микрофлоры кишечника // Вестн. РАМН. -1996. -№2. -С.60-65.

48. Косарев В.В., Лотков B.C., Жестков A.B. Иммунологические эффекты воздействия на работающих в хлорорганическом производстве // Гигиена и санитария. 1999. - №6. - С. 31-34.

49. Костюкова H.H. Уроки дифтерии // Журн. микробиол. 1999. - № 2. -С. 92-96.

50. Крамарь JI.B. Микроэкология кишечника здоровых людей в условиях техногенного воздействия крупного промышленного города// Вестник РАМН. -2002. -№28. -С.37-40.

51. Куваева И.Б., Ладодо К.С. Микроэкологические и иммунные нарушения у детей.-М., 1991.-240 с.

52. Кутепов E.H., Вашкова В.В., Чарыква Ж.Г. Особенности воздействия факторов окружающей среды на состояние здоровья отдельных групп населения // Гигиена и санитария. -1999. -№6. -С.13-16.

53. Левин Ю.М. Эндоэкологическая реабилитация: прошлое, настоящее, будущее // Intern. J. On Immunorehabilitation. -1997. -№ 6. -P. 148-156.

54. Лещук С.И., Попкова С.М., Сердюк Л.В. и др. Новые эритроцитарные иммунодиагностикумы для метода РПГА // Материалы 11 объединенной научной сессии СО РАН и СО РАМН: Новые технологии в медицине.— Новосибирск, 18-19 июня, 2002г. С.92.

55. Лещук С.И., Попкова С.М., Сердюк Л.В. и др. Способ получения эритроцитарного антигенного диагностикума //Патент РФ № 2202801. 2003.

56. Лещук С.И., Попкова С.М., Сердюк Л.В. и др. Способ приготовления эритроцитароного иммунодиагностикума и способ оценки иммунорезистентности организма // Патент РФ №2142807.1999.

57. Лещук С.И., Анненков В.В., Юринова Г.В. и др. Дизайн эритроцитарных диагностикумов с новыми конъюгирующими компонентами, для определения антибактериальных антител // Бюллетень Сибирского отделения РАМН. 2002. -Т.1, №4. - С.59-62.

58. Литманович A.A. Композиции на основе поликомплексов: получение, модификация, взаимодействия с дисперсиями: дис. .д.х.н. -М., МГУ. -1996.

59. Литманович A.A., Сусь Т.А., Карапутадзе Т.М. и др. Комплексообразование поликарбоновых кислот с поли-Ы-винилпирролидоном различных молекулярных масс // Высокомол. Соед. Сер. Б. -1980. -Т.22, №3-С. 236-238.

60. Люберцев А.П. Воронцов-Вельяминов И.Н. Моделирование гибких полиэлектролитов методом Монте-Карло // Высокомол. Соед. Сер. А. -1990. — Т.32, №4. С.721-726.

61. Мазурова И.К. Роль противомикробных антител в пассивной защите организма от дифтерийной инфекции // Острые детские инфекции: Сб.науч.трудов М. НИИЭМ им. Г.Н.Габричевского. 1978. -T.XIX. -С.26-34.

62. Медуницин Н.В. Вакцинология. «Триада». М., 1999. - 272 с.

63. Мерингова Л.Ф., Гупалова Т.В., Суворов А.Н. и др. Влияние различных адъювантов на иммуногенность компонентов вакцины против стрептококков группы В // Медицинская иммунология. -2008. -№ 2. -С.215-222.

64. Микельсаар М.Э. Формирование и сохранение резидентной микрофлоры желудочно-кишечного тракта //Антибиотики и колонизационная резистентность. -М., 1990. 287 с.

65. Миронов А.Ю. Архитектоника микробной экологии человека в норме и при некоторых патологических состояниях: Автореф. Дисс. . .докт. мед. наук. — Москва, 2002. 44 с.

66. Митрохин С.Д. Дисбактериоз: современные представления, диагностика, возможности лечения //Антибиотики и химиотерапия-2004.-№7.-С.22-33.

67. Москаленко Е.П. О фракциях растворимого антигена возбудителя коклюша // Журн. микробиол. -1968. -№6. С.63-67.

68. Москаленко Е.П., Харсеева Г.Г., Бревдо A.M. и др. Влияние полиоксидония на адгезивные свойства CORYNEBACTERIUM DIPHTHERIAE // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 2009. —№ 2. -С. 11-15.

69. Мошиашвили И .Я., Файкин И.М. Модификация ультразвукового генератора ULA-100 ВТ для микробиологических исследований // Журн. микробиол. -1968. —№6. С.120-122.

70. Муратов В.В. Гигиенический анализ совместного действия химического и радиационного факторов окружающей среды на здоровье населения, проживающего в районе горнорудных разработок: Автореф. Дисс. .к.м.н. — Иркутск, 1997.-24с.

71. Мухина Ю.Г. Диагностика и коррекция дисбактериоза у детей // Русск. мед. журн. -1999. Т. 7, №11. - С.487-495.

72. Назарова Е. К., Гиммельфарб Е. И., Созаева JI. Г. Микробиоценоз влагалища и его нарушения. Этиология, патогенез, клиника, лабораторная диагностика // Антибиотики и химиотерапия. -2002. -Т.47. -№. 4. -С.36- 43.

73. Насыбуллина Г.М., Рябова Н.В., Ползик Е.В. и др. Роль техногенного загрязнения как фактор риска заболеваемости детей дошкольного возраста // Гигиена и санитария. -1999. -№4. -С. 35-38.

74. Нефедов Н.К. Интерполимерные комплексы на основе поли-1-винил-1,2,4-триазола и поликарбоновых кислот: Дис. . канд. хим. Наук -Иркутск, 1987. -163 с.

75. Никитина Т.Н., Авдеева Ж.И. Иммуноадъювантное действие цитокинов//Биопрепараты. -2008. -№ 1 (29). С. 16-20.

76. Остапенко В.А. Клинико-иммунологическне признаки поражения кишечника при цитостатической терапии // Иммунопрофилактика, иммунодиагностика и иммунокоррекция. Омск, 1994. - С. 54 - 56.

77. Павлова A.JL, Домнина Е.С., Скушникова А.И. и др. Кинетика сополимеризации 1-винилбензилимидазола с акриловой кислотой // Высокомол. Соед. Сер. А. -1992. Т.34, №7. -С.38-45.

78. Паранько Н.М., Рублевская Н.И. Гигиеническая характеристика загрязнения тяжелыми металлами окружающей среды промышленного региона и иммунный статус детей // Гигиена и санитария. -1999. -№2. -С. 51-55.

79. Парфенов А.И. Микробная флора кишечника и дисбактериоз // Русск. Мед. журн. -1998. -Т.6, №18. -С.1170-1173.

80. Патрушев JI. И. Искусственные генетические системы. -ИБХ РАН, 2004. -407с.

81. Певницкий Л.А., Баймуканова Г.П., Писарев В.М. и др. Экологический иммунодефицит: иммуногенетические аспекты его развития и коррекции // Вестн. РАМН. -1994. -№4. С. 20-28.

82. Перетц Л.Г. Значение нормальной микрофлоры для организма человека. — Москва, 1955.-431с.

83. Петров Р.В., Кабанов В.А., Хаитов P.M. и др. Протективная эффективность конъюгатов бактериального антигена с синтетическими полиэлектролитами // Докл. АН. СССР. -1993. Т.270, №5. - С. 1257-1259.

84. Петров Р.В., Хаитов P.M. Искусственные антигены и вакцины М.: Медицина. -1998. -289с.

85. Петров Р.В., Хаитов P.M. Коньюгированные полимер-субъединичные иммуногены и вакцины // Вестник РАМН. 2003. - №1. - С. 10-14.

86. Петров Р.В., Кабанов В.А., Хаитов P.M. и др. Модификация иммунного ответа при помощи антигена, связанного с неприродными полиэлектролитами // Журн. Микробиол. -1981. -№2. -С.58- 63.

87. Пинегин Б.В., Мальцев В.Н., Коршунов В.М. Дисбактериозы кишечника. — М., 1984. -144с.

88. Платэ H.A., Васильев А.Е. Физиологически активные полимеры // Химия. -М., 1986.-296с.

89. Подволоцкая А.Б. Функциональная характеристика аутомикрофлоры кожи детей младшего школьного возраста в условиях техногенного загрязнения среды: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. — Владивосток, 2000. 31с.

90. Попкова С.М. Микробная экология человека в условиях техногенного прессинга промышленных городов Восточной Сибири: Дисс. . докт. биол. наук. — Иркутск, 2004. -301 с.

91. Попкова С.М., Лещук С.И., Анненков В.В. и др. Сравнительная характеристика эритроцитарных иммунодиагностикумов по определению нормальных бактериальных антител // Бюллетень ВСНЦ РАМН. -2007. -№3. -С.43-48.

92. Попкова С.М., Лещук С.И. Оценка противодифтерийного иммунитета у носителей токсигенных коритебактерий дифтерии // Метод-письмо 3.1.003.-01. -Иркутск: Цент Госсанэпиднадзора в Иркутской области. —2001. —7с.

93. Попкова С.М., Лещук С.И., Кичигина Е.Л. и др. Оценка иммунорезистентности популяции при массовых обследованиях населения // Бюллетень Сибирского отделения РАМН. -1998. -№2. -С.40-43.

94. Попкова С.М., Джиоев Ю.П., Лещук С.И. и др. Современные подходы к диагностике, профилактике и коррекции дисбактериозов // Вестник Российской Военно-медицинской академии. С-Пб., 2008. -2(22). -С.203-204.

95. Попкова С.М., Шмелёва Е.А., Макарова С.И. и др. Иммунология антропогенного ответа на антигены симбионтных нетоксигенныхкоринебактерий дифтерии // Вестник Российской Академии медицинских наук. -2006. —№1. -С.24-28.

96. Праздничная О.В., Юргенс И.Д., Кораблева C.B. и др. Трехкомпонентные интерполимерные комплексы с низкомолекулярным посредником некоторые особенности надмолекулярной структуры // Высокомолекулярные соединения. -1994. -Сер. А. Т.36, № 8. - С. 1316-1321.

97. Пшеничная Л.Н., Тукачинский С.Е. Влияние частичной модификации сывороточного альбумина на его конформацию и комплексообразующую активность // Ж.микробиол. -1977. -№3. -С.115.

98. Ракова Е.Б., Попкова С.М., Джиоев Ю.П. и др. Видовая архитектоника и плазмидный профиль бифидобактерий кишечной микробиоты у населения Иркутской области //Вестник Российской военно — медицинской Академии. -2008. -№2 (22). -С.660-661.

99. Ревич Б.А. Последствия воздействия стойких органических загрязнений на здоровье населения: Цикл лекций -М.: Джеймс, 2000. -48 с. Юб.Римарчук Г.В. Оздоровление детей в районе экологического неблагополучия // Рус. мед. журн. -1999. -№ 11. С. 500-504.

100. Румянцев В.Г. Дисбактериоз кишечника: клиническое значение и принципы лечения // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. -1999. — Т.9, №3. -С.61-63.

101. Ряпис JI.А., Беляков В.Д. Молекулярная эпидемиология дифтерии // Журн. микробиол. 1998. - № 4. - С. 101-106.

102. Сабирова З.Ф. Влияние загрязнения атмосферного воздуха в регионах нефтепереработки, нефтехимии, химии на смертность населения // Гигиена и санитария. -1999. №5. -С. 15-19.

103. Ш.Савилов Е.Д., Колесников С.И., Красовский Г.Н. Инфекция и техногенное загрязнение. Новосибирск: Наука, 1996. -190 с.

104. Скачков М.В., Смолягин А.И., Боев В.М. и др. Иммунологическая эффективность вакцинации в различных экологических ситуациях // Эпидемиология и инфекц. болезни. 2001. - № 4. - С. 47-48.

105. Скобелева В.Б., Зинченко A.B., Рогачева В.Б. и др. Взаимодействие слабосшитого полиамида с бычьим сывороточным альбумином // Вестн. Московского ун-та, сер.2. Химия. -1998. -№4. С.268-271.

106. Стенина М.А., Воеводин Д. А., Скрипник А.Ю. и др. Уровень сывороточных антител к условнопатогенной микрофлоре как маркер процесса формирования вторичного иммунодефицита у детей // Журн. микробиол. — 2001. —№5. — С.50-54.

107. Трофимов Б.А., Михалева А.И. N-винилпирролы. Новосибирск: Наука, 1984. -262 с.

108. Труфакин В.А., Трунова Л.А. Иммунологические механизмы формирования экологически обусловленной патологии // Вестн. РАМН. —1997. -№ 7. -С. 15-18.

109. Усатова Е.А. Значение микробиологических и иммунологических тестов в оценке влияния промышленных загрязнений атмосферного воздуха на детский организм (по материалам г. Ворошиловграда): Автореф. Дис. . канд. мед. наук. Москва,1988. —23 с.

110. Филиппов A.C., Савченков М.Ф., Дифенбах Т.И. и др. Состояние здоровья детей Восточной Сибири в условиях антропогенного воздействия // Экология человека и природы. — Иркутск, 1999. -С. 145-153.

111. Хавкин А.И. Микробиоценоз кишечника и иммунитет // Русский медицинский журнал. -2003. -№11 (3). -С.122-125.

112. Хаитов P.M. Вакцины нового поколения и проблемы биобезопасности //Цитокины и воспаление. -2005. -№3. -С.45-48.

113. Хаитов P.M., Зверев В.В., Семенов Б.Ф. Вакцинопрофилактика в XXI веке: настоящее и будущее // Иммунология. 2009. -№ 6. -С.324-335.

114. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология.— М., 1995.—345 с.

115. Хаитов P.M. Физиология иммунной системы. М.: ВИНИТИ РАН, 2001.-223 с.

116. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Иммунная система ЖКТ: особенности строения и функционирования в норме и патологии //Иммунология. 1997. -№5. - С.4-7.

117. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Современные представления о механизмах действия полиоксидония // Иммунология. —2005. № 4. - С. 197-199.

118. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Основные принципы иммуномодулирующей терапии // Аллергия, астма и клиническая иммунология./-2000. № 1. - С. 3133.

119. Хаитов P.M., Федосеева В.Н., Некрасов A.B. и др. О сниженных анафилактогенных свойствах аллергоида, коньюгированного с синтетическим полимером // Иммунология. -1996. № 6. -С. 40-45.

120. Хергет Х.Ф., Летцель X., Петров P.O. Комплексная терапия дисбиозов // Эпидемиол. и инфекц. болезни. -1997. -№6. -С.51-55.

121. Шамардин В.А., Каральник Б.В. Способ сенсибилизации эритроцитов //АС СССР. №614377 от 22.03.76. -Б.И. №25. -19786.

122. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора и ее роль в поддержании здоровья человека // Рос.журн.гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. -1998. -Т.8, №1. — С.61-65.

123. Шмелёва Е.А., Злобин В.И. Популяционный уровень иммунореактивности макроорганизма к антигенам микрофлоры человека (на примере взаимоотношений с антигенами C.diphtheriae и Bifidobacterium)// Бюллетень ВСНЦ РАМН. 2003. -№ 1. -С. 164 -169.

124. Юринова Г.В. Совершенствование технологии приготовления эритроцитарных иммунодиагностикумов для РПГА на основе клеточных фракций бифидобактерий с использованием синтетических полимеров: Дис. . канд. биол. наук. Улан-Удэ, 2005. - С.65-84.

125. Ющук Н.Д., Верткин A.JI. Дисбактериоз кишечника: патогенез и фармакотерапия // Междунар. мед. журн. -1998. -№4. С.27 - 29.

126. Юрьев С.Ю., Евтушенко И.Д., Огородова JI.M. и др. Полиоксидоний и гепон в лечении хронического урогенитального хламидиоза при планировании беременности // Бюлл.СО РАМН. -2005. -№2. С. 112-116.

127. Ярилин А.А. Основы иммунологии: Учебник. М.: Медицина, 1999. -С. 608.

128. Altunkova I., Koleva М., Rangachev I. Changes in the humoral immune response in occupational exposure to metall aerosols // Probl. Khig. -1996. —№ 21.— P.122-130.

129. Allcock H. Polyphosphazenes as new biomedical and bioactive material // Marcel Dekker. -New York, 1990.

130. Annenkov V.V., Mazyar N.L., Kruglova V.A., et al. Equilibria in Solutions of Complexes of Poly(acrylic acids) and Poly(N-vinylazoles) // J. Mol. Liq. 2001. - V. 91.-P. 109-114.

131. Antoni G., et al.// J. Immunol. -1986. -V. 137. P.3201-3206.

132. Arunas Usaitis, Sirkka Liisa Maunu, Heikki Tenhu Aggregation of the interpolymer of poly (methacrylic acid) poly (vinilpyrrolidone) in aqueous solutions // Eur. Polym. J. -1997. V.33, №2. - P.219-223.

133. Arroyo P. J., Bash J. A., Wallack M. K.//Cancer Immunol. Immunother. 1993. -V. 31.-P. 305.

134. Barksolole L. Handbook on habitants isolation and indefication of bacteria. — London, 1970. V.2. - 182 p.

135. Doseva V., Shencov S., Baranovsky V.Y. Complex formation between polymethacrylic acid and copolymers of adipic acid with poly (ethylene glycol) in aqueous solution // Polymer. -1997. -V.38, №6. P. 1339-1344.

136. Eagland D., Crowther N.J., Butler С J. Complexation between polyoxyethylene and polymethacrylic acid the importance of the molar mass of polyoxyethylene // Eur. Polym. J. - 1994. - V.30, №7. -P.767-773.

137. Feliu Jordi X., Villaverde A. An optimized ultrasomcation protocol for bacterial celf disruption and recovery of ß-galactosidase fusioi // Biotechnol. Techn. -1994. -V. 8. -N 7. -C.509-514.

138. Fuller R. Probiotics 2: applications and practical aspects — London: Channan & Hall, 1997. -178 p.

139. Heath A. W., Playfair J. H. L.//Vaccine. -1992. -№10. P. 427-434.

140. Kotz J. Polyelectrolytes complexes // Polymeric Encyclopedia. Boca Raton -New-York - London - Tokyo: CRC Press Inc., 1994. - P.5762-5791.

141. Krupers M.J., Van Der Gaag F.J., Feijen J. Complexation of poly (ethylene oxide) with poly (acrylic acid-co-hydroxyethyl metecrylates) // Eur. Polym. J. 1996. - V.32, №6. — P.785-790.

142. Laemmli U.K. Cleavage of proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. -1970. -V. 227. -P. 680- 685.

143. Lowry O. H., Rosenbrough N. J., Farr A. L. Protein measurement with the Folin phenol reagent // Biol. Chem. -1951. -V.193. P.265-275.

144. Mayer L. Oral tolerance: new approaches, new problems // Clin. Immunol. -2000. -V. 94. -P. 1-8.

145. Manivel V., Rao K. V. S.//Vaccine. -1991. -V. 9. -P. 395-397. löl.Nobiron I., Thompson I., Brownlie., Collins M. E.// Microbiol. -2000. -V. 76. -№2.-P. 129-142.

146. Nürnberg J., Doule M. V, York S. M., et al. //Proc.atl. Acad. Sei. USA. 1989. -V. 86.-P. 4240-4243.

147. Perrin P., Joffret M. L, Zanetti C. et al. //Immunology. -1988. -V. 177. -P. 199-209.

148. Poxton I.K., Brown R., Sawyerr A. A. et al. Mucosaassociated bacterial flora of the human colon // J. Med. Microbiol. -1997. № 46. -P. 85-91.

149. Rajananthanan P., Attard G. S., Sheikh N. A., et al. // Vaccine. -1999. -V. 18, № 1-2.-P. 140-152.

150. Schmidt G., Zink R. Basis features of the stress response in the three species of bifidobacteria: B. longum, B. adolescentis and B. breve//International J. of Food Microbiol. -2000. V. 54. - P. 41 - 45.

151. Strauss U.P., Barbieri b.W., Wong G. Analysis of ionisation eguilibria polyacids in terms of species population distributions. Examination of "two-state" conformational transition // J.Phys. Chem. 1979. -V.83, №22. - P.2840-2843.

152. Tagliabue A., Rappuoli R. Vaccine adjuvants// Human Vaccines. -2008. —V.4, №5. -P.347-349.

153. Turner S.R. Syntethesis, charge transfer complex behavior and electronic transport properties of novel electron-acceptor polymers based on trinitrofluorenate // Macromolecules. 1980. - V.13, №4. -P. 782-726.

154. Utell M.J., Samet J.M. Particulate air pollution and health. New evidence on an old problem //Am. Rev. Respir. Dis. 1994. -V. 147, № 12. - P. 1334-1335.

155. Van der Waaij D. Colonization resistance of the digestive tract: An importance first barrier of defense to opportunistic infections in man and animals // Abstracts XII Intern. Sympos. Gnotobiology, June 23-28. Gonolulu, 1996. -P. 1243.

156. Weinbach R. Die Verwendung von formalinisierten Erythrozyten als Antigen-Träger in der indirekten Hämagglutination // Schweiz. Z allg. Path. -1959. -V.22. -P.l-8.