Создание препарата для сельскохозяйственных животных на основе штамма термостойких целлюлозолитических бактерий Bacillus pantothenticus ь1-85 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Проворов, Евгений Леонидович

• Проворов, Евгений Леонидович
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Проворов, Евгений Леонидович

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Симбиоз организма и микрофлоры его пищеварительного тракта.

1.2. Пробиотические препараты. ч» 1.2.1. История становления предмета и термина.

1.2.2. Использование пробиотиков в сельском хозяйстве.

1.2.3. Механизмы действия пробиотиков.

1.3. Ферментные препараты.

1.3.1. Применение ферментов в кормлении сельскохозяйственной птицы: предпосылки, необходимость.

1.3.2. Разнообразие кормовых ферментных препаратов.

1.3.3. Влияние экзогенных ферментов на процессы пищеварения.

1.4. Микробиологические препараты с ферментативным эффектом.

1.5. Проблемы сохранности кормовых добавок и пути их решения.

2. Материалы и методы исследований.

2.1. Объекты исследований.

2.1.1. Штаммы микроорганизмов.

2.1.2. Животные.

2.2. Питательные среды для хранения и культивирования микроорганизмов.

2.3. Методы изучения культурально-морфологических свойств целлюлозолитических бактерий.

2.4. Методы изучения целлюлозолитической активности микроорганизмов.

2.5. Методы определения количества микробных клеток в разных субстратах.

2.6. Методы изучения устойчивости микроорганизмов к термообработке в лабораторных и промышленных условиях.

2.7. Тестирование штамма Bacillus pantothenticus №1на наличие патогенности и токсигенности.

2.8. Методы изучения технологических аспектов культивирования Bacillus pantothenticus №1-85.

2.9. Изучение влияния Bacillus pantothenticus №1-85 на продуктивные качества цыплят-бройлеров.

3. Экспериментальная часть. Результаты исследований.

3.1. Изучение влияния температурного воздействия на жизнеспособность микроорганизмов препарата целлобактерин в лабораторных условиях. ф 3.2. Изучение влияния гранулирования и экспандирования на жизнеспособность микроорганизмов препарата целлобактерин в условиях производственного эксперимента.

3.3. Отбор наиболее активных изолятов целлюлозолитических бактерий из коллекции ГНУ ВНИИСХМ.

3.4. Изучение свойств отобранного штамма целлюлозолитических бактерий.

3.5. Тестирование штамма Bacillus pantothenticus №1на наличие патогенности и способность образовывать токсины.

3.6. Изучение параметров роста и отработка технологии высушивания культуры Bacillus pantothenticus №1-85.

3.7. Изучение влияния штамма Bacillus pantothenticus №1на продуктивность цыплят-бройлеров.

3.8. Изучение сохранности

Bacillus pantothenticus №1-85 в кормовых смесях при экспандировании и гранулировании.

3.9. Сохранность бактерий штамма № 1-85 в комбикорме в течение срока его хранения.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Создание препарата для сельскохозяйственных животных на основе штамма термостойких целлюлозолитических бактерий Bacillus pantothenticus ь1-85»

Животные с момента их рождения вступают в сложные симбиотические взаимоотношения с микроорганизмами, населяющими их пищеварительный тракт. Нормальная кишечная микрофлора оказывает влияние на формирование иммунной системы молодых животных, участвует в инактивации некоторых продуктов распада и препятствует размножению в их кишечнике условно-патогенных бактерий (Чахава, 1972; Малик, 2002).

В некоторых случаях такой симбиоз является жизненно необходимым, так как микроорганизмы предоставляют свои ферментные системы для расщепления недоступных высшим организмам полимеров - например растительной клетчатки (Hungate, 1966; Пивняк и др., 1982; Russel et al., 2001).

Доказано, что химический состав пищи, потребляемой высшим организмом, оказывает непосредственное влияние на качественные и количественные характеристики микробного сообщества кишечника (Любянскене и др., 1989). Следовательно, неправильное кормление животных приводит к нежелательной сукцессии микробиоценоза их желудочно-кишечного тракта, что является причиной снижения продуктивности и возникновения ряда заболеваний (Russel et al., 1996; Nagaraja et al., 1998).

Рацион сельскохозяйственных животных и птицы включает большое количество растительных компонентов. У крупного рогатого скота и других видов жвачных в процессе эволюции сформировался мощный аппарат, состоящий из специальных отделов пищеварительного тракта и населяющих их микроорганизмов, позволяющий им эффективно использовать растительную клетчатку.

Животные с однокамерным желудком и птицы лишены такой возможности. Существует ряд подходов корректирующих процессы пищеварения и направленных на стабилизацию продуктивности при повышении в рационе доли труднопереваримых растительных полимеров.

Во-первых, практикуется использование сухих стабилизированных форм ферментов, получаемых при культивировании естественных продуцентов (грибов, бактерий). Существуют разные препараты из этой серии, отличающиеся, как по ферментативному спектру, так и по активности входящих в них компонентов. Чаще всего применяют ферменты, действие которых направлено на целлюлозу, промежуточные продукты её гидролиза, а также на некрахмальные полисахариды и фитин. При включении ферментных препаратов в низкопитательные рационы сельскохозяйственных животных и птицы удаётся добиться повышения их продуктивности и снижения затрат корма (Околелова и др., 2001; Пирс, 2002).

Второе, не менее крупное направление - использование пробиотиков - препаратов на основе штаммов полезных микроорганизмов, чаще всего изолированных из желудочно-кишечного тракта животных или человека. Подавляющее число добавок этой группы создано на основе классических пробиотических бактерий (pp. Lactobacillus, Bifidobacterium). Занимая свободные экологические ниши в кишечнике животных, и продуцируя, ряд биологически активных веществ, они оказывают положительное воздействие на здоровье животных (Малик, 2001; Guarner, 2003). Основной эффект от их использования, складывается из повышения сохранности поголовья, а также получения экологически чистой продукции.

И наконец, среди микробиологических добавок есть препараты, способные заменить в рационах животных как кормовые ферменты так и пробиотики (Эрнст, 1991; Тараканов, 1998; Лаптев и др., 2003). Микроорганизмы, входящие в их состав продуцируют ряд ферментов, отсутствующих у высших животных.

Одним из таких препаратов является целлобактерин, созданный коллективом учёных Всероссийского научно - исследовательского института сельскохозяйственной микробиологии, на основе ассоциации целлюлозолитических и молочнокислых бактерий.

Для наиболее полноценного использования той или иной добавки необходимо найти оптимальный путь включения её в состав комбикорма. Как правило, он заключается во внесении дополнительных компонентов в комбикорм во время его изготовления. Это позволяет применить более точную дозировку, добиться равномерного распределения добавки в комбикорме и снизить затраты труда. Особенно важен такой подход при использовании хозяйством гранулированных кормов, так как равномерное смешивание мелкодисперсных препаратов с готовыми гранулами практически невозможно.

На сегодня существует проблема сохранности добавок в комбикормах, подвергающихся различным видам термообработки. Многие производители комбикормов используют процессы экспандирования и экструдирования для повышения переваримости растительных компонентов рациона и снижения контаминации конечного продукта. При этом становится невозможным включение термолабильных добавок в состав комбикорма при его изготовлении.

В связи с этим основной целью нашей работы являлось выделение штаммов термостойких целлюлозолитических бактерий и создание на их основе препарата, способного повышать продуктивность сельскохозяйственных животных и птицы.

В задачи исследований входило:

1 Изучить влияние температурного воздействия на жизнеспособность микроорганизмов препарата целлобактерин в лабораторных и производственных экспериментах.

2 Провести отбор среди штаммов целлюлозолитических бактерий, из коллекции ГНУ ВНИИСХМ, по критериям ферментативной активности и термоустойчивости.

3 Изучить культурально - морфологические свойства наиболее активного изолята и отработать технологию его выращивания в производственных условиях, с последующим высушиванием на твёрдом носителе.

4 Изучить воздействие термообработки комбикорма на жизнеспособность отобранного штамма и проанализировать его влияние на продуктивность цыплят-бройлеров в промышленных условиях.

Научная новизна

1. В результате выполненной работы впервые получены данные по влиянию различных процессов термообработки комбикорма на сохранность в нём полезных микроорганизмов. Установлены пороговые значения температуры производственных процессов, превышение которых делает использование препарата целлобактерин неэффективным.

Впервые был проведён направленный отбор среди изолятов целлюлозолитических микроорганизмов коллекции ГНУ

ВНИИСХМ, завершившийся выделением наиболее ферментативно-активных и термостойких штаммов. 3. Впервые изучено влияние целлюлозолитических бактерий рода Bacillus на продуктивность сельскохозяйственной птицы.

Апробация работы

Материалы диссертации были доложены:

• на Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых "Биотехнология - возрождению сельского хозяйства России в XXI веке" (г. Санкт-Петербург, 30 окт. 2001 г);

• на региональной конференции молодых учёных «Стратегия взаимодействия микроорганизмов с окружающей средой» (г. Саратов, 26-27 марта 2002 г);

• на II международной научно-практической конференции «Научно-технический прогресс в животноводстве России — ресурсосберегающие технологии производства экологически безопасной продукции животноводства» (Дубровицы, 29 сентября 2003 г);

• на III научно-практической конференции «Перспективные 0 направления в производстве и использовании комбикормов и балансирующих добавок» (Дубровицы, 17 декабря 2003 г);

Публикации

Основные результаты диссертации опубликованы в 9 печатных работах.

Структура и объём диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и их обсуждения,

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Проворов, Евгений Леонидович

Выводы

1. Из лабораторных и производственных экспериментов по изучению влияния температурного воздействия на сохранность препарата целлобактернн следует, что при повышении температуры обработки комбикорма выше 75°С гибель целлюлозолитических и молочнокислых бактерий достигает критических значений, а следовательно, использование препарата становится нецелесообразным.

2. В результате скрининга штаммов целлюлозолитических бактерий из коллекции ГНУ ВНИИСХМ, для дальнейшего изучения был отобран штамм под №1-85. Он показал наилучшую ферментативную активность — 19% убыли натуральной целлюлозы через 72 часа инкубирования и высокую сохранность жизнеспособных клеток при прогревании культуры на жидкой питательной среде до 90°С - 6,71 ±0,74 lgKOE/мл.

3. Изучена морфология клеток бактерий отобранного штамма, характер их роста на различных питательных средах, потребности в питательных веществах и биохимическая активность. По совокупности этих признаков штамм был идентифицирован как Bacillus pantothenticus №1-85. Путём постановки биологических проб на лабораторных животных не было выявлено патогенных и токсинпродуцирующих свойств у изучаемого штамма.

4. Изучены технологические аспекты культивирования Bacillus pantothenticus №1-85 на лабораторной и производственных питательных средах различного состава. Показано, что минерально-шротовая среда является оптимальной для выращивания данных микроорганизмов в промышленных условиях. Через 24 часа культивирования количество жизнеспособных термоустойчивых спор в 1 мл среды составляет 4,63±0,67 lgKOE/мл и в дальнейшем значительно не увеличивается.

5. Отработана технология высушивания культуры Bacillus pantothenticus №1-85 на разных носителях растительного происхождения. Высушивание в кипящем слое позволяет сократить продолжительность процесса в 7 - 10 раз по сравнению с конвекционной сушкой. Количество микроорганизмов перенёсших высушивание составляет 7,9 — 8,3 IgKOE/r. Не обнаружено достоверного влияния вида носителя, а также метода, температуры и продолжительности высушивания, на эту величину. Наиболее удобными в использовании оказались подсолнечниковый шрот и пшеничные отруби.

6. При включении в рацион цыплят-бройлеров культуры бактерий Bacillus pantothenticus №1-85, в дозе 4,24±0,07 IgKOE/r, снижение затрат корма на единицу привеса варьировало в пределах 7 - 22% по сравнению с контролем. При сравнении влияния пробиотика целлобактерин, ферментного препарата целловиридин Г20х и изучаемого штамма на зоотехнические показатели бройлеров, у птиц, получавших штамм Bacillus pantothenticus №1-85 была зафиксирована наибольшая живая масса в конце эксперимента (на 5,9% выше контрольной), а также наилучшие показатели переваримости протеина и сухого вещества рациона. При этом процент переваренной клетчатки был выше у цыплят, получавших ферментный препарат.

7. Выявлено, что экспандирование комбикорма, содержащего штамм Bacillus pantothenticus №1-85 в количестве около 4 IgKOE/r, в температурном диапазоне 70° - 105°С не приводит к заметному снижению численности бактерий. Последующее хранение комбикорма в течение 1 месяца (по ГОСТ Р 51850) не оказывает отрицательного воздействия на сохранность микроорганизмов.

Практические предложения:

Использование препарата целлобактерин-Т, созданного на основе целлюлозолитических бактерий Bacillus pantothenticus №1-85 позволяет сохранять продуктивность бройлеров на высоком уровне при кормлении их низкопитательным рационом.

Возможность включения препарата в состав гранулированных комбикормов, непосредственно на комбикормовом заводе, позволит заранее корректировать их состав, снижать затраты труда и повышать рентабельность производства.

Заключение

С момента рождения желудочно-кишечный тракт животных и птиц заселяется различными микроорганизмами. Постепенно между ними складываются сложные симбиотические взаимодействия. Нормальная кишечная микрофлора оказывает влияние на активность физиологических процессов животного - хозяина, регулирует его взаимоотношения с окружающей средой. В зависимости от типа питания макроорганизма меняется качественный и количественный состав его микрофлоры.

В условиях интенсивного промышленного содержания животные и птицы подвергаются систематическим стрессовым воздействиям. Это отрицательно сказывается на их здоровье и продуктивности. Рациональное кормление является одним из ведущих факторов на пути к получению качественных и недорогих продуктов животноводства. Использование рационов, содержащих большое количество легкодоступных питательных веществ, экономически неоправданно, а также приводит к нежелательным сдвигам в составе микробного населения кишечника, что может явиться причиной высокой заболеваемости поголовья. С другой стороны, кормление животных и птицы кормами, богатыми клетчаткой и другими труднопереваримыми растительными полимерами не позволяет получить от них достаточного количества продукции.

Основным подходом, направленным на решение возникающих противоречий является использование разнообразных добавок, корректирующих процессы пищеварения.

Наша работа была направлена на создание микробного препарата на основе целлюлозолитических микроорганизмов, предназначенного для коррекции микробиоценоза желудочно-кишечного тракта животных.

В связи с тем, что большинство кормов в настоящее время подвергается различным видам термообработки (экспандированию) и выпускается в форме гранул, основным требованием, предъявляемым к целлюлозолитическим бактериям, наряду с высокой ферментативной активностью, была их способность выдерживать нагревание. Такие биологические особенности штамма позволят включать его в состав комбикормов при их изготовлении и тем самым оптимизировать процесс дозировки препарата и снизить затраты труда на производстве.

В кормлении животных и птицы применяется препарат пробиотик целлобактерин, созданный сотрудниками ГНУ ВНИИСХМ, на основе ассоциации целлюлозолитических бактерий, выделенных из рубца жвачных животных. На первом этапе работы в лабораторных и производственных экспериментах была изучена способность препарата переносить нагревание. Полученные данные показали, что его использование оправдано в тех случаях, когда температура кормовой смеси не превышает 75°С. При дальнейшем нагревании была отмечена массовая гибель микроорганизмов. В производственных условиях корма чаще всего экспандируются при 90° и 105°С, а следовательно, включение в их состав целлобактерина не представляется нам целесообразным.

Полученные данные явились предпосылкой для поиска целлюлозолитических бактерий, обладающих высокой ферментативной активностью и способных выдерживать значительное повышение температуры. Нами был проведён анализ имеющихся в лаборатории сведений об активности изолятов целлюлозолитических бактерий из коллекции ГНУ ВНИИСХМ. На его основе было отобрано 6 наиболее активных штаммов и проведена сравнительная характеристика их способности лизировать натуральную целлюлозу, а также переносить нагревание. По совокупности этих свойств лучшим был признан штамм под №1-85, выделенный из рубца крупного рогатого скота.

Следующий этап работы был посвящён изучению культурально-морфологических свойств бактерий штамма №1-85. По их совокупности, при помощи определителя бактерий Берги («Определитель бактерий Берги», 1997) и частотной матрицы, предложенной Беркли с соавт. (Berkeley et al., 1984), исследуемый штамм с вероятностью 97% был идентифицирован как Bacillus pantothenticus №1-85.

Итак, был отобран штамм, по ряду признаков перспективный для дальнейшей работы. Однако прежде чем изучать технологические аспекты его культивирования, необходимо было убедиться в отсутствии у него патогенности и способности к образованию токсинов. С этой целью был проведён ряд экспериментов на табельных лабораторных животных — белых мышах. Суть их заключалась в подкожном и внутрибрюшинном заражении мышей разными количествами микробных тел штамма №1-85, а также в парентеральном введении им бесклеточного фильтрата 2-х недельной бульонной культуры Bacillus pantothenticus №1-85. В результате опытов не было обнаружено патогенности штамма Bacillus pantothenticus №1-85, и его способности продуцировать токсины.

Для того чтобы включать заданное количество бактерий в рацион бройлеров, необходимо было отработать технологию культивирования штамма на дешёвой питательной среде, а затем перевести микробные клетки в состояние, обеспечивающее сохранение их жизнеспособности в течение определённого времени. Нами были изучены параметры роста Bacillus pantothenticus №1-85 на лабораторной и производственных питательных средах и составлены кривые роста штамма. Наиболее приемлемой для культивирования бактерий в промышленных условиях оказалась минерально-шротовая производственная среда. Такие моменты, как непродолжительная лаг-фаза, последующий затем интенсивный рост, обеспечивающий высокий титр бактерий в начале стационарной фазы, делают её наиболее привлекательной для использования. Показано, что временем культивирования штамма Bacillus pantothenticus №1-85 на этой среде, необходимым для начала спорообразования, является 18 часов, а уже к 24 часам количество термостойких спор составляет 4,63 lgKOE/мл. Дальнейшее продолжение инкубирования представляется нам нецелесообразным, так как заметного увеличения количества термостабильных спор при этом не происходит.

При изучении особенностей высушивания 24-часовой культуры Bacillus pantothenticus №1-85, на трёх субстратах растительного происхождения, наиболее подходящими были признаны подсолнечниковый шрот и пшеничные отруби. Независимо от метода сушки (конвекционная или сушка в кипящем слое) удавалось добиться высокого содержания жизнеспособных спор в конечном продукте — около 8 lgKOE/r, что сопоставимо с титром культуральной жидкости. В то же время её десятиминутное прогревание показало, что к 24 часам термостойкие споры составляют лишь 4,63 lgKOE/мл от общего количества клеток. Следовательно, вторую половину клеточного урожая составляют незрелые и неустойчивые к нагреванию споры и вегетативные клетки на разных стадиях дифференцировки. Однако процессы сушки не оказывали на них губительного воздействия.

Сведения о параметрах культивирования и высушивания штамма Bacillus pantothenticus №1-85 легли в основу разработки технического регламента на производство нового препарата.

Научно-производственные эксперименты, выполненные на цыплятах-бройлерах, получавших низкопитательный рацион с повышенным содержанием растительной клетчатки, позволили выявить положительное влияние изучаемого штамма на показатели продуктивности птицы. Оказалось, что наиболее эффективно усваивают корма цыплята, в рационе которых содержатся бактерии штамма Bacillus pantothenticus №1-85 в количестве 4,24 lgKOE/r. Статистически достоверное увеличение эффективности использования кормов в таких опытных группах по сравнению с контрольными колеблется от 7 до 22%.

Отмечено также, что такие группы птиц отличаются набольшей сохранностью поголовья (100%).

В эксперименте на бройлерах кросса «Конкурент-2» провели сравнительную оценку влияния Bacillus pantothenticus №1-85, ферментного и микробиологического препаратов на показатели переваримости и использования питательных веществ рациона. Птицы, получавшие в качестве добавки бактерии штамма №1-85 лучше всего переваривали протеин и сухое вещество, а кроме того, имели самую высокую живую массу в конце опыта, что говорит об эффективном использовании валовой энергии. Интересно, что высокие показатели переваримости протеина, зафиксированы у них на фоне среднего значения переваримости клетчатки, по сравнению с другими группами. Возможно, наряду с целлюлазами Bacillus pantothenticus №1-85 продуцирует ряд ферментов вторичного метаболизма, способствующих повышению доступности питательных веществ рациона для животных с однокамерным желудком.

Изначально при скрининге штаммов целлюлозолитических бактерий учитывали их способность переносить нагревание. Такое свойство некоторых микроорганизмов приобретает значение при необходимости их использования в условиях связанных со значительным повышением температуры окружающей среды. В нашем случае необходимо было изучить выживаемость Bacillus pantothenticus №1-85 при их включении в состав кормовых смесей, подвергаемых различным видам термообработки. Ряд опытов, проведённых на Белгородском экспериментальном заводе рыбных комбикормов показал, что при экспандировании и гранулировании кормов, проводимом в температурном диапазоне от 70° до 105°С, количество Bacillus pantothenticus №1-85 не опускается ниже 4 IgKOE/r. Такие потери являются вполне приемлемыми с точки зрения обеспечения оптимального содержания микроорганизмов в рационе птицы, и позволяют использовать штамм в производстве гранулированных кормовых смесей.

За месячный период хранения комбикорма, регламентируемый ГОСТ Р 51850, численность бактерий штамма №1-85 снижается относительно исходной величины в пределах среднестатистической ошибки, следовательно хранение кормов не оказывает отрицательного воздействия на сохранность в них бактерий штамма №1-85.

Результаты настоящей работы легли в основу разработки технологии производства и применения ферментативного пробиотика целлобактерин-Т, повышающего продуктивность бройлеров и пригодного для включения в состав гранулированных кормовых смесей. Новый препарат прошёл этап регистрации в Департаменте Ветеринарии при Министерстве сельского хозяйства Российской Федерации и находится в стадии широких производственных испытаний.

На изобретение «Штамм бактерий Bacillus pantothenticus 1-85 для использования в гранулированных кормах» получен патент №2235772 от 10 сентября 2004 года.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Проворов, Евгений Леонидович, 2004 год

1. Аджигирова Е.В. Использование кормовых ферментных препаратов при выращивании цыплят-бройлеров: Автореф. на соиск. уч. степ, к.с.х. наук.- Краснодар, 2001. - 20 с.

2. Актуальные проблемы применения биологически активных веществ и производства премиксов/ Околелова Т.М., Кулаков А.В., Молоскин С.А., Грачёв Д.М. Сергиев Посад. 2002 -282 с.

3. Ветеринарная лабораторная практика/ Под ред. И.Г.Усачёва и А.М.Ярных, Том 1. М. 1963 - С.567.

4. Бигон М., Харпер Дж., Таунсенд К. Экология. Особи, популяции и сообщества. М. 1989 248 с.

5. Доусон Карл А., Трикарико X. Живая дрожжевая культура И-САК1026™ краеугольный камень успешного использования культурных рас дрожжей в качестве усилителя рубцового пищеварения у жвачных// Сб. трудов 19-го ежегодного лекц. тура комп. Оллтек, 2002. - С.52.

6. Киселёва Н., Лаптев Г., Солдатова В. Использование Целлобактерина в птицеводстве// Комбикорма. 2000. - №5. — С.39.

7. Киселёва Н., Лаптев Г., My дрова Ю. Подсолнечниковый шрот в кормлении бройлеров// Животн. России. 2001. - №9. — С.43.

8. Кичеева Т. Изучение действия стресс-фактора на организм молодняка кур// Передовой науч.-произв. опыт в птицеводстве.-1997.-№ 2. С.20.

9. Корма и ферменты/ Околелова Т.М., Кулаков А.В., Молоскин С.А., Грачёв Д.М. Сергиев Посад. 2001 - 111 с.

10. Кормление сельскохозяйственной птицы// Фисинин В.И., Егоров И.А., Околелова Т.М., Имангулов Ш.А. Сергиев Посад, 2001 - 360 с.

11. Коршунов В.М., Смеянов В.В., Ефимов Б.А. Рациональные подходы к проблеме коррекции микрофлоры кишечника// Вестн. РАМН. — 1996.-№ 2. С.60.

12. Косолапое В.М., Косолапова В.Г., Мухамадьярова A.JL Переваримость питательных веществ при добавлении в рацион молодняка крупного рогатого скота пробиотика реалак// Сельскохозяйственная биология. 2003. - №2.

13. З.Костин А.П., Мещеряков Ф.А., Сысоев А. А. Физиология сельскохозяйственных животных. М.: 1983 450 с.

14. Н.Коштоянц Х.С. Основы сравнительной физиологии. Л.: 1951 —420 с.

15. Краткий определитель бактерий Берги/ Под ред. Дж. Хоулта. М.: 1997-495 с.

16. Куваева И.Б. Обмен веществ организма и кишечная микрофлора. М.: Медицина, 1976-270 с.

17. Курцин И.Т. Механорецепторы желудка и работа пищеварительного аппарата. Л.: 1952 351 с.

18. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М.: Медицина, 1972 310 с.

19. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высш. Школа, 1980-291 с.

20. Лаптев Г.Ю., Эрнст Л.К., Солдатова В.В. Интородукция целлюлолитичсеких бактерий в рубец крупного рогатого скота для повышения переваримости клетчатки// Сельскохоз. Биолог. 1994. -№4.- С.34.

21. Лаптев Г., Солдатова В., Баранихин А., Винокурова Т. Целлобактерин пробиотик, повышающий удои// Животноводство России. - 2003. - №10. - С.23.

22. Малик Н.И., Панин А.Н. Ветеринарные пробиотические препараты// Ветеринария 2001. - № 1. - С.27.

23. Малик Н.И. Новые пробиотические препараты ветеринарного назначения: Автореф. диссер. на соискание степени доктора б.н. -Москва, 2002. 28 с.

24. Мечников И.И. Сорок лет искания рационального мировоззрения // Акад. собр. соч. М.: Гос. изд.-во медицинской литературы. 1954. Т. 13.-С.7.

25. Микробные ферменты и биотехнология/ Под ред. В.М. Фогарти. -М. 1986 С.154.

26. Павлов И.П. Полное собрание сочинений. М.: 1951. Т.2. кн. 1-2. С.592.

27. Панин А.Н., Малик Н.И., Степаненко И.П. Пробиотики: теоретические и практические аспекты// Уралбиовет. 2002. - №2-3.

28. Пивняк И.Г., Тараканов Б.В. Микробиология пищеварения жвачных. М.: 1982.

29. Пирс Дж. Ферменты в кормлении птицы// Сб. трудов 19-го ежегодного лекц. тура комп. Оллтек. 2002, С. 18.

30. Попова Т.С., Шрамко Л.У. Нутрицевтики и пробиотики в лечении синдрома кишечной недостаточности и нормализации микробиоценоза кишечника// Клин. мед. 2001. - №4. С.4.

31. Практикум по микробиологии/ Под ред. М.С. Егорова. М. 1976.

32. Проворов Е.Л., Лаптев Г.Ю., Солдатова В.В. Введение в желудочно-кишечный тракт бройлеров ассоциаций целлюлолитических бактерий// Мат. 1-ой per. конф. мол.уч. «Стратегия взаимодействия микроорг. с окр. средой» февраль 2002 г. Саратов, 2002. С.36.

33. Рекомендации по кормлению сельскохозяйственной птицы// Ш.А. Имангулов и др. Сергиев Посад. 2000 - С. 19.

34. Родионова, Безбородов. О локализации систем ферментов// Прикл. Биохимия и микробиология. 1997. - №5 - С.467.

35. Саубенова М.Г. Использование целлюлолитических бактерий в кормопроизводстве// Прикл. Биохим. и Микроб. 1998. - №34(1). -С.91.

36. Смирнов В. В. Антибиотики и/или пробиотики: размышления и факты// Лкування та Д1 агностика. — 1998. №2. - С.8.

37. Смирнова И.Э., Саубенова М.Г. Целлюлозолитические азотфиксирующие бактерии для обогащения белком грубых кормов// Прикл. Биохим. и Микроб. 2001. - №37(1). С.86.

38. Сысоев А.А. Физиология сельскохозяйственных животных. М.: Колос, 1980.

39. Тараканов Б.В. Использование пробиотиков в животноводстве. Калуга.: ВНИИФиП с/х животных, 1998.

40. Тихомиров Д.Ф., Фетисова В.В., Симанькова М.В., Клёсов А.А. Эндо-1,4,-Р-глюканаза анаэробной термофильной бактерии

41. Clostridium thermocellum в условиях распада мультиферментных кластеров// Биохимия. 1988. - №5. - С.758.

42. Уголев A.M., Иезуитова Н.Н., Тимофеева Н.М. Физиология мембранного (пристеночного) пищеварения. Физиология пищеварения. JL: 1974 С.542.

43. Ушакова Н.А., Белов Л.П., Варшавский А.А., Козлова А.А., Колганова Т.В., Булыгина Е.С., Турова Т.П. Расщепление целлюлозы при дефиците азота бактериями, выделенными из кишечника растительноядных позвоночных// Микробиология. — 2003. -№3.-С.400.

44. Чахава О.В. Гнотобиология. М., 1972.

45. Челиева В.В., Манвелова М.А. Антиопухолевое и иммуномодулирующее действие бифидобактерий// Сб. н. тр.: «Мед. аспекты микробной экологии». М., 1994, С.82.

46. Шевелева С.А. Пробиотики, пребиотики и пробиотические продукты// Вопр.питания. 1999. - №2. - С.32.

47. Шендеров Б.А. Антибиотики и химиотер. 1990. - №35. С.2.

48. Шендеров Б.А., Манвелова М.А. Функциональное питание и пробиотики. М.: 1997.

49. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том 1: Микрофлора человека и животных и её функции. М.: Грантъ, 1998.

50. Шубин А.А., Шубина Л.А. Бифилакт-А препарат для профилактики и лечения желудочно-кишечных болезней телят и ягнят// Вестник Российской Академии сельскохозяйственных наук. - 1993. - №5. -С.53.

51. Эрнст Л.К., Лаптев Г.Ю., Солдатова В.В. Комплексный препарат -пробиотик для стимуляции процессов пищеварения// Мат. международной конф. «Биологические основы высокойпродуктивности сельскохозяйственных животных», 4.1. Боровск, 1991: С.137.

52. Apajalahti J., Bedford M.R. Improve bird performance by feeding its microflora// World Poultry-Elsevier. 1999.- Vol.15, №2. P.20.

53. Bayer E.A., Setter E., Lamed R. Organization and Distribution of the Cellulosome in Clostridium thermocellum// J. of Bact. 1985. - P.552.

54. Bedford MR, Classen HL, Campbell GL. The effect of pelleting, salt, and pentosanase on the viscosity of intestinal contents and the performance of broilers fed rye// Poult. Sci. 1991. - Vol.70, N7. P. 1571.

55. Bedford M.R. Interactions Between Ingested Feed and the Digestive System in Poultry// J. Appl. Poultry Res. 1996. - Vol.5, N86. P.95.

56. Bedford M.R. The Effect of Enzymes on Digestion// J. Appl. Poultry Res. 1996. Vol.5. P.370.

57. Beguin P. et al. Bacterial cellulaces// Biochem. Soc. Transact. 1992. Vol.20, N1.P.42.

58. Benemann J.R. Nitrogen fixation in termites// Science. 1973. Vol. 181. P.4095.

59. Berkeley R.C.W., Logan N.A., Shute L.A., Capey A.G. Identification of Bacillus species// Methods in Microbiol. 1984. Vol.16. P.291.

60. Blomberg L.A., Henriksson and P.L. Conway. Ingibition of adhesion of Escherihia coli K88 to piglet ileal mucus by Lactobacillus spp// App. Environ. Microbiol. Vol.59. P.34.

61. Bohnhoff N, Drake BL, Muller CP. Effect of streptomycin on susceptibility of the intestinal tract to experimental salmonella infection// Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1954. Vol.86. P.132.

62. Breznak J.A., Brill W.J., Mertins J.W., Coppel H.C. Nitrogen fixation in termites// Nature 1973. - Vol.244, № 5418. P.577.

63. Bujnakova D, Kmet V. Aggregation of animal lactobacilli with 0157 enterohemorragic Esherichia coli// J. Vet. Med.B.Infect.Dis.Vet.Public Health. 2002. - Vol.49, N3. P.152.

64. Carr J.G. Microbes I have known: A study of those associated with fermented products// J. Appl. Bacteriol. 1983. - Vol.55. P.383.

65. Carre C. Ueber Antagonisten unter den Bacterien// Correspondenz-Blatt fuer Schweizer Aerzte. 1887. - Vol.17. P.385. (in German).

66. Coates M.E., Fuller R. Gnotobiotic animal. Microbial Ecology of the Gut/ Eds. R.T.J. Clarke, T. Bauchop. San Francisko, 1977. P.307.

67. Collins FM, Carter PB. Growth of salmonellae in orally infected germ free mice// Infect. Immun. 1978. - Vol.21. P.41.

68. Conly JM, Stein K. The production of menaquinones (vitamin K2) by intestinal bacteria and their role in maintaining coagulation homeostasis// Prog. Food Nutr. Sci. 1992. - Vol.16, N4. P.307.

69. Farmer RE. Inhibitory effect of yoghurt components upon to the proliferation of ascites tumor cells// J. Dairy Sci. 1987. - Vol.58. P.787.

70. Ferket P.R. Managing gut health in world without antibiotics// Proceedings from Altech's 17 th European, Middle Eastern and African Lecture Tour. -2003. P. 19.

71. Fuller R. Probiotics in man and animals// J. Appl. Bacteriol. 1989. -Vol.66. P.365.

72. Freter R. The fatal enteritic cholera infection in the guinea pig// Bacteriol. Proc.-1954.-Vol.56.

73. Freter R. Factors affecting the microecology of the gut. In: Probiotics, the scientific basis. London: Chapman & Hall, 1992: P.l 11.

74. Goldin B.R., Gorbach S. Am. J. Clin. Nutr. M. 1984. P.756.

75. Green M., Starzl Т.Е., Reyes J., Fung J.J., Abu-Elmagd K., Cicalese L., Sileri P. Bacterial Translacation In Clinical Intestinal Transplantation// Transplantation Proceedings. 2000. - Vol.32, N6. P. 1210.

76. Guarner F, Malagelada JR. Gut flora in health and disease// Lancet. -2003. Vol.8, N361(9356). P.512.

77. Hackstein J.H.P., Langer P., Rosenberg J. Genetic and evolutionary constraints for the symbiosys between animals and methanogenic bacteria// Environmental Monitoring and Assessment. — 1996. Vol.42. P.39.

78. Hara Т., Veda S. Regulation of polyglutamate production in Bacillus subtilis (natto): Transformation of high PGA productivity// Agric. Biol. Chem. 1982. - Vol.46. P.2275.

79. Havenaar R, Huis In't Veld MJH. Probiotics: a general view. In: Lactic acid in health in disease. Vol 1. Amsterdam: Elsewier Applied Science Publichers, 1992.

80. Hollister,A.G., Corner D.E., Nisbet D.J. and J.R. DeLoach. Effects of chicken-derived caecal microorganisms maintained in continuous cultureon caecal colonization by Salmonella thyphumurium in turkey poults// Poultry Sci. Vol.78. P.546.

81. Hooper Lora V. and Gordon Jeffrey I. Commensal host-bacterial relationships in the Gut// Science. Vol.292. P.l 115.

82. Hungate R.E. The rumen and its microbes. New York, Academic press, ed.3., 1966.

83. Jadamus A, Vahjen W, Simon O. Growth behavior of a spore forming probiotic strain in the gastrointestinal tract of broiler chiken and piglets// Arch. Tierenahr. -2001. Vol.54, N.l. P.l.

84. Kindberg C, Suttie JW, Uchida K, Hirauchi K, Nakao H. Menaquinone production and utilization in germ-free rats after inoculation with specific organisms// J. Nutr. 1987. - Vol. 117, N6. P.l 032.

85. Kmet, V., M.L. Callegari, V. Bottazzi, and L. Morelli. Aggregation-promoting factor in pig intestinal Lactobacillus strains// Lett. Appl.Microbiol. 1995.- Vol.21. P.351.

86. Kmet, V., and F. Lucchini. Aggregation-promoting factor in human vaginal Lactobacillus strains// FEMS Immunol. Med. Microbiol. 1997. Vol. 19. P.l 11.

87. Kmet, V., F. Lucchini. Aggregation of sow lactobacilli with diarheagenic Echerichia coli// J. Vet. Med. 1999 - Vol.46. P.683.

88. Lamed R., Naimark J., Morgenstern E., Bayer E.A. Specialized cell Surface Structures in Cellulolytic Bacteria// J. of bact. 1987. - P.3792.

89. Lilly DM, Stillwell RH. Probiotics. Growth promoting factors produced by microorganisms// Science. 1965. - Vol.147. P.747.

90. McCroarty J. A., and Reid G. Detection of Lactobacillus substance that inhibits E.coli// Can.J. Microbiol. 1988. - Vol.34. P.974.

91. McDonald P., Edwards R.A., Greenhalgh J.F.D., Morgan C.A. Animal Nutrition. Fifth Edition. Longman, 1995. - P. 153,175.

92. Molin G. Probiotics in foods not containing milk or milk constituents, with special reference to Lactobacillus plantarum 299v// Am.J. Clin. Nutr.-2001.-Vol.73. P.380.

93. Nagaraja T.G., Chengappa M.M. J. Anim. Sci. 1998. - Vol.76. P.287.

94. Opinion of the Scientific Committee on Animal Nutrition on the Safety of use of Bacillus species in animal nutrition. SCAN report// Europ. Commission health & consum. protection direct.- 2000. (http://www.europa.eu.int/).

95. Owens F.D., Secrist D.S., Hill W.J., Gill D.R. J. Animal. Sci. -1998.-Vol.76. P.275.

96. Parker RB. Probiotics, the other half of the antibiotic story// Anim. Nutr. Health. 1974. - Vol.29. P.4.

97. Perdigon G., Alvarez S. and A. Pesce de Ruiz Holdago. Immunoadjuvant activity of oral Lactobacilus casei: influence of dose on the secretory immune response and protective capacity in intestinal infections//J. Dairy Res. 1991. - Vol.58. P.485.

98. Pestova M.I., Clift R.E.,Viskers R.J., Franklin M.A. and Mathew A.G. Effect of weaning and dietary galactose supplemenation on digesta glycoproteins in pigs// J.Sci.Food Agric. 2000. - V.80. P.1918.

99. Pouwels, P.H., Leer,R.J. Boersma, W.J. The potential of Lactobacillus as a carrier for oral immunization: development and preliminary chara// J. Biotechnolog. 1996. - Vol.44. P. 183.

100. Prokesova L. Effect of Bacillus firmus on antibodi formation after mucosal and parenteral immunization in mice// Immunol. Lett. 1998. -Vol.64, N2. P. 161.

101. Procesova L. Immunostimulatory effect of Bacillus firmus on mouse lymphocytes// Folia Microbiol (Praha). 2002. - Vol.47, N2. P.193.

102. Puvadolpirod S, Thaxton JP. Model of physiological stress in chickens. Digestion and metabolism// Poult. Sci. — 2000. Vol.79, N3. P.383.

103. Ramotar K, Conly JM, Chubb H, Louie TJ. Production of menaquinones by intestinal anaerobes// J. Infect. Dis. 1984 - Vol.150, N2. P.213.

104. Ravindran V, Selle PH, Ravindran G, Morel PCH, Kies AK, Bryden WL. Microbial phytase improves performance, apparent metabolizable energy, and ileal amino acid digestibility of broilers fed a lysine-deficient diet//Poult. Sci.-2001.-Vol.80, N3. P.338.

105. Reid G., J.A. McCroarty, R. Amgotti, and R.L.Cook. Lactobacillus inhibitor production against E.coli and coaggregation ability with uropatogenes//Can. J. Microbiol. 1998. - Vol.138. P.763.

106. Renondo-Lopez. V., R.I. Cook, and J.D.Sobel. Emerging role of lactobacilli in the control and maintenance of the vaginal bacterial microflora// Rev. Infect. Dis. 1990 - Vol. 12. P.856.

107. Report the Scientific Committee on Animal Nutrition on product Bioplus 2B ® for use as feed additive. SCAN Report. Europ. Commission health & consum. protection direct. 2000. (http://www.europa.eu.int/).

108. Rettger LF, Cheplin HA. A treatise on the transformation of the intestinal flora with special reference to the implantation of bacillus acidophilus. London, 1921.

109. Rettger LF, Levi MN, Weinstein L. Lactobacillus acidophilus and its therapeutic application. London, 1935.

110. Roy, D., Chevalier P., Ward P. and Savoie L. Sugars fermented by Bifidobacterium infantis ATSS 27920 in relation to grow and alpha-galactosidase activity// Appl. Microbiol. Biotech. 1991. - Vol.34. P.653.

111. Russel J.B., Wilson D.B. J. Dairy Sci. 1996. - Vol.79. P. 1503.

112. Russel J.B., Rychlik J.L. Factors That Alter Rumen Microbial Ecology// Science. -2001. Vol.292. P.l 119.

113. Salminen S. Uniqueness of probiotic strains// IDF Nutr. News Lett. -1996.-Vol.5. P. 16.

114. Schaafsma G. State of art concerning probiotic strains in milk products// IDF Nutr. News. Lett. 1996.-Vol.5. P.23.

115. Shapiro F, Nir I. Stunting syndrome in broilers: effect of age and exogenous amylase and protease on performance, development of the digestive tract, digestive enzyme activity, and apparent digestibility// Poult. Sci. 1995. - Vol.74, N12. P.2019.

116. Shapiro F, Nir I. Stunting syndrome in broilers: physical, physiological, and behavioral aspects// Poult. Sci. 1995. - Vol.74, N1. P.33.

117. Shirakawa H, Komai M, Kimura S. Antibiotic-induced vitamin К deficiency and the role of the presence of intestinal flora. Int. J. Vitam. Nutr. Res. 1990. - Vol.60, N3. P.245.

118. Shrezenmeir J., M. de Verse. Probiotics, prebiotics, and synbiotics approaching a definition// Am. J. Clin. Nutr. - 2001. - Vol.73. P.361.

119. Sohail SS, Roland DA Sr. Influence of supplemental phytase on performance of broilers four to six weeks of age// Poult. Sci. 1999.-Vol.78, N4. P.550.

120. Sorokulova I.B. Effect of probiotics from bacilli on macrophage functional activity// Antibiot Khimioter. 1998.- Vol.43, N2. P.20.

121. Sperti GS. Probiotics. West point. Avi Publiching Co, 1971.

122. Stenback A, Meurling S, Lundholm M, Wallander J, Johnsson C. Bacterial translocation from defunctionalized rat small bowel// Clin. Exp. Med. 2001. - Vol. 1N2. P. 113.

123. Szabo J, Salyi G, Rudas P. Effect of malabsorption syndrome on pancreatic function in broilers// Poult. Sci. 1989. - Vol.68., N11. P.1553.

124. Tankson JD, Vizzier-Thaxton Y, Thaxton JP, May JD, Cameron JA. Stress and nutritional quality of broilers// Poult. Sci. 2001 - Vol.80., N9. P.1384.

125. Tannock G.W. Probiotics: A critical review Chapter Abstracts// Horizon Scientific Press, 1998. ('http://www.horizonpress.com4)

126. Tissier H. Taxonomy and ecology of bifidobacteria// Bifidobacteria Microflora. 1984. Vol.3., N11. P.28.

127. Tsujisaka, Y., Okumura, S. & Iwai, M. Biochimica et Biophysica Acta, 1977. в кн.: «Микробные ферменты и биотехнология» (под ред. В.М. Фогарти).М., 1986.

128. Vranjes Vukic М. & Wenk С. Influence of Trichoderma viridae Enzyme Complex on Nutrient Utilization and Performance of Laying Hens in Diets With and Without Antibiotic Supplementation// Poultry Science. 1996. -Vol.75. P.551.

129. Wood T. Microbial enzymes involved in the degradation of the cellulose component of plant cell walls// Annual report. The Rowett Research Institute, 1992.

130. Zanini SF, Sazzad MH. Effects of microbial phytase on growth and mineral utilisation in broilers fed on maize soyabean-based diets// Br. Poult. Sci. 1999. - Vol.40., N3. P.348.

131. Состав комбикорма ПК-5, использованного на АО «ГППЗ Большевик» для кормления бройлеров от 5 до 30 дней*1. Наименование %1. Кукуруза 20,001. Пшеница 42,81

132. Шрот подсолнечный 36-40% 6,801. Шрот соевый сп>46% 19,401. Мука рыбная 68% 6,001. Масло растительное 1,901. Лизин 78% 0,031. Метионин кормовой 0,161. Известняковая мука 0,101. Соль поваренная 0,10

133. Углеводно-минеральная добавка 1,001. Фосфат обесфторенный 1,201. Премикс П5-1 0,50

134. Показатели качества комбикорма ПК-5*

135. Наименование Единица измерения Значение

136. Данные приведены на основании удостоверения о качестве комбикорма ЗАО «Гатчинский ККЗ» от 16.10.2002

137. Состав комбикорма ПК-6, использованного на АО «ГППЗ Большевик» для кормления бройлеров от 31 до 56 дней**1. Наименование %1. Пшеница 52,391. Ячмень без плёнок 15,00

138. Шрот подсолнечный 36-40% 15,00

139. Шрот соевый сп>41-45% 4,001. Мука рыбная 68% 6,801. Масло растительное 4,501. Лизин 78% 0,161. Метионин кормовой 0,111. Известняковая мука 0,501. Соль поваренная 0,141. Фосфат обесфторенный 0,901. Премикс П6-1 0,50

140. Содержание витаминов и микроэлементов в 1 кг комбикорма ПК-6**

141. Показатели качества комбикорма ПК-6**

142. Наименование Единица измерения Значение

143. Данные приведены на основании удостоверения о качестве комбикорма ЗАО «Гатчинский ККЗ» от 03.12.2002

144. Компонентный состав и содержание питательных веществ в комбикорме, использованном для кормления бройлеров кросса1. Конкурент-2»***

145. Наименование, % 1-4 недели 5-7 недель1. Кукуруза 10,0 0,01. Пшеница 42,6 44,01. Ячмень 10,0 13,5

146. Жмых подсолнечный 15,0 25,01. Шрот соевый 6,0 0,01. Мука рыбная 68% 4,0 2,01. Мясокостная мука 2,0 2,01. Глютен кукурузный 5,0 4,0

147. Масло подсолнечное 3,0 6,01. Лизин HCL 0,33 0,601. Метионин DL 0,11 0,10

148. Известняковая мука 0,8 1,61. Соль поваренная 0,20 0,20

149. Трикальций фосфат 1,0 0,50

150. Премикс витаминно-минеральный 0,50 0,501. Итого 100,0 100,0

151. В 100 гр комбикорма содержится, %

152. Обменной энергии, Ккал 299,0 310,41. Сырого протеина 21,0 20,41. Сырой клетчатки 4,03 4,731. Кальция 1,04 1,091. Фосфора общего 0,76 0,711. Натрия 0,25 0,221. Лизина 1,12 1,08

153. Данные приведены на основании отчёта ГНУ ВНИИТИП

154. Открытое акционерное общество

155. Белгородский экспериментальный завод рыбных комбикормов »309300. РФ,Белгородская обл., Ракитянский р-н, п.Пролетарский, Борисовское шоссе, 1

156. Телефоны: (07245) 3-58-48 ; 3-50-19 ; 3-54-29 ; 3-53-24. Факс: 5-57-741. На №1. АКТо результатах производственного испытания препарата пробиотика1. Целлобактерин -Т"

157. Кормление птицы на мясном откорме рационами с вводом препарата "Целлобактерин -V приводило к улучшению экономических показателей: снижение конверсии корма, увеличению процента сохранности и росту среднесуточного привеса.

158. Можно рекомендовать использование пробиотика "Целлобактерин -Т" для ввода в рецепты в комбикорма, вырабатываемые методами гранулирования и экспандирования.

159. Заместитель генерального директорСП^П!/ по ресурсам1. О • JMjl1. Главный технолог 1

160. И.с. Вергун Г.С. Головлева