Создание биопрепаратов на основе штаммов-деструкторов пестицидов прометрина и паратион-метила и испытание технологии ремедиации загрязненных почв тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат наук Третьякова, Светлана Эдуардовна

• Третьякова, Светлана Эдуардовна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Третьякова, Светлана Эдуардовна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общая характеристика пестицидов

1.1.1. Классификация пестицидов и их характеристика

1.1.2. Характеристика модельных пестицидов

1.2. Основные механизмы очищения почвы от пестицидов

1.2.1. Самоочищение почв

1.2.2. Основные направления принудительной ремедиации почв, загрязненных пестицидами

1.3. Влияние свойств почвы и внешних природных факторов на процессы деструкции пестицидов

1.4. Биоремедиация

1.4.1. Фиторемедиация

1.4.2. Микробиологическая деструкция

1.5. Методы и способы активации почвенных микроорганизмов

1.6. Иммобилизация микроорганизмов-деструкторов

1.7. Биопрепараты: составы и способы применения

1.8. Методы промышленной биотехнологии для получения биомассы микроорганизмов

1.8.1. Режимы культивирования микроорганизмов в ферментерах

1.8.2. Системы обеспечения условий культивирования в ферментерах

1.9. Индикация штаммов-деструкторов на фоне автохтонной микробиоты почв

1.9.1. Анализ общего микробиоценоза загрязненной почвы

1.9.2. Индикация интродуцированного штамма-деструктора

1.10. Оценка токсичности методами биотестирования

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2. ОБЪЕКТЫ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Объекты исследования

2.1.1. Бактериальные штаммы

2.1.2. Тест-объекты

2.1.3. Почва

2.2. Субстраты, носители и среды

2.2.1. Субстраты

2.2.2. Микрокапсулы как носитель микроорганизмов

2.2.3. Жидкие и плотные среды, их состав и приготовление

2.3. Общепринятые методы исследования

2.3.1. Определение титра колониеобразующих единиц микроорганизмов

2.3.2. Определение качественного и количественного состава аборигенной микробиоты

2.3.3. Микроскопия 5

2.3.4. Идентификация выделенных штаммов

2.3.5. Определение концентрации бактериальных клеток в культуральной жидкости по оптической плотности

2.3.6. Определение концентрации пестицидов

2.3.7. Определение почвенно-гидрологических констант модельной почвы

2.3.8. Определение токсичности почвенной вытяжки с использованием тест-объектов Daphnia magna Straus и Chlorella vulgaris Beijer

2.4. Методика выделения эффективных штаммов-деструкторов на прометрин

и паратион-метил

2.4.1. Подбор способа внесения пестицидов в экспериментальные среды

2.4.2. Выделение и селекционирование микроорганизмов-деструкторов

2.4.3. Выявление у микроорганизмов дегидрогеназной активности

2.4.4. Отбор наиболее эффективных штаммов-деструкторов

2.5. Подготовка почвенных систем для лабораторных исследований

2.6. Исследование процессов саморазрушения пестицидов и деструктивной активности аборигенной микрофлоры в почве

2.7. Изучение деструктивных свойств модельных штаммов в зависимости от применяемых агротехнических приемов в лабораторных условиях

2.8. Способ индикации интродуцированного штамма-деструктора в составе общей микробиоты экспериментальной почвы

2.9. Изучение внешнего вида и сорбционных свойств микрокапсул

2.10. Выращивание биомассы деструктора в ферментере

2.11. Способ инокулирования микрокапсул клетками штамма-деструктора

2.12. Подготовка экспериментальных участков почвы для проведения полевых исследований 72 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Получение эффективных штаммов-биодеструкторов на прометрин и паратион-метил

3.1.1. Выбор способа внесения пестицидов в экспериментальные среды

3.1.2. Выделение и выбор деструкторов по дегидрогеназной активности

3.1.3. Выбор наиболее эффективных пестицид-деструкторов

3.2. Характеристика чистой модельной почвы с экспериментального участка

3.2.1. Почвенно-гидрологические константы

3.2.2. Состав аборигенной микробиоты почвы экспериментального участка

3.3. Исследование процессов биодеструкции в лабораторных почвенных системах

3.3.1. Определение скорости саморазрушения пестицидов в стерильной почве 8

3.3.2. Деструктивные свойства модельных штаммов в почве на фоне агротехнических приемов в лабораторных условиях

3.4. Индикация интродуцированного штамма-деструктора Р. риНс1а П2 в составе общей микробиоты экспериментальной почвы

3.5. Создание биопрепаратов на основе штамма Р. риИс!а П2 94 3.5.1. Изучение сорбционных свойств микрокапсул в водной среде (жидкофазная сорбция)

3.5.2. Изучение сорбционных свойств микрокапсул в модельной почвенной

системе

3.5.3. Инокулирование капсул микроорганизмами

3.6. Разработка параметров культивирования штамма-деструктора Р. рШ1с1а П2

в ферментере

3.7. Оценка эффективности технологических агроприемов ремедиации почвы

в полевых условиях с использованием биопрепаратов

3.7.1. Изменения концентрации прометрина в почве экспериментальных участков

3.7.2. Сравнительные исследования изменений микробиологического состава экспериментальных почв

3.7.3. Изменение концентрации штамма-деструктора Р. риИс1а П2 в почве экспериментальных участков

3.7.4. Исследование токсичности почвенных образцов 113 ВЫВОДЫ 116 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ 118 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 119 ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Создание биопрепаратов на основе штаммов-деструкторов пестицидов прометрина и паратион-метила и испытание технологии ремедиации загрязненных почв»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы

Одной из актуальных задач современной биотехнологии является создание биопрепаратов на основе штаммов-деструкторов ксенобиотиков, выделенных из аборигенной микрофлоры, для решения комплекса задач, связанных с реабилитацией загрязненных почв в результате возрастающей техногенной нагрузки [1-7]. Растущий дефицит пригодных для хозяйственной деятельности человека земель возникает при активном использовании почв непосредственно в качестве природного ресурса в сельскохозяйственном секторе экономики [8-11]. Особенно сильно деградируют почвы вследствие интенсивного применения пестицидов с нарушением норм и правил их использования, что приводит к их значительному накоплению в почвах. Так же особую опасность представляют полигоны захоронения неиспользованных или запрещенных химикатов [12-14]. Естественные процессы самоочищения почв неспособны справиться с такими объемами загрязнений.

Известно, что плодородие и самоочищение почв напрямую зависит от активности микробиологических процессов, однако в результате высокой интоксикации почвы ингибируется автохтонная микрофлора [15-20]. Необходимость рекультивации нарушенных земель определяет комплекс задач по разработке, освоению и оптимизации технологий ремедиации, применения комплекса мелиоративных и рекультивационных мероприятий, оправданных экологическими и экономическими оценками. [21-27].

Изучение состава микробоценозов загрязненных почв, его изменений в процессе ремедиации после внесения штамма-деструктора или консорциума микроорганизмов, динамики адаптации и развития внесенного биодеструктора в условиях взаимодействия с аборигенной микрофлорой и под влиянием естественных и антропогенных факторов, представляет значительный научный интерес как для теоретической, так и для прикладной микробиологии.

Актуальность разработки комплексных технологий, направленных на восстановление основных функций почв и повышение их плодородия, связана с решением крупной народно-хозяйственной проблемы, имеющей государственное значение.

Степень разработанности проблемы. В настоящее время для решения проблем очистки загрязненных почв биологические методы ремедиации рассматриваются в качестве приоритетных. Биодеструкция считается наиболее перспективным направлением в технологиях рекультивации почвенных систем, зараженных органическими поллютантами, в том числе и пестицидами [28-30].

Известно, что структура и состав почвы являются ведущими факторами, влияющими как на стабилизацию пестицидов, так и на их биодоступность [31—37].

В работах ряда авторов показано, что снижение рН почвы приводит к увеличению адсорбции прометрина, атразина и двух его метаболитов гумусом почвы, что приводит к замедлению их деструкции [38]. Для различных видов загрязнений почв используют соответствующие специфичные штаммы-биодеструкторы. Доказано, что выделение микроорганизмов, устойчивых к экотоксикантам, целесообразно проводить из почвы, длительно содержащей высокие концентрации ксенобиотиков [1, 39^5]. На настоящий момент выделено и депонировано большое количество штаммов пестицид-деструкторов как в виде монокультур, так и в консорциумах [3, 39, 41-43, 46-48]. Однако практическое их применение в целях биоремедиации почв возможно только после изготовления из них биопрепаратов.

Одним из перспективных направлений является применение комбинированных физико-биологических методов, основанных на деструкционном потенциале почвенных микроорганизмов и высокой аккумулирующей способности сорбентов в отношении загрязнителей, в частности, пестицидов [12, 13, 49, 50]. Многими учеными показано, что иммобилизация бактерий, предназначенных для биоремедиации загрязненных почв, на различных носителях: вермикулите, опилках, торфе, соломе,

активированных углях и других, способствует повышению жизнеспособности и активности бактерий, улучшая качество очистки [51-55].

Существует большое количество запатентованных биотехнологических разработок, основанных на внесении биодеструкторов в различных препаративных формах (свободных и иммобилизованных), называемых биопрепаратами, в сочетании с агромелиоративным комплексом обработки почвы [46, 56-58]. Однако на сегодняшний день практически отсутствуют коммерческие биопрепараты на основе штаммов-деструкторов пестицидов в иммобилизованной форме для задач биоремедиации загрязненных почв сельскохозяйственного назначения.

Таким образом, актуальность, теоретическая и практическая значимость обусловили выбор темы, определили цель, задачи и структуру исследования.

Цель работы: создание биопрепаратов на основе штаммов пестицид-деструкторов, выделенных из аборигенной микрофлоры хронически загрязненных почв и иммобилизованных на микрокапсулах, и испытание технологии ремедиации экспериментально загрязненных почв в лабораторных и полевых условиях на примере чернозема южного.

Задачи исследования:

1. Выделение из хронически загрязненных пестицидами почв штаммов микроорганизмов, устойчивых к прометрину и паратион-метилу, и выбор из них наиболее перспективных биодеструкторов.

2. Исследование активности отобранных биодеструкторов на экспериментально загрязненных почвенных системах в лабораторных условиях для выбора наиболее оптимальных условий ремедиации.

3. Оптимизация биотехнологических параметров получения биомассы модельного биодеструктора на лабораторном ферментере.

4. Создание биопрепаратов на основе модельного биодеструктора, иммобилизованного на микрокапсулах, и испытание его деструктивных свойств в полевых условиях на экспериментально загрязненных почвенных системах.

5. Испытание технологии ремедиации экспериментально загрязненных почв в полевых условиях на примере чернозема южного с использованием модельного биодеструктора, разработанного биопрепарата и традиционных агротехнических приемов.

6. Оценка эффективности ремедиации экспериментально загрязненных прометрином почв при разных способах применения биодеструктора по данным химико-аналитических, токсикологических и микробиологических исследований.

Научная новизна работы.

Впервые экспериментально обоснованы условия выделения консорциума бактерий, устойчивых к 100 ПДК прометрина и паратион-метила. Охарактеризованы штаммы-деструкторы пестицидов: прометрина — Pseudomonas putida П2, Р. putida 1.1.2 и Р. putida 6.7.2; паратион-метила — Bacillus subtilis МФ1; Р. putida 8.3.2; Ochrobactrum thiophenivorans 6.2.3; В. megaterium; В. fastidiosus; В. laterosporus, использующие пестицид в концентрации 100 ПДК в качестве единственного источника углерода.

Отобраны для создания биопрепаратов штаммы Р. putida П2 и В. subtilis МФ1, которые характеризуются наибольшей деструктивной активностью на модельных средах: за 7 суток разрушают 80 % прометрина и 97 % паратион-метила, соответственно. Штаммы обладали высокими адаптационными и деструктивными характеристиками в условиях загрязнения почвы 100 ПДК пестицида.

Впервые обосновано использование наиболее активного штамма деструктора прометрина Р. putida П2 для создания биопрепарата, иммобилизованного на микрокапсулах из полимочевины диаметром 40-60 мкм. Изучена деструктивная способность вариантов биопрепарата на основе некапсулированного штамма Р. putida П2 и иммобилизованного на микрокапсулах в лабораторных и полевых условиях на модели почвенной системы, экспериментально зараженной 100 ПДК прометрина. Доказано, что применение микрокапсулированного препарата биодеструктора в 10 раз эффективнее, чем внесение суспензии чистого штамма.

Теоретическая и практическая значимость.

Выделены и депонированы штаммы-деструкторы прометрина и паратион-метила P. putida П2 (per. № ВКМ B-2811D) и В. subtilis МФ1 (per. № ВКМ B-2812D) (Приложение 1, 2).

Оптимизированы параметры ферментации и сроки выхода культуры деструктора в стационарную фазу для получения наибольшей биомассы. Определены оптимальные варианты применения комбинаций приемов ремедиации (полив, рыхление и интродукция биодеструкторов), обеспечивающих максимальное снижение концентрации пестицида прометрина и не вызывающие нарушения микробиологического равновесия в почве типа чернозем южный.

В рамках ОКР (шифр «Почва») № госрегистрации 01200960905 разработаны рекомендации по ремедиации почвы, загрязненной промышленным пестицидным препаратом «Гезагард» на примере чернозема южного.

Полученные данные по оптимизации параметров ферментации открывают перспективы использования в промышленном производстве биопрепаратов для ремедиации почв, загрязненных пестицидом прометрин. Результаты изучения деструктивной активности микрокапсулированого биопрепарата в полевых условиях могут быть использованы при разработке проектов ликвидации источников накопленного экологического ущерба, связанных с хранением пестицидов, при проведении биологического этапа рекультивации почв.

Результаты диссертационной работы внедрены в ЗАО «БНТ» при выполнении ОКР (шифр «Почва») № госрегистрации 01200960905 в рамках Федеральной целевой программы «Национальная система химической и биологической безопасности Российской Федерации (2009-2014 годы)» и реализованы при разработке универсальных технологий с использованием биологических и сорбционно-биологических методов, обеспечивающих рекультивацию (санацию) земель в соответствии с темой ОКР «Почва»; а также при разработке опытной Установки У1111Р 10/15, предназначенной для промышленного производства разработанных в ходе выполнения

диссертационной работы биопрепаратов для рекультивации почв, загрязненных пестицидами, что подтверждается актом о внедрении 09.06.2013 г. (Приложение 3).

Методология и методы исследования. Методологической базой послужили труды отечественных и зарубежных исследователей по вопросам выделения из аборигенной микрофлоры хронически загрязненных почв штаммов-деструкторов пестицидов и оценки их деструктивных свойств; условий иммобилизации клеток штаммов-деструкторов; биотехнологических условий выращивания микробной биомассы; условий биоремедиации почв, загрязненных пестицидами, и методам индикации штаммов-интродуцентов на фоне аборигенной микрофлоры почв. Основу данного исследования составляют комплексный анализ и системный подход в изучении рассматриваемой темы.

При проведении исследования и изложения материала автором были применены общенаучные методы: теоретико-методологический анализ литературных источников, эмпирические методы исследования в форме наблюдения, эксперимента, описания, измерения и сравнительно-сопоставительного анализа.

Применение указанных методов, а также анализ фактического материала позволил обеспечить объективность полученных выводов и результатов.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Выделены и охарактеризованы штаммы-деструкторы пестицидов: прометрина - Р. риНс1а П2, Р. риМа 1.1.2 и Р. рШгс1а 6.7.2.; паратион-метила -В. БиЫШз МФ1; Р. рийс1а 8.3.2; ОскгоЬаМгит Шоркепгоогат 6.2.3, В. megaterium; В. /азНсИоБШ', В. \aterosporus, использующие пестицид в концентрации 100 ПДК в качестве единственного источника углерода.

2. Отобраны для создания биопрепаратов штаммы Р. рийс1а П2 и В. быЫШб МФ1, которые характеризуются наибольшей деструктивной активностью, способностью за 7 суток разрушать 80 % прометрина и 97 % паратион-метила, соответственно, и высокими адаптационными и деструктивными характеристиками в условиях загрязнения почвы 100 ПДК пестицида.

3. Применение микрокапсулированного препарата биодеструктора в 10 раз эффективнее, чем внесение суспензии чистого штамма биодеструктора в загрязненную 100 ПДК прометрина почву на фоне проведения агроприемов в полевых условиях.

Работа выполнена в период с 2009 по 2013 гг. в научной биологической лаборатории и научно-образовательном центре «Промышленная экология» кафедры экологии Саратовского государственного технического университета имени Гагарина Ю.А. в рамках НИР СГТУ 13 В «Разработка методов оценки и реабилитации загрязненных природных сред» (2009-2010 гг.), а также в лаборатории биотехнологии ООО «НИИТОНХиБТ» в рамках ОКР «Почва» № госрегистрации 01200960905. Исследования поддержаны грантом Федеральной целевой программы «Развитие научного потенциала высшей школы» (государственный контракт СГТУ-7, 2012-2013).

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на конференциях различного уровня: Международной конференции «Антропогенная трансформация природной среды» (Пермь, 2010); Международной экологической студенческой конференции «Экология России и сопредельных территорий» (Новосибирск, 2010); Международной научно-практической конференции «Вавиловские чтения 2010» (Саратов, 2010); 1-3 Всероссийских научно-практических форумах «Экология: синтез естественно-научного, технического и гуманитарного знания» (Саратов, 2010-2012); Международной Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2011); 5-6 Всероссийских конференциях с международным участием «Экологические проблемы промышленных городов» (Саратов, 2011, 2013); Международной научно-практической конференции «Биотехнология: реальность и перспективы в сельском хозяйстве» (Саратов, 2013).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 работ, из них 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Благодарности. Автор выражает глубокую признательность и благодарность к.т.н. директору Олискевичу В.В. и управляющему директору ООО «НИИТОНХиБТ» Талаловской Н.М. за организационное и материальное обеспечение работ и помощь в оформлении экспериментальных результатов, а также всем сотрудникам ООО «НИИТОНХиБТ», оказавшим помощь при выполнении работ, заложивших основу для данной диссертации: Гребенщиковой В.А., Андрюхиной И.Ю., Басовой Е.В., Живайкиной Ю.А. (НИО биотехнологий); Руцкой Л.И. и остальным сотрудникам Испытательного центра; к.х.н. Никонорову П.Г. за помощь в постановке и интерпретации экспериментов по исследованию сорбционных свойств микрокапсул (НИО Химии).

Автор выражает глубокую благодарность аспирантке ФГБОУ ВПО «СГУ им. Н.Г, Чернышевского» Ивановой Е.В. и сотрудникам кафедры микробиологии и физиологии растений за помощь в определении состава микрофлоры модельной почвы и за предоставленный для исследования модельный штамм.

Автор благодарит Самойленко В.А., Пунтус И.Ф. и остальных сотрудников коллектива ИБФМ им. Г.К. Скрябина, РАН (г. Пущино) за консультации по вопросам культивирования микроорганизмов в ферментере. Также автор выражает глубокую признательность за совместную работу на всех этапах выполнения ОКР «Почва» главного конструктора ЗАО «БНТ» к..х.н. Барышниковой Е.А.

Автор выражает особую благодарность научным руководителям д.б.н., профессору Тихомировой Е.И. и к.б.н. Ксенофонтовой О.Ю. за помощь в формулировании положений диссертации и за полезные советы при оформлении диссертации.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общая характеристика пестицидов

1.1.1 Классификация пестицидов и их характеристика Высокий экономический эффект от использования химических средств защиты растений в сельском хозяйстве и других областях привела к быстрому развитию этой отрасли химической промышленности [59, 60]. С ростом объема их использования значительно вырос и ассортимент агропрепаратов, которые принято называть общим словом «пестициды». Большое разнообразие пестицидов обусловило разработку их классификации по различным критериям: химической природе [61, 62], персистентности, способу проникновения в организм и механизмам действия в нем [61-64], степени токсичности [65], назначению [12].

При классификации по назначению ядохимикаты подразделяются на следующие группы [12]:

- инсектициды, предназначенные для борьбы с вредителями сельскохозяйственных культур (тиофос, метафос, карбофос, хлорофос, карбаматы);

- гербициды, предназначенные для борьбы с сорными травами (амины, карбаматы, триазины);

- фунгициды - химикаты для борьбы с грибковыми болезнями растений (бензимидазолы, морфолины, дитиокарбаматы, тетраметилтиурамдисульфид);

- регуляторы роста растений;

- дефолианты, вызывающие преждевременное старение листьев растений, для оптимизации уборки урожая при использовании сельхозтехники.

В настоящее время биоциды, к которым относятся инсектициды, гербициды и фунгициды, являются неотъемлемой частью технологий для борьбы с сорными растениями и вредителями в сельском хозяйстве. Применение биоцидов с нарушением норм и правил привело к значительному накоплению их в почвах, Большинство из перечисленных биоцидов попали в список самых опасных

синтетических поллютантов [65, 66]. Персистентность большинства пестицидов и, как следствие, их биоаккумуляция и трансграничный перенос на большие расстояния способствуют вовлечению их в биосферный круговорот с переходом из одной среды в другую. При этом происходит непрерывный перенос этих веществ по пищевым цепям и их аккумуляция в .конечных звеньях, к которым относится и человек [67-69].

Пестициды, относящиеся к биоцидам, по степени своего воздействия разделяются на группы, составляющие 3 класса опасности [65]. Классификация биоцидов, как возможных загрязнителей почвы, приведена в таблице 1.

Таблица 1 - Классификация биоцидов, как возможных загрязнителей почвы

Классы опасности Соединения

I класс: Сильнотоксичные Гранозан > ГХПГ, гептахлор > тиодан >цирам, метафос, севин > линдан, фосфидцинка, > карбатион, ДНОК, тирам, ПХП >ПХК

II класс: Среднетоксичные Атразин, симазин, ПХФ, 2,4-Д, 2-9 КМ, метилмеркаптофос>гардона, карбин, трефлан, нитрафен, тиозон, цидиан > ИФК, ДЦВФ, карбофос, сойфос, хлорофос >хомецин, монурон, прометрин, фосфамид, фозалон > пирамин, тиллам, ТХА, трихлорметафос, фталофос

III класс: Слаботоксичные Хлор-ИФК, эфирсульфонат, арезин, менурон, метилнитрофос, семерон>антио, культан>кератан, поликарбацид, далапон, диурон, купроцин, каратэ, солан > дактал, ДМХ, дихлорэтан, тедион, фигон, цинеб > фталан, дентахлорнитробензол

По масштабам производства и использования, одной из ведущих групп гербицидов являются препараты триазинового ряда [70]. К ним относятся многочисленные агропрепараты, принадлежащие к гетероциклическим соединениям на основе шестичленного ароматического цикла с тремя атомами азота. Наиболее применяемыми из них в сельхозпроизводстве являются симметричные триазины с атомами азота в 1,3,5-положениях - сим-триазины.

Использование сим-тиразинов в качестве гербицидов началось с середины пятидесятых годов [71]. В результате многолетнего применения и высокой персистентности триазинов появилась опасность стойкого загрязнения почвы не только этими препаратами, но и продуктами их трансформации. Накапливаясь в почве, триазиновые гербициды негативно воздействуют как на растительные, так и на животные организмы [72-77].

Известно, что заражение почв ядохимикатами происходит не только при непосредственном производстве сельхозпродукции, но и в результате хранения или захоронения неликвидных пестицидов, в настоящее время запрещенных к применению [78]. Захоронения на полигонах и в бункерах, сооруженных зачастую с нарушениями предписанных норм, хранение на импровизированных складах, а иногда и вовсе вывоз на несанкционированные свалки приводят к тому, что токсичные вещества, входящие в состав этих препаратов, вследствие диффузии проникают в окружающую среду [79]. Именно поэтому очень остро стоит вопрос о выборе оптимальных стратегий утилизации указанных пестицидов, удаления продуктов их разложения из окружающей среды. К ним относятся инсектициды ДДТ и паратион-метил. Паратион-метил является действующим веществом выпускавшихся ранее агропрепаратов Метафос, Вофатокс, Метацид, Фолидол, Парашют и запрещенных в настоящее время к производству, применению, продаже и ввозу на территории РФ в связи с очень высокой токсичностью.

Продолжительность сохранения и разложения пестицидов в почве зависит как от их химических и физических свойств, дозы и формы применения препарата, так и от типа почвы, ее влажности, температуры и физических свойств, состава почвенной микрофлоры, видового состава произрастающих растений и особенностей обработки почвы [80]. Например, в г. Новоузенске Саратовской области через полгода после ликвидации склада обезличенных пестицидов 1 и 2 класса опасности (в апреле 2011 г.) на расстоянии 50 м от его бывшего месторасположения было обнаружено содержание ГХЦГ, которое соответствовало 832 ПДК, содержание ГХБ - 1648 ОДК. Кроме того, пробы почв были загрязнены полихлорироваными бифенилами, содержание которых

доходило до 11 ОДК. Образцы почвы, отобранные с этой территории, имели специфический запах. В рамках ремедиационных мероприятий было запланировано провести зачистку территории, снять и заменить верхний слой почвы [78].

Представители триазиновой группы пестицидов Атразин, Симазин, Прометрин относятся ко II классу токсичности, а Метафос - к I классу опасности (Таблица 1).

1.1.2. Характеристика модельных пестицидов

Прометрин (гезагард, зиразин, капарол, прометол К, селектин) Ci0Hi9N5S, 2-метилтио-4,6-бис-(изопропиламино)-симм-триазин, (1,3,5-тригидрокси-симм -триазин) представляет собой белое кристаллическое вещество с температурой плавления 118 - 120 °С. При температуре 20 °С он слабо растворим в воде - 48 мг/л; но хорошо - в органических растворителях: в ацетоне - 240 г/л, дихлорметане - 300 г/л, гексане - 5,5 г/л, метаноле - 160 г/л, толуоле - 170 г/л. Прометрин стабилен к гидролизу в нейтральной, слабокислой или слабощелочной средах при 20 °С. Он выпускается в виде 50%-го суспендированного препарата («Гезагард») и в виде 25%-ой концентрированной эмульсии. Препараты широко используются в растениеводстве на территории России и обладают широким спектром действия против однолетних двудольных и злаковых сорняков на посевах картофеля, капусты, злаковых и масличных культур [81].

Метафос (метилпаратион, вофатокс, метацид, фолидол) - является ядохимикатом, принадлежащим к органическим соединениям фосфора (производным тиофосфорной кислоты). Действующим веществом Метафоса является паратион-метил. Это белое кристаллическое вещество (температура плавления 35- 36 °С). Слабо растворяется в воде (при 25 °С в 1 л воды растворяется 55 мг препарата) и парафиновых углеводородах, хорошо растворяется в большинстве других органических растворителей. Ранее Метафос интенсивно применялся на территории РФ как контактный инсектицид и акарицид для обработки плодовых деревьев, виноградников, зерновых, овощных

и технических культур. Метафос относится к сильнодействующим ядовитым веществам I класса токсичности. Он обладает резко выраженной общей токсичностью, местного действия не оказывает. Под действием ультрафиолетовых лучей образует оксиизомер, токсичность которого в несколько раз выше основного вещества. При пероральном введении метафос быстро проникает в кровь. При отравлении метафосом уменьшается содержание гемоглобина, но увеличивается количество метгемоглобина в крови человека и животных [81].

В настоящее время метафос и другие пестициды на основе паратион-метила запрещены к производству, применению, продаже и даже ввозу на территорию РФ, так как в настоящее время. Все запасы пестицидов на основе паратион-метила находятся в виде захоронений, проникая в близлежащие почвы, именно поэтому процесс его деструкции стоит особенно остро.

1.2. Основные механизмы очищения почвы от пестицидов

Изучение процессов самовосстановления почвенной системы от естественных и искусственных загрязнителей легло в основу разработок принудительных способов (технологий) ремедиации почв со слабым потенциалом самоочищения или вследствие высоких уровней содержания в них антропогенных поллютантов. Методы, применяемые в искусственных технологиях ремедиации почв, основываются на принципах, соответствующих естественным процессам почвенного самоочищения.

1.2.1. Самоочищение почв

Самоочищение почвы от пестицидов происходит за счет процессов трансформации, деградации, стабилизации и миграции пестицидов. Эти процессы протекают под воздействием природных абиотических и биотических факторов.

К абиотическим факторам относятся:

а) фотохимическое разложение - трансформация пестицидов под воздействием солнечного излучения и кислорода (фотолиз, или фотодеградация) [63, 82, 83];

б) физико-химическая стабилизация - сорбция гумусом почвы и пористыми породами, которые присутствуют в составе природных почв (керамзит, вермикулит) [32, 35-37, 84-86];

в) вымывание из почв осадками в нижние горизонты почв [72, 87, 88].

К биологическим факторам относятся:

а) фиторемедиация - биоаккумуляция пестицидов растениями [39];

б) трансформация органического субстрата беспозвоночными [89];

в) микробиологическая ремедиация - деструкция пестицидов аборигенной микробиотой [39].

1.2.2. Основные направления принудительной ремедиации почв, загрязненных пестицидами

Современные технологии ремедиации почв классифицируются по принципу действия применяемых в технологии методов и по месту применения технологии.

В зависимости от типа загрязнения, его концентрации и возможностей реализации процесса различают два способа организации процесса очистки загрязненных участков в зависимости от места их применения: in situ и ex situ.

Способ in situ (in) предполагает обработку загрязненного участка непосредственно на месте загрязнения (отсутствует выемка загрязненной земли экскаватором).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Третьякова, Светлана Эдуардовна, 2013 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Ксенофонтова О.Ю. Взаимодействие пестицидов и микроорганизмов почвы: Автореф. дис. ... канд. биол. наук / Ксенофонтова О.Ю. - Саратов. - 2004. -28 с.

2. Плешакова Е.В. Приемы стимуляции аборигенной нефтеокисляющей микрофлоры / Е.В. Плешакова, Е.В. Дубровская, О.В. Турковская // Биотехнология. - 2005. - № 1. - С. 42-50.

3. Плешакова Е.В. Эколого-функциональный аспекты микробной ремедиации нефтезагрязненных почв: Автореф. дис. д-ра биол. наук / Плешакова Е.В. -Саратов. 2010.-42 с.

4. Биотехнологии для очистки окружающей среды / О.В. Турковская, Л.В. Панченко, Е.В. Дубровская [и др.] // Высокие технологии - путь к прогрессу: Сб. науч. тр. - Саратов: Научная книга, 2003. - С. 76-81.

5. Возможности современных приемов биоремедиации окружающей среды / О.В. Турковская, Е.В. Дубровская, А.Ю. Муратова [и др.] // Биотехнология - состояние и перспективы развития: Материалы 1-го Международного конгресса. - Москва, 2002. - С. 290.

6. Beneficial effect of plants in the remediation of soil and groundwater contaminated with organic materials / J.F. Shimp, J.C. Tracy, L.C. Davis [et al.] // Crit. Rev. Environ. Sci. Tech. - 1993. - Vol. 23, № 1. - P.41-77.

7. The application of active sludge in bioremediation processes / O. Turkovskaya, L. Panchenko E. Dubrovskaya [et al.] // Abst. Book of Seventh International FZK/TNO Conference on Contaminated Soil. - Germany. - Leipzig, 2000. -Vol. 2.- 1296 p.

8. Рева М.Л. Влияние промышленных полевых выбросов на почву / М.Л. Рева, Р.Я. Филатова//Экологические проблемы сельского хозяйства. -М., 1978. -С. 124-125.

9. Григорян К.В. Влияние загрязненных промышленными отходами оросительных вод на физические, физико-химические свойства и

биологическую активность почвы: Автореф. дис. ... канд. биол. наук / Григорян К.В. - М. - 1980. - 25 с.

10. Муравьев А.Г. Оценка экологического состояния природно-антропогенного комплекса: Учебно-методическое пособие / А.Г. Муравьев // СПб., 1999. -65 с.

11. Герасимова Л.Г. Изучение структуры и поверхностных свойств расщепленных частиц слюды / Л.Г. Герасимова, В.Н. Макаров, В.А. Найденов // Журнал прикладной химии. - 2003. - Т. 76. № 6. - С. 896-899.

12. Ивлев А. М. Деградация почв и их рекультивация / А. М. Ивлев, А. М. Дербенцева // Владивосток: Изд-во ДВГУ - 2003. - 86 с.

13. Колесников С.И. Экологическое состояние и функции почв в условиях химического загрязнения / С.И. Колесников, К.Ш. Казеев, В.Ф. Вальков // Ростов-на—Дону: Изд-во Ростиздат - 2006. — 385 с.

14. Решетов Г.Г. Нарушенные почвы Саратовской области / Г.Г. Решетов, B.C. Белов, В.В. Корсак // Саратов: Саратовский государственный социально-экономический университет, 2008. - 180 с.

15. Звягинцев Д.Г. Биологическая активность почв и шкалы для оценки некоторых ее показателей / Д.Г. Звягинцев // Почвоведение. - 1978. - № 6. -С. 48-54.

16. Практикум по почвоведению / И.С. Кауричев [и др.] // М.: Колос. - 1979. -272с.

17. Бабьева М.А. Биология почв / М.А. Бабьева, Н.К. Зенова // М.: Изд-во МГУ, 1989.-336с.

18. Вальков В.Ф. Системно-биологический подход при изучении почв / В.Ф. Вальков // Научная мысль Кавказа. - 1995. - № 4. - С. 6-10.

19. Вальков В.Ф. Экология почв: Учебное пособие для студентов вузов. Часть 3. Загрязнение почв / В.Ф. Вальков, К.Ш. Казеев, С.И. Колесников // Ростов-на-Дону: УПЛ РГУ. - 2004. - 54 с. '

20. Ананьева Ю.С. Содержание подвижных питательных веществ в черноземах и «дыхание» почвы в условиях высокого Алтайского Приобья /

Ю.С. Ананьева, E.B. Кононцева, С.А. Довбыш // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. - 2007. - №6 (32). - С. 5-8.

21. Беспамятнов Г.П. Предельно допустимые концентрации химических веществ в окружающей среде / Г.П. Беспамятов, Ю.А. Кротов // Справочник. -Л.: Химия, 1985. - 528 с.

22. Александров В.Н. Отравляющие вещества / В.Н. Александров, В.И. Емельянов //М.: Воениздат, 1990. -271 с.

23. Алексеев Ю.В. Тяжелые металлы в почвах и растениях / Ю.В. Алексеев // М.: Агропромиздат, 1987.-140 с.

24. Химическое загрязнение почв и их охрана / Д.С. Орлов [и др.] -М.: Агропромиздат, 1991. - 303 с.

25. Колесников С.И. Биоэкологические принципы мониторинга и нормирования загрязнения почв / С.И. Колесников, К.Ш. Казеев, В.Ф. Вальков // Ростов-на-Дону: Изд-во ЦВВР. - 2001. - 65 с.

26. Казеев К.Ш. Биологическая диагностика и индикация почв: методология и методы исследований / К.Ш. Казеев, С.И. Колесников, В.Ф. Вальков // Ростов н/Д: Изд-во РГУ. - 2003. - 216 с.

27. Латышевская Н.И. Гигиеническая оценка загрязненности почвы и грунта на бывшем объекте по производству химического оружия / Н.И. Латышевская, Б.Н. Филатов, A.B. Васильков // Бюллетень Волгоградского научного центра РАМН и Администрации Волгоградской области: научно-практический журнал - 2010. - №1 - С. 3-6.

28. Вельков В.В. Биоремедиация: принципы, проблемы, подходы / В.В. Вельков // Биотехнология. - 1995. - № 3-4. - С. 20 - 27.

29. Головлева Л.А. Микробиологическая деградация пестицидов / Л.А. Головлева, Е.Г. Головлев // Успехи микробиологии. - 1980. - Т. 15 - С. 137-179.

30. Прикладная экобиотехнология: Учеб. пособие: в 2 т. / А.Е. Кузнецов [и др.] // М.: БИНОМ. Лаборатория знаний. 2-е изд., - 2012. - 485 с.

31. Самоочищение сельскохозяйственных территорий от остаточного количества стойких пестицидов в зависимости от свойств почв / Р.В. Галиулин, Я.А. Пачепский, В.П. Сухопарова, [и др.] // Агрохимия. -1990. -№ 1. - С.97-114.

32. Чкаников Д.И. Поведение 2,4-Д и других хлорфеноксикислот в почве / Д.И Чкаников // Агрохимия. - 1983. - № 12. - С. 111-121.

33. Dieguez-Carbonell D. Adsorption of the herbicide "2,4-D" by montmorillonite / D. Dieguez-Carbonell, C. Rodriguez Pascual // Environ. Qual. Safety. - 1975. -Vol. 3.-237 p.

34. Hamaker J.W. Organic chemicals in the soil environment / J.W. Hamaker, J.M. Tomson / Ed. By C.A.J. Goring, J.W. Hamaker // New York: Marcel Dekker Inc., 1972.-Vol. 1.-49 p.

35. Kuwatsura C. Degradation of PCP on soil / C. Kuwatsura, M. Igarashi // Soil Sci. and Plant Nutrition. - 1975. - № 4. - P. 21.

36. Providenti M.A. Selected factors limiting the microbial degradation of recalcitrant compound // M.A. Providenti, H. Lee, J.T. Trevors / J. Ind. Microbiol. - 1993. - Vol. 12. - P. 379-395.

37. Virag D. Comparative study of accessibility of distinctive pesticides / D. Virag, A. Kiss // J. Environ. Sci. Health B. - 2009. - Vol. 44. - P. 69-75.

38. Land use effects on sorption of pesticides and their metabolites in sandynsoils. Atrazine and two metabolites, deethylatrazine and deisopropylatrazine, and prometryne / D.P. Oliver, R.S. Kookana, R. Salama [et al.] // Australian J. of Soil Research. - 2003. - Vol. 41. - № 5. - P. 861-874.

39. Анкудинова A.B. Изучение микроорганизмов-деструкторов полициклических ароматических углеводородов и их использование в технологии биоремедиации загрязненных почв: Дис.... канд. биол. наук / Анкудинова А.В. -Саратов, 2010.-148 с.

40. Ахметов Л.И. Роль горизонтального переноса плазмид биодеградации в микробной деструкции полициклических ароматических углеводородов: Дис. ... канд. биол. наук / Ахметов Л.И. -Пущино, 2006. - 163 с.

41. Колупаев A.B. Почвенные микроорганизмы-биодеструкторы органических пестицидов: Автореф. дис.... канд. биол. наук/Колупаев A.B. - М., 2010. -21 с.

42. Любунь, Е.В. Биологические подходы к очистке почв и водоемов, загрязненных продуктами деструкции иприта и люизита: Дис.... канд. биол. наук / Любунь Е.В. - Саратов, 2004 - 124 с.

43. Орлова О.Г. Взаимодействие микроорганизмов с продуктами гидролиза иприта: Дис ... канд. биол. наук / Орлова О.Г. - СПб., 2007. - 115 с.

44. Плешакова Е.В. Эффективность технологий микробной очистки почв от нефтяного загрязнения / Е.В. Плешакова, Е.В. Дубровская, О.В. Турковская // Энергосбережение в Саратовской области. - 2006. - № 2 (24). - С. 17-19.

45. Пунтус И.Ф. Микробная деградация нафталина и фенантрена в модельных почвенных системах: Автореф. дис. ... канд. биол. наук: / Пунтус И.Ф. -Пущино. 2000. - 17 с.

46. Афанасьев В.Н. Способ получения микробного препарата для утилизации пестицидов, способ утилизации пестицидов (варианты) и устройство для утилизации пестицидов / В.Н. Афанасьев, Н.В. Гамова, Н.Г. Гаранькина [и др.] // Патент Российской Федерации №2279325, кл С12М1/10, С12М1, В09С1/10. - 2002.

47. Иллялетдинов А.Н. Микробиология и биотехнология очистки промышленных сточных вод / А.Н. Иллялетдинов, P.M. Алимова // Алма-Ата: Галым - 1990. - 224 с.

48. Макаренко A.A. Биосенсоры для детекции сульфоароматических и фенольных соединений на основе бактерий родов Comamonas и Pseudomonas - деструкторов n-толуолсульфаната и фенола: Дис. ... канд. биол. наук / Макаренко A.A. - Саратов, 2007. - 144 с.

49. Тихомирова Е.И. Перспективные методы рекультивации земель, зараженных экотоксикантами различной природы / Е.И. Тихомирова, Г.К. Васильева, Е.А. Барышникова // Актуальные научно-технические

проблемы химической безопасности: матер. Всероссийской конференции. -Москва, 2011. - С. 53-54.

50. Олискевич В.В. Определение пестицид-деструктирующей способности бактерий с помощью 2,3,5-трифенилтетразолийхлорида - индикатора их дегидрогеназной активности / В.В. Олискевич, С.Э. Третьякова, Н.В. Веденеева [и др.] // Российский химический журнал. - 2013. - Т. 57, № 1-С. 105-108.

51. Алексеева Т.П. Перспективы использования торфа для очистки нефтезагрязненных почв / Т.П. Алексеева, Т.П. Бурмистрова, Н.Н. Терещенко // Биотехнология. - 2000. - № 1. - С. 58-64.

52. Могилевич Н.Ф. Иммобилизованные микроорганизмы и очистка воды / Н.Ф. Могилевич // Микробиол. Журнал. - 1995. - Т. 57, № 5. - С. 90-105.

53. Братцев А.П. Поглощение нефти и нефтепродуктов торфяными почвами. Влияние геологоразведочных работ на природную среду Болыдеземельской тундры/ А.П. Братцев // Тр. Коми науч. Центра УрО АН СССР. Сыктывкар. - 1988.-№90.-С. 29-35.

54. Levinson W.E. Hazardous waste cleanup and treatment with encapsulated or entrapped microorganism / W.E. Levinson, K.E. Stormo, H.L. Tao [et.al.] // Biological Degradation and Bioremediation of Toxic Chemicals / Ed by G.R. Chaudhry // London: Charman end Hall, 1994. - P. 455-469.

55. Obuekwe C.O., Al-Muttawa E.M. Self-immobilized bacterial cultures with potential for application as ready-to-use seeds for petroleum bioremediation // Biotechnology Letters. - 2001. - №23. - P.1025 - 1032

56. Лушников C.B. Очистка воды и почвы от нефти и нефтепродуктов с помощью культуры микробов-деструкторов / С.В Лушников, К.Н. Завгороднев, В.В. Бобер // Экология и промышленность России. -1999.-№ 2-С. 17-20.

57. Калюжин В.А. Использование аборигенных видов микроорганизмов при комплексных работах по очистке территорий от последствий разливов

нефти [Электронный ресурс] - Режим доступа:

http://sun.tsu.ru/mminfo/000063105/327/image/327-200.pdf. - Загл. с экрана.

58. Маркушева Т.В. Штамм бактерий Bacillus cereus ВКПМ В-7164, осуществляющий биологическую деградацию 2,4,5-трихлорфеноксиуксусной кислоты / Т.В. Маркушева, Е.Ю. Журенко, И.В. Кусова [и др.] // Патент РФ №2129605; 27.04.1999.

59. Гар К.А. Химические средства защиты сельскохозяйственных культур / К.А. Гар // М.: Россельхозиздат. - 1978. - 143 с.

60. Грин М.В. Пестициды и защита растений / М.В. Грин, Г.С. Хартли, Т.Ф. Вест (Пер. с англ. под ред. Голышина Н.М.) // М.: Колос. - 1979. -384 с.

61. Мельников H.H. Пестициды. Химия, технология и применение / H.H. Мельников // М.: Химия, 1987. - С. 15-16.

62. Справочник по пестицидам / H.H. Мельников [и др.] // М.: Химия, 1985. -352 с.

63. Голышин Н.М. Фунгициды в сельском хозяйстве / Н.М. Голышин // М.: Колос.- 1982.-270 с.

64. Каган Ю.С. Общая токсикология пестицидов / Ю.С. Каган // Киев. - 1981. -173 с.

65. Ананьева Н.Д. Микробиологические аспекты самоочищения и устойчивости почв / Н.Д. Ананьева // М.: Наука, 2003. - 223 с.

66. Инженерная геодезия. Землеустройство: Учебное пособие / B.C. Ермаков [и др.] // СПб.: Изд-во СПбГТУ - 2001. - 104 с.

67. Федоров JI.A. Пестициды - токсический удар по биосфере и человеку / JI.A. Федоров, A.B. Яблоков // М.: Наука, 1999. - 462 с.

68. Biziuk М. Pestycydy, wystepowanie, oznaczanie I unieszkodliwianie / M. Biziuk // Warszawa: Naukowo-Techiczne, 2001. - 275 p.

69. Wyszkowska J. Microbiological properties of soil contaminated with the herbicide Treflan 480 EC / J. Wyszkowska // Polish J. Natur. Sei. - 2002. -Vol. 10, № 1. - P. 71-77.

70. Игнатовец О.С. Деградация сим-триазиновых гербицидов бактериями рода Pseudomonas / О.С. Игнатовец, Т.И. Ахрамович, В.Н. Леонтьев, [и др.] // Микробиология. Труды БГ. - 2008 - Т 3. - С. 61-64.

71. Горбатенко Н. О. Пестициды: структура и процессы деградации / Н.О. Горбатенко/ Н. О. // Успехи биологической химии. - 2006. - Т.4. -С.323-348.

72. Горбатова О. Н. Триазиновые пестициды: структура, действие на живые организмы, процессы деградации / О.Н. Горбатова, А.В.Жердев, О.В.Королева // Успехи биологической химии. - 2006. - Т.46. № 2. -С. 323-348.

73. Bester К. Effects of pesticides on seagrass beds / K. Bester // Helgol. Mar. Res. -2000.-Vol. 54.-P. 95-98.

74. Dewey S.L. Effects of the herbicide atrazine on aquatic insect community structure and emergence / S.L. Dewey // Ecology. - 1986. - Vol. 67. -P. 1148-1162.

75. Graymore M. Impacts of atrazine in aquatic ecosystems / M. Graymore, F. Stagnitti, G. Allinson // Environ. Intern. - 2001. - Vol. 26. - P. 483-495.

76. Hall L.W. Chronic toxicity to atrazine to sago pondweed at a range of salinities: Implications for criteria development and ecological risk / L.W. Hall, R.D. Anderson, M.S. Ailstock // Arch. Envirion. Contam. Toxicol. - 1997. - Vol. 33. -P. 261-267.

77. Lakshminarayana J.S.S. Impact of atrazine-bearing agricultural tile drainage discharge on planktonic drift of a natural stream / J.S.S. Lakshminarayana, H.J. O'Neil, S.D. Jonnavithula [et al.] // Environ. Pollut. - 1992. - Vol. 76. -P. 201-210.

78. Государственный доклад «О состоянии и об охране окружающей среды российской федерации в 2011 году» [Электронный ресурс] - Режим доступа http://www.mnr.gov.ru/upload/iblock/a76/posdoklad2011 .pdf. — Загл. с экрана.

79. Бабкина Э.И., Сурин В.А., Самсонов Д.П., Цитцер О.Ю. и др. Полигоны захоронения пестицидов как источник загрязнения окружающей среды //

Природные ресурсы. Использование и охрана природных ресурсов в России. - 2003,-Бюл. № 11-12.-С. 115-122.

80. Пилипенко А.Ф. Современные методы защиты растений / А.Ф. Пилипенко // Днепропетровск: ДГУ, 1987. - С. 6-8.

81. Мельников H.H. Пестициды и регуляторы роста растений: справочник / H. Н. Мельников, К. В. Новожилов, С. Р. Белан // М.: Химия, 1995. — 575 с.

82. Мельникова Н.П. Фотохимическая устойчивость ряда арил- и гетарил-содержащих пестицидов: Автореф. дис. ... канд. хим. наук / Мельникова Н.П-М., 1992.-21с.

83. Zongmao С. Degradation of Pesticides on Plant Surfaces and its Prediction -A Case Study on Tea Plant / C. Zongmao, W. Haibin // Environ. Monit. Assessment. - 1997.-Vol. 44.-P. 303-313.

84. Анисимова M.A. Детоксицирующая способность почв и выделенных из них гуминовых кислот по отношению к гербицидам: Автореф. дис. канд. биол. наук / Анисимова M.A. - М., 1997. - 24 с.

85. Куликова H.A. Связывающая способность и детоксицирующие свойства гумусовых кислот по отношению к атразину: Автореф. дис. ... канд. биол. наук / Куликова H.A. - М., 1999. - 29 с.

86. Почвенный покров Саратовской области и его агроэко логическая характеристика / Н.Е. Синицына [и др.] // Саратов: ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ», 2009. - 124 с.

87. Семенова H. Н. Теоретические аспекты имитационного моделирования поведения пестицидов в агроценозе для оптимизации экотоксикологических параметров в защите растений: Дис. ... д-ра биол. наук/ Семенова H.H. -СПб. 2007.-407 с.

88. Сметник A.A. Прогнозирование миграции пестицидов в почвах: Дис. ... д-ра биол. наук: / Сметник A.A. - М. 1999. - 389 с.

89. Терещенко H.H. Эколого-биологические факторы и механизмы ремедиации антропогенно-нарушенных почв: Автореф. дис. ... д-ра биол. наук: / Терещенко Наталья Николаевна. - Томск. 2007. - 42 с.

90. Королев В.А. Очистка грунтов от загрязнений / В. А. Королев // М. Агро. -2001.-365 с.

91. Байдин H.JI. К использованию цеолитов в качестве поглотителей тяжелых металлов в техногенно загрязненной почве // Сиб. биол. ж. 1991. № б. -С. 32-38.

92. Марфенина О.Е. Микробиологические аспекты охраны почв / О.Е. Марфенина // М.: Изд-во МГУ, 1991. - 118 с.

93. Sarkar D. Bioremediation of petroleum hydrocarbons in contaminated soil: comparison of biosolids addition, carbon supplementation, and monitored natural attenuation / D. Sarkar, M. Ferguson, R. Datta [et al.] // Environ. Pollut. - 2005. -Vol. 136, № 1. - P. 187-195.

94. Гусев M.B. Микробиология / M.B. Гусев, JI.A. Минеева // M.: МГУ. - 1985. -376 с.

95. Руссель С. Микроорганизмы и жизнь почвы. / С. Руссель - М.: Колос, 1977. - 223 с.

96. Sveinung S. Biodégradation of oily sludge in Norwegian soils / S. Sveinung, L. Aaslaug, P.T. Arve // Appl. Microbiol. Biotechnol. - 1986. - Vol. 23. -№3-4.-P. 297-301.

97. Киреева H.A. Комплексная биоремедиация нефтезагрязненных почв для снижения токсичности / Н.А. Киреева, Е.М. Тарасенко, Т.С. Онегова, [и др.] // Биотехнология. - 2004. - № 6. - С. 63-71.

98. Atlas R.M. Stimulated petroleum biodégradation / R.M. Atlas // Crit. Rev. Microbiol. - 1977. - Vol. 5, № 4. - P. 371-386.

99. Getzin L.W. Degradation of chlorpyrifos in soil: influence of autoclaving, soil moisture, and temperature / L.W. Getzin // J. Econ. Entomol. - 1981. - Vol. 74. -P.158-162.

j

100. van Elsas J.D. Modern soil microbiology. 2 edn. / Ed. by J.D. van Elsas, J.K. Jansson, J.T. Trevors. // Wellington: CRC Press, 2007. - 646 p.

101. Glik B.R. Phytoremediation: synergistic use of plants and bacteria to clean up the environment / B.R. Glik // Biotechnol. Adv. - 2003. - Vol. 21. - P. 383-393.

102. Игнатов B.B. Молекулярные основы взаимоотношения ассоциативных микроорганизмов с растениями / Под ред. В.В. Игнатова // М.: Наука, 2005. - 262 с.

103. Игнатова A.A. Динамика численности и взаимодействия псевдомонад, стимулирующих рост растений и разрушающих нафталин в ризосфере горчицы белой / A.A. Игнатова, A.A. Ветрова, A.B. Лисов, [и др.] // Биотехнология. - 2006. - № 6. - С. 35-43.

104. Микробиологическая рекультивация нефтезагрязненных почв / H.A. Киреева [и др.] // М.: ВНИИОЭНГ. -2001.-40 с.

105. Молотков И.В. Фиторемедиация / И.В. Молотков, В.А. Касьяненко // НефтьГазПромышленность. - 2005. - № 1. - С. 18-24.

106. Вельков В.В. Стандартизация формата описаний промышленных технологий биоремедиации / В.В. Вельков // Биотехнология. - 2001. - № 2. -С.70 - 76.

107. Калюжин В.А. Утилизация техногенных органических соединений аборигенной микрофлорой / В.А. Калюжин // Вестник Томского государственного университета. - 2009. - № 328 - С. 200-201.

108. Градова Н.Б. Использование бактерий рода Azotobacter при биоремедиации нефтезагрязненных почв / Н.Б. Горнова, И.Б Горнова, Р. Эддауди, [и др.] // Прикладная биохимия и микробиология. - 2003. - Т.39, № 3. - С. 318-321.

109. Пунтус И.Ф. Выделение и характеристика микроорганизмов-деструкторов полициклических ароматических углеводородов / И.Ф. Пунтус, А.Е. Филонов, A.B. Карпов [и др.] // Микробиология. - 1997. - № 2, Т. 66. -С. 222-225.

110. Саловарова В.П. Окружающая среда и биотехнология / В.П. Саловарова, Т.М. Трифонова // Иркутск, 1996. - С. 48-56.

111. Balba М.Т. Bioremediation of oil contaminated soil: microbiological methods for feasibility assessment and field evaluation / M.T. Balba, N. Al-Awadhi, R. Al-Daher // J. Microbiol. Methods. - 1998. - Vol. 32. - P. 155-164.

112. Balba M.T. Bioremediation of oil contaminated soil: the Kuwaiti experience / M.T. Balba, R. Al-Daher, N. Al-Awadhi // Environ. Int. - 1998. - Vol. 24, № 1-2.-P. 163- 173.

113. De Schrijver A. Degradation of pesticides by actinomycetes / A. De Schrijver, R. De Mot // Crit. Rev. Microbiol. - 1999. - Vol. 25 (2). - P. 85-119.

114. Goi A. Combined chemical and biological treatment of oil contaminated soil / A. Goi, N. Kulik, M. Trapido // Chemosphere. - 2006. - Vol. 63, № 10. - P. 1754-1763.

115. El Fantroussi S. Is bioaugmentation a feasible strategy for pollutant removal and site remediation? / S. El Fantroussi, S. Agathos // Curr. Opin. Microbiol. - 2005. - Vol. 8, № 3. - P. 268-275.

116. Jorgensen K.S. Bioremediation of petroleum hydrocarbon - contaminated soil by composting in biopiles / K.S. Jorgensen, J. Puustinen, A.M. Suortti // Environ. Pollut. - 2000. - Vol. 107. - P. 245-254.

117. Leahy M.C. Bioremediation: Modelling and mapping are critical, while air sparging and soil vapor extraction have become strong allies / M.C. Leahy, R.A. Brown // Chem. Eng. - 1994. - № 5. - P. 108-116.

118. Козлова А.А. Учебная практика по физике почв. Учеб-метод, пособие / А.А. Козлова // Иркутск: Изд-во ИГУ - 2009. - 81 с.

119. Пупонин А.И. Земледелие. Учебник для вузов / Под ред. А.И. Пупонин // М.: Колос, 2000 - 550 с.

120. Большая советская энциклопедия. Т. 30. / под ред. A.M. Прохоров. -М.: Сов. энцикл, 1969-1978.

121. Boopathy R. Anaerobic biodégradation of no.2 diesel fuel in soil: a soil column study / R. Boopathy // Biores. Technol. - 2004. -Vol. 94, № 2. - P. 143-151.

122. Van Hamme J.D. Recent advances in petroleum microbiology / J.D. Van Hamme, A. Singh, O.P. Ward // Microbiol. Mol. Biol. Rev. - 2003. Vol. 67, № 4. -P. 503-549.

123. Alexander M. Biodégradation and bioremediation / M. Alexander // New York: Academic Press, 1999. - 453 p.

124. Molina-Barahona L. Diesel removal from contaminated soils by biostimula-tionand supplementation with crop residues / L. Molina-Barahona, R. Rodriguez-Vazquez, M. HernandezVelasco [et al.] // Appl. Soil Ecol. - 2004. - Vol. 27. -№2.-P. 165-175.

125. Roy R. Hexadecane mineralization and denitrification in two diesel fuel-contaminated soils / R. Roy, C.W. Greer // FEMS Microbiol. Ecol. - 2000. -Vol. 32.-P. 17-23.

126. Van Gestel K. Bioremediation of diesel oil-contaminated soil by composting with biowaste / K. Van Gestel, J. Mergaert, J. Swings [et al.] // Environ. Pollut. -2003. - Vol. 125. - P. 361-368.

127. Namkoong W. Bioremediation of diesel-contaminated soil with composting / W. Namkoong, E. Hwang, J.S. Park [et al.] // Environ. Pollut. - 2002. - Vol. 119. -P. 23-31.

128. Ma Y. Microbial activity during composting oh anthracene-contaminated soil / Y. Ma, J.Y. Zhang, M.H. Wong // Chemosphere. - 2003. - Vol. 52. -P. 1505-1513.

129. Freijer J. Assessing mineralization rates of petroleum hydrocarbons in soils in relation to environmental factors and experimental scale / J. Freijer, H. de Jonge, W. Bouten [et al.] // Biodégradation. - 1996. - Vol. 7. - P. 487-500.

130. Chaineau C.H. Effect of nutrient concentration on the biodégradation of crude oil and associated microbial population in the soil / C.H. Chaineau, G. Rougeux, C. Yepremian [et al.] // Soil Biol. Biochem. - 2005. - Vol. 37, № 8. -P. 1490-1497.

131. Delelle D. Biostimulation of natural microbial assemblages in oil-amended vegetated and desert sub-Antarctic soils / D. Delelle, F. Coulon, E. Pelletier // Microb. Ecol. - 2004. - Vol. 47, № 4. - P. 407-415.

132. Pelletier E. Crude oil bioremediation in sub-Antarctic intertidal sediments: chemistry and toxicity of oiled residues / E. Pelletier, D. Delille, B. Delille // Mar. Environ. Res. - 2004. - Vol. 57, № 4. - P. 311-327.

133. Бидей С.П., Иммобилизованные клетки и ферменты. Методы / С.П. Бидей, П.И. Броделиус,М.А Кабрал, М.П Кафлэн // М.: Изд-во Мир, 1988. - 215с.

134. Звягинцев Д.Г. Взаимодействие микроорганизмов с твердыми поверхностями / Д.Г.Звягинцев // М.: Изд-во МГУ - 1973. - 176 с.

135. Кощеенко К.А. Иммобилизованные клетки в биотехнологии. Сб. науч. тр. / Под ред. К.А. Кощеенко - Пущино: ЦНБИ - 1987. - 172 с.

136. Константинова М.С. Иммобилизованные микроорганизмы и их применение. Курсовая работа [Электронный ресурс] - Режим доступа: http://knowledge.allbest.ru/biology/d-3c0a65625a2bc78a4d53a89521316d37.html - Загл. С экрана.

137. Кощеенко К.А. Трансформация стероидных соединений живыми иммобилизованными клетками микроорганизмов: Дис. ... д-ра биол. наук / Кощеенко К.А. - Пущино, 1984. - 495 с.

138. Иммобилизованные клетки микроорганизмов / А.П. Синицын [и др] // М.: Изд-во МГУ, 1994. - 288 с.

139. Инструкция по применению биодеструктора нефтяных загрязнений Микрозим(йп) «ПЕТРО ТРИТ» [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.micro2rvm.ru/oilspills.htm. — Загл. с экрана.

140. Каширин С.И. Деворойл [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://devoroil—1 .ru. - Загл. с экрана.

141. Инструкция по применению биодеструктора «MSI BIO» для очистки почв, акваторий и прибрежной полосы от загрязнения нефтью и нефтепродуктами [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.partner-msi.ru/info.html. — Загл. с экрана.

142. Препараты серии «Биодеструктор» [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.nauka.kz/biol med/razd4/preparati serii Biodestryktor.php. — Загл. с экрана. Логинов О.Н. Консорциум микроорганизмов Bacillus brevis и Arthrobacter species, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов / О.Н. Логинов, H.H. Силищев, Р.Н. Чураев [и др.] // Патент РФ № 2232806, 2004.

143. Технологии восстановления почв, загрязненных нефтью и нефтепродуктами / S. Miertus, Н.Ю. Гречищева, C.B. Мещеряков [и др.] // Справочник. -М.: Изд-во РЭФИА и НИА Природа, 2001. - 191 с.

144. ВРД 39-1.13-056-2002 «Технология очистки различных сред и поверхностей, загрязненных углеводородами» - М: ОАО «Газпром», 2001.

145. Биопрепарат Фенокс [Электронный ресурс] - Режим доступа http://www.eco wiki.ru/index.php?titl e=%D0%9F%D 1 %80%D0%BE%D0%B5%D0%B A%D 1 %82 %C2%AB%D0%96%D0%98%D0%92%D0%90%D0%AF %D0%97%D0%95%D0%9 C%D0%9B%DQ%AF %D0%92 %D0%9F%D0%90%D0%A0%D0%9A%DQ%95 %D0%93 %D0%9E%D0%A0%D0%AC%D0%9A%D0%9E%D0%93%D0%9E%C2%BB - Загл. с экрана.

146. Laine M.M. Fate and toxicity of chlorophe-nols, polychlorinated dibenzo-p-dioxins and dibenzofurans during composting of contaminated sawmill soil / M.M. Laine, J. Ahtiainen, N. Wagman [et al.] // Environ. Sci. Technol. - 1997. -Vol. 31.-P. 3244-3250.

147. Laine M.M. Microbial functional activity during composting of chlorophenols-contaminated sawmill soil / M.M. Laine, H.H. Haario, K.S. Jorgensen // J. Microbiol. Meth. - 1997. - Vol. 30. - P. 21-32.

148. Neralla S. Inoculants and biodégradation of crude oil floating on march sediments / S. Neralla, R.W. Weaver // Bioremediation J. - 1997. -№ 1. - P. 89-96.

149. Vasudevan N. Bioremediation of oil sludge contaminated soil / N. Vasudevan, P. Rajaram // Environ. Int. - 2001. - Vol. 26. - P. 409-411.

150. Bento F. Comparative bioremediation of soils contaminated with diesel oil by natural attenuation, biostimulation and bioaugmentation / F. Bento, F. Camargo, В. Okeke [et al.] // Biores. Technol. - 2005. - Vol. 96, № 9. - P. 1049-1055.

151. Экология микроорганизмов: Учеб. для студ. ВУЗов / А.И. Нетрусов [и др.] / Под ред. Нетрусова А.И. - М.: Издательский цент «Академия», 2004. -272 с.

152. Егорова Т.А. Основы биотехнологии: Учеб. пособие для высш. пед. учеб. заведений / Т.А. Егорова, С.М. Клунова, Е.А. Живухин //М.: Издательский центр «Академия» - 2003. - 208 с

153. Кузьмина H.A. Основы биотехнологии: Учебное пособие для студентов биологического факультета. - Омск: ОГПУ, 1995-2013. - [Электронный ресурс] - Режим доступа: http://www.biotechnolog.ru/prombt/prombtl 11 .htm — Загл. с экрана.

154. Егоров Н.С. Биотехнология. Проблемы и перспективы / Н.С. Егоров,

B.Д. Самуилов, A.B. Олескин // М.: Издательство: Высшая школа - 1987. -159 с.

155. Самонин В.В. Изучение закономерностей адсорбции бактериальных клеток на пористых носителях / В.В Самонин, Е.Е. Еликова // Микробиология. -2004. - Т. 73, № 6. - С. 1-7.

156. Алдобаев В.Н. Очистка почвы от загрязнения полициклическими ароматическими углеводородами на основе применения хемотаксически активных микроорганизмов ризосферы растений: Дис. ... канд. биол. наук / Алдобаев В.Н. - Серпухов, 2004. - 157 с.

157. Волова Т.Г. Биотехнология / Т.Г. Воло'ва // Новосибирск: Изд-во Сибирского отделения Российской Академии наук. — 1999. - 252 с.

158. Герхардт Ф. Методы общей бактериологии / Ф. Герхард // М.: Мир. - Т.1 -1983.-536 с.

159. Коростелева Н.И. Биотехнология: учебное пособие / Н.И. Коростелова, Т.В. Громова, И.Г. Жукова // Барнаул: Изд-во АГАУ. - 2006. - 127 с.

160. Работнова И.Л. Теория и практика непрерывного культивирования микроорганизмов / Под ред. И.Л. Работнова // М.: Наука, 1980. - 221 с.

161. Режимы раздельного и совместного культивирования микроорганизмов-деструкторов нефти родов Pseudomonas и Rhodococcus / А.Е. Филонов, К.В. Петриков, Т.В. Якшина [и др.] // Биотехнология. - 2008. - №6. -

C. 80-85.

162. Петриков, К.В. Биологические поверхностно-активные вещества, продуцируемые микроорганизиами-нефтедеструкторами родов Pseudomonas и Rhodococcus: Автореф. дис. ... канд. хим. наук: / Петриков К.В. -М., 2011.-с22.

163. Практикум по микробиологии: Учеб. пособие для студ. высш. учеб. заведений / А.И. Нетрусов [и др.] - М.: Издательский центр «Академия», -2005. - 608 с.

164. Лефковитс И. Иммунологические методы исследований / И. Лефковитс, Б. Пернис // М.: Мир. - 1988. - 530 с.

165. Нго Т.Т. Иммуноферментный анализ / Т.Т. Нго, Г. Ленхофф // М.: Мир, 1998.-446 с.

166. Применение ммуноферментного анализа для выявления азотфиксирующих бактерий рода Azospirillum в почвенных суспензиях / А.И. Красов, И.А. Попова, Ю.А. Филипьечева [и др.] // Микробиология. - 2009. - Т. 9, №5.-С. 662-666.

167. Biomarkers for monitoring efficacy of bioremediation by microbial inoculants / J. K. Jansson, K. Bjorklof, A.M. Elvang [et al.] // Environ. Pollut. - 2000. -Vol. 107, №2.-P. 217-223.

168. Викторов Д.А. Усовершенствование методов выделения, идентификации и индикации бактерий P. putida: Автореф. дис. ... канд. биол. наук / Викторов Д.А. - Саратов, 2011. - 22 с.

169. Dick R.P. Soil enzyme activities as integrative indicators of soil health / R.P. Dick // Biological indicators of soil health / Eds. C.E. Punkhurst, B.M. Doube, V.V.S.R. Gupta // Wallingford: CABI Publ., 1997. - P. 121-156.

170. Гранатская Т.А. Способ выявления микроорганизмов - деструкторов ксенобиотиков / Т.А. Гранатская [и др.] // Патент Российской Федерации № 2051961, кл C12N1/20. - 1996.

171. ФР.1.39.2006.02264. Методика выполнения измерений всхожести семян и длины корней проростков высших растений для определения токсичности техногенно загрязненных почв.

172. Приказ МПР России от 15.06.2001 № 511 «Об утверждении Критериев отнесения опасных отходов к классу опасности для окружающей природной среды».

173. ПНД Ф Т 16.1:2.3:3.10-06. Методика определения токсичности отходов, почв, осадков сточных, поверхностных и грунтовых вод методом биотестирования с использованием равноресничных инфузорий Paramecium caudatum Ehrenberg.

174. ПНД Ф Т 16.1:2.3:3.7-04 Методика определения токсичности проб поверхностных пресных, грунтовых, питьевых, сточных вод, водных вытяжек из почв, осадков сточных вод и отходов по изменению оптической плотности культуры водоросли хлорелла (Chlorella vulgaris Beijer).

175. ПНД Ф Т 16.1:2.3:3.8-04 Методика определения токсичности воды и водных вытяжек из почв, осадков сточных вод и отходов по изменению интенсивности бактериальной биолюминесценции тест-системой "Эколюм" на приборе "Биотокс-10".

176. ПНД Ф Т 16.1:2:3:3.9-06 Методика определения токсичности водных вытяжек из почв, осадков сточных вод и отходов, питьевой, сточной и природной воды по смертности тест-объекта Daphnia magna Straus.

177. ПНД Ф Т 16.1:3.11-06. Методика определения токсичности высокоминерализованных поверхностных и сточных вод, почв и отходов по выживаемости солоноватоводных рачков Artemia salina L.

178. ПНД Ф Т 16.2:2.2-98. Методика определения токсичности почвы и донных осадков по хемотаксической реакции инфузорий.

179. ПНД Ф Т 16.3.12-07. Методика определения токсичности золошлаковых отходов методом биотестирования на основе выживаемости парамеций и цериодафний.

180. ПНД Ф 16.1:2:2.3:3.13-09. Методика выполнения измерений индекса токсичности почв, почвогрунтов вод и отходов по изменению подвижности половых клеток млекопитающих in vitro.

181. ФР.1.39.2007.03221. Методика определения токсичности воды и водных вытяжек из почв, осадков сточных вод, отходов по смертности и изменению плодовитости цериодафний.

182. ФР.1.39.2007.03223. Методика определения токсичности вод, водных вытяжек из почв, осадков сточных вод и отходов по изменению уровня флуоресценции хлорофилла и численности клеток водорослей.

183. Маниатис Т. Молекулярное клонирование / Т. Маниатис, Э. Фрич, Дж. Самбрук // М.: Мир, 1984. - 477 с.

184. Методы контроля, биологические и микробиологические факторы / В методических рекомендациях «Методы микробиологического контроля почвы» - М., 2004. - № ФЦ/4022.3

185. ГОСТ 17.4.4.02-84 Почвы. Методы отбора и подготовки проб для химического, бактериологического, гельминтологического анализа.

186. ГОСТ 28168-89 Почвы. Отбор проб.

187. ГОСТ 17.4.3.01-83 Охрана природы. Почвы. Общие требования к отбору проб.

188. Егоров Н.С. Руководство к практическим занятиям по микробиологии / Н.С. Егоров //М.: МГУ - 1983.-215 с.

189. Петерсон A.M. Практические рекомендации для идентификации сапрофитных и условно-патогенных бактерий по фенотипическим признакам: для студ. биол. фак-та / A.M. Петерсон., П.А. Чиров // Саратов: Изд-во ун-та, 2005. - 20 с.

190. Определитель бактерий Берджи / Под ред. Дж. Хоулта [и др.] - М.: Мир, 1997.-Т. 2.-1232 с. (1)

191. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology: The Firmicutes / P. De Vos,

G. Garrity, D. Jones [et al.] // New York: Springer, 2009. - Vol. 3. - 1450 p.

192. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology: The Proteobacteria / G. M. Garrity, D.J. Brenner, N.R. Krieg [et al.] // New York: Springer, 2005. - Vol. 2. - 1388 p.

193. Красильников H.A. Определитель бактерий и актиномицетов /

H.A. Красильников // М.: Л.: АН СССР - 1949. - 829 с.

194. РД 52.18.188-2001 Определение массовой доли триазиновых гербицидов симазина и прометрина в пробах почвы.

195. РД 52.18.310 - 2001 МУ Определение массовой доли фосфооранических пестицидов паратион-метила, фозалома, диметоата в пробах почвы. Методика выполнения измерений методом газожидкостной хроматографии.

196. РД 52.24.410-95 Методические указания. Методика выполнения измерений массовой концентрации пропазина, атразина, симазина, прометрина в поверхностных водах суши газохроматографическим методом.

197. РД 52.24.411-2009 Массовая концентрация паратион-метила, карбофоса, диметоата, фозалона в водах. Методика выполнения измерений газохроматографическим методом.

198. Никитенко Г.Ф. и др. Опытное дело в полеводстве. - М.: Россельхозиздат, 1982. - 190 с. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.ussr-forever.ru/op/34-45.html?showal 1=1 - Загл. с экрана

199. Влагоемкость почвы и методы ее определения [Электронный ресурс]. — Режим доступа: http://www.pravya.ru/vlagoemkost-pochvyi-i-metodyi-ee-opredeleniya-2.html — Загл. с экрана.

200. Чиров П.А. Изучение влияния пестицидов на микроорганизмы почвы: Метод, реком. для студ. биол. фак-та / П.А. Чиров, О.Ю. Ксенофонтова // Саратов: СГУ, 2002. - 16 с.

201. Иванова Е.В. Оценка действия сим-триазинового гербицида прометрина на микроорганизмы, обеспечивающие плодородие почвы / Проблемы современной биологии: Материалы IV Международной научно-практической конференции / Е.В. Иванова, О.Ю. Ксенофонтова / М.: «Спутник+» - 2012. - С. 31-34.

202. Мишустин E.H. Ассоциации почвенных микроорганизмов. / E.H. Мишустин — М.: Наука, 1975. — 106 с.