СОВРЕМЕННЫЕ ПОДХОДЫ К ПОВЫШЕНИЮ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОГРАММ ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ РЕПРОДУКТИВНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ У ПАЦИЕНТОК С ДИСМОРФИЗМАМИ ООЦИТОВ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.01, кандидат наук Сыркашева Анастасия Григорьевна

• Сыркашева Анастасия Григорьевна
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Сыркашева Анастасия Григорьевна

ВВЕДЕНИЕ.................................................................................5

ГЛАВА 1 Современные методы лечения бесплодия у супружеских пар с дисморфизмами ооцитов у женщин (обзор литературы)....................13

1.1 Влияние качества ооцитов на эффективность ВРТ............................13

1.2 Генез и факторы риска анеуплоидии ооцитов....................................17

1.3 Современные возможности преимплантационного генетического скрининга...............................................................................22

1.4 Митохондриальная ДНК ооцитов и фертильность женщины.................27

1.5 Влияние различных видов дисморфизмов ооцитов на эффективность программ ВРТ..........................................................................32

ГЛАВА 2 Материалы и методы исследования...................................41

2.1 Дизайн исследования для задачи 1.................................................41

2.2. Дизайн исследования для задачи 2................................................42

2.3 Дизайн исследования для задачи 3................................................44

2.4 Дизайн исследования для задачи 4................................................45

2.5 Дизайн исследования для задачи 5................................................46

2.6 Дизайн исследования для задачи 6................................................47

2.7 Критерии включения и исключения...............................................48

2.8 Расчет объема выборки...............................................................49

2.9 Методы исследования................................................................51

2.9.1 Общеклинические методы исследования.......................................54

2.9.2. Ультразвуковое исследование органов малого таза........................55

2.9.3 Гормональное исследование......................................................56

2.9.4 Исследование эякулята............................................................56

2.9.5 Стимуляция функции яичников и трансвагинальная пункция

фолликулов.................................................................................58

2.9.6 Морфологическая оценка ооцитов и оплодотворение.......................60

2.9.7 Исследование числа копий мтДНК в неоплодотворившихся ооцитах...62

2.9.8 Морфологическая оценка эмбрионов...........................................63

2.9.9. Преимплантационный генетический скрининг..............................63

2.9.10 Перенос эмбрионов в полость матки и ведение посттрансферного

периода.......................................................................................65

2.10 Статистическая обработка данных...............................................66

ГЛАВА 3. Исходы программ вспомогательных репродуктивных

технологий у пациенток с различными дисморфизмами ооцитов.........68

3.1. Клинико-анамнестическая характеристика пар, включенных в исследование................................................................................68

3.2 Клинико-лабораторное обследование супружеских пар, включенных в исследование...............................................................................75

3.3 Особенности протоколов стимуляции суперовуляции у пациенток в изученных группах........................................................................77

3.4 Многофакторный анализ шансов развития дисморфизмов ооцитов в зависимости от изученных предикторов..............................................78

3.5 Характеристика оогенеза, раннего эмбриогенеза и исходов программ ВРТ

у пациенток в группах сравнения......................................................82

ГЛАВА 4. Изучение генеза влияния дисморфизмов на исходы программ

вспомогательных репродуктивных технологий................................92

4.1. Изучение числа копий митохондриальной ДНК в ооцитах человека с различными дисморфизмами...........................................................92

4.2 Клинико-анамнестические характеристики супружеских пар, включенных в исследование.............................................................................95

4.3 Клинико-лабораторное обследование супружеских пар, включенных в

исследование..............................................................................101

4.4. Особенности протоколов стимуляции суперовуляции у пациенток в изучаемых группах.......................................................................103

4.5 Характеристика оогенеза, раннего эмбриогенеза и исходов программ ВРТ

у пациенток в группах сравнения....................................................104

4.6 Преимплантационный генетический скрининг у супружеских пар с дисморфизмами ооцитов у пациенток: анализ затраты-эффективность......111

4.7 Клинико-экономический анализ эффективность ПГС для пар с дисморфизмами ооцитов у пациенток................................................115

ГЛАВА 5. Обсуждение полученных результатов..............................120

ВЫВОДЫ..................................................................................140

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ...............................................142

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ .И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ...............144

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ...............................................................147

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «СОВРЕМЕННЫЕ ПОДХОДЫ К ПОВЫШЕНИЮ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОГРАММ ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ РЕПРОДУКТИВНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ У ПАЦИЕНТОК С ДИСМОРФИЗМАМИ ООЦИТОВ»

ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы исследования

Качество половых клеток в циклах вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) является ключевым фактором успеха. Именно от зрелости ооцита и сперматозоида, как структурной, так и морфологической, зависит наступление беременности и рождение здорового ребенка.

В последнее время в литературе активно обсуждается взаимосвязь между качеством полученных при стимуляции суперовуляции ооцитов и неудачными исходами циклов ВРТ [1]. Аномалии яйцеклеток могут быть разделены на две группы: экстрацитоплазматические и цитоплазматические. К цитоплазматическим аномалиям, наблюдаемым при световой микроскопии ооцита, относят центральную гранулярность цитоплазмы клетки, появление в цитоплазме аномальных агрегатов гладкого эндоплазматического ретикулума (ГЭР), вакуолей, рефрактерных телец, а также наличие темной цитоплазмы клетки. К экстрацитоплазматическим аномалиям относят изменение ширины перивителлинового пространства и появление в нем гранулярности, деформацию мембран оолеммы, а также аномалии строения первого полярного тельца [2]. Получены данные о том, что вышеперечисленные аномалии цитоплазмы, определяющие цитоплазматическую зрелость ооцита, оказывают особое влияние на оплодотворение и дальнейшее развитие эмбриона [3]. При этом окончательно не определена роль каждого из этих нарушений в дальнейшем развитии эмбриона, и не известны клинические предикторы их развития.

Нарушения цитоплазматической организации могут влиять на процесс оплодотворения и дальнейшее развитие эмбриона, которые не преодолеваются методом интрацитоплазматической инъекции сперматозоида (ИКСИ, от англ. - ICSI - IntraCytoplasmic Sperm Injection). Появление

вышеуказанных дисморфизмов ооцитов связывают с развитием генетических, эпигенетических или метаболических нарушений в клетках [4]. Частота генетических нарушений в ооцитах (анеуплоидии) достигает, по данным некоторых авторов, 47,5% [5]. При наличии анеуплоидии в ооцитах наблюдается высокий риск анеуплоидии у эмбрионов [6]. Выявление хромосомных аномалий ооцита возможно лишь при оценке полярного тела, биопсия которого может негативно влиять на последующее деление эмбриона [7]. Именно поэтому поиск ооцитарных морфологических предикторов анеуплоидии эмбрионов является весьма актуальной проблемой.

Метаболические явления в ооцитах являются важным фактором, способствующим правильному оплодотворению яйцеклетки и дальнейшему развитию эмбриона [8], [9]. Ооциту требуется большой объем энергии, чтобы осуществились такие важные биологические процессы, как формирование веретена деления, правильное расхождение хромосом, а также деление клетки после оплодотворения. До момента имплантации развивающаяся зигота зависит от существующего пула митохондрий, который уменьшается с каждым циклом деления клеток. Известно, что митохондрии ооцитов, полученных от женщин старшего репродуктивного возраста, содержат делеции ДНК, которые могут нарушать их функционирование. Сочетание уменьшенного числа митохондрий и повышенной частоты мутаций и делеций может привести к неадекватной активности митохондрий, и затем к отсутствию беременности. В последнее время активно изучалась роль митохондриального аппарата в развитии ооцитов и эмбрионов животных [10], [11]. Лучшее понимание морфофункционального состояния митохондриального аппарата ооцитов и эмбрионов ранней стадии развития, возможно, позволит выявить новые предикторы оценки их качества.

Использование преимплантационного генетического скрининга (ПГС) предотвращает перенос эмбрионов с аномальным числом хромосом (числовое нарушение кариотипа, анеуплоидии) и позволяет осуществить

селекцию генетически полноценных эмбрионов, что в клинической практике ВРТ приводит к увеличению частоты наступления беременности, уменьшению репродуктивных потерь и снижению риска рождения детей с генетической патологией. Оценка клинико-экономической эффективности проведения ПГС необходима для выбора правильной тактики ведения для данной группы пациентов ВРТ.

Цель исследования

Целью исследования является повышение эффективности программ вспомогательных репродуктивных технологий у пациенток с дисморфизмами ооцитов на основании морфологической оценки качества ооцитов, изучения числа копий митохондриальной ДНК и клинико-экономического анализа преимплантационного генетического скрининга.

Задачи исследования

1. Изучить клинико-анамнестические данные и выявить факторы риска развития дисморфизмов ооцитов у пациенток программ ВРТ.

2. Оценить распространенность различных дисморфизмов ооцитов в программах вспомогательных репродуктивных технологий.

3. Провести сравнительный анализ результатов программ ВРТ у супружеских пар с дисморфизмами ооцитов (параметров фолликулогенеза, оогенеза, раннего эмбрионального развития, наступления беременности и репродуктивных потерь в I триместре).

4. Исследовать число копий митохондриальной ДНК (мтДНК) в неоплодотворившихся ооцитах с различными дисморфизмами у пациенток программ ВРТ.

5. Изучить риск развития анеуплоидии хромосом 13, 18, 21, X, Y в ядрах бластомеров у супружеских пар с дисморфизмами ооцитов.

6. Оценить клинико-экономическую эффективность

преимплантационного генетического скрининга в исходах программ ВРТ у пациенток с дисморфизмами ооцитов.

Научная новизна

В ходе проведения исследования были получены следующие новые знания:

• Было оценено влияние различных видов дисморфизмов ооцитов на параметры раннего эмбрионального развития и исходы программ ВРТ у супружеских пар с бесплодием с расчетом скорректированного отношения шансов наступления беременности в зависимости от вида дисморфизмов ооцитов.

• Было изучено влияние различных способов стимуляции суперовуляции и клинико-анамнестических факторов на риск развития различных дисморфизмов ооцитов в программах ВРТ с созданием моделей прогноза развития дисморфизмов ооцитов в зависимости от выявленных факторов риска.

• Было исследовано число митохондрий путем оценки числа копий мтДНК в ооцитах с различными видами морфологических изменений.

• Была определена степень риска анеуплоидии в ядрах бластомеров в зависимости от наличия и вида дисморфизмов ооцитов.

• Была изучена эффективность, в том числе клинико-экономическая эффективность, преимплантационного генетического скрининга в реализации программ ВРТ у пациентов с различными видами дисморфизмов ооцитов у женщин.

Практическая значимость

В результате проведенного исследования была обоснована значимость морфологической оценки качества ооцитов у пациенток программ ВРТ и выделены группы риска пациенток с наличием ооцитов с различными видами морфологических изменений.

Были созданы модели прогноза развития дисморфизмов ооцитов на основании выявленных клинико-анамнестических и ятрогенных факторов риска, которые могут быть использованы в качестве прогностических критериев эффективности программ ВРТ у супружеских пар с бесплодием.

Был проведен анализ затраты - эффективность преимплантационного генетического скрининга методом FISH у супружеских пар с различными видами дисморфизмами ооцитов, что послужило обоснованием его применения в изучаемой группе пациентов с учетом клинической и экономической составляющих.

Положения, выносимые на защиту

1. Морфологические изменения ооцитов, особенно цитоплазматические дисморфизмы, увеличивают риск неудачных исходов программ ВРТ. Значимыми клинико-лабораторными факторами риска развития дисморфизмов ооцитов являются возраст пациентки, уровень антимюллерового гормона и уровень свободного тироксина. Значимым ятрогенным фактором риска является применение агонистов гонадотропин рилизинг-гормона в качестве триггера овуляции или в протоколах стимуляции суперовуляции.

2. Возможными причинами неэффективности программ ВРТ у пациентов с цитоплазматическими дисморфизмами ооцитов могут быть хромосомные или метаболические нарушения в половых клетках. Ооциты с цитоплазматическими дисморфизмами имеют более низкое число копий

мтДНК по сравнению с морфологически нормальными ооцитами, а получение и перенос эмбрионов с различными видами анеуплоидий, полученных при их оплодотворении, осуществляется в 3,6 раз чаще.

3. Проведение преимплантационного генетического скрининга методом FISH неэффективно у пациентов с экстрацитоплазматическими дисморфизмами ооцитов, а в группе пациентов с цитоплазматическими дисморфизмами ооцитов увеличивает эффективность программ ВРТ в 1,4 раза, что объясняется переносом в полость матки эуплоидных по 13, 18, 21, X и Y хромосомам эмбрионов. Клинико-экономическая эффективность преимплантационного генетического скрининга методом FISH в лечении бесплодия у супружеских пар с цитоплазматическими дисморфизмами у женщин может быть достигнута путем повышения эффективности лечения бесплодия в программах ВРТ на 19% и снижения стоимости ПГС на 33%.

Личный вклад автора

Автор участвовал в выборе темы научной работы, разработке цели и задач исследования, в проведении и интерпретации результатов морфологического исследования качества ооцитов, молекулярно-цитогенетических исследований, в обобщении и статистической обработке полученных данных. Автором лично осуществлялось обследование и ведение супружеских пар на всех этапах лечения бесплодия методом экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов (ЭКО/ПЭ).

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.01.01 - «акушерство и гинекология». Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 4 и 5 паспорта акушерства и гинекологии.

Апробация результатов

Основные положения работы доложены на XV Всероссийском форуме «Мать и дитя» (Москва, 2014), VII регионарном форуме «Мать и дитя» (Геленджик, 2014), XXIV Международной конференции РАРЧ (Москва, 2014), XXI Всероссийском конгрессе с международным участием «Амбулаторно-поликлиническая помощь: от менархе до менопаузы» (Москва, 2015). Работа доложена на заседании апробационной комиссии ФГБУ «НЦАГиП им. В.И. Кулакова» Минздрава России 1 июня 2015 г.

Внедрение результатов исследования в практику

Результаты исследования внедрены и используются в практической работе отделения вспомогательных технологий в лечении бесплодия (заведующий д.м.н. Калинина Е.А.) и лаборатории репродуктивной генетики (заведующий д.м.н. профессор Бахарев В.А.) ФГБУ «НЦАГиП им. В.И. Кулакова» Минздрава России (директор академик РАН Сухих Г.Т.). Материалы и результаты исследования включены в лекции и практические занятия для клинических ординаторов и аспирантов ФГБУ «НЦАГиП им. В.И. Кулакова» Минздрава России. Результаты исследования изложены в 18 печатных работах, из которых 9 напечатаны в рецензируемых научных журналах, рекомендуемых ВАК: в двух обзорных статьях, одном описании клинического случая и шести оригинальных статьях, опубликованных в журналах «Акушерство и гинекология» (импакт-фактор 0,617), «Гинекология» (импакт-фактор 0,465), «Проблемы репродукции» (импакт-фактор 0,385), "Цитология" (импакт-фактор 0,507), «Молекулярная медицина» (импакт-фактор 1,513).

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена в традиционной форме. Состоит из оглавления, списка принятых сокращений, введения, обзора литературы, глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа представлена на 164 страницах машинописного текста, иллюстрирована 23 рисунками 32 таблицами. Библиографический указатель включает 13 работ на русском языке и 155 работ на английском языке.

Глава 1. СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ ЛЕЧЕНИЯ БЕСПЛОДИЯ У СУПРУЖЕСКИХ ПАР С ДИСМОРФИЗМАМИ ООЦИТОВ У ЖЕНЩИН (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. Влияние качества ооцитов на эффективность программ ВРТ

Бесплодие - это нарушение функции репродуктивной системы, клинически проявляющееся неспособностью супружеской пары добиться беременности в течение как минимум одного года половой жизни без использования контрацепции [12], [13]. Бесплодие может быть обусловлено функциональными или анатомическими нарушениями женской репродуктивной системы (в 35-45% случаев), мужским фактором (в 20-40% случаев), сочетанным генезом (в 20-30% случаев). В некоторых случаях причина бесплодия остается неизвестной [14], [15]. Основными причинами женского бесплодия являются отсутствие или нарушение проходимости маточных труб, отсутствие овуляции, а также наружный гениальный или внутренний эндометриоз. Мужской фактор бесплодия обусловлен нарушениями сперматогенеза, приводящими к отсутствию или снижению концентрации сперматозоидов, повышению доли морфологически аномальных форм, снижению подвижности сперматозоидов, и соответственно, их оплодотворяющей способности. Также бесплодие у мужчин может быть обусловлено нарушением транспорта сперматозоидов по семявыносящим протокам.

Тактика ведения супружеских пар с бесплодием индивидуальна. Основными методами лечения являются модификация образа жизни супругов, медикаментозное и/или хирургическое лечение заболеваний, лежащих в основе бесплодия, а при неэффективности данных мероприятий -применение методов вспомогательных репродуктивных технологий.

В настоящее время к методам ВРТ относятся:

• внутриматочная инсеминация спермой мужа (партнера) или донорской спермой;

• экстракорпоральное оплодотворение и перенос эмбрионов в полость матки;

• криоконсервация и/или витрификация эмбрионов, ооцитов и спермы;

• интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида, а также интрацитоплазматическая инъекция морфологически нормальным сперматозоидом (ИМСИ);

• программы суррогатного материнства, а также донорство спермы, ооцитов и эмбрионов;

• преимплантационная генетическая диагностика (ПГД) и преимплантационный генетический скрининг [16].

Основной целью программ ЭКО является наступление одноплодной беременности и рождение здорового ребенка при переносе минимального числа эмбрионов в полость матки. Программа ЭКО включает в себя несколько этапов:

• стимуляция суперовуляции;

• трансвагинальная пункция яичников и аспирация фолликулярной жидкости, содержащей ооцит-кумулюсные комплексы;

• селекция и оплодотворение ооцитов;

• культивирование эмбрионов с последующим переносом эмбриона/ов в полость матки реципиента;

Первостепенным фактором, определяющим вероятность наступления клинической беременности и рождения здорового ребенка в результате программы ЭКО, является качество полученных эмбрионов. Разработка схем культивирования эмбрионов до пятых суток развития (стадия бластоцисты) способствовала повышению результативности программ ВРТ при снижении числа переносимых эмбрионов. Культивирование до стации бластоцисты, во-первых, представляет больше возможностей для отбора «лучших» эмбрионов, обладающих максимальным потенциалом к имплантации и

дальнейшему развитию, а, во-вторых, делает перенос адекватным моменту физиологического попадания эмбрионов в «имплантационное окно». Тем не менее, несмотря на все достижения последних десятилетий в области клинической репродуктологии, эмбриологии и генетики, судьба эмбриона прежде всего зависит от исходного качества гамет, а именно их морфологической и структурной зрелости [17]. В опытах на ооцитах и эмбрионах млекопитающих было показано, что качество ооцита играет более важную роль, чем качество сперматозоида [18], [19].

Активация собственного генома эмбриона человека происходит на 3 сутки после оплодотворения на 8-клеточной стадии, когда начинают работать более 4000 генов, которые обеспечивают дальнейшее дробление, компактизацию, формирование бластоцисты, имплантацию и все последующее развитие эмбриона [20]. Однако до этого момента важны накопленные в течение оогенеза продукты — мРНК, протеины, субстраты, питательные вещества, которые аккумулируются в ооците. Именно поэтому для оплодотворения и развития эмбриона первостепенное значение имеет именно качество ооцита.

Клинические испытания подтверждают данные фундаментальных исследований. Использование донорских ооцитов является эффективным методом лечения бесплодия, позволяющим добиться наступления беременности и рождения здорового ребенка женщинам с низким овариальным резервом, независимо от того, вызвано ли снижение функции яичников возрастом, преждевременной недостаточностью яичников или ятрогенными факторами [21], [22]. В мета-анализе, опубликованном в 2013 году американскими авторами, оценивается эффективность программ ВРТ с использованием донорских ооцитов у пациенток с ожирением. По данным литературы, эффективность программ ЭКО у пациенток с нарушениями жирового обмена значительно ниже общепопуляционных значений, что может быть связано с явлениями окислительного стресса в различных тканях и клетках, в том числе ооцитах [23], [24]. Тем не менее, при использовании

донорских ооцитов частота наступления беременности, частота ранних репродуктивных потерь и частота живорождений у пациенток с ожирением не отличаются от аналогичных показателей у пациенток с нормальным индексом массы тела (ИМТ) [25]. Испанские авторы в 2014 году опубликовали исследование, посвященное влиянию возраста отцов на исходы программ ЭКО/ИКСИ с использованием донорских ооцитов, проанализировав 4887 циклов ВРТ. Авторы наблюдали статистически значимую корреляцию между увеличивающимся возрастом мужчин и снижением качества спермы, а именно снижением объема, общей концентрации сперматозоидов, общей подвижности сперматозоидов, а также повышением морфологически аномальных форм. Ассоциация возраста мужчин с репродуктивными исходами (частота биохимических и клинических беременностей, частота репродуктивных потерь в I триместре беременности и частота живорождений) была проанализирована с помощью метода логистической регрессии, в качестве конфаундеров рассматривались возраст донора ооцитов, возраст реципиента, состояние спермы (свежая или криоконсервированная), а также число перенесенных в полость матки эмбрионов. Не было получено статистических значимых различий между исходами программ ВРТ и возрастом мужчины [26]. Авторы предполагают, что качественные ооциты молодых женщин совместно с использованием метода ИКСИ способны преодолевать низкий репродуктивный потенциал сперматозоидов возрастных мужчин.

Таким образом, качество ооцитов является одним из основных факторов, ограничивающих как фертильность женщины, так и эффективность лечения бесплодия в целом. Характеристики ооцитов, способные влиять на их качество, могут быть разделены на морфологические, генетические, метаболические и эпигенетические. В рутинной клинической практике лабораторий ЭКО применяется оценка клеток преимущественно по их морфологическим характеристикам и их свойствам во время и после оплодотворения. В данном обзоре литературы будут рассмотрены

морфологические, генетические и метаболические характеристики ооцитов. Эпигенетические характеристики ооцитов на данном этапе практически не изучены, хотя представляют определенный научный интерес.

1.2. Генез и факторы риска анеуплоидии ооцитов

Анеуплоидии (изменения числа хромосом) являются самыми распространенными вариантами хромосомных аномалий у человека, а также основной генетической причиной потерь беременности и рождения детей с врожденными дефектами, как при естественном зачатии, так и при применении ВРТ. Анеуплоидии являются результатом ошибок мейоза. Известно, что большинство хромосомных нарушений в ооцитах возникают вследствие неправильного расхождения хромосом в анафазе I деления мейоза. Исследования гаметогенеза у человека показали, что оогенез значительно более подвержен ошибкам мейоза, чем сперматогенез [27], [28]. По данным литературы, распространенность анеуплоидии по 13, 18, 21, X, Y хромосомам в нормальной или субфертильной сперме не превышает 0,6% [29], а распространенность анеуплоидии по 24 хромосомам не превышает 5%, хотя при наличии патозооспермии, особенно тератозооспермии, распространенность анеуплоидии может возрастать в 4-5 раз [30], [31]. Появление процедуры ИКСИ сделало возможным получение эмбрионов даже при наличии тяжелой формы патозооспермии у мужчин, которая препятствует наступлению спонтанной беременности, что привело к более широкому распространению эмбрионов с отцовскими анеуплоидиями [32], [33], [34].

Оценка хромосомного набора ооцита возможно только при проведении оплодотворения in vitro и генетическом исследовании полярного тельца. По данным литературы, средний уровень анеуплоидии в ооцитах, полученных в естественных циклах, составляет около 20% [35]. Данные литературы о распространенности анеуплоидии в ооцитах в стимулированных циклах

варьируют в широком диапазоне (20-70%), при этом наблюдается четкая прямая связь между возрастом пациентки и долей анеуплоидных ооцитов [6]. С помощью метода флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) было показано, что у женщин старше 40 лет доля ооцитов с анеуплоидиями превышает 0,5 [36]-[38].

Возможной причиной большей предрасположенности к анеуплоидии именно ооцитов, а не сперматозоидов, являются различия между гаметогенезом у мужчин и женщин [27], [39]. Сперматогенез у мужчин является непрерывным процессом, в то время как женщины рождаются с законченным набором незрелых ооцитов, находящихся в пассивном состоянии, и процесс созревания завершается только в естественном или экзогенно стимулированном овуляторном менструальном цикле.

У обоих полов основой мейоза служит репликация ДНК в родительской клетке, за которой следуют два цикла деления ядра и клетки, известные как первое деление мейоза (мейоз I) и второе деление мейоза (мейоз II), которые приводят к образованию гаплоидных гамет. В профазе I гомологичные хромосомы выстраиваются в ряд, образуют хиазмы (точки перекреста), а затем происходит кроссинговер, необходимый для образования новых генных комбинаций. Также в течение профазы I происходит дезинтеграция ядрышек и ядерных оболочек клетки, и образуются нити веретена деления. В метафазе I пары хромосом выстраиваются у экватора веретена деления, прикрепляясь к нитям центромерами (центромеры - точки соединения хромосом). В анафазе I микротрубочки сокращаются, в результате чего нити веретена тянут гомологичные хромосомы к противоположным полюсам веретена деления. В анафазе I хромосомы разделяются на два гаплоидных набора, по одному на каждом полюсе веретена деления. В результате мейоза I деления гомологичные хромосомы расходятся к противоположным полюсам веретена деления. При этом число хромосом уменьшается вдвое, но они состоят из двух хроматид каждая. В результате кроссинговера возникают новые генные комбинации, и хроматиды неидентичны. Результатом мейоза

II, которое по структуре сходно с митотическим делением, является образование гаплоидных дочерних клеток.

В процессе сперматогенеза мейотическое деление клеток происходит постоянно, начиная со времени полового созревания, и затем в течение всей жизни мужчины. В женском организме первое мейотическое деление начинается во время эмбрионального развития - в него вступают примордиальные зародышевые клетки, образовавшиеся в результате митоза (примерно с 20-й недели гестации), а затем мейоз останавливается на стадии профазы I [40]. В дальнейшем мейотическое деление продолжается только в результате овуляторного пика лютеинизирующего гормона (ЛГ) у девочки, достигшей полового созревания. Для большинства ооцитов финальная стадия мейоза никогда не наступает, а для остальных овуляторный пик ЛГ происходит спустя годы и десятилетия. Длительный временной интервал между началом и остановкой мейоза во время эмбрионального развития женского организма и окончанием мейоза во время овуляторных циклов является наиболее вероятной причиной высокой частоты хромосомных нарушений в ооцитах.

Расхождение хромосом в течение мейотического деления в целом является точно скоординированным биологическим процессом, и ошибки возникают достаточно редко. К примеру, у дрожжевых грибов только 1 из 100 000 делений ассоциировано с нарушением расхождения хромосом. Анеуплоидии в гаметах млекопитающих, например грызунов, встречаются значительно чаще, их распространенность составляет от 0,5% до 1,0% [41].

Хромосомный статус человеческих ооцитов в процессе оогенеза и оплодотворения также достаточно хорошо изучен. Известно, что на различных этапах мейоза могут произойти ошибки, которые приведут к несбалансированному распределению хромосом, за счет нерасхождения хромосомы целиком или преждевременного разделения и случайного расхождения сестринских хроматид [42],[43].

Под воздействием овуляторного пика ЛГ возобновляется первое мейотическое деление в ооците, пары хромосом (биваленты) разделяются и мигрируют к противоположным полюсам веретена деления. Один из бивалентов переходит в первое полярное тельце (РВ1), в то время как второй остается в цитоплазме ооцита. В норме каждый из бивалентов содержит 23 хромосомы и 46 хроматид, которые соединены между собой специфическими когезионными белками. Данная фаза соответствует второму мейотическому делению, которое завершается только после проникновения сперматозоида в клетку, индукции активации ооцита и выброса второго полярного тельца (РВ2). На данном этапе сестринские хроматиды разделяются, и одна из них переходит во второе полярное тельце, а вторая остается в цитоплазме ооцита (рисунок 1).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Сыркашева Анастасия Григорьевна, 2015 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Significance of metaphase II human oocyte morphology on ICSI outcome /L. Rienzi [et al.] // Fertil. Steril. - 2008. - Vol. 90, № 5. - P. 1692-1700.

2. Balaban, B. Effect of oocyte morphology on embryo development and implantation / B. Balaban, B. Urman // Reprod Biomed Online.- 2006.- Vol. 12. - P. 608-615.

3. The relationship between pregnancy outcome and smooth endoplasmic reticulum clusters in MII human oocytes / J. Otsuki [et al.] // Hum. Reprod.- 2004.- Vol. 19.- P. 1591-1597.

4. Frequency and distribution of chromosome abnormalities in human oocytes / A. Kuliev [et al.] // Cytogenet. Genome Res.- 2005.- Vol. 111.- P. 193-198.

5. Comparative genomic hybridization of oocytes and first polar bodies from young donors/ E. Fragouli [et al.] //Reprod. Biomed. Online.-2009.- Vol. 19, № 2.- P. 228-237.

6. The origin of human aneuploidy: Where we have been, where we are going / T. Hassold [et al.] // Hum. Mol. Genet.- 2007.- Vol. 16, №

2.- P. 203-208.

7. In vitro fertilization with preimplantation genetic screening /T. Mastenbroek [et al.] // N Engl J Med.- 2007.- Vol. 357, № 1, P. 9-17.

8. Mitochondrial content reflects oocyte variability and fertilization outcome / T. Santos [et al.] // Fertil. Steril.- 2006.- Vol. 85, №

3.- P. 584-591.

9. Mitochondrial DNA content affects the fertilizability of human oocytes /C. Morgan [et al.] // Mol. Hum. Reprod.- 2001.- Vol. 7, № 5.- P. 425-429.

10. Shoubridge, E. The Role of Mitochondrial DNA Copy Number in Mammalian Fertility / E. A. Shoubridge, T. Wai // Biol. Reprod.- 2007.- Vol. 77, № 6.- P. 87-111.

11. Mitochondrial DNA transmission, replication and inheritance: A journey from the gamete through the embryo and into offspring and embryonic stem cells/ J. C. John [et al.] // Hum. Reprod. Update.- 2010.- Vol. 16, № 5.- P. 488-509.

12. Committee for Monitoring Assisted Reproductive Technology (ICMART) and the World Health Organization (WHO) revised glossary of ART terminology / F. Zegers-Hochschild // Fertil. Steril.-2009/- Vol. 92, № 5, P 15201524.

13. National Institute for Health and Care Excellence. Fertility: assessment and treatment for people with fertility problems / D. Barlow [et al.] //NICE CLincal Guide.- 2013.- 274 p.

14. Jose-miller A. B. Infertility / A. B. Jose-miller, J. W. Boyden, K. A. Frey // Am. Fam. Physician.- 2007.- Vol. 75.- P. 849-856.

15. Defining infertility-a systematic review of prevalence studies / S. Gurunath [et al.] // Hum. Reprod. Update.- 2011.- Vol. 17, № 5, P. 575-588.

16. Приказ Министерства здравоохранения РФ от 30 августа 2012 г. N 107н "О порядке использования вспомогательных репродуктивных технологий, противопоказаниях и ограничениях к их применению". [Электронный ресурс] -2012.- Режим доступа: https: //www. ro sminzdrav.ru/docs/mzsr/standards/proj ects/197.

17. Significance of morphological attributes of the early embryo / L. Rienzi [et al.] // Reprod Biomed Online.- 2005.- Vol. 10.- P. 669-681.

18. Contribution of the oocyte to embryo quality / M. A. Sirard [et al.] // Theriogenology.- 2006.- Vol. 65.- P. 126-136.

19. Temporal patterns of embryonic gene expression and their dependence on oogenetic factors / P.De Sousa [et al.] // Theriogenology.- 1998.- Vol. 49, № 97, P. 115-128.

20. Bell, C. Genomic RNA profiling and the programme controlling preimplantation mammalian development / C. Bell, M. Calder, A. Watson // Mol. Hum. Reprod.- 2008.- Vol. 14.- P. 691-701.

21. Shah, D. Post Reproductive Health: The Journal of The British Menopause Society Premature menopause - Meeting / D. Shah, N. Nagarajan // Post Reprod. Heal.- 2014.- Vol. 1.- P. 1-7.

22. Trends and outcomes for donor oocyte cycles in the United States /J. F. Kawwass [et al.] // JAMA.- 2013.- Vol. 310, № 22.- P. 24262434.

23. The association between severe obesity and characteristics of failed fertilized oocytes / R. MacHtinger [et al.] // Hum. Reprod.- 2012.-Vol. 27, № 11.- P. 3198-3207.

24. Robker, R. L. Inflammatory pathways linking obesity and ovarian dysfunction / R. L. Robker, L. L. Y. Wu, X. Yang // J. Reprod. Immunol.- 2011.- Vol. 88, № 2.- P. 142-148.

25. IVF outcomes in obese donor oocyte recipients: A systematic review and meta-analysis / E. S. Jungheim [et al.] // Hum. Reprod.- 2013.-Vol. 28, № 10.- P. 2720-2727.

26. Paternal age and assisted reproductive outcomes in ICSI donor oocytes: is there an effect of older fathers? / R. Begueria [et al.] // Hum. Reprod.- 2-14.- Vol. 0, № 10.- P. 1-9.

27. Gianaroli., L. Sperm and blastomere aneuploidy detection in reproductive genetics and medicine / L. Gianaroli, M. C. Magli, A. P. Ferraretti // J. Histochem. Cytochem.- 2005.- Vol. 53.- P. 261-267.

28. Черных, В. Б. Синдром персистенции мюллеровых протоков: современное состояние проблемы / В. Б. Черных, Л. Ф. Курило // Медицинская генетика.- 2003.- Т. 2, № 3, С. 98-105.

29. Риск анеуплоидии эмбрионов в программах вспомогательных репродуктивных технологий у мужчин с

патозооспермией (мета-анализ) / Долгушина Н.В. [и др.] //Акушерство и гинекология.- 2012.- №. 7.- С. 4-13.

30. Frequency of aneuploidy in sperm from patients with extremely severe male factor infertility / L. Gianaroli [et al.] // Hum. Reprod.-2005.- Vol. 20, № 8.-Р. 2140-2152.

31. Исходы программ вспомогательных репродуктивных технологий у супружеских пар с различными видами патозооспермии у мужчин / Н. В. Долгушина [и др.] // Акушерство и гинекология.- 2013.- № 10.- С. 69-75.

32. Влияние уровня анеуплоидии хромосом в сперматозоидах на развитие анеуплоидии эмбрионов и исходы программ вспомогательных репродуктивных технологий / С. А. Сокур [и др.] // Гинекология.- 2013.- № 6.- С. 38-41.

33. Paternal contribution to aneuploidy in preimplantation embryos / M.C. Magli [et al.] // Reprod Biomed Online -2009.- Vol. 18, № 4. - P. 536-543.

34. Sperm aneuploidy and recurrent pregnancy loss / L. M. Bernandini [et al.] // Reprod. Biomed. Online.- 2004.- Vol. 9, № 3ю- Р. 312-320.

35. The meiotic competence of in-vitro matured human oocytes is influenced by donor age: Evidence that folliculogenesis is compromised in the reproductively aged ovary / K. Volarcik [et al.] // Hum. Reprod.- 1998.- Vol. 13, № 1.- Р. 154-160.

36. Kuliev, A. Meiotic and mitotic nondisjunction: Lessons from preimplantation genetic diagnosis / A. Kuliev, Y. Verlinsky // Hum. Reprod. Update.- 2004.- Vol. 10, № 5.- Р. 401-407.

37. Predicting aneuploidy in human oocytes: Key factors which affect the meiotic process / L. Gianaroli [et al.] // Hum. Reprod.- 2010.- Vol. 25, № 0.- Р. 2374-2386.

38. The cytogenetics of polar bodies: Insights into female meiosis and the diagnosis of aneuploidy / E. Fragouli [et al.] // Mol. Hum. Reprod.- 2011.- Vol. 17, № 5.- Р. 286-295.

39. Курило, Л.Ф. Возможности цитогенетического исследования мейоза при мужском бесплодии / Л. Ф. Курило // Цитология и генетика.- 1989.- Т. 23.- С. 63-70.

40. Elder, K. In-vitro fertilization / K. Elder, B. Dale- C.: «Cambridge University Press», 2010.- 12 — 277 p.

41. Gender effects on the incidence of aneuploidy in mammalian germ cells / F. Pacchierotti // Environ. Res.- 2007.- Vol. 104.- P. 46-69.

42. Zenzes, M. Cytogenetics of human oocytes, zygotes, and embryos after in vitro fertilization / M. Zenzes, R. F. Casper // Hum. Genet.-1992.- Vol. 88.- P. 367-375.

43. Angell, R. First-meiotic-division nondisjunction in human oocytes / R. Angell // Am. J. Hum. Genet.- 1997.- Vol. 61.- P. 23-32.

44. Cdc20 Is Critical for Meiosis I and Fertility of Female Mice / F. Jin [et al.] // PLoS Genet.- 2010.- Vol. 6, № 9.- Р. 1-16.

45. A trisomic germ cell line and precocious chromatid segregation leads to recurrent trisomy 21 conception / J. Cozzi [et al.] // Hum. Genet.-1999.- Vol. 104.- P. 23-28.

46. Errors at mitotic segregation early in oogenesis and at first meiotic division in oocytes from donor females: Comparative genomic hybridization analyses in metaphase II oocytes and their first polar body / A. Obradors [et al.] // Fertil. Steril - 2010.- Vol. 93, № 2.- P. 675-679.

47. Germinal and Somatic Trisomy 21 Mosaicism: How Common is it, What are the Implications for Individual Carriers and How Does it Come About? / M. Hulten [et al.] // Curr. Genomics.-2010.- Vol. 11, № 0.-P. 409-419.

48. Баранов В.С., Кузнецова Т.В. Цитогенетика эмбрионального развития человека. / В.С Баранов., Т.В. Кузнецова-Санкт-Петербург: Н-Л , 2007. - 78-79 c.

49. Munne, S. Technology requirements for preimplantation genetic diagnosis to improve assisted reproduction outcomes / S. Munne, D. Wells, J. Cohen // Fertil. Steril.-2010.- Vol. 94, № 2.- P. 408-430.

50. Live birth outcome with trophectoderm biopsy, blastocyst vitrification, and single-nucleotide polymorphism microarray-based comprehensive chromosome screening in infertile patients / W. B. Schoolcraft [et al.] // Fertil. Steril - 2011.- Vol. 96, № 3.- P. 638-640.

51. Chromosome mosaicism in day 3 aneuploid embryos that develop to morphologically normal blastocysts in vitro / M. C. Magli [et al.] // Hum. Reprod.-2000.- Vol. 15, № 8.- P. 1781-1786.

52. Chromosomal abnormalities and embryo development in recurrent miscarriage couples / C. Rubio [et al.] // Hum. Reprod.- 2003.- Vol. 18, № 1.- P. 182-188.

53. Effect of infertility, maternal age, and number of previous miscarriages on the outcome of preimplantation genetic diagnosis for idiopathic recurrent pregnancy loss / J. G. Garrisi [et al.] // Fertil. Steril.- 2009.- Vol. 92, № 1.- P. 288-295.

54. Comprehensive chromosome screening of polar bodies and blastocysts from couples experiencing repeated implantation failure / E. Fragouli [et al.] // Fertil. Steril.- 2010.- Vol. 94, № 3.- P. 875-887.

55. Hassold, T. To err (meiotically) is human: the genesis of human aneuploidy / T. Hassold, P. Hunt // Nat. Rev. Genet.- 2001.- Vol. 2.- P. 280-291.

56. Gardner, R. Control of the Sex Ratio at Full Term in the Rabbit by transferring Sexed Blastocysts / R. Gardner, R. Edwards // Nature.- 1968.-Vol. 218.- P. 346-348.

57. Analysis of the first polar body: preconception genetic diagnosis / Y. Verlinsky [et al.] // Hum. Reprod.- 1990.- Vol. 5.- №. 7.- P. 826-829.

58. Pregnancies from biopsied human preimplantation embryos sexed by Y-specific DNA amplification / H. Handyside[et al.] // Nature.-1990.- Vol. 344.- P. 768-770.

59. Kuliev, A. Thirteen years' experience of preimplantation diagnosis: report of the Fifth International Symposium on Preimplantation Genetics / A. Kuliev, Y. Verlinsky // Reprod. Biomed. Online.- 2004.- Vol. 8, № 2.- P. 229-235.

60. ESHRE Preimplantation Genetic Diagnosis Consortium: data collection III (May 2001) / T. Ebner [et al.] // Hum. Reprod.- 2002.- Vol. 17, № 1, P. 233-246.

61. Detection of chromosomal imbalances in transitional cell carcinoma of the bladder by comparative genomic hybridization / C. Voorter [et al.] // Am. J. Pathol.- 1995.- Vol. 146, № 6.- P. 1341-1354.

62. Wells, D. Comprehensive chromosomal analysis of human preimplantation embryos using whole genome amplification and single cell comparative genomic hybridization / D. Wells, J. D. Delhanty // Mol. Hum. Reprod.- 2000.- Vol. 6, № 11.- P. 1055-1062.

63. Pregnancies following pre-conception diagnosis of common aneuploidies by fluorescent in-situ hybridization / Verlinsky Y [et al.] // Hum Reprod.- 1995.- Vol. 10, № 7.- P. 1923-1927.

64. Polar Body Diagnosis of Common Aneuploidies by FISH /Y. Verlinsky [et al.] // J. Assist. Reprod. Genet.- 1995.- Vol. 13, № 2.- P. 2-7.

65. Aneuploidies of chromosomes 1, 4, and 6 are not compatible with human embryos' implantation / M. C. Magli [et al.] // Fertil. Steril.-

2010.- Vol. 94, № 6, P. 2012-2016.

66. Kuliev, A. Polar body-based preimplantation genetic diagnosis for Mendelian disorders / A. Kuliev, S. Rechitsky // Mol. Hum. Reprod.-

2011.- Vol. 17, № 5.- P. 275-285.

67. Successful polar body-based preimplantation genetic diagnosis for achondroplasia / G. Altarescu [et al.] // Reprod. Biomed. Online.- 2008.-Vol. 16, № 2.- P. 276-282.

68. Pre-embryonic diagnosis for Sandhoff disease /A. Kuliev [et al.] // Reprod. Biomed. Online.- Vol. 12, № 3.- P. 328-333.

69. First pregnancy and life after preimplantation genetic diagnosis by polar body analysis for mucopolysaccharidosis type I / D. Tomi [et al.] // Reprod. Biomed. Online.- 2006.- Vol. 12, № 2.- P. 215-220.

70. Polar body array CGH for prediction of the status of the corresponding oocyte. Part II: Technical aspects / M. C. Magli [et al.] // Hum. Reprod.- 2011.- Vol. 26, № 0.- P. 3181-3185.

71. Multiple meiotic errors caused by predivision of chromatids in women of advanced maternal age undergoing in vitro fertilisation / A. H. Handyside [et al.] // Hum. Reprod.- 2012.- Vol. 20, № 7.- 742-747.

72. Nicolaidis, P. Origin and mechanisms of non-disjunction in human autosomal trisomies / P. Nicolaidis, M. Petersen // Hum Reprod. -1998.- Vol. 13, № 2.- P. 313-319.

73. Munne, S. Embryonic chromosome abnormalities / S. Munne // Reprod Biomed Online. -2005. -Vol. 10, № 2. - P. 3-6.

74. FISH analysis for chromosomes 13, 16, 18, 21, 22, X and Y in all blastomeres of IVF pre-embryos from 144 randomly selected donated human oocytes and impact on pre-embryo morphology / S. Ziebe [et al.] // Hum. Reprod.-2008.- Vol. 18, № 12.- P. 2575-2581.

75. Preimplantation genetic screening reveals a high incidence of aneuploidy and mosaicism in embryos from young women undergoing IVF / E. B. Baart [et al.] // Hum. Reprod.- 2006.- Vol. 21, № 1.- P. 223-233.

76. Preimplantation Genetic Screening (PGS) with Comparative Genomic Hybridization (CGH) following day 3 single cell blastomere biopsy markedly improves IVF outcomes while lowering multiple pregnancies and miscarriages / M. D. Keltz [et al.] // J. Assist. Reprod. Genet.- 2013.- Vol. 30.- P. 1333-1339.

77. Origins and rates of aneuploidy in human blastomeres / M. Rabinowitz [et al.] // Fertil. Steril.- 2012.- Vol. 97, № 2.- P. 395-401.

78. Preimplantation aneuploidy testing for infertile patients of advanced maternal age: a randomized prospective trial / W. B. Schoolcraft [et al.] // Fertil. Steril.- 2009.- Vol. 92, № 1.- P. 157-162.

79. No beneficial effect of preimplantation genetic screening in women of advanced maternal age with a high risk for embryonic aneuploidy / M. Twisk [et al.] // Hum. Reprod.- 2008.- Vol. 23, № 12.- P. 2813-2817.

80. Preimplantation genetic screening in women of advanced maternal age caused a decrease in clinical pregnancy rate: a randomized controlled trial / T. Hardarson [et al.] // Hum. Reprod.- 2008. - Vol. 23, № 12.- P. 2806-2812.

81. Anaphase lagging mainly explains chromosomal mosaicism in human preimplantation embryos /E. Coonen [et al.] // Hum. Reprod.- 2004.-Vol. 19, № 2.- P. 316-324.

82. Comparison of blastocyst transfer with or without preimplantation genetic diagnosis for aneuploidy screening in couples with advanced maternal age: a prospective randomized controlled trial / C. Staessen [et al.] // Hum. Reprod.- 2004.- Vol. 19, № 12.- P. 2849-2858.

83. Preimplantation aneuploid embryos undergo self-correction in correlation with their developmental potential / S. Barbash-Hazan [et al.] // Fertil. Steril.-2009.- Vol. 92, № 3.- P. 890-896.

84. Self-correction of chromosomally abnormal embryos in culture and implications for stem cell production / S. Munne [et al.] // Fertil. Steril.-Vol. 84, № 5.- P. 1328-1334.

85. Blastocyst biopsy with comprehensive chromosome screening and fresh embryo transfer significantly increases in vitro fertilization implantation and delivery rates: A randomized controlled trial / R. T. Scott [et al.] // Fertil. Steril - Vol. 100, № 3.- P. 697-703.

86. Schoolcraft, W.B. Clinical application of comprehensive chromosomal screening at the blastocyst stage / W.B. Schoolcraft, E. Fragouli, J. Stevens // Fertil. Steril. -2010.- Vol. 94. - P. 1700-1706.

87. What next for preimplantation genetic screening (PGS)? Experience with blastocyst biopsy and testing for aneuploidy / R. P. S. Jansen [et al.] // Hum. Reprod.- Vol. 23, № 7.- P. 1476-1478.

88. Pregnancies and live births after trophectoderm biopsy and preimplantation genetic testing of human blastocysts / S. J. McArthur [et al.] // Fertil. Steril.- 2005.- Vol. 84, № 6, P. 1628-1636.

89. Preimplantation genetic screening for abnormal number of chromosomes (aneuploidies) in in vitro fertilization or intracytoplasmic sperm injection / M. Twisk [et al.] // Cochrane Database Syst Rev. -2011.- № 2.

90. Margulis, L. The microbes' contribution to evolution / L. Margulis // Biosystems.- 1975.- Vol. 7.- P. 266-292.

91. Sequence and organisation of the human mitochondrial genome / S. Anderson [et al.] // Nature.- 1981.- Vol. 290.- P. 457-465.

92. Reanalysis and revision of the Cambridge reference sequence for human mitochondrial DNA /R. M. Andrews [et al.] // Nat. Genet.- 1999.- Vol. 23.-P. 147.

93. Hornst, M. Protein import into mitochondria / M. Horst, N. G. Kronidou // Membr. Protein Transp.- 1995.- Vol. 1.- P. 109-143.

94. Mechanical behavior in living cells consistent with the tensegrity model /N. Wang [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.- 2001.- Vol. 98, № 14.-P. 7765-7770.

95. Sathananthan, H. Mitochondrial morphology during preimplantational human embryogenesis / H. Sathananthan, O. Trounson // Hum. Reprod.- 2000.-Vol. 15, Suppl. 2.- P. 148-159.

96. Piko , L. Number of mitochondria and some properties of mitochondrial DNA in the mouse egg / L. Piko, L. Matsumoto // Dev. Biol.- 1976.-Vol. 49.- P. 1-10.

97. Jansen, R. P. Germline passage of mitochondria: quantitative considerations and possible embryological sequelae / R. P. Jansen // Hum. Reprod.- 2000.-Vol. 15, Suppl 2.- P. 112-128.

98. The Role of Mitochondrial DNA Copy Number in Mammalian Fertility / T. Wai [et al.] // Biol of Reprod.- 2010.- Vol. 62.- P. 52-62.

99. Quantification of mtDNA in single oocytes , polar bodies and subcellular components by real-time rapid cycle fluorescence monitored PCR / N. Steuerwald [et al.] // Zygote.- 2000.- Vol. 9.- P. 209-215.

100. Mitochondria and human preimplantation embryo development / M. Wilding [et al.] // Reproduction.- 2009.- Vol. 137.- P. 619-624.

101. Van Blerkom, J. Mitochondrial function in the human oocyte and embryo and their role in developmental competence /J. Van Blerkom // Mitochondrion.- 2011.- Vol. 11, № 5.- P. 797-813.

102. Mitochondrial transcription factor A is necessary for mtDNA maintenance and embryogenesis in mice / N. G. Larsson [et al.] // Nat. Genet.-1998/- Vol. 18.- P. 231-236.

103. Mitochondrial aggregation patterns and activity in human oocytes and preimplantation embryos / M. Wilding [et al.] // Hum. Reprod.-2001.- Vol. 16, № 5.- P. 909-917.

104. Bogenhagen, D. S. Does mtDNA nucleoid organization impact aging? / D. F. Bogenhagen // Exp. Gerontol.- 2010.- Vol. 45, № 7-8.- P. 473-477.

105. Wai, T. The mitochondrial DNA genetic bottleneck results from replication of a subpopulation of genomes / T. Wai, D. Teoli, E. Shoubridge // Nat. Genet.-2008.- Vol. 40, № 12.- P. 1484-1488.

106. A reduction of mitochondrial DNA molecules during embryogenesis explains the rapid segregation of genotypes / L. M. Cree [et al.] // Nat. Genet.- 2008.- Vol. 40, № 2.- P. 249-254.

107. Maternal inheritance of human mitochondrial DNA / R. E. Giles [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.- 1980.- Vol. 77, №. 1.- P. 67156719.

108. Mitochondrial functionality in reproduction: From gonads and gametes to embryos and embryonic stem cells / J. Ramalho-Santos [et al.] // Hum. Reprod. Update.- 2009.- Vol. 15, № 5.- P. 553-572.

109. The fate of human sperm-derived mtDNA in somatic cells / G. Manfredi [et al.] // Am. J. Hum. Genet.- 1997.- Vol. 61.- P. 953-960.

110. Schwartz, M. Paternal inheritance of mitochondrial DNA / M. Schwartz, J. Vissing // New Engl J Med.- 2002.- Vol. 347, № 8.- P. 576-580.

111. Genotypes from patients indicate no paternal mitochondrial DNA contribution / R. W. Taylor [et al.] // Ann. Neurol.- 2003.- Vol. 54.- P. 521-524.

112. Lack of paternal inheritance of muscle mitochondrial DNA in sporadic mitochondrial myopathies / M. Filosto [et al.] // Ann. Neurol.- 2003.- Vol. 54.- P. 524-526.

113. Degradation of paternal mitochondria after fertilization: implications for heteroplasmy, assisted reproductive technologies and mtDNA inheritance / P. Sutovsky [et al.] // Reprod. Bio. Online.- 2004.- Vol. 8, №1.- P. 24-33.

114. Van Blerkom, J.ATP content of human oocytes and developmental potential and outcome after in-vitro fertilization and embryo transfer / J. Van Blerkom, P. Davis, J. Lee // Hum. Reprod.- 1995.- Vol. 10.- P. 415-424.

115. Murakoshi, Y. Embryo developmental capability and pregnancy outcome are related to the mitochondrial DNA copy number and ooplasmic volume / Y. Murakoshi, K. Sueoka, K. Takahashi // J Assist Reprod Genet.- 2013.-Vol. 30.- P. 1367-1375.

116. Low oocyte mitochondrial DNA content in ovarian insufficiency / C. Jacques [et al.] // Hum. Reprod.- 2005.- Vol. 20, № 3.- P. 593-597.

117. Relationship between oocyte abnormal morphology and intracytoplasmic sperm injection outcomes : a meta-analysis /A. S. Setti [et al.] // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol.- 2011.- Vol. 159.- P. 364-370.

118. Body mass index is negatively correlated with the response to controlled ovarian stimulation but does not influence oocyte morphology in ICSI cycles / A. Souza [et al.] // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol.- 2012.- Vol. 163.- P. 175-179.

119. GnRH agonist versus GnRH antagonist in assisted reproduction cycles: oocyte morphology / A. M. M. Cota[et al.] // Reprod. Biol. Endocrinol.- 2012-Vol. 12.- P. 10-33.

120. Факторы риска развития дисморфизмов ооцитов в программах вспомогательных репродуктивных технологий / А. Г. Горшкова [и др.] // Акушерство и гинекология.- 2015.- Т. 5, С. 6673.

121. Yoldemir, Т. Does the duration of gonadotropin stimulation affect embryo quality on post-retrieval day 3? /T. Yoldemir /Gynecol Endocrinol.-Vol. 27.- P. 324-330.

122. Relationship between granular cytoplasm of oocytes and pregnancy outcome following intracytoplasmic sperm injection / S. Kahraman [et al.] // Hum. Reprod.- 2000.- Vol. 15, № 11.- P. 2390-2393.

123. Intracytoplasmic sperm injection: correlation of oocyte grade based on polar body, perivitelline space and cytoplasmic inclusions with fertilization rate and embryo quality /P. Xia // Hum. Reprod.- 1997.- Vol. 12.- P. 1750-1755.

124. Importance of cytoplasmic granularity of human oocytes in in vitro fertilization treatments / P. Fancsovits [et al.] // Acta Biol. Hung.-2012.- Vol. 63, № 2.- P. 189-201.

125. Ubaldi, F. Morphological selection of gametes / F. Ubaldi, L. Rienzi // Placenta.- 2008.- Vol. 29.- P. 115-120.

126. Грубозернистая деструкция цитоплазмы ооцитов в цикле ЭКО / Н. П. Макарова [и др.] // Акушерство и гинекология.- 2012.- Т. 8.- С. 103-105.

127. Ebner, Т. Occurrence and developmental consequences of vacuoles throughout preimplantation development / T. Ebner, M. Moser, M. Sommergruber //Fertil Steril.- 2005.- Vol. 83, № 6.- P. 1635-1640, 2005.

128. An oocyte score for use in assisted reproduction / M. Wilding [et al.] // J Assist Reprod Genet.- 2007.- Vol. 24.- P. 350-358.

129. Otsuki, J. Lipofuscin bodies in human oocytes as an indicator of oocyte quality / J. Otsuki, Y. Nagai, K. Chiba / J. Assist. Reprod. Genet.-2007.-Vol. 24, № 7.- P. 263-70.

130. The relationship between pregnancy outcome and smooth endoplasmic reticulum clusters in MII human oocytes / J. Otsuki [et al.] // Hum. Reprod.- 2004.-Vol. 19, № 7.- P. 1591-1597.

131. Prognosis of oocytes showing aggregation of smooth endoplasmic reticulum / T. Ebner [et al.] // Reprod Biomed Online.- 2008.- Vol. 16.- P 113-118.

132. Ultrastructure of tubular smooth endoplasmic reticulum aggregates in human metaphase II oocytes and clinical implications / R. Sa [et al.] // Fertil Steril.-2011.- Vol. 96, № 1.- P. 143-149.

133. Donor oocyte dysmorphisms and their influence on fertilization and embryo quality / J. Ten [et al.] / Reprod Biomed Online.- 2007.- Vol. 14.- P. 4048.

134. Oocyte morphology correlates with embryo quality and pregnancy rate after intracytoplasmic sperm injection / D. Loutradis [et al.] // Fertil. Steril.-1999.- Vol. 72.- № 2.- P. 240-244.

135. Perivitelline space granularity: a sign of human menopausal gonadotrophin overdose in intracytoplasmic sperm injection /H. Hassan-Ali [et al.] // Hum. Reprod.- 1998.- Vol. 13, № 12.- P. 3425-3430.

136. Oocyte morphology does not correlate with fertilization rate and embryo quality after intracytoplasmic sperm injection / P. De Sutter [et al.] // Hum. Reprod.- 1996.- Vol. 11, № 3.- P. 595-597..

137. Макарова, Н. П. Критерии оценки качества ооцитов в циклах ИКСИ: взгляд клинического эмбриолога / Н. П. Макарова, Е. А. Калинина // Гинекология.- 2012.- Т. 14.- С. 24-28.

138. Meiotic spindle presence and oocyte morphology do not predict clinical ICSI outcomes: a study of 967 transferred embryos / S. Chamayou [et al.] // Reprod Biomed Online.- 2006.- Vol. 13.- P. 661-667.

139. Morphological criteria of oocyte quality / K. Lasiene [et al.] / Medicina (Kaunas).- 2009.- Vol. 45, № 7.- P. 509-515.

140. Coarse granulation in the perivitelline space and IVF-ICSI outcome / J. Farhi [et al.] // J. Assist. Reprod. Genet.- 2002.- Vol. 19, № 12.- P. 545-549.

141. Oocyte morphology on day 0 correlates with aneuploidy as detected by polar body biopsy and FISH / A. G. Schmutzler [et al.] // Arch. Gynecol. Obstet.- 2014.- Vol. 289, № 2.- P. 445-450.

142. Polar body morphology and spindle imaging as predictors of oocyte quality / L. De santis [et al.] // Reprod Biomed Online.- 2005.- Vol. 11.- P. 36-42.

143. Gabrielsen, A. The impact of the zona pellucida thickness variation of human embryos on pregnancy outcome in relation to suboptimal embryo development . A prospective randomized controlled study / A. Gabrielsen, S. Lindenberg, K. Petersen // Hum. Reprod.- 2001.- Vol. 16, № 10.- P. 2166-2170.

144. Oocyte morphology predicts outcome of intracytoplasmic sperm injection / P. F. Serhal [et al.] // Hum. Reprod.- 1997.- Vol. 12, № 6.- P. 1267-1270.

145. Pronuclear morphology predicts embryo development and chromosome constitution /B. Balaban [et al.] // Hum. Reprod.- 2004.- Vol. 8, № 6.- P. 695-700.

146. Impact of preimplantation genetic diagnosis on IVF outcome in implantation failure patients/ T. Pehlivan [et al.] // Reprod. Biomed. Online.- 2003.- Vol. 6, №2.- Р. 232-237.

147. Сокур, C. А. Оптимизация исходов программ вспомогательных репродуктивных технологий у супружеских пар с повышенным уровнем анеуплоидии в сперматозоидах: дисс. канд. мед. наук: 14.01.01/ С. А. Сокур. М., 2012. - 146 с.

148. Нерсеян Р.А. Руководство ВОЗ по стандартизованному обследованию и диагностике бесплодных супружеских пар / Р.А. Нерсеян-М.: «МедПресс»,1997.- 10 — 91с.

149. Hardy, K. Maintenance of the inner cell mass in human blastocysts from fragmented embryos / K. Hardy, J. Stark, R. M. L. Winston // Biol. Reprod.-2003.- Vol. 68.- P. 1165-1169.

150. Преимплантационный генетический скрининг у супружеских пар с патозооспермией: анализ затраты-эффективность / Н. В. Долгушина [и др.] // Акушерство и гинекология.-2014.- Т. 4.- С. 51-61.

151. Постановление Правительства РФ от 18 октября 2013 г. N 932 г. Москва (ред. от 29.05.2014) 'О программе государственных гарантий бесплатного оказания гражданам медицинской помощи на 2014 год и на плановый период 2015 и 2016 годов'. [Электронный ресурс] - 2013. - Режим доступа: http://www.rg.ru/printable/2013/10/18/zdorovie-dok.html.

152. Basal level of anti-Mullerian hormone is associated with oocyte quality in stimulated cycles / T. Ebner[et al.] // Hum. Reprod.- 2006.- Vol. 21, № 8.- P. 2022-2026.

153. Is the zona pellucida thickness of human embryos influenced by women's age and hormonal levels? / H. Balakier [et al.] // Fertil. Steril.- 2012/-Vol. 98, №1.- P. 77-83.

154. Chromosomal abnormalities in a series of 6733 human oocytes in preimplantation diagnosis for age-related aneuploidies / A. Kuliev [et al.] Reprod. Biomed. Online.- 2003.- Vol. 6, № 1.- P. 54-59.

155. Oocyte morphology on day 0 correlates with aneuploidy as detected by polar body biopsy and FISH / A. G. Schmutzler [et al.] // Arch. Gynecol. Obstet.- 2014.- Vol. 289.- P. 445-450.

156. Inflammatory pathways linking obesity and ovarian dysfunction / N. Yilmaz [et al.] // J. WOMEN'S Heal.- 2009.- Vol. 18, № 5.- P. 5-8.

157. Triggering ovulation with gonadotropin-releasing hormone agonists does not compromise embryo implantation rates / B. Acevedo [et al.] // Fertil. Steril.- 2006.- Vol. 86, № 6.- P. 1682-1687.

158. The use of gonadotropin-releasing hormone (GnRH) agonist to induce oocyte maturation after cotreatment with GnRH antagonist in high-risk patients undergoing in vitro fertilization prevents the risk of ovarian hyperstimulation syndrome: a prospective rando / L. Engmann [et al.] // Fertil. Steril.- 2008.- Vol. 89, №1.- P. 84-91.

159. Severe cytoplasmic abnormalities of the oocyte decrease cryosurvival and subsequent embryonic development of cryopreserved embryos / B. Balaban [et al.] // Hum. Reprod.- 2008.- Vol. 23, № 8.- P. 1778-1785.

160. Mitochondrial DNA content and 4977 bp deletion in unfertilized oocytes / C. C. W. Chan [et al.] // Mol. Hum. Reprod.- 2006.-Vol. 11, № 12.- P. 843-846.

161. Agarwal, A. Role of oxidative stress in female reproduction / A. Agarwal, S. Gupta, R. K. Sharma // Reprod. Biol. Endocrinol.- 2005.- Vol. 3.- P. 28.

162. Ultrastructure of human mature oocytes after slow cooling cryopreservation using different sucrose concentrations / S. A. Nottola [et al.] // Hum. Reprod.- 2007.- Vol. 22, № 4.- P. 1123-1133.

163. Oxidative stress in an assisted reproductive techniques setting / A. Agarwal [et al.] // Fertil. Steril.- 2006.- Vol. 86, № 3.- P. 503-512.

164. Aneuploidy across individual chromosomes at the embryonic level in trophectoderm biopsies: changes with patient age and chromosome structure / J. M. Franasiak [et al.] // J. Assist. Reprod. Genet.- 2014.- Vol. 31.- P. 1501-1509.

165. Does high body mass index increase the risk of miscarriage after spontaneous and assisted conception? A meta-analysis of the evidence / M. Metwally [et al.] // Fertil. Steril.- 2008.- Vol. 90, № 3.- P. 714-726.

166. Association of body mass index with embryonic aneuploidy / K. N. Goldman [et al.] // Fertil. Steril.- 2015.- Vol. 103, № 3.- P. 744-748.

167. Array comparative genomic hybridisation on first polar bodies suggests that non-disjunction is not the predominant mechanism leading to aneuploidy in humans / S. Gabriel [et al.] // J. Med. Genet.- 2011.- Vol. 48.- P. 433-437.

168. Kinetochore geometry defined by cohesion within the centromere. / T. Sakuno, K. Tada, Y. Watanabe // Nature.- 2009.- Vol. 458, № 7240. -P. 852858.