Совершенствование технологии промышленного производства и обеспечение качества поливалентных сывороток крови животных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат наук Сусский, Евгений Владимирович

• Сусский, Евгений Владимирович
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Сусский, Евгений Владимирович

Введение....................................................................................7

1. Обзор литературы......................................................................17

1.1. Этиология и распространение вирусно-бактериальных респираторных и желудочно-кишечных инфекций животных...............................17

1.2. Биологическая характеристика возбудителей респираторно-кишечных инфекций крупного рогатого скота .........................................21

1.2.1. Вирусные пневмоэнтериты крупного рогатого скота...................21

1.2.1.1. Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота...............22

1.2.1.2. Парагрипп-3 крупного рогатого скота....................................27

1.2.1.3. Вирусная диарея-болезнь слизистых оболочек крупного рогатого скота (В Д - БС КРС)..........................................................35

1.2.1.4. Респираторно-синцитиальная инфекция крупного рогатого скота (РСИ).............................................................................39

1.2.1.5. Аденовирусная инфекция крупного рогатого скота....................41

1.2.1.6. Рота- и коронавирусные инфекции крупного рогатого скота........42

1.2.2. Бактериальные возбудители желудочно-кишечных и респираторных заболеваний крупного рогатого скота.......................................44

1.2.2.1. Сальмонеллезы.................................................................44

1.2.2.2. Пастереллезы животных......................................................49

1.2.2.3. Эшерихиозы животных.......................................................55

1.2.3. Ассоциированные вирусо-бактериальные инфекции у крупного рогатого скота...................................................................63

1.4. Поливалентные сыворотки - эффективное средство для лечения и профилактики пневмоэнтеритов крупного рогатого скота................72

1.4.1. Общие принципы изготовления гипериммунных сывороток..........72

1.4.2. Сыворотки против эшерихиоза................................................75

1.4.3. Сыворотки против сальмонеллеза............................................78

1.4.4. Сыворотки против пастереллеза...............................................80

1.4.5. Поливалентные гипериммунные сыворотки................................82

1.5. Система обеспечения качества лечебных сывороток на предприятиях биологической промышленности..............................................85

2. Собственные исследования.......................................................91

2.1. Материалы и методы...........................................................91

2.2. Результаты исследований.....................................................119

2.2.1. Разработка и стандартизация методов изготовления и контроля качества исходных материалов для промышленного производства гипериммунных сывороток крови животных..............................119

2.2.2. Совершенствование и стандартизация технологии производства и контроля качества воды очищенной и воды для инъекций.............123

2.2.3. Оптимизация и стандартизация технологических процессов производства гидролизатных питательных сред..........................131

2.2.4. Оптимизация и масштабирование процессов периодического культивирования пастерелл, сальмонелл и эшерихий...................142

2.2.5. Разработка и стандартизация технологических процессов производства и методов контроля активности вирусных антигенов....................150

2.2.5.1. Паспортизация сублиний клеток MDBK-субстратов производства вирусов ПГ-3 и ИРТ крупного рогатого скота........................ 150

2.2.5.2. Цитометрический анализ сублиний клеток MDBK....................154

2.2.5.3. Оптимизация условий промышленного культивирования вирусов ПГ-3 и ИРТ крупного рогатого скота.....................................162

2.2.6. Система менеджмента качества - основа эффективного производства и стандартизации лечебных СК животных...................................169

2.2.7. Разработка и стандартизация технологии производства и обеспечение качества «иммуносерум» - сыворотки для лечения и профилактики вирусных пневмоэнтеритов телят.............................................178

2.2.7.1. Отбор и паспортизация штаммов культуральных моделей для производства вирусных антигенов.....................................179

-42.2.7.2. Разработка технологии изготовления и оценка эффективности комплексных антигенов для гипериммунизации волов-продуцентов сыворотки против вирусных пневмоэнтеритов КРС..................182

2.2.7.3. Разработка технологии серийного производства и обеспечения качества поливалентной сыворотки против вирусных пневмоэнтеритов телят.....................................................187

2.2.7.4. Лечебная и профилактическая эффективность поливалентной сыворотки против вирусных пневмоэнтеритов телят ..................................................................................195

2.2.8. Разработка и стандартизация технологии производства и обеспечение качества «Сыворотки антиадгезивной антитоксической против эшерихиоза сельскохозяйственных животных»........................199

2.2.8.1. Селекция, отбор и паспортизация штаммов эшерихий для производства поливалентного антигена..............................200

2.2.8.2. Масштабирование и оптимизация технологии производства поливалентного эшерихиозного антигена...........................210

2.2.8.3. Разработка оптимальной схемы производства и обеспечение качества «Сыворотки антиадгезивной антитоксической против эшерихиоза сельскохозяйственных животных»...................215

2.2.8.4. Профилактическая и терапевтическая эффективность «Сыворотки антиадгезивной антитоксической против эшерихиоза сельскохозяйственных животных».....................................221

2.2.9. Разработка и стандартизация технологии производства и обеспечение качества «Сыворотки против пастереллеза, сальмонеллеза, эшерихиоза, парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота».................................................................................230

2.2.9.1. Изучение, отбор и паспортизация штаммов бактерий и вирусов для изготовления поливалентного антигена...............................230

-52.2.9.2. Разработка и стандартизация технологических процессов производства и контроля бактериальных и вирусных антигенов.....................................................................240

2.2.9.3. Разработка технологии производства и обеспечения качества поливалентной сыворотки крови против респираторно-кишечных инфекций крупного рогатого скота....................................247

2.2.9.4. Лечебная и профилактическая эффективность поливалентной сыворотки против респираторно-кишечных инфекций крупного рогатого скота..............................................................254

2.2.10. Совершенствование технологии производства и обеспечение качества поливалентных сывороток крови животных в соответствии с требованиями ОМР.......................................................263

2.2.11. Технико-экономическое обоснование инноваций в технологии производства и обеспечении качества гипериммунных сывороток крови животных..............................................................276

2.2.12. Транспортировка и хранение лечебных и иммунобиологических препаратов в системе «Холодовой цепи».............................284

3. Заключение...........................................................................292

4. Выводы.................................................................................313

5. Практические предложения.......................................................316

6. Список литературы..................................................................318

7. Приложение...........................................................................381

7.1.Паспорта штаммов...............................................................382

7.2.Нормативная документация....................................................397

7.3.Акты испытаний...................................................................422

7.4.Патент ы..............................................................................435

Условные сокращения

АА — аминный азот

БА - бактериальные антигены

БХ - бульон Хоттингера

ВИ - вода для инъекций

ВО - вода очищенная

ВОЗ - Всемирная торговая организация

ВП - волы продуценты СК

ВГНКИ - Всероссийский Государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для

животных и кормов BCM - вируссодержащий материал BP - вспомогательные работы ГА - гемагглютинин ГАЕ - гемагглютинирующая единица Д - доза заражения ИФА - иммуноферментный анализ ИБП - иммунобиологические препараты ИП - индекс пролиферации ИРТ - инфекционный ринотрахеит ККТ - критические контрольные точки MDBK - перевиваемая линия почки телят M К - микоплазмы-контаминанты ММ - микробиологический метод ПД - нормативная документация ПЛК - перевиваемая линия клеток ПМ - посевной материал ПР - подготовительные работы ПС - питательная среда

ПКГ - программированная клеточная гибель - апоптоз

ПЦ - проточная цитометрия

ПЭГ - полиэтиленгликоль

ПХ - перевар Хоттингера

ПГ-3 - парагрипп-3 КРС

РН - реакция нейтрализации

РГА - реакция гамагппотинации

РТГА (РЗГА) - реакция торможения (задержки) гамагглютинации

РП - регламент производства

РДП - реакция диффузной преципитации

СК - сыворотка крови

СМК — система менеджмента качества

СТО - стандарт организации

ТК - тест-культура клеток

ТП - технологические процессы

ТУ - технические условия

УФ - ультрафильтрация

УК - урожай клеток

ФБР — фосфатно-буферный раствор

ФХЛ - фторхинолоны

ЦПД — цитопатогенное действие

ЦХМ — цитохимический метод

ЭФ — метод электрофореза

GMP - Goog manufacturing practice (надлежащая производственная практика) GLP - Goog Laboratory Practice (надлежащая лабораторная практика) LDîo/cm3 - 50%-ная летальная доза M.S. - Master Seed (главный посевной материал) W.S. - Working Seed (рабочий посевной материал) P.S. - Production Seed (производственный посевной материал) SL.S. - Seed Lot System (система посевных материалов)

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Совершенствование технологии промышленного производства и обеспечение качества поливалентных сывороток крови животных»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Респираторно-кишечные (РКИ) инфекции занимают ведущее место в патологии КРС, на долю которых приходится от 55-70 до 100% заболеваний новорожденных телят. Решающую роль в снижении естественной резистентности животных играют резкие изменения условий содержания, кормления и санитарно-гигиенических норм, скученное содержание на ограниченной территории, возникновение стрессов, завоз инфицированных животных, а также несвоевременная выпойка молозива новорожденным телятам [81, 139, 164, 200, 323,357].

Ведущую роль в этиологии РКИ новорожденных телят занимают вирусы парагриппа-3 (ПГ-3), инфекционного ринотрахеита (ИРТ), диареи - болезни слизистых оболочек (ВД-БС), ротавирусы (РВ), короновирусы (КВ), аденовирусы (АД) и возбудители пастереллеза, сальмонеллеза, эшерихиоза и ряд других инфекций, дифференциальная диагностика которых затруднена в условиях производства. Заболевание телят протекает, в основном, по типу ассоциативных инфекций (АИ), а пусковым механизмом острых заболеваний считают вирусы, которые разрушают эпителий респираторного и желудочно-кишечного трактов и создают благоприятные условия для размножения микроорганизмов [30, 56, 367, 382,389, 451].

Для профилактики и лечения РКИ новорожденных телят рекомендуется вакцинация стельных коров, применение антибиотиков, иммуноглобулинов, моно- и поливалентных СК животных. Специфическая профилактика новорожденных телят малоэффективна, поэтому для защиты животных от заражения в первые часы после рождения применяют молозиво, антибактериальные препараты, а при подтвержденном диагнозе - моновалентные СК. Однако для экстренной профилактики и лечения АИ наиболее перспективны поливалентные СК животных [56, 66, 161, 215, 252, 359].

В последние годы разработан целый ряд поливалентных СК против пневмоэнтеритов КРС, которые серийно не производятся и не применяются в

ветеринарной практике [66, 293, 409]. Поэтому исследования, направленные на разработку и стандартизацию технологии серийного производства и обеспечения качества поливалентных СК для профилактики и лечения пневмоэнтеритов КРС являются весьма актуальными и востребованными практикой.

Степень разработанности проблемы. Изучению вопросов разработки, производства, контроля и применения гипериммунных СК посвящено большое количество работ отечественных и зарубежных авторов [160, 203, 204, 205, 331].

Биологическая промышленность Российской Федерации на данном этапе готовит более 16 видов моно- и поливалентных СК животных и иммноглобулинов технология производства, которых достаточно трудоемка и не соответствует требованиям отечественных и международных стандартов. Наиболее значимыми элементами повышения качества и эффективности производства лечебных СК животных является «Система обеспечения качества», осуществляемая в соотвествии с требованиями GMP и ГОСТ Р 52249-2009 [81, 160,317, 325,381].

Недостаточно изученными остается широкий круг проблем, связанных с оснащением производства современным оборудованием, производственными помещениями высокого класса чистоты, совершенствованием ТП изготовления и методов контроля качества лечебных СК животных. Практического решения требуют также вопросы подбора и паспортизации штаммов бактерий и вирусов, изготовления и стандартизации гидролизатных питательных сред (ГПС), оптимизации условий периодического культивирования различных видов микроорганизмов, технологии изготовления и контроля инактивированных антигенов, а также схем гипериммунизации и эксплуатации животных-продуцентов (ЖП). Необходимо также механизировать и автоматизировать ТП получения, обработки, фасовки, укупорки и этикетировки, контроля качества и доставки промышленных серий СК потребителю в системе «Холодовой цепи».

При организации серийного производства поливалентных СК согласно требованиям ГОСТ Р 52249-2009 и ГОСТ 9001-2011 особое внимание следует уделять разработке «Системы обеспечения качества» и применению в

производстве «Системы посевных материалов» (Seed Lot System) и методов обеспечения их качества. Системный подход в производственной практике не получил широкого применения при изготовлении лечебных СК, поэтому его реализация на практике является актуальной. Решение указанных проблем требует также подбора современного оборудования и технологических решений, позволяющих существенно повысить активность и конкурентоспособность, а также снизить себестоимость промышленных серий поливалентных СК животных [81,92,314, 325].

Поливалентные СК против РКИ и вирусных пневмоэнтеритов телят в РФ не производились соответственно до 2003 и 2009 годов, но были востребованы практикой, что послужило основанием для разработки и серийного производства оригинальных по составу и технологии изготовления «Сыворотки против пастереллеза, сальмонеллеза, эшерихиоза, парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота», «Иммуносерум-сыворотки для лечения и профилактики вирусных пневмоэнтеритов телят», а также «Сыворотки антиадгезивной антитоксической против эшерихиоза сельскохозяйственных животных». При реализации этих задач предусматривалось решение целого ряда научных и технологических проблем, в том числе повышение качества, эффективности и конкурентоспособности лечебных препаратов на отечественном и международном рынках. Внедрение в практику указанных инноваций при серийном производстве и поливалентных СК является приоритетной задачей биопредприятия.

Цель и задачи исследований Цель работы - разработка и усовершенствование технологии промышленного производства, обеспечение качества и эффективности поливалентных сывороток против респираторно-кишечных инфекций КРС и эшерихиоза сельскохозяйственных животных и разработке современных средств и методов изготовления нового препарата для профилактики и терапии вирусных пневмоэнтеритов телят в соответствии с требованиями СМР.

Для достижения поставленной цели решились следующие задачи:

-10- анализ традиционных технологий промышленного сывороточного производства;

- разработка технологических и аппаратурно-технологических схем производства исходных материалов и поливалентных сывороток;

- реинжиринг производства согласно требованиям ОМР;

- научное обоснование выбора штаммов, методов изготовления и контроля активности живых и инактивированных бактериальных и вирусных антигенов;

- определение условий гидролиза белоксодержащих материалов и методов изготовления гидролизатных питательных сред с учетом метаболизма микроорганизмов;

масштабирование процессов периодического культивирования микроорганизмов;

- научное обоснование выбора культуральных моделей для серийного производства вирусных антигенов методом проточной цитометрии (ПЦ);

- разработка технологии производства, методов обеспечения качества и эффективности «Антиадгезивной антитоксической сыворотки против эшерихиоза сельскохозяйственных животных»;

- разработка технологии производства, методов обеспечения качества и эффективности «Иммуносерум - сыворотки для лечения и профилактики вирусных пневмоэнтеритов телят»;

- разработка технологии производства, методов обеспечения качества и эффективности поливалентной сыворотки против ассоциативных респираторно-кишечных инфекций телят вирусной и бактериальной этиологии;

- усовершенствование системы хранения и транспортировки лечебных и иммунобиологических препаратов в «Системе холодовой цепи»;

- разработка нормативной документации и организация серийного производства поливалентных сывороток крови животных.

Научная новизна. Научно - обоснован единый подход к разработке и усовершенствованию технологических процессов производства, обеспечению

качества трех видов поливалентных СК с учетом требований стандартов ИСО серии 9000, правил СМР и ГОСТ 52249-2009.

Усовершенствована технология очистки воды водопроводной с использованием современного высокопроизводительного оборудования, обеспечивающего производство промышленных объемов ВО и ВИ, отвечающих требованиям национальных и международных стандартов.

Научно обоснован дифференцированный подход к условиям и длительности ферментативного гидролиза различных белоксодержащих материалов с учетом метаболизма пастерелл, сальмонелл и эшерихий. Полученные гидролизаты не оказывают влияния на морфогенез и антигенные свойства микроорганизмов.

Определены параметры периодического культивирования микроорганизмов, позволяющие интенсифицировать кинетические процессы размножения, сократить время, многократно повысить уровень накопления и жизнеспособность пастерелл, сальмонелл и эшерихий.

Впервые методом ПЦ отобрана и аттестована культуральная модель (MDBK-E), отвечающая требованиям отечественных и международных стандартов, для серийного производства и контроля активности вирусов парагриппа-3 (ПГ-3) и инфекционного ринотрахеита (ИРТ) крупного рогатого скота.

Научно обоснованы требования к штаммам, технологии производства и контролю качества бактериальных и вирусных антигенов. Проведен скрининг изолятов, эталонных и производственных штаммов и отобраны возбудители вирусов, пастереллеза, сальмонеллеза и эшерихиоза с полным набором факторов патогенности, на основе которых разработаны комплексные препараты с выраженными антигенными свойствами. В процессе гипериммунизации не выявлено конкуренции антигенов и аллергизации животных-доноров.

Впервые разработаны технология производства, система обеспечения качества и эффективная схема применения «Иммуносерум-сыворотки для лечения и профилактики вирусных пневмоэнтеритов телят». Оригинальность и новизна способа получения препарата защищены патентом РФ №2407543.

Впервые разработаны технологическая схема производства и система обеспечения качества более эффективной «Сыворотки антиадгезивной антитоксической против эшерихиоза сельскохозяйственных животных», обеспечивающая защиту животных от широкого спектра вирулентных штаммов с полным набором факторов патогенности (подана заявка на «Способ изготовления препарата»).

Усовершенствована технология серийного производства, система обеспечения качества и способ применения «Сыворотки против пастереллеза, сальмонеллеза, эшерихиоза, парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота».

Разработаны технология серийного производства, система обеспечения качества и способ применения «Сыворотки против пастереллеза, сальмонеллеза, эшерихиоза, парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота».

Практическая значимость работы.

• Экспериментально и экономически обосновано применение разработанных технологических решений при серийном производстве высокоэффективных поливалентных сывороток крови для профилактики и лечения заболеваний вирусной и бактериальной этиологии сельскохозяйственных животных.

• Проведено масштабирование технологии производства поливалентных сывороток крови животных.

• Созданы и апробированы технологические линии для комплексной очистки воды водопроводной, определены общие требования к условиям и длительности ферментативного гидролиза белоксодержащих материалов с учетом требований метаболизма микроорганизмов.

• Определены условия серийного производства и требования к качеству бактериальных и вирусных антигенов.

• Внедрена в производство «Система обеспечения качества» лечебных сывороток в соответствии с требованиями стандартов ГОСТ ИСО 9001-2011, правил GLP, GMP и ГОСТ Р 52249-2009.

• Созданы и реализованы на практике «Система посевных материалов» (Seed Lot System) микроорганизмов, вирусов и клеточных культур.

• Разработана и внедрена в условиях биопредприятия «Система менеджмента качества» гипериммунных СК животных на основе стандартов ИСО серии 9000:2000.

• Отработана «Система управления качеством» на основе статистических методов контроля соответствия активности лечебных сывороток и технологических процессов производства стандартным показателям.

• Создана и успешно функционирует «Система холодовой цепи», позволяющая осуществлять регламентированное хранение и своевременную доставку лечебных и иммунобиологических препаратов потребителю.

• Разработаны и утверждены в установленном порядке комплекты нормативных документов на производство, контроль и применение поливалентных сывороток. Организовано серийное производство «Сыворотки против пастереллеза, сальмонеллеза, эшерихиоза, парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота», «Сыворотки антиадгезивной, антитоксической против эшерихиоза сельскохозяйственных животных» и «Иммуносерум-сыворотки для лечения и профилактики вирусных пневмоэнтеритов телят».

Положения диссертации, выносимые на защиту:

- отбор и паспортизация штаммов, обладающих полным набором факторов патогенности;

- использование метода ПЦ для отбора и паспортизации перевиваемых линий клеток, предназначенных для изготовления и контроля вирусных антигенов;

-14- методы получения и контроля посевного материала для серийного производства бактериальных и вирусных антигенов и перевиваемой линии клеток;

- условия периодического культивирования микроорганизмов;

- технологические линии по производству ВО и ВИ, ГПС, вирусных и бактериальных антигенов и поливалентных СК животных;

- усовершенствование схем гипериммунизации и эксплуатации животных-продуцентов при производстве поливалентных сывороток крови;

- система управления качеством, предусматривающая применение статистических методов контроля исходного сырья, полуфабрикатов и готовой продукции, постоянный мониторинг показателей ТП и их коррекция при производстве поливалентных СК животных.

Внедрение результатов. На биопредприятии внедрены разработанные технологии серийного производства «Сыворотки против пастереллеза, сальмонеллеза, эшерихиоза, парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота», «Сыворотки антиадгезивной, антитоксической против эшерихиоза сельскохозяйственных животных» и «Иммуносерум-сыворотки для лечения и профилактики вирусных пневмоэнтеритов телят», которые успешно реализуются и применяются в ветеринарной практике. Рекламаций на качество поливалентных сывороток в период 2006-2013 гг. не поступало. Годовой экономический эффект от внедрения в практику указанных инноваций составил 3348233,18 рублей.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на:

XVIII, XIX, XX, XXI, XXII Международной конференции и дискуссионного научного клуба. Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии - Украина, Крым, Ялта-Гурзуф, 2010-2014 гг;

Международной конференции, посвященной 80-летию организации ВГНКИ «Лекарственные препараты для животных: разработка, производство, эффективность и качество», Москва, 2011;

Международной научно-практической конференции «Научные основы, производства и обеспечение качества биологических препаратов АПК», Щелково, 2012;

Международном симпозиуме, посвященном 80-летию Аграрного университета Молдова-Кишенев, 2013;

Международной научно-практической конференции, посвященной 90-летию РУП «Института Экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского -Минск, 2013.

Публикация научных исследований. Основные положения диссертационной работы опубликованы в 42 научных работах, в том числе в 1 монография и 13 статей в изданиях по перечню, рекомендованному ВАК Минобрнауки России для публикации материалов докторских диссертаций. По результатам исследований получены 3 Патента РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 439 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих материалы и методы, результаты исследований; заключения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения на 58 страницах. Диссертация иллюстрирована 68 таблицами и 32 рисунками. Список литературы включает 604 источника, из которых 431 отечественных и 173 зарубежных авторов. В приложении представлены копии документов, подтверждающих достоверность результатов работы, её научную и практическую значимость.

Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Автором лично сформулирована проблема, постановка цели и задач исследований и их реализация в условиях производства. Осуществлен подбор современного оборудования и на их основе созданы и апробированы технологические линии по изготовлению и контролю ВО и ВИ, ГПС и стандартных бактериальных антигенов с использованием современных биореакторов и периодического метода культивирования микроорганизмов. Лично автором или под его руководством также подобраны штаммы, схемы

гипериммунизации и эксплуатации ВП, оптимизированы условия и технология производства СК, а также хранения и транспортировки лечебных препаратов в «Системе холодовой цепи».

Для решения этих задач автором на предприятии создан «Отдел контроля качества» (ОКК), внедрены статистические методы контроля и «Система обеспечения качества», что позволило проводить валидацию и коррекцию ТП производства на всех этапах технологического цикла и повысить стабильность и активность поливалентных СК животных. Отдельные этапы работы проводились совместно со специалистами ВНИИТИБП и ВГНКИ. Все материалы диссертации проанализированы и обобщены лично автором. Вклад в работу других авторов отражен в публикациях по теме диссертации.

Благодарности. Автор выражает благодарность научному консультанту -директору ВНИТИБП, доктору ветеринарных наук, профессору, академику РАСХН А.Я. Самуйленко. В выполнении некоторых разделов диссертации принимали участие и оказывали практическую и консультативную помощь доктор биологических наук В.И. Еремец, доктор биологических наук Т.А. Скотникова, доктор биологических наук В.И. Смоленский, доктор ветеринарных наук М.К. Пирожков, заведующий лабораторией «ИБХ им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова» C.B. Хайдуков, заместитель директора РУП «Института экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского» П.А. Красочко, за что приносим им сердечную благодарность.

-171. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Этиология и распространение вирусно-бактериальных респираторных и желудочно-кишечных инфекций животных

Инфекционные заболевания наносят значительный ущерб животноводству. Несмотря на разработку и применение различных средств специфической профилактики не удается добиться стойкого благополучия по заразным болезням животных, так как широкое использование антибиотиков, живих и инактивированных вакцин привело к появлению новых высоковирулентных штаммов микроорганизмов. В связи с этим отмечен интерес к экологически безопасным средствам профилактики и лечения инфекционных заболеваний, не вызывающих изменения биологических свойств и формирования новых лекарственноустойчивых штаммов возбудителей (сыворотки, иммуноглобулины). Перевод скотоводства на промышленную технологию производства, закупка скота за рубежом, нарушение климатических условий содержания, режима кормления, гиподинамия, стрессы приводят к ослаблению резистентности организма и способствуют возникновению и распространению инфекционных заболеваний. Согласно данным ветеринарной отчетности ведущая роль в инфекционных патологиях бактериальной этиологии принадлежит эшерихиозу, пастереллезу и сальмонеллезу, вирусной — инфекционному ринотрахеиту, парагриппу-3, рота- и коронавирусным инфекциям [24, 41, 42, 43, 133, 168,255,314].

Желудочно-кишечные заболевания телят занимают ведущее место в патологии крупного рогатого скота [21, 178, 468, 514, 529]. При традиционной технологии ведения скотоводства на долю желудочно-кишечных заболеваний приходится 55-70%, при промышленной - до 100% всех случаев заболевания телят [369, 468].

В.И. Терехов отмечает, что на фермах Кубани ежегодно 42-45% новорожденных телят переболевает данной патологией, из которых около 22% погибает. При этом, как отмечает автор, на долю таких инфекционных

заболеваний новорожденных телят как эшерихиоз приходится 0,3-0,8%, а стрептококкоз - 0,005-0,02% случаев. О том, что острые кишечные болезни телят регистрируются в большинстве случаев как незаразные говорят данные приведенные в отчете ВНИИЗЖ за 2012 г, посвященные эпизоотической ситуации в стране, где указывается, что в 2011 г было зарегистрировано всего 3711 случаев колибактериоза, 782 - энтеротоксемии, 509 - рота-коронавирусной инфекции, 372 - вирусной диареи и 178 диплококковой инфекции. [373,437].

Болезни органов дыхания и пищеварения часто регистрируются у телят с 1-го дня жизни до 6-и месячного возраста. В отдельных хозяйствах заболеваемость их достигает до 65-100% от числа народившихся, а часть животных (от 37,2- до 55,6%) переболевает два и более раз [16, 323, 369, 436, 456, 468, 556]. Сроки заболевания телят совпадают с так называемым «технологическим» возрастным иммунодефицитом.

Широкое распространение желудочно-кишечных заболеваний молодняка наносит огромный ущерб сельскохозяйственному производству, сдерживает развитие животноводства, служит одной из причин снижения продуктивности животных, вынужденного убоя, падежа, больших затрат на лечение и профилактику [51]. Летальность и вынужденный убой телят от желудочно-кишечных болезней составляет 5-100%. Желудочно-кишечные заболевания, как правило, стационарны и имеют выраженную сезонность. Массовый характер они приобретают в стойловый период [349, 367, 556].

Учитывая наличие при кишечных и респираторных заболеваниях молодняка животных иммунодефицитных состояний, важную роль условно-патогенных микроорганизмов и вирусов в этиопатогенезе этих болезней, неэффективность во многих случаях лечения их антибиотиками (из-за приобретения устойчивости условно-патогенных микроорганизмов к большинству антибиотиков), ! заслуживают внимания работы, направленные на разработку и применение новых специфических иммунных сывороток, препаратов-иммуномодуляторов и антагонистов патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

Кроме того, в связи с тем, что у животных, особенно при острых кишечных и респираторных заболеваниях, все чаще диагностируют смешанное инфицирование, в настоящее время особую актуальность приобретают поливалентные препараты против наиболее распространенных в определенных регионах возбудителей болезней.

Для этого необходимо повышение производственного и научно-технического потенциала ветеринарной биологической промышленности, разработка и освоение новых ветеринарных средств, отвечающих современным требованиям.

В комплексе мероприятий по борьбе с кишечными и респираторными заболеваниями животных широко используют гипериммунные сыворотки крови волов-продуцентов. Необходимо отметить, что производство лечебно-профилактических сывороток представляет собой трудоемкий, сложный и длительный процесс, в котором можно выделить следующие основные звенья: подбор иммуногенных штаммов микроорганизмов, приготовление стандартной питательной среды для их выращивания, культивирование штаммов, инактивация выращенных культур, отбор будущих животных-продуцентов, их гипериммунизация, взятие крови, обработка, получение сыворотки, консервация, отстой, фильтрация, расфасовка, укупорка, этикетирование и контроль готового препарата [127, 204, 212].

Простой перечень основных звеньев технологического процесса получения сывороток свидетельство его длительности и трудоемкости.

Вирусные инфекции в данной ситуации, являясь пусковым фактором развития инфекционных болезней, создают возможность бактериальным агентам проникать в нижние отделы респираторного и желудочно-кишечного тракта и вызывать воспалительные процессы [35, 95, 293, 354].

Массовая вакцинация животных, применение химиопрепаратов, антибиотиков и других веществ привели к существенному изменению этиологической структуры инфекционных заболеваний, в том числе и при желудочно-кишечной патологии молодняка крупного рогатого скота [170].

-2006 этом свидетельствуют публикации как отечественных, так и зарубежных авторов, среди которых встречаются данные о высоком удельном весе вируса диареи и ротавируса в составе ассоциаций при инфекционных энтеритах телят.

В работах В.А. Машеро [205] сообщается о полиэтиологичности желудочно-кишечных болезней телят в условиях Республики Беларусь, где возбудителями чаще всего являются вирус ИРТ - в 65,1% и вирус ПГ-3 - 55% случаев.

По данным A.M. Ламана основными причинами возникновения желудочно-кишечных заболеваний вирусно-бактериальной этиологии в животноводческих хозяйствах Гродненской области являются вирус диареи (72%), ротавирус (85%) и коронавирус (54,5%), при серологическом исследовании антитела у переболевших телят выявлялись в 82%, к вирусу диареи - 62%, коронавирусу - 68% случаев [170].

Кроме вирусов при инфекционных энтеритах телят выявляются сложные и разнообразные по своей структуре ассоциации бактерий, значение которых в инфекционной патологии ранее игнорировалось или рассматривалось как эксквизитное явление [216].

По данным Herrera-Luna et al. из проб фекалий от 230 телят здоровых и с признаками диареи в возрасте 1-6 недель отобранных на 100 фермах в Австрии были выделены: Е. coli из 17% проб, Clostridium perfringens из 21 пробы, Klebsiella spp. и Proteus spp. в 1,3 и 0,4% всех проб, соответственно [467].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Сусский, Евгений Владимирович, 2014 год

Источники сырья

I II III

Мясо говядины или конины (контроль) I 159,47 - - -

Мясо говядины или конины, фибрин II - 125,61 - 33,86

Кровяные сгустки III - - 11,71 147,76

Важное значение на результативность культивирования микроорганизмов оказывает состав гидролизатных ПС. Поэтому при производстве сред условия и длительность ферментативного гидролиза были экспериментально определены и строго регламентированы для различных видов микроорганизмов, с учетом их потребности и метаболизма.

При культивировании микроорганизмов использовались, в основном, стационарный метод (в бутылях), а также химические реакторы без контроля и регулирования основных технологических параметров. При модернизации производства для получения бактериальных антигенов применяли управляемое культивирование микроорганизмов только в «биореакторах» при регулируемых параметрах температуры, рН среды, интенсивности перемешивания, аэрации, рОг, еН, с учетом накопления и физиологического состояния тест-культур. Необходимо отметить, что использование высококачественных ГПС и

соуправляемого культивирования оказалось достаточно эффективным и дало возможность сократить время в 2 раза, повысить выход и жизнеспособность микроорганизмов соответственно в 20-50 раз и до 95% и максимально снизить применение ручного труда. Кроме того было показано, что активность антигенов в значительной степени зависит от длительности периодического культивирования бактерий пастерелл, сальмонелл и эшерихий. Экспериментально подтверждено, что для изготовления стандартных антигенов процесс культивирования микроорганизмов следует заканчивать в начале стационарной фазы роста. Данный технологический прием оказался достаточно эффективным и обеспечивал максимальный уровень жизнеспособности и производство стандартных по активности бактериальных антигенов.

При реализации указанных инноваций дополнительно было подобрано современное оборудование, смонтированы и апробированы на практике технологические линии по производству ВО и ВИ, ГПС и бактериальных антигенов, предназначенных для гипериммунизации ВП. Полученные результаты показали, что совершенствование состава и оптимизация процессов изготовления и контроля бактериальных антигенов достигнуто за счет использования стандартных по ростовым свойствам гидролизатных ПС и интенсификации ТП культивирования микроорганизмов, что позволило в итоге увеличить выход, снизить затраты и повысить активность и антигенность целевого продукта. При этом следует отметить, что уровень каждой стадии ТП оказывает заметное влияние на активность антигенов и результативность гипериммунизации животных-доноров.

При производстве «Иммуносерум-сыворотки для лечения и профилактики вирусных пневмоэнтеритов телят» осуществлена замена очищенного культурального концентрированного антитела (контроль) на коммерческие вакцины. Этот технологический прием оказался чрезвычайно эффективным и экономически оправданным (табл. 64).

В контроле себестоимость 1т/доз составила 52102 при цене 57511 рублей, при этом прибыль составила 5409 рублей за 1т/доз. При использовании

коммерческих вакцин себестоимость 1т/доз поливалентной СК составила 26051 при неизменной цене за 1 т/доз равной 57511 рублей прибыль достигла 31460 рублей за 1 т/доз. В период 2011-2012гг было реализовано 233,6 тыс.доз лечебной сыворотки. Среднегодовой экономический эффект составил 120 т.доз * (314605409) = 3126100 рублей. Экономический эффект от производства 1 т.доз препарата по инновационной технологии составил 26050 рублей.

Таблица 64 - Сравнительная оценка эффективности и себестоимости производства сыворотки для лечения и профилактики вирусных пневмоэнтеритов телят с использованием культуральных антигенов и коммерческих вакцин

Себестоимость 1 тыс.доз СК

№ п/п Наименование антигенов

Наименование статей Концентрированный культуральный антиген Коммерческие вакцины

1 Производственные животные 2677,00 1338,50

2 Корма и содержание 5021,00 2510,50

3 Сырье и материалы 2808,50 1404,25

4 Зарплата 6218,50 3109,25

5 Начисления на зарплату 1865,50 932,75

6 Топливо и электроэнегия 2759,00 1379,50

7 Вспомогательное производство 25527,50 12763,75

8 Цеховые расходы 1751,50 875,75

9 Общефабричные расходы 0,00

10 Амортизация 3473,50 1736,75

11 Итого затрат 52102,00 26051,00

12 Прибыль 5409,00 31460,00

13 Цена 57511,00 57511,00

Годовой экономический эффект 3126100

Полученный эффект достигнут за счет уменьшения расходов на закупку оборудования, питательных сред и растворов, сыворотки квалификации для

культур клеток, получения и хранения перевиваемых линий в жидком азоте, культивирования вирусов, изготовление и контроль комплексных антигенов, а также снижения затрат труда и рабочего времени.

Внедрение в практику указанных инноваций позволило организовать серийное производство практически равноценных по активности (р<0,05) серий поливалентной СК, с использованием как культуральных антигенов, так и коммерческих вакцин, отвечающих требованиям отечественных и международных стандартов и востребованных практикой.

Таблица 65 - Сравнительная оценка экономической эффективности методов серийного производства «Сыворотки антиадгезивной антитоксической против эшерихиоза сельскохозяйственных животных»

Наименование технологических Значение Схема производства СК Снижение

показателей показателей традицион- модерни- затрат

ная зированная

Стоимость 1 л ГПС руб 41,42 29,28 12,14

Изготовление антигена

- сосуды - накопление бактерий - стоимость 1 л антигена (в млрд/мл руб Бутыли 1,0 517,73 Биореактор 50,0 7,32 49 510,41

материальных затратах)

Гипериммунизация ЖД

- кратность - расход антигена кол мл 17 4060 10 2960 7 1100

- длительность сут 75 40 35

-затраты на гипериммунизациго 1 гол в течение мес руб 104,58 1,48 103,10

Эксплуатация ЖД - выход СК от ВП в месяц л 13,14 13,14

- общие затраты на 1 л СК - годовой объем СК Руб л 7,96 1200 0,11 1200 7,85

- затраты на годовой объем СК руб 95486,79 1350,19 94136,6

Годовой экономический эффект руб 94136,59

Обозначения: ЖД - животные доноры;

ГПС - гидролизатная питательная среда.

Результаты внедрения в практику модернизированной технологии изготовления «Сыворотки антиадгезивной антитоксической против эшерихиоза сельскохозяйственных животных» способствовали интенсификации ТП

производства и повышению качества и стандартности препарата, что обеспечило в итоге годовой экономический эффект равный 94136, 59 рублей (табл. 65).

Предложенные нами технологические решения дали возможность повысить выход бакмассы в 49 раз и снизить затраты на изготовление 1 л гидролизатной ПС и 1 л активного антигена соответственно на 12,14 и 510,41 рублей, а также уменьшить расходы на содержание, гипериммунизацию и эксплуатацию 1 головы ВП в течение месяца на 103,1 или 98,6% по сравнению с контролем. Необходимо также отметить, что были сокращены кратность введения антигена и длительность процесса гипериммунизации на 7 инъекций и 35 суток соответственно. Кроме того были снижены общие затраты на 7,85 рубля на изготовление 1 л конечного продукта.

Таким образом, разработанная и апробированная на практике технология позволила не только интенсифицировать ТП производства, но и сократить сроки изготовления и себестоимость конечного продукта, но и увеличить выход, повысить активность, лечебные и профилактические свойства «Сыворотки антиадгезивной антитоксической против эшерихиоза сельскохозяйственных животных».

Внедрение в практику модернизированной технологической схемы изготовления лечебных препаратов позволило нам также повысить эффективность производства, существенно снизить затраты труда, средств и времени, обеспечить серийный выпуск стандартной по активности «Сыворотки против пастереллеза, сальмонеллеза, эшерихиоза, парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота» и получить годовой экономический эффект в сумме 612 438,03 рубля (табл. 66).

Полученный результат достигнут нами за счет механизации, автоматизации и стандартизации ТП производства ВО и ВИ, БХ, с использованием как мяса говядины или конины, так и отходов сывороточного производства и более

Таблица 66 - Сравнительная оценка эффективности и экономичности производства «Сыворотки против пастереллеза, сальмонеллеза, эшерихиоза, парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота» традиционным и модернизированными методами

Наименование показателя Единица Технология производства Снижение

измерения традиционная модернизированная затрат

Стоимость 1 л ГПС руб 21,48 14,16 7,32

- стоимость 1 л пастереллезного руб 429,69 14,16 415,53

антигена

- расход антигена на 1 л СК руб 3,30 0,11 3,19

Стоимость 1 л ГПС руб 39,42 27,71 1,71

- стоимость 1 л сальмонеллезного руб 394,25 5,54 388,71

антигена

- расход антигена на 1 л СК руб 6,06 0,09 5,97

Стоимость 1 л ГПС руб 41,42 29,28 12,14

- стоимость 1 л эшерихиозного руб 517,73 7,32 510,41

антигена

- расход антигена на 1 л СК руб 7,96 0,11 7,84

Стоимость 1 л антигена руб 150,6 150,6 -

ПГ-3

Стоимость 1 л антигена руб 138,7 138,7 -

ИРТ

Затраты на производство 1 л СК руб 17,32 0,31 17,01

Годовой объем выпуска поливалентной СК руб 36000

Годовые затраты на производство пек руб 623473,19 11035,17 612438,3

Годовой экономический эффект руб 612438,03

активных бактериальных антигенов. В последнем случае при регламентированных условиях культивирования выход бакмассы пастерелл, эшерихий и сальмонелл был увеличен соответственно в 20 и 50 раз. Увеличена также в 100 раз активность культуральных антигенов вирусов ПГ-3 и ИРТ крупного рогатого скота и сокращена схема гипериммунизации и оптимизированы процессы эксплуатации ВП, получения, обработки, фасовки, укупорки и контроля качества гипериммунной СК животных. Высокая востребованность практикой оригинальной по составу поливалентной СК послужила основанием для дальнейшего совершенствования ТП производства и повышения лечебной и профилактической эффективности препарата.

Результаты внедрения в практику модернизированной технологии производства поливалентных СК животных подтвердили их высокую эффективность и перспективность для ветеринарной практики. При этом достоверно показано, что новый уровень технологических решений имеет не только народнохозяйственное, но и социальное значение. По сравнению с традиционной технологией предложенный комплекс инноваций дал возможность:

- интенсифицировать и стандартизовать ТП производства, повысить активность, лечебные и профилактические свойства гипериммунных СК животных;

- сократить затраты труда, средств и времени на изготовление препаратов;

- обеспечить экологическую безопасность для обслуживающего персонала и животных-доноров;

- гарантировать серийный выпуск и высокое качество и эффективность гипериммунных СК, отвечающих требованиям потребителя;

- получить годовой экономический эффект в сумме 3832674,62 рублей.

2.2.12. Транспортировка и хранение лечебных и иммунобиологических препаратов в системе «Холодовой цепи»

Проблема сохранности качества лечебных, диагностических и иммунобиологических препаратов (ИБП) для медицинской и ветеринарной практики весьма актуальна. Это связано с тем, что лекарственные средства (ЛС), и в особенности ИБП, термолабильны, поэтому их эффективность на практике, существенным образом, зависит от условий и длительности хранения и транспортировки препаратов [232, 263, 382]. В настоящее время в соответствии с требованиями ОМР, определены общие требования к условиям хранения и доставки препаратов потребителям в системе «Холодовой цепи» [32, 33, 220, 427].

Целью работы является оптимизация и стандартизация упаковок, условий хранения и доставки качественных препаратов потребителю. Реализация этих задач на практике важна и крайне необходима, поскольку на данном этапе на

соответствие международным требованиям сертифицировано лишь около 70% предприятий ВТО, а организации медицинской и биологической промышленности РФ находятся в условиях подготовительного периода и не отвечают требованиям GMP и стандартам ИСО 9000-2000, ГОСТ Р ИСО 9001-2008 [86, 242]. Поэтому при реализации указанных задач решались вопросы модернизации складских помещений, подбору технологического оборудования и транспортных средств, подготовки кадров, а также контроля качества, условий хранения и доставки препаратов потребителям в системе «Холодовой цепи».

В последние годы Армавирская биофабрика для профилактики, лечения и диагностики заболеваний животных и человека, вирусной и бактериальной этиологии, производит 39 моно- и ассоциированных вакцин, 7 лечебных сывороток крови, 1 стимулятор иммунитета, 2 диагностических и 43 химико-фармацевтических препаратов.

Процесс хранения готовых форм препаратов на биопредприятии осуществляется раздельно в коробках из гофрированного картона в складских помещениях площадью 1070 м2, оснащенных холодильными установками 4Н124/4СС-9.2/2 СТЕ 291 MGED производства ООО «Арианда-Ю» (Россия) и приточно-вытяжной вентиляционной системой. Стены склада ограждены панелями типа «сендвич». Стыки между панелями обработаны силиконовым герметиком, а места ,их примыкания к полу и потолку скруглены, что обеспечивает эффективную уборку и обработку дезинфектантами. В местах для перемещения тележек стены помещений защищены ограждениями из нержавеющей стали. Светильники герметично встроены в потолки, обработаны специальным красителем, устойчивым к растворам 1% хлорамина и 3%-ой перекиси водорода. С целью предотвращения возможного появления устойчивых форм микроорганизмов осуществляется еженедельная смена дезинфицирующих средств. Хранение готовой продукции осуществляется на 2-х ярусных стеллажах при температуре (10±2)°С. Температурный режим поддерживается автоматически и регистрируется при помощи термографов, электронных датчиков и визуально-диспетчерской службой. Апробированная система хранения готовой продукции

обеспечивает сохранность и высокое качество готовой продукции, соответствующее требованиям НТД и потребителя.

Основанием для поставки готовой продукции потребителю служит договор «Купли-Продажи», подписанный «Заказчиком» и «Исполнителем». В соответствии с договором формируется партия вакцин и других препаратов, которые упаковывают в транспортную тару, обеспечивающую сохранность продукции во время доставки потребителю. Вакцины и лечебные СК реализуются по принципу «произведен раньше - реализован первым». Объем поставок, как правило, формируется из минимального количества серий одного вида вакцин и других видов препаратов. Упаковки продукции маркируются и регистрируются общепринятыми методами.

Согласно действующему законодательству транспортировка ИБП осуществляется специальными авторефрижераторами, самолетами или железнодорожным транспортом с использованием специальных термоконтейнеров ТМ 52 и ТМ 35.

Указанные методы доставки препаратов отличаются по экономическим, временным и качественным показателям. Поэтому перед отгрузкой ИБП и лечебных СК проводится выбор оптимального варианта доставки с учетом объема партии препаратов, местоположения заказчика, сроков и сезона года. Основным критерием при выборе метода доставки является сохранность исходного «качества» ИБП, что определяется экономическими показателями, конструктивными и технологическими возможностями используемого оборудования как при хранении на складе, так и в системе «Холодовой цепи».

Для обеспечения сельскохозяйственных предприятий диагностикумами, химико-фармацевтическими и лечебными препаратами и вакцинами на базе Армавирской биофабрики создан отдел авторефрижераторных перевозок (ОАП), который обеспечивает доставку ИБП потребителям в системе «Холодовой цепи». Авторефрижераторы оснащены климатическим, контрольным и регистрирующим оборудованием и сертифицированы (Табл. 67, рис. 31). Таблица 67 - Технические характеристики авторефрижераторов, приборов

и оборудования для транспортировки вакцин

Наименование машин, оборудования, приборов Количество Производитель

Автомобили

МАЗ 5440А8 2 МАЗ, Беларуссия

Холодильно-обогревательные установки

SL-200e 2 Фирма Termo King, США

Системы регистрации температуры

THERMOGUARD-VI 2 Фирма Termo King, США

Автономные отопители кабин

Webasto 2 Германия

Холодильно-обогревательные установки позволяют поддерживать в кузове авторефрижераторов температуру в диапозоне от -20°С до +12°С при температуре окружающего воздуха ±35°С. Системы регистрации данных с помощью микропроцессоров-контролеров в цР-Т, малогабаритных печатающих устройств и цифровых регистраторов температуры ТегшосЬгоп 1921 или ТЬ-01 позволяют обрабатывать, сохранять и передавать объективную информацию изготовителям и потребителям ИБП и СК животных об условиях транспортировки каждой партии продукции.

Ремонт и техническое обслуживание приборов и оборудования «Холодовой цепи» осуществляется только на сервисных предприятиях заводов-изготовителей России и зарубежных стран. Многолетний опыт эксплуатации авторефрижераторов позволяет утверждать, что это наиболее перспективный и экономичный способ транспортировки лечебных и ИБП.

Немаловажным аспектом является себестоимость доставки препаратов потребителю. Как показывает практика основные расходы с реализацией ИБП связвны с приобретением и обслуживанием дорогостоящего оборудования, обучением и периодической аттестацией персонала, а также «надлежащим хранением» препаратов в условиях производства. При выборе метода доставки

препаратов потребителю выполняются два основных требования: это обеспечение качества препаратов и соблюдение требуемых сроков доставки.

Рис. 31. Помещение, оборудование и транспортные средства для хранения и транспортировки лечебных и иммунобиологических препаратов в системе «Холодовой цепи».

Себестоимость авторефрижераторных перевозок зависит, в основном, от протяженности маршрутов и в меньшей степени от объема партии ИБП. Напротив

Склад готовой продукции с холодильной системой Ш124/4СС-9.2/2СТЕ291М6ЕО

Самоходный электроштабеллер СОР 16

___________________ихолодильно-

обогревательной установкой Тегто Юп£

МАЗ АФ 47820 с термобудкой и холодильно-обогревательной установкой Тегто Кт§

Портативное малогабаритное печатающее устройство температуры

Малогабаритные цифровые регистраторы 051921 или ТЬ-01 температуры

авиатарифы рассчитываются в зависимости от объема препаратов и в меньшей степени от удаленности аэропорта грузополучателя. Поэтому на первом уровне «Холодовой цепи», где транспортируются максимальные по объему партии ИБП и СК животных целесообразнее использовать специализированные авторефрижераторы. Многолетний положительный опыт доставки иммунобиологических, лечебных и диагностических препаратов в системе «Холодовой цепи» доказывает, что способ транспортировки продукции специальными авторефрижераторами является технически наиболее совершенным, качественным и в 5-10 раз более экономичным.

География перевозок ИБП и гипериммунных СК животных охватывает более 20 регионов России и стран СНГ (рис. 32).

Мурманск О

Рис. 32. Схема маршрутов доставки ИБП специальными авторефрижераторами в регионы России и страны СНГ.

Выбор маршрута доставки РКП авторефрижераторами определяется заявками потребителей, объемами продукции, эпизоотологической ситуацией в регионах, экономической целесообразностью, а также возможностью и безопасностью перевозок. На основании этих данных разрабатываются

оптимальные маршруты движения авторефрижераторов и определяются сроки доставки продукции потребителям. За один маршрут доставляются препараты в 10-20 и более регионов РФ и стран СНГ. В экстренных ситуациях препараты транспортируются по кратчайшему маршруту со среднесуточным пробегом до 1000 км.

Альтернативные методы доставки ИБП и СК животных реализуются лишь в отдаленные регионы Сибири и Дальнего востока, где отсутствуют автодороги, при угрозе жизни и здоровью водителей, а также в тех случаях, когда экономически оправдана транспортировка грузов самолетами или поездами в контейнерах без ущерба для качества вакцин. Преимуществами авторефрижераторных перевозок является возможность постоянного контроля температурных режимов хранения и качества биопрепаратов в обычной упаковке и доставка препаратов непосредственно заказчику, исключая перегрузки и промежуточное хранение в аэропортах и железнодорожных станциях при нерегламентированных температурных режимах.

Важнейшим компонентом системы «Холодовой цепи» является персонал. ОАП укомплектован семью специалистами, которые постоянно проходят профессиональную подготовку по эксплуатации машин, холодильно-обогревательных установок и контрольно-измерительных приборов. Квалификационная подготовка персонала в обязательном порядке подтверждается именными «Сертификатами» в соответствии с требованиями СП 3.3.1248-03, что гарантирует успешную доставку и сохранность биопрепаратов. За последние 4 года заказчикам авторефрижераторами доставлено 595000 упаковок продукции, в том числе 22564969 доз живых, инактивированных вакцин и СК животных для профилактики и лечения заболеваний животных вирусной и бактериальной этиологии. За указанный период рекламаций на несвоевременность доставки и низкое качество лечебных, профилактических и диагностических препаратов на предприятие от потребителей не поступало (табл. 68).

При возникновении эпизоотий в очаги инфекции и угрожаемые регионы осуществляется так же экстренная доставка авторефрижераторами средств диагностики, профилактики и лечения, в том числе особо опасных инфекций для человека и животных. При этом водители и сопровождающие их лица руководствуются «Санитарно-эпидемиологическими правилами» СП 1.3.2322-08 и СП 1.3.1285-03.

Таблица 68 - Результаты транспортировки продукции отделом авторефрижераторных перевозок Армавирской биофабрики потребителям в системе «Холодовой цепи»

Показатели Значения показателей Результаты

2006 2007 2008 2009 Итого за 4 года

Упаковки Штук 80000,0 95000,00 180000,00 240000,00 595000,00

Объем продукции Л 62050,6 80020,94 145389,86 194476,42 481937,82

Тыс/доз 63421,68 60601,341 51546,96 55661,28 107208,24

Кг 1826,9 277,15 875 8463,98 9338,98

Наборы 656 1313 1269 821 4059

Вакцины Л 1085,8 1495,7 2415,2 2219,5 7216,2

Тыс/доз 61806,19 58976,68 50218,27 54648,55 225649,69

Сыворотки Л 610 973 1010 3378 5971

Тыс/доз 1455,04 1532,8 1328,67 1012,75 5329,26

Стимуляторы Л 40322,9 61062,3 102710,46 141279,62 345375,28

Днагноетнкумы Наборы 65 6 1313 1269 821 4059

Химико-фармацевтические препараты Л 18292,3 16272,54 34277,9 41792,7 110635,44

Тыс/флк 5132 495 470 6097

Таким образом, в результате многолетней работы на базе Армавирской биофабрики создан современный «Отдел авторефрижераторных перевозок», который отвечает требованиям «Системы холодовой цепи», оснащен современным оборудованием, имеет высококвалифицированный персонал, который гарантирует успешную доставку и сохранность качества диагностических, лечебных и профилактических препаратов и, как результат, эпизоотическое благополучие животноводства страны по инфекционным заболеваниям.

-2933. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Представленная работа посвящена разработке, оптимизации и стандартизации технологии промышленного производства и обеспечению качества поливалентных СК животных против респираторно-кишечных заболеваний КРС. В настоящее время ведущую роль в повышения эффективности промышленного животноводства и свиноводства играют две группы факторов: технология содержания животных и состояние окружающей среды. Значимость этих факторов особенно велика, если учитывать интенсивный характер современного сельскохозяйственного производства, обусловленный использованием максимально продуктивных пород, интенсивным воспроизводством поголовья и постоянной модернизацией технологии содержания. О влиянии перечисленных выше факторов на возникновение стрессов, приводящих к ослаблению резистентности организма и способствующих возникновению и распространению инфекционных заболеваний указывает ряд авторов [41, 42, 43, 133]. В общей структуре инфекционных заболеваний животных, согласно данным ветеринарной отчетности, ведущая роль в этиологии бактериальных инфекций принадлежит эшерихиозу, пастереллезу и сальмонеллезу, вирусной -инфекционному ринотрахеиту, парагриппу-3, рота- и коронавирусным инфекциям [24,168,314].

В таких условиях организм животных становится чрезвычайно чувствительным к малейшим изменениям условий содержания, кормления и поэтому нуждается в коррекции физиологического состояния и иммунного статуса поголовья с помощью биопрепаратов, так как резко возрастает значимость возбудителей инфекций в патологии молодняка сельскохозяйственных животных острых респираторных и желудочно-кишечных заболеваний. Особенно это важно с учетом того, что сроки заболевания телят совпадают с так называемым «технологическим» возрастным иммунодефицитом [349, 367, 556].

Перевод животноводства на промышленную основу, создание крупных комплексов и специализированных ферм по выращиванию нетелей и

производству говядины, где животные размещены большими группами на небольших площадях с ограничением и даже отсутствием моциона. Такие фермы комплектуются за счет сборного поголовья. Животные поступают из хозяйств, где имеется различная эпизоотическая ситуация в отношении возбудителей респираторных и желудочно-кишечных заболеваний вирусной и бактериальной этиологии. При этом на организм телят и поросят значительное влияние оказывают разнообразные стресс-факторы и часто нарушаются зоогигиенические нормы содержания животных, отмечается недостаток и несбалансированность кормления, а животные различных половозрастных групп находятся в тесном контакте, что приводит к повышению вирулентности условно-патогенной микрофлоры, снижению естественной резистентности организма животных к условно-патогенным вирусам и бактериям с последующим возникновением респираторных и желудочно-кишечных заболеваний.

С тем, что частота вспышек респираторных и желудочно-кишечных заболеваний зависит от плотности животных на определенных территориях относительно аденовирусной [431, 433, 502, 523] и короновирусной [270, 448] инфекций согласны вышеозначенные исследователи, которые так же указывают, что на развитие клинических признаков заболевание большое значение оказывает тропизм возбудителя, возраст, восприимчивость (резистентность) макроорганизма, условия содержания и кормления животных.

В этиологии респираторных и желудочно-кишечных заболеваний определяющую роль играет возбудители вирусных инфекций. Данный эффект состоит в том, что даже слабопатогенный вирус, обладающий цитопатическим действием, разрушает покровный эпителий респираторного и желудочно-кишечного тракта на фоне низкого уровня неспецифической и специфической резистентности организма. В структуре ассоциированных инфекций вирусные агенты в данной ситуации, являясь пусковым фактором развития инфекционных болезней, создают возможность бактериальным агентам проникать в нижние отделы респираторного и желудочно-кишечного тракта и вызывать воспалительные процессы [35, 94, 293, 354].

Массовая вакцинация животных, применение химиопрепаратов, антибиотиков и других веществ привели к существенному изменению этиологической структуры инфекционных заболеваний, в том числе и при желудочно-кишечной патологии молодняка крупного рогатого скота [170].

Об этом свидетельствуют публикации как отечественных, так и зарубежных авторов, среди которых встречаются данные о высоком удельном весе вируса диареи и ротавируса в составе ассоциаций при инфекционных энтеритах телят.

В работах В.А. Машеро [200] сообщается о полиэтиологичности желудочно-кишечных болезней телят в условиях Республики Беларусь, где возбудителями чаще всего являются вирус ИРТ - в 65,1% и вирус ПГ-3 - 55% случаев.

По данным A.M. Ламана (2010) основными причинами возникновения желудочно-кишечных заболеваний вирусно-бактериальной этиологии в животноводческих хозяйствах Гродненской области являются вирус диареи (72%), ротавирус (85%) и коронавирус (54,5%), при серологическом исследовании антитела у переболевших телят выявлялись в 82%, вирусу диареи - 62%, коронавирусу - 68% случаев [170].

Кроме вирусов при инфекционных энтеритах телят выявляются сложные и разнообразные по своей структуре ассоциации бактерий, значение которых в инфекционной патологии ранее игнорировалось или рассматривалось как эксквизитное явление [216]. Поэтому в настоящий период целесообразно использование поливалентных гипериммунных СК для профилактики и терапии респираторных и желудочно-кишечных болезней животных.

Одним из современных подходов к решению данной проблемы является разработка, производство и применение новых лечебных и ИБП, способных обеспечить защиту животных от возбудителей вирусной и бактериальной этиологии.

В связи с вышеизложенным нами проведены фундаментальные исследования по разработке технологии серийного производства методов контроля качества и применения лечебно-профилактических СК для борьбы с

инфекционными болезнями животных. Характерной особенностью этих биопрепаратов является специфичность и направленность их действия, против возбудителей вызывающих конкретные болезни.

Гипериммунные сыворотки и выделяемые из них иммуноглобулины применяют с целью экстренной профилактики и лечения многих болезней человека и животных. Например, в практике здравоохранения немаловажное значение имеют сыворотки против дифтерии, столбняка, ботулизма, газовой инфекции и другие. В ветеринарной практике для профилактики и лечения животных также широко используют сыворотки против рожи, сальмонеллеза, эшерихиоза, пастереллеза, лептоспироза и других заболеваний. Эффективность лечения больных животных значительно повышается при комплексном применении химиотерапевтических препаратов, специфических сывороток и иммуноглобулинов [125, 127, 204, 212].

Лечебно-профилактические сыворотки содержат готовые антитела, поэтому пассивный иммунитет у людей и животных наступает практически незамедлительно при их введении. Ценность сывороток заключается еще и в том, что сывороточные белки пополняют организм энергетическими и пластическими веществами, оказывают неспецифическое действие, повышают тонус и способствуют выздоровлению больного. В ряде случаев сыворотки используют с целью предупреждения осложнений при вакцинации препаратами с повышенной реактогенностыо, а также лечение животных и человека в случае осложнений, вызванных применением живых вакцин. Из гипериммунных сывороток готовят иммуноглобулины, которые применяют с профилактической, лечебной и, в некоторых случаях, диагностической целью. Эти препараты представляют собой водный раствор глобулиновой фракции белка сыворотки крови, содержащей гамма- и бета- глобулины. Иммуноглобулины кроме специфического действия обладают способностью повышать бактерицидность крови животного, естественную резистентность организма [204, 212, 374].

Для экстренной профилактики и терапии вирусных и бактериальных инфекций сельскохозяйственных животных на базе Армавирской биофабрики

проведен комплекс мероприятий по созданию на предприятии высокоэффективного производства лечебных гипериммунных сывороток животных, отвечающих требованиям национальных и международных стандартов в управляемых условиях надлежащей производственной практики вМР. Реализация указанных задач предполагает переход предприятия на более высокий уровень организации труда, контроля и эффективного управления качеством продукции, повышения рентабельности и конкурентоспособности производства гипериммунных СК животных на внешнем рынке, а также инвестиционной привлекательности предприятия путем внедрения системы менеджмента качества (СМК).

В нашей стране проблемами получения и применения лечебной СК против эшерихиоза занимались Михин Н.А. (1934, 1937), Вышелесский С.Н. (1936), Архангельский И.И. (1951, 1960), Малявин А.Г. (1953, 1955, 1960, 1963) и многие другие, которые разработали классические схемы гипериммунизации животных-продуцентов эшерихиозным антигеном, используемые и в настоящее время с незначительными модификациями [70, 98], однако при их производстве не учитывались предлагаемые нами параметры системы менеджмента качества (СМК).

При этом нами были разработаны:

- Сыворотка против пастереллеза, сальмонеллеза и эшерихиоза, парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (ТУ 9388-00100482849-2007).

Сыворотка антиадгезивная антитоксическая против эшерихиоза сельскохозяйственных животных (СТО 00482849-0020-2007).

- Иммуносерум - сыворотка для лечения и профилактики вирусных пневмоэнтеритов телят (СТО 00482849-0018-2007).

Технологическая схема производства лечебных сывороточных препаратов предусматривает:

- получение воды очищенной (ВО), воды для инъекций (ВИ) и гидролизатных питательных сред (ГПС);

-298- разработку и стандартизацию методов изготовления и контроля качества исходных материалов для промышленного производства гипериммунных сывороток крови животных;

- заготовку, карантинирование, гипериммунизацию и эксплуатацию волов-продуцентов;

- обоснование выбора, подбора и паспортизации штаммов, культивирование микроорганизмов, изготовление живых и инактивированных антигенов для гипериммунизации продуцентов;

- проведена оптимизация технологии производства и внедрение в практику системы управления качеством гипериммунных сывороток крови животных в соответствии с требованиями стандартов ИСО серии 9000 и правил вМР;

- разработана система менеджмента качества - основа эффективного производства и стандартизации лечебных сывороток крови животных;

- изготовление, фасовку, укупорку, этикетировку, контроль качества СК и отгрузку конечного продукта потребителю в системе «Холодовой цепи»;

- доклинические испытания безопасности и специфической активности гипериммунных сывороток;

- отработка оптимальных параметров практического использования гипериммунных сывороток.

В процессе исследований совершенствовали и оптимизировали технологические процессы производства лечебных сывороток животных в соответствии с требованиями вМР. При этом существенно повысились общие требования к исходному сырью, к системе управления качеством и профессиональной подготовке персонала; модернизировали помещения, оснастили производство современным оборудованием, нормативно-технической документацией, совершенствовались статистические методы контроля качества, проведена организация самоинспекции и валидации приборов, оборудования и технологических процессов изготовления сывороточных препаратов для животных.

При производстве лечебных сывороток широко использовались высококачественные исходные материалы, в том числе вода различной степени очистки. Поэтому особое внимание уделялось оптимизации процессов водоподготовки и совершенствованию методов контроля качества серий воды различной степени очистки с учетом результатов статистических методов контроля и управления качеством продукции. При этом было подобрано современное оборудование, оптимизированы технологические процессы производства и методы контроля качества воды очищенной (ВО) и воды для инъекций (ВИ). Для повышения эффективности водоподготовки было подобрано современное оборудование и на его основе созданы две технологические линии. В целях стандартизации условий производства воды использовали «процессный подход», при реализации которого были определены критические точки риска и предельно допустимые значения технологических показателей. С учетом документированных фактов и результатов валидационных испытаний контрольно-измерительных приборов, оборудования и коррекции процесса, организован постоянный мониторинг условий получения и контроля качества воды.

На предварительном этапе вода очищалась методом дистилляции от растворенного и нерастворенного железа, взвешенных частиц, свободного хлора на 95%, органических веществ на 70%, с последующим осветлением и частичной стерилизацией полученного продукта через фильтры с диаметром пор 10 и 5 мкм и при помощи ультрафиолетового (УФ) облучения. Полученный полуфабрикат воды отводится и сохраняется в накопительных емкостях. Дальнейшая очистка воды осуществляется на установке УВОИ-МФ-8040-6 производительностью 8000 л/ч.

В результате исследовательской и производственной деятельности на Армавиркой биофабрике были созданы и в течение многих лет апробированы две технологические линии по изготовлению воды различной степени очистки. Линия «В» с предварительной очисткой воды на установке «Водопад» признана более эффективной и более экономичной и внедрена в практику. Стабильность

промышленного производства и соответствие качества ВО и ВИ требованиям отечественных и международных стандартов в пятилетний период подтверждены методом контрольных карт Шухарта и результатами статистического контроля наиболее значимых показателей качества конечного продукта. Постоянный анализ показателей ТП производства и своевременные коррегирующие действия обеспечивают серийный выпуск и стандартные показатели качества ВО и ВИ. Практическое решение указанных задач позволило реально осуществить переход производственной деятельности предприятия на более высокий уровень в организации труда, контроля и эффективного управления качеством ВО и ВИ, а также ПС и растворов. Надежной гарантией выпуска в практику лечебных и ИБП, отвечающих требованиям ОМР, является высокие профессионализм сотрудников предприятия, жесткие стандарты производства, многоступенчатый контроль исходных материалов, в том числе ВО и ВИ и конечного продукта на всех этапах технологического цикла.

Для производства лечебных и иммунобиологических препаратов требуется увеличение объемов производства гидролизатных питательных сред и бактериальных антигенов. Известно, что нестабильное накопление бактерий во многом зависит от качества питательных сред и условий культивированных микроорганизмов. Исходя из этого производились исследования по совершенствованию технологии производства сред на основе гидролизатов из пищевого сырья и отходов сывороточного производства.

Основным источником белоксодержащих материалов является мясо говядины или конины, а наиболее щадящим методом гидролиза -панкреатические ферменты. С целью замены пищевого сырья и экономии средств в качестве альтернативных источников белка используются различные отходы сывороточного производства, в том числе фибрин, элементы крови, сывороточные альбумины, гидролизаты которых более стандартны по химическому составу и не уступают по качеству гидролизатам мышечной ткани КРС.

Для промышленного производства антигенов представляло интерес изучить влияние различных видов гидролизатов на уровень накопления пастерелл, сальмонелл, эшерихий, которые являются грамотрицательными бактериями с высокой метаболической активностью. Для своего роста они нуждаются в наборе из 12-20 аминокислот, хотя незаменимым являются лишь 1-3 аминокислоты. Остальные служат стимуляторами роста и в процессе культивирования микроорганизмы используют практически все аминокислоты для синтетических целей и в качестве потенциального источника углерода и энергии. Рост микроорганизмов также стимулируют высокомолекулярные продукты ферментативного гидролиза - пептиды с ММ выше 500 Д. Низкомолекулярные пептиды менее эффективны.

Определяющими факторами эффективного производства лечебных сывороток и антибактериальных иммунобиологических препаратов являются высокое качество сред, их допустимость и себестоимость. Гидролизатные среды, и в частности бульон Хоттингера, являются многокомпонентной системой и содержит в своем составе воду очищенную, продукты ферментативного гидролиза мяса (говядины или конины), минеральные вещества, углеводы и факторы роста. Состав и ростовые свойства ферментативных гидролизатов существенным образом зависят от качества исходного сырья, активности и специфичности фермента, первичной структуры белка, степени его денатурированности, а также времени и условий гидролиза.

Гидролизаты, изготовленные по традиционной технологии из отходов сывороточного производства (фибрина, отварного фарша, крови доноров) существенно не отличались также от контроля (ПХ) по физико-химическим показателям. Однако гидролизаты форменных элементов крови имели более высокое содержание пептидов с ММ выше 1000 Б (55%) и 350-400 Б (17%) и более низкое содержание микроэлементов и Сахаров.

При реализации этих задач в условиях Армавирской биофабрики было подобрано современное высокопроизводительное оборудование, смонтирована и запущена в эксплуатацию технологическая линия с автоматическим

регулированием основных технологических процессов производства. Были определены и стандартизированы общие требования к качеству исходных материалов (воде, фаршу говядины, активности протеолитических ферментов), режиму и длительности гидролиза фарша мяса говядины или конины, к схеме изготовления, контролю качества, консервированию, длительности и условиям хранения. С учетом метаболизма микроорганизмов были отобраны оптимальные условия изготовления и определены рецептура и предельно допустимые физико-химические показатели качества, обеспечивающие максимальное накопление пастерелл, сальмонелл и эшерихий. В результате оптимизации и стандартизации технологических процессов осуществлено производство промышленных серий сред, отвечающих требованиям практики, отечественных и международных стандартов. Эффективное производство гидролизатов достигнуто за счет отбора и паспортизации исходных материалов, применения современных приборов и оборудования, оптимизации условий гидролиза тканевых субстратов, использования валидированных методов контроля и отбора серий сред с учетом потребностей и метаболизма микроорганизмов. Доказана пригодность и экономичность применения отходов сывороточного производства для изготовления высококачественных гидролизатных питательных сред и бактериальных антигенов, предназначенных для гипериммунизации животных-продуцентов сывороток против респираторно-кишечных инфекций крупного рогатого скота.

В целях масштабирования и оптимизации промышленного производства бактериальных антигенов была разработана, смонтирована и запущена в эксплуатацию технологическая линия, оснащенная современным оборудованием: реакторы различного объема с автоматическим регулирование основных технологических параметров; емкостями для изготовления растворов и антигенов; сепараторами, обеспечивающими концентрирование антигенов и трубопроводами из нержавеющей стали для подачи воды, растворов и антигенов. В цехе предусмотрено также разделение людских и материальных потоков и обеспечение стерильности производства антигенов, растворов, безопасность сотрудников и

окружающей среды. Внедрение в практику современного оборудования обеспечило более высокий уровень механизации и автоматизации производственных процессов, что способствовало получению стандартных по активности антигенов и повышению производительности труда.

Для изготовления противовирусных и антибактериальных поливалентных СК выбраны штаммы, отвечающие основным требованиям, предъявляемым к штаммам такого рода. Использование хорошо изученных и постоянно контролируемых коллекционных штаммов является гарантией их безопасности.

Штаммы были подобраны с учетом полного набора факторов патогенности, антигенной активности, специфичности и высокой иммуногенности.

В результате исследовательской и производственной деятельности сотрудниками биопредприятия были определены особенности размножения производственных штаммов пастерелл, сальмонелл и эшерихий стационарным и глубинным методами. Доказано влияние состава ПС на метаболизм и уровень накопления микроорганизмов. Замена стационарного на регулируемый способ периодического культивирования бактерий в биореакторах позволила сократить сроки культивирования, повысить выход бакмассы и уменьшить затраты на производство стандартных антигенов. Для реализации указанных задач была создана и апробирована технологическая линия, оснащенная современным оборудованием с автоматическим регулированием и контролем основных технологических параметров периодического культивирования микроорганизмов. Постоянный контроль и валидация оборудования, приборов, ТП и применение ГПС, отвечающих требованиям метаболизма микроорганизмов обеспечили в 3,6-8 раз более высокое накопление бактерий. Пригодность и перспективность полученных антигенов подтверждена при производстве вакцин против пастереллеза, сальмонеллеза, эшерихиоза и 3-х видов гипериммунных сывороток крови.

Для специфической профилактики и лечения эшерихиоза в различных странах применяют сыворотки, полученные из крови животных-продуцентов (волов, свиней), гипериммунизированных возрастающими дозами инактивирован-

ных энтеропатогенных штаммов эшерихий различных серогрупп, являющихся возбудителями болезни на территории данной страны. Так, например, в Чехии фирма Биовета изготавливает сыворотку против колибактериоза, содержащую антитела к эшерихиям серогрупп 08, 078, 0138, 0139 и 0141; в Германии - 08, 09, 015, 020, 026, 055, 078, 086, Olli, 0115, Ol 17; в Болгарии - 08, 020, 045, 0138, 0139, 0147, во Франции - 09, 015, 078, 086, Ol 15, 0117; в Монголии -08, 09, 015, 026, 078, 086, 0101, ОИ5, 0117, 0119, 0138, 0141, 0147, 0149. Консервируют лечебные сыворотки, как правило, 0,5%-ным фенолом [49, 70, 98, 245].

Полученные нами результаты согласуются с данными [101, 108], свидетельствующими, что эффективность полученных гипериммунных сывороток проявляется в основном к эшерихиям тех серогрупп, которые входят в состав антигена, а профилактическое и терапевтическое действие гипериммунных CK зависит от наличия, концентрации и состава иммуноглобулинов в лечебном препарате. В этой связи, необходимо отметить, что лечебная и профилактическая эффективность вышеперечисленных коммерческих сывороток недостаточно высока при эшерихиозе, вызываемом возбудителями, обладающими комплексом факторов вирулентности - адгезивными антигенами, TJI- и ТС-токсинами и др.

Многочисленными исследователями также показано, что более активные CK получают при использовании для гипериммунизации животных-продуцентов поливалентного липополисахаридного антигена в сочетании с адгезивными антигенами, термолабильным и термостабильным энтеротоксинами [18, 23, 47], применяемыми нами для гипреиммунизации ВП.

Для получения вирусных антигенов в результате исследований были решены проблемы стабильности производства вирусных антигенов, что было достигнуто за счет использования высокочувствительной сублинии клеток MDBK-E, аттестованной в соответствии с требованиями отечественных и международных стандартов, оптимальных условий роллерного культивирования и постоянного применения стандартных образцов рабочего банка тест-культуры и посевного материала штаммов ПТК 45/86 и ТК-А/ВИЭВ вирусов ПГ-3 и ИРТ

крупного рогатого скота. Экспресс-метод ПЦ оценки качества клеток является объективным и достаточно перспективным для их паспортизации по размерам, гранулярности, фазам клеточного цикла, апоптозу и ростовому потенциалу. Роллерный метод культивирования дает возможность получить не только активные, но и полноценные в антигенном отношении штаммы ПГ-З и ИРТ, пригодные для гипериммунизации ВП при серийном производстве лечебных СК животных.

Для получения высококачественных сывороток основой их эффективного производства и стандартизации является система менеджмента качества.

С учетом изложенного на Армавирскаой биофабрики проведен комплекс мероприятий по созданию на предприятии высокоэффективного производства лечебных СК животных, отвечающего требованиям национальных и международных стандартов в управляемых условиях надлежащей производственной практики ОМР. Реализация указанных задач предполагает переход предприятия на более высокий уровень организации труда, контроля и эффективного управления качеством продукции, повышения рентабельности и конкурентоспособности производства гипериммунных СК животных на внешнем рынке, а также инвестиционной привлекательности предприятия путем внедрения системы менеджмента качества (СМК).

Успешное серийное производство гипериммунной СК было достигнуто таюке за счет высокой квалификации сотрудников и жестких стандартов производства, рациональной планировки и реконструкции чистых помещений, использование современного оборудования и приборов, разделение людских и материальных потоков и строгого соблюдения санитарно-гигиенических норм, постоянного проведения внутреннего аудита и статистических методов контроля исходных материалов и конечного продукта на всех этапах жизненного цикла. Реализация указанных мероприятий на практике дала возможность минимизировать риски перекрестного заражения материалов, выявить и устранить ошибки в технологических процессах производства, обеспечить комфортные условия и работоспособность персонала и, как результат, исключить

брак и существенно повысить качество и стандартность гипериммунной СК, а также подтвердить значимость и достоверность утверждения о том, что качество лечебных сывороток не контролируют, а создают усилиями коллектива.

Известно, что для получения сывороток состав антигенов, предназначенных для гипериммунизации животных-продуцентов прошел длительный путь развития от моновалентных с нетипированными возбудителями эшерихий до поливалентных антигенов, включающих в свой состав патогенные штаммы микроорганизмов с выраженными антигенными, иммуногенными и вирулентными свойствами.

При создании лечебных и иммунобиологических препаратов используются, как правило, высоковирулентные штаммы микроорганизмов, обладающие широким спектром факторов патогенности, которые обусловливают особенности течения и разнообразие клинических форм проявления заболеваний [193, 195, 212]. Для повышения эффективности противоэшерихиозной сыворотки из числа производственных, музейных штаммов и изолятов были отобраны и селекционированы штаммы эшерихий, обладающие высокой иммуногенностью и выраженными факторами патогенности, играющими основную роль в развитии патологического процесса у животных.

Оценка стабильности продукции факторов патогенности селекционированными штаммами после проведения 18-кратных пассажей их через белых мышей и 12-кратных через морских свинок и 10-летнего культивирования на искусственных питательных средах показала, что эти манипуляции не оказали негативного влияния на продукцию ими факторов патогенности и антигенности, которые сохранялись на исходном уровне на протяжении многолетних исследований. Сравнивая схемы гипериммунизации с использованием различных доз антигенов, полученных различными методами с использованием усовершенствованных сред установлено, что применение больших доз антигена позволяет получить сыворотку с высоким титром в короткие сроки, но в этом случае возрастает частота аллергических реакций.

Применение же малых доз также ведет к получению высокоактивной сыворотки, но количество инъекций при этом увеличивается в 2 раза [136, 297, 303, 384].

В результате модернизации и стандартизации серийного производства «Сыворотки антиадгезивной антитоксической против эшерихиоза сельскохозяйственных животных» были существенно снижены по сравнению с прототипом количество и длительность гипериммунизации волов на 2 инъекции и 10 суток, повышена активность соматических полисахаридных капсульных антигенов (в РА) до 1:600 - 16400 (в контроле 1:50-1:400), адгезивных антигенов (К88 и К99) до 1:640 - 1:66400 (в контроле 1:50-1:200) и токсинов (в РДП) до 1:4 -1:6 (в контроле 1:1), а также были получены высокие титры антител к адгезивным антигенам 987Р и Б41, к ТС и УТ токсинам, отсутствующим в «Сыворотке поливалентной колибактериоза (эшерихиоза) сельскохозяйственных животных». По данным ряда авторов [143, 190, 200] активной считается сыворотка при уровне противовирусных антител не менее 1:128 в РНГА, а антибактериальных - не менее 1:500 что согласуется с активностью полученных нами гипериммунных сывороток при промышленном производстве.

Кроме того, при испытании лечебного препарата снижена ИД5о с 8,57 до 3,25 см и повышена сохранность телят и поросят соответственно до 96,9 и 96,7 % в контроле соответственно 89,9 и 90,4%.

Наиболее острой проблемой промышленного животноводства являются респираторно-кишечные заболевания крупного рогатого скота, которые протекают по типу ассоциативных инфекций и обусловлены комплексом патогенных и условно-патогенных возбудителей вирусной и бактериальной природы. Практикой доказано, что именно бактериально-вирусные инфекции протекают тяжелее и сопровождаются значительными отвесами и массовой гибелью молодняка. Показано также, что уровень опасности ассоциаций существенно возрастает в условиях крупных животноводческих комплексов [15, 43,120, 147, 200, 244, 307, 378, 594].

В этиологической структуре респираторно-кишечных заболеваний вирусы ПГ-3, ИРТ, РС, ВД и некоторые другие занимают значительное место и в

ассоциации с патогенами бактериальных инфекций (колибактериозом, сальмонеллезом, пастереллезом) вызывают, в особенности у молодняка КРС, респираторные заболевания, диарею, бесплодие, а также поражение генитальных органов. Для профилактики и лечения респираторно-кишечных инфекций КРС рекомендуются антибиотики, иммуноглобулины, моно- и поливалентные сыворотки крови животных. Для экстренной профилактики и лечения ассоциативных инфекций наиболее перспективны поливалентные сыворотки, применение которых имеет неоспоримое преимущества в плане сокращения количества лечебных и профилактических инъекций, снижения уровня аллергизации, повышения сохранности и продуктивности животных. Основные принципы и требования к производству и контролю поливалентных СК животных против бактериальных и вирусных инфекций остаются в основном неизменными. Процессы подбора и селекции штаммов, оптимизации состава поливалентных антигенов, схемы гипериммунозации животных-продуцентов и технологических процессов производства и количественных методов контроля активности гипериммунных СК животных должны постоянно совершенствоваться с учетом технологического прогресса и требований практики, так как вопросы качества, себестоимости изготовления и конкурентоспособности лечебных препаратов на мировом рынке являются чрезвычайно актуальными [49, 70, 98, 108, 204, 206, 210, 236, 267, 298, 426, 484].

В процессе работы нами была проведена разработка, совершенствование и внедрение в практику технологического процесса производства и обеспечения качества поливалентной сыворотки для профилактики и лечения респираторно-кишечных инфекций крупного рогатого скота. При этом решились задачи подбора и оценки совместимости штаммов вирусов и бактерий, изготовления, стандартизации и контроля нативных и инактивированных антигенов, оптимизации схемы подготовки, гипериммунизации и эксплуатации животных, а также аспектов изготовления, контроля и применения на практике «Сыворотки против пастереллеза, сальмонеллеза, эшерихиоза, парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота».

-309В результате производственных испытаний установлено, что промышленные серии поливалентной сыворотки крови, изготовленные в соответствии с требованиями ТУ 9388-001-00482849-2007 характеризовались выраженным терапевтическим и профилактическим эффектом в отношении респираторно-кишечных инфекций крупного рогатого скота особенно при своевременной и достоверной диагностике инфекции и экстренном применении лечебного препарата. Применение лечебного препарата в условиях производства позволило существенно уменьшить процент заболеваемости и гибели, а также сохранить поголовье новорожденных телят от респираторно-кишечных инфекций бактериальной и вирусной этиологии. Серийное производство поливалентной сыворотки против респираторно-кишечных инфекций крупного рогатого скота достигнуто за счет использования статистических методов контроля и своевременных корректирующих действий, обеспечивающих эффективное воспроизводство стандартных по качеству питательных сред, посевных материалов, активных бактериальных и вирусных антигенов, а также за счет применения рациональной схемы подготовки, гипериммунизации и эксплуатации волов, а также оптимизации технологического процесса производства и доставки конечного продукта потребителю в системе «Холодовой цепи».

Современные условия экономического развития и вступления России в ВТО требует от производителя иммунобиологических и сывороточных препаратов постоянного совершенствования технологии производства, повышения качества и безопасности, снижения себестоимости и повышения конкурентоспособности препаратов в соответствии с требованиями отечественных и международных стандартов серии ISO 9000 и системы ХАССП, которые определяют общие требования и принципы организации и управление качеством и рисками производства лечебных сывороток крови животных. В указанных стандартах методы и параметры функционирования технологических процессов производства сывороток крови не регламентируются, поэтому производители биопрепаратов сами определяют механизмы, показатели повышения качества и анализа рисков при изготовлении препаратов. Для решения этих задач на

Армавирской биофабрике в 1999 г разработана и реализуется новая политика руководства, которая базируется на повышении эффективности системы управления качеством и контроля технологических процессов в соответствии с «Правилами надлежащей производственной практики» GMP и международными стандартами серии ИСО. Для анализа рисков была избрана система ХАССП, которая позволяет выявить не только риски, но и разработать меры по их коррекции. К наиболее значимым причинам риска производства лечебных препаратов относят биологические (контаминанты), химические (вещества) и физические факторы.

В системе ХАССП также предусмотрено 8 основных принципов: выявление критических факторов и системы предупреждающих действий; определение критических контрольных точек (ККТ); определение пределов допуска критических показателей; разработка системы корригирующих действий; создание системы валидации и верификации ТП; разработка системы мониторинга показателей; создание системы подготовки персонала.

Производство моно- и поливалентной СК животных представляет собой многостадийный технологический процесс. Это обстоятельство определяет многообразие подготовительных операций, методов изготовления и контроля исходных материалов, специфику необходимого оборудования и производственных помещений различного класса чистоты, а также обеспечение условий экологической безопасности и оценки рисков для сотрудников предприятия, животных-доноров (ЖД), а также выпуска препаратов, отвечающих требованиям потребителя. Результаты экспериментальных и производственных исследований позволили модернизировать и внедрить в практику технологическую схему производства и систему контроля качества исходных материалов, промежуточных и готового продукта на всех этапах технологического цикла изготовления сывороток крови животных.

Особую значимость при анализе рисков придается мониторингу и мерам борьбы с контаминацией воздуха, помещений, оборудования, инструментов, антигенов и рук обслуживающего персонала бактериями и вирусами. С

профилактической целью на предприятии проводится постоянный мониторинг и обработка инфицированных объектов эффективными дезосредствами. Для предотвращения образования устойчивых форм микроорганизмов осуществляется еженедельная смена дезинфицирующих средств. Инженерное обеспечение технологического процесса производства гипериммунных сывороток крови представляет собой сложную много факторную задачу, решение которой было реализовано за счет применения современного оборудования (биореакторов, фильтров, аналитических приборов и других средств) и технологических линий оснащенных микропроцессорами с автоматическим регулированием и контролем процессов производства воды, гидролизатных питательных сред, культивирования микроорганизмов, изготовление живых и инактивированных антигенов, получение крови, плазмы, сыворотки и последующих операций по подготовке и стерилизации флаконов, фасовке, укупорке, этикетировке и хранению конечного продукта (Приложение).

Полученные результаты были достигнуты также за счет оптимизации процессов управления, повышения эффективности производства и контроля качества продукта на всех этапах технологического цикла, а также своевременного выявления и коррекции нерегламентированных показателей в реальном времени. Кроме того предусматривались и реализовывались на практике процессный и системный подходы к управлению производством, лидерство руководителя, ориентация на потребителя, вовлечение сотрудников в технологический процесс производства, постоянное улучшение и оперативный контроль качества конечного продукта, принятие экстренных решений, основанных на реальных фактах, а также взаимовыгодные отношения с поставщиками исходных материалов.

В процессе совершенствования и стандартизации производства гипериммунных сывороток крови животных был организован постоянный мониторинг технологического процесса и разработана система предупреждающих действий на каждом этапе изготовления лечебных препаратов.

Пастереллы, сальмонеллы и эшерихии являются сапрофитами, существенно различаются по метаболизму и для своего размножения требуют индивидуального подхода при выборе гидролизатных питательных сред строго определенного состава. Для их максимального накопления экспериментально определены соответственно питательные среды с содержанием аминного азота на уровне 185-200, 230-250, 200-230 мг%.

Определены и апробированы практикой оптимальные параметры (интенсивность перемешивания и аэрации, показатели ^С, рН среды, р02, еН) периодического культивирования пастерелл, сальмонелл и эшерихий, которые отнесены к физическим рискам. «Иммуносерум - сыворотки для лечения и профилактики вирусных пневмоэнтеритов телят» выпущено в объеме 12511 литров. При этом удалось полностью исключить брак лечебных препаратов по стерильности, безвредности и активности, а также разработать и утвердить комплект нормативной документации и аттестовать производство лечебных СК в соответствии с общепринятыми требованиями.

Конкурентоспособность инновационных препаратов задается в процессе разработки новых препаратов, построенном с учетом требований современных международных и национальных законов («Об обращении лекарственных средств», «О ветеринарии»), стандартов ИСО с. 9000 (ГОСТ Р ИСО 9001-2008) и вМР (ГОСТ Р 52249-2009). На этапе проектирования процесса создания новой продукции (согласно требованиям стандарта ИСО 10006:2003) закладываются характеристики ее качества и безопасности. В методологию проектного подхода входит планирование и проведение доклинических исследований (ДИ), которые осуществляются в соответствии с Правилами вЬР и требованиями Директивы ЕС «О защите животных, используемых в экспериментальных и научных целях».

Таким образом, в результате проведенных исследований разработаны и внедрены в промышленное производство высокоэффективные сывороточные препараты - «Сыворотка против пастереллеза, сальмонеллеза и эшерихиоза, парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота»; «Сыворотка антиадгезиваная антитоксичная против эшерихиоза

сельскохозяйственных животных» и «Иммуносерум - сыворотки для лечения и профилактики вирусных пневмоэнтеритов телят» показавшие высокую эффективность и востребованность практикой.

Применение сывороточных препаратов в промышленном животноводстве вносит значимый вклад в обеспечение устойчивого ветеринарного благополучия хозяйств, повышения продуктивности телят и поросят, гарантии качества, биологической и экологической безопасности, как самой продукции животноводства, так и процесса ее производства.

-3144. ВЫВОДЫ

1. Научно обоснован единый подход к разработке, совершенствованию и стандартизации технологических процессов изготовления и контроля поливалентных сывороток для лечения и профилактики респираторно-кишечных инфекций крупного рогатого скота. Серийное производство и обеспечение качества лечебных сывороток осуществляется в соответствии с требованиями «Системы менеджмента качества» на основе стандартов ИСО серии 9000, правил вМР и ГОСТ Р 52249-2009 с использованием современного оборудования, технологических линий и валидированных методов контроля на всех этапах изготовления целевого продукта.

2. Разработана и внедрена в практику система управления качеством на основе статистических методов контроля соответствия активности поливалентных сывороток и технологических процессов производства стандартным показателям и своевременных корректирующих воздействий на обеспечение выпуска стандартных препаратов надлежащего качества.

3. Созданы и функционируют 2 технологические линии для комплексной очистки воды водопроводной (ВВ). Очистка ВВ на установке «Водопад» признана более эффективной, чем метод дистилляции. Этот прием дает возможность повысить выход и снизить себестоимость 1 т целевого продукта в 3,6 раза. Дальнейшая очистка воды на установке УВОИ-МФ-8040-6 позволяет стабилизировать рН среды и удельную электропроводность (УЭ) воды очищенной (ВО) соответственно на уровне 5,0-7,0 и 2,87±0,14 мкСм/см. Дополнительная очистка пермеата на установке 8ирег-С2 или УВОИ 4040 позволяет снизить показатель УЭ воды для инъекций (ВИ) до 0,35±0,1 мкСм/см и не превышать 1,1 мкСм/см.

4. Разработан дифференцированный подход к условиям и длительности ферментативного гидролиза белоксодержащих материалов. Установлены предельно допустимые физико-химические показатели бульона Хоттингера, отвечающие потребностям и метаболизму различных видов микроорганизмов. Максимальное накопление штаммов пастерелл (20,0±0,7-К21,8±0,9 млрд/см3), сальмонелл (49,8±0,5-51,8±0,8 млрд/см3) и эшерихий (50,0±0,0^-53,8±1,1 млрд./см3)

■Зарегистрировали в бульоне Хоттингера, содержащим соответственно 185-200, 200-250 и 220-250 мг% аминного азота.

5. Определены оптимальные условия серийного производства бактериальных антигенов. Метод периодического культивирования позволяет интенсифицировать кинетические показатели процессов размножения микроорганизмов и по сравнению со стационарным способом сократить время максимального накопления бакмассы минимум в 2 раза, повысить жизнеспособность клеток до 92-^97 % и уровень накопления пастерелл, сальмонелл, эшерихий соответственно в 8,13; 3,75 и 5,88 раза.

6. Методом проточной цитометрии отобрана, аттестована культуральная модель - перевиваемая линия клеток МЕ)ВК (Е) — с высоким ростовым потенциалом и не содержащая контаминантов. Определены оптимальные условия максимального накопления штаммов ПТК 45/86 (7,47±0,06 ТЦДзо/смз) и ТК/А ВИЭВ (7,60±0,04 ТЦДзо/смз) вирусов парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота роллерным методом.

7. Впервые разработана технология изготовления и методы обеспечения качества «Сыворотки антиадгезивной антитоксической против эшерихиоза сельскохозяйственных животных». Определены состав и условия изготовления комплексного антигена из бактериальных клеток эшерихий трех серогрупп 09, 078 и 0141, полисахаридных капсульных антигенов КЗ О, К80 и К87, белковых адгезивных антигенов К88, К99 и 987Р, Ь41, термостабильного, термолабильного и вероанатоксинов. Оптимизирована схема гипериммунизации и эксплуатации волов-продуцентов. Продолжительность цикла гипериммунизации доноров и количество инъекций сокращены на 10 дней и 2 введения поливалентного антигена. В сыворотке крови выявлены высокие титры антител к адгезивным антигенам 987Р и Б41; ТС и УТ токсинам, которые отсутствуют в сыворотке-прототипе. Сыворотка безвредна, обладает выраженным лечебным и профилактическим эффектом против эшерихиоза (колидиареи, колисепсиса, колиэнетротоксемии) сельскохозяйственных животных.

8. Впервые разработаны технология производства и система обеспечения качества «Сыворотки против пастереллеза, сальмонеллеза, эшерихиоза, парагриппа-3 и ИРТ крупного рогатого скота». Отобраны и аттестованы штаммы микроорганизмов

и вирусов, с полным набором факторов патогенности и антигенности. Определен состав, условия хранения и контроля активности инакгивированного бактериального и культурального вирусного антигенов. Оптимизирована схема гипериммунизации и эксплуатации волов-продуцентов. Одновременное введение комплексных антигенов не вызывает интерференции между штаммами возбудителей вирусных и бактериальных инфекций и повышения реактогенности организмов животных-доноров. Усовершенствована схема изготовления и метод контроля качества лечебной сыворотки.

9. Применение поливалентной сыворотки против респираторно-кишечных инфекций безопасно, эффективно и экономически оправдано. Однократное введение препарата с профилактической целью в дозе 20-30 мл обеспечивает сохранность не менее 85,6 % телят. Лечебная эффективность препарата в дозе 40-60 мл составляет от 80,1 до 95,3 %.

10. Впервые разработана технология производства и система обеспечения качества «Иммуно серум-сыворотки для лечения и профилактики вирусных пневмоэнтеритов телят». Отобраны и паспортизированы штаммы вирусов и оптимизированы условия изготовления комплексных антигенов, схема гипериммунизации, эксплуатации ВП и контроля активности лечебного препарата.

11. Профилактическая эффективность поливалентной сыворотки «Иммуно серум» на новорожденных телятах в хозяйствах, неблагополучных по вирусным пневмоэнтеритам составила от 96,2 до 100%. Двукратное применение препарата с лечебной целью обеспечивало сохранность 92,8-100% животных.

12. Разработаны и внедрены в практику поливалентные сыворотки крови животных против респираторно-кишечных инфекций крупного рогатого скота. Комплекс технологических решений позволил сократить затраты труда, средств и времени и обеспечить серийное производство стандартных по активности, лечебной и профилактической эффективности производственных серий сывороток, отвечающих требованиям потребителя. Среднегодовой экономический эффект от внедрения в практику современных технологических решений при изготовлении трех видов лечебных препаратов составил 3832674,62 рублей.

-3175. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для практического использования разработаны и утверждены следующие нормативные документы:

- Промышленный регламент на производство «Иммуносерум - сыворотки для лечения и профилактики вирусных пневмоэнтеритов телят» ПР-0042849-015-09;

- Промышленный регламент на производство «Сыворотки против пастереллеза, сальмонеллеза, эшерихиоза, парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота» ПР- 00482849-013-09;

- Промышленный регламент на производство «Сыворотки антиадгезивной антитоксической против эшерихиоза сельскохозяйственных животных» ПР-00482849-011-09;

- Стандарт ФГУП «Армавирская биофабрика» «Иммуносерум - сыворотка для лечения и профилактики вирусных пневмоэнтеритов телят». Технические условия СТО 00482849-0018-2007. Утвержден Россельхознадзором 03.03.2008 г.;

- Стандарт ФГУП «Армавирская биофабрика» «Сыворотка против пастереллеза, сальмонеллеза, эшерихиоза, парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота» Технические условия СТО 9388-00100482849-2007. Утвержден Россельхознадзором 03.03.2008 г.;

- Стандарт ФГУП «Армавирская биофабрика» «Сыворотка антиадгезивная антитоксическая против эшерихиоза сельскохозяйственных животных». Технические условия СТО 00482849- 0020-2007. Утвержден Россельхознадзором 15.10.2008 г.;

- Сертификат соответствия № РОСС 1Ш ФВ01.Н25748 «Иммуносерум -сыворотка для лечения и профилактики вирусных пневмоэнтеритов телят». Утверждена органом по сертификации РОСС №. 0001.11ФВ01 ФГУ «ВГНКИ» за № 0971018. Срок действия по 03.03.2013 г.;

-318- Сертификат соответствия № РОСС 1Ш ФВ01.Н26231 «Сыворотка против пастереллеза, сальмонеллеза, эшерихиоза, парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота». Утверждена органом по сертификации РОСС 1Ш. 0001. 11ФВ01 ФГУ «ВГНКИ» за № 0971179. Срок действия с 02.10.2012 по 01.01.2013 г.;

- Сертификат соответствия № РОСС 1Ш ФВ01.Н23792 «Сыворотка антиадгезивная антитоксическая против эшерихиоза сельскохозяйственных животных».Утверждена органом по сертификации РОСС ЬШ. 0001.11ФВ01 ФГУ «ВГНКИ» за№ 0411783. Срок действия с 03.08.2011 по 02.02.2013 г.;

Инструкция по применению сыворотки против пастереллеза, сальмонеллеза, эшерихиоза, парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота. Утверждена Россельхознадзором 11.07.2011 г.;

- Инструкция по применению сыворотки антиадгезивной антитоксической против эшерихиоза сельскохозяйственных животных Утверждена Россельхознадзором 11.07.2011 г.;

- Инструкция по применению Иммуносерум - сыворотки для лечения и профилактики вирусных пневмоэнтеритов телят. Утверждена Россельхознадзором 11.09.2012 г..

-3196. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. А. с. 1795582 СССР. Способ получения гипериммунной сыворотки против респираторных заболеваний крупного рогатого скота / Шегидевич Э.А., Юдин А.И., Федулов В.Б. и др. - Per. 08.10.1992.

2. A.c. 926813 СССР. Ассоциированная вакцина против парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита и способ профилактики парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита / Крюков H.H., Зудилина З.Ф., Вечеркин A.C. -Заявл. 07.01.1982.

3. Аавер, Э.Я. К эпизоотологии инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в Эстонской ССР / Э.Я. Аавер, Ю.В. Фомин, Ю. Кумар // Тез. докл. Всес. межвуз. научн. конф. по вет. вирусологии. М.: 1973.— С. 41-43.

4. Авылов, Ч.К. Справочник ветеринарного врача / Ч.К. Авылов, Н.М. Алтухов, В.Д. Бойко, и др.: сост. A.A. Кунаков - Колос, 2006. -736с.

5. Адамова, И.Ю. Системы обеспечения качества производства/ И.Ю. Адамова.- М.: Мед. бизнес, 2005 - 344 с.

6. Адгезивный антиген К99 термостабильный энтеротоксин у патогенных эшерихий - возбудителей колибактериоза телят / O.A. Полякова и др. // Ветеринария. - 1986. - № 8. - С. 37-40.

7. Аликин, Ю.С. Стимуляторы неспецифической резистентности на основе РНК для ветеринарной медицины: автореф. дис. ... доктора биол. наук: 16.00.03 / Аликин Юрий Серафимович - Новосибирск, 1998. - 42 с.

8. Амитров, В.К. Пастереллез крупного рогатого скота: / В.К. Амитров, С.П. Нечаев, К.А. Медведев, М.Я. Казаков // Ветеринария, 1961. — № 71.- С. 6-8.

9. Аналитические методы белковой химии / Под ред. В.Н.Ореховича. - М.: Изд. ИЛ, 1963.- 643с.

10. Ананьев, П.К. Колибактериоз молодняка / П.К. Ананьев, В.М. Петров, Э.Б. Соловьев. - Алма-Ата: Кайрат, 1986. - 111 с.

-32011. Андреев, E.B. Диагностика и профилактика вирусных респираторных инфекций молодняка крупного рогатого скота в хозяйствах по производству говядины / Е.В Андреев // Пути обеспечения ветеринарного благополучия в промышленном животноводстве. — Киев, 1978.— С.34-42

12. Андреев, Е.В. Средства и способы пассивной иммунизации телят в хозяйствах по производству говядины / Е.В. Андреев // Проблемы ветеринарной иммунологии. — М.: Агропромиздат, 1985.— С. 135-138.

13. Андреев, Е.В. Острые респираторные заболевания крупного рогатого скота / Е.В. Андреев, A.B. Драгомир. - Кишинев: Картя-Малдовеняскэ, 1979.— 194 с.

14. Андреев Е.В. Выделение цитопатогенных агентов из спермы быков-производителей: сборник ветеринария / Е.В. Андреев, О.Д. Дудник. - Киев, 1977.-В. 45.- С. 3-5.

15. Андреев, Е.В. Ассоциированное воздействие на организм вируса и условно-патогенных бактерий / Е.В. Андреев // Ветеринария.-1984. - №7- С. 22-27.

16. Андросик, H.H. Этиологическая структура колибактериоза новорожденных телят и его специфическая профилактика / H.H. Андросик, Д.В. Курлович, В.К. Карпович, Ю.В. Ломако // Проблемы патологии, санитарии и бесплодия в животноводстве: Материалы международной науч.-практ. конф.. - Минск, 1998. - С. 78-79.

17. Антипов, A.A. Обоснование применения пробиотика «Olin» при выращивании бройлеров / A.A. Антипов, В.И. Фисинин, H.A. Егоров // Ветеринария и кормление.-2011.-№1.- С.10-13.

18. Антонюк, В.П. О повышении качества ветеринарных биологических препаратов: сборник научных трудов / В.П. Антонюк, А.Г. Лихачев, Ю.В. Родин. - Москва: ВГНКИ, 1984. - С.91-94.

19. Анч, Л. Вывод на рынок нового лекарственного препарата / Л. Анч. // Ремедиум.- 2006.- Июнь.-С.37-42.

20. Апатенко, В.М. Достижения ветеринарной паразитоценологии и основные

направления ее развития / В.М. Апатенко. - М.: Колос, 1984.— С.56-69.

21. Апатенко, В.М. Смешанные вирусные инфекции сельскохозяйственных животных / В.М. Апатенко. - Киев: Урожай, 1978.— 120 с.

22. Аронов, И. Качество продукции и безопасность: что первично? / И. Аронов // Стандарты и качество.- 2006.-№1.-С.34-37.

23. Артемов, Б.Т. Совершенствование схемы гипериммунизации животных-доноров / Б.Т. Артемов. Л.И. Ефанова // Актуальные проблемы ветеринарии. - Барнаул, 1995.- С. 101-107.

24. Арушунян, А.Я. Профилактика острых кишечных заболеваний новорожденных телят бактериальной этиологии с использованием метаболитных пребиотиков: дис. ... канд. вет. наук: 06.02.02 / Арушунян Артавазд Ягорович.- Краснодар, 2013г. - 132 с.

25. Ахмедов, A.M. Сальмонеллезы молодняка. - 2-ое изд. испр. и доп. / A.M. Ахмедов. - М.: Колос, 1983 - 240с.

26. Ашмарин, И.П., Статистические методы в микробиологических исследованиях / И.П. Ашмарин, A.A. Воробьев. - Л.: Медгиз, 1962. - 180с.

27. Бакулов, И.А. Эпизоотология с микробиологией / И.А. Бакулов - М.: Агропромиздат, 1987.- 415 с.

28. Бакулов, И.А. Особенности распространения вирусных болезней животных в современных условиях и их профилактирование / И.А. Бакулов, Г.Г. Юрков // Актуальные проблемы ветеринарной вирусологии.- Казань: 1980.-С.6-9

29. Барашков, А.Н. Эффективность гипериммунизации волов-продуцентов гипериммунной сыворотки против пастереллеза / А.Н. Барашков. - Витебск, 2002.-Т.З 8,4.1.- С.10-12.

30. Басова Н.Ю. Респираторные болезни молодняка крупного рогатого скота инфекционной этиологии в условиях Северного Кавказа: автореф. дис. ... докторара вет. наук: 16.00.03 / Басова Наталья Юрьевна. - Краснодар, 2002.

-322-42 с.

31. Безбородкин, Н.С. Методика определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий / Н.С. Безбородкин - Витебск, 2000. - 13 с.

32. Безопасность работы с микроорганизмами I и II групп патогенности (опасности). Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.31285-03. М.: МЗ РФ, 2003- 152 с.

33. Безопасность работы с микроорганизмами III и IV групп патогенности и гельминтами. Санитарные правила СП 1.2.731-99. - М.: Федеральный центр госанэпиднадзора МЗ РФ, 1999. - 107 с.

34. Белкина, Н.М. Изучение некоторых биологических свойств вирусов группы герпеса: автореф. дисс. ... канд. вет. наук: 16.00.03 / Белкина Нина Михайловна - М.: 1974.— 20 с.

35. Белова, Н.Б. Эффективность ассоциированной вакцины против рота-корона-ВД-БС вирусов крупного рогатого скота / Н.Б. Белова // Ветеринария.-2005.-№4.-С.18-20.

36. Биотехнология. Принципы и применение: пер. с англ. / под. ред. И. Хиггинса, Д. Беста, Дж. Джонса. - М.: Мир, 1988 - 480с.

37. Биотехнология: учебник / И.В. Тихонов, Е.А. Рубан, Т.Н. Грязнева и др., под. ред. Е.С. Воронина. - СПб.: ГИОРД, 2005. - 782с.

38. Блюгер, А.Ф. Сальмонеллез / А.Ф. Блюгер, И.Н. Новицкий, З.Ф. Теребкова. - Рига: Зинатне, 1975. - 330 с.

39. Бобрович, В.Р. Применение специфических моно- и полисывороток и иммуноглобулинов для профилактики и терапии вирусных пневмоэнтеритов крупного рогатого скота // Акт. вопр. профилактики и борьбы с болезнями с.-х. ж-ных. в спец. хоз-вах и комплексах: Тез. докл. республ. научн.-произ. конф. - Минск, 1983. - С. 13-14.

40. Бовкун, Г.Ф. Биологические особенности и антигеная структура возбудителя пастереллеза (Р. multocida): автореф. дис. ... канд. вет. наук:

-32316.00.03 / Бовкун Г.Ф. - M.: 1977. - 18 с.

41. Болезни крупного рогатого скота и овец / П.А.Красочко, З.Д.Джамбулатов, К.Б.Курбанмагомедов и др.: под ред. П.А.Красочко. - Махачкала. 2007 - 657 с.

42. Болезни крупного рогатого скота и свиней / П.А. Красочко, О.Г.Новиков, А.И.Ятусевич и др.: под ред. П.А.Красочко. - Минск: Технопринт, 2003-464с.

43. Болезни сельскохозяйственных животных / П.А.Красочко, М.В. Якубовский, А.И.Ятусевич и др.: под ред. П.А.Красочко. - Минск: Бизнесофсет, 2005. - 800 с.

44. Болоцкий, И. А. Инфекционные болезни свиней: учебное пособие для вузов / И.А. Болоцкий, А.К. Васильев, В.И. Семенцов, C.B. Пруцаков. -«Феникс», 2007 -350 с.

45. Борисович, Ю.Ф. Инфекционные болезни животных / Ю.Ф. Борисович, JI.B. Кириллов. - М.: Агропромиздат, 1987. - 288 с.

46. Бочаров, А.Ф. Персистенция вирусов / А.Ф. Бочаров, Е.Ф. Бачаров. -Новосибирск: Наука, Сибирское отделение, 1979. - 237 с.

47. Буданов, В.П. Место введения антигена / В.П. Буданов // Ветеринария.-1973.-№3.-С. 90.

48. Будулов, Н.Р. Респираторные болезни крупного рогатого скота в Дагестане: Дис. ... докт. вет. наук / Будулов Н.Р. - Краснодар, 2009 - 334 с.

49. Бурлацкий, И.Д. Колибактериоз и сальмонеллез и их специфическая профилактика: автореф. дис. ... доктора вет. наук / И.Д. Бурлацкий -Ленинград, 1980. - 40 с.

50. Буровая, Ф.Н. Изучение влияния гидролизатов эритроцитарной массы (отходов производства) на состав гидролизатов / Ф.Н. Буровая, Н.И. Шапиро, М.И. Ступова, Т.П. Колотинская. - М., 1980. - С.93-99.

-32451. Вартанян, Ю.П. Отек лап белых мышей - тест для оценки активности энтеротоксинов E.coli / Ю.П. Вартанян, М.К. Северцова, О.И. Введенская // Бюлл. эксперим. биол. и мед. - 1979. - № 2. - С. 150-152.

52. Варфоломеев, С.Д. Биотехнология. Кинетические основы микробиологических процессов / С.Д. Варфоломеев, C.B. Калюжный. - М.: Высшая школа, 1990.- 296 с.

53. Венедяпин, Г.В. Общая методика экспериментального исследования и обработки опытных данных: 3-е изд., доп. и перераб. - М.: Колос, 1973. -199 с.

54. Ветеринарные препараты. Справочник / под.ред. Д.Ф. Осидзе.-М.: Колос, 1981.-270 с.

55. Виглинский, О.Н. Пути повышения качества антитоксических сывороток / О.Н. Виглинский, JI.H. Запорожцев // Актуальные вопросы иммунопрофилактики вирусных и бактериальных инфекций. -Томск, 1981. - 139 с.

56. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьев, Н.В. Фомина. - М.: ВНИТИБП, 1998. - 928 с.

57. Власова, Н.П. Оптимизация состава питательной среды для культивирования бактерий рожи свиней / Н.П.Власова, A.C. Фоменко, Л.Б. Соловьев и др. // Передовой науч.-производств. опыт в биологич. пром-сти - 1983.-№3.- С.7-9.

58. Волынец, Л.К. Продуцирование веротоксинов эшерихиями, выделенными при колибактериозе телят : материалы Международной научно-практической конференции 5-6 октября 2000 / Л.К. Волынец, Л.В. Зоценко, науч. ред. H.H. Андросик. - Минск: Хата, 2000 - С. 249-251.

59. Воронин, Е.С. Профилактика диарей и респираторных болезней телят с помощью новейших препаратов : материалы науч. конф. / Е.С. Воронин, Д.А. Девришов. -М., 1990.- С. 123-130.

-32560. Воронин, Е.С., Шахов Ф.Г. Современная концепция этиологии, профилактики и лечения молодняка сельскохозяйственных животных // Состояние, проблемы и перспективы развития ветеринарной науки в России // Материалы научной сессии Россельхозакадемии / Том: Пленарное заседание, секции 1-11.: Россельхозакадемия, 1999. - С. 209-214.

61. Вспышка инфекционного ринотрахеита у племенного скота после транспортировки: бюллетень ВИЭВ / B.C. Иванов, З.Ф. Зудилина, Г.А. Надточей, H.H. Крюков. - М.: 1972.—Вып. XIV.— С. 30-31.

62. Вечеров, А.Е. Выявление и дифференциация штаммов вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота с помощью полимеразной цепной реакции и секвенирования фрагмента гена HN / А.Е. Вечеров, П.К. Аянот; A.M. Тимина, В.В. Лисицин // Вопр.вирусологии. - 2003. - Т.48. - N 5.- С. 46

63. Галактионов, В.Г. Иммунология / В.Г. Галактионов. - Москва: Изд-во МГУ, 1998.-480 с.

64. Галатова, Л.В. Эпизоотология, диагностика и мероприятия по профилактике и ликвидации инфекционного ринотрахеита в ЗАО С1Ш "Коелгинское" Еткульского района : актуал.пробл.вет.медицины / Л.В. Галатова, Т.Н. Давыдова. -Троицк, 2002 . - С. 38-39

65. Гармашева, И.Л. Биологическая активность и безопасность энтерококков [электронный ресурс] / И.Л. Гармашева, Н.К. Коваленко // режим доступа http://fest.org.ua/usefulinfo/zdorovie_kosmetica/info/98

66. Гаффаров, Х.З. Полиспецифическая гипер-иммунная сыворотка против рота-, корона-, герпесвирусов и эшерихиоза новорожденных телят / Х.З. Гаффаров, М.А. Ефимова, М. Шакиров // Ветеринарный врач. - 2000. - № 3. - С. 21-24.

67. Гаффаров, Х.З. Лечение смешанных форм инфекционных диарей новорожденных телят и поросят / Х.З. Гаффаров, A.B. Иванов, Е.А. Непоклонов, А.З. Равилов // Практик. - 2007. - № 1. - С. 56-61.

-32668. Геведзе, В.И. Пастереллез крупного рогатого скота / В.И. Геведзе. — Минск. «Урожай», 1989. - 133 с.

69. Гидролизаты из отходов сывороточного и глобулинового производства / Н.Г. Шептун, О.Ф. Фисенко, Л.И. Алейников, Л.Я. Телишевская // Контроль, стандартизация и применение химиотерапевтических и биологических активных препаратов, кормовых добавок и премиксов: сборник науч. тр.- М., 1985. - С.78-82.

70. Гипериммунные сыворотки / С.П. Карпов и др.. - Томск: изд-во Томского университета, 1976. - 380 с.

71. Глотов, А.Г. Респираторные болезни телят вирусно-бактериальной этиологии / А.Г. Глотов, Т.И. Глотова. - Новосибирск: РАСХН, Сиб. Отд-ние. ГНУ ИЭИСиДВ, 2008.- 256 с.

72. Глотов, А.Г. Вирусные и ассоциативные болезни крупного рогатого скота (особенности эпизоотологии, патогенеза, клинического проявления, патологических изменений) / А.Г. Глотов, Н.А. Шкиль, А.Н. Сергеев // Ветеринарный консультант.- 2005. - № 9.- С.5-14.

73. Глотов, А.Г. Экспериментальная инфекция телят, вызванная вирусами вирусами вирусной диареи, инфекционного ринотрахеита и Pasteurella multocida / А.Г. Глотов и др. // Ветеринария. - 2007.- № 8. - С. 21-24

74. Головко, А.Н. 3aco6i д1агностик} та спещфичной профилактию кол1бактер1озу телят на ocHoei факторов патогенности збудшка: автореф. дис.... д-ра вет. наук / А.Н. Головко. - Харюв, 1996. - 33 с.

75. Головко, А.Н. Система средств диагностики и профилактики колибактериоза животных нового поколения : Науковые досягнення в галуз1 ветеринарной медицини / А.Н. Головко, В.А. Ушкалов. - Харыав, 1997.-С. 18-19.

76. Голубева, И.В. Род Escherichia. Энтеробактерии. / И.В. Голубева, B.C. Киселева : под ред. В.И. Покровский. - М.: Медицина, 1985. - С. 57-87.

-32777. Голубь, Ю.С., Стеценко В.И. Профилактика парагриппа-3 у телят в первые месяцы жизни // Профилактика и меры борьбы с болезнями молодняка с.-х. ж-ных: Тез. докл. республ. научн.-практ. конф. - Минск, 1990. - С. 87-88.

78. Горбань, Н.И. Вирусные респираторные болезни животных / Н.И. Горбань.

— Киев: Урожай, 1981.— 64 с.

79. ГОСТ 13496.7-97 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения токсичности. - М.: Стандартинформ, 1997.-15 с.

80. ГОСТ Р 50779.42-99 Статистические методы. Контрольные карты Шухарта. -М.: Изд-во стандартов, 1999. - 65 с.

81. ГОСТ Р 52249-2009 Правила производства и контроля лекарственных средств. -М.: Стандартинформ, 2010.-139 с.

82. ГОСТ Р 52537-2006 Производство лекарственных средств. Система обеспечения качества. Общие требования. - М.: Стандартинформ, 2006.-74с.

83. ГОСТ Р 52550-2006 «Производство лекарственных средств. Организационно-технологическая документация». - М.: Стандартинформ, 2007.- 40 с.

84. ГОСТ Р ИСО 10014-2006 Менеджмент организации. Руководящие указания по достижению экономического эффекта в системе менеджмента качества.

- М.: Медицина, 2007. - 440 с.

85. ГОСТ Р ИСО 14644.4-2002 Чистые помещения и связанные с ними контролируемые среды. Ч. 4. Проектирование, строительство и ввод в эксплуатацию. - М.: Стандартинформ, 2002. - 37 с.

86. ГОСТ Р ИСО 9001-2001 Системы менеджмента качества. Требования. - М.: Изд-во стандартов, 2001. -20 с.

87. ГОСТ Р ИСО 9001-2008 Система менеджмента качества. Требования. - М.: Изд-во стандартов, 2009 - 20 с.

-32888. ГОСТ Р ИСО 9004-2010 Менеджмент для достижения устойчивого успеха организации. Подход на основе менеджмента качества. - М.: Стандартинформ, 2011. - 41 с.

89. Гражданкин, Б. Как получить здоровые и безопасные продукты птицеводства [Электронный ресурс] / Гражданкин Б. // - Режим доступа: www.krestyanin.com.-2010

90. Грапкова, A.A. Система управления качеством. Организационная схема системы управления качеством. Организация ведения документации : мат. совещания по вопросам Государственного регулирования в сфере обращения лекарственных средств и мед. изделий / A.A. Грапкова — М., 2005. - С.122-127.

91. Грачев, В.П., Петруччиани Д.С. Оценка перевиваемых клеточных линий как субстрата для производства биологически активных веществ / В.П. Грачев, Д.С. Петруччиани // ЖМЭИ. - 1987. - №2. - С.46-51.

92. Григорьев, Л.Ю. О роли СМК в общей системе управления предприятием //Методы менеджмента качества, 2009. - №4. - С.14-17.

93. Губин, М.М. Технология лекарств по ОМР: инфузионные растворы / М.М. Губин. -М., 2011.-224 с.

94. Гуненков, В.В. О лабораторной диагностике вирусных пневмоэнтеритов телят / В .В. Гуненков // Ветеринария. - 1978. - № 6. - С. 90-93.

95. Гуненков, В.В. Респираторно-синцитиальная инфекция / В.В. Гуненков, Г.А. Халенев, В.Н. Сюрин // Животноводство и ветеринария. - 1975.-Т.8.-С.70-76.

96. Гуненков, В.В. Профилактика вирусных гастроэнтеритов телят / В.В. Гуненков, А.Е. Зеленов, Н.Л. Соколова // Ветеринария.-2002,- №12.-С.21-23.

97. Гуненков, В.В., Халенев Г.А., Сюрин В.Н. Вирусные и хламидозойные респираторные и кишечные инфекции крупного рогатого скота / В.В.

Гуненков, Г.А. Халенев, В.Н. Сюрин // Животноводство и ветеринария. -1975. - Т.8. - С.5-13.

98. Гусаков, Ю.А. Всероссийский конкурс в области менеджмента качества. Итоги и перспективы / Ю.А. Гусаков // Стандарты и качество. - 2010. -№10. - С.64-68.

99. Гуськова, Т.А. Оценка безопасности лекарственных средств на стадии доклинического изучения / Т.А. Гуськова // Химико-фармацевтический журнал.-1990.-Т. 24. - №7.- С.10-15.

100. Гутковский, A.A. Колибактериоз телят и поросят / A.A. Гутковский, Г.Л. Дворкин. - Минск : Ураджай, 1989. - 160 с.

101. Гутковский, A.A. Об антигенах для получения гипериммунной сыворотки к термолабильному энтеротоксину (LT) кишечной палочки / A.A. Гутковский. - Минск: Ураджай, 1991.-Вып.29.-С.67-70.

102. Декларация Российского открытого акционерного общества «Росагробиопром» о качестве продукции (принята Советом директоров РОАО «Росагробиопром» протокол № 75 от 15.03.2006 г.).

103. Деревлева, Т.А. Способ получения гипериммунных сывороток путем введения в лимфатический узел / Т.А. Деревлева, P.A. Зубцова . — М., 1975. -Т.22.-СЛ07-109.

104. Джарылгасов, С.А. Методы получения и оценка качества воды для клеточных культур, используемых в микробиологическом производстве / С.А. Джарылгасов, С.М. Борисова, Н.М. Пухова, В.А. Лукина. - М., 1986. -48с.

105. Диагностика болезней животных и профилактика их на фермах и комплексах: сб. науч. тр. ВАСХНИЛ. - Новосибирск, 1984. - С. 9 - 13.

106. Директива Совета о защите животных, используемых в экспериментальных и научных целях (86/609/ЕЭС), 24 ноября 1986г.-25с.

-330107. Досон, Р. Справочник биохимика/ Р. Досон, Д. Элиот, У. Элист, К. Джеке. -М.: Мир, 1991.- 543с.

108. Дурнев, А.Д. Современная практика доклинической оценки безопасности лекарств / А.Д. Дурнев // Фармобращение : мат. совещания по вопросам гос. регулирования в сфере обращения лекарственных средств и медицинских изделий.- М.- 2005. - С.28-29.

109. Душук, Р. В. Болезни, вызываемые пастереллами. Пастереллёзы : инфекц. болезни животных: справочник / Р. В. Душук : под ред. Осидзе Д. Ф.- М., 1987.- С. 188-194.

110. Душук, Р.В. Совершенствование специфической профилактики пастереллеза животных : совершенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов: материалы Всесоюзной научной конференции / Р.В. Душук. -М., 1991. — С.156-158.

111. Душук, Р.В. Инфекционные болезни сельскохозяйственных животных / Р.В. Душук. -М.: Агропромиздат, 1987. - 198 с.

112. Жданов, В.М. Вирусология / В.М. Жданов, С.Я. Гайдамович. - М.: Медицина, 1966.— 351 с

113. Жестерев, В.И. Чувствительность культур клеток к вирусу ПГ-3 КРС / В.Н. Жестерев, Т.В. Каламина, Ю.Ф. Калантаенко, С.Г. Юрков. // Диагн. профил. и меры борьбы с особо опасными экзотич. болезнями ж-ных.: Мат. междун. науч.-практ. конф. - Покров, 1998. - С. 114-115.

114. Животная клетка в культуре : методы и применение в биотехнологии / под общ. ред. проф. Л.П.-Дьяконова. - М.: Изд. Спутник+, 2009.- 656 с.

115. Жидков, С.А. Вирусная диарея - болезнь слизистых оболочек крупного рогатого скота (характеристика возбудителя, диагностика и специфическая профилактика): дис. ... доктора вет. наук.: 16.00.03 / Жидков Станислав Александрович. - М., 1994. - 299 с.

-331116. Жидков, С.Ф. Специфическая профилактика рота-, коронавирусных энтеритов телят и вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота (ВД-БС) / С.Ф.Жидков, и др. // Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных. Мат. Межд. Науч.-практ.- конф. ВИЭИ.- М.-2008.-С.220-222.

117. Загаевский, И.С. Сальмонеллезы животных / И.С. Загаевский, A.JI. Жорницкий,- Киев: Урожай, 1977.- 144 с.

118. Зайцев, В.В. Исследования по усовершенствованию метода получения полисахаридного антигена сальмонелл / В.В. Зайцев, А.П. Медведев // Научные основы производства ветеринарных препаратов. - М. - 224с.

119. Закутский, Н.И. Роллерная технология культивирования вируса ПГ-3 / Н.И. Закутский, В.И. Жестерев, Л.Д. Конакова и др. // Диагн., профил, и меры борьбы с особо опасными экзотич. и зооантропоноз. болезнями ж-ных: Сб. статей Междунар. науч.-практ. конф. - Покров, 2000. - С. 177-179.

120. Зароза, В.Г. Колибактериоз телят / В.Г. Зароза. - М. : Агропромиздат, 1991. -237 с.

121. Зеленский, В.П. Пастереллез с.-х. животных и борьба с ним / В.П. Зеленский.- Минск: «Урожай», 1965. — 71 с.

122. Зелютков, Ю.Г. Инфекционные энтериты новорожденных телят : монография / Ю.Г. Зелютков. - Витебск : УО ВГАВМ, 2006. - 188 с.

123. Зелютков, Ю.Г. Морфогенез ротавируса крупного рогатого скота / Ю.Г. Зелютков : гл. ред. А.И. Ятусевич. - Витебск, 2006. - Т. 42, вып. 1, ч. 2. - С. 24-25.

124. Зелютков, Ю.Г. Продукция адгезивных антигенов эшерихий на питательных средах : ученые записки ВГАВМ / Ю.Г. Зелютков. - Витебск, 1998.-Т. 34.-С. 137-139.

125. Зелютков, Ю.Г. Атрыманне антыгеннага эрытрацытарнага дыягностыкума в1руснай дыярэ1 буйной рагатай живёлы / Ю.Г. Зелютков, П.А. Красочко // Весщ Акадэмп навук БССР. Сер. сельскагаспадарчых навук.— 1990.—

№ 1.— С.113-116.

126. Иванов, Г.А. Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота / Г.А. Иванов, Ю.В. Фомин // Лабораторная диагностика вирусных болезней животных.—М.: Колос, 1972 — С.101-107

127. Иванов, И.В. Иммуногенность сухой инактивированной вакцины из вируса ПГ-3 «ЗКСМ», репродуцированного в монослое клеток МДВК на макроносителях // Науч. основы произ-ва вет. биол. препаратов: Тез. докл. Всерос. науч.-практ. конф. - Щелоково, 2000. - С. 41-43.

128. Иванов, И.В. Сравнительная активность вируса парагриппа-3, репродуцированного в культуре клеток ВНК-21/13 и МДВК суспензионным и псевдосуспензионным способами // Науч. основы произ-ва вет. биол. препаратов: Тез. докл. Всерос. научн.-практ. конф. - Щелково, 2000. - С. 4041.

129. Иммунитет и его коррекция в ветеринарной медицине / П. А. Красочко и др. - Смоленск, 2001. - 324 с.

130. Иммуноглобулин молозивный неспецифический / В.Е.Иванов, А.Ф.Пилуй, П.А.Красочко // Нормативно-техническая документация ТУ РБ 00028493.070-95 Минск, 1995, 30 с.