Совершенствование технологии получения сорбозы культурой Gluconobacter oxydans тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат технических наук Шмалько, Татьяна Александровна

• Шмалько, Татьяна Александровна
• кандидат технических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат технических наук Шмалько, Татьяна Александровна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1 Микробиологический синтез полупродуктов аскорбиновой кислоты.

1.2. Таксономическое положение рода С1исопоЬас(ег.

1.3. Бактерии рода ОШсопоЬаМег.

1.3.1. Морфологические особенности бактерий С1исопоЬас(ег, распространение бактерий рода (ИисопоЬас1ег.

1.3.2. Биохимические особенности бактерий рода аисопоЬасЛег.

1.3.3. Роль пито п л аз м аги чески х мембран в окислении органических соединений бактериями С1исопоЬас(ег охуйат.

1.3.4. Дыхательная цепь и окислительное фосфорилирование бактерий С1исопоЬас1ег охуйат.

1.3.5. Окислительные реакции бактерий рода СШсопоЬааег.

1.3.6. Пигменты бактерий рода аисопоЬас(ег.

1.3.7. Физиологичесике особенности культуры С. охуйат.

1.4. Пути интенсификации процесса окисления Д-сорбита в Ь-сорбозу.

1.4.1. Генетическая нестабильность штаммов-продуцентов биологически активных веществ.

1.4.2. Способы хранения культур-продуцентов.

1.4.3. Использование различных биостимуляторов в процессе окисления Д-сорбита в Ь-сорбозу.

1.4.4. Влияние факторов, определяющих динамику процесса окисления Д-сорбита в Ь-сорбозу.

Глава 2. Экспериментальная часть

2.1 Объекты и методы исследований.

2.1.1. Объекты исследований.

2.1.2. Культивирование бактерий.

2.1.3. Методы анализов.

2.1.4. Приготовление биостимуляторов.

2.1.5. Математическая обработка результатов.

2.2. Результаты и их обсуждение.

2.2.1. Изучение метаболизма штаммов культуры G.oxydans из коллекции ВНИВИ.

2.2.2. Влияние состава питательной среды и уровня аэрации на окислительную активность штаммов культуры G.oxydans.

2.2.3. Использование отработанной биомассы G.oxydans в качестве биостимулятора в составе питательных сред при окислении сорбита в сорбозу.

2.2.3.1. Влияние различных биостимуляторов на процесс окисления сорбита в сорбозу.

2.2.3.2. Использование ферментолизата уксуснокислых бактерий в качестве компонента питательных сред.

2.2.3.3. Использование ферментолизата шрота биомассы G.oxydans в качестве компонента питательных сред.

2.2.3.4. Определение оптимальной концентрации ферментолизата шрота биомассы на параметры процесса окисления сорбита в сорбозу.

2.2.3.5. Влияние внесения добавок к ферментолизатам биомассы и шрота на параметры процесса окисления сорбита в сорбозу.

2.2.4. Изучение условий хранения штаммов культуры G.oxydans.

2.2.4.1. Сравнение и выбор криопротекторов.

2.2.4.2. Влияние условий длительного хранения и реактивации на жизнеспособность и окислительную активность культур-продуцентов сорбозы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Совершенствование технологии получения сорбозы культурой Gluconobacter oxydans»

Актуальность темы. Производство аскорбиновой кислоты является самым крупнотоннажным в общем объёме производства витаминов и коферментов. Аскорбиновая кислота используется как фармакологическое средство при лечении разнообразных заболеваний и в профилактике гиповитаминозов, пищевая промышленность применяет аскорбиновую кислоту в виде антиоксидантной добавки и для витаминизации пищевых продуктов, парфюмерная - в составе косметических средств, другими областями промышленного применения являются реакции полимеризации, фот ография, технология обработки металлов.

В подавляющем большинстве стран аскорбиновую кислоту получают в кристаллической форме синтезом, который включает четыре химических этапа и один биотехнологический. "Узким местом" при производстве аскорбиновой кислоты является стадия получения сорбозы. В связи с этим на первый план выступает необходимость интенсификации и совершенствования стадии получения последней.

Производство сорбозы основано на реакции окисления Д-сорбита в Ь-сорбозу, которая осуществляется бактериями (ЛисопоЬаМег охуйат. Пути интенсификации этого процесса могут разрабатываться на основе детал ьного знания потребностей организма-продуцента и условий, обеспечивающих его рост и высокую окислительную активность. Свойства этого организма во многих отношениях уникальны и до сих пор недостаточно изучены. Оценка данных литературы, результатов лабораторных опытов и показателей процесса в действующем производстве приводит к заключению, что потенциальные возможности продуцента сорбозы в условиях производства не используются в полной мере. Научная новизна. Впервые определена субстратная специфичность штаммов-продуцентов сорбозы посредством использования микробных биосенсоров с целью выявления различий между штаммами. Проведено сравнительное изучение окисления Д-сорбита разными штаммами и показано, что окислительная активность штаммов, окисляющих сорбит при одинаковых условиях, варьирует в 6 довольно широких пределах. Установлено, что уровень окислительной активности зависит от соотношения между интенсивностью аэрации среды и составом ферментационной среды.

Впервые предложено использование в качестве биостимулятора в составе ферментационных сред биомассы и шрота биомассы уксуснокислых бактерий -отхода производства сорбозы, в виде ферм е нтол и зато в.

Предложен способ длительного хранения (не менее двух лет) штаммов культуры С. охуйат без снижения их окислительной активности при температуре -14" ±3°С, под слоем криопротектора.

Выявлены морфологические варианты в культуре-продуценте сорбозы, различающиеся по уровню окислительной активности. Определены морфологические признаки высокоактивных продуцентов сорбозы, которые могут быть использованы при проведении поддерживающей селекции штаммов.

Практическая значимость. Использование результатов работы позволяет:

- интенсифицировать рост и окислительную активность бактерий С.охуйат за счёт культивирования последних на средах, содержащих биостимуляторы, полученные на основе биомассы и шрота биомассы продуцента;

- упростить и удешевить процесс хранения и поддержания штаммов-продуцентов;

- отбирать наиболее активные в отношении окисления сорбита варианты бактерий, используя их морфологические признаки; повысить окислительную активность штаммов-продуцентов путём изменения состава компонентов питательной среды с учётом индивидуальных потребностей культуры.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является усовершенствование процесса окисления Д-сорбита в Ь-сорбозу культурой О. охуёат. Для достижения поставленной цели были определены основные задачи:

- изучить влияние состава ферментационной среды и условий культивирования на окислительную активность ряда штаммов культуры С.охуйат; 8

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Шмалько, Татьяна Александровна

Выводы

1. Охарактеризованы свойства штаммов культуры С.охучШт , показано сходство субстратной специфичности, и наряду с этим штаммы различаются неодинаковой скоростью окисления сорбита в сорбозу, потребностью в витаминах, аэрофильностью, осмотолерантностью.

2. Показана целесообразность использования клеточных компонентов отработанной биомассы культуры С\oxydans в качестве биостимуляторов в составе питательных сред. Установлено, что питательная ценность сред с ФУКБ повышается внесением аммонийного азота, витаминов или кукурузного экстракта. ФШБ используется в ферментационных средах без добавок.

3. Экспериментально установлено, что скорость процесса окисления сорбита в сорбозу на 8-13% выше при использовании в качестве биостимулятора ФШБ, при сравнении с использованием ФБМ. Определена оптимальная концентрация ФШБ в среде - 1 г/л.

4. Предложен способ поддержания культур, обеспечивающий повышение стабильности культур к диссоциации. Установлено, что хранение при отрицательных температурах -14°±з°С способствует накоплению высокоактивного Б-варианта, в 10-20 раз превышающего исходное соотношение диссоциан-тов.

5. Подобран режим хранения продуцентов сорбозы, обеспечивающий сохранение высокой окислительной активности сроком не менее 2-х лет при температуре -1411 ±3"Г под слоем 80% сорбита в качестве криопротектора.

6. Установлено, что поддерживающую селекцию штаммов-продуцентов сорбозы с целью сохранения высокой окислительной активности следует проводить с учётом их морфологических признаков на агаризованных средах.

161

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Шмалько, Татьяна Александровна, 1999 год

1. Азизбекян P.P. Изменение наследственности бактерий путём фаговой конверсии// Итоги науки и техники ВИНИТИ. Микробиология- 1974- т.З-с. 191-233.

2. Аркадьева 3. А. Факторы, влияющие на жизнеспособность и свойства микроорганизмов при различных методах хранения. // Биол. Науки-1983-№4-с.93-105.

3. Аркадьева З.А., Писку нова Н.Ф., Пименова М.Н., Влияние условий хранения на диагностические признаки Pseudomonas aeruginosa, P.fluorescens и P.putida II Биологические науки- 1984- №8- с.86-88.

4. Аркадьева З.А., Пименова М.Н., Хранение уксуснокислых бактерий //Прикл. биохим. и микробиол,-1985-Т.21, вып.5- с.645-648.

5. Аркадьева З.А. Хранение микроорганизмов // В кн. Промышленная микробиология, М.: Высшая школа,1989- с. 149-166.

6. Бахматова И.В., Чюрлис Т.К., Жарикова Г.Г. Естественная изменчтвость бактерий, М,- 1981 // Деп. в ВИНИТИ, 16.03.81, № 1593.

7. Бекер М.Е.Эдамберг Б.Е., Раппопорт А.И. Анабиоз микроорганизмов, Рига: Зинатне, 1981- с,247.

8. Беляков В.Д., Каминский Г.Д., Каминская С.Г. Гипотеза направленной самоперестройки популяции микроорганизмов и её общебиологическое значение// Журн. микробиол., эпидемиолог, и иммунобиол,- 1985- №1- с.93-100.

9. Березовский В.М. Химия витаминов, М.: Пищевая промышленность, 1973-631с.

10. Блок Р., Лестранж Р.,Цвейг Г. Хроматография на бумаге // Изд-во: Иностр. лигерат., М.,1954.

11. Богданов Н.Н. Техническая микробиология цельномолочных продуктов // М.: Пищепромиздат, 1965- 75с.

12. Браун В. Генетика бактерий, М., 1968- 446 с.162

13. Василенко М.И. Трансформация глюкозы в 2кето-Д-глюконовую кислоту свободными и иммобилизованными клетками микроорганизмов // Диссертация .канд.биол.наук,Пущино: 1992-180с.

14. Василяускас Ю.Ф., Станчинская Э.С., Стукалин Г.С. Морфологическая изменчивость штаммов Bacillus subtilis продуцентов а - амилазы // 1V Съезд всесоюзн. о-ва генетиков и селекционеров: Тез. Докл. 4.1, Кишинев- 1982-с.292.

15. З.Воробьева ЛИ. Микробиологический синтез витаминов, Изд-во: МГУ, 1982167 с.

16. Воскресенский A.M. Генетическая и биологическая характеристика S-, R-диссоциации у энтеропатогенных кишечных палочек серогруппы 0124:К72, 1981, ВИНИТИ № 3276-81.

17. Гебриел Х.М.А., Особенности биологии бактерий вида Gluconobacter оху-dans, обитающих в Египте. Дис. .канд.биол.наук, Л.: 1987-160с.

18. Генкель П.А. Микробиология с основами вирусологии, М.: Просвещение, 1974-с.271.

19. Герна Р. Хранение микроорганизмов // В кн.: Методы общей бактериологии-1983, М.: Мир T.1-C.512.

20. Голышева М.Г., Л ибер Е.Е, Метод адаптации уксуснокислых бактерий Acetobacter melanogenum и Acetobacter suboxydans к повышенным концентрациям сорбита // Витамины в теории и практике- 1953- т. 4-с.35-40.

21. Господинов H.P., Камедулски В.Г., Леви Ш.С., Тепавичарова И.И. Метод биохимического окисления D-сорбита в L-сорбозу: Авт. Св. НРБ № 17146 // РЖ Биология- 1979, № 1Л49993П.

22. Григорян А.Н., Головкина Г.П., Соловьёв Ю.М. и др. // В кн.: Биотехнология и биоинженерия Рига, 1978- т. 1-56 с.

23. Грязнова М.Н., Коновалова Е.Ю., Эль-Регистан Г.И. Характеристика анабиотических клеток микроорганизмов // Современные проблемы биотехнологии микоорганизмов: Тез. докл. конф. молодых учёных. Рига, 1987-с. 110.163

24. Дебабов В.Г.,Лившиц В.А. Современные методы создания промышленных штаммов микроорганизмов, М : Высшая школа, 1988- 208с.

25. Егоров Н.С., Аркадьева З.А., Выборных С.И., Лория Ж.К. Влияние различных условий хранения на стабильность такономических признаков Serratia marcescens И Прикл. биохим. и микробиол.-1980-т.16, вып. 5-с.729-734.

26. ЕгоровН.С. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М: МГУ, 1983-221с.

27. Ждан-Пушкина С.М. Окисление сорбита покоящимися клетками Acetobacter suboxydans II Труды Петергофского биологического института, Изд-во: ЛГУ, 1965-№19- с.65-70.

28. Жданова H.H., Походенко В.Ю., Гаврюшкина А.И., Голынская И.С. Устойчивость Dermatiaceae их мутантов к различным видам облучения // Известия АН СССР, сер. биол,- 1973-т. 3, с.324-329.

29. Золотарёв Н.С., Тхоревская З.Г., Москвин М.Д. и др. К вопросу о получении 1,-сорбозы из D-сорбита // Хим.-фарм.журн.- 1970-1.4, № 6-с, 28-32.

30. Иерусалимский Н.Д. Основы физиологии микробов, М.: АН СССР, 1963-243с.

31. Коган Л.М., Обольникова Е.А., Замуреенко В.А. и др. Идентификация уби-хинонов в некоторых промышленных микроорганизмах /7 Прикл. биохим и микробиол 1981-т. 14, вып. 5-с. 720-723.

32. Коган М.И., Буйко Д.А., Лебедев В.Г. // A.c. 102532 (СССР)-Бюлл.изобрет -1956,№2-с. 10.164

33. Королева Н.С. Физиологические, культуральные свойства и селекция микроорганизмов в молочной промышленности , М.: Пищепромиздат,1975-232с.

34. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии, Изд-во: Высшая школа, 1971- 352с.

35. Куплетская М.Б., Аркадьева З.А., Сравнение различных способов хранения Citrobacter freundii, обладающего тирозинфеноллиазой // Микробиология-1989- т.58, вып.б-с. 1048-1053.

36. Куплетская М.Б., Аркадьева З.А., Методы длительного хранения коллекции микроорганизмов кафедры микробиологии Московского государственного университета /7 Микробиология- 1997-т.66, №2- с. 283-288.

37. Кустова H.A., Поморцева Н.В., Красильникова Т.Н., Николаев П.И. Влияние аэрации на образование диоксиацетона из глицерина Gluconobacter oxyda ns. /У Прикл. биохим. и микробиол,- 1979-Т.15, вып. 1-е.51-55.

38. Лойцянская М.С. Метаболизм уксуснокислых бактерий // Успехи микробиологии- 1966-вып. 3-С.47-73.

39. Лойцянская М.С., Ткаченко A.A., Элисашвили В.И. О левансахаразе уксуснокислых бактерий// Микробиология- 1971-T.40, вып. 3-е. 505-508.

40. Лойцянская М. С., Успенская С.Н., Метаболизм рафинозы у Gluconobacter oxydans П Микробиология-1976-Т.45, вып.2-е.229-233.

41. Лойцянская М.С., Павленко Г.В., Немировская Н.И. О меланиновом пигменте Gluconobacter oxydans. // Микробиология-1981 -т.50-е.718-722.

42. Лойцянская М.С. Получение уксуса и другие аспекты использования уксуснокислых бактерий И В кн. Промышленная микробиология, М.: Высшая школа, 1989-е. 477-493.

43. Лурия С. и др. Общая вирусология, М., 1981-е.305.

44. Луста К.А., Решетилов А.Н. Физиолого-биохимические особенности Gluconobacter oxydans и перспективы использования в биотехнологии и био165сенсорных системах // Прикл. биохим. и микробиол.-1998-т.34, №4-с. 339353.

45. Лях СЛ., Рубан E.J1. Микробные меланины. М.:Наука, 1972-184с.

46. Львова Е.Б., Ждан-Пушкина С М. Об активности НАД- и НАДФ-зависимых сорбитдегидрогеназ и транскетолазы при культивировании Acetobacter sub-oxydans штамм ЛГУ-1 в средах с сорбитом. // Вестник ЛГУ- 1972,-№15-с. 97-104.

47. Львова Е.Б. Изучение некоторых физиологических особенностей Acetobacter suboxydans ЛГУ-1 при периодическом и непрерывном культивировании // Дис. . канд.биол.наук, Л.: 1973-с. 190.

48. Мартынкина Л.П., Милько Е.С. Ультраструктурные особенности диссоци-антов Rhodococcus rubropertinctus и Streptococcus ¡actis.// Микробиология-1991-т.60,вып.2-с.334-338.

49. Максимов В Н., Милько Е.С., Ильиных И.А. Влияние углеродного, азотного и фосфорного питания на рост R-, S- и М- диссоциантов Pseudomonas aeruginosa.// Микробиология-1999-т.68,№2-с.206-210.

50. Максимов В.Н., Милько Е.С., Ильиных И.А. Влияние углеродного, азотного и фософрного питания на рост R-, S- и М-диссоциантов Pseudomonas aeruginosa в смешанных культурах.// Микробиология-1999-т.68,№4-с.485-490.

51. Махоткина Т.А., Поморцева Н.В., Ломова И.Е., Николаев П.И. Трансформация глицерина в диоксиацетон иммобилизованными в полиакриламидном геле клетками Gluconobacter oxydans // Прикл. биохим и микробиол,- 1981т. 17, вып. 1-е. 102-106.

52. Мейнелл Дж., Мейнелл Э. Экспериментальная микробиология, М.: Мир, 1967- 347 с.

53. Микробиологические методы определения витаминов, аминокислот и антибиотиков //М.: Колос, 1968-с.23-28.

54. Милько Е.С., Аркадьева З.А., Пименова М.Н. и др. Выживаемость R-, S- И М-вариантов Mycobacterium lacticolum при различных условиях хранения „ Микробиология-1984- т.53,№1-с. 113-116.

55. Милько Е.С.,Егоров Н.С. О роли умеренного фага в диссоциации бактерий // Биол. Науки-1986- №4- с. 6-19.

56. Милько Е.С. Влияние физико-химических факторов среды на рост диссоци-антов некоторых грамм положительных бактерий.// Биологические науки-1992-№5-с. 89-96.

57. Милько Е.С., Мартынкина Л.П. Морфологические и физиолого-биохимические особенности диссоциантов Pseudomonas aeruginosa iI Микробиология- 1996-T.65, №3-c. 352-356.

58. Милько Е.С. Выживаемость диссоциантов углеводородокисляющего штамма Pseudomonas aeruginosa при хранении // Микробиология-1998-т.67,№1-с. 102-105.

59. Милько Е.С., Ники ген ко J1.A., Влияние физических и химических факторов среды на рост диссоциантов Pseudomonas aeruginosa 11 Прикл. биохим. и микробиол,-1998-т. 34, №2-с. 171-174.

60. Милько B.C., Красильникова E.H. Особенности углеводного метаболизма R, S-, и М-диссоциантов Pseudomonas aeruginosa П Микробиология -1999-т.68,№2-с.211-214.167

61. Мирончик Т.Г., Кашкина Г.Б., Аботуров Д.Д. Устойчивость тёмно-окрашенных грибов Stremphylium botryosum Waller и Cladosporium clado-sporioides (fries) de vries к / -облучению // Микробиология-1968-т. 37-с. 865868.

62. Митюшова Н.М. О соотношении процессов размножения и окисления у Acetobacter suboxydans в зависимости от состава среды // Микробиология1953-г 22, вып. 3-е. 249-253.

63. Михлин Э.Д., Голышева М.Г., Кеппен В.А. Влияние условий аэрации на развитие уксуснокислых кетогенных микроорганизмов // Микробиология, 1952, Т. 21, Вып. 5, С. 521-527.

64. Михлин Э.Д., Голышева М.Г., Розенберг И.С., Крылов H.A., Кеппен В.А. Окисление сорбита в сорбозу в системе жидкость-газ // Труды ВНИВИ,1954-т. 5-е. 66-73.

65. Надирова И.М., Данилова М.В. Хранение бактериальных культур под минеральным маслом // В кн. Методы хранения коллекционных культур микроорганизмов, Изд.:Наука, 1967-е. 91-118.

66. Изд-во АН СССР, 1959- 308с. 75.Определитель бактерий Берджи// под ред.Дж.Хоулта, Н.Крига, П.Снита, Дж.

67. Стейли, С. Уилльямса, 9 изд-е М.:Мир, 1997-432с. 76.Отчет по заказ-наряду № 004 раздел "Сорбоза периодическая",ВНИВИ, 1981-51 с,168

68. Павленко Г.В. Экология и систематика уксуснокислых бактерий. Дис. .канд.биол.наук, JI.: 1980-200с.

69. Павленко Г.В., Науменко З.С. Формы близкие к Frateuria на пчёлах в Северо-Западном регионе РСФСР // Вестник ЛГУ- 1987- №11 -с.57.

70. Павленко Г.В., Науменко З.С. Формы близкие к Frateuria на пчёлах в Северо-Западном регионе РСФСР // Вестник ЛГУ, 1987, № 11, С. 57-60.

71. Патент НРБ № 25449, с12Д, 13/00, 1978.81 .Пехов А.П. Генетика бактерий, М.: Медицина, 1977- С.407.

72. Позмогова И.Н. Микроорганизмы в условиях не оптимальных для размножения (нарушение корреляции между процессами катаболизма и анаболизма) // Успехи микробологии- 1974-вып. 9-с. 84-95.

73. Поморцева Н.В., Красилъникова Т.Н. О влиянии маннита на процесс микробиологического окисления сорбита в сорбозу // Хим.-фарм. жури,-1978-т.12, № 8-с. 88-91.

74. Поморцева Н.В., Игнатов В.Л., Янчевский С В. Особенности процесса непрерывного окисления сорбита в сорбозу Gluconobacter oxydans!I Прикл.биохим. и микробиол.-1980-т.16, вып. б-с.890-894.

75. Поморцева Н.В., Красильни нова Т.Н., .Окисление D-сорбита в L-сорбозу иммобилизованными клетками Gluconobacter oxydans // Хим.-фарм.журн,-1983-Т.17, № 6-с. 721-725.

76. Поморцева Н.В., Соловьёва К.А., Красильникова Т.Н.,Суворова Е Е. Окисление сорбита в сорбозу покоящимися клетками // Прикл.биохим. и микро-биол.-1983-т. 19, вып. 2.-С.250-255.169

77. Поморцева Н.В. Перспективы получения витаминов и коферментов с помощью микроорганизмов // Хим.-фарм.журн.- 1986-T.20, № 8-с.965-975.

78. Промышленный регламент на производство сорбозы технической.-Йошкар-Ола, 1986-320с.

79. Промышленный регламент на производство сорбозы технической.-Калинин, 1985-321с.

80. Промышленный регламент на производство сорбозы технической.-Белгород,! 985-320с.

81. Работа о ва И. Л. Физиологическая изменчивость микроорганизмов и её регулирование //Успехи микробиологии- 1975-вып. 10-с. 120-131.

82. Разумовская З.Г. О значении концентрации веществ питательной среды при окислении сорбита уксуснокислыми бактериями // Труды ин-та Микробиологии АН СССР, 1959- вып. 6-с. 46-49.

83. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика, Минск, 1973-132с.

84. Рубан Е.Л. Хранение культур микроорганизмов // Прикл. биохим. и мик96.робиол,- 1989-Т.25, вып.З-с. 291-301.

85. Т.А. Изучение пигмента Actinomyces aureofaciens ЛСБ-2201. // Прикл. Биохим. и микробиол.-1974-т. 1 с.734-738.

86. Сидякина Т.М., Кузнецова E.B., Чумакова М.Ю. Жизнеспособность и биохимическая активность дрожжей Saccharomyces vini при сублимационном высушивании и криоконсервации // Микробиология-1986-т.53, вып. 1-е. 2328.

87. Скрябин Т.К., Головлёва Л.А. Использование микроорганизмов в органическом синтезе, М.: Наука, 1976- 333 с.

88. Смирнов М. И. Витамины, М.: Медицина, 1974- с, 493.

89. Смирнов В.В., Резник С.Р., Василевская И.А. Спорообразующие аэробные бактерии продуценты биологически-активных веществ, Киев, 1982.

90. Смирнов Г.В. Роль плазм ид и мигрирующих генетических элементов в эволюции бактерий // Успехи микробиологии- 1984-т. 19-е.35-74.170

91. Сорокулова И.Б., Резник С.Р. О пигментах, продуцируемых Bacillus sub-tilisvar. niger 16 К И Прикл. биохим. и микробиол,- 1979-т. 15-е.314-317.

92. Татаринова Н.Ю., Поморцева Н.В., Коган Л.М., Обольникова Е.А., Самохвалов Г.И. Биосинтез убихинона-10 и окислительная активность культуры Gliiconobacter oxydans. //Микробиология- 1987-т.56,выи.3-с.436-440.

93. Татаринова НЮ. Образование убихинона Q10 культурой Gluconobacteroxydans. Дис. .канд. биол. наук, М: 1988-190с.

94. Тепавичарова И.И. Исследование и усовершенствование биохимического метода получения L-сорбозы: Автореф. Дисс. . канд.техн.наук, М:1975-39с.

95. Тепавичарова И.И., Леви Ш.С. Метод за получаване на L-сорбоза. Авт. св. БНР, кл.С 12Д 13/80, № 25449, заявл. 13.06.77, № 33604,1978.

96. Тепавичарова И.И., Тодоров Ц.П. Влияние на никела върху биохимично-то окисление на D-сорбита до L-сорбоза от Acetobacter suboxydans II Го-дишник на Софийския Университет-1980а-т.72/73-кн.3-е.101-107.

97. Тепавичарова И.И., Тодоров Ц.П. Оптимизация на процеса на био.чимич-но окисление на D-сорбита до L-сорбоза от Acetobacter suboxydans I ! Го-дишник на Софийския Университет-1980в-т.72/73-кн. 3-е. 109-113.171

98. Трофименко А.Ф., Кузина О.Н., Беленикина З.В., Чистякова Л.Г., Кобеле-ва B.C. Механизм метаболической гибели клеток Escherichia coli после за-м0раживание-0'паивания//Журн. Микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии- 1986-№2-с. 30-34.

99. Троцкий B.JI. О методе консервирования микробных культур под вазелиновым маслом // Лабораторная практика- 1929- № 6-с. 8-10.

100. Турки на М.В., Кощеенко К. А. Морфологические особенности включённых в полиакриламидный гель клеток Gluconobacter oxydans // Известия Академии наук СССР, сер. Биологическая, М.-1986-№ 6-с. 851-861.

101. Тхоревская З.Г. Авт.св. СССР № 42798 с 12с 13/00, Б.И. № 18, 1974.

102. Успенская С.Н., Лойцянская С.М. Эффективность использования глюкозы Gluconobacter oxydans // Микробиология- 1979- т. 48, вып. 3-е. 400-405.

103. Успенская С.Н. Метоболизм углеводов Gluconobacter oxydans. Авто-реф.дис. .канд.биол.наук, Л: 1980, 21 с.

104. Файбич М.М., Егоров В.И, Писаревский Ю.С. О выживаемости микроорганизмов при замораживании // Журнал микробиол., эпидемиол. и иммунобиологии-1962-т.5,с. 68-72.

105. Хайс ИМ., Мацек К. Хроматография на бумаге / Изд-во: Иностр. литер., 1962-545С.

106. ХесинР.Б. Непостоянство генома, M., 1985-230с.

107. Цибульская М.И.ДТоморцева Н.В. Особенности определения витаминов с помощью микроорганизмов // Сборник трудов ВНИВИ " Аналитический контроль в производстве витаминов"- 1982-е.25-40.

108. Чеботарева H.A., Татаринова Н.Ю., Познанская A.A., Королёв H.H. Микробиологические синтезы 2- кето-Е-гул о н овой кислоты из L-сорбозы и их связь с энзиматическими системами. // Хим.-фарм.журн,- 1992-Т.26, № 2,с. 68-72.

109. Черменский Д.Н. Биосинтез вторичных метаболитов // Прикл. биохим и микробиол,- 1988-т. 24, вып. 5-е. 730-735.172

110. Черныш Г.П., Попонина Р.П., Градусова А.А. Яковлев В.А. Определение дегидрогеназной активности культуры Acetobacter melanogenum в процессе ферментативного окисления D-сорбита в L-сорбозу // Хим.фарм.журн-1976-т.Ю, № 6-с. 19-21.

111. Шнайдман Л.О. Производство витаминов, М: Пищевая промышленность, 1973-437с.

112. Элисашвили В.И. Левансахараза Acetobacter suboxydans Л-1: Автореф. Дис. .канд. б иол. наук. Л: 1974,-21с.

113. Экспериментальная витаминология // под ред. Островского Ю.М.-Минск:Наука и техника, 1979-550с.

114. Aida К., Yamada Y. A new enzyme, 5-ketofructose reductase // Agric.Biol. Chem.- 1964- 28,№l-p.75.

115. Ameyama M.,Kondo K. Carbohydrate metabolism by the acetic acid bacteria. V. On the vitamin requirements for growth // Agric.Biol.Chem.-1966-30-p.203-211.

116. Ameyama M. Gluconobacter oxydans subsp. Sphaericus, new subspecies iso lated from grapes // Int. J.Syst.Bacteriol.-1975-25,№4-p.365-370.

117. Ameyama M., Shinagaawa E., Maatsushita K., Adachi O. D-fructose dehydrogenase of Gluconobacter industrius. Purification, characterization and application to enzymatic microdetermination of d-fructose // J.Bacteriol.-981 a-145,№2 p. 814-823.

118. Ameyama M., Shinagawa E., Matsushita K., Adachi O. D-glucose dehydrogenase of Gluconobacter suboxydans. solubilization, purification and characterization // Agric.Biol.Chem.-1981-45-p.851-861.

119. Ameyama M., Osada K., Shinagawa E. Et.al. Purification and characterization of aldehyde dehydrogenase of Acetobacter aceti // Agric.Biol.Chem. -1981c-45,№8- p. 1889-1890.

120. Asai T. Acetic acid bacteria: classification and biochemical activities.

121. Tokyo:University of Tokyo Press, 1968-343c

122. Asai T.,Shoda K. The taxonomy of Acetobacter and allied oxidative bacteria.

123. J. Gen. Appl.Microbiol. -1958-4-p .289-292.37. 136. Asai T., Ivzuka H., Komagata K. The flagellation and taxonomy of genera

124. Gluconobacter and Acetobacter with reference to the existence of intermediate streins.-1964-J.Gen. Appl.Microbiol.-10-p.95-99.

125. Baccarini-Melandri A.,Melandri B.A. A role for ubiquinone-10 in the b-c2 segment of the photo synthetic bacterial electron transport chain // Febs Letters-1977-v.80-№2-p.459-464.

126. Batzing B.L.,Claus G.W. Fine structural changes of Acetobacter suboxydans during growth in a difined medium II J.Bacteriol.-1973-v. 113-№3-p. 1455-1461.

127. Belly R.T., Claus G.W. Effect of amino acids on the growth of Acrtobacter suboxydans // Arch.Microbiol.-1972-Bd.83-H.3.-p.237-245.

128. Benziman M., Goldhamer H. The role of ubiquinone in the respiratory chain of Acetobacter xylinum li Biochem.J.-1968-v. 108-№2-p.311-316.

129. Biothnology of vitamins, pigments and growth factor. // ed. by J. Vandamme-London, New-York: Elsevier Applied Seience- 1988-p. 300, 301 -311.

130. Chang L., Elander R. Long-term preservation of industrially important microorganism. Manual of indastrial microbiology and biotechnology//eds Demain A.,Solomon.- Washington: Amer.Soc.Microbiol., 1986-p.49-55.

131. Cheldelin V.H. Metabolic pathways in microorganisms.-N.Y.:John Wiley and Sons. Inc.,1960-91p.

132. Claret C.,Salmon J.M., Romieu C., Bories A. Physiology of Gluconobacter oxydans during dihydroxyacetone production from glycerol // Appl.Microbiol, and Biotechnol.-l 994-41 ,№3-p.359-365.

133. Claus G.W., Roth L.E. Fine structure of the gram-negativ bacterium Acetobactersuboxydans 11 J.Cell.Biol.-l 964-20,№2-p.217-233.

134. Claus G.W., Orcutt M.L., Belly R.T. Phosphoenolpyruvate carboxylation and aspartate synthesis in Acetobacter suboxydans I I J.Bacteriol.-1969-97,№2-p.691-696.

135. Claus G.W., Batzing B.L., Baker C.F., Goebel E.M. Intracytoplasmic membraneformation and increased oxidation of glycerol during growth of Gluconobacter oxydans 11 J.Bacteriol.-1975-123,№3-p.l 169-1183.

136. Cox G.B., Newton N.A., Gibson F. et. al. The function of ubiquinone in Escherichia coli // Biochem.J.-l 970-117,№3-p.551-562.

137. Cummins J.T., King T.E., Cheldelin V.H. The biological oxidation of sorbitol //

138. J.Biol. Chem.-l957a-224,№l-p.323-329.

139. Cummens J.T., Cheldelin Y.H., King T.E. Sorbitol dehydrogenases in Acetobactersuboxydans // J.Biol. Chem.-I957b-226,№l-p.301-306. Daniel, 1981

140. Dubos F. One centure of bacterial polymorphism. // Role Cult. Collect. Era Mol.

141. Biol. Washngton-1976-p.35-42.

142. Daniel R.M.,Redfearn E.R. Rhe reduced NAD-oxydase system of Acetobacter suboxydans 11 Biochem.J.-1968-106,№4- p.953-954.175

143. Daniel R.M. The electron transport system of Acetobacter suboxydans with particular reference to cytochrom o // Biochim.Biophys. Acta.-1970-216,№2-p.328-341.

144. De Ley J., Comparative carbohydrate metabolic and a proposal for a phylogeneticrelationship of the acetic acid bacteria // J.Gen.Microbiol. 1961-V.28- № 2-p.31-50.;

145. De Ley J.,Kersters K. Oxidation of aliphtic glycols by acetic bacteria // Bact. Rev.1964-V. 28 № 22-p.164-180.

146. Edwardset G.A., Buell C. B., Weston W.U. The influence of mineral oil on theoxygen consumption of Sordaria fimicola Amer.J.Botan.-1947-V.34 - p.551 -553.

147. Englard S.,Avigad G. 5-keto-D-fructose. 11. Patterns of formation and of associated dehydrogenase activities in Gluconobacter cerinus. -1965-V. 240 -№. 6- p. 2297-2301.

148. Englard S., Avigad G 5-keto-D-fructose reductase from Gluconobacter cerinus.-// Methods in enzyrnology 1975 -V.41 -p. 127-131

149. Flickinger M.G., Parlman D. Application of oxygen-enriched aeration in the conversion of glycerol to dihydroxyaceton by Gluconobacter melanogenum JFO 3293 //Appi. Environ. Microbiol. -1977 V.33 - №3 -p. 706-712.

150. Fluckiger J., Ettlinger L. Glucose metabolism in Acetobacter aceti // Arch. Micrjbiol. -1977 V. 114 № 2 - p. 183-187.

151. Fortney K., Thome R. Stabilization of culture productivity // Del. Ind. Microbiol.1977 -V. 18 p. 319-325.

152. Forrest W W.,Walker D.J. The generation and utilization of energgy during growth

153. Adv. Microbiol. Physiology 1971 -V. 5-№>2 - p. 213-221.

154. Fujuwara A., Hoshino T., Sugisawa T. Enzym und Verfahren zu seiner Herstellung// Europen Patent № 248400 -1987a.176

155. Fujiwara A., Hoshino T., Sugisawa T. Purification and characterization of L-sorbose dehydrogenase of Gluconobacter oxydans// Eropean Patent № 248401 -1987b.

156. Gherna R. Preparation // Manual methods in general bacteriology. Washington:

157. Amer. Soc. Microbiol. 1981 - p. 208-217.

158. Greenfield S., Claus G.W. Isocitrate degidrogenase and glutamate synthesis in Acetobacter suboxydans // J. Bactenol 1969 - V.100 -№3- p.1264-1270.

159. Greenfield S., Claus G.W. Nonfunctional tricarboxylic acid cycle and the mechanism of glutamate biosynthesis in Acetobacter suboxydans // J. Bacteriol. 1972-V.l 12 -№3 - p. 1265-1301.

160. Grange J.M. The genetics of mycobacteria and mycobacteriophages. A reviw //

161. Tubercle.- 1975 V. 56- №2 - p. 227-238.

162. Grange J. M., RedmondW.B. Host-phage relaaationships in the genus Myoobacterium and their clinical significance // Tubercle. 1978 - V. 59- №3 - p.203-225.

163. Greenfield S., Claus G.W. Nonfunctional tricarboxylic acid cycle and the mechanism of glutamate biosynthesis in Acetobacter suboxydans // J. Bacteriol. 1969 - V.I00-№3-p. 1264-1270.

164. Hayakawa K. Effect of the formation of eutectic mixture on the Freeze-thawdamage of yeast // Princip. et appl. lyophilis. prod. biol. pham. et alim. c. z. reun. commiss. C.I. Tokyo- May 20-22, 1986 P. 255-260.

165. Heefner D.E.,Claus G.W. Change in quantity of lipids and cell size during intracytoplasmic membrane formation in Gluconobacter oxydans il I. Bacteriol. .1976 -V. 125-№3 p. 1163-1171.

166. Jamasato K., Daij 0.,Toshichica O. Preservation of bacteria by freezing at moderate low temperatures /'/' Cryobiology-1973-v.10-p.453.

167. Kanzaki T., Okazaki H. 2-keto-L-gulonic acid fermentation. IV L-Sorbose metabolism in Pseudomonas aemgenosa // Agric. Biol. Chem. 1970 - v.34 - p. 432-436.

168. Karube I., Suzuki S., Vandamme E.J. Antibiotic production with immobilized living cells. //Biotechnology of Industrial Antibiotics. Ed Vandamme E.J.-Maecel Dekker, New York, Basel, 1984-p.762-780.

169. Kersters K., Wood N.A., De Ley J Polyol dehydrogenases of Gluconobacter oxydans // J. Biol. Chem. 1965- v. 240, №3 - p. 965-974.

170. Kersters K., De Ley J. Polyol dehydrogenases of Gluconobacter I I Methods inenzymology, 1966 - v. 9 -p. 170-179.

171. Kersters K., De Ley J. The occurence of Enther-Doudoroff pathway in bacteria // Antonie van Leeuwenhoeck. 1968 - v. 34, №4 - p. 393-408.

172. Kieslich K. Present state of biotechnoiogical productins of pharmaceuticals. In Proceeding of the 3rd European Congress on Biotechnology. 1984 - v. 4 VCH, Weinheim - p. 39-72.

173. Kita D., Hall K.E. Preparation of 2-keto-L- gulonic acid. 1981 - US Patent № 4 245 049.

174. Kitamura 1.,Per I man D. Metabolism of L-sorbose by enzyme from Gluconobacter melanogenus IFO 3293.1I Eur. J. Appl. Microbiol. -1975 v. 2, №1 - p. 1-7.

175. Klasen R., Bringermeyer S., Sahm H. // Incapability of Gluconobacter avrdans toproduce tartaric acid. 1995 -J. Bacteriol. - v. 177, №10 - p. 2637-2643.178

176. Kolblin R.,Troger R. Untersuchungen zur Umwandlung von Sorbit in Sorbosedurch Acetobacter suboxydans // Zbl. Bakt. II. Abt. 1977 -Bd. 132 H. 11 - S.196.203.

177. Kulhanek M., Sevcikova Z., Biochemical dehydrogenisation of saccharides.1., Secondary products of biochemical dehydrogenation of D-sorbitol and D-mannitol // Fol. Microbiol. -1962 v. 7, №5 - p. 288-297.

178. Kulhanek M. Fermentetion processes employed in vitamin C synthesis // Adv.

179. Appl. Microbiol. 1970-v. 12, №11 - p. 11-33.

180. Kulhanek M.,Tadra M. Biochemishe Dehydrierungen von Saccharides VI. Bemerkungen zur Dehydrierung von L-arabit durch Acetobacter xytinum und zur Bertrandschen Regel // Zbl. Bact. II. Abt.- 1973-Bd. 128-H. V^-s. 25-30.

181. Kulhanec M.,Tarda M. Biochemical dehydrogenation of saccharides. IX. D-lyxo-5hexulosonic acid from D-mannose by Acetomonas oxydans fermentation // Fol. Microbiol.-1977-v. 25, №5-p.373-376.

182. Lazdunski,Beiaich A., Beiaich J. P., Uncoupling in bacterial growth: ATP poolvariation in Zymomonas mobilis cells in relation to different uncoupling condi

183. Uiia ui giuvVui // J. vjwx. iviivluuiui. j j i ¿^-y . / u, jJttii.-i. p. 1 o / I s i .

184. Leifson E. The flagellation and taxonomy of species of'Acetobacter Antonie van1.euwenhok-1954- J. Microbiol. A. Serol.,-v.20=p.l02-104.

185. Lu S., Huang S., Yu J. Rules of the supply and demand of oxygen and scale up forvitamin C fermentation // Huaaxue Fanyyying Gongchenng Yu Gongyi-1985-v.l-p.72-82.

186. Matsushita K., Shinagawa E., Adachi M. Spheroplast of acetic acid bacteria // Agric, Biol. Chem.-1981 -v.45,№6-p. 1515-1518.

187. MolinariF., Villa R., Manzom M., Aragozzini F. Conversion alifatic low alcohols to aldehydes by mutant stain of Gluconobacter oxydans. //Appl. Micrjbiol. Bio-technol.-l 995 v. 4 3 ,№6 -p.989-994.

188. Muller 1. Untersuchungen über die Sorbosegarung in stationaaren und kontinuier-liicher Kultur//Zbl.Bakt. IL Abt.- 1966-Bd.l20-H.4-s.349-378.

189. Ning W., Tao Z., Wang C., Wang S., Van Z., Yin G. Fermentation process for producing 2-keto-L-gulonic acid sorbose. // European Patent № 278 447,1988.

190. Neussel O.M.,Tempest D.N. Bioenergetic aspects of aerobic growth of Klebsieila aerogenes NCTC 418 in carbonlimited and carbon-sufficient chemostat culture // Arch. Microbiol. -1975-v.l07,№2-p. 215-221.

191. Newton N.A., Cox G.B., Gibson F. Function of ubiquinone in Escherichia coli: a mutant stain forming a low level of ubiquinon // J. Bacteriol.-1972-v.l09,№l-p.69-73.

192. Obata Y., Nara K., Tarui K., Mochizuki K., Isono M. L-Ascorbinic acid. // apiin Patent № 75 22113, 1975.

193. UU/13 // /Appi. miuuuiui. jjujifcviiiuji.- i ~-jj.tz.-t7.

194. Robakis N.K., Pallerom N.J., Despreaux C.W., Boublic M., Bacer C.A., Chum P.J., Clans G.W. Isolation and characterization of two phages for Gluconohacter oxy-dans H J. Gen. Microbiol.- 1985a-v. 13 l-p.2467-2473.

195. Robakis N.K., Palleroni N.J., Boublic M., Despreaux C.W. Construction of a restriction map of the Gluconohacter Bacteriophage A-1 genome. // J.Gen. Microbiol.- 1985b-v.l31-p. 2475-2477.

196. Sato K., Yamada Y., Aida K., IJ em lira T. Enzimatic studies on the oxydation of 5-keto-D-fructose and y pyrone compounds produced from D-sorbitol by Gluconohacter suboxydans H Agric. Biol. Cheiri.-1969-v.33.№l 1 -p. 1606-1611.

197. Saunders J. R. The genetic basis of phase and antigenic variation in bacteria // Antigenic Var. Infcc.Diseases. Oxford 1 986-p. 57-76.

198. Schnarr G.W., Szarek W.A., Jones J.K.N., Preparation and activity of immobilized Acetobacter suboxydans cells //Appl. Environ. Microbiol.- 1977-v.33,№3-p.732-734.

199. Sharma N., Parshad R., Qazi G.N. Electron transport system associated with direct glucose oxidation in Gluconobacter oxydans // Biotechnology Letters-1992-v,14,№5-p.391-396.

200. Shinagawa E., Matsushita K., Adachi o., Ameyma M. Membrane-bound D-gluconate dehydrogenase of Serratia marcescens. purification and properties /7 Agric Biol. Chem.-1978-v.42,№12-p.2355-2361.181

201. Schocher A.Y., Khun 11., Schinder B., Palleroni T.J., Despeaux C.W., Roublin K M., Miller P.A Acetobacter bacteriophage A-1 // Arch. Microbiol.-1979-v. 121-p. 193-197.

202. Sonoyama T., Tani H., Matsuda K., Kageyama B., Tanimo M., Kobayashi K., Yagi

203. S., Kyotani II., Mitsushima K. Production of 2-keto-L-gulonic acid from D-glucose by two-stage fermentation /'/Appl. Environ. Microbiol.-1982-43-p.10641069.

204. Tachiki T., Shirasu Y., haruna M., Tochikura T. Occurrence of glutamine synthetase / glutamate synthase pathway in Gluconobacter suboxydans // Agric. Biol. Chem.-1978-v.42,№9-p. 1689-1695.

205. Tachiki T., Miirata K., Bunno M., Tochikura T. Derepressive formation of L-leucine-pyruvate transaminase undar nitrogen-free condition in Gluconobacter suboxydans I I Agric,Biol. Chem.-1980-v.44,№8-p. 1767-1771.

206. Tachiki T., Sung IL, Wakisaka S., Tochikura T. Purification and some properties of glutamate synthase from Gluconobacter suboxydans grown on glutamate as a nitrogen sourse H J. Ferment. Technol.-1983-v.61, №2-p. 179-184.182

207. Yamada Y., Nakazawa E., Nozaki A., Kondo K. Characterization of Acetobacterxylinum by ubiquinone system // J. Gen. Appl. Microbiol.-1976-v.22,№6-p.285-292.

208. Yamada S., Wada M., Chibata 1. Oxydgen trasfer in shaken flask cultures and theconversion of sorbitol to sorbose by Acetobacter suboxydans // J. Ferment. Tech-nol. -1978-v.56,№ 1-p.20-28.

209. Yamada S., Nabe K., Izuo N. Fermentative production of dihydroxyaceton Acetobacter suboxydans ATCC 621 // J. Ferment. Technol.-1979 a-v.57,№3-p.215-220.

210. Yamada S., Nabe K., Izuo N. Chibata I. Enzymatic production of dihydroxyacetonby Acetobacter suboxydans ATCC 621 // J. Ferment. Technol.-1979b-v.57№3-p.221-226.

211. Yamada Y. Acetobacter xyiinus sp. nov. norti rev., for the cellulose-forming andcellulose-less, acetate-oxidizing acetic acid bacteria with the Q-10 system // J. Gen, Appl, Microbiol,-1983-v.29,K?5-p.417-420,

212. Yamada Y., Akita M., Koda T. Et al. Elevation of Acetobacter aceti subsp. Comprising the pritrichously flagellated intermediate in acetic acid bacteria /7 J. Gen. Appl. Microbiol.-1983 a-v.29№5-p.327-333.183

213. Yamada Y.,Kondo K. Gluconoacetobacter, a new subgenus comprising the acetate-oxidizing acetic acid bacteria with ubiquinone-10 in the genus Acetohacter // G.Gen. Appl. Microbiol.-1984-v.30№4-p.297-303.

214. Yan Z.Z. Studes on production of vitamin C precursor 2-keto-L-gulonic acid from L-sorbose by fermentation.il Study on fermentation conditions. // 1981-Wei Shcng wu Hsueh Pao-v.21 -p. 185-191.

215. Yin G.L. Studies on the production of vitamin C precursor 2-keto-L-gulonic acid from L-sorbose by fermentation. I Isolation, screening and indentification of 2-keto-L-gulonic acid producing bacteria. // 1980-Wei Sheng Wu Hsueh Pao-v.20-p.246-251.

216. Zhu Q.S., Berden J.A., De Vries S., Slater E.G. On the role of ubiquinone in the respiratory chain // Biochim. Biophys. Acta.-1982-v.680,№l-p.69-79.

217. Научно-производственное объединение "Витамины"

218. УТВЕРЖДАЮ" ральный директор нения "Витамины"1. Гунар В.И. 1997 г.1. АКТпроведения опытно-производственных испытаний штаммов культур-продуцентов сорбозы

219. Ененко В.Д. Астапченко Е.И.

220. Суворова Е.Е. Королёв П.Н.1. Шмалько Т.А.

221. Научно-производственное объединение "Витамины"дВЕРЖДАЮ" / -УХ 'Генеральный директор 1 ОбъединЬния "Витамины"г.1. АКТпроведения опытно-производственных испытаний культур продуцентов сорбозы после хранения при отрицательныхтемпературах

222. Для выращивания прединокулята использовали среду состава: Сорбит 33 г, кукурузный экстракт - 5,67 мл, В, - 2,55 мг, В, - 1,26 мг, ПАБК 0,45 мг.

223. Зоды дистилированной до 300 мл, рН 5,6-5,8. Прединокулят выращивали 20 ча-:ов. Среду разливали по 50 мл в колбы, стерилизовали 1 ати 30 мин.

224. Для приготовления инокулята использовали среду состава: Сорбит ~ 55 г, кукурузный экстракт 4.4 мл, КН4Н2Р04 0,15 г, В1 - 0,47 мг, В, • 0,23 мг, ПАЕК 0,08 мг.

225. Воды дистилированной до 500 мл, рН 5,6-5,8. Среду разливали по 50 мл в <олбу, стерилизовали 30 мин. при 1 ати.

226. Процесс ферментации проводили на среде состава: Сорбит 330 г, кукурузный экстракт - 4,1 мл, В, -1,23 мг, В, - 0,645 мг, ПАБК - 0,21 мг, ЫН4Н2Р04- 0,41 г. Зоды водопроводной до 1.5 л, рН 5,6-5,8.

227. Засев производят 20-часовым инокулятом в количестве 10% к объёму ферментационной среды. После засева в аппарате устанавливают заданный режим ферментации: температура 28-30° С, аэрация 6 г/02л час, обороты мешалки -300 об./мин.

228. На всех стадиях, полученные показатели для культуры, хранившейся на косяках под слоем криопротектора (80% раствор сорбита), были не ниже, чем для культуры, поддерживаемой периодическими пересевами (табл. 1)