Совершенствование методов количественного определения кислоты аскорбиновой в фармацевтическом анализе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат фармацевтических наук Зыкова, Екатерина Владимировна

• Зыкова, Екатерина Владимировна
• кандидат фармацевтических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Зыкова, Екатерина Владимировна

ФМК

ГЛАВА 3. ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ СОПУТСТВУЮЩИХ ВЕЩЕСТВ ПРОБЫ НА РЕЗУЛЬТАТЫ АНАЛИЗА КА СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИМИ

МЕТОДАМИ С ФМК И ЕЕ НАТРИЕВОЙ СОЛЫО

3.1 Оценка влияния углеводов на результаты количественного определения КА

3.2 Оценка влияния органических кислот на результаты количественного определения кислоты аскорбиновой

3.3 Оценка влияния флавоноидов и дубильных веществ на результаты

количественного определения кислоты аскорбиновой

3.4 Оценка влияния стабилизаторов инъекционных форм на результаты

определения КА

ГЛАВА 4. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ КА В РАСТИТЕЛЬНОМ

СЫРЬЕ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТАХ

4.1 Количественное определение КА в растворе кислоты аскорбиновой для

инъекций

4. 2 Количественное определение К А в сухих плодах шиповпика.. 92 4.3 Количественное определение КА различными методами в сиропе плодов

шиповника

4.4 Количественное определение КА в лекарственном препарате

«Аскорутин»

РАЗДЕЛ 3. РЕШЕНИЕ ПРОБЛЕМЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ К А В ЛП И ЛРС. ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДА КАПИЛЛЯРНОГО

ЭЛЕКТРОФОРЕЗА

ГЛАВА 5. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ГЛАВА 6. ВЫБОР УСЛОВИЙ И РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КИСЛОТЫ АСКОБИНОВОЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ

КАПИЛЛЯРНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА

6.1 Валидационная оценка методики

ГЛАВА 7. ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДА КЭ ДЛЯ АНАЛИЗА КА В ЛП И ЛРС

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Совершенствование методов количественного определения кислоты аскорбиновой в фармацевтическом анализе»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Одной из основных задач фармацевтической химии и фармации в целом, является совершенствование методик анализа JIB. Оценка качества фармацевтической продукции осуществляется на всех этапах производства ЛП [4,7] и в значительной степени, зависит от надежности используемого метода анализа [13].

Актуальность исследований, направленных на совершенствование методик анализа JIB, связана с введением на фармацевтических предприятиях России правил надлежащей производственной практики (ГОСТ Р 52249-2004) и изменением подхода к контролю качества ЛП и ЛРС. Повышение требований к чувствительности, точности, правильности, воспроизводимости, технологичности анализа, заставляют пересматривать и совершенствовать уже имеющиеся методики, а так же разрабатывать новые.

Объектом настоящей работы была выбрана кислота аскорбиновая, поскольку с одной стороны, она является веществом с хорошо изученными свойствами и для нее разработаны многочисленные методы определения [28, 29, 30], с другой стороны - это компонент многих ЛП и ЛРС, которые применяются для профилактики и терапии широкого спектра заболеваний [20, 49, 54, 165].

Степень разработанности темы исследования

В настоящее время, интерес для рутинной фармацевтической практики представляют спектрофотометрические методики, которые характеризуются достаточной для анализа чувствительностью, точностью, простотой выполнения и легко автоматизируются [13]. Однако, при анализе сложных многокомпонентных образцов, предпочтение отдается высокоспецифичным хроматографическим или электрофоретическим методам [50, 108, 127]. Так, фармакопеи Британии, Японии, США рекомендуют использовать для анализа растительного сырья только высокоспецифичные хроматографические методы.

В отечественной фармации, для количественного определения КА используют йодатометрическое титрование и титрование с 2,6 -дихлорфенолиндофенолятом натрия. Эти методики являются длительными, трудоемкими и требуют предварительной (иногда ежедневной) стандартизации титранта. Единственным фармакопейным спектрофотометрическим методом анализа КА является метод на основе натриевой соли кислоты фосфорномолибденовой (ФМ-Ыа), рекомендованный для экстракта плодов шиповника (ФС 42-32-5-96). Однако, этот метод неудобен для использования в рутинной фармацевтической практике, основной реагент нестабилен и требует ежедневного приготовления. Для лекарственных форм КА, содержащих синтетическую субстанцию КА, рекомендованного спектрофотометрического метода анализа не предусмотрено. Так же в отечественной фармакопейной практике не предусмотрено метода, позволяющего эффективно проводить анализ растительного сырья, содержащего КА, несмотря на то, что разрабатываются общие фармакопейные статьи на высокоселективпые методы.

Целыо настоящей работы является оценка применимости титриметрических, спектрофотометрических и электрофоретических методик для анализа КА в субстанции, ЛП и ЛРС.

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

1. Оценить возможность применения общепринятых методов для количественной оценки КА в лекарственных препаратах и ЛРС, учитывая требования современных стандартов и ГОСТов.

2. Адаптировать спектрофогометрическую методику на основе свободной кислоты фосфорномолибденовой для количественного определения КА.

3. Определить основные метрологические характеристики модифицированной методики и возможность ее использования для количественной оценки КА в лекарственных средствах и препаратах.

4. Изучить влияние сопутствующих и вспомогательных веществ, содержащихся в лекарственных препаратах и растительном сырье, на результаты количественного определения КА.

5. Разработать условия для количественного определения КА с использованием метода капиллярного электрофореза.

6. Оценить валидность методик КЗЭ и МЭКХ для анализа КА в ЛП и JIPC.

Научная новизна работы

Впервые была проведена сравнительная оценка общепринятых методов анализа КА в лекарственных препаратах и JTPC. Показана необходимость проведения процедуры валидации используемых фармакопейных методов анализа и их возможного пересмотра в соответствии с современными нормами и стандартами на примере анализа КА в ЛП и ЛРС.

Впервые изучено влияние моно- и дисахаридов, органических кислот, флавопоидов, дубильных веществ, натрия сульфита и натрия гидросульфита на правильность определения КА двумя спектрофотометрическими методиками.

Впервые предложена модифицированная методика

спектрофотометрического анализа КА на основе реакции с фосфорномолибденовой кислотой и показаны ее возможности и ограничения для анализа КА в ЛП и ЛРС.

Обоснована возможность замены методики йодатометрического титрования на спектрофотометрическую методику для анализа КА в растворе для инъекций.

Предложено использование сепарационных методов анализа, которые позволяют получить результаты, удовлетворяющие требования НТД на препараты, содержащие КА.

Впервые проведена валидационная оценка спектрофот;ометрических и

электрофоретических методик количественного определения-'КА в соответствии с

*

требованиями международных документов ISO 5725/ ICH, правилами GMP и ГОСТ Р 5725-2002.

Показано, что метрологические характеристики сепарационных методов при использовании сложного лабораторного оборудования, удовлетворяют всем требованиям для включения их в ФС.

Теоретическая и практическая значимость работы.

На основании проведенных исследований:

Установлено, что прямые спектрофотометрические методы определения КА характеризуются должной правильностью результатов только при анализе простых лекарственных форм. Изучение влияния матрицы многокомпонентных образцов на результаты определения КА, показало необходимость проведения процедуры валидации методики для каждого вида образца. Интерференционные эффекты в таких многокомпонентных объектах как ЛРС, не позволяют определять содержание КА с высокой правильностью методами, основанными на окислительно-востановительных реакциях без предварительной очистки и подготовки образца.

Разработана спектрофотометрическая методика с применением ФМК для анализа КА в субстанции и инъекционных растворах.

Разработана унифицированная методика капиллярного электрофореза для количественного определения КА в ЛП и ЛРС. Показана возможность использования ФК и ПАБК в качестве внутреннего стандарта.

Доказана эффективность применения электросепарационных методов для анализа КА в многокомпонетных образцах.

Проведена апробация методики спектрофотометрического определения КА в инъекционных формах в аналитической лаборатории Центра контроля качества лекарственных средств ГУП «Волгофарм» и ООО «Научно-производственная фирма Фармация».

Результаты диссертационного исследования включены в материалы лекций и используются в учебных и научно-исследовательских процессах учебно-

производственной аптеки ВолгГМУ и кафедре фармацевтической и токсикологической химии ВолгГМУ.

Методология и методы исследования

Методологической основой исследования явились статьи Европейской, Японской, Американской Фармакопеи и ГФ XI, XII, ОСТ 42-510-98 «Правила производства и контроля качества лекарственных средств GMP» ( раздел «Валидация»), Государственный стандарт РФ ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 под общим заголовком «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений» в практической деятельности по метрологии (разработке, аттестации и применению методик выполнения измерений), стандартизации методов контроля (испытаний, измерений, анализа), испытаниям продукции, Национальный стандарт России ГОСТ Р 52249-2004, ГОСТ Р 52249-2009 «Правила производства и контроля качества лекарственных средств», руководство международной конференции по гармонизации (ICH), труды отечественных и зарубежных ученых.

В работе использовалось следующее оборудование: спектрофотометр Helios, жидкостный хроматограф Shimadzu (30425-05), прибор для капиллярного электрофореза НРСЕ Agilent Technologies (Gl602А), весы аналитические AB 12001 (Веста®, Россия, 36468-07), термостат воздушный ТС-80 (Россия), термостат водяной ВБ-2 (Россия), автоматические дозаторы фиксированного и переменного объема производства «Ленпипет» (Россия) и "Thermo Labsystems" (Финляндия), мерная стеклянная посуда, посуда из пропилена (2 класса точности) (Экрос). Химические реактивы соответствовали квалификации ХЧ (содержание основного вещества более 99%), субстанция КА соответствовала требованиям, предъявляемым к PCO.

Для количественного определения КА в ЛП и ЛРС использовали два титриметрических метода: с 2,6-ДХФИФ и КЮз, как методы, рекомендованные ГФ для анализа ЛП и ЛРС, спектрофотометрический метод с натриевой солыо

фосфорномолибденовой кислоты (ФС 42-3285-96), модифицированная методика на основе свободной фосфорномолибденовой кислоты, метод ВЭЖХ, высокоспецифичный спектрофотометрический ферментативный метод на основе аскорбатоксидазы и метод КЭ.

На защиту выносятся:

• Результаты разработки спектрофотометрической методики количественного определения КА с использованием ФМК для анализа субстанции КА и инъекционного раствора.

• Результаты исследования влияния сопутствующих веществ пробы на правильность количественного определения КА в многокомпонентных образцах.

• Результаты разработки условий и валидационные характеристики для методики количественного определения КА с помощью капиллярного электрофореза.

• Результаты количественного определения КА в лекарственных препаратах и JIPC с помощью метода капиллярного электрофореза.

Степень достоверности и апробация работы

Для оценки степени достоверности измерений, показателей точности и характеристик погрешности руководствовались рекомендациями (МИ 1317— 2004; РМГ 62—2003; РД 50-453—84; и ГОСТ Р 52249-2009), неопределенности — ГОСТ Р 54500.3 - 2011. Количество измерений для расчета аналитических характеристик определялось рекомендациями ГФ XI, «Руководством по валидации методик анализа лекарственных средств (Методические рекомендации)» - 2007 и РМГ 76-2004 ГСИ (Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа). Всего было выполнено более 10 тысяч измерений.

Обработка результатов исследования проводилась согласно требованиям ГФ и рекомендациям Международной конференции по гармонизации ICH с

использованием встроенных функций программы МС Excel (среднее значение, стандартное отклонение, стандартная ошибка, 95% доверительный интервал, медиана) и программы Stastitica 6,0 (StatSoft).

Основные теоретические и практические результаты диссертации опубликованы в 11 статьях и докладах, среди которых 3 публикации в ведущих рецензируемых изданиях, рекомендованных в действующем перечне ВАК. Результаты работы защищены рационализаторским предложение на использование спектрофотометрического метода для количественного определения кислоты аскорбиновой с использованием свободной кислоты фосфорномолибденовой (Принято Волгоградским государственным медицинским университетом 22.12.2008).

Основные положения работы докладывались и обсуждались на ежегодных научных конференциях Волгоградского государственного медицинского университета «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины» в 2005-2007 гг., XIX Зимней молодежной научной школе "Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии" (Москва, 2007), XIII региональной конференции молодых исследователей Волгоградской области (Волгоград, 2008), «Перспективные разработки науки и техники» (Польша, 2011), «Актуальные проблемы современной науки» (Польша, 2012).

РАЗДЕЛ 1. ПРОБЛЕМЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО АНАЛИЗА КИСЛОТЫ АСКОРБИНОВОЙ (обзор литературы)

Быстрый прогресс технологий во всех сферах деятельности человечества, который мы наблюдали последние 3 десятилетия, сопровождался значительными изменениями отношения к измерениям в науке и практике. Очевидно, что получение достоверной количественной информации о характеристиках и свойствах объектов и процессов с заданным качеством измерений (точностью, достоверностью, оперативностью, сопоставимостью и стабильностью) является обязательным условием для совершенствования самых различных технологических процессов. Понимание этого момента в частности привело к принятию Федеральный закон от 26 июня 2008 г. N 102-ФЗ "Об обеспечении единства измерений" и к приказу Министерства промышленности и торговли РФ от 17 июня 2009 г. N 529 "Об утверждении Стратегии обеспечения единства измерений в России до 2015 года".

За последние несколько десятилетий значительно усовершенствовались методы измерений в аналитической химии, неоднократно проводились процедуры гармонизация и локализаций регулирующих документов, при этом аналитические процедуры, прописанные регуляторами, нередко остаются неизменными, поэтому нам представилось интересным и важным в практическом плане изучить их соответствие современным требованиям. Для этого, в качестве объекта мы выбрали кислоту аскорбиновую, нормируемую в продуктах питания и многих лекарственных препаратах и методы определения которой, были разработаны в середине прошлого века.

1.1 Кислота аскорбиновая. Физико-химические свойства

Кислота аскорбиновая представляет собой порошок белого цвета. Она легко растворима в воде, растворима в спирте, нерастворима в эфире, бензоле и хлороформе. Температура плавления 190-193°С (с разложением) [14].

Кислота аскорбиновая ведет себя, как одноосновная кислота. Кислотный характер ее обусловлен водородом гидроксила в положении 3, за счет которого она образует соли (рис. 1).

О ОН

н

но-но-

сн

сн2

=о

н

ОМаОН

Н

N8011

НО

но-

сн сн2

о

Рисунок 1. Реакция образования натриевой соли кислоты аскорбиновой

Благодаря наличию двух асимметричных атомов углерода в 4-ом и 5-ом положениях, К А образует 4 оптических изомера и 2 рацемата [37].

Наличие в КА двух сопряженных двойных связей (углерод-углеродной и углерод-кислородной) обуславливает ее способность к обратимому окислению, продуктом которого является дегидроаскорбиновая кислота (ДАК) (Рис.2).

\ I

НО—С

У

но—с

о

■2{Н|

но-

2[Н|

с

I

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия, фармакогнозия», Зыкова, Екатерина Владимировна

128 ВЫВОДЫ

1. Сравнительная оценка спектрофотометрических и титриметрических методик для количественного анализа КА в ЛП и ЛРС показала, что для количественного определения КА в многокомпонентных образцах малопригодны методы, основанные на ее окислительно-восстановительных свойствах. Анализ КА в многокомпонентных ЛП и ЛРС требует использования современных сепарационных методов.

2. Разработаны условия для проведения спектрофотометрического анализа КА с использованием ФМК. Рабочий реагент: 4 мМ раствор кислоты фосфорномолибденовой в 0,6 М растворе кислоты серной. Инкубирование проб 90 минут при 37°С.

3. Методика спектрофотометрического определения КА с применением свободной фосфорномолибденовой кислоты характеризуется высокой точностью и воспроизводимостью, хорошей повторяемостью (2,9% при анализе растворов с концентрацией КА 0,25 мМ; 2,4% - с концентрацией 0,5 мМ и 1,8% при работе с 1 мМ растворов КА). Калибровочный график линеен, значение коэффициента детерминации составило 0,999, предел обнаружения - 0,02 мМ КА в пробе. Стабильность рабочего реактива в 20 раз превышает этот показатель для рабочего реактива метода с натриевой солыо форномолибденовой кислоты. Установлено, что методика валидна для анализа КА в растворе для инъекций.

4. Углеводы (глюкоза, сахароза, фруктоза и лактоза), флавоноиды и дубильные вещества снижают правильность результатов анализа КА в ЛРС с использованием спектрофотометрических методик на основе ФМК и ее натриевой соли, что ограничивает области применения этих методик.

5. Показана возможность использования спектрофотометрической методики с ФМК для анализа КА в присутствии стабилизаторов (натрия сульфита), входящих в состав инъекционных растворов КА.

6. Разработаны условия и обоснованы параметры пригодности системы для электрофоретического определения К А в ЛП и ЛРС. Кварцевый капилляр 50 мкм х 24,5 см или 50 мкм х 40 см, ведущий электролит рН 9,3 (смесь 25мМ раствора тетрабората натрия и 50 мМ раствора БОБ), напряжение +20 кВ, температура 25°С. Ввод пробы с длинного конца капилляра в течение 3 сек при давлении 50 мбар или 10 сек * 30 мбар (для капилляра 40 см). Длина волны детекции 254 нм. Внутренний стандарт ПАБК или ФК (для искусственно синтезированных ЛП).

7. Определены валидационные характеристики методики КЭ для анализа КА. Диапазон линейности составил 0,05-1 мМ, коэффициент регрессии -0,999, рассчитанные значения критериев Стьюдента и Фишера составили 1,5 и 2,15, соответственно. Предел количественного определения КА - 8 мг/л. Показано, что метод КЭ может быть валидирован для контроля качества ЛРС и лекарственных препаратов, содержащих КА.

КА

ЛРС

АОС

ЛВ

ЛП

ДАКдкгк-мтт

РМ8-ГЖХвэжх-кзэ

МЭКХ-ПАБК-ССК-ФКкч

ДХФИФ ФМ^а -ФМК-ДНФГ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ кислота аскорбиновая лекарственное растительное сырье антиоксидантная система лекарственное вещество лекарственный препарат дегидроаскорбиновая кислота дикетогулоновая кислота дикетогулоновая кислота

3-(4,5-диметилтетразолин-2)-2,5-дифенилтетразолиум бромид

5-метилфеназиниум метасульфата газожидкостная хроматография высокоэффективная жидкостная хроматография капиллярный зонный электрофорез мицеллярная электрокинетическая хроматография п-аминобензойная кислота кислота сульфосалициловая кислота феруловая коэффициент чувствительности натрия дихлофенолиндофенолят натрия фосфорномолибдат кислота фосфорномолибденовая динитрофенилгидразин

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Точное определение содержания КА необходимо для принятия решений по многим вопросам в самых различных областях медицины, фармакологии, гигиены питания и т.д.

При выборе подходящего метода для аналитического контроля ЛП часто возникает проблема, присущая практике количественного определения многих веществ. Она связана с тем, что многие методики, удовлетворяющие a priori основным требованиям, предъявляемым к аналитическому контролю, разработаны с использованием индивидуальных веществ, без учета влияния примесей, всегда присутствующих в ЛП, особенно в ЛРС, в широком диапазоне концентраций. Поэтому недорогие и достаточно точные титриметрические методы, прямые спектрофотометрические методы далеко не всегда удается использовать для определения основного продукта в многокомпонентных образах.

В России десятилетиями действовали фармакопеи, которые были ориентированы на очень низкий уровень оснащения контрольно-аналитической базы и были далеки от идеалов и требований вМР. На сегодняшний день ситуация меняется, и открытые рыночные отношения заставляют производителей ЛП ориентироваться на международные стандарты, что несомненно влечет за собой необходимость радикального пересмотра подходов к анализу многокомпонентных образцов.

Для количественной оценки КА в многокомпонентных образцах со сложной матрицей, следует применять только высокоспецифичные или сепарационные методы анализа. Однако высокоспецифичные методы на основе аскорбатоксидазы является достаточно дорогостоящими и малопроизводительными, что ограничивает их применение в рутинном фармацевтическом анализе. Метод ВЭЖХ широко применяется в фармацевтическом анализе для количественного определения практически всех витаминов в поливитаминных препаратах и многокомпонентных ЛРС. Однако метод не всегда удается использовать с одинаковой легкостью, как для анализа всего разнообразия образцов содержащих КА (особенно, для биологических образцов), так и для определения малых концентраций КА. Кроме того, метод ВЭЖХ требует больших затрат времени на подбор условий проведения анализа, специфичных для конкретного объекта (колонка, элюент и т.п.), подбор пробоподготовки.

Метод КЭ является дополнением и в то же время, альтернативой ВЭЖХ, характеризуется высокой эффективностью, малым расходом недорогих реагентов и простотой эксплуатации, капилляры долговечны и легко регенерируются. Несомненно, как и любой инструментальный метод, метод

КЭ предполагает материальные затраты на приобретение оборудования, однако такое оборудование является универсальным и позволяет проводить различные анализы.

Предложенная методика КЭ может быть использована для контроля качества лекарственного растительного сырья и лекарственных препаратов, содержащих КА (плоды и сироп шиповника, витаминный сбор №2, листья бархатцев, растворов КА для инъекций и препарата «Аскорутин»). При анализе искусственно синтезированных препаратов в качестве внутреннего стандарта можно использовать феруловую кислоту или ПАБК, тогда как для ЛРС, только ПАБК.

Для количественного определения КА в инъекционных растворах можно использовать более дешевый и доступный спектрофотометрический метод с ФМК.

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Зыкова, Екатерина Владимировна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Абрамова, Ж.И. Человек и противоокислительные вещества / Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И. - Л.: Наука, 1985. - 230 с.

2. Абдуллабекова, В.Н. Использование метода электрофореза для анализа витамина С / Абдуллабекова В.Н., Равшанов С.П. // Актуальные проблемы образования, науки и производства в фармации: сб.научн.ст. - Ташкент, 2005.- С. 73-74.

3. Абдуллин, И.Ф. Потенциометрическая оценка антиоксидантной способности по аскорбиновой кислоте / Абдуллин И.Ф., Турова Е. II., Зиятдинова Г.К. // Химия и компьютерное моделирование. Бутлеровские сообщения: сб. тез. поволж. конф. по аналитической химии - Набережные Челны, 2002. - № 8.- С. 82-82.

4. Аладышева, Ж.И. Практические аспекты работ по валидации аналитических методик / Аладышева Ж.И., Беляев В.В., Береговых В.В. // Фармация. -2008. - №7. - С. 9-14.

5. Алексанян, Л.А. Витамины-антиоксиданты в профилактике и лечении сердечно-сосудистых заболеваний / Алексанян Л.А., Полосьянц О.Б. // РМЖ. Кардиология. 2005. - Т.13, №11. - С. 18-20.

6. Анализ лекарственных смесей / Арзамасцев А.П.[и др.]. - М.: Компания Спутник, 2000.- 275с.

7. Араратян, Э.А. Перспективы изыскания антиоксидантов — адаптогенов растительного происхождения / Араратян Э.А., Мусаелян М.С., Манучарян М.А. // Перекисное окисление липидов в норме и патогенезе различных заболеваний: сб. научн. тр. - Ереван: Айастан, 1988. - С. 24-26.

8. Арзамазцев, А.П. Валидация аналитических методов / Арзамазцев А.П., Садчикова Н.П., Харитонов Ю.Я. // Фармация. - 2006. - №4. - С. 8-12.

9. Арзамасцев, А.П. Стандартные образцы лекарственных веществ / Арзамасцев А.П., Сенов П.Л. - М.: Медицина, 1978. - 248 с.

10. Ахромеева, Г.И. Определение дегидроаскорбиновой кислоты в пищевых продуктах / Ахромеева Г.И. // Вопросы питания. - 1988. - №3. - С. 66-88.

П.Барабой, В. А. Биологическое действие растительных фенольных соединений / Барабой В.А. - Киев: Наук, думка, 1976. - 260 с.

12. Баталова, В.Н. Определение аскорбиновой кислоты и железа методом инверсионной вольтамперометрии в фармацевтических препаратах / Баталова В.Н., Степная Н.В., Малий Л.В. // Аналитика Сибири и Дальнего Востока: сб. науч.ст. 8 всерос. конф- Томск, 2008. - С. 67-69.

13. Беликов, В.Г. Анализ лекарственных веществ фотометрическими методами. Опыт работы отечественных специалистов / Беликов В.Г. // Рос. хим. ж. (Ж. Рос. хим. об-ва им. Д.И. Менделеева). - 2002. - Т. 46, № 4. - С. 63-67.

14. Беликов, В.Г. Фармацевтическая химия: в 2ч. / Беликов В.Г. - Пятигорск: Высш. шк., 2003. - 4.2. - 720 с.

15. Березовский, В.М. Химия витаминов / Березовский В.М. - М.: Пищевая пром-ть, 1973. - С. 230-300.

16. Бобылев, Р.В. Технология лекарственных форм / Бобылев Р.В., Грядунова Г.П., Иванова Л.А. -М.: Медицина, 1991. -544 с.

17. Бобырев, В.Н. Специфичность систем антиоксидантной защиты органов и тканей — основа дифференцированной фармакотерапии антиоксидантами / Бобырев В.Н., Почернява В.Ф., Стародубцев С.Г. // Эксперим. и клинич. фармакология.- 1994. — № 57(1) —С. 47-54.

18. Борец, В.М. Витамины /Борец В.М. -М.: Наука, 1980.-29 с.

19. Бохински, Р. Современные воззрения в биохимии / Бохински Р. - М.: Мир, 1987. - 544 с.

20. Бременер, С.М. Витамины / Бременер С.М. - М.: Медицина, 1974. - 194 с.

21. Брутко, Л.И. Количественный анализ лекарственных препаратов растительного происхождения / Брутко Л.И. - М.: Медицина, 1985. - 249 с.

22. Бурлакова, Е.Б. Роль токоферолов в пероксидном окислении липидов биомембран / Е.Б Бурлакова, С.А Крашаков, Н.Г Храпова // Биол. Мембраны. - 1998. - ТЛ5, № 2. - С. 137-167.

23. Власов, B.B. Введение в доказательную медицину / Власов В.В.- М.: Медиа-Сфера, 2012. - 392 с.

24. Гавриленко, H.A. Полиметакрилатные сенсоры для определения аскорбиновой кислоты / Гавриленко H.A., Джиганская О.В., Мокроусов Г.М. // Тез.докл. 17 Менделевского съезда по общей и прикладной химии. -Казань: КГУ, 2003. - С. 297-297.

25. Гавриленко, H.A. Оптический сенсор для определения аскорбиновой кислоты / Гавриленко H.A., Мокроусов Г.М., Джиганская О.В. // Журн. аналит. химии. - 2004. - Т. 59, № 7. - С. 600-604.

26. Гильдеев, Г.Н. Новый подход к контролю качества лекарственных средств / Гильдеев Г.Н., Соловьева О.В., Косенко В.В. // Ремедиум. - 2006. - №9. - С. 33-36.

27. Государственная фармакопея СССР. - 10 изд. - М.: Медицина, 1968. -1081 с.

28. Государственная фармакопея СССР. Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное сырье. МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1990. -400 с.

29. ГОСТ 30627.2-98 Методы измерения массовой доли витамина С в продуктах молочных для детского питания. - М.: Изд.стандартов, 1999. - 11 с.

30. ГОСТ 52441 - 2007 Премиксы. Определение содержания витаминов: Bi, Вг, В5, Вб, Вс, С методом капиллярного электрофореза. - М.: Стандартинформ, 2007.- 18 с.

31. ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. - М.: Госстандарт России, 2002. - 42 с

32. Григорьев, Г.П. Цитохром Р-450 и витамин С / Григорьев Г.П. // Вопросы питания. -1983. - №4. - С. 5-10.

33. Гринкевич, Н.И. Химический анализ лекарственных растений / Гринкевич Н.И., Сафронович Л.Н. -М.: Высш. шк, 1983.- 174 с.

34. Давлетбаева, JI.Р. Сравнительный анализ международных требований к параметрам валидации аналитических методик / Л.Р. Давлетбаева, С.И. Положенцев, А.Г. Исрафилов // Новые лабораторные технологии в диагностике и лечении заболеваний человека: сб. тр. конф.- Челябинск, 2006. - С. 34-47.

35. Девис, М. Витамин С: Химия и биохимия / Девис М., Остин Дж., Патридж Д.-М.: Мир, 1999.-176 с.

36. Дубова, Н.М. Определение аскорбиновой кислоты методом амперометрического титрования / Дубова Н.М., Слепченко Г.Б., Ковалева H.A. // Сиб. мед. журн. - 2002. №2 - С. 102-105.

37. Евстигнеева, Е.П. Витамин Е как универсальный антиоксидант и стабилизатор биологических мембран / Евстигнеева Е.П., Волков И.М., Чудинова В.В. // Биологич. мембраны.- 1998.- Т. 15, № 2.- С.119-135.

38. Збарский, Б.И. Практикум по биологической химии / Збарский Б.И., Збарский И.Б., Солнцев А.И. - М.: МЕДГИЗ, 1954. - 348 с.

39. Золотов, Ю.А. Основы аналитической химии. Методы химического анализа: учебник для вузов / Золотов 10.А., Дорохова E.H., Фадеева В.И.-М.: Высш. шк., 1996,- Кн.2. -461 с.

40. Зотов, Ю.А. Основы аналитической химии. Кн.1. / Зотов Ю.А. - М.: Высш.шк., 2004. -412 с.

41. Зубабян, С.А. Органическая химия / Зубабян С.А., Колесник Ю.А.- М.: Медицина, 1989.-432 с.

42. Исупов, В.П. Пищевые добавки и пряности / Исупов В.П. - СПб: ГИОРД, 2000.- 176 с.

43. Каждое пятое лекарство в аптеках - подделка [Электронный ресурс] / Новые известия, - 2004. - 16 июня. - Режим доступа: www.aferizm.ru

44. Машковский, М. Д. Лекарственные средства: в 2 т.- 14-е изд. / Машковский М. Д.-М.: Новая Волна, 2000. - 598 с.

45. Мазор, Jl. Методы органического анализа / Мазор Л. - М.: Мир, 1986. - 493 с.

46. Карабанов, И.А. Витамины и фитогормоны в жизни растений / Карабанов И.А. - Минск: Урожай, 1977. - 110 с.

47. Казимирко, В. К. Антиоксидантная система и ее функционирование в организме человека / Казимирко В.К., Мальцев В.И., Бутылин В.Ю. // Здоровье Украины. - 2004. - № 98. - С. 24-27.

48. Казимирко, В.К. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная терапия / Казимирко В.К., Мальцев В.И., Бутылин В.Ю. — Казань: Морион, 2004. —160 с.

49. Каменцев, Я.С. Капиллярный электрофорез. Аппаратурное оформление и области применения / Каменцев Я.С., Комарова Н.В. // Партнеры и конкуренты. - 2002,- № 1- С. 12-15.

50. Киверин, М.Д. Витамин С и профилактика С-витаминозных состояний на Севере /Киверин М.Д. -Томск: Сев.-Зап. книжное изд., 1971. - С. 5-7.

51. Короткова, Е.И. Новый способ определения активности антиоксидантов / Короткова Е.И. //Жури, физич. химии. - 2000. - Т. 74, №9. - С. 1544-1546.

52. Коренман, И.М. Фотометрический анализ. Методы определения органических соединений / Коренман И.М. - М.: Химия, 1975. - 360 с.

53. Корытова, Л.И. Коррекция нарушений оксидации у онкологических больных в процессе лучевого лечения / Корытова Л.И., Вершинина С.Ф. // Вестник РНЦРР Минздрава России. - 2004. - №3. - С. 183-185.

54. Крылов, Ю.Ф. Регистрация и контроль качества лекарственных средств в Российской Федерации / Крылов Ю.Ф. // Фарматека. - 2006. - №1(37). - С. 7-10.

55. Ладынина, Е.А. Фитотерапия / Ладынина Е.А., Морозова P.C.- М.: Медицина, 1990. - 153 с.

56. Лекарственные препараты в России: справочник ВИДАЛЬ. - 12-е изд., перераб, испр. и доп. - М.: АстраФармСервис, 2006. - 1614 с.

57. Логинов, Н.Я. Аналитическая химия / Логинов Н.Я., Воскресенский А.Г., Солодкин И.С. - 2-е изд., перераб. - М.: Просвещение, 1979. - 480 с.

58. Маев, И.В. Профилактическое и клиническое значение витаминов / Маев И.В., Казюлин А.Н., Кучерявый Ю.А. // Фармац. вестник. - 2002. - № 12. - С. 17-19.

59. Машковский, М.Д. Лекарственные средства. В 2 т. / Машковский М.Д. -14-е изд.-М.: Новая волна, 2000.-598 с.

60. Мелентьев, Г.А. Практическое руководство по фармацевтической химии / Мелентьев Г.А. - М.: Медицина, 1967. - 340 с.

61. Муравьева, Д. А. Фармакогнозия: учебник.- 3-е изд. / Муравьева Д. А. - М.: Медицина, 1991.-560 с.

62. Матасова, А.П. Химический состав сухого водного экстракта из шрота шиповника / Матасова А.П., Рыжова Г.Л., Дычко К.А. // Химия раст. сырья. — 1997.-№ 2-С. 28-31.

63. Методы анализа лекарств / Максютина Н.П. [и др.]. - Киев: Здоровье, 1984. - 222 с.

64. Меньшиков, В.В. Клиническая лабораторная аналитика в пяти томах / Меньшиков В.В. // Основы клинич. лаб. анализа. - 2002. - Т. 1. - 860 с

65. Мецлер, Д. Биохимия / Мецлер Д. М.: Мир, 1980. - Т. 2. - 606 с.

66. Национальный стандарт ГОСТ Р 52249-2004 Правила производства и контроля качества лекарственных средств. — Чебоксары: Чебоксарская типография, 2004. — 211 с.

67. Оковитый, C.B. Клиническая фармакология антиоксидантов / Оковитый C.B. // ФАРМиндекс-Практик. - 2003. - Вып. 5. - С. 85-111.

68. Пастушенков, Л.В. Растения - антигопоксанты (фитотерапия) / Пастушенков Л.В., Лешовская Е.Е. - СПБ.: Хим.-фармац. ин-т., 1991. - 96 с.

69. Петрова, Г.А. Определение аскорбиновой кислоты в моче при гигиенических исследованиях / Петрова Г.А. // Гигиена и санитария. - 1989. -№5.-С. 49-50.

70. Подгорная, Ж.В. Аминокислотный и витаминный состав цветков бархатцев Tagetes patula L. / Подгорная Ж.В., Гранкина И.И. // Науч. обозрение. -2008. - №2. -С. 7-8.

71. Поллинг, J1. Рак и витамин С / Поллинг JT. - М.: Кобра Интернеэшнл, 2001. - 332 с.

72. Полинг, JI. Витамин С и здоровье / Полинг JI. - М.: Знание, 1974. - 80 с.

73. Починок, Х.Н. Методы биохимического анализа растений / Починок Х.Н. -М.: Медицина, 1976.-286 с.

74. Рыжикова, Л.Д. Сравнительная оценка влияния веществ в растениях / Рыжикова Л.Д. -М.: Медицина, 1999. -138 с.

75. Руководство по методам контроля качества и безопасности Б АД к пище. Р 4.1.1672-03. - М.: Стандартинформ, 2003. - 240 с.

76. Руководство ICH «Валидация аналитических методик. Содержание и методология» Q2 (R1) // Фармация. -2008,- №4.-С.3-10.

77. Спиричев, В.Б. Методы оценки витаминной обеспеченности населения / Спиричев В.Б., Коденцова В.М., Вржесинская O.A.; ГУ НИИ питания РАМН МЗ РФ. - М, 2001. - 68 с.

78. Соколовский, В.В. Определение аскорбиновой, дегидроаскорбиновой и дикетогулоновой кислот в биологических тканях / Соколовский В.В., Лебедева Л.В., Лиэлуп Т.Б.// Лаб. дело. -1967. -№12. -С.160-162.

79. Титц, Н. Энциклопедия клинических лабораторных тестов / Титц Н. - М.: Лабинформ, 1997. - 960 с.

80. Темердашев, З.А. Вольтамперометрическое определение аскорбиновой кислоты в пищевых продукта / Темердашев З.А., Цюпко Т.Г., Федоровская С.Н. // Химия и компьютерное моделирование. Бутлеровские сообщения. -2002. - № 8. - С. 46-46.

81. Труфанов, A.B. Биохимия и физиология витаминов и антивитаминов / Труфанов A.B. - М.: Сельхоз. лит., 1959. - 654 с.

82. ФС 42-3285-96 Экстракт шиповника сухой -М.:Фармстандарт, 1996. - 5 с.

83. Хайгер, Д. Высокоэффективный капиллярный электрофорез / Д. Хайгер -М.: Мир, 2000. - 115 с.

84. Харитонов, Ю.Я. Аналитическая химия. Т.1. Качественный анализ / Харитонов Ю.Я. - М.Высш.шк., 2003. - 615с.

85. Чупахина, Г.Н. Система аскорбиновой кислоты растений: Монография / Чупахина Г.Н. - Калининград: Калинингр. ун-т., 1997. - 120 с.

86. Шаповалова, E.H. Хроматографические методы анализа / Шаповалова E.H., Пирогов A.B. - М.:МГУ, 2007. - 109с.

87. Шилина, A.C. Определение аскорбиновой кислоты в радиофармпрепаратах методом потенциометрического титрования / Шилина A.C., Гусенков C.B., Эпштейн Н.Б. // Ломоносов-2006. Материалы международной конференции молодых учёных по фундаментальным наукам. -М.: МГУ, 2006 - С. 44-44.

88. Ших, К.В. Взаимодействия компонентов витаминно-минеральных комплексов и рациональная витаминотерапия / Ших К.В. // Рос. мед. журн. - 2004.-Т. 6, №12.-С. 34-37.

89. Уильяме, У.Д. Определение анионов / Уильяме У.Д. - М.: Химия, 1982.-624с.

90. Эпшпейн, H.A. Оценка пригодности (валидация) ВЭЖХ методик в фармацевтическом анализе / Эпшпейн H.A. // Хим.- фармац. журн. - 2004. -Т.38., №4. - С. 40-56.

91. Яшин, А.Я. Новый экспрессный амперометрический способ определения антиоксидантной активности растительных лекарственных препаратов, биологически активных добавок и напитков / Яшин А.Я., Яшин Я.И., Пахомов В.П. // ЭМА-2012. Материалы 8 Всерос. конф. по электрохимическим методам анализа. - 2004. - № 34. - С 12-14.

92. Abudu, N. Vitamins in human arteriosclerosis with emphasis on vitamin С and vitamin E / Abudu N, Miller J., Attaelmannan M. // Clin Chim Acta. - 2004. -Vol.339, N.ll.-P 25-25.

93. Ahsan, H. Pro-oxidant, anti-oxidant and cleavage activities on DNA of curcumin and its derivatives demethoxycurcumin and bisdemethoxycurcumin / Ahsan IT., Parveen N., Khan N.U. // Chem. Biol. - 1999.- Vol.121, N. 2,- P.161-175. .

94. Alvik, A.C. High throughput assay for screening of antioxidants R [Electronic resource] / Alvik A.C., Lovaas E.A. - Norway: Institute of Pharmacy, Department of Pharmaceutical Chemistry, University of Tromso, 2001. Режим доступа: www.farmasi.uit.no/EN/Erik/Poster Marin Biopros-01-WEB.pdf.

95. Anderson, R. Ascorbate and cysteine-mediated selective neutralisation of extracellular oxidants during N-formyl peptide activation of human phagocytes / Anderson R., Lukey P.T., Theron. // Agents and Actions. — 1987. — Vol. 20. — P. 77-78.

96. Anderson, R. Ascorbic acid and immune Functions: Mechanism of immunostimulation./ Anderson R. — London: Applied Science, 1981. — 249 p.

97. Arrigoni, O. Ascorbic acid: much more than just anantioxidant / Arrigoni O, De Tullio M. // Biochim Biophys Acta. - 2002. -Vol. 15. - P. 1-9.

98. Asplund, K. Antioxidant vitamins in the prevention of cardiovascular disease: a systematic review / Asplund K. // Intern Med. - 2002. - Vol. 251, N 72. - P.89 -92.

99. Baker, T. Effect of vitamin С on the availability of tetrahydrobiopterin in human endothelial cells / Baker Т., Milstien S, Katusic ZS. // Cardiovasc Pharmacol.-2001.- Vol.37, N333. -P.8-10.

100. Beisel, W.R. Single nutrients and immunity / Beisel W.R. // J. Clin. Nutr.— 1982. — Vol. 35. —P. 417-419.

101. Benzie, I. The ferric reducing ability of plasma (FRAP) as a measure of «antioxidant power»: the FRAP assay / Benzie I., Strain J. // Analytical Biochemistry. - 1996. - Vol. 239. - P. 70-76.

102. Blois, M. Antioxidant determination by the use of a stable free radical / Blois M. // Nature. - 1958. - Vol. 26. - P. 1198-1200.

103. Bocek, P. Selectivity in Capillary Electrophoresis / Bocek P., Vespalec R. // Anal. Chem. - 2000. - Vol. 1. - P. 586-595.

104. Burton, G. Vitamin E: application of the principles of physical organic chemistry to the exploration of its structure and function / Burton G., Ingold K. // Acc. Chem. Res. - 1986. - Vol. 19, N. 194. - P. 201 - 208.

105. Bowry, V. Tocopherol-mediated peroxidation: the prooxidant effect of vitamin E on the radical-initiated oxidation of human low-density-lipoprotein ./ Bowry, VW, StockerR. //Am Chem Soc. - 1993.-Vol.115, N.60 - P. 29.-44.

106. Buijnsters, M. Evaluation of Antioxidative Activity of Some Antioxidants by Means of a Combined Optothermal Window and a DPPH* Free Radical Colorimetry / Buijnsters M., Burton G., Ingold K. // Analytical Sciences. Special Issue. - 2001. - Vol. 17. - P. 544-546.

107. Burton, G. Vitamin E: application of the principles of physical organic chemistry to the exploration of its structure and function / Burton G., Ingold K. // Acc. Chem. Res. - 1986. - Vol.19, N.194. - P. 201-206.

108. Cancalon, P. Routine analysis of ascorbic acid in juice using capillary electrophoresis: Food authenticity / Cancalon P. // J. of AOAC International. -2001. - Vol. 84, N.3. - P. 987-991.

109. Carr, A. Potential antiatherogenic mechanisms of ascorbate (vitamin C) and alpha-tocopherol (vitamin E) / Carr A., Zhu B., Frei B. // Circ Res. - 2000. Vol.87., N.349. - P. 54-55.

110. Chen, S. Counterflow Isotachophoresis-Capillary Zone Electrophoresis on Directly Coupled Columns of Different Diameters / Chen S., Lee M. // Analyt. Chem. - 1998. - Vol. 70. - P. 3777-3780.

111. Chen, X. Antioxidant effects of vitamins C and E are associated with altered activation of vascular NADPH oxidase and superoxide dismutase in stroke-prone SHR / Chen X, Touyz R, Park J // Hypertension. - 2001. - Vol. 38, N. 606. - P. 11-16.

112. Cerhata, D. Determination of ascorbic acid in blood serum using highperformance liquid chromatography and its correlation with spectrophotometric (colorimetric) determination / Cerhata D, Bauerova A, Ginter E. // Ceska Slov Farm.- 1994.- Vol. 6, N. 43(4). - P. 16835- 16836.

113. Cuzzocrea, S. Antioxidant therapy: A new pharmacological approach in shock, inflammation, and ischemia/reperfusion injury / Cuzzocrea S., Riley D.P., Caputi A.//Pharmacol. Rev. -2001. - Vol.53. - P. 153-159.

114. Daniel, W. Comparison of Ascorbic Acid Concentrations in Whole Blood Obtained by Venipuncture or by Finger Prick / Daniel W. Bradley, James E. // Clinical Chemistry. - 1972. - Vol. 18, N. 9. - P. 89-93.

115. Dayton P. Ascorbinic acid and blood coagulation / Dayton P., Weiner M. // Ann.N.Y.Acad Sci. - 1961. - Vol. 12. - P. 302-306.

116. Dietz, E. Die relative Bioverfugbarkeit der Ascorbate oxidase des Saddornsaftes fur den Menschen / Dietz E., Witthoft C., Bitsch I. // Food Science and Technology. - 2012. - Vol. 52, N. 2. - P. 123-130.

117. Dror, Y. Recommended micronutrient supplementation for institutionalized elderly / Dror Y., Stern F., Berner Y.N. // J. Nutr. Health. Aging. - 2002. - Vol. 6. - P. 295-300.

118. Elars, R antioxidative activity of phenolic acids and esters / Elars, R, P Urizzi, J. Souchard // Int. Electronic Conf. on Synthetic Organic Chemistry (ECSOC-2) -1998.-Vol. 9. - P.1-30.

119. Evans R.M. The distribution of ascorbic acid between various cellular components of blood, in normal individuals, and its relation to the plasma concentration / Evans R.M., Currie. L., Campbell A. // Brit. J. Nutr. — 1982. — Vol. 47. - P. 473-479.

120. European Pharmacopoeia. Published in accordance with Convection on the Elaboration of a European Pharmacopoeia. - Strasbourg: Council of Europe, 2011. - 1336 p.

121. Gliniecki, K. Hadebutten-Bestimmung des Vitamin C-Gehaltes / Gliniecki K., I-lademann U., Kuhne W. // Pharm. Zeitung. - 1999. - Vol. 127. - P. 823-826.

122. Gottel, W., Hallstein H. // Prax. Naturwiss. Chem. - 1980. - Vol. 10. - P. 295-304.

123. Goodman, G. The pharmacological Basis of Therapeutics, Eight Edition / Goodman, G. - 2002. - 1236 p.

124. Griffiths, H. Dietary supplementation with vitamin C but not vitamin E reduces constitutive expression of 1CAM-1 in peripheral blood monocytes of normal subjects with low plasma vitamin C levels / Griffiths II, Rayment S, Shaw J. // Free Radic Biol Med. - 2003. - Vol.12. - P. 35-35.

125. Grossman, P. Capillary Electrophoresis - Theory and Practice / Grossman P., Colburn J. - San Diego: Academic Press Inc., 1992. - 643 p.

126. Heiger, D. High Performance Capillary Electrophoresis / Heiger D. // Agilent Technologies. - 2000. - P. 130-135.

127. Hempel, G. Strategies to Improve the Sensitivity in Capillary Electrophoresis for the Analysis of Drugs in Biological Fluids / Hempel G. // Electrophoresis. -2000. - Vol.21. -P. 691-698.

128. Heller, R. L-ascorbic acid potentiates endothelial nitric oxide synthesis via a chemical stabilization of tetrahydrobiopterin / Heller R., Unbehaun A, Schellenberg B. // Biol Chem. -2001.- Vol. 276, N.40. - P 7-9.

129. Henderson, P.T. The hydantoin lesions formed from oxidation of 7,8-dihydro-8-oxoguanine are potent sources of replication errors in vivo / Henderson P.T., Delaney J.C, Muller J.G // Biochemistry. - 2003. -Vol.42, N.31. - P. 9257- 9262.

130. Hernandez, J. Determination of L-ascorbic acid and total ascorbic acid in vascular and nonvascular plants by capillary zone electrophoresis / Hernandez J. // Laboratory Robotics and Automation. - 1999. - Vol. 11. - P. 121 -126.

131. Hewitt E., Dickes G. Spectrophotometric Measurements on ascorbic acid and their use for the estimation of ascorbic acid and dehydroascorbic acid in plant

tissuer / Hewitt E., Dickes G. // The biochemical Journal. - 1961. - Vol. 78. N. 2. -P. 384-391.

132. Huang, A. Ascorbic acid enhances endothelial nitric-oxide synthase activity by increasing intracellular tetrahydrobiopterin / Huang A., Vita J., Venema R. // Biol Chem. - 2000. - Vol. 275, N.17. -P. 399^106.

133. ISO 5725-1-1994. Accuracy (trueness Ana precision) of measurement methods and results - P. I. Genera principles and definitions. - Geneva, 1994. - 17

P-

134. Ihara, H. A simple and rapid method for the routine assay of total ascorbic acid in serum and plasma using ascorbate oxidase and o-phenylenediamine / Ihara H., Shino Y., Aoki Y. //Nutr. Sci. Vitaminol. - 2000. - Vol. 46. - P. 321-324.

135. Ihara, H. An automated assay for measuring serum ascorbic acid with use 4-hydroxy 2,2,6-6-tetramethylpiperidinyloxy, free radical and o-phenylenediamine / Ihara H., Matsumoto N., Shino Y. // Clin.Chim. Acta. - 2000. - Vol. 301. - P. 193-204.

136. Ingold, K. Autoxidation of lipids and antioxidation by alpha-tocopherol and ubiquinol in homogeneous solution and in aqueous dispersions of lipids: unrecognized consequences of lipid particle-size as exemplified by oxidation of human low-density-lipoprotein / Ingold K., Bowry V., Stocker R. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. - 1993.-Vol.90., N.45. -P. 9-13.

137. Jumppunen J. Marker Techniques for High-Accuracy Identification in CZE / Jumppunen J., Reikkola M.//Anal. Chem. - 1995. - Vol.67. - P. 1060-1066.

138. Jagota, S. A new colorimetric technique for the estimation of vitamin C using Folin phenol reagent / Jagota S., Dani H. // Analytical Biochemistry. - 1982. -Vol. 127.-P. 178-182.

139. Kampa M. New automated method for the determination of the Total Antioxidant Capacity (TAC) of human plasma, based on the crocin bleaching assay / Kampa M., Nistikaki A., Tsaousis V. // BMC Clinical Pathology. - 2002. -Vol. 2.-P. 34-39.

140. Kaliora, A. Dietary antioxidants in preventing atherogenesis / Kaliora A., Dedoussis G., Schmidt H. // Atherosclerosis. - 2006. - Vol. 187, N. 1. - P. 17-21.

141. Korcok, J. Differential effects of glucose on dehydroascorbic acid transport and intracellular ascorbate accumulation in astrocytes and skeletal myocytes / Korcok J, Dixon S, Lo T. // Brain Res. - 2003. - Vol.993, N.201. - P. 7-8.

142. Korotkova, E., Study Electroanalytical Chemistry / Korotkova E., Karbainov Y., Shevchuk A. - 2002. - Vol. 518, N.l. - P. 56-60.

143. Moeslinger, T. Spectrophotometric determination of dehydroascorbic acid in biological samples / Moeslinger T., Brunner M., Spieckermann P. // Anal. Bio.Chem. - 1994. - Vol. 221. - P.290-296.

144. Nagaoka S.. Kinetics of the reaction by vitamin E is regenerated which natural by vitamin C / Nagaoka S., Kakiuchi T., Ohara K. // Chem Phys Lipids. - 2007. -Vol.146, N.6.-P. 32-36

145. Neuzil, J. The role of vitamin E in atherogenesis: linking the chemical, biological and clinical aspects of the disease / Neuzil J, Weber C, Kontush A. // Atherosclerosis. - 2001. - Vol. 157, N.257. - P. 83-83.

146. Neuzil, J. Vitamin E: function and metabolism / Neuzil J. // The Faseb. J. -2000.-Vol. 13, N. 10.-P. 1145-1155.

147. Lei, J. Analysis of Ascorbic Acid in Single Human Neutrophils by Electrochemical Detection / Lei J., Wen R. // Chinese Chemical Letters. - 2002. -Vol. 13,N. 11.-P. 1087- 1089.

148. Lin, L. Determination of ascorbic acid and isoascorbic acid by capillary zone electrophoresis: application to fruit juices and to a pharmaceutical formulation / Lin L., Baeyens B., Acker V. // Pharm-Biomed-Anal. - 2002. -Vol. 10. - P. 717721.

149. Lowry, O. The determination of ascorbic acid in small amounts of blood serum / Lowry O., Hunter T. //Biol. Chem. - 1945. - Vol. 169. - P. 61-64.

150. Lussignoli, S. A microplate-based colorimetric assay of the total peroxyl radical trapping capability of human plasma / Lussignoli S., Fraccaroli M., Andrioli G. // Analytical Biochemistry. - 1999. -Vol. 269. - P. 38-44.

151. Maeda, N. Aortic wall damage in mice unable to synthesize ascorbic acid / Maeda N., Hagihara H., Nakata Y // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2000. -Vol.97., N.84.- P. 1-6.

152. Meeran, N., Abdul S., Patel R. Indirect Potentiometric Titration of Ascorbic Acid in Pharmaceutical Preparations Using Copper Based Mercury Film Electrode / Meeran N., Abdul S., Patel R. // Chem. Pharm. Bull. - 2004. - Vol. 52(1).-P. 38—40.

153. Mo, S. Modulation of TNF-alpha-induced ICAM-1 expression, NO and H2O2 production by alginate, allicin and ascorbic acid in human endothelial cells / Mo S., Son E., Rhee D. // Arch Pharm Res. - 2003. - Vol. 26. - P. 51-54.

154. Morris, C. Routine vitamin supplementation to prevent cardiovascular disease: a summary of the evidence for the U.S. Preventive Services Task Force / Morris C., Carson S. // Ann Intern Med. -2003. - Vol. 139, N.56. - P. 70-75.

155. Moser, R. Uptake of ascorbic acid by human granulocytes / Moser R., Weber F. // Internal. J. Vit. Nutr. Res. — 1983. — Vol. 54. — P. 47-49.

156. Marui N. Vascular cell-adhesion molecule-l(Vcam-l) gene-transcription and expression are regulated through an antioxidant sensitive mechanism in human vascular endothelial-cells / Marui N., Offermann M., Swerlick R. // Clin. Invest. - 1993. - Vol.92, N.1866. - P. 74-77.

157. Packer, L. Flavonoids and other polyphenols / Packer L. - M.: Academic Press, 2001.-105 c.

158. Padayatty, S. Vitamin C as an Antioxidant: Evaluation of Its Role in Disease Prevention / Padayatty S., Katz A., Wang Y. // Am. Coll. Nutr. - 2003,- Vol. 22.-P. 18-35.

159. Panush, R. Modulation of certain immunologic responses by vitamin C III-Potentiation of in-vitro and in-vivo lymphocyte responses / Panush R.S., Delafuente J.C., Katz P. // Vit. Nutr. Res. — 1982. — Vol. 23. — P. 35-38.

160. Prieto, P. Spectrophotometric quantification of antioxidant capacity through the formation of a phosphomolybdenum complex. Specific application to the determination of vitamin E / Prieto P., Pineda M., Aguilar M. // Anal. Biochem. -1999. - Vol.269. - P. 337-341.

161. Rayment, S., Shaw J., Woollard K. Vitamin C supplementation in normal subjects reduces constitutive ICAM-1 expression / Rayment S., Shaw J., Woollard K. // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2003. - Vol. 308, N.339. - P. 45-49.

162. Ramanathan, K. Effects of ascorbic acid and alpha-tocopherol on arsenic-induced oxidative stress / Ramanathan K, Balakumar BS, Panneerselvam C. // Hum. Exp. Toxicol. -2002. - Vol.21, N.675. - P. 80-82.

163. Retsky, K. Ascorbic acid oxidation product(s) protect human low density lipoprotein against atherogenic modification / Retsky K.L., Freeman M.W., Frei B // Biol. Chem. — 1993. — Vol. 268. — P. 1304-1309.

164. Roe, J. Kuether C. The determination of ascorbic acid in blood and urine through the 2.4-dinitrophenylhydrazine derivate of dehydroascorbic acid / Roe J. Kuether C. // Biol. Chem. - 1943. - Vol. 147. - P. 394-399.

165. Schwerdt, P. Effect of ascorbic acid on rhinovirus replication in WI-38 cells / SchwerdtP. //Proc. Soc. Exp. Biol, and Med. - 1975. - Vol. 148. - P. 1237-1243.

166. Sharma, R. Antioxidant Power Assay: Direct Measure of "Total Antioxidant Activity" of Biological Fluids / Sharma R., Riswal U. // Z. Pflanzenphysiol. -1976. - Vol. 78, N. 2. - P. 169-172.

167. Smith, I.K. Analysis of Ascorbic and Dehydroascorbic Acid in Biological Samples / Smith I.K. Vierheller T.L., Thorne C.A. // Physiol. Plant. - 1989. -Vol. 77, N3.-P. 449-456.

168. Shea, T. Quantification of antioxidant activity in brain tissue homogenates using the 'total equivalent antioxidant capacity / Shea T., Rogers E., Ashline D. // J. Neuroscience Methods. - 2003. - Vol.125. -P. 55-58.

169. Salonen, R. Six-year effect of combined vitamin C and E supplementation on atherosclerotic progression: the Antioxidant Supplementation in Atherosclerosis Prevention (ASAP) study / Salonen R., Nyyssonen K, Kaikkonen J. // Circulation. -2003. - Vol. 107, N.947. - P. 53-55.

170. Siow, R, Sato II, Leake D. Vitamin C protects human arterial smooth muscle cells against atherogenic lipoproteins: effects of antioxidant vitamins C and E on oxidized LDL-induced adaptive increases in cystine transport and glutathione / Siow R, Sato H, Leake D. // Arterioscler Thromb. Vase. Biol. - 1998. - Vol. 18, N. 1662. - P. 70-76.

171. Stanner, S. A review of the epidemiological evidence for the antioxidant hypothesis / Stanner S, Hughes J, Kelly C // Public Health Nutr. - 2004. - Vol. 7, N. 407. - P. 22-27.

172. Son, E. Vitamin C blocks TNF-alphainduced NF-kappaB activation and ICAM-1 expression in human neuroblastoma cells / Son E, Mo S, Rliee D. // Arch. Pharm. Res. -2004. - Vol. 27, N.1073. - P. 9-13.

173. Su, S-C. Capillary Zone Electrophoresis and Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography for Determining Water-Soluble Vitamins in Commercial Capsules and Tablets / Su S-C., Chou S-S., Hwang D-F // J. of Food Science. -2001.-Vol. 66, N.l. - P. 10-14.

174. Tomlinson, A., Bensen L., Landers J. Investigation of the Metabolism of the Neuroleptic Drug Haloperidol by Capillary Electrophoresis / Tomlinson A., Bensen L., Landers J. // Chromatogr. - 1993. - Vol. 652. - P. 417-417.

175. Tousoulis, D. Effects of combined administration of vitamins C and E on reactive hyperemia and inflammatory process in chronic smokers / Tousoulis D, Antoniades C, Tentolouris C. // Atherosclerosis. - 2003. - Vol. 170, N. 261. - P. 7-11.

176. Urizzi P. The Methods in Enzymology series represents the gold-standard. / Urizzi P., Souchard J., Monje M. // Int. Electronic Conf. on Synthetic Organic Chemistry, Basel. - 1998. - P. 24-27.

177. Weinberger, R. Buffer Systems for Capillary Electrophoresis. Encyclopedia of Chromatography / Weinberger R. - Florida: Florida Atlantic University Boca Raton, 2001.-P. 94-97.

178. Willett, W. Clinical practice. What vitamins should I be taking, doctor? / Willett W., Stampfer M// Med. - 2001. - Vol.345, N. 18. - P. 19-24.

179. Werler, M. Multivitamin supplementation and risk of birth defects / Werler M., Hayes C., Louik C. // J. of Epidemiology. - 1999. - Vol. 10. - P. 675-682.

180. Yi, L. New Developments and Novel Therapeutic Perspectives for Vitamin C1>2 / Yi L. Herb E. // J. nutrition. - 2008. - Vol.8. - P. 14- 16.

СПИСОК ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА

Рисунок 1. Реакция образования натриевой соли кислоты аскорбиновой.........12

Рисунок 2. Реакция превращение КА в ДАК.........................................................12

Рисунок 3. Превращение 2.3-ликетогулоновой кислоты в Ь-треоновую (А) и

щавелевую (В) кислоты...........................................................................................13

Рисунок 4. Структурные формулы Р-аскорбиновой (Г) и Р-глюкоаскорбиновой

ПП кислот..................................................................................................................15

Рисунок 5. Реакция взаимодействия КА с элементарным йолом........................27

Рисунок 6. Структура 2.6-лихлорфенолиндофенола (реактив Тильманса)........29

Рисунок 7. Схема образования аскорбината железа............................................31

Рисунок 8. Реакция взаимодействия ДАК с ДТТФГ...............................................34

Рисунок 9. 2.4-линитрофенилгидразиновое производное 2.3-ДКГК..................35

Рисунок 10. Реакция образования Ь-АК диазониевого производного голубого

цвета...........................................................................................................................36

Рисунок 11. Взаимодействие ДАК с о-фенилендиамином...................................38

Рисунок 12. Триметилсилиловый эфир К А...........................................................42

Рисунок 13. УФ - спектр поглощения фосфорномолибденового комплекса.....59

Рисунок 14. Кинетические зависимости образования комплекса «молибденовой

сини» в зависимости от температуры инкубации.................................................60

Рисунок 15. Сравнение результатов анализа, полученных при использовании олного реактива ФМК в различных аналитических сериях (серия 1 - реактив ФМК хранился в течение 1 недели, серия 2 - в течение 1 месяца и серия 3 — в

течение 4 месяцев в темном месте при комнатной температуре)........................63

Рисунок 16. Сравнение результатов анализа, полученных при использовании олного реактива ФМ-Ыа при хранении в течение 1 или 5 дней в темном месте при комнатной температуре....................................................................................64

Рисунок 17. Диаграмма рассеяния и регрессионная прямая лля зависимости ОП реакционной смеси от коннентрапии аскорбиновой кислоты в пробе при анализе ФМК-метолом. Регрессионная прямая приведена с указанием 95%

доверительного интервала.......................................................................................66

Рисунок 18. Гралуировочная зависимость плошали пика от коннентрапии КА.. 88

Рисунок 19. Электофореграмма пробы КА без добавки SPS............................104

Рисунок 20. Электрофореграмма пробы КА с добавлением SPS в состав в

рабочего буферного раствора................................................................................105

Рисунок 21. Электрофореграммы проб К А при температурах 25°С (А). 20°С СБ).

..................................................................................................................................106

Рисунок 22. Зависимость соотношения плошали пика КА к плошали пика внутреннего стандарта от концентрации КА (мМ) А) лля КЗЭ. Б) для МЭХ.. 107 Рисунок 23. Электрофореграмма совместного определения КА и феруловой

кислоты в модельной системе...............................................................................112

Рисунок 24. Пример электрофореграмм реальных проб (внутренний стандарт феруловая кислота): а - плоды шиповника, б - сироп плодов шиповника, в -

препарат лля инъекций, г - драже КА..................................................................113

Рисунок 25. Электрофореграмма совместного определения КА (2.295) и ПАБК

(2.378) в модельной системе (А). КА и ССК (Б)..................................................115

Рисунок 26. Электрофореграмма пробы сиропа плодов шиповника (внутренний

стандарт ССК).........................................................................................................115

Рисунок 27. Электрофореграмма плодов шиповника (внутренний стандарт

ПАБК)......................................................................................................................116

Рисунок 28. Электрофореграмма сиропа плодов шиповника (внутренний

стандарт ПАБК)......................................................................................................116

Рисунок 29. Электрофореграмма драже КА (внутренний стандарт ПАБК).....116

Рисунок 30. Электрофореграмма раствора КА для инъекций (внутренний стандарт ПАБК)......................................................................................................117

Рисунок 31. Электрофореграмма совместного определения КА и ПАБК в

молельной системе при использовании капилляра 40 см...................................117

Рисунок 32. Электрофореграмма образна витаминного сбора №2. Капилляр 40

см. время ввола пробы 4 секунды.........................................................................120

Рисунок 33. Электрофореграмма пробы витаминного сбора №2...................... 120

Рисунок 34. Электрофореграмма пробы витаминного сбора №2 и спектр пика

КА.............................................................................................................................121

Рисунок 35. Электрофореграмма пробы плодов шиповника и спектр пика КА.... 121

Рисунок 36. Электрофореграмма пробы листьев бархатцев и спектр пика КА.... 122

Рисунок 37. Электрофореграмма пробы сиропа плодов шиповника и спектр

пика КА....................................................................................................................122

Рисунок 38. Спектр пика стандартного раствора К А.........................................122

Перечень таблиц

Таблица 1- Качественные характеристики субстанции кислоты аскорбиновой 17

Таблица 2 - Препараты, с действующим веществом кислота аскорбиновая......20

Таблица 3- Межфармакопейный анализ по применению различных методов для

оценки подлинности, качества и количественного определения КА..................47

Таблица 4 - Аналитические параметры проб при различной температуре

инкубации в течение 90 мин....................................................................................61

Таблица 5 - Реагенты и техника проведения исходного и модифицированного

метода........................................................................................................................62

Таблица 6 - Значения оптической плотности холостых проб для расчета а для

метода с ФМК...........................................................................................................67

Таблица 7. - Значения оптической плотности холостых проб для расчета показателя а для метода с ФМ-Ыа.........................................................................68

Таблица 8. Расчет прелела обнаружения и количественного определения для

трех спектрофотометрических методик анализа КА............................................69

Таблица 9. - Значения концентраций КА для определения коэффициента

вариации ФМК-метода.............................................................................................71

Таблица 10 - Значения показателей г2, точка пересечения с осыо У (Ь). наклон регрессионной кривой (а) и сумма квадратов остатков (Бе^ ) для трех методов

количественного определения КА..........................................................................72

Таблица 11 - Основные валиданионные параметры модифицированного и

базового методов анализа КА..................................................................................73

Таблица 12 - Влияние углеводов различной концентрации на результаты

определения КА........................................................................................................76

Таблица 13 - Влияние органических кислот и их солей на результаты

определения КА........................................................................................................79

Таблица 14 - Влияние флавоноилов и дубильных веществ на результаты

определения КА........................................................................................................80

Таблица 15 - Влияние стабилизаторов на результаты определения КА.............82

Таблица 16 - Метрологические характеристики спектрофотометрической методики с ФМК и йодатометрического титрования при анализе КА в

модельной системе...................................................................................................85

Таблица 17 - Результаты содержания КА в различных образцах, полученные с

помошыо ВЭЖХ и ферментативного метола........................................................88

Таблица 18 - Результаты определения КА в инъекционной форме различными

методами....................................................................................................................91

Таблица 19 - Содержание К А в плодах шиповника, измеренное различными

методами....................................................................................................................93

Таблица 20 - Результаты определения КА в сиропе плодов шиповника............95

Таблица 21 - Результаты определения К А в препарате «Аскорутин»................96

Таблица 22- Параметры для анализа КА..............................................................106

Таблица 23 - Результаты определения КА в субстанции методами капиллярного зонного электрофореза и мицеллярной электрокинетической

хроматографии (внутренний стандарт феруловая кислота)...............................108

Таблица 24- Воспроизводимость времени миграции (абсолютного и

определенного с использованием внутреннего стандарта)................................109

Таблица 25 - Валидационные характеристики методик капиллярного

электрофореза для количественного определения КА......................................110

Таблица 26 - Валидационные характеристики методики МЭКХ анализа КА при

использовании внутреннего стандарта ПАБК.....................................................117

Таблица 27 - Воспроизводимость времени миграции пиков (абсолютного и

относительного) с использованием внутреннего стандарта ПАБК...................118

Таблица 28 - Значения прецизионности для ЛП и ЛРС.....................................123

Таблица 29 - Результаты анализа К А в ЛП и Л PC.............................................124