Состав, биологическая активность и роль экзогликанов бактерий Paenibacillus polymyxa во взаимодействиях с растениями тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат биологических наук Трегубова, Кристина Владимировна

• Трегубова, Кристина Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Трегубова, Кристина Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Почвенные азотфиксирующие бактерии вида РаетЪасШт ро1утуха

1.1.1 Морфологические и физиологические особенности бактерий

1.1.2 Практическое использование бактерий Р. ро1утуха

1.1.3 Механизмы стимулирующего воздействия на растения

1.2 Основные этапы растительно-бактериального взаимодействия

1.2.1 Прикрепление бактерий Р. ро1утуха к корням растений

1.2.2 Образование биопленок

1.2.3 Деформации корневых волосков

1.3 Экзополисахариды ризобактерий Р. ро1утуха

1.3.1 Физико-химическая характеристика и свойства экзогликанов бактерий Р. ро1утуха

1.3.2 Практическое использование микробных полисахаридов

1.3.3 Иммунотропные свойства ЭПС

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Объекты исследования

2.2 Приборы и материалы

2.3 Методы выделения и исследования химического состава экзополисахаридов

2.3.1 Выделение экзополисахаридов Р. ро1утуха

2.3.2 Определение кинематической вязкости

2.3.3 Хроматографические методы

2.3.4 Колориметрическое определение состава углеводсодержащих полимеров

2.3.5 Электрофорез в полиакриламидном геле

2.3.6 ИК-спектроскопический анализ

2.3.7 Распад по Смиту

2.4 Методы исследования деформаций корневых волосков и способности Р. ро1утуха к колонизации корней и формированию биопленок

2.5 Иммунохимические методы исследования

2.5.1 Иммунизация животных и получение поликлональных кроличьих антител

2.5.2 Реакция агглютинации

2.5.3 Встречная двойная иммунодиффузия

2.5.4 Иммуноферментный анализ (ELISA) 47 2.6 Методы исследования иммуномодулирующего действия экзополисахаридов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Сравнительное исследование продукции внеклеточных полисахаридов штаммами Р. polymyxa

3.2 Выделение, очистка и исследование химического состава экзополисахаридов бактерий Р. polymyxa

3.3 Иммунохимическое исследование экзополисахаридов Р. polymyxa

3.4 Оценка способности бактерий Р. polymyxa к колонизации корней проростков пшеницы

3.4.1 Наблюдение колонизации корней пшеницы посредством световой микроскопии

3.4.2 Различия бактерий Р. polymyxa в способности к адсорбции на корнях и индукции деформаций корневых волосков

3.4.3 Количественная оценка колонизации Р. polymyxa 1465 корней пшеницы методом иммуноферментного анализа (ELISA)

3.5 Оценка способности к формированию биопленок ряда штаммов

Р. polymyxa, отличающихся по выходу и реологическим свойствам ЭПС

3.6 Исследование активности экзополисахаридов Р. polymyxa в отношении индукции факторов неспецифической резистентности макроорганизма

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Состав, биологическая активность и роль экзогликанов бактерий Paenibacillus polymyxa во взаимодействиях с растениями»

Актуальность проблемы. Почвенные азотфиксирующие ризобактерии Paenibacillus polymyxa стимулируют рост и развитие широкого круга растений благодаря формированию эффективных ассоциативных отношений. Это связано со способностью этих микроорганизмов к азотфиксации, фосфатмобилизации, продукции фитогормонов, антибиотиков (Mannanov and Sattarova, 2001), широкого спектра литических ферментов, высокой адаптивностью к условиям существования, а также частым обнаружением их в ризосфере злаков (Lebuhn et al., 1997, da Mota et al, 2002; Lal and Tabacchioni, 2009). Опытным путем доказано, что P. polymyxa, находясь в ассоциации с растениями, могут увеличивать сопротивляемость растительного организма биотическим и абиотическим стрессам (McSpadden, 2004; Selim et al, 2005; Timmusk et al., 2005). Ряд исследователей выдвигает на первый план в данных процессах способность Р. polymyxa к эффективной колонизации и формированию биопленок (Haggag and Timmusk 2008; Timmusk et al., 2009). Показано, что некоторые штаммы не только колонизируют корневую поверхность (Bent et al., 2002), но и проникают внутрь корневых тканей (Shishido et al., 1999).

Бактерии P. polymyxa известны как активные продуценты кислых и нейтральных экзополисахаридов (ЭПС) (Пирог с соавт., 1985; Матора с соавт., 1992; Hebbar et al., 1992; Lee et al, 1997; Jung et al., 2007), обладающих рядом уникальных свойств, что объясняет разнообразие сфер возможного применения данных полимеров. Наряду с этим, экзогликанам Р. polymyxa отводится важная роль в формировании растительно-микробных ассоциаций (Hebbar et al, 1992; Bezzate et al, 2000; Timmusk et al, 2005; Haggag, 2007). P. polymyxa широко используются как основные компоненты комплексных бактериальных удобрений, что приводит к обогащению окружающей среды выделяемыми полисахаридами (ПС), эффект действия которых на организм человека и животных до сих пор не вполне ясен.

Поверхностная локализация внеклеточных полисахаридов (ВПС) придает им свойства посредников во взаимодействии Р. polymyxa с другими микро- и макроорганизмами. Кроме того, образуя на поверхности бактерий плотный слой, ЭПС могут экранировать расположенные под ними другие клеточные структуры и определять иммунологические свойства бактерий (Васильев с соавт., 1984). Исследованиями ряда ученых (Ермольева и Вайсберг, 1976; Розе с соавт., 1990; Jung et al, 2007; Chang et al, 2009; 2010) показано, что ЭПС P. polymyxa представляют собой биологически активные вещества, обладающие иммунотропным действием.

Несмотря на интенсивные исследования данных бактериальных полисахаридов и значительные успехи в выяснении их физиологической роли, остаются до конца не выясненными свойства и химическая структура большого спектра ЭПС. Всестороннее изучение данных биополимеров позволит выявить функциональные связи между строением экзогликанов и их биологической ролью, что может способствовать более полному и глубокому пониманию молекулярных основ межклеточных, межвидовых и межорганизменных взаимодействий. Это свидетельствует о несомненной актуальности работ, направленных на изучение внеклеточных полисахаридов бактерий вида Р. ро1утуха.

В этой связи, цель данной работы состояла в выявлении особенностей состава и свойств экзогликанов ряда штаммов Р. ро1утуха и оценке их роли во взаимодействии с корнями пшеницы.

Для реализации поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

1. Провести сравнительное исследование продукции внеклеточных полисахаридов рядом штаммов Р. ро1утуха.

2. Выделить суммарные препараты ЭПС бактерий Р. ро1утуха и провести анализ их химического состава.

3. Провести качественную и количественную оценку способности бактерий Р. ро1утуха к колонизации корней проростков пшеницы.

4. Оценить способность к формированию биопленок ряда штаммов Р. ро1утуха, отличающихся по выходу и реологическим свойствам ЭПС.

5. Исследовать активность препаратов ЭПС Р. ро1утуха в отношении эукариотических клеток: растительных, иммунной системы животных и цельной крови человека.

Научная новизна работы.

Установлено, что штамм Р. ро1утуха 1465, характеризующийся наибольшим выходом ЭПС, более высокими значениями кинематической вязкости культуральной жидкости и водных растворов ЭПС, оказался более активным в процессах колонизации корней проростков пшеницы, индукции деформации корневых волосков, а также при формировании биопленок на абиотических поверхностях.

Впервые обнаружена способность ЭПС Р. ро1утуха вызывать различные морфологические изменения корневых волосков проростков пшеницы, являющиеся одним из наиболее ранних откликов растения на присутствие в окружающей среде бактерий.

Впервые показана перспективность применения твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием антител на ЭПС для количественной оценки колонизации ризобактериями Р. ро1утуха корней пшеницы, что может найти применение при тестировании природных изолятов бактерий.

Установлено, что ЭПС P. polymyxa 1465 способны к активации иммунных клеток. Показано, что данные экзогликаны in vitro стимулируют фагоцитоз бактериальных клеток и метаболические процессы в лейкоцитах мышей и человека. Показано умеренное стимулирующее влияние исследуемых ЭПС на продукцию ведущих провоспалительных цитокинов ИЛ-10 и ФНО-а фагоцитирующими мононуклеарами человека.

Научно-практическая значимость. Полученные результаты расширяют представления о составе и свойствах экзогликанов бактерий P. polymyxa, способствуют пониманию роли ЭПС в формировании растительно-бактериальных взаимодействий.

Препараты ЭПС штаммов P. polymyxa, полученные в ходе исследований, применяются в экспериментальной деятельности сотрудниками лаборатории биохимии, иммунохимии ИБФРМ РАН, а также кафедры биохимии и биофизики СГУ.

Выявленная биологическая активность ЭПС P. polymyxa 1465 в отношении иммунных клеток позволяет прогнозировать возможность использования культур P. polymyxa с целью получения гликополимеров, обладающих иммунотропным действием.

Полученные антитела на ЭПС P. polymyxa могут быть использованы в экологических исследованиях при тестировании природных изолятов бактерий данного вида

Результаты диссертационной работы использованы при подготовке курсовых и дипломных работ студентами биологического факультета СГУ и в преподавании студентам биологического и химического факультетов СГУ курсов: «Основы гликологии» и «Химия и биохимия углеводов».

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Экзополисахариды P. polymyxa 1460, 1465, 92 являются гетерополисахаридами, содержащими глюкозу, маннозу, галактозу, уроновые кислоты и аминосахариды. ЭПС P. polymyxa 1465 - нерегулярный по структуре, разветвленный гликополимер, основная цепь которого образована (1—>4)- и (1—>6)-связанными остатками гексоз в пиранозной форме.

2. Внеклеточные полисахариды P. polymyxa играют существенную роль в процессах колонизации корней, деформации корневых волосков и при формировании биопленок на абиотических поверхностях.

3. Твердофазный ИФА с использованием антител, полученных на ЭПС Р. polymyxa, может применяться для количественной оценки колонизации данными ризобактериями корней пшеницы.

4. Экзогликаны ризобактерий P. polymyxa 1465 in vitro стимулируют фагоцитоз бактериальных клеток, активируют метаболические процессы в лейкоцитах человека и животных и умеренно воздействуют на продукцию провоспалительных цитокинов мононуклеарами человека.

Апробация работы. Результаты исследований были представлены на следующих научных форумах: 10-ой Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, Россия, 2006 г.); 3-ей и 4-ой Межрегиональных конференциях молодых ученых «Стратегия взаимодействия микроорганизмов и растений с окружающей средой» (Саратов, Россия, 2006, 2008 гг.); Международной школе-конференции молодых ученых «Applied and fundamental aspects of responses, signaling and developmental process in the root-microbe systems» (Санкт-Петербург, Россия, 2007 г.); Международной научной конференции молодых ученых и студентов «Modern problems of Microbiology and biotechnology» (Одеса, Украина, 2007 г.); Всероссийской конференции с международным участием «Фундаментальные и прикладные аспекты исследования сим биотических систем», (Саратов, Россия, 2007 г.); Международной научной конференции «Современное состояние и перспективы развития микробиологии и биотехнологии» (Минск, Беларусь, 2008 г.); отчетной конференции ИБФРМ РАН (Саратов, Россия, 2008 г.); Всероссийской научной конференции с международным участием «Физиология и генетика микроорганизмов в природных и экспериментальных системах» (Москва, Россия, 2009 г.); Научно-практической конференции «Biologically active substances: Fundamental and Applied Problems» (Новый Свет, Крым, Украина, 2009 г.); Международной научно-практической конференции «Вавиловские чтения - 2009» (Саратов, Россия, 2009 г.); Ii-ом Международном конгрессе студентов и аспирантов-биологов «Симбиоз Россия 2009» (Пермь, Россия, 2009 г.).

Работа выполнена в лаборатории биохимии Учреждения Российской академии наук Института биохимии и физиологии растений и микроорганизмов (ИБФРМ) РАН в соответствии с плановыми темами: «Структуры гликополимеров и их функции в растительно-микробных взаимодействиях» (№ гос. per. 0120.0403358, научный руководитель - зав. лаб. засл. деятель науки РФ, д.б.н. проф. Игнатов В.В.) и «Структурно-функциональные особенности поверхностных гликополимеров ризобактерий» (№ гос. per. 1200712165, научный руководитель - зав. лаб. засл. деятель науки РФ, д.б.н. проф. Игнатов В.В.).

Личный вклад соискателя. Представленные экспериментальные результаты получены лично автором и в совместной работе с сотрудниками лаборатории биохимии ИБФРМ РАН и кафедры биохимии и биофизики ГОУ ВПО «Саратовский государственный университет им. Н.Г. Чернышевского». Моносахаридный состав

ЭПС исследован совместно с сотрудниками лаборатории химии углеводов Института органической химии им. Н.Д. Зелинского РАН (г. Москва) и лаборатории физико-химических методов исследования ИБФРМ РАН. Иммунохимические исследования ЭПС выполнены совместно с сотрудниками лаборатории иммунохимии ИБФРМ РАН. Исследования активности экзополисахаридов Р. ро1утуха в отношении индукции факторов неспецифической резистентности макроорганизма проведены совместно с сотрудниками кафедры биохимии и биофизики СГУ. На защиту вынесены только те положения и результаты экспериментов, в получении которых роль соискателя была определяющей.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 26 работ в отечественных и зарубежных изданиях, из них 2 статьи в журналах из перечня, рекомендованного Высшей аттестационной комиссией Российской Федерации.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, глав с изложением методов исследования, результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка использованной литературы, содержащего 262 источника, в том числе 169 зарубежных. Работа изложена на 131 странице, содержит 24 рисунка и 9 таблиц.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Трегубова, Кристина Владимировна

выводы

1. Проведено сравнительное исследование продукции и состава экзогликанов штаммов P. polymyxa 1460, 1465 и 92. Установлено, что выход экзополисахаридов, кинематическая вязкость культуральной жидкости и водных растворов полисахаридов определялись штаммовой принадлежностью, возрастом культуры и источником углерода. Обнаружено преобладание в препаратах ЭПСгл штаммов 1465 и 92 кислого компонента, что коррелировало с более высокой вязкостью растворов ЭПС. Среди исследованных выявлен штамм 1465, характеризующийся более высоким выходом ЭПС, наибольшими значениями вязкости среды и водных растворов полисахаридов.

2. Показано, что ЭПС протестированных штаммов являются гетерогенными по молекулярной массе и заряду полисахаридами, в состав которых входят манноза, глюкоза, галактоза, уроновые кислоты и аминосахариды. ЭПС^ является нерегулярным по структуре, разветвленным гетерогликаном, основная цепь которого образована (1—>4)- и (1—>6)- связанными остатками гексоз. С использованием поликлональных антител на ЭПС1465 обнаружено отсутствие выраженной штаммовой специфичности антигенных детерминант ЭПС в пределах вида P. polymyxa.

3. Показана более высокая адсорбционная способность штамма 1465 по сравнению со штаммом 1460 на всем протяжении совместной инкубации с корнями пшеницы. Продемонстрирована перспективность применения твердофазного иммуноферментного анализа с использованием поликлональных антител на изолированный препарат ЭПС1465, для количественной оценки колонизации бактериями P. polymyxa корней.

4. Отмечена способность протестированных штаммов P. polymyxa к формированию биопленок на абиотических поверхностях. Способность к закреплению на гидрофобной и гидрофильной поверхности снижалась в ряду штаммов P. polymyxa: 1465, 92, 1460, что, вероятно, определялось выходом и реологическими свойствами синтезируемых ими ЭПС.

5. Впервые обнаружена активность изолированных препаратов ЭПС Р. polymyxa в индукции различных морфологических изменений корневых волосков проростков пшеницы, являющихся одним из наиболее ранних откликов растения на присутствие в окружающей среде бактерий. Наибольший эффект вызывали полисахариды штаммов 1465 и 92.

6. Установлено, что ЭПС P. polymyxa 1465 in vitro стимулировали процесс фагоцитоза эшерихий макрофагами, не оказывали стимулирующего влияния на продукцию активных форм кислорода лейкоцитами, в то же время ЭПСгл незначительно активировал миелопероксидазу. Показано, что ЭПС активировали кислую фосфатазу, в большей степени - ЭПСгл (в 1.8-2.0 раза), преимущественно стимулировали образование ИЛ-10 и незначительно ФНО-а на завершающих стадиях фагоцитоза.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Почвенные азотфиксирующие бактерии Р. polymyxa стимулируют рост и развитие широкого круга растений и известны как активные продуценты экзополисахаридов. Они разнообразны по структуре и физико-химическим свойствам и в большинстве своем малотоксичны или нетоксичны. Показано, что ЭПС Р. polymyxa представляют собой биологически активные вещества, обладающие иммунотропным действием (Ермольева и Вайсберг, 1976; Розе с соавт., 1990; Jung et al., 2007). В том числе, по мнению ряда авторов (Timmuck et al., 2005; Hebbar et al., 1992; Bezzate et al, 2000; Haggag, 2007), внеклеточные полисахариды Р. polymyxa играют существенную роль в формировании растительно-микробных ассоциаций. В этой связи нам представлялось целесообразным исследовать некоторые физико-химические и биологические свойства изолированных препаратов ЭПС ряда штаммов Р. polymyxa.

В ходе данной работы в соответствии с поставленной целью были оценены различные факторы, влияющие на выход ЭПС и его свойства. Установлено, что продукция ЭПС, кинематическая вязкость культуральной жидкости и собственная вязкость растворов ЭПС определялись пггаммовой принадлежностью, возрастом культуры и природой используемого источника углерода. В результате сравнительного исследования бактерий Р. polymyxa 1465, 1460 и 92 по продукции ЭПС показано, что штамм 1465 характеризовался наибольшим выходом ЭПС (до 4 и 12 г/л на глюкозе и сахарозе соответственно), более высокими значениями вязкости КЖ и водных растворов ЭПС. Вязкость 0.1 % растворов ЭПСГл в среднем составила 4.5 мм2/с, у

ЭПСслх "" 1-4 мм /с. Продукция экзогликанов бактериями Р. polymyxa 1460 была в среднем в 3 раза меньше как на среде с глюкозой, так и с сахарозой, а собственная вязкость 0.1 % растворов ЭПС находилась на уровне контрольных значений в течение

2 1 всей ферментации и составляла около 1.3 мм /с.

Для построения обоснованных выводов относительно функций конкретных гликополимеров необходимо накопление данных о химической структуре этих важных макромолекул. В связи с этим следующий этап нашей работы был посвящен выделению, очистке и изучению состава экзогликанов ряда штаммов Р. polymyxa различными физико-химическими методами. Суммарные препараты ЭПС Р. polymyxa штаммов 1465, 1460 и 92 были проанализированы методами гель- и ионообменной хроматографии, электрофореза в ПААГ, ИК-спектроскопии, ГЖХ, а также колориметрическими методами. Обобщая полученные результаты, можно заключить, что данные бактерии в периодической культуре продуцируют ЭПС, гетерогенные по молекулярной массе (7><104-2х106 Да) и заряду, при этом условия культивирования влияют на соотношение фракций и реологические свойства синтезируемых ЭПС. Содержание углеводов в суммарных препаратах ЭПС достигало 72-75 %, белка 1.62.2 %. Выявлено значительное доминирование в ЭПС штаммов 1465 и 92 высокомолекулярных кислых фракций при культивировании на среде с глюкозой, причем водные растворы таких ЭПС имели более высокую вязкость. Результаты ИК-спекгроскопии ЭПС, синтезируемых на средах с глюкозой и сахарозой, указывали на сходство химического состава препаратов, однако были обнаружены и отличия. Максимумы поглощения на ИК-спектрах свидетельствовали о наличии в молекулах ЭПС гидроксильных групп, групп N11, СН, СН2, С=0, С-О-С, а также как а-, так и Р-гликозидных связей. В анализируемых экзогликанах преобладали манноза, глюкоза и галактоза, в разном соотношении, а также идентифицированы уроновые кислоты и аминосахара. На примере ЭПС14б5 показано, что изменение условий культивирования сказывается на моносахаридном составе полисахаридов: отмечалось существенное сокращение доли галактозы и уроновых кислот в суммарном препарате ЭПС при замене в среде выращивания глюкозы сахарозой. По данным ^-ЯМР-спектроскопии и ГЖХ-масс-спекгрометрии, ЭПС1465 является нерегулярным по структуре разветвленным гетерогликаном, основная цепь которого образована* (1—>4)- и (1—>6)- связанными остатками гексоз в пиранозной форме.

Для оценки степени родства ЭПС Р. ро1утуха 1465 с ЭПС других штаммов данного вида мы использовали сравнительный иммунохимический' анализ. Иммунизацией кроликов суммарным препаратом ЭПС14б5ГЛ получены поликлональные Ат. ЭПС14б5ГЛ формировал с Ат две полосы преципитации, что свидетельствовало о наличии в его составе двух различных фракций, отличающихся антигенными свойствами. Сравнительный иммунодиффузионный анализ препаратов ЭПС ряда штаммов Р. ро1утуха выявил взаимодействие полученных Ат с ЭПС штаммов 1459, .1460, 92 и 88А при выращивании последних на глюкозе, при этом перекрестная реакция была отмечена только по одной.из двух полос преципитации, характерных для штамма 1465 (предположительно, соответствующей кислой фракции). В то же время, ЭПС, продуцируемые на среде с сахарозой, не взаимодействовали с Ат. Исключение составлял ЭПС1465САХ, формирующий с данными Ат одну слабую полосу преципитации.

Для количественной оценки антигенных свойств ЭПС, выделенных из штаммов Р. ро1утуха 92, 1460, 1465, 1459 и 88А, выращенных на разных средах, использовали непрямой ИФА. Было установлено, что ЭПС штаммов 1465 и 92 среди сравниваемых препаратов наиболее близки между собой и имеют примерно одинаковое количество общих антигенных детерминант в составе кислых фракций препаратов. В то время как с ЭПСнбогд полученные Ат взаимодействовали очень слабо, а значения ИФА ЭПСибослх были близки к контрольным, что находилось в хорошем согласии с полученными ранее результатами иммунодиффузионного анализа. На основании полученных данных можно говорить об отсутствии выраженной штаммовой специфичности антигенных детерминант ЭПС в пределах вида Р. ро1утуха, а также о том, что условия культивирования влияют на соотношение фракций и на антигенные свойства синтезируемых ЭПС.

Поскольку предполагается, что ЭПС Р. ро1утуха вовлечены в формирование растительно-микробных ассоциаций, очередной этап нашей работы был посвящен изучению биологической активности ЭПС ряда штаммов Р. ро1утуха в отношении морфологии корневых волосков проростков пшеницы. Хорошо известно, что образование деформаций корневых волосков является одним из наиболее ранних откликов растения на присутствие в окружающей среде бактерий. Нами обнаружено, что ЭПС Р. ро1утуха способны индуцировать морфологические изменения корневых волосков проростков пшеницы с разной интенсивностью. Зарегистрировано несколько типов деформаций. Наибольшей активностью характеризовались ЭПС бактерий Р. ро1утуха 1465 и 92. Полученные результаты свидетельствуют в пользу предположения об активной роли экзогликанов ризобактерий Р. ро1утуха в процессах формирования растительно-микробных ассоциаций.

Следующий этап нашей работы был посвящен качественной и количественной оценке способности бактерий Р. ро1утуха к колонизации корней пшеницы. Корни трехсуточных проростков мягкой яровой пшеницы Саратовская 29 инокулировали в бактериальной суспензии в течение 0.25-48 ч. Наблюдения с помощью световой микроскопии выявили неравномерный характер колонизации корневой поверхности. Больше бактерий обнаруживалось около кончика корня, в зоне элонгации и в местах соединения корневых волосков с поверхностью корня. При длительном совместном инкубировании Р. ро1утуха формировали на поверхности корня многослойные клеточные агрегаты. Сравнение динамики прикрепления к корням проростков пшеницы штаммов Р. ро1утуха, отличающихся по выходу и реологическим свойствам ЭПС, показало более высокую адсорбционную способность штамма 1465 по сравнению со штаммом 1460 на всем протяжении контакта с корнями: количество адсорбированных клеток Р. ро1утуха 1465 в 5 раз превышало таковое для штамма 1460.

Колонизирующую способность Р. ро1утуха оценивали также с помощью количественного ИФА с использованием кроличьих поликлональных антител, полученных на суммарный препарат ЭПС Р. ро1утуха 1465. Тестируемыми образцами являлись гомогенаты корней пшеницы, инокулированных бактериями Р. ро1утуха 1465 (в течение 0.25-48 ч), а также суспензии бактерий данного штамма и бактерий других родов. Была установлена высокая степень выявления клеток штамма 1465 с помощью полученных Ат по сравнению с другими протестированными бактериями. На основании результатов титрования антигенов были выбраны оптимальные разведения проб для проведения ИФА и разработан соответствующий протокол. Динамика выявления с помощью ИФА специфических бактериальных антигенных детерминант коррелировала с увеличением численности бактерий на корнях по результатам подсчета КОЕ, при этом ИФА позволял проанализировать большое количество образцов. Полученные результаты свидетельствовали о перспективности применения твердофазного ИФА с использованием Ат на ЭПС для количественной оценки колонизации бактериями Р. ро1утуха корней.

Способность Р. ро1утуха к эффективной колонизации и формированию биопленок, по мнению ряда исследователей, имеет определяющее значение в увеличении сопротивляемости растительного организма биотическим и абиотическим стрессам (Haggag, Тишпшк, 2008; Тлттизк е1 а1, 2009). На следующем этапе нашего исследования мы оценивали способность ряда штаммов ризобактерий Р. ро1утуха, отличающихся по выходу и реологическим свойствам ЭПС, к формированию биопленок на абиотических поверхностях (стекло, полистирол). Было показано, что хорошо выраженные биопленки на стеклянных и пластиковых поверхностях образуются клетками штаммов 1465 и 92. Менее выраженные биопленки формировались клетками Р. ро1утуха 1460. Следует заметить, что штамм 1465 характеризовался наибольшим выходом ЭПС, более высокими значениями вязкости КЖ и водных растворов ЭПС. Полученные результаты свидетельствуют об участии ЭПС Р. ро1утуха в формировании биопленок данными бактериями на твердых гидрофобных и гидрофильных поверхностях, что может способствовать успешной колонизации данными бактериями корней растения.

В настоящее время актуален поиск нетоксичных и доступных биополимеров, обладающих иммунотропным действием. Весьма перспективными в этом отношении являются полисахариды непатогенных микроорганизмов. За последние годы установлено, что некоторые бактериальные полисахариды отличаются выраженной способностью влиять на иммунобиологическую реактивность организма. Они вызывают многокомпонентную защитную реакцию организма, обусловливая изменение уровня сопротивляемости (Ермольева и Вайсберг, 1976). Сообщалось, что Р-1,3-0-глюканы являются мультимодальными модуляторами биологической реактивности организма со значительным клиническим противоопухолевым и противоинфекционным (противомикробным, противопротозойным, противовирусным) потенциалом, позволяющим усилить вакцинацию и активировать процессы гемопоэза (Беседнова с соавт., 2000). Исследованиями ряда ученых показано, что ЭПС P. polymyxa повышают неспецифическую реактивность организма (Афонская и Колесова, 1980; Розе с соавт., 1990; Jung et al., 2007).

Заключительный этап наших исследований посвящен исследованию активности экзополисахаридов P. polymyxa 1465 в отношении индукции факторов неспецифической резистентности макроорганизма. Были проведены эксперименты in vitro по изучению влияния ЭПС 1465, синтезируемых на средах с глюкозой и сахарозой, на фагоцитарную активность, генерацию активных форм кислорода и ферментов (кислой фосфатазы, миелопероксидазы), а также синтеза провоспалительных цитокинов (ФНО-а, ИЛ-ip) мышиными и человеческими лейкоцитами.

Установлено, что внесение ЭПС1465 в концентрации 1 мкг/мл в культуру перитонеальных макрофагов перед началом фагоцитоза приводило к увеличению количества активированных макрофагов по сравнению с контролем. ЭПС в интервале доз 0.01-10 мкг/мл не оказывали стимулирующего влияния на продукцию АФК перитонеальными макрофагами, было отмечено ингибирующее действие ЭПСслх на образование АФК при всех дозах примерно на 15-24 %, что может свидетельствовать об антиоксидантных свойствах исследуемых полисахаридов. В то же время ЭПСщ незначительно активировал миелопероксидазу, обеспечивающую альтернативный механизм кислородзависимого киллинга. Наши исследования показали, что стимуляция пролиферации спленоцитов препаратами ЭПС1465 была незначительной, и не носила концентрационно-зависимого характера. Показано, что ЭПС1465 активировали кислую фосфатазу, в большей степени - ЭПСГЛ в концентрациях 0.01 и 1 мкг/мл (в 2.0 и 1.8 раза по сравнению с контролем, соответственно). Анализируемые ЭПС преимущественно стимулировали образование ИЛ-1 р и незначительно ФНО-а на завершающих стадиях фагоцитоза. Отмеченные нами некоторые различия в активности гликополимеров ЭПСрл и ЭПСсах могут объясняться отличиями по молекулярной массе, составу и структуре данных полисахаридов. Полученные нами результаты достоверно свидетельствуют о том, что препараты ЭПС P. polymyxa 1465 оказывают стимулирующее действие на неспецифический иммунитет, что открывает перспективу их использования в качестве биологически активных веществ, обладающих иммунотропным действием.

Дальнейшее изучение биохимической структуры микробных ПС является одним из наиболее важных направлений современной химии живого вещества. Наряду с нуклеиновыми кислотами и белками высокомолекулярные ПС являются третьей важнейшей категорией биополимеров, обладающих широким спектром биологических функций и, прежде всего, функций рецепторных, обеспечивающих взаимодействие клеток друг с другом и с представителями других видов (Васильев с соавт., 1984).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Трегубова, Кристина Владимировна, 2010 год

1. Андреева И.Н., Редькина Т.В., Измайлов С.Ф. Роль индолилуксусной кислоты в стимулирующем действии Azospirillum brasilense на бобово-ризобиальный симбиоз // Физиол. раст. 1993. - Т. 40, № 6. - С. 902-907.

2. Апринян B.C., Михайлова A.A., Петров Р.В. Миелопептид-3 повышает интенсивность фагоцитоза Salmonella typhimurium мышиными перитонеальными макрофагами // Иммунология. 2001. - № 2. - С. 20 - 22.

3. Аркадьева Г.Е. Биологическая активность некоторых микробных полисахаридов: Автореф. дисс. докт. биол. наук. — Л., 1974. 24 с.

4. Архипова Т.Н. Исследование цитокининов, продуцируемых ризосферными микроорганизмами: Автореф. дис. канд. биол. наук. Уфа, 1999. - 17 с.

5. Афонская С.В., Колесова Э.Л. Профилактическое действие экстрацеллюлярных полисахаридов некоторых видов рода Bacillus при стафилококковой инфекции // Тез. докл. V Съезда Укр. микробиол. о-ва- Киев: Наукова думка, 1980. С. 156.

6. Басс-Шадхан Х.Ф. Зимозан: методы получения. Биохимическая характеристика и перспективы применения. Рига, 1970. - 313 с.

7. Беседнова H.H., Иванушко Л.А., Звягинцева Т.Н., Елякова Л.А. Иммунотропные свойства I—>3; I—>6-Р-0-глюканов // Антибиотики и химиотерапия. -2000-№2.-С. 37-44.

8. Бойко A.C. Структурные особенности липополисахаридов азоспирилл в связи с их участием в коммуникации микроорганизмов в ризосфере: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Саратов, 2009. - 23 с.

9. Бухарова E.H. Экзополисахарид Paenibacillus polymyxa 88А: получение, характеристика и перспективы использования в хлебопекарной промышленности: Автореф. дис. канд. биол.наук. Саратов, 2004. - 22 с.

10. Васильев Н.В., Луцик Н.Б., Палий Г.К., Смирнова О.В. Биохимия и иммунология микробных полисахаридов. Томск: Изд-во Изд. Томск, ун-та, 1984. -303 с.

11. Васильева Г.И., Пустовалов В.Л., Дорошенко Е.П., Киселева А.К. Оценка вирулентности штаммов чумного микроба по индексу завершенности фагоцитоза // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1987. -№ 6. - С. 117-118.

12. Веселов С.Ю., Иванова Т.Н., Симонян М.В., Мелентьев А.И. Исследование цитокининов, продуцируемых ризосферными микроорганизмами // Прикл. биохим. и микробиол. 1998. - Т. 34, № 2. - С.175-179.

13. Войнов H.A., Степень P.A., Воронин С.М. Улучшение экологичности и повышение эффективности биохимических производств // Химия растительного сырья II. 1998. -№ 1. - С. 33-43.

14. Волошин С.А., Капрельянц A.C. Межклеточные взаимодействия в бактериальных популяциях // Биохимия. 2004. - Т. 69, № 11.- С. 1555-1564.

15. Гвоздяк Р.И., Матышевская М.С., Григорьев Е.Ф., Литвинчук O.A. Микробный полисахарид ксантан. Киев: Наукова думка, 1989. - С. 187-188.

16. Глухова Е.В., Шендеров Б.А., Яроцкий C.B. Образование экзополисахаридов при культивировании Bacillus polymyxa на различных углеводных субстратах // Антибиотики и медицинская биотехнология. 1985. - Т. 30, № 7. - С. 490-495.

17. Глухова Е.В., Яроцкий C.B., Дерябин В.В., Шендеров Б.А., Игнатов В.В. Внеклеточные полисахариды почвенной бактерии Bacillus polymyxa и ее мутантного штамма // Антибиотики и мед. биотехнология. 1986а. - Т. 31, № 9. - С. 669-674.

18. Глухова Е.В., Заславская П.Л., Шендеров Б.А. Сравнительный анализ 2 штаммов Bacillus polymyxa, различающихся по спектру продуцируемых экзогенных полисахаридов // Антибиотики и мед. биотехнология. 19866. - Т. 31, № 10. - С. 743748.

19. Граник В.Г. Экзогенные доноры оксида азота и ингибиторы NO-синтаз // Вестник РФФИ. 2002. - № 4 (зо). - С.48-74.

20. Дише 3. Цветные реакции гексуроновых кислот // Методы химии углеводов/ Под ред. Н.К. Кочеткова. М., 1967. - С. 38-42.

21. Долгушин И.И., Бухарин О.В. Нейтрофилы и гомеостаз. Екатеринбург: УрО РАН, 2001.-277 с.

22. Блинов Н.П. Некоторые микробные полисахариды и их практическое применение // Успехи микробиологии. 1982. - Т. 17. - С. 158-176.

23. Блинов Н.П. Химия микробных полисахаридов. М.: Высшая школа, 1984.-256 с.

24. Блинов Н.П. // Успехи микробиологии. 1987. - Т. 36. - С. 201-206.

25. Ермольева З.В., Вайсберг Г.Е. Стимуляция неспецифической резистентности организма и бактериальные полисахариды. М.: Медицина, 1976. -184 с.

26. Жбанков Р. Г. Инфракрасные спектры и структура углеводов. Минск:

27. Наука и техника, 1972. 456 с.

28. Жеребцов H.A., Абрамова И.Н., Шеламова A.C. Выделение экстрацеллюлярной бактериальной инулиназы и изучение ее физико-химических свойств // Биотехнология. — 2002. № 3. - С. 13-20.

29. Жеребцов H.A., Абрамова И.Н., Шеламова A.C., Попова Т.Н. Идентификация каталитически активных групп инулиназы Bacillus polymyxa 722 II Прикл. биохим. и микробиол. 2003. - Т. 39, № 6. - С. 619-624.

30. Захарова И.М., Косенко JI.B. Методы изучения микробных полисахаридов. Киев: Наукова думка, 1982. — 67 с.

31. Игнатенко JI.A. Иммуномодулирующие и радиозащитные свойства транслама: Дисс. канд. мед. наук. Владивосток, 1994. - 160 с.

32. Ильина Т.С., Романова Ю.М., Гинцбург A.JI. Биопленки как способ существования бактерий в окружающей среде и организме хозяина: феномен, генетический контроль и системы регуляции их развития // Генетика. 2004. - Т. 40, № 11.-С. 1445 - 1456.

33. Карпунина JI.B. Роль агглютинирующих белков азотфиксирующих бацилл и ризобий в жизнедеятельности бактерий при взаимодействии с растениями: Дис. . д-ра биол. наук. Саратов, 2002. - 315 с.

34. Карпунина Л. В., Мельникова У. Ю., Коннова С. А., Стадник Г. И. Изучение биологической роли лектинов Bacillus polymyxa при взаимодействии с углеводными компонентами корней пшеницы // Изв. РАН. Сер. биол. 2003. - № 3. -С. 311-314.

35. Кашкина М.А. Влияние дрожжевых полисахаридов на иммунологическую реактивность организма: Автореф. дисс. . канд. биол. наук Л., 1974.-19 с.

36. Клаус Д. Лимфоциты. Методы. М.: Мир, 1990. - 279 с.

37. Козак Н. И. Микробный полисахарид ксантан // Полимеры Деньги. -2006. -№ 15.-С. 30-32.

38. Козыровская H.A., Негруцкая В.В., Ковальчук М.В., Вознюк Т.Н. Paenibacillus sp. перспективная бактерия для создания технологии производства бакпрепаратов для растений // Биополимеры и клетка. 2005. - Т. 21, № 4. - С. 312-318.

39. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. Учебник для мед. ВУЗов. С-Пб.: СпецЛит., 2002. - 580 с.

40. Красов А.И., Попова И.А.,. Филипьечева Ю.А, Бурыгин ГЛ., Матора Л.Ю. Применение иммуноферметного анализа для выявления азотфиксирующих бактерий рода Azospirillum в почвенных суспензиях // Микробиология. 2009. - Т. 78 -№ 5. — С. 662-666.

41. Кулинский В.И. Биохимические аспекты воспаления // Биохимия. 2007. - Т. 72, вып. 6. - С. 733-746.

42. Кэбот Е., Мейер М. Экспериментальная иммунохимия. М.: Медицина, 1968.-684 с.

43. Лукин С.А., Кожевин П.А., Звягинцев Д.Г. Азоспириллы и ассоциативная азотфиксация у небобовых культур в практике сельского хозяйства // Сельскохоз. биология. 1987. - № 1. - С. 51-58.

44. Лыков В.В., Ховрычев М.П., Полин А.Н. Биосинтез полимиксина Bacillus polymyxa при лимитации роста источниками питания // Микробиология. -1988. Т. 57, № 3. - С. 410-414.

45. Лященко В.А. Макрофаги в инфекционном процессе // Инфекционная иммунология. 1995, № 4. - С.48-52.

46. Майорова Т.Н., Кожевин П.А., Звягинцев Д.Г. Подходы к оптимизации интродукции азоспирилл // Микробиология. -1996. Т. 65, № 2. - С. 277-281.

47. Мальцева H.H., Надкерничная Е.В., Волкогон В.В., Ушакова М.А. Активность азотфиксации и азотфиксирующие микроорганизмы ризосферы озимой ржи // Микробиол. журнал. 1992. - Т. 54, № 6. - С.10-16.

48. Мамаева Г.Г. Выделение и идентификация бактерий Paenibacillus, разлагающих пиретроидные инсектициды, их биологическая активность и возможность использования для биоразложения остатков ядохимикатов // Экологическая безопасность в АПК.-2002.-С. 19.

49. Матора A.B. Получение и исследование промышленно-важных штаммов-продуцентов экзополисахаридов: Дис. канд. биол. наук. Саратов, 1993 - 170 с.

50. Мелентьев А.И., Еркеев А.М. Изучение антагонизма между почвенными бациллами и микромицетами рода Fusarium Lk:FR. // Микробиол. журн. 1990. - Т. 52, № 1.-С. 53-56.

51. Мельникова У.Ю. Лектины Bacillus polymyxa: физико-химические и биологические свойства: Автореф. дис. канд. биол. наук. Саратов, 2000. - 19 с.

52. Мишке И.В. Микробные фитогормоны в растениеводстве. Рига:1. Зинатне, 1988.-151 с.

53. Определитель бактерий Берджи / Под ред. Хоулта Дж., Крига Н., Сниита П., Стейли Дж. и Уильямса С. -М.: Мир, 1997. Т. 2. - С.567-568.

54. Пирог Т.П., Гринберг Т.А., Пинчук Г.Э., Сенченкова С.А., Малашенко Ю.Р. Разделение экзополисахаридов, синтезируемых Acinetobacter sp., на ацилированный и неацелированный компоненты // Микробиология. 1994. - Т. 63, № 5.-С. 840-846.

55. Пирог Т.П., Слабоспицкая А.Т., Воцелко С.К., Мохаммед эль Сайд, Афонская C.B., Гринберг Т.А. Образование и физико-химические характеристики экзополисахаридов некоторых бактерий рода Bacillus II Микробиол. журн. 1985. - Т. 47. № 6. - С. 27-32.

56. Практикум по иммунологии / Под ред. Кондратьевой И.А., Самуилова В.Д. М.: МГУ, 2001.-224 с.

57. Проворов H.A., Воробьев Н.И., Андронов Е.Е. Макро- и микроэволюция бактерий в системах симбиоза // Генетика. 2008. - Т. 44, № 1. — С. 12-28.

58. Розе JI.B., Закенфельд Г.К., Лайвениекс М.Г., Беккер М.Е. Биологические эффекты левана // Изв. АН Латв ССР. 1990. - Т. 2. - С. 56-64.

59. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология / Пер. с англ. М.: Мир, 2000. - 592 с.

60. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика. Минск: Вышэйшая школа, 1973.-320 с.

61. Рудик Д.В., Тихомирова Е.И. Методы изучения фагоцитоза и функционально-метаболического состояния фагоцитирующих клеток Саратов: Изд-во Сарат. ун-та, 2006. - 112 с.

62. Рулева Н.Ю., Звягинцева М.А., Дугин С.Ф. Миелопероксидаза: биологические функции и клиническое значение // Современные наукоемкие технологии. 2007 - № 8. - 11-14.

63. Рябичева Т.Г., Вараксин H.A., Тимофеева Н.В., Рукавишников М.Ю. Определение цитокинов методом иммуноферментного анализа // Новости «Вектор-Бест». 2004. - №4(34): Электронный документ. (http://www.vector-best.ru/nvb/st344.htm). Проверено 11.05. 2010.

64. Саидов М.З., Пинегин Б.В. Спектрофотометрический способ определения активности миелопероксидазы в фагоцитирующих клетках //

65. Лабораторное дело. 1991. - № 3. - С. 56-60.

66. Сафронова И.Ю., Ботвиненко И.В. Межклеточный матрикс Bacillus subtilis 271: полимерный состав и функции // Микробиология. 1998. - Т. 67, № 1. — С. 55- 60.

67. Симбирцев A.C. Цитокины: классификация и биологические функции // Цитокины и воспаление. 2004. - Т. 3, № 2. - С. 16-22.

68. Скворцова Н.Г., Умаров М.М., Костина Н.В. Влияние инокуляции смешанными культурами Bacillus polymyxa Pseudomonas на трансформацию азота в ризосфере небобовых растений // Микробиология. - 1998. - Т. 67, № 2. - С. 244-248.

69. Скоупс Р. Методы очистки белков. М.: Мир, 1985. - 342 с.

70. Скочинская H.H., Айзенберг В.А., Антипчук А.Т., Танцюренко Е. В. К вопросу о наличии пектинолитической активности у клубеньковых бактерий // Микробиол. журн. 1990. - Т. 52, № 1. - С. 22 - 23.

71. Слонекер Дж. Газожидкостная хроматография ацетатов альдитов // Методы исследования углеводов / Под ред. Хорлин А.Я. М.: Мир, 1975. - С. 22-25.

72. Смирнов В.В., Резник С.Р., Василевская И.А. Спорообразующие аэробные бактерии продуценты биологически активных веществ. - Киев: Наукова думка, 1982.-216 с.

73. Тихонович И.А., Проворов H.A. Симбиогенетика микробно-растительных взаимодействий // Экологич. генетика. 2003. - Т. 1. - С. 36-46.

74. Ткаченко A.A., Севрюгина Т.В. Биосинтез левана Bacillus polymyxa II Микробиология. 1989. - Т. 58, вып. 3. - С. 457-461.

75. Тотолян A.A., Фрейдлин И.С. Клетки иммунной системы. Т. 1-2. СПб.: Наука, 2000.-231 с.

76. Умаров М.М. Ассоциативная азотфиксация. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1986.-134 с.

77. Усов А.И. Проблемы и достижения в структурном анализе сульфатированных полисахаридов красных водорослей. // Химия растительного сырья. 2001. -№ 2. - С. 7 - 20.

78. Федоненко Ю.П., Егоренкова И.В., Коннова С.А., Игнатов В.В. Участие липополисахаридов азоспирилл во взаимодействии с поверхностью корней пшеницы

79. Микробиология. 2001. - Т. 70, № 3. - С. 384-390.

80. Федоров М.В. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. -М.: Гос. изд-во сельскохоз. лит-ры, 1957. 231 с.

81. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. М.: Медицина, 2000. - 432 с.

82. Шерстобоева Е.В. Современные микробные препараты для сельского хозяйства // Оптимизация структури агроландшафт!в i ращональне використування грунтових pecypciB: Наук.- вироб. конф., Кшв, 4-7 липня 2000. Кшв: Д1А, 2000. - С. 92-93.

83. Щерба. В.В., Бабицкая В.Г. Полисахариды ксилотрофных базидиомицетов // Прикл. биохим. и микробиол. 2008. - Т. 44, № 1. - С. 90-95.

84. Щербухин В.Д. Применение инфракрасной спектроскопии к изучению углеводов // Успехи биологической химии. 1968. - Т. 9. - С. 198-219.

85. Щетинин Е.В. Полимиксины новый взгляд на известные антибиотики // КМАХ. - 2000. - Т. 2, № 3. - С. 1-8.

86. Широков А.А. Иммунохимическая идентификация поверхностных структур Azospirillum brasilense, участвующих в реализации социального поведения бактерий: Автореф. дис. канд. биол. наук. Саратов: ИБФРМ РАН, 2008. 23 с.

87. Экологическая роль микробных метаболитов / Под ред. Д.Г. Звягинцева. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1986. - 240 с.

88. Элисашвили В.И. Биосинтез левана уксуснокислыми бактериями, выделенными из природных источников // Прикл. биохимия и микробиол. 1982. - Т. 18, №2.-С. 180-185.

89. Элисашвили В.И. О синтезе левана культурой Paenibacillus sp. // Прикладная биохимия и микробиология. 1984. -№ 20. - С. 101-106.

90. Ярилин А.А. Основы иммунологии. М.: Медицина, 2000. - 608 с.

91. Alexander K.G., Miller М.Н. The effect of soil aggregate site on early growth and shoot-root ratio of maize {Zea mays L.) // Plant Soil. 1991. - V. 138. - P. 189-194.

92. Arena A., Maugeri T.L., Pavone В., Iannello D., Gugliandolo C., Bisignano G.

93. Antiviral and immunoregulatory effect of a novel exopolysaccharide from a marine thermotolerant Bacillus licheniformis II Int Immunopharmacol 2006. - V. 6. - P. 8-13.

94. Arunakumari A., Lamm R.B., Neyra-Estens C.A. Changes in the cell surface properties of azospirilla in relation to cell pleomorphism and aggregation // Symbiosis. -1992.-V. 13.-P. 291-305.

95. Ash, C., Priest, F.G. and Collins, M.C. Molecular identification of rRNA group 3 bacilli using a PCR probe test // Antonie van Leeuwenhoek 1993. - V. 64. - P. 253-260.

96. Baldani V.L.D., Baldani J.I., Dobereiner J. Effects of Azospirillum inoculation on root infection and nitrogen incorporation in wheat // Can. J. Microbiol. 1983. - V. 29, №8.-P. 924-929.

97. Ball D.H., Adams G.A. II Can. J. Chem. 1959. - V. 37. - P. 1012-1017.

98. Bashan Y., Levanony H., Klein E. Evidence for a weak external adsorption of Azospirillum brasilense Cd to wheat roots // J. Gen. Microbiol. 1986. - V. 132. - P. 30693073.

99. Bashan Y., Holguin G. Azospirillum-plant relationships: environmental and phisiological advances (1990-1996) II Can. J. Microbiol. 1997. -V. 43. - P. 103-121.

100. Bastarrachea F., Zamudio M., Rivas R. Non-encapsulated mutants of Azospirillum brasilense and Azospirillum lipoferum II Can. J. Microbiol. 1988. - V. 34. -P. 24-29.

101. Beatty P.H., Jensen S.E. Paenibacillus polymyxa produces fusaricidin-type antifungal antibiotics active against Leptosphaeria maculans, the causative agent of blackleg disease of canola II Can. J. Microbiol. 2002. - № 48. - P. 159-169.

102. Bent E., Tuzun S., Chanway C.P. and Enebak S. Alterations in plant growth and hormone levels of lodgepole pines inoculated with rhizobacteria // Can. J. Microbiol. 2001. - V. 47, №9.-P. 793-800.

103. Bent E., Breuil C., Enebak S., Chanway C.P. Surface colonization of lodgepole pine (Pinus contorta var. latifolia roots by Pseudomonas fluorescens and Paenibacillus polymyxa under gnotobiotic conditions // Plant and Soil. 2002 - V. 241. - P. 187-196.

104. Bezzate S., Steinmetz M., Aymerich S. Cloning, sequencing, and disruption of a levanase gene of Bacillus polymyxa CF43 // J. Bacteriol. 1994. - V. 176. - P. 21772183.

105. Bezzate S., Aymerich S., Chambert R., Czames S., Berge O., Heulin T. Disruption of the Paenibacillus polymyxa levansucrose gene impairs its ability to aggregate soil in the wheat rhizosphere // Environ. Microbiol. 2000. - V. 2. - P. 333-342.

106. Budi S.W., van Tuinen D., Arnould C., Dumas-Gaudot E., Gianinazzi-Pearson

107. V., Gianinazzi S. Hydrolytic enzyme activity of Paenibacillus sp. strain B2 and effects of the antagonistic bacterium on cell integrity of two soil-borne pathogenic fungi // Appl. Soil Ecol. -2000. V. 15.-P. 191-199.

108. Cakmakci R., Erat M., Erdogan U., Donmez M.F. The influence of plant growth-promoting rhizobacteria on growth and enzyme activities in wheat and spinach plants // J. Plant Nut. Soil Sci. 2007. - V. 170. - P. 288-295.

109. Chang Z.Q., Lee J.S, Hwang M.H., Hong J.H., Jung H.K., Lee S.P., Park S.C. A novel P-glucan produced by Paenibacillus polymyxa JB115 inducesnitric oxide production in RAW264.7 macrophages // J. Vet. Sci. 2009. - V. 10, № 2. - P. 165-167.

110. Chang Z.Q., Lee J.S., Gebru E., Hong J.H., Jung H.K., Jo W.S., Park S.C. Mechanism of macrophage activation induced by beta-glucan produced from Paenibacillus polymyxa JB115 // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2010. - V. 391, № 3. - P. 13581362.

111. Chanway C.P. Differential response of western hemlock from low and high elevation to inoculation with plant crowth-promoting Bacillus polymyxa II Soil Biol. Biochem. 1995. - V. 27, № 6. - P. 767-775.

112. Chanway C.P., Holl F.B., Turkington R. Genotypic coadaptation in plant growth promotion of forage species by Bacillus polymyxa II Plant and Soil. 1988. - V. 106.-P. 281-284.

113. Chanway, C.P., Holl, F.B. Biomass increase and associative nitrogen fixation of mycorryzal Pinus conforta Dougl. seedlings inoculated with a plant growth promoting Bacillus strain// Can. J. Bot. 1991. -№ 69. -P. 507-511.

114. Cheong H., Park S.-Y., Ryu C.-M., Kim J.F., Park S.-H., Chang S. P. Diversity of root-associated Paenibacillus spp. in winter crops from the southern part of Korea // Journal of microbiology and biotechnology. 2005. - V. 15, № 6. - P. 1286-1298.

115. Chida K., Chen G.J., Kodama T. // Agr. Biol. Chem. 1983. - V. 47. - P. 275-280.

116. Chockalingam E., Subramanian S., Natarajan K.A. Studies on biodégradation of organic flotation collectors using Bacillus polymyxa // Hydrometallurgy. 2003. - V. 71. -P. 249-256.

117. Chu K.H., Kim E.Y. Predictive modelling of competitive biosorption equilibrium data // Biotehchnol. Bioprocess Eng. 2006. - V. 11. - P. 67-71.

118. Chung, Y.R., Kim, C.H., Hwang, I., Chun, J. Paenibacillus koreensis sp. nov., a new species that produces an iturin-like antifungal compound // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2000. - V. 50. - P. 1495-1500.

119. Cleary J.A., Kelly G.E., Husband A.J. The effect of molecular weight and (31,6- linkages on priming of macrophage function in mice by (I,3)-P-D-glucan // Immunol.

120. Cell Biology. 1999. - V. 77. - P. 395-403.

121. Costacurta A., Vanderleyden J. Synthesis of phytogormones by plant-associated bacteria // Critical Rew. Microbiol. 1995. - № 21. - P. 1-18.

122. Costerton J.W., Lewandowski Z., Caldwell D.E. et al. Microbial biofilms // Annu. Rev. Microbiol. 1995. - V. 49. - P. 711-745.

123. Curran H.R., Evans F.R. The influence of iron or manganese upon the formation of spores by mesophilic aerobes in fluid organic media // J. Bacteriol. 1954. -V. 67, № 4. - P. 489-497.

124. Davey M., O'toole G. Microbial biofilm: from ecology to molecular genetics // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 2000. -V. 64 (4). - P. 847-867.

125. Day J.M., Dobereiner J. Physiological aspects of N2-fixation by Spirillum from digitaria roots // Biol. Chem. 1976. - V. 8. - P. 46-60.

126. De Troch P., Vanderleyden J. Surface properties and motility of Rhizobium and Azospirillum in relation to plant root attachment // Microb. Ecol. 1996. - V. 32. - P. 149-169.

127. Deo N., Natarajan K.A., Somasundaran P. Mechanisms of adhesion of Paenibacillus polymyxa onto hematite, corundum and quartz // Intern. J. Miner. Process. -2001.-V. 62.-P. 27-39.

128. Dobereiner J. Physiological aspect of N2 fixationin grass-bacteria assotiation //

129. Resent Developments in Nitrogen Fixation London: Acad. Press. 1977. - P. 518-538.

130. Dobereiner J., Day J.M. Associative symbioses in tropical grasses: characterization of microorganisms and dinitrogen-fixing sites // Proc. I st Intern. Symp. on N2 Fixation. Washington, 1976. - P. 518-537.

131. Donlan R.M., Costerton J.W. Biofilms: Survival Mechanisms of Clinically Relevant Microorganisms // Clinical Microbiology Reviews. 2002. - V. 15, №. 2. - P. 167-193.

132. Dubois M., Gilles K.A., Hamilton J.K., Rebers P.A., Smith F. Colorimetric method for determination of sugars and related substances // Anal. Chem. 1956. - V. 28, №3.-P. 350-356.

133. Fahraeus G. The infection of clover root hairs by nodule bacteria studied by simple glass slide technique // J. Gen. Microbiol. 1957. - V. 16. - P. 374-381.

134. Falch B.H., Espevik T., Ryan L., Stokke B.T. The cytokine stimulating activity of (l->3)-beta-D-glucans is dependent on the triple helix conformation // Carbohydr. Res. 2000. - V. 329, № 3. - P. 587-596.

135. Ferrieres L., Clarke D.J. The RcsC sensor kinase is reqired for normal biofilm formation in E.coli K12 and controls the expression of a regulon in respons to growth on a solid surface.// Molecular microbiology. 2003. - V. 50, № 5. - P. 1665-1682.

136. Fraser V., Braley-Mullen H. // Cell. Immunol. V.63, № 1.- P. 177-187.

137. Fukui H., Tanaka M., Misaki A. Structure of a physiologically active polysaccharide produced by Bacillus polymyxa S-4 // Agric. Biol. Chem. 1985. - V. 49. -P. 2343-2349.

138. Gamalero E., Lingua G., Berta G., Lemanceau P. Methods for studying root colonization by introduced beneficial bacteria // Agronomie. 2003. - V. 23. - P. 407-418.

139. Gaskins M.H., Hubbell D.H. Response of non-leguminous plants to root inoculation with free-living diazotrophic bacteria // The soil-root interface. N. Y., 1979. -P. 175-182.

140. Girardin H., Albagnas C., Dargaignaratz C., Nguyen-The C., Carlin F. Antimicrobial activity of foodborne Paenibacillus and Bacillus sp against Clostridium botulinum HI. Food Prot. -2002. V. 65 (5). - P. 806-813.

141. Grau F.H., Wilson P.W. Physiology of nitrogen fixation by Bacillus polymyxa II J. Appl. Chem. and Biotechnol. -1962. -V. 83. P. 490-496.

142. Green L.C., Wagner D.A., Glogowski J., et al. Analysis of nitrate, nitrite, and (15N) nitrate in biological fluids II Analyt Biochem. 1982. -№ 126. -P. 131-138.

143. Guemouri-Athmani S., Berge O., Bourrain M., Mavingui P., Thiery J.M., Bhatnagar T. and Heulin T. Diversity of Paenibacillus polymyxa in the rhizosphere of wheat (Triticum durum) in Algerian soils II Eur. J. Soil Biol. 2000. - V. 36. - P. 149-159.

144. Gummadi S.N. and Kumar K. Production of extracellular water insoluble p-1.3-glucan (curdlan) from Bacillus sp. SNC07 // Biotechnol. Bioprocess Eng. 2005. - V. 10.-P. 546-551.

145. Gupta A, Gopal M, Tilak KV. Mechanism of plant growth promotion by rhizobacteria // Division of Microbiology. New Delhi, 2000. - V. 38, № 9. - P. 856-862.

146. Haggag W.M. Colonization of exopolysaccharide-producing Paenibacillus polymyxa on peanut roots for enhancing resistance against crown rot disease //Afr. J. Biotechnol. 2007. - V. 6, № 13. - P. 1568-1577.

147. Haggag W.M. Colonization of peanut roots by biofilm forming Paenibacillus polymyxa initiates biocontrol against crown rot disease // J. Appl. Microbiol. 2008. - V. 104, №4.-P. 961-969.

148. Haggag W.M., Timmusk S. Colonization of peanut roots by biofilm forming Paenibacillus polymyxa initiates biocontrol against crown rot disease // J. Appl. Microbiol. 2008. - 104(4). - P. 961-969.

149. Hakomori S.-I. A rapid permetylaion of glicolipids and polysaccharides catalyzed by methylsulfinyl carbanion in dimethylsulfoxide // J. Biochem. — 1964. — V. 55. P. 205-208.

150. Halverson L.J., Stacey G. Signal exchange in plant-microbe interactions // Microbiol. Rev. 1986. - V. 50, № 2. - P. 193-225.

151. Han Y.W. Levan production by Bacillus polymyxa II J. Indian. Microbiol. -1989.-V. 4.-P. 447-452.

152. Han Y.W., Lee R.E. Microbial rout to levan // Bioprocess Technol. 1990. -V. 12, №3.-P. 1.

153. Hebbar K.P., Gueniot B., Heyraud A., Colin-Morel P., Heulin T., Balandreau J., Rinaudo M. Characterization of exopolysaccharides produced by rhizobacteria // Applied and Microbiology Biotechnology. 1992. - V. 38. - P. 248-253.

154. Hitchcock P.J., Brown T.M. Morphological heterogeneity among Salmonella lipopolysaccharide chemotypes in silver-stain polyacrylamide gels // J. Bacteriol. 1983. -V. 154.-P. 269-277.

155. Hubbel D.H., Morales V.M., Umali-Garcia M. Proteolytic enzymes in Rhizobium II Appl. Environ. Microbiol. 1978. -V. 31, № 1. - P. 210-213.

156. Iman G.M., Abd-Allah N.M. Fructosan, a new soil conditishing polysaccharide isolated from the methabolites of Bacillus polymyxa AS-1 and its clinical application // Egypt. J. Botan. 1974. - V. 17, № 1. - P. 19-26.

157. Ito M., Kojama J. Iolipeptin, a new peptide antibiotic // J. Antibiotics. 1972. -V. 25.-P. 304-312.

158. Jain D.K., Patriquin D.G. Root hair deformation, bacterial attachment and plant growth in wheal-Azospirillum associations // Appl. Environ. Microbiol. 1984. - V. 48.-P. 1208-1213.

159. Johnson B.A., Pitt B.R., Davies P. Pulmonary arterial smooth muscle cells modulate cytokine- and LPS-induced cytotoxicity in endothelial cells // Am. J. Physiol. Lung. Cell Mol. Physiol. 2000. - V. 278. - P. 460-468.

160. Jung H.-K., Hong J.-H., Park S.-C., Park B.-K., Nam D.-H. and Kim S.-D. Production and physicochemical characterization of p-glucan by Paenibacillus polymyxa JB115 // Biotechnol. and Bioprocess Engineer. 2007. - V. 12. - P. 713-719.

161. Kahn M.L., Schroeder B.K., House B.L. Foraging for meaning-postgenome approaches to Sinorhizobium meliloti II Biology of Plant-Microbe Interactions. 2004. - V. 4.-P. 416-422.

162. Kajimura Y., Kaneda M. Fusaricidin A, a new depsipeptide antibiotic produced by Bacillus polymyxa KT-8. Taxonomy, fermentation, isolation, structure elucidation, and biological activity // J. Antibiot. 1996. - V. 49. - P. 129-135.

163. Karpunina L.V., Melnikova U.Yu., Konnova S.A. Biological role of lectins from the nitrogen-fixing Paenibacillus polymyxa strains 1460 during bacterial-plant-root interaction // Curr. Microbiol. 2003. - V. 47. - P. 376-378.

164. Kim Y.M., Bombeck C.A., Billiar T.R. Nitric oxide as a bifunctional regulator of apoptosis // Circ Res. 1999. V. 84. - P. 253-256.

165. Kloepper J. W., Lifshitz R., Zablowicz R. Free-living bacterial inocula for enhancing crop productivity // Frends Biotechnol. -1989. V. 7. - P. 39-44.

166. Kumar A.S., Mody K. and Jha B. Bacterial exopolysaccharides-a perception // J. Basic Microbiol. 2007. - V. 47. - P. 103-117.

167. Lai S., Tabacchioni S. Ecology and biotechnological potential of Paenibacillus polymyxa: a minireview // Indian J. Microbiol. 2009. - V. 49. - P. 2-10.

168. Lebuhn M., Heulin Т., Hartmann A Production of auxin and other indolic and phenolic compounds by Paenibacillus polymyxa strains isolated from different proximity to plant roots // FEMS Microbioly Ecol.-1997. V. 22, № 4. - P. 325-334.

169. Lee I.Y., Seo W.T., Kim G.J., Kim M.K., Ahn S.G., Kwon G.S., Park Y.H. Optimization of fermentation conditions for production of exopolysaccharide by Bacilluspolymyxa //Bioprocess Engineer. 1997. - № 16. - P.71-75.

170. Lee K.Y., Lee M.H., Chang I.Y., Yoon S.P., Lim D.Y., Jeon Y.J. Macrophage activation by polysaccharide fraction isolated from Salicornia herbacea. II J. Ethnopharmacol. 2006. - V. 103. - P. 372-378.

171. Leung M.Y.K., Liu C., Koon J.C.M, Fung K.P. Polysaccharide biological response modifiers // Immunology Letters. 2006. - V. 105, № 2. - P. 101-114.

172. Lindberg T., Granhall U., Tomenius K. Infectivity and acetylene reduction of diazotrophic rhizosphere bacteria in wheat (Triticum aestivum) seedlings under gnotobiotic conditions // Biol. Fertil. Soils. 1985. - V. 1. - P. 123-129.

173. Ljunggren H., Fahraeus C. The role of polygalacturonase in root-hair invasion by nodule bacteria // J. Gen. Microbiol. 1961. - V. 26, № 2. - P. 521-528.

174. Lowenstein C.J., Dinerman J.L., Snyder S.H. Nitric oxide: a physiologic messenger. // Ann. Intern. Med. 1994. - V. 120. - P. 227-237.

175. Maes M., Baeyen S. Exreriences and perspectives for the use of a Paenibacillus strain as a plant protectant // Commun. Agric. Appl. Biol. Sci. 2003. - V. 68.-P. 457-462.

176. Mannanov R.N., Sattarov R.K. Antibiotics produced by Bacillus bacteria // Chemistry of Natural Compounds. 2001. - V. 37, № 2. - P. 117-123.

177. Matora L., Serebrennikova O., Shchyogolev S. Structural effects of the Azospirillum Iipopolysaccharides in cell suspensions // Biomacromolecules. 2001. - V. 2. -P. 402-406.

178. Mavingui P., Laguerre G., Berge O., Heulin T. Genetic and phenotypic diversity of Bacillus polymyxa in soil and in the wheat rhizosphere // Appl. Environ. Microbiol. 1992.-V. 58.-P. 1894-1903.

179. Mavingui P., Heulin T. In vitro chitinase and antifungal activity of a soil, rhizosphere and rhizoplane population of Bacillus polymyxa II Soil Biol. Biochem. 1994. -V. 26.-P. 801-803.

180. McAuliffe O., Ross R. P., Hill C. Lantibiotics: structure, biosynthesis and mode of action // FEMS Microbiol. Rev. 2001. - V. 25. - P. 285-308.

181. McNeely I., Kang C.J. Stabilisation of saccharide structure // Microbiol. Ecol. 1996. -№ 2. - P. 29-34.

182. McSpadden Gardener B.B. Ecology of Bacillus and Paenibacillus spp. in agricultural system // Phytopathology. 2004. - V. 94. - P. 1252-1258.

183. Michiels K., Verreth C., Vanderleyden J. Azospirillum brasilense and Azospirillum lipoferum surface polysaccharide mutants that are affected in flocculation // J. Appl. Bacteriol. 1990. -V. 69. - P. 705-711.

184. Michiels K.W., Croes C.L., Vanderleyden J. Two different modes of attachment of Azospirillum brasilense Sp7 to wheat roots // J. Gen. Microbiol. 1991. - V. 137, №9.-P. 2241-2246.

185. Mitsuda C., Miyata N., Hirota T., Kikuchi T. High-viscosity polysaccharide by Bacilluspolymyxa II Hakko Kogaku Zasshi. 1981. - V. 59. - P. 303-309.

186. Mok M.C. Cytokinins and plant development an overview. // Cytokinins: Chemistry, Activity and Function. - New York, 1994. - P. 115-166.

187. Moncada S., Palmer R.M.J., Higgs E.A. Nitric oxide: physiology, pathophysiology, and pharmacology // Pharmacol. Rev. 1991. - V. 43. - P. 109-142.

188. Moon S.H., Park J.M., Chun H.Y., Kim S.J. Comparisons of physical properties of bacterial cellulose produced in different culture conditions using saccharified food wastes // Biotechnol. Bioprocess Eng. 2006. - № 11. - P. 26-31.

189. Muratova A., Hiibner Th., Tischer S. et al. Plant-rhizosphere-microflora association during phytoremediation of PAH-contaminated soil // Int. J. Phytorem. 2003. V.5.-P. 137-151.

190. Nakajiama N., Chihara S., Koyama V. A new antibiotic, gatavalin // J. Antibiotics 1972. - V. 25. - P. 243-252.

191. Nakashimada Y., Kanai K. and Nishio N. Optimization of dilution rate, pH and oxygen supply on optical purity of 2, 3-butanediol produced by Paenibacillus polymyxa in chemostat culture // Biotechnol. Lett. 1998. - V. 20. - P. 1133-1138.

192. Narula N., Deubel A., Gans W., Behl RK., Merbach W. Paranodules and colonization of whet roots by phytohormone producing bacteria in soil // Plant soil environ. -2006.-V. 3.-P. 119-129.

193. Nielsen P., Sorensen J. Multi-target and medium-independent fungal antagonism by hydrolytic enzymes in Paenibacillus polymyxa and Bacillus pumilus strains from barley rhyzosphere // FEMS Microbiol. Ecol. 1997. - V. 22. - P. 183-192.

194. Ninomiya E., Kizari T.s Harada K. High viscous polysaccharide produced by spore-forming bacterium. Part I. Identification of product // J. Agr. Chem. Soc. Jap. -1968a.-V. 42.-P. 178-184.

195. Ninomiya E., Kizari T., Harada K. High viscous polysaccharide produced by spore-forming bacterium. Part II. Physical properties and consistent sugar ratio // J. Agr. Chem. Soc. Jap. 1968b. - V. 42. - P. 431-434.

196. Ninomiya E., Kizari T. Bacterial polysaccharide produced from Bacillus polymyxa № 271 // Die Angewandene Makromolek. Chem. 1969. - V. 6. - P. 179-185.

197. Okon Y., Kapulnik Y. Development and function of Azospirillum inoculated roots // Plant Soil. 1986. - V. 90. - P. 3-16.

198. Ouchterlony O., Nilsson L.-A. Immunodiffusion and immunoelectrophoresis // Handbook of experimental immunology. Vol. 1. Immunochemistry / Ed. D.M. Weiz. -Oxford: Alden Press, 1979.-P. 19-33.

199. Patra P., Natarajan K.A. Microbially induced flotation and flocculation of pyrite and sphalerite // Coll. Surf. B: Biointerfaces. 2004. - V. 36. - P. 91-99.

200. Patra P., Natarajan K.A. Surface chemical studies on selective separation of pyrite and galena in the presence of bacterial cells and metabolic products of Paenibacillus polymyxa II J. Coll. Interface Sci. 2006. - V. 298. - P. 720-729.

201. Patriquin D.G., Dobereiner J., Jain D.K. Sites and processes of association between diazotrophs and grasses // Can. J. Microbiol. 1983. - V. 29, № 8. - P. 900-915.

202. Petersen, D.J., Srinivasan, M., Chanway C. Bacillus polymyxa stimulates increased Rhizobium etli populations and nodulation when co-resident in the rhizosphere of Phaseolus vulgaris IIFEMS Microbiology Letters. -1996. V. 142. - P. 271-276.

203. Philip L., Iyengar L., Venkobachar C. Site of interaction of copper on Bacillus polymyxa II Water, Air and Soil Pollut. 2000. - V. 119. - P. 11-21.

204. Prado Acosta M., Valdman E., Leite S.G.F., Battaglini F., Ruzal S.M. Biosorption of copper by Paenibacillus polymyxa cells and their exopolysaccharide // World J. Microbiol. Biotechnol. 2005. - Vol. 21. - P. 1157-1163.

205. Railkin A.I. Protsessy kolonizatsii I zashchita ot bioobrastaniya (Colonization Processes and Protection from Biofouling) // St. Petersburg: Izd-vo S-Petersburg, un-ta, 1998.

206. Renato de Freitas J. Yield and assimilation of winter wheat (Triticum aestivum L., var. Norstar) inoculated with rhizobacteria // Pedobiologia. 2000. - V. 44. - P. 97-104.

207. Renni R.J., Thomas J.B. 15N-determination effect of inoculation with N2-fixing bacteria on nitrogen assimilation in Western Canadian wheat // Plant and Soil. -1987.-V. 100.-P. 213-223.

208. Rosado A.S., Seldin L. Production of a potentially novel anti-microbial substance by Bacillus polymyxa II World J. Microbiol. Biotechnol. 1993. - V. 9. - P. 521528.

209. Ross G.D., Vetvicka V., Yan .J, Xia Y., Vetvickova J. Therapeutic intervention with complement and beta-glucan in cancer // Immunopharmacology. 1999. -V. 42.-P. 61-74.

210. Ruiz-Bravo A., Jimenez-Valera M., Moreno E., Guerra V., Ramos-Cormenzana A. Biological Response Modifier Activity of an Exopolysaccharide from

211. Paenibacillus jamilae CP-7 // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2001. - V. 8, №. 4. - P. 706710.

212. Ryu C.-M., Kima J., Choi O., Kima S.H., Park C.S. Improvement of biological control capacity of Paenibacillus polymyxa E681 by seed pelleting on sesame // Biol Control. 2006. - V. 39. - P. 282-289.

213. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Second Edition. — Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989.

214. Sandula J., Kogan G., Kacurakova M., Machova E. Microbial (1—>3)-ß-D-glucans, their preparation, physicochemical characterization and immonomodulatory activity // Carbohydr. Polym. 1999. -V. 38. - P. 247-253.

215. Santhiya D., Subramanian S., Natarajan K.A. Surface chemical studies on sphalerite and galena, using extracellular polysaccharides isolated from Bacillus polymyxa II J. Coll. Int. Sei. 2002. - V. 256. - P. 237-248.

216. Sharma P.K., Rao Hanumantha K. Adgesion of Paenibacillus polymyxa on chalcopyrite and pyrite: surface thermodynamics and extended DLYO theory // Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 2003. - V. 29. - P. 21-38.

217. Shishido M., Breuil C., Chanway C.P. Endophytic colonization of spruce by plant growth-promoting rhizobacteria//FEMS Microbiol. Ecol.- 1999. V. 29. -P. 191-196.

218. Siddiqui Z.A., Baghel G. and Akhtar M.S. Biocontrol of Meloidogyne javanica by Rhizobium and plant growth promoting rhizobacteria on lentil // World J. Microbiol. Biotechnol. 2007. - V. 23. - P. 435-441.

219. Singh H.P., Sing T.A. The interaction of a rockphosphate, Bradyrhizobium, vesicular-arbuscular mycorrhizae and phosphatesolubilizing microbes on soybean grown in a sub-Himalayan mollisol // Mycorriza. 1993. - V. 4. - P. 37-43.

220. Skvortsov I.M., Ignatov V.V. Extracellular polysaccharides and polysaccharide-containing biopolymers from Azospirillum species: properties and the possible role in interaction with plant roots // FEMS Microbiol. Lett. 1998. - V. 165. - P. 223-229.

221. Smit G. Adhesin from Rhizobiaceae and their role in plant-bacterium interaction // Ph. D. Thesis Leuden Univ. -The Netherlands, 1994.

222. Stansly P.G., Schlosser M.E. Studies on polymyxin: isolation and identification of Bacillus polymyxa and differentiation of polymyxin from certain known antibiotics // J. Bacteriol. 1947. - V. 54, № 5. - P. 549-560.

223. Sutherland I.M. Bacterial exopolysaccharides // Adv. Microbiol. Physiol. -1972.-V. 8.-P. 143.

224. Sutherland I.W. Exopolysaccharides in biofilm, floes, and related structures // Water Sci. Technol. 2001. - V. 43, № 6. - P. 77-86.

225. Sutherland I.W. Industrielly useful of microbial polysaccharides // Microbiol. Sci.- 1986.-V. 3.-P. 5-9.

226. Sutherland I.W. Structure-function relationships in microbial exopolysaccharides // Biotechnol. Adv. 1994. - V. 12, № 2. - P. 393-448.

227. Syu M.J. Biological production of 2,3-butanediol // Appl. Microbiol. Biotechnol.-2001.-V. 55.-P. 10-18.

228. Tien T.M., Diem H.G., Gaskins M.H., Hubbell D.H. Polygalacturonic acid transeliminase production by Azospirillum species // Can. J. Microbiol. 1981. - V. 27. - P. 426-431.

229. Tien T.M., Gaskins M.N., Hubbell D.H. Plant growth substances produced by Azospirillum brasilense and their effect on the growth of Pearl Millet (Pennisetum americanum L.) // Appl. Environ. Microbiol. 1979. - V. 37. - P. 1016-1024.

230. Timmusk S., Nicander B., Granhall U., Tillberg E. Cytokinin production by Paenibacilluspolymyxa II Soil Biol. Biochem. 1999. - V. 31. - P. 1847-1852.

231. Timmuck S., Grantcharova N., Wagner E.G.H. Paenibacillus polymyxa invades plant roots and forms biofilm // Appl. Environ. Microbiol. 2005. - V. 71, № 11. - P. 7292-7300.

232. Timmusk S., van West P., Gow N.A.R, Huffstutler R.P. Paenibacillus polymyxa antagonizes oomycete plant pathogens Phytophthora palmivora and Pythium aphanidermatum II Journal of Applied Microbiology. 2009. - V. 106, № 5. - P. 14731481.

233. Tsai C.M., Frasch C.E. A sensitive silver stain for delecting lipopolysaccharides inpolyacrylamide gels // Anal. Biochem. -1982. V. 119. - P. 115-119.

234. Tupinamba G., da Silva A.J.R., Alviano C.S., Souto-Padron T., Seldin L., Alviano D.S. Antimicrobial activity of Paenibacillus polymyxa SCE2 against some mycotoxin-producing fungi // Journal of Applied Microbiology. 2008. - V. 105, № 4. - P. 1044-1053.

235. Umali-Garcia M., Hubbel D.H., Gaskins M.H., Dazzo F.B. Association of Azospirillum with grass roots // Appl. Environ. Microbiol. 1980. - V. 39. - P. 219-226.

236. Van Loosdrecht M.C.H. Bacterial Adhesion Wageningen, 1988.

237. Vijayalakshmi S.P., Raichur A.M. Bioflocculation of high-ash Indian coals using Paenibacillus polymyxa II Intern. J. Miner. Process. 2002. - V. 67. - P. 199-210.

238. Vlamakis H., Aguilar C., Losick R., Kolter R. Control of cell fate by the formation of an architecturally complex bacterial community // Genes Dev. 2008. - V. 22, №7.-P. 945-953.

239. Vogel S.N., Marshall S.T., Rosenstreich D.L. Analysis of the effects of lipopolysaccharide on macrophages: differential phagocytic responses of C3H/HeN and C3H/HeJ macrophages in vitro //Infect Immun. 1979. -V. 25. - 328-336.

240. Vogt C., Simon D., Alfreider A., Babel W. Microbial degradation of chlorobenzene under oxygen-limited conditions leads to accumulation of 3-chlorocatechol // Environ. Toxicol. Chem. 2004. - V. 23, № 2. - P. 265-270.

241. Von der Weid I.A., Paiva E., Nobrega A., van Elsas J.D., Seldin L. Diversity of Paenibacillus polymyxa strains isolated from the rhizosphere of maize planted in Cerrado soil // Res. Microbiol. 2000. - V. 151. - P. 369-3 81.

242. Whatley M., Bodwin J., Lippincott B., Lippincott J. Role for Agrobacterium cell envelop lipopolysaccharide in infection site attachment // Infection and Immunity. -1976.-V. 13.-P. 1080-1083.

243. Williams D.L., Browder J.W., McName R. et al. // Adv. Exp. Med. Biol. -1982.-V. 155.-P. 701-706.

244. Wood P J. Specificity in the interaction of direct dyes with polysaccharides // Carbohydr. Res. 1980. -V. 85. - P. 271-287.

245. Yahalom E., Dovrat A., Okon Y., Czosnek H. Effect of inoculation with Azospirillum brasilense strain Cd and Rhizobium on the root morphology of burr medic CMedicago polymorpha L.) // Isr. J. Bot. 1991. - V. 40. - P. 155-164.

246. Yopk G.M., Gonzalez J.E., Walker G.C. Exopolyccharides and their role in nodule invasion // Biology of Plant-Microbe Interaction. St. Paul, USA, 1996. - P. 325330.

247. Zamudio M., Bastarrachea F. Adhesiveness and root hair deformation capacity of Azospirillum strains for wheat seedlings // Soil Biol. Biochem. 1994. - V. 26, № 6. - P. 791-797.

248. Zanchetta P., Lagarde N. and Guezennec J. A new bone-healing material: A hyaluronic acid-like bacterial exopolysaccharide // Calcif. Tissue Int. 2003. - V. 72. - P. 74-79.

249. Zengguo H., Duygu K., Liwen Z., Chunhua Y., Kari B.G.-C., Ahmed E.Y. Isolation and identification of a Paenibacillus polymyxa strain that coproduces a novel lantibiotic and polymyxin // Appl. and Environ. Microbiol. 2007. - V. 73, № 1. - P. 168178.