Соматический мозаицизм у человека и мыши по данным мультилокусного маркирования ДНК тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.07, кандидат биологических наук Бутовская, Полина Руслановна

• Бутовская, Полина Руслановна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Бутовская, Полина Руслановна

Условные обозначения

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Соматический мозаицизм, причины его возникновения.

1.1.1. Хромосомная нестабильность

1.1.2. Изменения числа повторов в мини - и микросателлитах

1.1.3. Вариации по числу копий крупных (80-180 т.п.н.) хромосомных сегментов

1.1.4. Метилирование ДНК - эпигенетическая модификация функционального 23 состояния генома

2.1. Методы выявления соматического мозаицизма

1.2.1. Мультилокусный ДНК - фингерпринтинг

2.2.2. RAPD- PCR (полимеразная цепная реакция со случайными праймерами)

Глава 2. Материалы и методы

2.1. Биологический материал

2.2. Выделение ДНК из тканей и органов

2.3. Выделение ДНК из клеточных линий

2.4. Выделение стромальных клеток из жировой ткани

2.5. Получение клеточных культур

2.5.1. Культивирование СКЖТ

2.5.2. Культивирование клеток фибробластов

2.6. RAPD- PCR

5.7. Электрофоретическое фракционирование ПЦР-продуктов

5.8. ДНК-фингерпринтинг 42 5.8.1. Обработка ДНК рестрикционными эндонуклеазами

5.8.2. Электрофоретическое фракционирование рестрикционных фрагментов ДНК и перенос ДНК из геля на мембранные фильтры

5.8.3. Обработка фильтров перед гибридизацией

5.8.4. Приготовление Р 32- меченных зондов

5.8.5. Блот - гибридизация

5.8.6. Получение радиоавтографов

Глава 3. Результаты и обсуждение

3.1. Выявление соматического мозаицизма у человека

3.1.1. Использование мулитилокусного ДНК - фингерпринтинга

3.1.2. Использование полимеразной цепной реакции со случайными 50 праймерами(КАРБ- PCR)

3.2. Выявление соматического мозаицизма у мыши с помощью полимеразной 54 цепной реакции со случайными праймерами(КАРО- PCR)

3.3. RAPD-анализ клеточных культур на разных стадиях пассирования 61 Заключение 61 Выводы 75 Благодарности 79 Список литературы

Условные обозначенияЯ LINE (Long Interspersed Elements) — длинные диспергированные повторы LTR (Long Terminal Repeats) - длинные концевые повторы PCR (Polymerase Chain Reaction) - полимеразная цепная реакция (ПЦР) RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) - метод анализа полиморфизма ДНК с использованием случайных праймеров для амплификации ДНК SDS (Sodium Dodecyl Sulfate) - додецил сульфат натрия SSC (Sodium Saline Citrate) -натрий- цитратный буферный раствор ТХУ - трихлоруксусная кислота

VNTR (Variable Number of Tandem Repeats) — вариабельные тандемные повторы

ТВЕ-буфер - трис-ЭДТА-боратный буфер (ТБЭ-буфер) ТЕ-буфер - трис-ЭДТА буфер (ТЭ-буфер)

ЭДТА (EDTA) - динатриевая соль этиледиаминтетрауксусной кислоты UV- (Ultraviolet) - ультрафиолет (УФ)

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Соматический мозаицизм у человека и мыши по данным мультилокусного маркирования ДНК»

Актуальность проблемы

Отличительной особенностью эукариотического генома является большое количество различных типов диспергированных и тандемно организованных повторяющихся последовательностей ДНК. Многие из этих повторов являются источниками различных полиморфизмов и используются в качестве генетических маркеров в популяционных и эволюционных исследованиях (Рысков, 1999). Функциональная роль большинства повторов остается неясной, хотя и предполагается, что некоторые из них могут играть важную роль в регуляции генной экспрессии; например, путем участия самой" последовательности в специфической организации хроматина (Трифонов, 2002). Встает вопрос, не играют ли эти последовательности определенную роль в спецификации клеток, в клеточной дифференцировке.

Очевидно, эксперименты в рамках этой концепции направлены на выявление геномных различий между специализированными клетками и их предшественниками. В биологических системах описано такое явление, как соматический мозаицизм, что означает присутствие в одном организме генетически различных популяций соматических клеток. Структурные изменения в ДНК злокачественно трансформированных клеток - наиболее известный пример соматического мозаицизма (Ionov et al., 1993). Его причинами могут служить как генетические, так и эпигенетические события (Vikki et.al., 2001). Причиной соматического мозаицизма могут быть потеря гетерозиготности путем митотической рекомбинации, хромосомная нестабильность, изменения в микросателлитных локусах (Cavenee et al., 1983; Lengauer et al., 1998). В то же время, имеется очень мало данных о соматическом мозаицизме в нормальных тканях. Цель и задачи исследования.

Целью исследования является изучение феномена соматического мозаицизма в нормальных органах и тканях млекопитающих с помощью методов полимеразной цепной реакции со случайными праймерами (RAPD-PCR) и мультилокусного ДНК-фингерпринтинга.

В работе были поставлены следующие задачи:

1. Разработать варианты RAPD-анализа для получения информативных амплификационных спектров ДНК органов и тканей человека и мыши.

2. Исследовать ДНК, выделенную из нормальных органов и тканей эмбрионов человека, методами RAPD-PCR и ДНК-фингерпринтинга с целью выявления соматического мозаицизма на уровене индивидуального организма.

3. Исследовать ДНК нормальных органов и тканей взрослых мышей с целью выявления соматического мозаицизма у индивидов разных линий.

4. Оценить наблюдаемые эффекты геномных изменений на модели длительно пассируемых клеточных культур с помощью RAPD-анализа.

Научная новизна и практическая значимость работы

Впервые обнаружена соматическая изменчивость ДНК в нормальных тканях эмбрионов человека и мыши методами RAPD-PCR и ДНК-фингерпринтинга. Показано, что возникновение соматического мозаицизма происходит с довольно высокой частотой и носит случайный характер.

Впервые показана измечивость PARD-спектров клеточных культур при длительном пассировании (мезенхимные прогениторные клетки человека, стромальные клетки жировой ткани человека, клетки фибробластов человека).

Эти результаты имеют фундаментальный характер и вносят важный вклад в изучение проблемы соматического мутагенеза.

Практическая значимость результатов связана с разработкой эффективного варианта RAPD-анализа для геномной паспортизации клеточных культур человека и выявления генетических изменений при их I длительном пассировании (Заявка на патент «Способ паспортизации и контроля за генетической изменчивостью в клеточных культурах различной длительности пассирования» No 2008114535/13 (016031) от 16 апреля 2008 года).

Метод может найти применение в медицине для изучения клеточных аномалий (в том числе онкологических), контроля генетической стабильности клеточных культур, используемых в качестве источника материала для клеточной терапии и регенерации тканей, а также паспортизации клеточных линий с целью их юридического правообладания.

Апробация работы

Материалы диссертации были представлены на следующих конференциях: 11-th PhD meeting in evolutionary Biology. Bordeaux. France. 2005; IV International conference Molecular genetics of somatic cells. Zvenigorod. Russia. 2005; 12-th PhD meeting in evolutionary Biology. St.Andrews. Skotland. 2006; 13-th meeting in evolutionary Biology. Lund. Sweden. 2007.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ, из них статей в журналах, соответствующих перечню ВАК — 2, заявка на патент — 1, тезисов докладов и материалов конференций - 3.

Структура и объем работы

Диссертационная работа изложена на 95 страницах, содержит 14 рисунков, 2 таблицы и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов и их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 125 цитируемых источника.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Бутовская, Полина Руслановна

выводы

1. Подобраны праймеры, дающие информативные амплификационные спектры ДНК органов и тканей человека и мыши.

2. Впервые с помощью RAPD-анализа и ДНК-фингерпринтинга обнаружена соматическая изменчивость ДНК у эмбрионов человека. При анализе нормальных органов и тканей соматический мозаицизм выявлен у трех из четырех исследованных эмбрионов.

3. Впервые продемонстрированы случаи соматического мозаицизма при RAPD-анализе образцов ДНК нормальных органов и тканей взрослых мышей линий С57КС, СВА, 101. Различия в RAPD-спектрах обнаружены у 7 из 18 особей, и они связаны с изменением подвижности или появлением/утратой амплифицированных фрагментов спектра. ,

4. Предложен эффективный вариант RAPD-анализа для геномной паспортизации клеточных культур человека.

5. Впервые показана изменчивость RAPD-спектров ДНК клеточных культур человека (мезенхимные прогениторные клетки, стромальные клетки жировой ткани и клетки фибробластов) на разных стадиях пассирования (заявка на патент №2008114535/13 (016031) от 16 апреля 2008 года).

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор выражает сердечную благодарность своим руководителям А.П. Рыскову и Г.В. Павловой за руководство, ценные советы и терпение, И.А. Мартиросян за помощь в проведение некоторых экспериментов. Отдельная благодарность всем тем, кто предоставил биологические образцы для анализа.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Цель настоящей работы — выявление соматического мозаицизма в нормальных клетках на уровне ДНК у человека и мыши. В биологических системах мозаицизм означает присутствие в индивидуальном организме генетически различных популяций клеток. До настоящего времени явление соматического мозаицизма в основном связывалось с возникновением различных болезней. Раковый патогенез является наиболее известным примером, при котором обнаруживается соматический мозаицизм. В настоящей работе явление соматического мозаицизма мы изучали на нормальных органах и тканях человека и мыши. В качестве основного подхода был выбран метод полимеразной цепной реакции со случайными одиночными олигонуклеотидмыми праймерами (RAPD-PCR). Тестирование <

27 праймеров в полимеразной цепной реакции позволило выявить три праймера (Р92, 447, R45), дающих наиболее информативные спектры амплифицированных ДНК- маркеров и оптимизировать варианты RAPDанализа ДНК человека и мыши. Этим методом, а также с помощью ДНК фингерпринтинга была обнаружена соматическая изменчивость ДНК у трех из четырех исследованных эмбрионов человека. С помощью RAPD- анализа

15 образцов ДНК различных органов и тканей было показано появление дополнительных амплификационных полос размером 300 п.н. в спектрах

ДНК хориона, глаза, и пуповины ( праймер 447) и размером 380 п.н в спектре глаза ( праймер R45). С помощью ДНК - фингерпринтинга при использовании гибридизационных проб (GACA)4 и (CAC)s в сочетании с рестриктазой Hinf I была показана изменчивость фингерпринтных спектров ДНК хориона, глаза и позвоночника. RAPD-методом продемонстрированы случаи соматического мозаицизма при анализе 99 образцов ДНК органов и тканей 18 взрослых мышей линий С57КС, СВА, 101. Различия в RAPD-спектрах были связаны с изменением подвижности или появлением/утратой отдельных фрагментов спектра. При использовании праймера R45 соматические изменения обнаружены у 3-х из 10 особей линии 101, 2-х из 4-х особей линии СВА и 1из 4 особей линии С57КС в образцах ДНК сердца, легких, гонад, кишечника, печени и кожи. При использовании праймера 447 соматические изменения обнаружены у 2-х из 4-х особей линии СВА и 1 из 4-х особей линии С57КС в образцах ДНК кишечника и мозга.

Таким образом, не смотря на небольшую выборку индивидуальных организмов, можно говорить о высокой частоте соматического мозаицизма, выявленных методом RAPD. При этом, нами не обнаружены какой-либо предпочтительности этого явления для конкретных органов и тканей, т.е. изменения в ДНК по-видимому носят случайный характер. Источниками такой изменчивости могут быть мутации в сайтах связывания праймеров с

ДНК, делеции и инсерции в участках между праймерами, альтернативное праймирование в участках сходного строения и вариабельность в числе копий повторяющихся элементов генома. Еще одной задачей настоящей работы было использование RAPD- метода в качестве тест-системы геномных изменений в клеточном материале в ходе пассирования клеточных культур. Было исследовано влияние длительного пассирования на 8 клеточных культур фибробластов человека, 5 клеточных культур стромальных клеток жировой ткани и 1 клеточной культуры эмбриональных клеток костного мозга человека. Различные культуры отличались друг от друга возрастом пациентов. RAPD- спектры различных пассажей сравнивали с таковым 0 или 1-го пассажа. В результате был найден праймер (447), позволяющий обнаруживать значительную изменчивость ДНК при длительном пассировании культур клеток. Предположено, что различия в RAPD- спектрах 0-ых пассажей клеточных культур определяются индивидуальными различиями в ДНК, которые могут быть связаны с мутациями в эмбриогенезе у индивидов-доноров соответствующих клеток, а изменения в ДНК клеточных культур могут определяться 1) структурными изменениями в ДНК в ходе пассирования или 2) изменением соотношения клеточных фракций, несущих структурно различающиеся ДНК, при пассировании. Таким образом, показано, что RAPD- анализ позволяет не только проводить паспортизацию клеточных культур, но и диагностировать возможные геномные изменения в клеточном материале в ходе пассирования клеточных культур.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Бутовская, Полина Руслановна, 2010 год

1. Алтухов Ю.П., Саламенкова Е. А. Полиморфизм ДНК в популяционной генетике. // Генетика 2002. Т. 38(9). С. 1174-1195.

2. Георгиев Г.П. Гены высших организмов и их экспрессия. // М.: Наука, 1989.

3. Гречко В. В. Молекулярные маркеры ДНК для изучения филогении и систематики // Генетика. 2002. Т. 38(8). С. 1013-1033.

4. Гришанин А.К., Шехоцов А.К., Бойкова Т.В. и др. Проблема диминуции хроматина на рубеже XX и XXI. // Цитология. 2006. Т. 48. N4. С. 379-397.

5. Евгеньев М.Б., Зеленцова Е. С., Полуэктова Е. В. Инвазия мобильных элементов причина взрывов сальтационного видообразования // Эволюцион. Биология. Томск. ТГУ. 2001. Т. 1. С. 37-48.

6. Корочкин Л. И., Рысков А. П. Был ли прав Август Вейсман? // Генетика. 2003. Т. 39. N. 2. С. 157-163. (Korochkin. L. I., Ryskov. А. P.Was August Weithman right? // Rus. J. Genetics. 2003. V. 39. N. 2. P. 157-163).

7. Малышева Д.Н., Токарская О.Н., Петросян В.Г. и др. Генетическая дифференциация партеногенетических ящериц Darevskia Rostombekowi (Сем. Lacertidae) по данным ядерных и митохондриальных маркеров ДНК // Доклады Академии Наук. 2006. Т.410. С. 560-563.

8. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии «Молекулярное клонирование». М.: Мир, 1984. С. 499.

9. Ю.Никитина Т.В., Назаренко С.А. Микросателлитные последовательности ДНК человека: Мутационный процесс и эволюция. // Генетика. 2004. Т. 40. С. 1301-1318.

10. П.Прохорчук А.В., Рузов А.С. Метилирование генома и его роль в функционировании эукариотического организма // Генетика, 2000. Т. 36, N. 11, С. 1475-1486.

11. Рысков А. П. Информационный бюллетень Геном человека // Академия Наук СССР. 1990. С.38.

12. Рысков А. П. Мультилокусный ДНК фингерпринтинг в генетико-популяционных исследованиях разнообразия. // Молекулярная Биология. 1999. Т. 33. N. 6. С. 880-892.

13. Рысков А.П., Мартиросян И.А., Корочкин Л.И. Выявление соматического мозаицизма у взрослых мышей с помощью метода ДНК-фингерпринтинга// ДАН. 2004. Т. 398. N. 4. С. 551-554.

14. Рысков А.П., Мартиросян И.А., Вергун А.А. и др. Молекулярная структура аллельных вариантов миктосателлитных локусов Du281 и

15. Du47 у представителей однополых и двуполых видов ящериц рода Darevskia. Известия РАН, серия биологическая. 2009, 2: С. 201-208.

16. Сулимова Г.Е., Зинченко В.В. Анализ полиморфизма ДНК с использованием метода полимеразной цепной реакции. // Изд-во "Диалог МГУ". Москва. 1999.

17. Токарская О.Н., Даревский И.С., Мартиросян И.А. и др. Генетическая нестабильность (GATA)n микросателлитных повторов ДНК и соматический мозаицизм у однополых ящериц Darevskia unisexualis // ДАН. 2003. Т. 388(6). С. 825 828.

18. Токарская О.Н., Ефремова Д.А., Кан Н. Г. и др. Изменчивость мультилокусных маркеров ДНК в популяциях сибирской (Capreolus pygargus Pall.) и европейской (С. capreolus L.) косуль // Генетика. 2000. Т. 36, №11. С. 1520-1529.

19. Трифонов Е. Н. Сегментативный геном. Элементарные структурные единицы генома // Генетика. 2002. Т. 38. С. 793-798. (E.N. Trifonov Segmented Genome: Elementary Units of Genome Structure // Rus. J. Genetics. 2002. V. 38. N 6. P. 793-798.

20. Aaltonen L. A., Peltomaki. P., Leach F. S. et al. Clues to the pathogenesis of familial colorectal cancer// Science. 1993. V. 260. P. 812-816.

21. Ainsworth P. J., Chakraborty P.K. and Weksberg R. Example of somatic mosaicism in a series of de novo neorofibromatosis type 1 cases due to a maternally derived deletion // Hum. Mutat. 1997. V. 9. P. 452-457.

22. Alexandrava S. A., Shvemberg I.N. Genetic variability of the mouse hepatoma cells MH-22a revealed by RAPD-PCR-fingerprinting under different conditions of cultivation // Expt. Oncol. 2005 V. 27. N. 2. P. 114119.

23. Allanson J.E, Graham G.E. In: Principles and Practice of Medical Genetics. 4th Edn. (Rimoin D. L., Connor J.M., Pyeritz R.E and Korf B. R. Eds.). Edinburg. Churchill Levingstone. 2002. P. 1184-1201.

24. Anderson S., Bankier A.T., Barel B.G. et al. Sequence and organization of human mitochondrial genome //Nature. 1981. V.290. P. 457-465.

25. Armour J.A., Povey S., Jeremiah S. et al. Systematic cloning of human minisatellites from ordered array charomid libraries // Genomics. 1990. V 8. N3. P. 501-512.

26. Armour J.A., Ptel I., Thein S.L. et al. Anaylsis of somatic mutations at human minisatellite in tumor and cell lines // Genomics. 1989. V. 3. P. 328334.

27. Armstrong L., McGowan-Jordan J., Brierley K. et al. De novo dup(X)(q22.3q26) in a girl with evidence that functional disomy of X material is the cause of her abnormal phenotype // Am. J. Med. Genet. A. 2003. V 1. N 116A(1). P. 71-76.

28. Arnason U., Adegoke J. A., Bodin K. et al. Mammalian mitogwnomic relationships and the root of the eutherian tree. // Proc. Nat. Amer. Sci. 2002. V. 99. N 12. P. 8151-8156.

29. Bailey J.A., Eichler E.E. Primate segmental duplications crucibles of evolution, diversity and disease // Nat. Rev. Genet. 2006. V. 7. P. 552-564.

30. Barinaga M. Cells exchanged during pregnancy live on // Science. 2002 V. 21 N296(5576). P. 2169-2172.

31. Bianchi D.W., Lo Y.M. Fetomaternal cellular and plasma DNA trafficking: the Yin and the Yang // Ann N Y Acad Sci. 2001. V. 945. P. 119-131.

32. Bird A.P., Wolffe A.P. Methylation- induced repression- belts, braces and chromatin // Cell 1999. V. 99. P.451-454.

33. Bois P., Jeffreys A.J. Minisatellite instability and germline mutation // Cell. Mol. Life. Sci. 1999. V. 55. N 12. P. 1636-1648.

34. Bois P., Willianson J., Brown J. et al. // Genomics. 1998. V. 49. P. 122-128.

35. Boveri T. The Orgin of Maligrant Tumors. Williams and Wilkins Eds., Baltimore, Maryland, 1929.

36. Britten R.J., Davidson E.H. Repetitive and nonrepetitive DNA sequences and a speculation on the origins of evolutionary novelty // Quatr. Rev. Biol. 1971. V 46. N2. P. 111-133.

37. Brown W. M. Evolution of genes and proteins. Sinaeur Sunderland Eds. M.A. 1983. P. 62-88.

38. Bruder C.E., Piotrowski A., Gijsbers A.A. et al. Phenotypically concordant and discordant monozygotic twins display different DNA copy-number-variation profiles // Am. J. Hum. Genet. 2008. V. 82. N 763-771.

39. Butovskaya P.R. Somatic mosaicism detection in humans by DNA-fingerprinting // Abstracts 11th PhD Meeting in Evolutionary Biology. Bordeaux. France. 2005. P. 14-15.

40. Caetano-Annoles G., Bassam B. J., Gresshoff P.M. DNA amplification fingerprinting: A strategy for genome analysis // Plant. Mol. Rep. 1991. V. 9. N2. P. 292-305.

41. Calvisi D.F., Ladu S., Conner E.A. et al. Disregulation of E-cadherin in transgenic mouse models of liver cancer // Lab. Invest. 2004. V 84. N 9. P. 1137-1147.

42. Cavenee W.K., Dryja T.P., Phillips R.A. et al. Expression of recessive alleles by chromosomal mechanisms in retinoblastoma // Nature. 1983. V. 305. N 5937. P. 779-784.1 <

43. Chance P.F., Abbas N., Lensch M.W. et al. Two autosomal dominant neuropathies result from reciprocal DNA duplication/deletion of region on chromosome 17 // Hum. Mol. Genet. 1994. V. 3. P. 223-228.

44. Clayton D.A. Replication and transcription of vertebrate mitochondrial DNA // Ann. Rev. Cell Biol. 1991. V. 7. P. 453-478.

45. Di Fabio F., Alvarado C., Gologan A. et al. Somatic mosaicism of androgen receptor CAG repeats in colorectal carcinoma epithelial cells from men // J. Surg. Res. 2009. V. 154(1). P. 38-44.

46. Dil-Afroze, Misra A., Sulaiman I. M. et al. Genetic alterations in brain tumors identified by RAPD analysis // Gene. 1998. V 206. P. 45-48.

47. Ellegren H. Microsatellites: simple sequences with complex evolution // Nat. Rev. Genet. 2004. V. 5. P. 551-558.

48. Endow S., Gall C. Differential replication of satellite DNA in polyploidy tussues of D. virilis // Chromosoma. 1975. V. 50. P. 175-192.

49. Engerstrom I. W., Kerr A. Workshop on autonomic function in Rett syndrome // Brain Dev. 1988. V. 20. P.323-326.

50. Epplen J.T. On simple repeated GATCA sequences in animal genomes: a critical reappraisal // J. Hered. 1988. V. 79(6). P. 409-417.

51. Erickson R., Somatic gene mutation and human disease other than cancer // Mutation Research. 2003. V. 543. P. 125-136.

52. Ferguson H. L. et al. Mosaicism in pseudoachondroplasia // Am. J. Med. Genet. 1997. V. 70. P. 287-291.

53. Gibbs M., Collick A., Kelly R.G. et al. A tetranucleotide repeat mouse minisatellite displaying substantial somatic instability during early preimplantation development//Genomics. 1993 V. 17(1). P. 121-128.

54. Gilbert D.A., Lehman N., O'Brien, et al. Genetic fingerprinting reflects population differentiation in the California Channel Island fox// Nature. 1990. V. 344. P. 764- 766.

55. Goldstein D.B., Pollock D.D. Launching microsatellites: a review of mutation processes and methods of phylogenetic interference // J. Hered. 1997. V. 88(5). P. 335-42.

56. Gollob M.H., Jones D.L., Krahn A.D. et al. Somatic mutations in the connexin 40 gene (GJA5) in atrial fibrillation // N. Engl. J Med. 2006. V. 354(25). P. 2677-88.

57. Gottlieb В., Beitel L.K., Trifiro M.A. Somatic mosaicism and variable expressivity// Trends Genet. 2001. V. 17. N 2. P. 79-82.

58. Gratacos M., Nadal M., Martin-Santos R. et al. A polymorphic genomic duplication on human chromosome 15 is a susceptibility factor for panic and phobic disorders // Cell. 2001. V. 106: P. 367-379.

59. Hall J.G. A bone is not a bone is not a bone //J. Pediatr. 1998. V. 133 (1). P.5.6.

60. Hendrich B. Human genetics: Methylation moves to medicine // Current Biology. 2000 Vol. 10, P. 60-63.

61. Hendrich B. Methylation moves into medicine // Curr Biol. 2000. V. 27. N 10(2). P. 60-63.

62. Jacobs P.A., Brunton M., Court Brown W.M. et al. Change of human chromosome count distribution with age: evidence for a sex differences // Nature. 1963. V. 197. P. 1080-1081.

63. Jeanpierre M., Turleau C., Aurias A. et al. An embryonic-like methylation pattern of classical satellite DNA is observed in ICF syndrome // Hum. Mol. Genet. 1993. V 2. P. 731-735.

64. Jeffreys A. J., Wilson V., Tein S. L. Hypervariable minisatellite regions in human DNA // Nature. 1985. V. 314. P. 67-73.

65. Jones P. A., Gonzalgo M.L. Altered DNA methylation and genome instability: A new pathway to cancer? // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. V. 94. P. 2103-2105.

66. Kelly R., Bulfield G., Collick A. et al. Characterization of a highly unstable mouse minisatellite locus: evidence for somatic mutation during early development // Genomics. 1989. V 5. N 4. P. 844-856.

67. Klose R. J., Bird A. Genomic DNA methylation: the mark and its mediators // Trends in Bioch. 2006. Sciences. V. 31. N. 2. P. 89-97.

68. Korchagin V.I., Badaeva T.N., Tokarskaya O.N. et al. Molecular characterization of allelic variants of (GATA)n microsatellite loci in parthenogenetic lizards Darevskia unisexualis (Lacertidae) // Gene. 2007. 392. P. 126-133.

69. Kvittingen E.A., Rootwelt H., Berger R. et al. Self-induced correction of the genetic defect in tyrosinemia type I // Clin Invest. 1994. V. 94. P. 16571662.

70. Langauer. С., Kinzler К. W., Vogelstein В. DNA methylation and genetic instability in colorectal cancer cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. V. 94. P. 2545-2550.

71. Lee Y.C., Shan Y.S., Lin P.W. Surgical decompression in the patients of pancreatic intraductal papillary mucinous neoplasm // Hepatogastroenterology. 2007. V 54(80). P. 2395-2397.

72. Lengauer C., Kinzer K.W., Vogelstein B. Genetic instabilities in human cancer // Nature. 1998. V. 396. N 6712. P. 643-649.

73. Li E., Bestor T.H, Jaenisch R. Targeted mutation of DNA methyltransferase gene results in embryonic lethality // Cell. 1992. V 69. P. 915-926.

74. Limborska S.A., Prosnyak M.I., Bocharova T.N. et al. The properties of human DNA fingerprints produced by polymeric monocore probes (PMS probes) // Genetic Analysis: Biomolecular Engineering. 1999. V. 15(1). P. 19-24.

75. Locke D.P., Sharp A.J., McCarroll et al. Linkage disequilibrium and heritability of copy-number polymorphisms within duplicated regions of the human genome // Am. J. Hun. Genet. 2006. V. 79. P. 275-290.

76. Loeb L.A. Cancer cells exhibit a mutator phenotype // Adv. Cancer Res. 1998. V. 72. P. 25-56.

77. Luceri C., De Filippo C., Caderni G. et al. Detection of somatic DNA alterations in azoxymethane-induced F344 rat colon tumors by random amplified polymorphic DNA analysis // Carcinogenesis. 2000. V 21. N 9. P. 1753-1756.

78. М. Kayser., L. Roewer., M. Hedman., et al. Characteristics and frequency of germline mutations at microsatellite loci from the human Y chromosome, as revealed by direct observation in father/son pairs // Hum. Mol.Genet. 1995. V.4.P. 1193-1199.

79. Maraschio P., Zuffardi O., Dalla Fior T. et al. Immunodeficiency, centromeric heterochromatin instability of chromosomes 1, 9, and 16, and facial anomalies: the ICF syndrome // J. Med Genet. 1988. V. 25. N 3. P. 173-80.

80. Mitani K., Sato Y., Tojo A. et al. Philadelphia chromosome positive B-cell type malignant lymphoma expressing an aberrant 190 kDa bcr-abl protein // Br. J. Haematol. 1990. V. 76. N2. P. 221-225.

81. Monica K., Galili N., Nourse J. et al. PBX2 and PBX3, new homeobox genes with extensive homology to the human proto-oncogene PBX1 // Mol. Cell Biol. 1991. V 11. N 12. P. 6149-6157.

82. Muller F., Tobler H. Chromatin diminution in the parasitic nematodes Ascaris suum and Parascaris univalens // Int. J. Parasitol. 2000. V. 30. P. 391-399.

83. Munoz M.A., Saunders D.N., Henderson M.J. et al. The E3 ubiquitin ligase EDD regulates S-phase and G (2)/M DNA damage checkpoints // Cell Cycle. 2007. V 6 (24). P. 3070-3077.

84. Nakamura Y., Leppert M., O'Connell P. et al. Variable number of tandem repeat (VNTR) markers for human gene mapping // Science. 1987. V.235. P. 1616-1622.

85. Pena and Chakraborty. Paternity testing in the DNA era // Trends Genet. 1994. V 10(6). P. 204-209.

86. Pentao L., Lewis R.A., Ledbetter D.H. et al. Maternal uniparental isodisomy of chromosome 14: association with autosomal recessive rod monochromacy // Am. J. Hum. Genet. 1992 V. 50(4). P. 690-699.

87. Piotrowski A., Bruder C.E.G., Andersson R. et al. Somatic Mosaicism for copy number variation in different human tissues // Human mutation. 2008. V. 29(9). P. 1118-1124.

88. Rehen S.K., McConnell M.J., Kaushal D. et al. Chromosomal variation in neurons of the developing and adult mammalian nervous system // Proc Natl

89. Acad Sci USA. 2001. V. 98(23). P. 1361-1362.

90. Reinoso E.B. Analisis epidemiologico у molecular de cepas de Staphylococcus aureus de distintos origenes. Tese de Doutorado, Instituto de Microbiologia, Universidad Nacional de Rio Cuarto, Argentina. 2004. 199 pp.

91. Russo C.A.M., Takezaki N., Nei M. Efficiencies of different genes and different tree-buildings methods in recovering a known vertebrate phylogeny // Mol. Biol. Evol. 1996. V. 13(3). P. 525-537.

92. Ryskov A.P., Dzhincharadze A.G., Prosnik M.I. et al. Genomic fingerprints of organisms from different taxonomic groups: the use of phage M13 DNA as a hybridization probe // Genetika. 1988.

93. Saiki R.K., Gelfand D.H., Stoffel S. et al. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase // Science. 1988. V. 239(2). P. 487-491.

94. Sebat J. Major changes in our DNA lead to major changes in our thinking //Nat Genet. 2007 V. 39 (7 Suppl). P. 3-5.

95. Sebat J., Lakshmi В., Troge J. et al. Large-scale copy number polymorphism in the human genome // Science. 2004. V 305(5683). P. 525528.

96. Shaw C.J., Lupski J.R. Implications of human genome architecture for rearrangement-based disorders: the genomic basis of disease // Hum Mol Genet. 2004 Apr 1; 13 Spec N 1. P. 57-64. E-pub 2004 Feb 5.

97. Sparkes R. et al. The validation of a 7-locus multiplex STR test for use in forensic casework.I. Mixtures, ageing degradation and species studies // Int. J. Legal Med. 1996. V. 109. P. 186-194.

98. Tegelstrom, H., Sjoberg G. Introduced Swedish Canada geese (Branta canadensis) have low levels of genetic variation as revealed by DNA fingerprinting // J. Evol. Biol. 1995. V. 8. P. 195-207.

99. Thein S.L., Jeffreys A.J., Gooi H.C. et al. Detection of somatic changes in human cancer DNA by DNA fingerprint analysis // Br. J. Cancer. 1987. V 55. P. 353-356.

100. Tokarskaya O. N., Martirosyan I. A., Badaeva T. N. et al. Instability of (GATA)n microsatellite loci in parthenogenetic Caucasian rock lizard Darevskia unisexualis (Lacertidae) // Molecular Genetics and Genomics. 2004. V. 270. P. 509-513.

101. Tolmie J.L. Principles and Practice of Medical Genetics. 4th Edn (Eds. Rimoin D. L., Connor J.M., Pyeritz R.E and Korf B. R.). Churchill Levingstone, Edinburg. 2002. P. 1129-1182.

102. Turner В. J., Elder J. F., Laughlin Т. H. et al. Genetic variation in clonal vertebrates detected by simple sequence DNA fingerprinting // Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 1990. V. 87. P. 5653-5657.

103. Van Dijk B.A., Boomsma D.I., de Man A.J. Blood group chimerism in human multiple births is not rare // Am. J. Med. Genet. 1996. V 61(3). P. 264-268.

104. Vassart G., Georgies M., Monsieur R. et al. Sequences in M13 Phage Detects Hypervariable Minisatellites in Human and Animal DNA // Science. 1987. V. 235. P. 683-684.

105. Vikki S., Tsao J-L., Loukola A. et .al. Extensive somatic microsatellite mutations in normal human tissue // Cancer. Research. 2001. V. 61. N. 11. P. 4541-4544.

106. Wallace D.C., Lott M. In: Principles and Ptactice of Medical Genetics 4th Edn. (Eds. Rimoin D. L., Connor J.M., Pyeritz R.E and Korf B. R: Churchill Levingstone, Edinburg // 2002. P. 299-409.

107. Wang D. G., Fan J. В., Sian J. C. et al. Large-scale identification, mapping, and genotyping of single-nucleotide polymorphisms in the human genome // Science. 1998. V. 280. P. 1077-1082.

108. Wells R. D. Molecular basis of genetic instability of triplet repeats // J. Biol. Chem. 1996. V. 271. N. 6. P. 2875-2878.

109. Welsh J., McClelland M. Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers//Nucl. Acid Res. 1990. V. 18(24). P. 7213-7218.

110. Wetton J.H., Carter R.E., Parkin D.T. et al. Demographic study of a wild house sparrow population by DNA fingerprinting // Nature. 1987. V. 327(6118). P. 147-149.

111. Xu G-L, Bestor Т. H, Bourchis D. et al. Chromosome instability and immunodeficiency syndrome caused by mutations in DNA methyltransferase gene // Nature. 1999. V. 402. P. 187-191.

112. Youssoufian H. Natural gene therapy and the Darwinian legacy // Nat Genet. 1996. V. 13(3). P. 255-256.

113. Youssoufian H., Pyeritz R.E. Mechanisms and consequences of somatic mosaicism in humans // Nat. Rev Genet. 2002. V. 3. N. 10. P. 748-758.

114. Yurov Y.B., Iourov I.Y., Vorsanova S.G. et al. Aneuploidy and confined chromosomal mosaicism in the developing human brain // PLoS One. 2007. V. 27(6). E 558.

115. Zaragoza M.V., Jacobs P.A., James R.S. et al. Nondisjunction of human acrocentric chromosomes. Studies of 432 fetueses and liveborns // Hum. Genet. 1994. V. 94. P. 411-417.