Сканирующая зондовая нанотомография для исследования 3D структуры матриксов для тканевой инженерии и регенеративной медицины тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.24, кандидат наук Агапова, Ольга Игоревна

• Агапова, Ольга Игоревна
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Агапова, Ольга Игоревна

ВВЕДЕНИЕ......................................................................................................................5

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ МИКРОСКОПИИ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ СВОЙСТВ БИОПОЛИМЕРНЫХ МАТЕРИАЛОВ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В РЕКОНСТРУКТИВНОЙ И РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ

(ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)...............................................................................................10

1.1 Микроскопические методы исследования биоматериалов.................................10

1.1.1 Сканирующая электронная микроскопия.......................................................10

1.1.2 Трансмиссионная электронная микроскопия................................................11

1.1.3 Конфокальная микроскопия............................................................................13

1.1.4 Сканирующая зондовая микроскопия............................................................15

1.1.5 Сканирующая зондовая нанотомография.......................................................17

1.16 Сравнительный анализ сканирующей зондовой микроскопии с

существующими методами исследования структуры биоматериалов....................18

1.1.7 Особенности проведения сканирующей зондовой микроскопии для

гидратированных сред .................................................................................................20

1.2. Биополимерные конструкции для тканевой и регенеративной медицины......22

1.2.1 Биосовместимые полимеры для изготовления биоконструкций.................22

1.2.1.1 Синтетические полимеры...........................................................................23

1.2.1.2 Полимеры природного происхождения....................................................27

1.2.2 Виды биоконструкций......................................................................................36

1.3 Технологии изготовления ЗО-матриксов..............................................................45

1.4 Тканеспецифические матриксы.............................................................................47

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.......................................................................50

2.1 Материалы................................................................................................................50

2.2 Экспериментальные животные..............................................................................54

2.3 Методы изготовления матриксов для исследования...........................................53

2.3.1 Изготовление трехмерных полимерных матриксов из

рекомбинантного спидроина методом выщелачивания............................................55

2.3.2 Изготовление трехмерных матриксов из фиброина шелка методом выщелачивания..............................................................................................................55

2.3.3 Изготовление микрочастиц децеллюляризованного матрикса из

печени крысы.................................................................................................................56

2.3.4 Изготовление альгинатных сферических микроносителей..........................58

2.4 Оценка адгезии клеток гепатомы человека Hep G2 на поверхность микроносителей.............................................................................................................59

2.5 Подготовка образцов альгинатных микроносителей для криоСЗНТ................61

2.6 Методы микроскопического исследования структуры матриксов....................61

2.7 Метод лазерной сканирующей конфокальной микроскопии для оценки адгезии и пролиферации фибробластов ЗТЗ на изготовленных

матриксах в экспериментах in vitro.............................................................................63

2.8 Экспериментальная модель травматического повреждения бедренной

кости................................................................................................................................63

2.9 Проведение статистического анализа полученных результатов........................66

ГЛАВА 3. ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ........................67

3.1 Разработка технологии сканирующей зондовой крионанотомографии............67

3.1.1 Создание аппаратного комплекса для проведения криоСЗНТ.....................67

3.1.2 Последовательные этапы работы аппаратного комплекса при выполнении криоСЗНТ.................................................................................................78

3.2 Сравнительный анализ трехмерной наноструктуры пористых биодеградируемых матриксов из рекомбинантного спидроина и фиброина шелка при комнатной температуре..............................................................................85

3.2.1 Результаты исследования микро- и наноструктуры матриксов с помощью сканирующей электронной микроскопии и сканирующей

зондовой нанотомографии............................................................................................85

3.2.2 Изучение адгезии и пролиферации фибробластов ЗТЗ на каркасных матриксах из рекомбинантного спидроина и фиброина шелка

в экспериментах in vitro................................................................................................90

3.2.3 Результаты имплантации каркасных матриксов в костную ткань

крыс в экспериментах ш vivo с моделированием повреждения

бедренной кости............................................................................................................91

3.3. Разработка тканеспецифического мелкодисперсного альгинатного матрикса и исследование его микро- и наноструктуры с помощью

сканирующей зондовой крионанотомографии...........................................................99

ЗАКЛЮЧЕНИЕ............................................................................................................117

ВЫВОДЫ.....................................................................................................................120

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.........................................................................................121

БЛАГОДАРНОСТИ....................................................................................................123

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ...........................................................................................124

ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы исследования

Дефицит донорских органов в трансплантологии не позволяет обеспечить ими всех нуждающихся, поэтому разработка альтернативных методов восстановления поврежденных органов и тканей является актуальной и необходимой [1] [2]. На успешную имплантацию и регенерацию оказывает существенное влияние подбор адекватного материала для изготовления биоискусственных конструкций [3]. В связи с этим важную роль играет изучение наноструктуры того или иного используемого биоматериала, от которой в значительной степени зависит биологическая и функциональная активность изделия. Методика сканирующей зондовой нанотомографии (СЗНТ), предполагающая использование сканирующего зондового микроскопа и ультрамикротома в одном устройстве, позволяет изучать биологические объекты в трехмерном виде, с минимальными изменениями их природной структуры, характеристик и свойств, что является её преимуществом перед другими методами микроскопии [4] [5]. Использование замораживания в присутствии криопротекторов для анализа трехмерной структуры методом сканирующей зондовой нанотомографии в криогенных условиях позволяет получить уникальную информацию о нативной структуре клеток, тканей, искусственных гидрогелевых биоконструкций с наноразрешением.

Объектами настоящего исследования являются пористые биодеградируемые матриксы из фиброина шелка и рекомбинантного спидроина, а также альгинатные клеточные микроносители, поверхность которых модифицирована микрочастицами девитализированного матрикса печени для повышения адгезии эукариотических клеток. Наноструктура и ее влияние на биологические свойства этих матриксов и микроносителей ранее не были изучены, поэтому настоящее исследование посвящено сравнительному изучению наноструктуры каркасных и

мелкодисперсных матриксов методом сканирующей зондовой нанотомографии как при комнатной температуре, так и в криогенных условиях.

Степень разработанности темы исследования

Проведенные в ФГБУ «ФНЦ трансплантологии и искусственных органов им. акад. В.И. Шумакова» Минздрава России серии исследований по разработке метода сканирующей зондовой нанотомографии показали принципиальную возможность анализа трехмерной структуры биологических объектов при комнатной температуре. Были разработаны методические подходы к изучению микро- и наноструктуры биоматериалов и фиксированных тканей. Возможность разработки технологии СЗНТ в криогенных условиях оставалась под вопросом, что и послужило основанием для выполнения настоящей работ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сканирующая зондовая нанотомография для исследования 3D структуры матриксов для тканевой инженерии и регенеративной медицины»

Цель работы

Целью работы является изучение ЗО микро- и наноструктуры пористых и мелкодисперсных матриксов, перспективных для тканевой инженерии и регенеративной медицины, с помощью сканирующей зондовой нанотомографии для установления взаимосвязей между наноструктурными и биологическими свойствами имплантатов.

Задачи исследования

1. Разработать технологию сканирующей зондовой нанотомографии в криогенных условиях для анализа структурных свойств водосодержащих материалов и тканей.

2. Разработать тканеспецифический мелкодисперсный матрикс из альгинатных микросфер, модифицированных микрочастицами девитализированной ткани печени.

3. Исследовать микро- и наноструктуру трехмерных пористых биоматриксов из фиброина шелка и рекомбинатного спидроина методом сканирующей зондовой нанотомографии при комнатной температуре.

4. Исследовать микро- и наноструктуру мелкодисперсных альгинатных и тканеспецифических матриксов методом сканирующей зондовой нанотомографии в криогенных условиях.

5. Изучить влияние особенностей структуры биополимерных матриксов на их биологические свойства in vitro и in vivo в экспериментальной модели травматического повреждения кости у крыс.

Научная новизна

1. Разработана технология сканирующей зондовой крионанотомографии для выполнения наномасштабных исследований водосодержащих материалов и тканей.

2. Методом сканирующей зондовой нанотомографии при комнатной температуре установлены существенные различия в наноструктуре каркасных матриксов из рекомбинантного спидроина и фиброина шелка.

3. Установлено, что матриксы из рекомбинантного спидроина с более высокой нанопористостыо и взаимосвязанностыо пор по сравнению с матриксами из фиброина шелка, обладают более высокой биологической активностью в экспериментах с восстановлением поврежденной бедренной кости у крыс.

4. Разработан тканеспецифический мелкодисперсный матрикс из альгинатных микросфер, модифицированных микрочастицами девитализированной ткани печени.

5. Методом сканирующей зондовой нанотомографии в криогенных условиях установлена более высокая наноструктурированность поверхности мелкодисперсного матрикса из альгинатных микросфер, модифицированных микрочастицами девитализированной ткани печени, по сравнению с

^модифицированными поверхностями этого матрикса, что сопровождается более высокой адгезией клеток, на примере гепатомы человека Нер 02.

Теоретическая и практическая значимость

Результаты предварительных исследований биологической активности пористых трехмерных матриксов из рекомбинантного спидроина и фиброина шелка, а также мелкодисперсного тканеспецифического матрикса из альгинатных микросфер, поверхность которых модифицирована фрагментами девитализированной ткани печени, позволяют рекомендовать данные изделия для проведения доклинических исследований с целью их использования в тканевой инженерии и регенеративной медицине.

Разработана и внедрена в практику ФГБУ «Федеральный научный центр трансплантологии и искусственных органов имени академика В.И. Шумакова» Минздрава России технология сканирующей зондовой нанотомографии в криогенных условиях для скрининга биоматериалов.

Методология и методы исследования

В ходе выполнения работы использован комплекс физико-химических и биологических методов исследования.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Разработанная технология сканирующей зондовой нанотомографии в криогенных условиях пригодна для исследования трехмерной наноструктуры водосодержащих материалов и тканей.

2. Технология сканирующей зондовой нанотомографии позволяет проводить количественный анализ трехмерной наноструктуры биополимерных матриксов.

" ' vil" I

3. Степень и характер нанопористости матриксов из рекомбинантного спидроина и фиброина шелка, изготовленных методом выщелачивания, влияют на их биологическую активность при имплантации в поврежденую ткань бедренной кости крысы.

4. Модификация поверхности альгинатных микросфер фрагментами девитализированной ткани печени повышает их адгезивные свойства для клеток гепатомы человека Hep G2.

Степень достоверности и апробация результатов

Достоверность результатов определяется репрезентативным объемом проведенных экспериментальных исследований, использованием современных методов исследования и методов статистической обработки.

Основные положение диссертационной работы были доложены и обсуждены на межинститутских семинарах ФГБУ «ФНЦ трансплантологии и искусственных органов им. акад. В.И. Шумакова» Минздрава России (2013 г., 2014 г., 2015 г.), XXII Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2015», Москва, 13-17 апреля 2015г, V Международной Конференции «ФизтехБио» МФТИ, 29-30 апреля 2015г., а также «Nanotech 2015», Washington, DC, USA, June 14-17, 2015.

Часть работы выполнена в рамках проекта ФЦПИР 2014-2020 Минобрнауки России (Соглашение № 14.604.21.0001, уникальный идентификатор проекта RFMEFI60414X0001).

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ МИКРОСКОПИИ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ СВОЙСТВ БИОПОЛИМЕРНЫХ МАТЕРИАЛОВ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В

РЕКОНСТРУКТИВНОЙ И РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ (ОБЗОР

ЛИТЕРАТУРЫ)

В настоящей главе приведены данные, отражающие современное состояние проблем изготовления биодеградируемых конструкций для регенеративной медицины, а также описаны характеристики существующих микроскопических методов изучения структуры биоматериалов, отражающие возможности и преимущества новой технологии сканирующей зондовой нанотомографии.

1.1 Микроскопические методы исследования биоматериалов

Для изучения структуры и свойств тех или иных биоматериалов, а также конструкций из них, существуют различные методы микроскопии, которые выбираются в зависимости от особенностей объекта и цели исследования.

1.1.1 Сканирующая электронная микроскопия

Сканирующая электронная микроскопия (СЭМ) представляет собой метод, в котором изображение образца формируется по точкам в результате взаимодействия электронного пучка (зонда) с поверхностью объекта [6]. Электронный пучок перемешается по поверхности, последовательно облучая каждую точку объекта, а синхронное построение изображения на экране происходит благодаря ответным сигналам различной физической природы (рентгеновское излучение, отраженные и вторичные электроны, свет, поглощенный ток), возникающим при взаимодействии электронов зонда с веществом [7]. При нормальном атмосферном давлении электронный пучок не может фокусироваться из-за своего рассеивания и поглощения, поэтому сканирующий электронный микроскоп - вакуумный прибор. СЭМ является одним

из основных инструментов для получения знаний в разделе наук о материалах благодаря высокой информативности, универсальности, простоте и удобстве в управлении оборудованием [8]. СЭМ обладает рядом преимуществ по сравнению с другими методами: характеризуется большей разрешающей способностью, а также глубиной резкости по сравнению с традиционной световой микроскопией; благодаря трехмерному представлению изображения метод отличается легкостью в его интерпретации; существует возможность подключать дополнительные приборы для исследования в микродиапазоне. Кроме того, метод не предполагает очень сложную пробоподготовку [9], а по сравнению со сканирующей зондовой микроскопией дает возможность изучать участки образца большей площади, исследовать поверхности, обладающие сильным рельефом, применять больший диапазон увеличений, а также получать информацию о слоях, которые прилегают к поверхности [10]. К недостаткам метода можно отнести то, что электронные микроскопы дороги в обслуживании и производстве, кроме того, они должны работать в помещениях без вибраций и внешних электромагнитных полей.

Технология корреляционной микроскопии представляет собой объединение исследований в одном цикле образцов с помощью оптического и электронного микроскопа, что открывает новые возможности изучения объектов биологии, материаловедения, геологии, минералогии, криминалистики, при этом экономя время работы. В перспективе, корреляционная микроскопия может совместить в одном устройстве несколько микроскопов, включая флуоресцентные со сверхразрешением, конфокальные, просвечивающие электронные, гелиево-ионные микроскопы, что при правильном выборе новейших приложений, зондов, при адекватной подготовке методологии, техники и программных разработок позволит реализовать весь потенциал подобных конструкций в изучении образцов [11].

1.1.2 Трансмиссионная электронная микроскопия

Принцип работы транмиссионного (просвечивающего) электронного микроскопа [12] состоит в том, что тонкопленочный образец просвечивается пучком ускоренных электронов с энергией, равной 50-200 кэВ. Электроны отклоняются атомами объекта на малые углы, другие проходят сквозь него с небольшими энергетическими потерями, после чего попадают в систему магнитных линз, формирующих на люминесцентном экране светлопольное изображение внутренней структуры объекта [13]. Данным методом получается разрешение порядка 0,1 нм (увеличение до 1,5 х 106 раз) [14]. Контраст изображения находится в зависимости от диаметра задерживающих рассеянные электроны диафрагм. Во время исследования силыюрассеивающих объектов лучше использовать темнопольные изображения. Стоит отметить, что способ подготовки образца сильно влияет на разрешение и информативность изображений, получающихся с помощью ТЭМ [15]. Во время изучения тонких пленок и срезов полимерных материалов и биологических тканей контраст увеличивается пропорционально толщине, но разрешение понижается. В связи с этим следует использовать тонкие пленки и срезы (до 0,01 мкм), обрабатывая их соединениями тяжелых металлов, избирательно взаимодействующих с элементами микроструктуры, для повышения контраста. Используя ультрамикротомы, получают срезы полимерных материалов необходимой толщины, а пористые и волокнистые материалы пропитываются и заливаются эпоксидными компаундами [16]. Исследуя форму и размеры микрочастиц (вирусы, макромолекулы), они наносятся в виде суспензий на проницаемые для электронного луча пленки-подложки из формвара (поливинилформаля) или аморфного углерода, а контрастируют методом оттенения или негативного контрастирования [17]. ТЭМ дает возможность визуализировать как трехмерную структуру объекта, так и динамику биологических нанообъектов с разрешением от 2-5 нм до атомного (0,2 нм) [18]. Кроме того, в ТЭМ нет лимитирующего размера частиц, наличие кристаллов не является обязательным требованием, также стоит отметить, что используется малое количество материала, а крио-модификация метода делает возможным наблюдение биологической молекулы в

нативном водном окружении в состоянии, которое схоже с физиологическим [19]. Возможность быстрого документирования ТЭМ изображений также является преимуществом данного метода: оцифровка изображения осуществляется уже в процессе его получения. При этом происходит контролирование содержания сохраняемого кадра, фокусировки, влияние дрейфа; управление контрастом ТЭМ-изображения, что помогает избежать проблемы с недостаточным контрастированием срезов. Также имеется возможность работать с диафрагмами объектива большего диаметра, понижая влияние дифракционных ошибок и астигматизма, используется цифровая фильтрация (коррекция фона, автоматическое вычитание дефектов сцинтиллятора), отсутствует ограничение в количестве кадров [20]. Недостатком методики ТЭМ является невысокое разрешение первичного изображения, которое компенсируется повышением ТЭМ-увеличения, сужая при этом поле зрения, а также из-за автоматической регулировки чувствительности нет возможности денситометрических измерений, т. е. измерять и сравнивать электронную плотность различных участков изображения [21].

1.1.3 Конфокальная микроскопия

Конфокальная микроскопия является методом оптической микроскопии с высоким контрастом благодаря использованию диафрагмы, которая отсекает поток фонового рассеянного света [22]. В конфокальном микроскопе происходит регистрация изображения одной точки образца в каждый момент времени, а полноценное изображение формируется сканированием посредством перестройки оптической системы или перемещением объекта [23]. Для регистрации света от одной точки после объективной линзы имеется диафрагма малого размера, её расположение таково, что свет, который излучает анализируемая точка, проникает через диафрагму и регистрируется, в то время как свет остальных точек диафрагма задерживает [24]. Также высокий контраст получается благодаря тому, что осветлителем производится фокусировка света в исследуемой точке,

избегая равномерной освещенности поля зрения. Этого можно добиться, разместив фокусирующую систему за объектом, при условии, что образец прозрачный. В связи с тем, что объективные линзы дорогие, альтернативой могут быть светоделительные пластинки, их нужно применять так, чтобы фокусировка падающего и отражённого света осуществлялась одним объективом. Подобная схема делает юстировку более легкой. Повышая контраст изображения за счет сужения отверстия в диафрагме, снижается его яркость, поэтому необходимо применять высокочувствительные регистрирующие системы, а также находить баланс между яркостью и контрастом. Благодаря высокому разрешению и контрасту, конфокальная микроскопия довольно часто применяется в изучении структуры клеток, их органелл: цитоскелета, эндоплазматического ретикулума, лизосом, митохондрий, ядра, а также может применяться для определения расположения веществ в клетке [25] [26] [27]. Кроме того, конфокальная микроскопия используется для изучения динамических процессов в живых клетках, например, транспорта биологически-активных соединений [28]. С помощью данного метода микроскопии можно получить объемную реконструкцию объекта, записав в памяти компьютера серию оптических срезов. Также, возможно получение нескольких изображений виртуальных срезов клетки, которые впоследствии могут быть объединены в трехмерную модель. Всё это реализуемо благодаря лазеру, чей луч может фокусироваться в любой точке объекта [29]. Стоит отметить, что образец при этом должен являться флуоресцентно активным, другими словами, он должен излучать свет с волной большей длины, чем длина волны того света (лазера), который на него попадает За счёт улавливания микроскопом этого света и строится изображение [30] [31] [32]. Также электромеханическое устройство содержит оптический фильтр, который пропускает луч лазера, отражая свет с более длинными волнами на диафрагму («пинхол»), отсекающую ненужный фоновый свет и снижающую воздействие нижележащих оптических слоев на четкость изображения. Оцифровывается информация фотоприемником, который находится за диафрагмой. Использование в конфокальной системе спиннинг-диска дает

возможность получать изображение не одной точки, а линии на образце за один акт работы. Т.о. конфокальный микроскоп обладает уникальными возможностями: с его помощью можно изучать ткани на клеточном уровне в состоянии физиологической жизнедеятельности и оценивать результаты в четырёх направлениях — высоте, ширине, глубине и во времени, а использование специальной приставки делает возможным исследование при разных температурах [33] [34].

1.1.4 Сканирующая зондовая микроскопия

Сканирующая зондовая или атомно-силовая микроскопия (СЗМ) представляет собой вид микроскопии, с помощью которой можно исследовать рельеф поверхности с разрешением от десятков ангстрем до атомарного [35]. Основа СЗМ - силовое взаимодействие атомов зонда и поверхности (силовое взаимодействие атомов), которое регистрируется специальными зондовыми датчиками - упругими консолями, на конце которых расположен острый зонд

[36]. Зонды обычно имеют коническую или пирамидальную форму с радиусом кривизны острия от десятка нанометров до размера одного атома и высотой от 1 до 20 мкм, изготавливаются в основном из Si и Si3N4. Располагается зонд на свободном конце консоли (кантилевера), представляющей собой упругую пластинку, по её отклонению оценивается сила взаимодействия острия с образцом

[37]. Влияние острия на итоговое изображение зависит от угла его схождения и радиуса кривизны: чем меньше радиус и угол, тем меньше влияние и выше разрешение получаемого изображения. Силы межатомного взаимодействия действуют при приближении острия к объекту. От расстояния между ними зависит то, будет ли это сила притяжения или сила отталкивания, поэтому в атомно-силовом микроскопе существует несколько режимов сканирования: контактный (contact mode), бесконтактный (non-contact mode), полуконтактный или прерывистый {tapping mode). При контактном режиме острие подходит очень близко к образцу, при этом рельеф поверхности формируется или в режиме

t

постоянной высоты, т. е. кантнлевер передвигается в горизонтальной плоскости, регистрируется его отклонение в каждой точке), или в режиме постоянной силы, когда путем системы обратных связей сила взаимодействия кантилевера с образцом (отклонение (прогиб) кантилевера) поддерживается постоянной. При бесконтактном режиме расстояние между зондом и образцом должно быть таким, чтобы отталкивание не имело большого значения, но и не настолько большим, чтобы взаимодействие отсутствовало. Режим прерывистого контакта дает возможность улучшить качество итогового изображения и применяется чаще всего при изучении мягких материалов (полимерные цепи, биообъекты). При таком режиме совершаются вынужденные механические колебания кантилевера с частотой десятки и сотни килогерц (близка к резонансной) и амплитудой около 100 нм. Итоговое трёхмерное изображение поверхности в СЗМ формируется после математической обработки цифровой информации - двумерных массивов целых чисел (например, характеризующих отклонения кантилевера в каждой точке скана). Подготовка образца имеет важное значение при получении качественного изображения. Иногда подготовка не требуется, например, если образец - поверхность графита. Но при изучении биохимических веществ и молекул требуется их адсорбция на соответствующей подложке. Изучение биологических объектов в водной среде дает возможность исследовать процессы in vitro [38]. С помощью СЗМ можно наблюдать динамику различных процессов, например, деление и рост бактериальных клеток [39], [40]. В медицине такой метод может использоваться для диагностики заболеваний, например, при изучении структуры поверхности мембран эритроцитов у пациентов с сахарным диабетом второго типа [41], для диагностики ортопоксовирусов, в частности, вируса коровьей оспы [42]. СЗМ позволяет изучать как проводящие, так и непроводящие поверхности, кроме того дает возможность манипулировать атомами. Также среди преимуществ СЗМ можно выделить то, что в результате исследования получается истинный трехмерный рельеф поверхности, непроводящая поверхность не требует нанесения проводящего металлического покрытия. Большинство режимов метода осуществляются на воздухе или в

жидкости без применения вакуума [43], что играет большую роль в изучении биомакромолекул и живых клеток. В условиях сверхвысокого вакуума СЗМ способна на атомное разрешение [44]. К недостаткам метода можно отнести небольшой размер поля сканирования (максимальный перепад высот равен нескольким мкм, наибольшее поле сканирования составляет порядка 150 мкм2), появление артефактов на изображении если зонд выбран неправильно, искажение изображения тепловым дрейфом из-за низкой скорости развёртки СЗМ [45], [46]. Кроме того, снижать качество изображения могут нелинейность, гистерезис и ползучесть (крип) пьезокерамики сканера [47]. Для устранения искажений современные СЗМ используют программное обеспечение и сканеры с замкнутыми следящими системами [48].

1.1.5 Сканирующая зондовая нанотомография

Сканирующая зондовая нанотомография (СЗНТ) представляет собой метод, предполагающий объединение техники ультрамикротомии с последовательным анализом наноструктуры поверхности после произведенного среза методом сканирующей зондовой микроскопии. Он дает возможность осуществлять СЗМ-измерения поверхности блока изучаемого материала, не передвигая образец, непосредственно после сверхтонкого среза в рабочем цикле ультрамикротома

[49]. Точность и надежность измерений возрастает благодаря тому, что на поверхности блока практически отсутствуют артефакты, которые возникают при проведении механического воздействия (сжатие или растяжение, деформация)

[50]. Чтобы получить СЗМ-изображений одного и того же участка поверхности, осуществляются последовательные срезы объекта с указанной толщиной (от 20 нм) и СЗМ-измерения морфологии поверхности и карт распределения физических свойств исследуемых образцов после каждого среза. В течение одного эксперимента можно получить несколько десятков изображений благодаря тому, что автоматизация и оптимизация цикла дает возможность получать до 10 последовательных изображений в час. Метод сканирующей зондовой

нанотомографии (СЗНТ) позволяет реконструировать трехмерные структуры образцов, получать информацию о трехмерной морфологии, локальном распределении ряда физических свойств, о трехмерном распределении компонент (наночастиц, кластеров) в объеме нано- и биоматериалов [51] [52].

1.1.6 Сравнительный анализ сканирующей зондовой микроскопии с существующими методами исследования структуры биоматериалов

Для микроскопических исследований конструкций из полимерных материалов с витализированными клетками, биодеградируемых клеточных носителей, гидратированных гелевых биоматериалов необходимо сохранять их нативную структуру на уровне отдельных макромолекул как во время измерений, так и в процессе подготовки объекта.

Методы просвечивающей электронной микроскопии и электронной томографии [53] [54] [55] [56] [57], их сочетание с корреляционными оптическими методиками [58] [59] [11] имеют как свои достоинства и преимущества, так и недостатки, например, высокая стоимость оборудования, трудоемкость работы [60] [61], а также ограничения, связанные с физическими принципами измерений и формированием контраста в этих методах. Кроме того, электронная микроскопия дает возможность восстанавливать трехмерную структуру объекта при срезах не более 300 нм, что ограничивает возможности исследования клеточных носителей.

Объединение техники сканирующей электронной микроскопии (СЭМ) и травления поверхности фокусированным ионным пучком (ФИП) является одним из перспективных методов. Восстановление трехмерной структуры осуществляется с помощью последовательных СЭМ-изображений поверхности, которые получаются после стравливания слоев материала ионным потоком с поверхности объекта. Метод эффективен при работе с большим количеством материалов и объектов [62] [63], но воздействие электронных и ионных пучков, а

также вакуумные условия могут оказывать структурные изменения в биологических образцах, что является недостатком при исследовании [64].

Для изучения полимеров, клеточных носителей, биоматериалов на микроуровне [65] [66] [67] широко применяется рентгеновская томография, однако, она не позволяет получать на такого рода объектах разрешение в десятки нм, кроме того, для максимального разрешения в данном методе размер образца не должен превосходить 1 мкм [68] [69].

Такие ограничения рентгеновской и электронной томографии весьма неудобны при анализе биологических и полимерных материалов из легких химических элементов. Избежать подобных ограничений возможно с помощью методов сканирующей зондовой микроскопии (СЗМ). Такой анализ структуры поверхности позволяет осуществлять исследование с наноразрешением [70] [71], при этом не разрушая образец химической фиксацией, не нанося повреждения электронным пучком, а также помогает избежать слабого электронно-микроскопического контраста [72] [73]. Кроме того, СЗМ позволяет анализировать поверхность несколькими методиками: изображение фазы, распределение электрической проводимости [74] [75], метод измерения силовых кривых, магнитная [76] или электростатическая силовая микроскопия, химическая силовая микроскопия [77] [78].

Принцип сканирующей зондовой нанотомографии заключается в серии последовательных измерений поверхности образца после удаления сверхтонких поверхностных слоев материала, после которых выполняется воссоздание трехмерного томографического изображения путём объединения серий двухмерных СЗМ-изображений. Существует несколько способов удаления верхних слоев образца: плазменное или химическое травление, механическое удаление с использованием жесткого зонда СЗМ, срез ультрамикротомом.

Впервые, томографическая трехмерная реконструкция на основе последовательных измерений СЗМ была сделана при помощи плазменного травления [79], а также защищена патентами [80] [81]. Плазменное травление проиводилось ex situ, что предполагало перемещение образца из СЗМ в установку

для травления и обратно с дальнейшей локализацией области исследования с точностью до десятков нм, что является недостатком данной методики. Спустя некоторое время, благодаря усовершенствованию методики и установки, стало возможно химическое [82] или плазменное травление поверхности образца, оставляя его в установке СЗМ. Такая методика использовалась при изучении трехмерных структур полимерных композитов, а также кости человека [83] [84].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Агапова, Ольга Игоревна, 2015 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1 Nayak, A., Ettenger, R., McGuire, S., Lipshutz, G., Reed, E., Veale, J., and Tsai, E.: 'Optimizing HLA matching in a highly sensitized pediatric patient using ABO-incompatible and paired exchange kidney transplantation', Pediatr Nephrol, 2015, 30, (5), pp. 855-858

2 Parikh, K., Appis, A., and Doukky, R.: 'Cardiac imaging for the assessment of patients being evaluated for kidney or liver transplantation', J. Nucl. Cardiol., 2015, 22, (2), pp. 282-296

3 Wagenhâuser, M., Pietschmann, M., Docheva, D., Giilecyiiz, M., Jansson, V., and Miiller, P.: 'Assessment of essential characteristics of two different scaffolds for tendon in situ regeneration', Knee Surg Sports Traumatol Arthrose, 2015, 23, (4), pp. 12391246

4 Efimov, A.E., Moisenovich, M.M., Kuznetsov, A.G., Safonova, L.A., Bobrova, M.M., and Agapov, I.I.: 'Investigation of micro- and nanostructure of biocompatible scaffolds from regenerated fibroin of Bombix mori by scanning probe nanotomography', Nanotechnol Russia, 2014, 9, (11-12), pp. 688-692

5 Mochalov, K.E., Efimov, A.E., Alexey, B., Agapov, I.I., Chistyakov, A.A., Vladimir, O., Alyona, S., and Igor, N.: 'Combined Scanning Probe Nanotomography and Optical Microspectroscopy: A Correlative Technique for 3D Characterization of Nanomaterials', ACS Nano, 2013, 7, (10), pp. 8953-8962

6 Schmitt, R.: 'Scanning Electron Microscope', in Laperrière, L., and Reinhart, G. (Eds.): 'CIRP Encyclopedia of Production Engineering' (Springer Berlin Heidelberg, 2014), pp. 1085-1089

7 Frank, L., Hovorka, M., Mikmekovâ, S., Mikmekovâ, E., Miillerova, I., and Pokornâ, Z.: 'Scanning Electron Microscopy with Samples in an Electric Field', Materials, 2012, 5, (12), pp. 2731-2756

8 Eberle, A.L., Mikula, S., Schalek, R., Lichtman, J., Tate, M.L., and Zeidler, D.: 'High-resolution, high-throughput imaging with a multibeam scanning electron microscope', Journal of microscopy, 2015, 259, (2), pp. 114-120

9 Sakalli, Y., and Trettin, R.: 'Investigation of C3S hydration by environmental scanning electron microscope', Journal of microscopy, 2015, 259, (1), pp. 53-58

10 Bogner, A., Jouneau, P.H., Thollet, G., Basset, D., and Gauthier, C.: 'A history of scanning electron microscopy developments: towards "wet-STEM" imaging', Micron (Oxford, England : 1993), 2007, 38, (4), pp. 390-401

11 Caplan, J., Niethammer, M., Taylor, R.M., 2nd, and Czymmek, K.J.: 'The power of correlative microscopy: multi-modal, multi-scale, multi-dimensional', Current opinion in structural biology, 2011, 21, (5), pp. 686-693

12 Abellan, P., Woehl, T.J., Parent, L.R., Browning, N.D., Evans, J.E., and Arslan, I.: 'Factors influencing quantitative liquid (scanning) transmission electron microscopy', Chemical Communications, 2014, 50, (38), pp. 4873-4880

13 Joy, D.C.: 'Scanning electron microscopy: Second best no more', Nat Mater, 2009, 8, (10), pp. 776-777

14 Howe, J.M., Fultz, B., and Miao, S.: 'Transmission Electron Microscopy': 'Characterization of Materials' (John Wiley & Sons, Inc., 2002)

15 Ayache, J., Beaunier, L., Boumendil, J., Ehret, G., and Laub, D.: 'Web sample preparation guide for transmission electron microscopy (TEM)', in Luysberg, M., Tillmann, K., and Weirich, T. (Eds.): 'EMC 2008 14th European Microscopy Congress 1-5 September 2008, Aachen, Germany' (Springer Berlin Heidelberg, 2008), pp. 801802

16 Li, W., Luo, T., Yang, Y., Tan, X., and Liu, L.: 'Formation of controllable hydrophilic/hydrophobic drug delivery systems by electrospinning of vesicles', Langmuir : the ACS journal of surfaces and colloids, 2015, 31, (18), pp. 5141-5146

17 Limonta, D., Falcon, V., Torres, G., Capo, V., Menendez, I., Rosario, D., Castellanos, Y., Alvarez, M., Rodriguez-Roche, R., de la Rosa, M.C., Pavon, A., Lopez, L., Gonzalez, K., Guillen, G., Diaz, J., and Guzman, M.G.: 'Dengue virus identification by transmission electron microscopy and molecular methods in fatal dengue hemorrhagic fever', Infection, 2012, 40, (6), pp. 689-694

18 Bowie, R., Kida, K., Leroux, M., and Blacque, O.: 'A picture tells a thousand words: transmission electron microscopy of the ciliary transition zone in C. elegans', Cilia, 2012,1,(1), pp. 1-1

19 Zasadzinski, J.A.: 'Transmission electron microscopy observations of sonication-induced changes in liposome structure', Biophysical Journal, 49, (6), pp. 1119-1130

20 Pennycook, S.J.: 'Scanning transmission electron microscopy: Seeing the atoms more clearly', MRS Bulletin, 2012, 37, (10), pp. 943-951

21 Jinschek, J.R.: 'Advances in the environmental transmission electron microscope (ETEM) for nanoscale in situ studies of gas-solid interactions', Chemical Communications, 2014, 50, (21), pp. 2696-2706

22 Uguz, A.: 'Book review: Confocal and Two-Photon Microscopy: Foundations, Applications, and Advances, edited by Alberto Diaspro', Annals of Biomedical Engineering, 2002, 30, (7), pp. 984-984

23 Flaberg, E., Sabelstrom, P., Strandh, C., and Szekely, L.: 'Extended Field Laser Confocal Microscopy (EFLCM): Combining automated Gigapixel image capture with in silico virtual microscopy', BMC Med Imaging, 2008, 8, (1), pp. 1-13

24 Vekshin, N.L., and Frolova, M.S.: 'Artefacts of confocal microscopy', BIOPHYSICS, 2014, 59, (5), pp. 843-847

25 Srinivasan, R., Zhou, X., Miller, E., Lu, J., Litchman, J., and Wong, S.T.C.: 'Automated Axon Tracking of 3D Confocal Laser Scanning Microscopy Images Using Guided Probabilistic Region Merging', Neuroinformatics, 2007, 5, (3), pp. 189-203

26 Gorshkov, A.N., Snigirevskaya, E.S., and Komissarchik, Y.Y.: 'Analysis of vasopressin-induced transepithelial water transport by confocal and electron microscopy methods', Biochem. Moscow Suppl. Ser. A, 2009, 3, (3), pp. 311-311

27 Kann, B., and Windbergs, M.: 'Chemical Imaging of Drug Delivery Systems with Structured Surfaces-a Combined Analytical Approach of Confocal Raman Microscopy and Optical Profilometry', AAPS J, 2013, 15, (2), pp. 505-510

28 McAllister, J., Wagshul, M., Rashid, S., and Li, J.: 'Measurement of capillary pulsations in the rat neocortex with two-photon laser scanning confocal microscopy', Cerebrospinal Fluid Res, 2009, 6, (Suppl 2), pp. 1-1

29 Hoffmann, A., Meyer zu Horste, G., Pilarczyk, G., Monajembashi, S., Uhl, V., and Greulich, K.O.: 'Optical tweezers for confocal microscopy', Appl Phys B, 2000, 71, (5), pp. 747-753

30 Zitta, C., Oliveira, E., Bouzon, Z., and Hayashi, L.: 'Ploidy determination of three Kappaphycus alvarezii strains (Rhodophyta, Gigartinales) by confocal fluorescence microscopy', J Appl Phycol, 2012, 24, (3), pp. 495-499

31 Dobbs, J., Krishnamurthy, S., Kyrish, M., Benveniste, A., Yang, W., and Richards-Kortum, R.: 'Confocal fluorescence microscopy for rapid evaluation of invasive tumor cellularity of inflammatory breast carcinoma core needle biopsies', Breast Cancer Res Treat, 2015, 149, (1), pp. 303-310

32 Nwaneshiudu, A., Kuschal, C., Sakamoto, F.H., Anderson, R.R., Schwarzenberger, K., and Young, R.C.: 'Introduction to confocal microscopy', The Journal of investigative dermatology, 2012, 132, (12), pp. e3

33 Harper, D., Pallazola, V., Williams, D., Harte, S., Clauw, D., and Shtein, R.: 'Confocal microscopy reveals nerve fiber similarities in fibromyalgia and patients with dry eyes with a normal ophthalmic exam', Mol Pain, 2014, 10, (1), pp. 1-1

34 Cremer, C., and Masters, B.R.: 'Resolution enhancement techniques in microscopy', EPJ H, 2013, 38, (3), pp. 281-344

35 Lee, Y.C., Kim, H.J., Kim, K.S., Choi, S., Kim, S.W., Park, H.-K., and Eun, Y.G.: 'Investigation of nanostructural changes following acute injury using atomic force microscopy in rabbit vocal folds', Microscopy research and technique, 2015, 78, (7), pp. 569-576

36 Abbasi, M., and Karami Mohammadi, A.: 'Study of the sensitivity and resonant frequency of the torsional modes of an AFM cantilever with a sidewall probe based on a nonlocal elasticity theory', Microscopy research and technique, 2015, 78, (5), pp. 408415

37 Liao, H.S., Chen, Y.H., Ding, R.F., Huang, H.F., Wang, W.M., Hwu, E.T., Huang, K.Y., Chang, C.S., and Hwang, I.S.: 'High-speed atomic force microscope based on an astigmatic detection system', The Review of scientific instruments, 2014, 85, (10), pp. 103710

A

38 Braunsmann, C., Seifert, J., Rheinlaender, J., and Schaffer, T.E.: 'High-speed force mapping on living cells with a small cantilever atomic force microscope', The Review of scientific instruments, 2014, 85, (7), pp. 073703

39 Van Der Hofstadt, M., Huttener, M., Juarez, A., and Gomila, G.: 'Nanoscale imaging of the growth and division of bacterial cells on planar substrates with the atomic force microscope', Ultramicroscopy, 2015, 154, pp. 29-36

40 Touhami, A., Jericho, M.H., and Beveridge, T.J.: 'Atomic force microscopy of cell growth and division in Staphylococcus aureus', Journal of bacteriology, 2004, 186, (11), pp. 3286-3295

41 Buys, A., Van Rooy, M.-J., Soma, P., Van Papendorp, D., Lipinski, B., and Pretorius, E.: 'Changes in red blood cell membrane structure in type 2 diabetes: a scanning electron and atomic force microscopy study', Cardiovasc Diabetol, 2013, 12, (IX pp. 1-7

42 Trindade, G.S., Vilela, J.M., Ferreira, J.M., Aguiar, P.H., Leite, J.A., Guedes, M.I., Lobato, Z.I., Madureira, M.C., da Silva, M.I., da Fonseca, F.G., Kroon, E.G., and Andrade, M.S.: 'Use of atomic force microscopy as a diagnostic tool to identify orthopoxvirus', Journal of virological methods, 2007, 141, (2), pp. 198-204

43 Arai, T., Koshioka, M., Abe, K., Tomitori, M., Kokawa, R., Ohta, M., Yamada, H., Kobayashi, K., and Oyabu, N.: 'Atom-Resolved Analysis of an Ionic KBr(001) Crystal Surface Covered with a Thin Water Layer by Frequency Modulation Atomic Force Microscopy', Langmuir : the ACS journal of surfaces and colloids, 2015, 31, (13), pp. 3876-3883

44 Wang, T., Ma, C., Chen, Y., Chu, J., and Huang, W.: 'Effects of temperature and humidity on atomic force microscopy dimensional measurement', Microscopy research and technique, 2015, 78, (7), pp. 562-568

45 Lapshin, R.V.: 'Feature-oriented scanning methodology for probe microscopy and nanotechnology', Nanotechnology, 2004, 15, (9), pp. 1135-1151

46 Lapshin, R.V.: 'Automatic drift elimination in probe microscope images based on techniques of counter-scanning and topography feature recognition', Measurement Science and Technology, 2007, 18, (3), pp. 907-927

47 Lapshin, R.V., and Obyedkov, O.V.: 'Fast-acting piezoactuator and digital feedback loop for scanning tunneling microscopes', Review of Scientific Instruments, 1993, 64, (10), pp. 2883-2887

48 Bazaei, A., Yong, Y.K., Moheimani, S.O.R., and Sebastian, A.: 'Tracking of Triangular References Using Signal Transformation for Control of a Novel AFM Scanner Stage', Control Systems Technology, IEEE Transactions on, 2012, 20, (2), pp. 453-464

49 Efimov, A.E., Tonevitsky, A.G., Dittrich, M., and Matsko, N.B.: 'Atomic force microscope (AFM) combined with the ultramicrotome: a novel device for the serial section tomography and AFM/TEM complementary structural analysis of biological and polymer samples', Journal of microscopy, 2007, 226, (Pt 3), pp. 207-217

50 Walther, P., and Muller, M.: 'Biological ultrastructure as revealed by high resolution cryo-SEM of block faces after cryo-sectioning', Journal of microscopy, 1999, 196, (Pt 3), pp. 279-287

51 Mochalov, K.E., Efimov, A.E., Bobrovsky, A.Y., Agapov, I.I., Chistyakov, A.A., Oleinikov, V.A., and Nabiev, I.: 'High-resolution 3D structural and optical analyses of hybrid or composite materials by means of scanning probe microscopy combined with the ultramicrotome technique: an example of application to engineering of liquid crystals doped with fluorescent quantum dots', in Editor (Ed.)A(Eds.): 'Book Highresolution 3D structural and optical analyses of hybrid or composite materials by means of scanning probe microscopy combined with the ultramicrotome technique: an example of application to engineering of liquid crystals doped with fluorescent quantum dots' (2013, edn.), pp. 876708-876708-876712

52 Mochalov, K.E., Efimov, A.E., Bobrovsky, A., Agapov, I.I., Chistyakov, A.A., Oleinikov, V., Sukhanova, A., and Nabiev, I.: 'Mochalov, K.E., Efimov, A.E., Bobrovsky, A., Agapov, I.I., Chistyakov, A.A., Oleinikov, V.A., Sukhanova, A., Nabiev, I. Combined Scanning Probe Nanotomography and Optical Microspectroscopy: A Correlative Technique for 3D Characterization of Nanomaterials// ACS Nano. 2013; 7 (10), P. 8953-8962.', ACS Nano, 2013, 7, (10), pp. 8953-8962

53 Midgley, P.A., and Dunin-Borkowski, R.E.: 'Electron tomography and holography in materials science', Nat Mater, 2009, 8, (4), pp. 271-280

54 Medalia, O., Weber, I., Frangakis, A.S., Nicastro, D., Gerisch, G., and Baumeister, W.: 'Macromolecular architecture in eukaryotic cells visualized by cryoelectron tomography', Science (New York, N.Y.), 2002, 298, (5596), pp. 12091213

55 Milne, J.L., and Subramaniam, S.: 'Cryo-electron tomography of bacteria: progress, challenges and future prospects', Nature reviews. Microbiology, 2009, 7, (9), pp. 666-675

56 Moebus, G., and Inkson, B.J.: 'Novel Nanoscale Tomography Modes in Materials Science', Microscopy and Microanalysis, 2003, 9, (SupplementS02), pp. 176-177

57 van Bavel, S.S., and Loos, J.: 'Volume Organization of Polymer and Hybrid Solar Cells as Revealed by Electron Tomography', Advanced Functional Materials, 2010, 20, (19), pp. 3217-3234

58 Mironov, A.A., and Beznoussenko, G.V.: 'Correlative microscopy: a potent tool for the study of rare or unique cellular and tissue events', Journal of microscopy, 2009, 235,(3), pp. 308-321

59 Spiegelhalter, C., Tosch, V., Hentsch, D., Koch, M., Kessler, P., Schwab, Y., and Laporte, J.: 'From Dynamic Live Cell Imaging to 3D Ultrastructure: Novel Integrated Methods for High Pressure Freezing and Correlative Light-Electron Microscopy', PloS one, 2010, 5, (2), pp. e9014

60 Pilhofer, M., Ladinsky, M.S., McDowall, A.W., and Jensen, G.J.: 'Bacterial TEM: new insights from cryo-microscopy', Methods in cell biology, 2010, 96, pp. 2145

61 Bouchet-Marquis, C., and Hoenger, A.: 'Cryo-electron tomography on vitrified sections: a critical analysis of benefits and limitations for structural cell biology', Micron (Oxford, England : 1993), 2011, 42, (2), pp. 152-162

62 Holzer, L., Indutnyi, F., Gasser, P.H., Munch, B., and Wegmann, M.: 'Three-dimensional analysis of porous BaTi03 ceramics using FIB nanotomography', Journal of microscopy, 2004, 216, (Pt 1), pp. 84-95

63 Zankel, A., Wagner, J., and Poelt, P.: 'Serial sectioning methods for 3D investigations in materials science', Micron (Oxford, England : 1993), 2014, 62, pp. 6678

64 Al-Abboodi, A., Fu, J., Doran, P.M., and Chan, P.P.: 'Three-dimensional nanocharacterization of porous hydrogel with ion and electron beams', Biotechnology and bioengineering, 2013, 110, (1), pp. 318-326

65 Ho, S.T., and Hutmacher, D.W.: 'A comparison of micro CT with other techniques used in the characterization of scaffolds', Biomaterials, 2006, 27, (8), pp. 1362-1376

66 Barbetta, A., Bedini, R., Pecci, R., and Dentini, M.: 'Role of X-ray microtomography in tissue engineering', Annali dell'Istituto superiore di sanita, 2012, 48,(1), pp. 10-18

67 Zielke, L., Hutzenlaub, T., Wheeler, D.R., Manke, I., Arlt, T., Paust, N., Zengerle, R., and Thiele, S.: 'A Combination of X-Ray Tomography and Carbon Binder Modeling: Reconstructing the Three Phases of LiCo02 Li-Ion Battery Cathodes', Advanced Energy Materials, 2014, 4, (8), pp. n/a-n/a

68 Moore, M.J., Jabbari, E., Ritman, E.L., Lu, L., Currier, B.L., Windebank, A.J., and Yaszemski, M.J.: 'Quantitative analysis of interconnectivity of porous biodegradable scaffolds with micro-computed tomography', J Biomed Mater Res A, 2004,71,(2), pp. 258-267

69 Muller, W.G., Heymann, J.B., Nagashima, K., Guttmann, P., Werner, S., Rehbein, S., Schneider, G., and McNally, J.G.: 'Towards an atlas of mammalian cell ultrastructure by cryo soft X-ray tomography', Journal of structural biology, 2012, 177, (2), pp. 179-192

70 Binnig, G., Quate, C.F., and Gerber, C.: 'Atomic Force Microscope', Physical Review Letters, 1986, 56, (9), pp. 930-933

71 'Magonov, S. N.; Reneker, D. H. Characterization of Polymer Surfaces with Atomic Force Microscopy. //Annu. Rev. Mater. Sci. 1997, 27, P. 175-222.'

72 Matsko, N.B.: 'Atomic force microscopy applied to study macromolecular content of embedded biological material', Ultramicroscopy, 2007, 107, (2-3), pp. 95105

73 Gallyamov, M.O.: 'Scanning force microscopy as applied to conformational studies in macromolecular research', Macromolecular rapid communications, 2011, 32, (16), pp. 1210-1246

74 Alekseev, A., Chen, D., Tkalya, E.E., Ghislandi, M.G., Syurik, Y., Ageev, O., Loos, J., and de With, G.: 'Local Organization of Graphene Network Inside Graphene/Polymer Composites', Advanced Functional Materials, 2012, 22, (6), pp. 1311-1318

75 Alekseev, A., Efimov, A., Lu, K., and Loos, J.: 'Three-dimensional Electrical Property Mapping with Nanometer Resolution', Advanced materials (Deerfield Beach, Fla.), 2009, 21, (48), pp. 4915-4919

76 Hartmann, U.: 'Magnetic force microscopy: Some remarks from the micromagnetic point of view', Journal of Applied Physics, 1988, 64, (3), pp. 1561-1564

77 'Noy, A.; Vezenov, D.V.; Lieber, C.M. Chemical Force Microscopy. //Annu. Rev. Mater. Sci. 1997, 27, P. 381-421.'

78 Zlatanova, J., Lindsay, S.M., and Leuba, S.H.: 'Single molecule force spectroscopy in biology using the atomic force microscope', Progress in biophysics and molecular biology, 2000, 74, (1-2), pp. 37-61

79 Magerle, R.: 'Nanotomography', Phys Rev Lett, 2000, 85, (13), pp. 2749-2752

80 'Magerle, R. //Europ. Patent EP 1144989, "Nanotomography", 2001.'

81 'Magerle R. //U.S. Patent 6,546,788, "Nanotomography", 2001.'

82 Dietz, C., Roper, S., Scherdel, S., Bernstein, A., Rehse, N., and Magerle, R.: 'Automatization of nanotomography', The Review of scientific instruments, 2007, 78, (5), pp. 053703

83 Rehse, N., Marr, S., Scherdel, S., and Magerle, R.: 'Three-Dimensional Imaging of Semicrystalline Polypropylene with 10 nm Resolution', Advanced Materials, 2005, 17,(18), pp. 2203-2206

84 Liedel, C., Hund, M., Olszowka, V., and Boker, A.: 'On the alignment of a cylindrical block copolymer: a time-resolved and 3-dimensional SFM study', Soft Matter, 2012, 8, (4), pp. 995-1002

85 Schulze, A., Hantschel, T., Dathe, A., Eyben, P., Ke, X., and Vandervorst, W.: 'Electrical tomography using atomic force microscopy and its application towards carbon nanotube-based interconnects', Nanotechnology, 2012, 23, (30), pp. 305707

86 Amstislavsky, S.Y., Brusentsev, E.Y., Okotrub, K.A., and Rozhkova, I.N.: 'Embryo and gamete cryopreservation for genetic resources conservation of laboratory animals', Russ J Dev Biol, 2015, 46, (2), pp. 47-59

87 Larman, M.G., Sheehan, C.B., and Gardner, D.K.: 'Calcium-free vitrification reduces cryoprotectant-induced zona pellucida hardening and increases fertilization rates in mouse oocytes', Reproduction, 2006, 131, (1), pp. 53-61

88 McGann, L.E.: 'Differing actions of penetrating and nonpenetrating cryoprotective agents', Cryobiology, 1978, 15, (4), pp. 382-390

89 Jomha, N.M., McGann, L.E., Law, G.K., and Sharma, R.: 'Cryoprotectant penetration into intact porcine articular cartilage', Journal of Bone & Joint Surgery, British Volume, 2008, 90-B, (SUPP I), pp. 105

90 Janz Fde, L., Debes Ade, A., Cavaglieri Rde, C., Duarte, S.A., Romao, C.M., Moron, A.F., Zugaib, M., and Bydlowski, S.P.: 'Evaluation of distinct freezing methods and cryoprotectants for human amniotic fluid stem cells cryopreservation', Journal of biomedicine & biotechnology, 2012, 2012, pp. 649353

91 Bhat, A., Irorere, V., Bartlett, T., Hill, D., Kedia, G., Morris, M., Charalampopoulos, D., and Radecka, I.: 'Bacillus subtilis natto: a non-toxic source of poly-y-glutamic acid that could be used as a cryoprotectant for probiotic bacteria', AMB Expr, 2013,3,(1), pp. 1-9

92 Rosato, M.P., and Iaffaldano, N.: 'Cryopreservation of rabbit semen: comparing the effects of different cryoprotectants, cryoprotectant-free vitrification, and the use of albumin plus osmoprotectants on sperm survival and fertility after standard vapor freezing and vitrification', Theriogenology, 2013, 79, (3), pp. 508-516

93 Chauvigne, F., Lubzens, E., and Cerda, J.: 'Design and characterization of genetically engineered zebrafish aquaporin-3 mutants highly permeable to the cryoprotectant ethylene glycol', BMC biotechnology, 2011, 11, pp. 34

94 P, I.: 'Effect of sucrose and propylene glycol on the vitrification of sheep oocytes', Journal of Cell and Animal Biology, 2013, 7, (3), pp. 25-30

95 Bruyas, J.F., Sanson, J.P., Battut, I., Fieni, F., and Tainturier, D.: 'Comparison of the cryoprotectant properties of glycerol and ethylene glycol for early (day 6) equine embryos', Journal of reproduction and fertility. Supplement, 2000, (56), pp. 549-560

96 Thirumala, S., Gimble, J.M., and Devireddy, R.V.: 'Evaluation of methylcellulose and dimethyl sulfoxide as the cryoprotectants in a serum-free freezing media for cryopreservation of adipose-derived adult stem cells', Stem cells and development, 2010, 19, (4), pp. 513-522

97 Mori, C., Yabuuchi, A., Ezoe, K., Murata, N., Takayama, Y., Okimura, T., Uchiyama, K., Takakura, K., Abe, H., Wada, K., Okuno, T., Kobayashi, T., and Kato, K.: 'Hydroxypropyl cellulose as an option for supplementation of cryoprotectant solutions for embryo vitrification in human assisted reproductive technologies', Reproductive biomedicine online, 2015, 30, (6), pp. 613-621

98 Chi, H.J., Koo, J.J., Kim, M.Y., Joo, J.Y., Chang, S.S., and Chung, K.S.: 'Cryopreservation of human embryos using ethylene glycol in controlled slow freezing', Human reproduction (Oxford, England), 2002, 17, (8), pp. 2146-2151

99 Eto, T., Takahashi, R., Kamisako, T., Hioki, K., and Sotomaru, Y.: 'A study on cryoprotectant solution suitable for vitrification of rat two-cell stage embryos', Cryobiology, 2014, 68, (1), pp. 147-151

100 Jeffries, E.M., Allen, R.A., Gao, J., Pesce, M., and Wang, Y.: 'Highly elastic and suturable electrospun poly(glycerol sebacate) fibrous scaffolds', Acta biomaterialia, 2015, 18, (0), pp. 30-39

101 Lace, R., Murray-Dunning, C., and Williams, R.: 'Biomaterials for ocular reconstruction', Journal of Materials Science, 2014, 50, (4), pp. 1523-1534

102 Song, Z.-m., Shi, B., Ding, J.-x., Zhuang, X.-l., Zhang, X.-n., Fu, C.-f., and Chen, X.-s.: 'Prevention of postoperative tendon adhesion by biodegradable electrospun

membrane of poly(lactide-co-glycolide)', Chinese Journal of Polymer Science, 2015, 33, (4), pp. 587-596

103 Zhao, F., Vaughan, T.J., and McNamara, L.M.: 'Multiscale fluid-structure interaction modelling to determine the mechanical stimulation of bone cells in a tissue engineered scaffold', Biomechanics and modeling in mechanobiology, 2015, 14, (2), pp. 231-243

104 'А. Г. Федяков, О. H. Древаль, В. И. Севастьянов, Н. В. Перова, А. В. Кузнецов, Г. Н. Чапандзе. Экспериментально-клиническое обоснование применения биодеградируемых имплантатов в хирургическом лечении поражений периферических нервов. Журнал "Вопросы нейрохирургии им. Н. Н. Бурденко", 2010, №3, с. 15-18.'

105 Zhu, G.C., Gu, Y.Q., Geng, X., Feng, Z.G., Zhang, S.W., Ye, L., and Wang, Z.G.: 'Experimental study on the construction of small three-dimensional tissue engineered grafts of electrospun poly-epsilon-caprolactone', Journal of materials science. Materials in medicine, 2015, 26, (2), pp. 112

106 Amoore, L., and De Goede, M.: 'Governance, risk and dataveillance in the war on terror', Crime Law Soc Change, 2005, 43, (2-3), pp. 149-173

107 Cartmill, B.T., Parham, D.M., Strike, P.W., Griffiths, L., and Parkin, В.: 'How do absorbable sutures absorb? A prospective double-blind randomized clinical study of tissue reaction to polyglactin 910 sutures in human skin', Orbit, 2014, 33, (6), pp. 437443

108 Pihlajamaki, H., Tynninen, O., Karjalainen, P., and Rokkanen, P.: 'The impact of polyglycolide membrane on a tendon after surgical rejoining. A histological and histomorphometric analysis in rabbits', Journal of biomedical materials research. Part A, 2007, 81, (4), pp. 987-993

109 Costa, M.P., Teixeira, N.H., Longo, M.V., Gemperli, R., and Costa, H.J.: 'Combined polyglycolic acid tube and autografting versus autografting or polyglycolic acid tube alone. A comparative study of peripheral nerve regeneration in rats', Acta cirurgica brasileira / Sociedade Brasileira para Desenvolvimento Pesquisa em Cirurgia, 2015, 30,(1), pp. 46-53

110 Zhu, Y., Liang, C., Bo, Y., and Xu, S.: 'Non-isothermal crystallization behavior of compatibilized polypropylene/recycled polyethylene terephthalate blends', Journal of Thermal Analysis and Calorimetry, 2014, 119, (3), pp. 2005-2013

111 Makarawo, T.P., Reynolds, R.A., and Cullen, M.L.: 'Polylactide bioabsorbable struts for chest wall reconstruction in a pediatric patient', The Annals of thoracic surgery, 2015, 99, (2), pp. 689-691

112 Guo, S.Z., Heuzey, M.C., and Therriault, D.: 'Properties of polylactide inks for solvent-cast printing of three-dimensional freeform microstructures', Langmuir : the ACS journal of surfaces and colloids, 2014, 30, (4), pp. 1142-1150

113 Water, J.J., Bohr, A., Boetker, J., Aho, J., Sandler, N., Nielsen, H.M., and Rantanen, J.: 'Three-dimensional printing of drug-eluting implants: preparation of an antimicrobial polylactide feedstock material', Journal of pharmaceutical sciences, 2015, 104, (3), pp. 1099-1107

114 Gonzalez-Perez, F., Cobianchi, S., Geuna, S., Barwig, C., Freier, T., Udina, E., and Navarro, X.: 'Tubulization with chitosan guides for the repair of long gap peripheral nerve injury in the rat', Microsurgery, 2015, 35, (4), pp. 300-308

115 Shen, Z.Q., Hu, J., Wang, J.L., and Zhou, Y.X.: 'Comparison of polycaprolactone and starch/polycaprolactone blends as carbon source for biological denitrification', International Journal of Environmental Science and Technology, 2014, 12, (4), pp. 1235-1242

116 de Mel, A., Yap, T., Cittadella, G., Hale, L., Maghsoudlou, P., de Coppi, P., Birchall, M., and Seifalian, A.: 'A potential platform for developing 3D tubular scaffolds for paediatric organ development', J Mater Sci: Mater Med, 2015, 26, (3), pp. 1-8

117 Alhusein, N., Blagbrough, I.S., and De Bank, P.A.: 'Electrospun matrices for localised controlled drug delivery: release of tetracycline hydrochloride from layers of polycaprolactone and poly(ethylene-co-vinyl acetate)', Drug Delivery and Translational Research, 2012, 2, (6), pp. 477-488

118 Osten, K.M., Aluthge, D.C., and Mehrkhodavandi, P.: 'The effect of steric changes on the isoselectivity of dinuclear indium catalysts for lactide polymerization', Dalton Transactions, 2015,44, (13), pp. 6126-6139

119 Kim, J.A., and Van Abel, D.: 'Neocollagenesis in human tissue injected with a polycaprolactone-based dermal filler', Journal of cosmetic and laser therapy : official publication of the European Society for Laser Dermatology, 2014, pp. 1-3

120 Xu, Z., Zhu, J., Liao, X., and Ni, H.: 'Thermal behavior of poly (ethylene terephthalate)/Si02/Ti02 nano composites prepared via in situ polymerization', Journal of the Iranian Chemical Society, 2014, 12, (5), pp. 765-770

121 Finosh, G., and Jayabalan, M.: 'Hybrid amphiphilic bimodal hydrogels having mechanical and biological recognition characteristics for cardiac tissue engineering', RSC Advances, 2015, 5, (48), pp. 38183-38201

122 Mallick, B.: 'Analysis of strain-induced crystallinity in neutron-irradiated amorphous PET fiber', Appl. Phys. A, 2015, 119, (2), pp. 653-657

123 Ma, Z., Kotaki, M., Yong, T., He, W., and Ramakrishna, S.: 'Surface engineering of electrospun polyethylene terephthalate (PET) nanofibers towards development of a new material for blood vessel engineering', Biomaterials, 2005, 26, (15), pp. 2527-2536

124 Huang, Z., Bi, L., Zhang, Z., and Han, Y.: 'Effects of dimethylolpropionic acid modification on the characteristics of polyethylene terephthalate fibers', Molecular medicine reports, 2012, 6, (4), pp. 709-715

125 Ebadi, H., and Mehdipour-Ataei, S.: 'Heat-resistant, pyridine-based polyamides containing ether and ester units with improved solubility', Chinese Journal of Polymer Science, 2009, 28, (1), pp. 29-37

126 Buccella, M., Dorigato, A., Pasqualini, E., Caldara, M., and Fambri, L.: 'Thermo-mechanical properties of Polyamide 6 chemically modified by chain extension with Polyamide/Polycarbonate blend', J Polym Res, 2012, 19, (8), pp. 1-9

127 Surguchenko, V.A., Ponomareva, A.S., Kirsanova, L.A., Skaleckij, N.N., and Sevastianov, V.I.: 'The cell-engineered construct of cartilage on the basis of biopolymer hydrogel matrix and human adipose tissue-derived mesenchymal stromal cells (in vitro study)', Journal of biomedical materials research. Part A, 2015, 103, (2), pp. 463-470

128 Sevastianov, V.l., Dukhina, G.A., Grigoriev, A.M., Perova, N.V., Kirsanova, L.A., Skaletskiy, N.N., Akhaladze, D.G., and Gautier, S.V.: 'The Functional Effectiveness of a Cell-Engineered Construct for the Regeneration of Articular Cartilage', Russian Journal of Transplantology and Artificial Organs, 2015, (1), pp. 86

129 Srisuwan, Y., Srihanam, P., and Baimark, Y.: 'Preparation of Silk Fibroin Microspheres and Its Application to Protein Adsorption', Journal of Macromolecular Science, Part A, 2009, 46, (5), pp. 521-525

130 'Yodthong Baimark and Prasong Srihanam, 2009. Effect of Methanol Treatment on Regenerated Silk Fibroin Microparticles Prepared by the Emulsification-Diffusion Technique. Journal of Applied Sciences, 9: 3876-3881.'

131 Mahaphasukwat, S., Shimamoto, K., Hayashida, S., Sekiguchi, Y., and Sato, C.: 'Mode I critical fracture energy of adhesively bonded joints between glass fiber reinforced thermoplastics', Appl Adhes Sei, 2015, 3, (1), pp. 1-13

132 Cui, H.-W., Suganuma, K., and Uchida, H.: 'Highly stretchable, electrically conductive textiles fabricated from silver nanowires and cupro fabrics using a simple dipping-drying method', Nano Res., 2015, 8, (5), pp. 1604-1614

133 Jalilian, S., and Yeganeh, H.: 'Preparation and properties of biodegradable Polyurethane networks from carbonated soybean oil', Polym. Bull., 2015, 72, (6), pp. 1379-1392

134 Schüttler, K., Pöttgen, S., Getgood, A., Rominger, M., Fuchs-Winkelmann, S., Roessler, P., Ziring, E., and Efe, T.: 'Improvement in outcomes after implantation of a novel polyurethane meniscal scaffold for the treatment of medial meniscus deficiency', Knee Surg Sports Traumatol Arthrose, 2015, 23, (7), pp. 1929-1935

135 Breslauer, D.N., Muller, S.J., and Lee, L.P.: 'Generation of monodisperse silk microspheres prepared with microiluidics', Biomacromolecules, 2010, 11, (3), pp. 643647

136 Skorotetcky, M.S., Borshchev, O.V., Surin, N.M., Meshkov, I.B., Muzafarov, A.M., and Ponomarenko, S.A.: 'Novel Cross-Linked Luminescent Silicone Composites Based on Reactive Nanostructured Organosilicon Luminophores', Silicon, 2014, 7, (2), pp. 191-200

137 Surovikin, Y.V., and Likholobov, V.A.: 'Synthesis and properties of a new generation of carbon materials from the Sibunit family modified with silicon compounds', Solid Fuel Chemistry, 2014, 48, (6), pp. 335-348

138 Liu, Q., Shao, L., Fan, H., Long, Y., Zhao, N., Yang, S., Zhang, X., and Xu, J.: 'Characterization of maxillofacial silicone elastomer reinforced with different hollow microspheres', Journal of Materials Science, 2015, 50, (11), pp. 3976-3983

139 Zolotareva, N., and Semenov, V.: 'MicroChannel Thermocured Silicone Rubber', Silicon, 2014, 7, (2), pp. 89-93

140 Lonys, L., Vanhoestenberghe, A., Julemont, N., Godet, S., Delplancke, M.-P., Mathys, P., and Nonclercq, A.: 'Silicone rubber encapsulation for an endoscopically implantable gastrostimulator', Med Biol Eng Comput, 2015, 53, (4), pp. 319-329

141 Nikolaeva, T.I., Kuznetsova, S.M., and Tiktopulo, E.I.: 'Does collagen microunfolding stimulate fibril formation?', Biophysics, 2010, 54, (6), pp. 683-685

142 Markel, M.D., Hayashi, K., and Thabit, G., Ill: 'Basic Properties of Collagen Shrinkage and Laser-Collagen Interactions', in Gerber, B., Knight, M.N., and Siebert, W. (Eds.): 'Lasers in the Musculoskeletal System' (Springer Berlin Heidelberg, 2001), pp. 162-169

143 Dawson, J., Schussler, O., Al-Madhoun, A., Menard, C., Ruel, M., and Skerjanc, I.S.: 'Collagen scaffolds with or without the addition of RGD peptides support cardiomyogenesis after aggregation of mouse embryonic stem cells', In vitro cellular & developmental biology. Animal, 2011, 47, (9), pp. 653-664

144 Chaisri, P., Chingsungnoen, A., and Siri, S.: 'Repetitive Gly-Leu-Lys-Gly-Glu-Asn-Arg-Gly-Asp peptide derived from collagen and fibronectin for improving cell-scaffold interaction', Applied biochemistry and biotechnology, 2015, 175, (5), pp. 2489-2500

145 Kretzschmar, M., Bieri, O., Miska, M., Wiewiorski, M., Hainc, N., Valderrabano, V., and Studler, U.: 'Characterization of the collagen component of cartilage repair tissue of the talus with quantitative MRI: comparison of T2 relaxation time measurements with a diffusion-weighted double-echo steady-state sequence (dwDESS)', European radiology, 2015, 25, (4), pp. 980-986

146 Togo, S., Sato, T., Sugiura, H., Wang, X., Basma, H., Nelson, A., Liu, X., Bargar, T.W., Sharp, J.G., and Rennard, S.I.: 'Differentiation of embryonic stem cells into fibroblast-like cells in three-dimensional type I collagen gel cultures', In vitro cellular & developmental biology. Animal, 2011, 47, (2), pp. 114-124

147 Werkmeister, J., Edwards, G., and Ramshaw, J.M.: 'Collagen-Based Vascular Prostheses', in Wise, D., Gresser, J., Trantolo, D., Cattaneo, M., Lewandrowski, K.-U., and Yaszemski, M. (Eds.): 'Biomaterials Engineering and Devices: Human Applications' (Humana Press, 2000), pp. 121-136

148 Bhat, S.: 'Cardiovascular Implants and Extracorporeal Devices': 'Biomaterials' (Springer Netherlands, 2002), pp. 130-162

149 Tran, A., Brown, S., Rosenberg, J., and Hovsepian, D.: 'Tract Embolization With Gelatin Sponge Slurry for Prevention of Pneumothorax After Percutaneous Computed Tomography-Guided Lung Biopsy', Cardiovasc Intervent Radiol, 2014, 37, (6), pp. 1546-1553

150 Chiu, C.-H., Shih, H.-C., Jwo, S.-C., and Hsieh, M.-F.: 'Effect of Crosslinkers on Physical Properties of Gelatin Hollow Tubes for Tissue Engineering Application', in Dössel, O., and Schlegel, W. (Eds.): 'World Congress on Medical Physics and Biomedical Engineering, September 7 - 12, 2009, Munich, Germany' (Springer Berlin Heidelberg, 2010), pp. 293-296

151 Chou, K., Chiu, H., Lin, J., Huang, W., Chen, P., Xiao, W., Chen, T., and Wang, L.: 'The Effect of Microwave Treatment on the Drug Release Property of Gelatin Microspheres', in Goh, J. (Ed.): 'The 15th International Conference on Biomedical Engineering' (Springer International Publishing, 2014), pp. 726-729

152 Parot, P., Dufrene, Y.F., Hinterdorfer, P., Le Grimellec, C., Navajas, D., Pellequer, J.L., and Scheuring, S.: 'Past, present and future of atomic force microscopy in life sciences and medicine', Journal of molecular recognition : JMR, 2007, 20, (6), pp. 418-431

153 Ankudinov, A.V., Yanul, M.L., Slipchenko, S.O., Shelaev, A.V., Dorozhkin, P.S., Podoskin, A.A., and Tarasov, I.S.: 'Investigation of the light field of a semiconductor diode laser', Opt. Express, 2014, 22, (21), pp. 26438-26448

154 Новикова, Л., Шорманов, В., Беляева, Г., Полонская, М., Беляева, Т., and Ахметзянова, И.: 'Получение коллагена и некоторых лекарственных препаратов на его основе', Курский научно-практический вестник "Человек и его здоровье", 2011,(1), pp. 139-145

155 Tretenichenko, Е.М., Datsun, V.M., Ignatyuk, L.N., and Nud'ga, L.A.: 'Preparation and properties of chitin and chitosan from a hydroid polyp', Russian Journal of Applied Chemistry, 2006, 79, (8), pp. 1341-1346

156 Kaya, M., Akata, I., Baran, Т., and Mente§, A.: 'Physicochemical Properties of Chitin and Chitosan Produced from Medicinal Fungus (Fomitopsis pinicola)', Food Biophysics, 2015, 10, (2), pp. 162-168

157 Greben', V.P., Rodzik, I.G., and Kolzunova, L.G.: 'Effect of modification of a sulfonic cation-exchange membrane with cross-linked chitosan on the selectivity of the transport of magnesium and calcium ions relative to sodium ions', Russian Journal of Applied Chemistry, 2011, 84, (3), pp. 473-478

158 Bashash, S., Saeidpourazar, R., and Jalili, N.: 'Development, analysis and control of a high-speed laser-free atomic force microscope', The Review of scientific instruments, 2010, 81, (2), pp. 023797-023791

159 Sogias, I.A., Williams, A.C., and Khutoryanskiy, V.V.: 'Why is Chitosan Mucoadhesive?', Biomacromolecules, 2008, 9, (7), pp. 1837-1842

160 Bhattarai, N., Gunn, J., and Zhang, M.: 'Chitosan-based hydrogels for controlled, localized drug delivery', Advanced drug delivery reviews, 2010, 62, (1), pp. 83-99

161 Pradines, В., Bories, C., Vauthier, C., Ponchel, G., Loiseau, P.M., and Bouchemal, K.: 'Drug-Free Chitosan Coated Poly(isobutylcyanoacrylate) Nanoparticles Are Active Against Trichomonas vaginalis and Non-Toxic Towards Pig Vaginal Mucosa', Pharmaceutical research, 2015, 32, (4), pp. 1229-1236

162 Abou Taleb, M.F., Alkahtani, A., and Mohamed, S.K.: 'Radiation synthesis and characterization of sodium alginate/chitosan/hydroxyapatite nanocomposite hydrogels: a drug delivery system for liver cancer', Polymer Bulletin, 2015, 72, (4), pp. 725-742

163 Grigoriadi, К., Giannakas, A., Ladavos, A.K., and Barkoula, N.-M.: 'Interplay between processing and performance in chitosan-based clay nanocomposite films', Polymer Bulletin, 2015, 72, (5), pp. 1145-1161

164 Teterina, A.Y., Fedotov, A.Y., Egorov, A.A., Barinov, S.M., and Komlev, V.S.: 'Microstructure formation in porous calcium phosphate-chitosan bone cements', Inorganic Materials, 2015, 51, (4), pp. 396-399

165 Vioque, A.: 'Transformation of Cyanobacteria', in León, R., Galván, A., and Fernández, E. (Eds.): 'Transgenic Microalgae as Green Cell Factories' (Springer New York, 2007), pp. 12-22

166 Beltrán, F.J.E., Muñoz-Saldaña, J., Torres-Torres, D., Torres-Martínez, R., and Schneider, G.A.: 'Atomic force microscopy cantilever simulation by finite element methods for quantitative atomic force acoustic microscopy measurements', Journal of Materials Research, 2006, 21, (12), pp. 3072-3079

167 Sasidharan, R.S., Bhat, S.G., and Chandrasekaran, M.: 'Biocompatible polyhydroxybutyrate (PHB) production by marine Vibrio azureus BTKB33 under submerged fermentation', Annals of Microbiology, 2014, 65, (1), pp. 455-465

168 'Василец B.H., Заитов JI.M., Милентьев А.Ю., Недосеев С.Л., Шварцкопф П.В., Егорова В.А., Севастьянов В.И. Создание и биологические испытания новых матриксов из биорезорбируемых материалов. Вестник трансплантологии и искусственных органов, 2010, Т. XII, № 2, стр. 67-73.'

169 Wadbua, P., Promdonkoy, В., Maensiri, S., and Siri, S.: 'Different properties of electrospun fibrous scaffolds of separated heavy-chain and light-chain fibroins of Bombyx mori', International journal of biological macromolecules, 2010, 46, (5), pp. 493-501

170 Ho, W.: 'Single-molecule chemistry', The Journal of Chemical Physics, 2002, 117,(24), pp. 11033-11061

171 Tanaka, K., Inoue, S., and Mizuno, S.: 'Hydrophobic interaction of P25, containing Asn-linked oligosaccharide chains, with the H-L complex of silk fibroin produced by Bombyx mori', Insect Biochemistry and Molecular Biology, 1999, 29, (3), pp. 269-276

172 Inoue, S., Tanaka, K., Arisaka, F., Kimura, S., Ohtomo, K., and Mizuno, S.: 'Silk fibroin of Bombyx mori is secreted, assembling a high molecular mass elementary unit consisting of H-chain, L-chain, and P25, with a 6:6:1 molar ratio', The Journal of biological chemistry, 2000, 275, (51), pp. 40517-40528

173 Vepari, C., and Kaplan, D.L.: 'Silk as a Biomaterial', Prog Polym Sci, 2007, 32, (8-9), pp. 991-1007

174 Gandhimathi, C., Venugopal, J.R., Tham, A.Y., Ramakrishna, S., and Kumar, S.D.: 'Biomimetic hybrid nanofibrous substrates for mesenchymal stem cells differentiation into osteogenic cells', Materials science & engineering. C, Materials for biological applications, 2015, 49, pp. 776-785

175 Gholami, A., Tavanai, H., and Moradi, A.R.: 'Production of fibroin nanopowder through electrospraying', Journal of Nanoparticle Research, 2010, 13, (5), pp. 20892098

176 Scherer, M.P., Frank, G., and Gummer, A.W.: 'Experimental determination of the mechanical impedance of atomic force microscopy cantilevers in fluids up to 70 kHz', Journal of Applied Physics, 2000, 88, (5), pp. 2912-2920

177 Dong, Y., Dai, F., Ren, Y., Liu, H., Chen, L., Yang, P., Liu, Y., Li, X., Wang, W., and Xiang, H.: 'Comparative transcriptome analyses on silk glands of six silkmoths imply the genetic basis of silk structure and coloration', BMC Genomics, 2015, 16, (1), pp. 1-14

178 Kim, E.Y., Tripathy, N., Park, J.Y., Lee, S.E., Joo, C.-K., and Khang, G.: 'Silk fibroin film as an efficient carrier for corneal endothelial cells regeneration', Macromolecular Research, 2015, 23, (2), pp. 189-195

179 Lawrence, B.D.: '3 - Processing of Bombyx mori silk for biomedical applications', in Kundu, S.C. (Ed.): 'Silk Biomaterials for Tissue Engineering and Regenerative Medicine' (Woodhead Publishing, 2014), pp. 78-99

180 Smith, R.K., Lewis, P.A., and Weiss, P.S.: 'Patterning self-assembled monolayers', Progress in Surface Science, 2004, 75, (1-2), pp. 1-68

181 Sun, K., Li, H., Li, R., Nian, Z., Li, D., and Xu, C.: 'Silk fibroin/collagen and silk fibroin/chitosan blended three-dimensional scaffolds for tissue engineering', European

journal of orthopaedic surgery & traumatology : orthopedie traumatologic, 2015, 25, (2), pp. 243-249

182 'Агапов И.И., Мойсенович M.M., Васильева T.B., Пустовалова О.Л., Коньков А.С., Архипова А.Ю., Соколова О.С., Богуш В.Г., Севастьянов В.И., Дебабов В.Г., Кирпичников М.П.. Биодеградируемые матриксы из регенерированного шелка для медицинских целей. Доклады Академии наук, 2010, том 433, № 5, с.699-702.'

183 Lian, X.-J., Wang, S., and Zhu, H.-S.: 'Surface properties and cytocompatibillity of silk fibroin films cast from aqueous solutions in different concentrations', Frontiers of Materials Science in China, 2010, 4, (1), pp. 57-63

184 Wang, P., Pi, В., Wang, J.-N., Zhu, X.-S., and Yang, H.-L.: 'Preparation and properties of calcium sulfate bone cement incorporated with silk fibroin and Sema3A-loaded chitosan microspheres', Frontiers of Materials Science, 2015, 9, (1), pp. 51-65

185 Wenk, E., Wandrey, A.J., Merkle, H.P., and Meinel, L.: 'Silk fibroin spheres as a platform for controlled drug delivery', Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society, 2008, 132, (1), pp. 26-34

186 Vehoff, Т., Glisovic, A., Schollmeyer, H., Zippelius, A., and Salditt, Т.: 'Mechanical properties of spider dragline silk: humidity, hysteresis, and relaxation', Biophysical journal, 2007, 93, (12), pp. 4425-4432

187 Kluge, J.A., Rabotyagova, O., Leisk, G.G., and Kaplan, D.L.: 'Spider silks and their applications', Trends in Biotechnology, 2008, 26, (5), pp. 244-251

188 Sponner, A., Schlott, В., Vollrath, F., Unger, E., Grosse, F., and Weisshart, K.: 'Characterization of the Protein Components of Nephila clavipes Dragline Silkf', Biochemistry, 2005, 44, (12), pp. 4727-4736

189 van Beek, J.D., Hess, S., Vollrath, F., and Meier, B.H.: 'The molecular structure of spider dragline silk: folding and orientation of the protein backbone', Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2002, 99, (16), pp. 10266-10271

190 Rousseau, M.-E., Lefevre, T., and Pezolet, M.: 'Conformation and Orientation of Proteins in Various Types of Silk Fibers Produced by Nephila clavipes Spiders', Biomacromolecules, 2009, 10, (10), pp. 2945-2953

191 Simmons, A.H., Michal, C.A., and Jelinski, L.W.: 'Molecular orientation and two-component nature of the crystalline fraction of spider dragline silk', Science (New York, N.Y.), 1996, 271, (5245), pp. 84-87

192 Thiel, B.L., Guess, K.B., and Viney, C.: 'Non-periodic lattice crystals in the hierarchical microstructure of spider (major ampullate) silk', Biopolymers, 1997, 41, (7), pp. 703-719

193 Cunniff, P.M., Fossey, S.A., Auerbach, M.A., Song, J.W., Kaplan, D.L., Adams, W.W., Eby, R.K., Mahoney, D., and Vezie, D.L.: 'Mechanical and thermal properties of dragline silk from the spider Nephila clavipes', Polymers for Advanced Technologies, 1994, 5, (8), pp. 401-410

194 Agnarsson, I., Boutry, C., and Blackledge, T.A.: 'Spider silk aging: initial improvement in a high performance material followed by slow degradation', Journal of experimental zoology. Part A, Ecological genetics and physiology, 2008, 309, (8), pp. 494-504

195 Osaki, S., Yamamoto, K., Kajiwara, A., and Murata, M.: 'Evaluation of the Resistance of Spider Silk to Ultraviolet Irradiation', Polymer Journal, 2004, 36, (8), pp. 623-627

196 Sapede, D., Seydel, T., Forsyth, V.T., Koza, M.M., Schweins, R., Vollrath, F., and Riekel, C.: 'Nanofibrillar Structure and Molecular Mobility in Spider Dragline Silk', Macromolecules, 2005, 38, (20), pp. 8447-8453

197 Yang, J., Barr, L.A., Fahnestock, S.R., and Liu, Z.B.: 'High yield recombinant silk-like protein production in transgenic plants through protein targeting', Transgenic research, 2005, 14, (3), pp. 313-324

198 Scheller, J., Henggeler, D., Viviani, A., and Conrad, U.: 'Purification of spider silk-elastin from transgenic plants and application for human chondrocyte proliferation', Transgenic research, 2004, 13, (1), pp. 51-57

199 Wen, H., Lan, X., Zhang, Y., Zhao, T., Wang, Y., Kajiura, Z., and Nakagaki, M.: 'Transgenic silkworms (Bombyx mori) produce recombinant spider dragline silk in cocoons', Molecular biology reports, 2010, 37, (4), pp. 1815-1821

200 Slotta, U., Tammer, M., Kremer, F., Koelsch, P., and Scheibel, T.: 'Structural Analysis of Spider Silk Films', Supramolecular Chemistry, 2006, 18, (5), pp. 465-471

201 Lazaris, A., Arcidiacono, S., Huang, Y., Zhou, J.F., Duguay, F., Chretien, N., Welsh, E.A., Soares, J.W., and Karatzas, C.N.: 'Spider silk fibers spun from soluble recombinant silk produced in mammalian cells', Science (New York, N.Y.), 2002, 295, (5554), pp. 472-476

202 Grip, S., Johansson, J., and Hedhammar, M.: 'Engineered disulfides improve mechanical properties of recombinant spider silk', Protein science : a publication of the Protein Society, 2009, 18, (5), pp. 1012-1022

203 Rabotyagova, O.S., Cebe, P., and Kaplan, D.L.: 'Self-assembly of genetically engineered spider silk block copolymers', Biomacromolecules, 2009, 10, (2), pp. 229236

204 Hauptmann, V., Menzel, M., Weichert, N., Reimers, K., Spohn, U., and Conrad, U.: 'In planta production of ELPylated spidroin-based proteins results in non-cytotoxic biopolymers', BMC biotechnology, 2015, 15, (1), pp. 1-14

205 'M.M. Moisenovich, O.L. Pustovalova, A.Yu. Arhipova, T.V. Vasiljeva, O.S. Sokolova, V.G. Bogush, V.G. Debabov, V.l. Sevastianov, M.P. Kirpichnikov, I.I. Agapov In vitro and In vivo Biocompatibility Studies of a Recombinant Analogue of Spidroin 1 Scaffolds. J. Biomed. Mater. Research, 2010, Part A, V. 96A, №1, PP. 125131.'

206 Al-Zoreky, N., and Al-Otaibi, M.: 'Suitability of camel milk for making yogurt', Food Sei Biotechnol, 2015, 24, (2), pp. 601-606

207 Shibukawa, Y., Sato, M., Kimura, M., Sobhan, U., Shimada, M., Nishiyama, A., Kawaguchi, A., Soya, M., Kuroda, H., Katakura, A., Ichinohe, T., and Tazaki, M.: 'Odontoblasts as sensory receptors: transient receptor potential channels, pannexin-1, and ionotropic ATP receptors mediate intercellular odontoblast-neuron signal

transduction', Pflugers Archiv : European journal of physiology, 2015, 467, (4), pp. 843-863

208 Zhang, X.-Z., Tian, F.-J., Hou, Y.-M., and Ou, Z.-H.: 'Preparation and in vitro in vivo characterization of polyelectrolyte alginate-chitosan complex based microspheres loaded with verapamil hydrochloride for improved oral drug delivery', Journal of Inclusion Phenomena and Macrocyclic Chemistry, 2015, 81, (3-4), pp. 429-440

209 Perets, A., Baruch, Y., Weisbuch, F., Shoshany, G., Neufeld, G., and Cohen, S.: 'Enhancing the vascularization of three-dimensional porous alginate scaffolds by incorporating controlled release basic fibroblast growth factor microspheres', Journal of biomedical materials research. Part A, 2003, 65, (4), pp. 489-497

210 Qiao, P.-y., Li, F.-f., Dong, L.-m., Xu, Т., and Xie, Q.-f.: 'Delivering MC3T3-E1 cells into injectable calcium phosphate cement through alginate-chitosan microcapsules for bone tissue engineering', J. Zhejiang Univ. Sci. B, 2014, 15, (4), pp. 382-392

211 Orive, G., Tam, S.K., Pedraz, J.L., and Hallé, J.-P.: 'Biocompatibility of alginate-poly-l-lysine microcapsules for cell therapy', Biomaterials, 2006, 27, (20), pp. 36913700

212 Heywood, H.K., Sembi, P.K., Lee, D.A., and Bader, D.L.: 'Cellular utilization determines viability and matrix distribution profiles in chondrocyte-seeded alginate constructs', Tissue engineering, 2004, 10, (9-10), pp. 1467-1479

213 'Шагидулин М.Ю., Онищенко H.A., Крашенинников M.E., Ильинский И.М., Можейко Н.П., Шмерко Н.П., Андриянова А.А., Аврамов П.В., Немец Е.А., Севастьянов В.И., Готье С.В. Выживание клеток печени, иммобилизованных на ЗО-матриксах, при моделировании печеночной недостаточности. Вестник трансплантологии и искусственных органов, 2011, Т. XIII, JSfe 3, стр. 59-66.'

214 'Сургученко В.А., Пономарева А.С., Ефимов А.Е., Немец Е.А., Агапов И.И., Севастьянов В.И. Особенности адгезии и пролиферации фибробластов мыши линии NIH/3T3 на пленках из бактериального сополимера поли(3-гидроксибутират-со-3-гидроксивалерата) с различной шероховатостью поверхности. Вестник трансплантологии и искусственных органов, 2012, № 1, стр. 72-77.'

215 Frederiksen, К., Guy, R.H., and Petersson, К.: 'Formulation considerations in the design of topical, polymeric film-forming systems for sustained drug delivery to the skin', European journal of pharmaceutics and biopharmaceutics : official journal of Arbeitsgemeinschaft fur Pharmazeutische Verfahrenstechnik e.V, 2015, 91, pp. 9-15

216 'В. И. Севастьянов, E. А. Немец, В. П. Столяров, В. А. Баранов, Н. Н. Божко, В. Г. Назаров. Сравнительное исследование влияния некоторых методов модификации поверхности пленок полиэтилена на взаимодействие с компонентами крови. Перспективные материалы, 2010, № 4, стр. 41-48.'

217 da Silva, L.C.E., Bertran, С.А., and Gon9alves, M.C.: 'Water vapor-induced formation of poly(e-caprolactone) membranes for guided bone regeneration', Journal of Materials Science, 2015, 50, (11), pp. 4122-4131

218 Thorngkham, P., Paradee, N., Niamlang, S., and Sirivat, A.: 'Permeation Study of Indomethacin from Polycarbazole/Natural Rubber Blend Film for Electric Field Controlled Transdermal Delivery', Journal of pharmaceutical sciences, 2015, 104, (5), pp. 1795-1803

219 Nair, R.S., and Nair, S.: 'Permeation Studies Of Captopril Transdermal Films Through Human Cadaver Skin', Curr Drug Deliv, 2015

220 Ramineni, S.K., Fowler, C.B., Fisher, P.D., Cunningham, L.L., and Puleo, D.A.: 'Effects of epidermal growth factor-loaded mucoadhesive films on wounded oral tissue rafts', Biomedical materials, 2015, 10, (1), pp. 015026

221 Song, H., Yin, L., Chilian, W.M., and Zhang Newby, B.M.: 'Dewetting based fabrication of fibrous micro-scaffolds as potential injectable cell carriers', Materials science & engineering. C, Materials for biological applications, 2015, 48, pp. 663-672

222 Aubry, P., Brochet, E., du Fretay, X.H., Bouton-Brochet, S., Ibrahim, H., Arrault, X., Hvass, U., and Juliard, J.M.: 'Early malfunction of polyvinyl alcohol membrane-covered atrial septal defect closure devices', Circulation. Cardiovascular interventions, 2014, 7, (5), pp. 721-722

223 Hujaya, S.D., Marchioli, G., Roelofs, K., van Apeldoorn, A.A., Moroni, L., Karperien, M., Paulusse, J.M., and Engbersen, J.F.: 'Poly(amido amine)-based multilayered thin films on 2D and 3D supports for surface-mediated cell transfection',

Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society, 2015, 205, pp. 181-189

224 Kaizawa, Y., Kakinoki, R., Ikeguchi, R., Ohta, S., Noguchi, T., Oda, H., and Matsuda, S.: 'Bridging a 30 mm defect in the canine ulnar nerve using vessel-containing conduits with implantation of bone marrow stromal cells', Microsurgery, 2015

225 Zhang, P., Wang, Z., Kou, Y., Han, N., Xu, C„ Yin, X., Wang, Y., and Feng, X.: 'Role of lumbricus extract in the nerve amplification effect during peripheral nerve regeneration', American journal of translational research, 2014, 6, (6), pp. 876-885

226 Dikina, A.D., Strobel, H.A., Lai, B.P., Rolle, M.W., and Alsberg, E.: 'Engineered cartilaginous tubes for tracheal tissue replacement via self-assembly and fusion of human mesenchymal stem cell constructs', Biomaterials, 2015, 52, pp. 452-462

227 Eguchi, Y., Ohtori, S., Sekino, M., and Ueno, S.: 'Effectiveness of magnetically aligned collagen for neural regeneration in vitro and in vivo', Bioelectromagnetics, 2015,36, (3), pp. 233-243

228 Yamanaka, T., Hosoi, H., Murai, T., Kobayashi, T., Inada, Y., and Nakamura, T.: 'Regeneration of the nerves in the aerial cavity with an artificial nerve conduit -reconstruction of chorda tympani nerve gaps', PloS one, 2014, 9, (4), pp. e92258

229 Liang, J.H., Zhou, X., Peng, P.X., Zheng, Z.B., and Yu, X.L.: '[Experimental study of replacement of an esophageal segment with an nitinol alloy composite artificial esophagus]', Zhonghua wai ke za zhi [Chinese journal of surgery], 2006, 44, (14), pp. 952-955

230 Liang, X.L., and Liang, J.H.: 'Effect of Slip Time in Forming Neo-Esophageal Stenosis After Replacement of a Thoracic Esophagus With Nitinol Artificial Esophagus', Artificial organs, 2015, 39, (7), pp. 607-614

231 Liang, J.H., Zhou, X., Zheng, Z.B., and Liang, X.L.: 'Polyester connecting ring improves outcome in nitinol composite artificial esophagus', ASAIO journal (American Society for Artificial Internal Organs : 1992), 2009, 55, (5), pp. 514-518

232 Yunoki, S., Hatayama, H., Ebisawa, M., Kondo, E., and Yasuda, K.: 'A novel fabrication method to create a thick collagen bundle composed of uniaxially aligned

fibrils: An essential technology for the development of artificial tendon/ligament matrices', J Biomed Mater Res A, 2015, 103, (9), pp. 3054-3065

233 Xu, X., Huang, T., Liu, Z., Wen, H., Ye, L., Hu, Y., Yu, H., and Pan, X.: 'Hamstring tendon autograft versus LARS artificial ligament for arthroscopic posterior cruciate ligament reconstruction in a long-term follow-up', Archives of orthopaedic and trauma surgery, 2014, 134, (12), pp. 1753-1759

234 Jiang, J., Wan, F., Yang, J., Hao, W., Wang, Y., Yao, J., Shao, Z., Zhang, P., Chen, J., Zhou, L., and Chen, S.: 'Enhancement of osseointegration of polyethylene terephthalate artificial ligament by coating of silk fibroin and depositing of hydroxyapatite', International journal ofnanomedicine, 2014, 9, pp. 4569-4580

235 Oryan, A., Moshiri, A., and Meimandi-Parizi, A.: 'Role of embedded pure xenogenous bovine platelet gel on experimental tendon healing, modelling and remodelling', BioDrugs : clinical immunotherapeutics, biopharmaceuticals and gene therapy, 2014, 28, (6), pp. 537-556

236 Kocsis, G., McCulloch, T.A., Thyagarajan, D., and Wallace, W.A.: 'The biological response to a failed extra-articular polyester ligament used for AC Joint reconstruction at the shoulder girdle: a retrieval analysis of five cases', The bone & joint journal, 2015, 97-b, (1), pp. 83-88

237 Finosh, G.T., Jayabalan, M., Vandana, S., and Raghu, K.G.: 'Hybrid alginate-polyester bimodal network hydrogel for tissue engineering - Influence of structured water on long-term cellular growth', Colloids and surfaces. B, Biointerfaces, 2015

238 Ming, J., Jiang, Z., Wang, P., Bie, S., and Zuo, B.: 'Silk fibroin/sodium alginate fibrous hydrogels regulated hydroxyapatite crystal growth', Materials science & engineering. C, Materials for biological applications, 2015, 51, pp. 287-293

239 Oh, D.X., Kim, S., Lee, D., and Hwang, D.S.: 'Tunicate-mimetic nano fibrous hydrogel adhesive with improved wet adhesion', Acta biomaterialia, 2015, 20, (0), pp. 104-112

240 Morales-Hurtado, M., Zeng, X., Gonzalez-Rodriguez, P., Ten Elshof, J.E., and van der Heide, E.: 'A new water absorbable mechanical Epidermal skin equivalent: The

combination of hydrophobic PDMS and hydrophilic PVA hydrogel', Journal of the mechanical behavior of biomedical materials, 2015, 46, pp. 305-317

241 Leng, X., Liu, В., Su, В., Liang, M., Shi, L., Li, S., Qu, S., Fu, X., Liu, Y., Yao, M., Kaplan, D.L., Wang, Y., and Wang, X.: 'In situ ultrasound imaging of silk hydrogel degradation and neovascularization', Journal of tissue engineering and regenerative medicine, 2015

242 Tajdaran, K., Shoichet, M.S., Gordon, Т., and Borschel, G.H.: 'A novel polymeric drug delivery system for localized and sustained release of tacrolimus (FK506)', Biotechnology and bioengineering, 2015, 112, (9), pp. 1948-1953

243 Zehnder, Т., Sarker, В., Boccaccini, A.R., and Detsch, R.: 'Evaluation of an alginate-gelatine crosslinked hydrogel for bioplotting', Biofabrication, 2015, 7, (2), pp. 025001

244 Stevens, K.R., Miller, J.S., Blakely, B.L., Chen, C.S., and Bhatia, S.N.: 'Degradable hydrogels derived from PEG-diacrylamide for hepatic tissue engineering', J Biomed Mater Res A, 2015

245 'Кирсанова JI.A., Баранова H.B., Бубенцова Г.Н., Скалецкая Г.Н., Перова Н.В., Севастьянов В.И., Скалецкий Н.Н., Влияние микроструктурированного коллагенсодержащего гидрогеля на культуры островковых клеток поджелудочной железы. Вестник трансплантологии и искусственных органов, 2014, №1, С. 29-33'

246 'Севастьянов В. И., Духина Г. А., Григорьев А. М., Перова Н. В., Кирсанова Л. А., Скалецкий Н. Н., Ахаладзе Д. Г., Готье С. В. Функциональная эффективность биомедицинского клеточного продукта для регенерации суставного хряща (экспериментальная модель остеоартроза). Вестник трансплантологии и искусственных органов, 2015; 17(1): 86-96.'

247 Nicolas, J., Mura, S., Brambilla, D., Mackiewicz, N., and Couvreur, P.: 'Design, functionalization strategies and biomedical applications of targeted biodegradable/biocompatible polymer-based nanocarriers for drug delivery', Chemical Society reviews, 2013, 42, (3), pp. 1147-1235

248 Yadav, S., Rai, V., Mahato, M., Singh, M., Deka, S.R., and Sharma, A.K.: 'Vitamin E-TPGS stabilized self-assembled tripeptide nanostructures for drug delivery', Current topics in medicinal chemistry, 2015, 15, (13), pp. 1227-1235

249 Caldorera-Moore, M.E., Liechty, W.B., and Peppas, N.A.: 'Responsive Theranostic Systems: Integration of Diagnostic Imaging Agents and Responsive Controlled Release Drug Delivery Carriers', Accounts of Chemical Research, 2011, 44, (10), pp. 1061-1070

250 'Богородский С.Э., Кротова Л.И., Минаева C.A., Мишаков Г.В., Попов В.К., Басок Ю.Б., Севастьянов В.И. Сверхкритическая флюидная микронизация и инкапсуляция ибупрофена в микрочастицы алифатических полиэфиров. Перспективные материалы, 2013, №1, с. 23-32.'

251 Yoshida, Т., Lai, Т.С., Kwon, G.S., and Sako, К.: 'pH- and ion-sensitive polymers for drug delivery', Expert opinion on drug delivery, 2013, 10, (11), pp. 14971513

252 Hu, J., Zhang, G., and Liu, S.: 'Enzyme-responsive polymeric assemblies, nanoparticles and hydrogels', Chemical Society reviews, 2012, 41, (18), pp. 5933-5949

253 Cheng, R., Meng, F., Deng, C., Klok, H.A., and Zhong, Z.: 'Dual and multistimuli responsive polymeric nanoparticles for programmed site-specific drug delivery', Biomaterials, 2013, 34, (14), pp. 3647-3657

254 Wang, L., Hao, Y., Li, H., Zhao, Y., Meng, D., Li, D., Shi, J., Zhang, H., Zhang, Z., and Zhang, Y.: 'Co-delivery of doxorubicin and siRNA for glioma therapy by a brain targeting system: angiopep-2-modified poly(lactic-co-glycolic acid) nanoparticles', Journal of drug targeting, 2015, pp. 1-15

255 Hermanson, K.D., Huemmerich, D., Scheibel, Т., and Bausch, A.R.: 'Engineered Microcapsules Fabricated from Reconstituted Spider Silk', Advanced Materials, 2007, 19, (14), pp. 1810-1815

256 Homar, M., Suligoj, D., and Gasperlin, M.: 'Preparation of microcapsules with self-microemulsifying core by a vibrating nozzle method', Journal of microencapsulation, 2007, 24, (1), pp. 72-81

257 Chan, O.C., So, K.F., and Chan, B.P.: 'Fabrication of nano-fibrous collagen microspheres for protein delivery and effects of photochemical crosslinking on release kinetics', Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society, 2008, 129, (2), pp. 135-143

258 Rasey, J.S., Cornwell, M.M., Maurer, B.J., Boyles, D.J., Hofstrand, P., Chin, L., and Cerveny, C.: 'Growth and radiation response of cells grown in macroporous gelatin microcarriers (CultiSpher-G)', The British journal of cancer. Supplement, 1996, 27, pp. S78-81

259 Hayashi, K., and Tabata, Y.: 'Preparation of stem cell aggregates with gelatin microspheres to enhance biological functions', Acta biomaterialia, 2011, 7, (7), pp. 2797-2803

260 Bellas, E., Lo, T.J., Fournier, E.P., Brown, J.E., Abbott, R.D., Gil, E.S., Marra, K.G., Rubin, J.P., Leisk, G.G., and Kaplan, D.L.: 'Injectable silk foams for soft tissue regeneration', Advanced healthcare materials, 2015, 4, (3), pp. 452-459

261 'Богородский С.Э., Василец B.H.. Кротова JI.И., Минаева С.А., Миронов А.В., Немец Е.А., Сургученко В.А., Попов В.К., Севастьянов В.И. Формирование биоактивных высокопористых полимерных матриксов для тканевой инженерии. Перспективные материалы, 2013, №5, с. 44-54.'

262 Stoppel, W.L., Ни, D., Domian, I.J., Kaplan, D.L., and Black, L.D.: 'Anisotropic silk biomaterials containing cardiac extracellular matrix for cardiac tissue engineering', Biomedical materials, 2015, 10, (3), pp. 034105

263 Chen, C.Y., Ke, C.J., Yen, K.C., Hsieh, H.C., Sun, J.S., and Lin, F.H.: '3D Porous Calcium-Alginate Scaffolds Cell Culture System Improved Human Osteoblast Cell Clusters for Cell Therapy', Theranostics, 2015, 5, (6), pp. 643-655

264 Pot, M.W., Faraj, K.A., Adawy, A., van Enckevort, W.J., van Moerkerk, H.T., Vlieg, E., Daamen, W.F., and van Kuppevelt, Т.Н.: 'Versatile wedge-based system for the construction of unidirectional collagen scaffolds by directional freezing: practical and theoretical considerations', ACS applied materials & interfaces, 2015, 7, (16), pp. 8495-8505

265 Luo, Z., Jiang, L., Xu, Y., Li, H., Xu, W., Wu, S., Wang, Y., Tang, Z., Lv, Y., and Yang, L.: 'Mechano growth factor (MGF) and transforming growth factor (TGF)-beta3 functionalized silk scaffolds enhance articular hyaline cartilage regeneration in rabbit model', Biomaterials, 2015, 52, pp. 463-475

266 Cai, R., Nakamoto, T., Kawazoe, N., and Chen, G.: 'Influence of stepwise chondrogenesis-mimicking 3D extracellular matrix on chondrogenic differentiation of mesenchymal stem cells', Biomaterials, 2015, 52, pp. 199-207

267 Gao, Z., Wu, T., Xu, J., Liu, G., Xie, Y., Zhang, C., Wang, J., and Wang, S.: 'Generation of Bioartificial Salivary Gland Using Whole-Organ Decellularized Bioscaffold', Cells Tissues Organs, 2015

268 Bogorodskii, S.E., Vasilets, V.N., Krotova, L.I., Minaeva, S.A., Mironov, A.V., Nemets, E.A., Surguchenko, V.A., Popov, V.K., and Sevast'yanov, V.I.: 'Formation of bioactive highly porous polymer matrixes for tissue engineering', Inorg. Mater. Appl. Res., 2013, 4, (5), pp. 448-456

269 Hou, Q., Grijpma, D.W., and Feijen, J.: 'Porous polymeric structures for tissue engineering prepared by a coagulation, compression moulding and salt leaching technique', Biomaterials, 2003, 24, (11), pp. 1937-1947

270 Mandal, B.B., and Kundu, S.C.: 'Cell proliferation and migration in silk fibroin 3D scaffolds', Biomaterials, 2009, 30, (15), pp. 2956-2965

271 Altman, G.H., Diaz, F., Jakuba, C., Calabro, T., Horan, R.L., Chen, J., Lu, H., Richmond, J., and Kaplan, D.L.: 'Silk-based biomaterials', Biomaterials, 2003, 24, (3), pp. 401-416

272 Haugh, M.G., Murphy, C.M., and O'Brien, F.J.: 'Novel freeze-drying methods to produce a range of collagen-glycosaminoglycan scaffolds with tailored mean pore sizes', Tissue Eng Part C Methods, 2010, 16, (5), pp. 887-894

273 Zarkoob, S., Eby, R.K., Reneker, D.H., Hudson, S.D., Ertley, D., and Adams, W.W.: 'Structure and morphology of electrospun silk nanofibers', Polymer, 2004, 45, (11), pp. 3973-3977

274 Matthews, J.A., Wnek, G.E., Simpson, D.G., and Bowlin, G.L.: 'Electrospinning of Collagen Nanofibers', Biomacromolecules, 2002, 3, (2), pp. 232-238

275 Ohkawa, K., Cha, D., Kim, H., Nishida, A., and Yamamoto, H.: 'Electrospinning of Chitosan', Macromolecular Rapid Communications, 2004, 25, (18), pp. 1600-1605

276 Ma, Z., Kotaki, M., Inai, R., and Ramakrishna, S.: 'Potential of nanofiber matrix as tissue-engineering scaffolds', Tissue Eng, 2005, 11, (1-2), pp. 101-109

277 Jakab, K., Norotte, C., Damon, B., Marga, F., Neagu, A., Besch-Williford, C.L., Kachurin, A., Church, K.H., Park, H., Mironov, V., Markwald, R., Vunjak-Novakovic, G., and Forgacs, G.: 'Tissue engineering by self-assembly of cells printed into topologically defined structures', Tissue Eng Part A, 2008, 14, (3), pp. 413-421

278 Norotte, C., Marga, F.S., Niklason, L.E., and Forgacs, G.: 'Scaffold-free vascular tissue engineering using bioprinting', Biomaterials, 2009, 30, (30), pp. 5910-5917

279 Murphy, S.V., and Atala, A.: '3D bioprinting of tissues and organs', Nat Biotech, 2014, 32, (8), pp. 773-785

280 Wang, Q., Xia, Q., Wu, Y„ Zhang, X., Wen, F., Chen, X., Zhang, S., Heng, B.C., He, Y., and Ouyang, H.W.: '3D-Printed Atsttrin-Incorporated Alginate/Hydroxyapatite Scaffold Promotes Bone Defect Regeneration with TNF/TNFR Signaling Involvement', Adv Healthc Mater, 2015, 4, (11), pp. 1701-1708

281 Arenas-Herrera, J.E., Ko, I.K., Atala, A., and Yoo, J.J.: 'Decellularization for whole organ bioengineering', Biomed Mater, 2013, 8, (1), pp. 014106

282 Nakayama, K.H., Batchelder, C.A., Lee, C.I., and Tarantal, A.F.: 'Decellularized Rhesus Monkey Kidney as a Three-Dimensional Scaffold for Renal Tissue Engineering', Tissue engineering. Part A, 2010, 16, (7), pp. 2207-2216

283 Ott, H.C., Matthiesen, T.S., Goh, S.K., Black, L.D., Kren, S.M., Netoff, T.I., and Taylor, D.A.: 'Perfusion-decellularized matrix: using nature's platform to engineer a bioartificial heart', Nat Med, 2008, 14, (2), pp. 213-221

284 Petersen, T.H., Calle, E.A., Colehour, M.B., and Niklason, L.E.: 'Matrix composition and mechanics of decellularized lung scaffolds', Cells, tissues, organs, 2012, 195, (3), pp. 222-231

285 Baptista, P.M., Siddiqui, M.M., Lozier, G., Rodriguez, S.R., Atala, A., and Soker, S.: 'The use of whole organ decellularization for the generation of a vascularized liver organoid', Hepatology, 2011, 53, (2), pp. 604-617

286 Uygun, B.E., Soto-Gutierrez, A., Yagi, H., Izamis, M.L., Guzzardi, M.A., Shulman, C., Milwid, J., Kobayashi, N., Tilles, A., Berthiaume, F., Hertl, M., Nahmias, Y., Yarmush, M.L., and Uygun, K.: 'Organ reengineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix', Nat Med, 2010, 16, (7), pp. 814-820

287 Zheng, X.L., Xiang, J.X., Wu, W.Q., Liu, X.M., Liu, W.Y., and Lv, Y.: '[Preparation of a decellularized scaffold derived from human liver tissue]', Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao, 2015, 35, (7), pp. 1028-1033

288 Gardin, C., Ricci, S., Ferroni, L., Guazzo, R., Sbricoli, L., De Benedictis, G., Finotti, L., Isola, M., Bressan, E., and Zavan, B.: 'Decellularization and Delipidation Protocols of Bovine Bone and Pericardium for Bone Grafting and Guided Bone Regeneration Procedures', PLoS One, 2015, 10, (7), pp. eO 132344

289 Park, K.M., and Woo, H.M.: 'Systemic decellularization for multi-organ scaffolds in rats', Transplant Proc, 2012, 44, (4), pp. 1151-1154

290 Mosmann, T.: 'Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays', J Immunol Methods, 1983, 65, (12), pp. 55-63

291 Matsko, N., and Mueller, M.: 'AFM of biological material embedded in epoxy resin', Journal of structural biology, 2004, 146, (3), pp. 334-343

292 Efimov, A.E., Gnaegi, H., Schaller, R., Grogger, W., Hofer, F., and Matsko, N.B.: 'Analysis of native structures of soft materials by cryo scanning probe tomography', Soft Matter, 2012, 8, (38), pp. 9756-9760

293 Bleeker, M.A., Smid, H.M., Van Aelst, A.C., Van Loon, J.J., and Vet, L.E.: 'Antennal sensilla of two parasitoid wasps: a comparative scanning electron microscopy study', Microscopy research and technique, 2004, 63, (5), pp. 266-273

294 Shirakigawa, N., Ijima, H., and Takei, T.: 'Decellularized liver as a practical scaffold with a vascular network template for liver tissue engineering', Journal of bioscience and bioengineering, 2012, 114, (5), pp. 546-551

295 Gao, J., Crapo, P.M., and Wang, Y.: 'Macroporous elastomeric scaffolds with extensive micropores for soft tissue engineering', Tissue engineering, 2006, 12, (4), pp. 917-925

296 Ho, M.H., Kuo, P.Y., Hsieh, H.J., Hsien, T.Y., Hou, L.T., Lai, J.Y., and Wang, D.M.: 'Preparation of porous scaffolds by using freeze-extraction and freeze-gelation methods', Biomaterials, 2004, 25, (1), pp. 129-138

297 Zong, X., Bien, H., Chung, C.Y., Yin, L., Fang, D., Hsiao, B.S., Chu, B., and Entcheva, E.: 'Electrospun fine-textured scaffolds for heart tissue constructs', Biomaterials, 2005, 26, (26), pp. 5330-5338

298 Boerckel, J.D., Mason, D.E., McDermott, A.M., and Alsberg, E.: 'Microcomputed tomography: approaches and applications in bioengineering', Stem cell research & therapy, 2014, 5, (6), pp. 144

299 Wang, Q., Chen, Q., Yang, Y., and Shao, Z.: 'Effect of various dissolution systems on the molecular weight of regenerated silk fibroin', Biomacromolecules, 2013, 14,(1), pp. 285-289

300 Sokolova, O.S., Bogush, V.G., Davydova, L.I., Polevova, S.V., Antonov, S.A., Neretina, T.V., Klinov, D.V., Debabov, V.G., and Kirpichnikov, M.P.: 'The formation of a quaternary structure by recombinant analogs of spider silk proteins', Molecular Biology, 2010,44, (1), pp. 150-157

301 Wang, S., Kowal, T.J., Marei, M.K., Falk, M.M., and Jain, H.: 'Nanoporosity significantly enhances the biological performance of engineered glass tissue scaffolds', Tissue engineering. Part A, 2013, 19, (13-14), pp. 1632-1640

302 Lee, Y.J., Elosegui-Artola, A., Le, K.H.T., and Kim, G.-M.: 'Morphological Cues for Regulation of Cell Adhesion and Motility with Tailored Electrospun Scaffolds of PCL and PCL/PVP Blends', Cellular and Molecular Bioengineering, 2013, 6, (4), pp. 482-495

303 Ketabchi, A., Komm, K., Miles-Rossouw, M., Cassani, D.A., and Variola, F.: 'Nanoporous titanium surfaces for sustained elution of proteins and antibiotics', PloS one, 2014, 9, (3), pp. e92080

304 Yao, L., Phan, F., and Li, Y.: 'Collagen microsphere serving as a cell carrier supports oligodendrocyte progenitor cell growth and differentiation for neurite myelination in vitro', Stem cell research & therapy, 2013,4, (5), pp. 1-8

305 Balakrishnan, В., and Jayakrishnan, A.: 'Self-cross-linking biopolymers as injectable in situ forming biodegradable scaffolds', Biomaterials, 2005, 26, (18), pp. 3941-3951

306 Sun, J., and Tan, H.: 'Alginate-Based Biomaterials for Regenerative Medicine Applications', Materials, 2013, 6, (4), pp. 1285-1309

307 Dhoot, N.O., Tobias, C.A., Fischer, I., and Wheatley, M.A.: 'Peptide-modified alginate surfaces as a growth permissive substrate for neurite outgrowth', Journal of biomedical materials research. Part A, 2004, 71, (2), pp. 191-200

308 Gilbert, T.W., Sellaro, T.L., and Badylak, S.F.: 'Decellularization of tissues and organs', Biomaterials, 2006, 27, (19), pp. 3675-3683

309 Koning, R.I., and Koster, A.J.: 'Cryo-electron tomography in biology and medicine', Ann Anat, 2009, 191, (5), pp. 427-445

310 Tokuyasu, K.T.: 'A technique for ultracryotomy of cell suspensions and tissues', J Cell Biol, 1973, 57, (2), pp. 551-565

311 Akiyama, Т., Suter, K., Rooij, N.F.d., Baumgartner, A., Gildemeister, A.E., Ihn, Т., Ensslin, K., and Staufer, U.: 'Scanning Probe with Tuning Fork Sensor, Microfabricated Silicon Cantilever and Conductive Tip for Microscopy at Cryogenic Temperature', Japanese Journal of Applied Physics, 2006, 45, (3S), pp. 1992

312 Akiyama, Т., Staufer, U., and de Rooij, N.F.: 'Self-sensing and self-actuating probe based on quartz tuning fork combined with microfabricated cantilever for dynamic mode atomic force microscopy', Applied Surface Science, 2003, 210, (1—2), pp. 18-21

313 'Мисуркин П.И., Аксёнова H.A., Тимашев П.С., Тимофеева В.А., Соловьёва А.Б. Параметризация хаотического рельефа поверхностей по данным атомно-силовой микроскопии, Российский химический журнал. 2009. Т. LIII. № 6. С. 8492'

!

314 Mirsaidov, U., Timashev, S.F., Polyakov, Y.S., Misurkin, P.I., Musaev, I., and Polyakov, S.V.: 'Analytical method for parameterizing the random profile components of nanosurfaces imaged by atomic force microscopy', Analyst, 2011, 136, (3), pp. 570576

315 Balakrishnan, B., Mohanty, M., Umashankar, P.R., and Jayakrishnan, A.: 'Evaluation of an in situ forming hydrogel wound dressing based on oxidized alginate and gelatin', Biomaterials, 2005, 26, (32), pp. 6335-6342

316 Liu, X., Jin, X., and Ma, P.X.: 'Nanofibrous hollow microspheres self-assembled from star-shaped polymers as injectable cell carriers for knee repair', Nat Mater, 2011, 10, (5), pp. 398-406

317 Khanna, O., Larson, J.C., Moya, M.L., Opara, E.C., and Brey, E.M.: 'Generation of Alginate Microspheres for Biomedical Applications', Journal of Visualized Experiments : JoVE, 2012, (66), pp. 3388