Система оксида азота в динамике действия морфина тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.45, кандидат медицинских наук Перегуд, Данил Игорьевич

• Перегуд, Данил Игорьевич
• кандидат медицинских наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Перегуд, Данил Игорьевич

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Биологические аспекты действия морфина.

1.2 Оксид азота.

1.3 Оксид азота в структуре действия морфина.

1.3.1. Роль оксида азота при действии морфина.

1.3.2. Нитрергическая система при остром и хроническом действии морфина.

1.3.3. Система оксида азота в печени и тимусе при воздействии опиатов.

1.4. Антиоксиданты и иммуномодуляторы в терапии опийной наркомании.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Введение морфина.

2.2.2. Оценка синдрома отмены морфина.

2.2.3. Введение галавита и аурола.

2.2.4. Получение биологического материала для исследований.

2.2.5. Биохимические методы исследования.

2.2.6. Статистическая обработка данных.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Глава 3. ВЛИЯНИЕ ОДНОКРАТНОГО ВВЕДЕНИЯ МОРФИНА НА НИТРЕРГИЧЕСКУЮ СИСТЕМУ ОТДЕЛОВ ГОЛОВНОГО МОЗГА.

3.1. Влияние однократного введения морфина на активность синтазы оксида азота и концентрацию нитритов и нитратов в отделах головного мозга крыс \Vistar: временная динамика.

3.2. Влияние однократного введения морфина на концентрацию нитритов и нитратов в отделах головного мозга у крыс инбредных линий р]зсЬег-344/М и \УАО/С81о: временная динамика.

Глава 4. ВЛИЯНИЕ СУБХРОНИЧЕСКОГО ВВЕДЕНИЯ МОРФИНА НА СИСТЕМУ ОКСИДА АЗОТА КРЫС.

4.1. Влияние субхронического введения морфина на нитрергическую систему отделов головного крыс.

4.2. Влияние субхронического введения морфина на систему оксида азота в печени и тимусе крыс.

Глава 5. СИСТЕМА ОКСИДА АЗОТА КРЫС ПРИ СИНДРОМЕ ОТМЕНЫ

МОРФИНА.

5.1. Проявления синдрома отмены морфина.

5.2. Влияние синдрома отмены морфина на показатели нитрергической системы отделов головного мозга крыс.

5.3. Влияние синдрома отмены морфина на систему оксида азота в печени и тимусе крыс.

Глава 6. СИСТЕМА ОКСИДА АЗОТА КРЫС В ПОСТАБСТИНЕНТНОМ СОСТОЯНИИ.

6.1. Нитрергическая система отделов мозга крыс в период постабстинентного состояния.

6.2. Система оксида азота в печени и тимусе крыс в период постабстинентного состояния.

Глава 7. АНТИАБСТИНЕНТНАЯ АКТИВНОСТЬ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИ

АКТИВНЫХ СРЕДСТВ: РОЛЬ СИСТЕМЫ ОКСИДА АЗОТА.

7.1. Эффективность иммуномодулятора галавит.

7.2. Эффективность антиоксиданта аурол.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Система оксида азота в динамике действия морфина»

Актуальность проблемы

Согласно официальным статистическим данным на 2004 г. в России зарегистрировано 343 тыс. больных наркоманией, при этом у подавляющего большинства (около 90%) была диагностирована опийная наркомания (Иванец, 2005). Опийная зависимость - это сложное заболевание, имеющее психологические и биологические детерминанты, а её последствия включают изменения в головном мозге и соматических органах. К настоящему времени считается, что определяющее значение в патогенезе опийной наркомании имеют нарушения в мезокортиколимбической системе головного мозга (Williams et al., 2001; Nestler, 2004). Среди таких нарушений особо выделяются патологические изменения в нейромедиаторных системах, системах внутриклеточных посредников и факторов транскрипции, а также генетическом аппарате (Анохина и соавт., 2004; Bailey and M. Connor, 2005). Помимо феномена зависимости, хроническая интоксикация опиатами характеризуется развитием висцеропатий, прежде всего со стороны печени, сердца, почек и иммунной системы. Наибольшую клиническую значимость среди висцеропатий, наблюдаемых при опийной наркомании, имеют гепатопатология и вторичный иммунодефицит, развивающиеся в результате активации свободно-радикальных процессов и иммуносупрессивного действия опиатов соответственно (Панченко и соавт, 1995, 1999, 2001; Гамалея и Наумова, 2002; Наумова и соавт., 2003; McCarthy et al., 2001; Atici et al., 2005).

Среди многообразия биологических процессов, обусловливающих последствия употребления опиатов, определенное место отводится оксиду азота (NO). NO образуется из аминокислоты L-аргинина в реакции, которую катализирует NO-синтаза (NOC) (Alderion et al., 2001). В ходе катаболизма NO образуется множество промежуточных соединений, среди которых наиболее стабильны нитриты и нитраты (NOx") (Ellis et al., 1998). В качестве внутри- и межклеточного посредника NO участвует в физиологических процессах нервной, сердечно-сосудистой и иммунной систем (Moneada et al., 1991).

Использование соединений, влияющих на метаболизм N0, позволило доказать, что нитрергическая система участвует в реализации как острых, так и хронических эффектов морфина (Vaupel et al., 1995; Pataki and Telegdy, 1998; Benamar et al., 2003; Heinzen and Pollack, 2004; Ozek et al., 2003, Javanmardi et al., 2005; Santamaría et al., 2005). Кроме того, с помощью морфологических подходов показано, что при хронической интоксикации морфином изменяется функциональное состояние нитрергической системы в отделах головного мозга (Дюйзен и соавт., 2001, 2003, 2005; Jhamandas et al., 1996; Cuéllar et al., 2000). Однако имеющиеся сведения о характере биохимических сдвигов, а также анатомической локализации изменений нитрергической системы в отделах головного мозга при действии опиатов немногочисленны и противоречивы (Babey et al., 1994; Leza et al., 1996; Kumar and Bhargava, 1997; Zhang et al., 2003). Работы, посвященные влиянию интоксикации опиатами на систему NO в печени (органе-мишени соматической патологии) единичны (Lysle et al., 2000, 2001, 2002), а в тимусе эта система до сих пор не исследована.

Несомненно, что углубление и обогащение фундаментальных знаний о состоянии системы N0 в головном мозге и соматических органах при действии опиатов будет способствовать лучшему пониманию природы опийной наркомании и её последствий, что необходимо, в частности, для пополнения арсенала психиатра-нарколога эффективными патогенетически направленными терапевтическими подходами. Учитывая патогенез висцеропатий при опийной наркомании, и данные об эффективности включения в основную терапию болезней химической зависимости антиоксидантных и иммуномодулирующих средств (Панченко и соавт., 2001; Дудко и соват., 2003; Гамалея и соавт., 2000, 2004), представляется целесообразным оценить антиабстинентную активность новых отечественных препаратов из указанных фармакологических групп, а также определить потенциальное участие системы N0 в механизмах их действия.

Цель работы и основные задачи исследования

Целью работы явилось исследование системы N0 при различных вариантах интоксикации морфином, а также поиск патогенетически направленных путей коррекции синдрома отмены морфина.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Оценить эффекты острого введения морфина на активность NOC и концентрацию N0X" в отделах головного мозга крыс Wistar, а также концентрацию N0X" в отделах головного мозга у крыс с различной чувствительностью к морфину - Fischer-344/N и WAG/GSto.

2. Исследовать влияние субхронической интоксикации морфином на активность NOC и концентрацию NOx" в головном мозге, печени и тимусе крыс Wistar.

3. Оценить активность NOC и концентрацию N0X" в головном мозге, печени и тимусе при спонтанном синдроме отмены морфина у крыс Wistar.

4. Изучить активность NOC и концентрацию N0X" в головном мозге, печени и тимусе в постабстинентном состоянии у крыс Wistar.

5. Оценить антиабстинентный потенциал иммуномодулятора галавита и антиоксиданта аурола у крыс Wistar.

6. Оценить влияние иммуномодулятора галавита и антиоксиданта аурола на активность NOC и концентрацию N0X" в отделах головного мозга, а также в печени и тимусе крыс Wistar при спонтанном синдроме отмены морфина.

Научная новизна

Впервые обнаружено, что инбредные крысы с исходно различной чувствительностью к фармакологическим эффектам морфина отличаются по базальному уровню концентрации N0X" в отделах головного мозга. У более чувствительных к морфину крыс Fischer-344/N концентрация N0X" в коре, стриатуме, среднем мозге и мозжечке выше, чем у менее чувствительных крыс WAG/GSto. Кроме того, обнаружено, что в ответ на введение морфина концентрация МОх" в отделах головного мозга этих линий крыс изменяется неодинаково: у крыс \УАСЛ381о концентрация N0/ повышается в среднем мозге, стриатуме и мозжечке, в то время как у крыс Р15сЬег-344/М этот показатель не изменяется.

Установлено, что изменения активности N00 и концентрации N0*" в головном мозге зависят от длительности введения морфина, а также от продолжительности периода после его отмены. При этом исследуемые показатели не всегда изменяются однонаправленно. При однократном введении морфина наблюдается активация нитрергической системы в стриатуме, среднем мозге и мозжечке, при субхронической интоксикации, напротив, отмечается ее дефицит в среднем мозге. При синдроме отмены изменения метаболизма N0 регион-специфичны: активация нитрергической системы наблюдается в среднем мозге, а в стриатуме выявлен ее дефицит. В постабстинентном состоянии нитрергическая система активируется только в гиппокампе.

Впервые продемонстрировано, что активность кальций-зависимой и кальций-независимой изоформ N00 в печени крыс по-разному изменяются в динамике субхронического введения морфина, синдрома отмены морфина и постабстинентного состояния. Установлено, что субхроническая интоксикация морфином вызывает значительную активацию системы N0 в тимусе.

Впервые показана антиабстинентная активность иммуномодулятора галавита и антиоксиданта аурола. Выявлено, что введение исследуемых препаратов в период отмены морфина сопровождается нормализацией системы N0 в отделах головного мозга и в печени. По-видимому, нормализация нитрергической системы может быть одним из механизмов антиабстинентного эффекта этих препаратов.

Теоретическая ценность к практическая значимость

Проведенные комплексные исследования системы N0 существенно пополнили представления об ее роли в развитии последствий употребления опиатов. Выявлена нейроанатомическая локализация изменений показателей нитрергической системы под действием морфина и в результате его отмены. Установлено, что опиаты изменяют метаболизм N0 не только в головном мозге, но и в печени и тимусе. Показано, что нормализация системы N0 при синдроме отмены морфина, в первую очередь в среднем мозге, может являться одним из нейробиологических факторов, детерминирующих антиабстинентный эффект галавита и аурола.

Согласно результатам работы, показатели единой метаболической системы N0 (активность N00 и концентрация N0*") не всегда однонаправленно изменяются в ответ на введение морфина. Поэтому при оценке системы N0 в различных экспериментальных условиях не следует ограничиваться регистрацией одного из показателей системы N0, а целесообразно определять несколько параметров, что даст более полное представление о метаболизме N0.

Полученные результаты могут лечь в основу разработки патогенетически направленной терапии опийной наркомании, основным инструментом которой могут стать средства, влияющие на систему N0. Учитывая то, что галавит зарегистрирован в фармакологическом комитете РФ, активно используется в клинике и обладает очевидной эффективностью при синдроме отмене морфина в эксперименте, можно рекомендовать его использование в наркологической практике в качестве дополнительного антиабстинентного средства с комплексным типом действия (воздействие как на центральный, так и на соматический компоненты последствий опийной наркомании). Следует также отметить целесообразность дальнейших доклинических испытаний антиоксиданта аурола с целью внедрения его в терапевтическую практику.

Положения, выносимые па защиту

Изменения активности системы N0 в отделах головного мозга, а также в печени и тимусе крыс наблюдаются на всех этапах формирования зависимости от морфина.

Антиоксидант аурол и иммуномодулятор галавит способны купировать синдром отмены морфина, один из механизмов этого действия может быть связан с нормализацией системы N0 в отделах головного мозга и в печени.

Апробация работы

Результаты работы были представлены на III и IV национальной научно-практической конференции с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, 2003 и 2005), III научной конференции и школе-семинаре для молодых ученых «Белки - маркеры патологических состояний» (Астрахань, 2003), XI международном симпозиуме «New Frontiers of Neurochemi stry and Neurophysics on Diagnosis and Treatment of Neurological Diseases» (Мартин, Словакия, 2003), международном симпозиуме «Современные аспекты изучения алкогольной и наркотической зависимости» (Гродно, Беларусь,

2004), научной конференции «Опыт интеграции научных исследований НИИ-ВУЗ-Клиника» (Москва, 2004), XIX съезде Российского физиологического общества им. И.П. Павлова (Екатеринбург, 2004), VIII региональной конференции Европейского общества нейропсихофармакологии (Москва,

2005), научной конференции «Нейрохимия: фундаментальные и прикладные аспекты» (Москва, 2005), XX съезде Международного нейрохимического общества совместно с Европейским нейрохимическим обществом (Инсбрук, Австрия, 2005), международном симпозиуме «Молекулярные механизмы регуляции функции клетки» (Тюмень, 2005).

Заключение диссертации по теме «Наркология», Перегуд, Данил Игорьевич

выводы

1. Изменения системы N0 в разных отделах головного мозга, а также в печени и тимусе крыс при воздействии морфина зависят от длительности интоксикации и продолжительности периода после отмены морфина.

2. Однократное введение морфина крысам \Vistar сопровождается активацией нитрергической системы в стриатуме и мозжечке. Инбредные линии крыс с различной чувствительностью к морфину (ХУАОЛ^о и Р1зсЬег-344/И) исходно различаются по концентрации 1М0Х" в отделах головного мозга. Более того, концентрация N0* в отделах головного мозга инбредных линий крыс в ответ на острую интоксикацию морфином изменяется по-разному, что может свидетельствовать об участии N0 в процессах, определяющих чувствительность к морфину.

3. С увеличением времени субхронической интоксикации наблюдается снижение активности нитрергической системы в среднем мозге. При спонтанном синдроме отмены морфина изменения нитрергической системы в мозге коррелируют с тяжестью абстиненции и характеризуются региональной специфичностью. В постабстинентном периоде нитрергическая система активируется в гиппокампе.

4. В печени при синдроме отмены морфина происходит перераспределение активностей изоформ N00: активность кальций-независимой изоформы снижена, а кальций-зависимой - повышена. В постабстинентном состоянии активность обеих изоформ N00 в печени выше нормальных значений.

5. При субхронической интоксикации морфином в тимусе выявлена активация системы N0, что сопровождается атрофией этого органа; это позволяет связать один из механизмов иммунотоксического действия морфина с активацией системы N0.

6. Иммуномодулятор галавит и антиоксидант аурол частично купируют синдром отмены морфина, однако препараты различаются по специфичности эффектов: галавит редуцирует диарею, птоз и диспноэ, а аурол - отряхивания «по типу мокрой собаки» и диарею. Введение галавита после отмены морфина сопровождается нормализацией параметров нитрергической системы в среднем мозге и гипоталамусе, а при введении аурола параметры нитрергической системы достигают контрольных значений только в среднем мозге. Кроме того, при использовании галавита и аурола соотношение активностей изоформ N00 в печени приближается к нормальному.

7. Биохимические сдвиги в системе N0 головного мозга, печени и тимуса крыс могут быть одним из механизмов реализации острых и хронических эффектов морфина, синдрома отмены, постабстинентных расстройств, а также висцеропатий. В основе антиабстинентного действия галавита и аурола может лежать их способность нормализовать систему N0 мозга и печени.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Перегуд, Данил Игорьевич, 2006 год

1. Анохина И.П., Иванец H.H., Шамакина И.Ю., Кибитов А.И., Воскобоева Е.Ю., Хуснутдинова Э.К. Современные проблемы генетики зависимости от психоактивных веществ. Наркология. 2004. №6. С. 71-78.

2. Боголепов H.H. Изменения дендритов при хронической интоксикации морфином. Арх. Анат. Гистол. Эмбриол. 1981. Т. 81. С. 5-10.

3. Веселовская Н.В., Коваленко А.Е. Наркотики: свойства, действие, фармакокинетика, метаболизм. пособие для работников наркологических больниц, наркдиспансеров, химико-токсикологических и судебно-химических лабораторий. Москва, Триада-Х, 2000. 208 стр.

4. Гамалея Н.Б., Ульянова Л.И., Даренский И.Д. и соавт. Нарушения в системе клеточного иммунитета у больных алкоголизмом и перспективы их коррекции с помощью иммуномодулятора Тактивина. Вопросы наркологии. 2000. № 4. С. 54-60.

5. Гамалея Н.Б., Наумова Т.А. Состояние иммунитета у больных алкоголизмом и наркоманиями. «Руководство по наркологии (Т. I)» в двух томах под ред. проф. H.H. Иванца, Москва, изд-во Медпрактика-М., 2002, С. 94123.

6. Гамалея Н.Б., Шостак O.A., Макарова Н.Е. и соавт. Влияние пирогенала на иммунный статус и патологическое влечение к алкоголю у больных алкоголизмом. Вопрсы наркологии. 2004. № 3. С. 47-56.

7. Головко А.И., Тихомиров С.М., Головко С.И., Леонтьева Л.В., Коноплин Д.А., Романенко О.И. Участие нейромедиаторных систем в развитии абстинентного синдрома при опиатной наркомании. Наркология. 2004. № U.C. 13-24.

8. Дюйзен И.В., Мотавкин П.А., Шорин В.В. Динамика активности NADPH-диафоразы в нейронах шва при хроническом введении опиатов. Бюлл. Эксп. Биол. Мед. 2001. Т. 132. С. 354-357.

9. Дюйзен И.В., Деридович H.H., Курбацкий P.A., Шорин В.В. NO-ергические нейроны ядер шва мозга крысы в норме и при введении опиатов. Морфология. 2003. Т. 123. С. 24-29.

10. Иванец H.H., Винникова М.А. Героиновая наркомания (постабстинентное состояние: клиника и лечение). Из-во «Медпрактика», Москва, 2000. 125 стр.

11. Иванец H.H. Наркология сегодня. Материалы международной конференции «Современные достижения наркологии», Москва, 2005. С. 3-22.

12. Константинопольский М.А., Пирожков C.B., Соловьева А.Г., Панченко Л.Ф., Барков Н.К. Синдром отмены и перекисное окисление липидов при хроническом введении крысам наркотических анальгетиков. Эксп. Клин. Фармакол. 1992. Т. 55. С. 21-24.

13. Латышева Т.В., Щербакова O.A. Новые возможности направленной иммунологической коррекции на примере отечественного иммуномодулятора "Галавит". Росс. Аллергол. Ж. 2004. №1.0. 77-81.

14. Морозов Г.В., Боголепов H.H. Морфинизм. М. Медицина, 1984. 173 стр.

15. Наумова Т.А., Панченко Л.Ф., Пирожков C.B., Баронец В.Ю., Алябьева Т.Н. Нарушение иммунного статуса и патология печени у молодых потребителей героина. Вестник РАМН. 2003. Т. 3. С. 32-36.

16. Онуфриев М.В., Семенова Т.П., Колаева С.Г., Ю.В Моисеева, JI.K. Егорова, Н.В. Гуляева. Активность синтазы оксида азота в отделах мозга сусликов Citellus Undulatus в разных фазах гибернационного цикла. Нейрохимия. 2002. Т. 19. С. 264-268.

17. Панченко Л.Ф., Пирожков C.B., Соловьева А.Г. Антиоксидантные системы и перекисное окисление липидов при наркотической интоксикации. Вопросы наркологии. 1995. № 1. С. 32-36.

18. Проскурякова Т.В. Фармакология и токсикология наркотиков.// «Руководство по наркологии (T. I)» в двух томах под ред. проф. H.H. Иванца, Москва, изд-во Медпрактика-М., 2002, С. 62-73.

19. Сосунов А.А. Оксид азота как межклеточный посредник. Сорос, обр. журнал.2000. Т. 6. С. 27-34.

20. Alderton W.K., Cooper C.E., Knowles R.G. Nitric oxide synthases : structure, function and inhibition. Biochem. J. 2001 Vol. 357. P.593-615.

21. Alexander B. The role of nitric oxide in hepatic metabolism. Nutrition. 1998. Vol. 14. P. 376-390.

22. Ammon-Treiber S., Hollt V. Morphine-induced changes of gene expression in the brain. Add. Biol. 2005. Vol. 10. P. 81-89.van Amsterdam J.G.C., Opperhuizen A. Nitric oxide and biopterin in depression and stress. Psychiatry Res. 1999. Vol. 85. P.33-38.

23. Anraku T., Ikegaya Y., Matsuki N., Nishiyama N. Withdrawal from chronic morphine administration causes prolonged enhancement of immobility in rat forced swimming test. Psychopharmacology. 2001. Vol. 157. P. 217-220.

24. Askew W.E., Charalampous K.D. Effects of morphine administration on cerebellar guanosine 3'^'-monophosphate. Experementia. 1976. Vol. 32. P.1454-1456.

25. Atici S., Cinel I., Cinel L., Doruk N., Eskandari G., Oral U. Liver and kidney toxicity in chronic use of opioids: An experimental long term treatment model. J. Boisci. 2005. Vol. 30. P. 245-252.

26. Babey A.M., Kolesnikov Y., Cheng J., Inturrisi C.E., Trifilletti R.R., Pasternak G.W. Nitric oxide and opioid tolerance. Neuropharmacology. 1994. Vol. 33. P. 1463-1470.

27. Bailey C.P., Connor M. Opioids: cellular mechanisms of tolerance and physical dependence. Curr. Opin. Pharmacol. 2005. Vol. 5. P. 60-68.

28. Barjavel M.J., Bhargava H.N. Effect of opioid receptor agonists on nitric oxide synthase activity in rat cerebral cortex homogenate. Neurosci. Lett. 1994. Vol. 181. P. 27-30.

29. Benamar K., Xin L., Geller E.B., Adler M.W. Effect of central and peripheral administration of a nitric oxide synthase inhibitor on morphine hyperthermia in rats. Brain Res. 2001. Vol. 894. P. 266-73.

30. Benamar K., Yondorf M.Z., Kon D., Geller E.B., Adler M.W. Role of the nitric-oxide synthase isoforms during morphine-induced hyperthermia in rats. J.Pharmacol. Exp. Ther. 2003. Vol. 307. P. 219-222.

31. Bhargava H.N., Bian J.T. Effects of acute administration of L-arginine on morphine antinociception and morphine distribution in central and peripheral tissues of mice. Pharmacol. Biochem. Behav. 1998. Vol. 61. P. 29-33.

32. Bhargava H.N., Cao Y.J. Effect of chronic administration of DPDPE on the activity of nitric oxide synthase in brain regions and spinal cord of mice. Peptides. 1998. Vol. 19. P. 113-117.

33. Bhargava H.N. Drugs that modify opioid tolerance, physical dependence,and abstinence symptoms: preclinical and clinical studies. NIDA Res. Monograph. 1995. Vol. 147. P. 53-83.

34. Bhargava H.N., Thomas P.T., Thorat S., House R.V. Effects of morphine tolerance and abstinence on cellular immune function. Brain Res. 1994. Vol. 642. P. 110.

35. Blalock J.E., Smith E.M. Human leukocyte interferon (HuIFN-alpha): potent endorphin-like opioid activity.Biochem. Biophys. Res. Commun. 1981. Vol. 101. P. 472-478.

36. Blasig J., Herz A., Reinhold K., Zieglgansberger S. Development of physical dependence on morphine in respect to time and dosage and quantification of the precipitated withdrawal syndrome in rats. Psychopharmacologia (Berl.). 1973. Vol.33. P.19-38.

37. Boehning D., Snyder S.H. Novel neural modulators. Annu. Rev. Neurosci. 2003. Vol.26. P. 105-131.

38. Bogdan C. Nitric oxide and the immune response. Nat. Immunol. 2001. Vol. 2. P.907-916.

39. Bradford M. M. A rapid and sensitive method for quantitation of microgram quantities of protein using the principle of protein binding //Anal. Biochem. 1976. Vol. 72. P. 248-254.

40. Brcdt D.S., Snyder S.H. Nitric oxide mediates glutamate-linked enhancement of cGMP levels in the cerebellum. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1989. Vol. 86. P. 9030-9033.

41. Brüne B., von Knethen A., Sandau K. B. Nitric oxide (NO): an effector of apoptosis. Cell Death Differ. 1999. Vol. 6. P.969-975.

42. Bryant H.U., Bernton E.W., Holaday J.W. Immunosuppressive effects of chronic morphine treatment in mice. Life Sci. 1987. Vol.41 P. 1731-1738.

43. Calignano A., Pérsico P., Mancuso F., Sorrentino L. Endogenous nitric oxide modulates morphine-induced changes in locomotion and food intake in mice. Eur. J. Pharmacol. 1993. Vol. 231. P. 415-419.

44. Cappendijk S.L.T., Garrelds I.M., Dzoljic M.R. Nitric oxide in brain tissue, cerebrospinal fluid and plasma of naive and morphine-abstinent rats. Nitric oxide and nervous system. 1994. Laurentians Mountains. Montreal, Canada, Abstracts P. 1.18.

45. Christie N.J., Williams J.T., Osborne P.B., Bellchambers C.E. Where is the locus in opioid withdrawal? Trends. Pharmacol. Sci. 1997.Vol.18. P. 134-140.

46. Conner E.C., Grisham M.B. Nitric oxide: Biochemistry, Physiology, and

47. Pathophysiology. Methods. 1995. Vol. 7. P. 3-13. Connor M., Christie M.J. Opioid receptor signaling mechanisms. Clin. Exp.

48. Physiol. Pharmacol. 1999. Vol. 26. P. 493-499. Cruz M.T., Carmo A., Carvalho A. P., Lopes M.C. Calcium-dependent nitric oxide synthase activity in rat thymocytes. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. Vol. 248. P. 98-103.

49. Doerfler P., Forbush K.A., Perlmutter R.M. Caspase enzyme activity is not essential for apoptosis during thymocyte development. J. Immunol. 2000. Vol. 164. P. 4071-4079.

50. Dougherty P.M., Aronowski J., Drath D., Dafny N. Evidence of neuro-immunologic interactions: cyclosporine modifies opiate withdrawal by effects on the brain and immune components. J. Neuroimmunol. 1987. Vol. 13. P. 331-342. a)

51. Dougherty P.M., Drath D., Dafny N. Evidence of an immune system to brain communication axis that affects central opioid functions: muramyl peptides attenuate opiate withdrawal. Eur. J. Pharmacol. Vol. 141. P. 253-260. 6)

52. Dougherty P.M., Pearl J., Krajewski K.J., Pellis N.R., Dafny N. Differential modification of morphine and methadone dependence by interferon alpha. Neuropharmacology. 1987. Vol. 26. P. 1595-1600. b)

53. Dougherty P.M., Pellis N.R., Dafny N. The brain and the immune system: an intact immune system is essential for the manifestation of withdrawal in opiate addicted rats. Neuroscience. 1990. Vol. 36. P. 285-289.

54. Dum J., Blasig J., Herz A. Buprenorphine: demonstration of physical dependence liability. Eur. J. Pharmacol. 1981. Vol. 70. P. 293-300.

55. Dyuizen I.V., Kurbatskii R.A., Dirlam G.G., Kozhemyako V.B., Zavgorodnyaya M.S. Inducible nitric oxide synthase in the locus coeruleus of human opiate addicts. Eur. Neuropsychopharmacol. 2005. Vol. 15 Suppl. 2. P. S295.

56. Eisch A.J., Barrot M., Schad C.A., Self D.W., Nestler E.J. Opiates inhibit neurogenesis in the adult rat hippocampus.Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2000 Vol. 97. P.7579-7584.

57. Ellis G., Adatia I., Yazdanpanah M., Makela S. Nitrite and nitrate analyses: a clinical biochemistry perspective. Clin. Biochem. 1998. Vol. 31. P. 195-220.

58. Esplugues J.V. NO as a signalling molecule in the nervous system. Br. J. Pharmacol. 2002. V. 135. P. 1079-1095.

59. Fang F., Wang Q., Cao Q., Liu J.Changes of AC/cAMP system and phosphorylation regulation of adenylate cyclase activity in brain regions from morphine-dependent mice. Zhongguo. Yi. Xue. Ke. Yuan. Xue. Bao. 2000. Vol. 22. P. 14-19.

60. Garthwaite J. Glutamate, nitric oxide and cell-cell signaling in the nervous system.

61. Hibbs J.B. Jr., Taintor R.R., Vavrin Z. Macrophge cytotoxicity:role for L-arginine deiminase and imino nitrogen oxidation to nitrite. Science 1987. Vol. 235. P. 473-476.

62. Kelly G.S. Rhodiola Rosea: A Possible Plant Adaptogen. Altern. Med. Rev. 2001. Vol. 6. P. 293-302

63. Kolesnikov Y.A., Pick C.G., Pastenak G.W. NG-nitro-L-arginine prevents morphine tolerance. Eur. J. Pharmacol. 1992. Vol. 221. P. 399-400.

64. Kolesnikov Y.A., Pick C.G., Ciszewska G., Pasternak G.W. Blockade of tolerance to morphine but not to kappa opioids by a nitric oxide synthase inhibitor. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. Vol. 90. P. 5162-516.

65. Kroncke K.-D., Fehsel K., Kolb-Bachofen V. Nitric oxide: cytotoxicity versus cytoprotection how, why, when, and where? Nitric oxide: biology and chemistry. 1997. Vol. 1. P. 107-120.

66. Kumar S., Bhargava H. Time course of the changes in central nitric oxide synthase activity following chronic treatment with morphine in the mouse: reversal by naltrexone. Gen. Pharmacol. 1997. V. 29. P. 223-227.

67. Manzanedo C., Aguilar M.A., Rodriguez-Arias M., Navarro M., Minarro J. 7-Nitroindazole blocks conditioned place preference but not hyperactivity induced by morphine. Behav. Brain. Res. 2004. Vol. 150. P. 73-82.

68. Mao J. NMDA and opioid receptors: their interactions in antinociception,tolerance and neuroplasticityBrain Res. Rev. 1999. Vol.30.P.289-304.

69. McCarthy L., Wetzel M., Sliker J.K., Eisenstein T.K., Rogers T.J. Opioids, opioid receptors, and the immune response. Drug and Alcohol Depend. 2001. Vol. 62. P. 111-123.

70. Misko T.R., Schilling R.J., Salvemini D. et al.// A fluorometric assay for the measurement of nitrite in biological samples. Anal. Biochem. 1993. Vol. 214. P. 11-16.

71. Moncada S., Palmer R.M.J., Higgs E.A. Nitric oxide: physiology, pathophysiology, and pharmacology. Pharmacol. Rev. 1991. Vol. 43. P. 109-142.

72. Montgomery S.P., Dafny N. Cyclophosphamide and Cortisol reduce the severity of morphine withdrawal. Int. J. Immunopharmacol. 1987. Vol. 9. P. 453-457.

73. Moulian N., Truffault F., Gaudry-Talarmain Y.M., Serraf A., Berrih-Aknin S. In vivo and in vitro apoptosis of human thymocytes are associated with nitrotyrosine formation. Blood. 2001. Vol. 97. P. 3521-3530.

74. Munjal I.D., Schmidt D., Spector S. Role of endogenous morphine in the attenuation of opiate withdrawal syndrome by N-acetylmuramyl-L-alanine-D-isoglutamine (MDP). Neuropsychopharmacology. 1996. Vol. 15. P. 99-103.

75. Murad F., Mittal C.K., Arnold W.P., Katsuki S., Kimura H. Guanilate cyclase: Activation by azide, nitro compounds, nitric oxide and hydroxyl radical and inhibition by hemoglobin and myoglobin. Adv. Cyclic Nucleotide Res. 1987. Vol. 9. P. 145-158.

76. Murphy S., Simmons M.L., Agullo L., Garci A., Feinstein D.L., Galea E., Reis D.J., Minc-Golomb D., Schwartz J.P. Synthesis of nitric oxide in CNS glial cells. Trends Neurosci. 1993. Vol. 16. P. 323-328.

77. Nakane, M., Mitchell, J., Forstermann U., Murad F. Phosphorylation by calcium calmodulin-dependent protein kinase II and protein kinase C modulates theactivity of nitric oxide synthase.Biochem. Biophys. Res. Commun. 1991. Vol. 180. P. 1396-1402.

78. Nestler E.J. Molecular mechanisms of drug addiction. J. Neurosci. 1992. Vol. 12. P. 2439-2450.

79. Nestler E.J. Molecular basis of long-term plasticity underlying addiction. Nat. Rev.

80. Pras N., Wichers K.J., Bruins A.P. et al. Plant. Cell. Tissue. Organ. Cult. 1988. Vol. 13. P. 15-26.

81. Prast H., Philippu A. Nitric oxide as modulator of neuronal function. Prog.

82. Salter M., Duffy C., Garthwaite J., Strijbos P.J.L.M. Ex vivo measurement of brain tissue nitrite and nitrate accurately reflects nitric oxide synthase activity in vivo. J. Neurochem. 1996. Vol.66. P. 1683-1690.

83. Salter M., Knowles R.G., Moncada S.// Widespread tissue distribution, species distribution and changes in activity of Ca2+-dependent and Ca2+-independent nitric oxide synthases. FEBS Lett. 1991. Vol. 291. P. 145-149.

84. Santamarta M.T., Ulibarri I., Pineda J. Inhibition of neuronal nitric oxide synthase attenuates the development of morphine tolerance in rats. Synapse. 2005. Vol. 57. P. 38-46.

85. Sahraei H., Poorheidari G., Foadaddini M., Khoshbaten A., Asgari A., Noroozzadeh A., Ghoshooni H., Firoozabadi S.H., Zarrindast M.R. Effects of nitric oxide on morphine self-administration in rat. Pharmacol. Biochem. Behav. 2004. Vol. 77. P. 111-116.

86. Schmidt H., Hoffmann H., Schndler U., Shtenko Z.S., Cunningham D.D., Feelisch M. No NO from NO synthase. Proc. Natl. Aead. Sci. USA. 1996. Vol. 93. P. 14492-14497.

87. Sei Y., Yoshimoto K., Mclntyre T., Skolniek P., Arora P. Morphine-induced thymic hypoplasia is glucocorticoid-dependent. J. Immunol. 1991. Vol. 146. P. 194-196.

88. Sharma S., Klee W., Niremberg M. Morphine receptors as regulators of adenylate cyclase activity. PNAS (USA) 1973. Vol. 72. P. 590-594.

89. Shin I.C., Kim H.C., Swanson J., Hong J.T., Oh K.W. Anxiolytic cffects of acute morphine can be modulated by nitric oxide systems. Pharmacology. 2003. Vol.68. P. 183-189.

90. Sklair-Tavron L., Shi W.-X., Lane S.B., Harris H.W., Bunney B.S., Nestler E.J. Chronic morphine induces visible changes in the morphology of mesolimbic dopamine neurons. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996 Vol. 93, P. 1120211207.

91. Snyder S.H., Ferris C.D. Novel neurotransmitters and their neuropsychiatric relevance. Am. J. Psychiatry. 2000. Vol. 157. P. 1738-1751.

92. Spector S., Munjal I., Schmidt D.E. Effects of the immunostimulant, levamisole, on opiate withdrawal and levels of endogenous opiate alkaloids andmonoamine neurotransmitters in rat brain.Neuropsychopharmacology. 1998. Vol. 19. P. 417-427.

93. Wiencken A.E., Casagrande V.A. Endothelial nitric oxide synthetase (eNOS) in astrocytes: another source of nitric oxide in neocortex. Glia. 1999. Vol. 26. P. 280-290.

94. Wilding T.J., Womack M.D., McCleskey E.W. Fast, local signal transduction between the mu opioid receptor and Ca channels. J. Neurosci. 1995. Vol. 15. P. 4124-4132.

95. Mediating Opioid Dependence. Physiol. Rev. 2001. Vol. 81. P. 299-343. Wink D.A. Mitchel J.B. The chemical biology: insights into regulatory, cytotoxic cytoprotective mechanisms of nitric oxide. Free Radic. Biol. Med. 1998. Vol. 25. P. 434-456.

96. Wise R.A. Opiate reward: sites and substrates. Neurosci. Biobehav. Rev. 1989. Vol. 13. P. 129-133.