Синтез пептидомиметиков - ингибиторов сериновых протеиназ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, кандидат химических наук Сергеев, Максим Евгеньевич

• Сергеев, Максим Евгеньевич
• кандидат химических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат химических наук Сергеев, Максим Евгеньевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

I.1 Ингибиторы протеиназ системы гемостаза.

1.1.1. Тромбин и плазмин - ключевые ферменты системы гемостаза.

1.1.2. Природные ингибиторы ферментов системы гемостаза.

1.1.3 Бифункциональные синтетические ингибиторы тромбина.

1.1.4 Сайт-направленные синтетические ингибиторы тромбина.

1.1.5 Ингибиторы плазмина.

1.1.5.1 Природные ингибиторы плазмина.

1.1.5.2 Синтетические ингибиторы плазмина.

1.1.6. Ингибиторы других протеиназ системы гемостаза.

II. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

II. 1. Синтез N-ацил-а-аминоальдегидов.

11.2. Синтез циклических амидов аминокислот.

11.3. Синтез вторичных амидов пептидов.

11.4. Синтез нуклеопептидов.

11.5. Фармакологические исследования.

III. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

III. 1. Материалы и методы.

III.2. Синтез а-аминоальдегидов.

III.2.1. Общая процедура на примере синтеза Boc-Asp(OtBu)=al.

3.2.1.1. Boc-Asp(OlBu)-OH.

111.2.1.2. Boc-Asp(OlBu)-ONSu.

111.2.1.3. Boc-AspCO'BiO-ol.

1Л.2.1.4. Вос-Азр(0'Ви)=а1.

IH.2.1.5 Синтез пептидил-а-аминоальдегидов, производных Val, Leu, Phe и Lys.

111.3. Синтез циклических амидов аминокислот.

Ш.3.1. Общая процедура на примере синтеза Lys-Pip*2HCl.

III.3.1.1. Синтез Boc2Lys-ONSu.

Ш.3.1.2. Синтез Boc2Lys-Pip.

111.3.1.3. Синтез Lys-Pip*2HCl.

Ш.3.1.4 Синтез защищенных и свободных циклических амидов аминокислот.

111.4. Ферментативный синтез амида пептида ForAlaPheLys-Pip.

111.4.1 Приготовление катализатора (субтилизина-72, сорбированного на силохроме С-80).

111.4.2 Синтез амида ForAlaPheLys-Pip.

111.5. Синтез вторичных амидов пептидов.

111.5.1. Общая процедура на примере синтеза (имидазол-1 -ил)амида N"'-(бензилоксикарбонил)-Ь-аланил-Ь-аланшт-Ь-(0-метил)-глутаминовой кислоты (Cbz-AlaAlaGlu(OMe)-Im).

111.5.2. Синтез вторичных амидов пептидов.

111.6. Синтез нуклеопептидов.

III.6.1. Общая процедура на примере синтеза 3'-O-[N0>-(2,4динитрофенил)-Ь-аланил-Ь-аланил-Ь-лейцил]-2'-дезокситимидина.

III.6.2 Синтез нуклеопептидов, производных dC, dA и dG.

111.7. Методы фармакологических исследований.

111.7.1. Методика определения активности сериновых протеиназ.

111.7.2. Методика ингибирования субтилизина.

111.7.3. Методика ингибирования плазмина.

111.7.4. Методика определения времени эуглобулинового фактор ХПа-зависимого лизиса.

111.7.5. Методика определения времени остановки кровотечения in vivo.

111.7.6. Методика определения объема кровопотери in vivo.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Синтез пептидомиметиков - ингибиторов сериновых протеиназ»

Система свертывания крови в нормальном состоянии находится в динамическом равновесии, при котором фибриновые сгустки постоянно образуются, а затем растворяются. Ключевыми ферментами системы гемостаза, ответственными за данные противоположные процессы, являются тромбин и плазмин. Аномальный избыток одного из этих ферментов приводит к нарушениям системы кровообращения, и современная медицина требует высокоэффективных препаратов как для предотвращения избыточного фибринобразования, так и для остановки кровотечений. Таким образом, центральная роль тромбина и плазмина в регуляции агрегатного состояния крови подталкивает многих ученых к попытке создания сильных и селективных ингибиторов данных протеиназ. Исследователям известно довольно большое количество различных классов ингибиторов тромбина и плазмина, представляющих собой как природные белки и производные пептидов, так и низкомолекулярные синтетические соединения. Однако многие из известных ингибиторов обладают рядом недостатков, такими как недостаточная химическая устойчивость, отсутствие высокой селективности по отношению к различным ферментам крови, усложненные процедуры синтеза и очистки, токсичность для организма. Разработка структуры веществ, селективно ингибирующих либо тромбин, либо плазмин, совмещение удобства синтеза и очистки новых низкомолекулярных производных для использования в медицине в качестве ингибиторов определенных протеиназ системы гемостаза позволит более эффективно осуществлять профилактику и лечение тромбозов и геморрагий.

I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1 Ингибиторы протеиназ системы гемостаза.

1.1.1. Тромбин и плазмин - ключевые ферменты системы гемостаза.

Основными ферментами регуляции агрегатного состояния крови являются тромбин, ответственный за свертывание крови, и плазмин -центральное звено фибринолитической системы. Особое внимание исследователи уделяют изучению тромбина, так как он обладает уникальной функцией в коагуляционном каскаде [1].

Тромбин, инициирующий превращение фибриногена в фибрин и активирующий тромбоциты, является ключевым ферментом тромбообразования. Как и большинство ферментов системы гемостаза, тромбин - это мультикаталитическая сериновая протеиназа, состоящая из двух полипептидных цепей [2]. Тромбин гидролизует четыре связи Arg-Gly в фибриногене [3], при этом из молекулы фибриногена удаляются два фрагмента — отрицательно заряженные фибринопептиды, и образуется фибрин-мономер. Длинные нерастворимые молекулы фибрин-мономера спонтанно ассоциируются в регулярные зигзагообразные структуры с образованием нерастворимого полимерного фибринового сгустка. Он захватывает тромбоциты, эритроциты и другие компоненты крови, в результате чего образуется тромбоцитная пробка - тромб. Кроме превращения фибриногена в фибрин, функция тромбина заключается в переводе множественных факторов коагуляции (например V, VIII) и фактора стабилизации XIII, стабилизирующего фибрин, в активную форму (Va, Villa, Xllla), а также в инициации антикоагулянтных путей через активацию протеина С [4, 5]. Тромбин инициирует некоторые клеточные и сосудистые реакции, такие как агрегация тромбоцитов, эндотелиальное клеточное размножение (пролиферация), сужение и/или расширение самих сосудов и др. [6, 7]. Так как тромбин участвует в таких различных биорегуляторных процессах, ингибирование его активного центра должно быть высокоэффективным при лечении различных заболеваний. При этом важно, чтобы используемые ингибиторы были в достаточной степени специфичными, так как сайт-направленные ингибиторы могут взаимодействовать и с другими компонентами крови.

Плазмин также является сериновой протеиназой, катализирующей расщепление фибрина, в результате чего происходит разрушение тромбов. В фибрине плазмин гидролизует пептидные связи, образованные остатками лизина и аргинина. Субстратами плазмина являются также: фибриноген, факторы свертывания крови V, VIII и ХГ1, гликопротеины мембран тромбоцитов, компоненты Cl, СЗ и С5 системы комплемента и другие. В плазме крови плазмин находится в виде предшественника (профермента) плазминогена, который существует в двух формах, различающихся содержанием углеводного компонента [8]. Одна форма содержит гликозилированные остатки Asn-288 и Thr-345, другая - только гликозилированный Thr-345. Плазмин представляет собой одну полипептидную цепь, состоящую у человека из 790 аминокислотных остатков (полностью расшифрованы первичная структура плазмина и его гена). Третичная структура плазминогена представлена семью доменами: пять из них-гомологичные кренделеобразные структуры, массой около 10 кДа. Подобные структуры обнаружены также у протромбина, тканевого активатора плазминогена, урокиназы и фактора XII свертывания крови. Два домена сформированы участком полипептидной цепи, соответствующим легкой цепи плазмина. В пяти кренделеобразных доменах расположены участки связывания субстрата с лизином и аргинином, представляющие собой полости, в формировании которых участвуют остатки аминокислот, преимущественно ароматической природы. Эти участки определяют сродство плазминогена и плазмина к фибрину, на поверхности которого происходит превращение плазминогена в плазмин. Оно сопровождается расщеплением одной пептидной связи между аргинином и валином в положениях 560 и 561, соответственно. При этом образуется двухцепочечная структура плазмина. Тяжелая цепь плазмина содержит все пять кренделеобразных доменов плазминогена. Нативный плазмин с остатком глутаминовой кислоты на конце (С1и-плазмин) способен автокаталитически, в результате гидролиза пептидной связи между двумя аминокислотными остатками лизина в положениях 76-77 и отщепления ТЧ-концевого пептида с массой 9 к Да, превращаться в ЬуБ-плазмин, обладающий более высоким сродством к фибрину. Обе формы плазмина способны расщеплять эту связь в проферменте с образованием Ьуз-плазминогена. Последний превращается в Ьуз-плазмин в результате действия ферментов - тканевого активатора плазминогена, урокиназы, комплекса плазминогена со стрептокиназой. Активация плазминогена ускоряется в 1000 раз в присутствии фибрина, на поверхности которого происходит концентрирование профермента и его активаторов. Связывание с фибрином защищает плазмин от инактивации ингибитором а2-антиплазмином плазмы крови, так как во взаимодействии с ним участвуют те же фрагменты структуры фермента, которые участвуют при связывании с фибрином [9].

Так как тромбин и плазмин осуществляют противоположные функции в системе гемостаза, целенаправленное воздействие на один из этих ферментов играет важную роль в лечении как тромбозов, так и геморрагий.

Система свертывания крови в нормальном состоянии находится в динамическом равновесии, при котором фибриновые сгустки постоянно образуются, а затем растворяются. Центральная роль тромбина и плазмина в регуляции агрегатного состояния крови подталкивает многих ученых к попытке создания сильных и селективных ингибиторов данных протеиназ. Некоторые результаты этих исследований рассмотрены в настоящем обзоре.

Заключение диссертации по теме «Биоорганическая химия», Сергеев, Максим Евгеньевич

выводы

1) Предложено использование двуокиси марганца для получения защищенных а-аминоальдегидов окислением М-ацил-|3-аминоспиртов.

2) Подобраны оптимальные условия ацилирования вторичных аминов, катализируемого субтилизином 72, и синтезирован ряд производных пептидов, содержащих вторичные амиды лизина и аргинина.

3) Показано, что в качестве ацил-акцептора в катализируемом субтилизином синтезе могут выступать дезоксирибонуклеозиды. В этом случае хемоселективно ацилируется З'-О атом сахарного остатка.

4) Исследована биологическая активность некоторых синтезированных пептидов и показано, что два из них, запатентованные производные Рог-А1а-РЬе-Ьу5-Р1р и Рог-А1а-РЬе-Ьу8-М^ обладают выраженной гемостатической активностью и могут быть использованы для создания медицинских препаратов.

5) Выявлена целесообразность комбинирования пептидов Рог-АЬ-РЬе-Ьуз-Р1р и Рог-А1а-Р11е-Ьу8-М^ с с-АКК для усиления гемостатического эффекта.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Сергеев, Максим Евгеньевич, 2010 год

1. Fenton J.W. Regulation of thrombin generation and functions. // Semin. Thromb. Haemost. 1988. v. 14. p.234-240.

2. Stubbs M.T., Bode W. A player of many parts: the spotlight fallson thrombin's structure. // Thromb. Res. 1993. v.69 p.1-58.

3. Blomback B. Fibrinogen and fibrin proteins with complex roles in haemostasisand thrombosis. // Thromb. Res. 1996. v.83 p. 1-75.

4. Davie E.W., Fujikawa K., Kisiel W. The coagulation cascade: initiation, maintenance and regulation. // Biochemistry. 1991. v.30. p.10364-10370.

5. Esmon C.T. The roles of protein С and thrombovodulin in the regulation of blood coagulation. //J. Biol. Chem. 1989. v.264. p.4743-4746.

6. Levin E.G., Stern D.M., Nawroth P.P., Marlar R.A., Fair D.S., Fenton J.W., Harker L.A. Specificity of the thrombin-induced earelse of tissue plasminogen-activator from cultured human endothelial cells. // Thromb. Haemost. 1986. v.56. p. 115-119.

7. Moon D.G., Horgarn M.J., Anderson T.T., Krystek S.R., Fenton J.W., Malik A.B. Endothelial-like pulmonary vasoconstrictor peptide release by a-thrombin. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989. v.86. p.9529-9533.

8. Березов T.T., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. // Под ред. Академика АМН СССР Дебова С.С. Москва. «Медицина». 1990. с.439-446.

9. Castellino F. J. Recent advances in the chemistry of the fibrinolytic system. // Chem. Rev. 1981. v. 81. N5. p.431-446.

10. Bjork I., Lindahl V. Mechanism of the anticoagulant action of heparin. // Mol. Cell. Biochem. 1982. v.48. p. 161-182.

11. Parker K.A., Tollefsen D.M. The protease specificity of heparin cofactor II: inhibition of thrombin generated during coagulation. // J. Biol. Chem. 1985. v.260. p.3501.

12. Olson S.T., Shore J.D. Demonstration of a two-step reaction mechanism for inhibition of a-thrombin III and idendification of the step affected ЬЗЗЗу heparin. // J. Biol. Chem. 1982. v.257. p. 14891-14895.

13. Stone S.R., Hofsteenge J. Kinetics of the inhibition of thrombin by hirudin. // Biochemistry. 1986. v.25. p.4622-4628.

14. Markward F. The development of hirudin as an antithrombotic drug. // Thromb. Res. 1994. v.74. p. 1-23

15. Qiu X., Yin M. Padmanabhan K.P., Krstenansky J.L., Tulinsky A. Structures of thrombin complexes with a designed and a natural exosite peptide inhibitor. //J. Biol. Chem. 1993. v.268. p.20318-20326.

16. Модифицированные аминокислоты и пептиды на их основе. Под редакцией ЧипенсаГ.И. // Рига: Зинанте. 1987. с.214.

17. Aoyagi Т., Takeuchi Т., Matsuzaki A., Kawamura К., Kondo S., Hamada М., Maeda К., Umezawa Н. Leupeptins, new protease inhibitors from actinomycetes. //J. Antibiotics. 1969. v.22. p.283-286

18. Kondo S., Kawamura K., Iwamaga J. Hamada M., Aoyagi Т., Maeda K., Takeuchi Т., Umezawa H. Isolation and characterization of leupeptins produced by actinomycetes. // Chem. Pharm. Bull. 1969. v. 17. p. 18961901.

19. Maeda K., Umezawa H. Synthetic studies on leupeptins and their analogs. //J. Antibiotics. 1972. v.25. p.515-523.

20. Aoyagi Т., Miyata S., Takeuchi Т., Umezawa H. Biological activities of leupeptins. //J. Antibiotics. 1969. v.22. p.558-568.

21. Kamiyama Т., Umino Т., Nakamura Y., Itezono I., Sawairi S., Satoh Т., Yokose K. Bacithrocins А, В and C, novel thrombin inhibitors. // J. Antibiotics. 1994. v.47. p.959-968.

22. Maraganore J.M., Bourdon P., Jabloncky J., Ramachandran K.L., Fenton J.W. Design and characterization of girulogs: a novel class of divalent peptide inhibitors of thrombin. // Biochemistry. 1990. v.29. p.7095-7101.

23. Naski M.C., Fenton J.W., Maraganore J.M., Oslon S.T., Shafer J.A. The COOH-terminal domain of hirudin. // J. Biol. Chem. 1990. v.265. p.13484-13489.t

24. Lombardi A., Nastri F., Morte R.D., Rossi A., De Rosa A., Ataiano N., Pedone C., Pavone V. Rational design of true hirudin mimetics: synthesis and characterization of multisite-directed a-thrombin inhibitors. // J. Med. Chem. 1996. v.39. p.2008-2017.

25. Maraganore J.M., Chao B., Joseph M.L., Jablonski J., Ramachandran K.L. Anticoagulant activity of synthetic hirudin peptides. // J. Biol. Chem. 1989. v.264. p.8692-8698.

26. DiMaio J., Gibbs B., Munn D., Lefebre J., Ni F., iConishi Y. Bifunctional thrombin inhibitors based on the sequence of hirudin 45-65. // J. Biol. Chem. 1990. v.265. p.21698-21703.

27. Nienaber V.L., Amparo E.C. A non-cleavable retro-binding peptide that spans the substrate binding cleft of serine protease. Atomic structure of nazumamide A: human thrombin. // J. Am. Chem. Soc. 1996. v. 118. p.6807-6810.

28. Tabernero L., Chang C.Y.Y., Ohringer S.L., Lau W.F., Iwanowcz E.J., Han W., Wang T.C., Seiler S.M., Roberts D.G.M., Sack J.S. Structure of a retro-binding peptide-inhibitor complexed with human a-thrombin. // J. Mol. Biol. 1995. v.246. p. 14-20.

29. Lewis S.D., Ni A.S., Baldwin J.J., Fusetani N., Naylor A.M., Shafer J.A. Inhibition of thrombin and other trypsin-like serine proteinases by cyclotheonamide A. // Thromb. Res. 1993. v.70. p. 173-190.

30. Bock L.C., Griffin L.C., Latham J.A., Vermaas E.H., Toole J.J. Selection of single-stranded DNA molecules that bind and inhibit human thrombin. //Nature. 1992. v.355. p.564-566.

31. Paborsky L.R., McCurdy S., Griffin L.C., Toole J.J., Leung L.L.K. The single-stranded DNA aptamer-binding site of human thrombin. // J. Biol. Chem. 1993. v.268. p.20808-20811.

32. Kubik M.F., Stephens A.W., Schneider D., Marlar R., Tasset D. High-affinity RNA ligands to human a-thrombin. // Nucleic Acids Res. 1994. v.22. p.2619-2626.

33. Hauptmann J., Sturzebercher J. Synthetic inhibitors of thrombin and factor Xa: from bench to bedside. // Thromb. Res. 1999. v.93. p.203-241.

34. Fareed J., Callas D.D., Hoppensteadt D., Jeske W., Walenga J.M. Recent developments in antithrombotic agents. // Exp. Opin. Invest. Drugs. 1995. v.4. p.389-412.

35. Callas D.D., Fareed J. Comparative pharmacology of site-directed antithrombin agents. Implication in drug development. // Thrombosis and Haemostasis. 1995. v.74. p.473-481.

36. Callas D.D., Iqbal O., Hoppensteadt D., Fareed J. Fibrinolytic compromise by synthetic and recombinant thrombin inhibitors: implications in the treatment of thrombotic disorders. // Clin. Appl. Thrombosis and Haemostasis. 1995. v.l. p.l 14-124.

37. Hauptmann J., Markwardt F. Pharmacologic aspects of the development of selective synthetic thrombin inhibitors as anticoagulants. // Seminars in thrombosis and haemostasis. 1992. v. 18. p.200-217. '

38. Bagdy D., Barabas E., Sebastyen I., Dioszegi M., Fittler Zs., Baiusz S., Szell E. Correlation between the anticoagulant and antiplatelet effect of D-Phe-Pro-Arg-H. //Thromb. Haemost. 1987. v.58. p.177-186.

39. Bagdy D., Barabas E., Szabo G., Bajusz S., Szell E. In vivo anticoagulant and antiplatelet effect of D-Phe-Pro-Arg-H and D-MePhe-Pro-Arg-H. // Thromb. Haemost. 1992. v.67. p.357-365.

40. Bajusz S., Barabas E., Szell E., Bagdy D. Inhibition of thrombin and trypsin by tripeptide aldehydes. // Int. J. Protein. Res. 1978. v. 12. p.217-221.

41. Bagdy D., Barabas E., Bajusz S., Szell E. In vitro inhibition of blood coagulation by tripeptide aldehydes a retrospective screening study focused on the stable D-MePhe-Pro-Arg-H*H2S04. // Thromb. Haemost. 1992. v.67. p.325-330.

42. Bajusz S. Interaction of trypsin-like enzymes with small inhibitors. // Symposia Biologica Hungarica. 1984. v.25. p.277-295.

43. Kettner C., Shaw E. D-Phe-Pro-ArgCH2Cl a selective affinity label for thrombin. // Thromb. Res. 1979. v. 14. p.969-973.

44. Lijnen H.R., Uyterhoeven M., Collen D. Inhibition of trypsin-like serine proteinases by tripeptide arginyl and lysyl chloromethylketones. // Thromb. Res. 1984. v.34. p.431-437.

45. Hauptmann J., Markwardt F. Studies on the coagulant and antithrombotic action of an irreversible thrombin inhibitor. // Thromb. Res. 1980. v.20. p.347-351.

46. Collen D., Matsuo O., Stassen J.M., Kettner C., Shaw E. In vitro studies of a synthetic inhibitor of thrombin. // J. Lab. Clin. Med. 1982. v.99. p.76-83.

47. Stuber W., Kosina H., Heinburger N. Synthesis of a tripeptide with a C-terminal nitrile moiety and the inhibition of proteinases. // Int. J. Pept. Protein Res. 1988. v.31. p.63-70.

48. Neises B., Tarnus C. Trombin inhibition by the tripeptide trifluoromethylketone D-Phe-Pro-ArgCH2CF3 (MDL73756). // Thromb. Haemost. 1991. v.65. p. 1290.

49. Cheng L., Scully M.F., Goodwin C.A. Peptide a-aminophophonic acids: a new type of thrombin inhibitor. // Thromb. Haemost. 1991. v.65. p. 1289.

50. Kettner C., Mesinger L., Knabb R. The selective inhibition of thrombin by peptides of boroarginine. //J. Biol. Chem. 1990. v.265. p. 18289-18297.

51. Cacciola J., Fevig J.M., Alexander R.S., Brittelli D.R. Synthesis of conformationally-restricted boropeptide thrombin inhibitors. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 1996. v.6. p.301-306.

52. Tapparelli C., Metternich R., Ehrhardt C., Claeson G., Scully M.F., Stone S.R. In vivo and in vitro characterization of a neutral boron-containing thrombin inhibitor. // J. Biol. Chem. 1993. v.268. p.4734-4731.

53. Wienand A., Ehrhardt C., Metternich R., Tapparelli C. Design, synthesis and biological evaluation of selective boron-containing thrombin inhibitors. // Bioorg. Med. Chem. 1999. v.7. p. 1295-1307.

54. Hijikata-Okonomiya A., Okamoto S. A strategy for a rational approach to design synthetic selective inhibitors. // Seminars in thrombosis and haemostasis. 1992. v.18. p.135-149.

55. Morishita K., Iwamoto M. Synergistic antithrombotic effects of argatroban and ticlopidine in the rat venous thrombosis model a small-molecule, direct thrombin inhibitor. //Thromb. Res. 1998. v.92. p.261-266.

56. Sakai M., Ohteki H., Narita I., Naitoh K., Natsuaki M., Itoh T. Argatroban as a potential anticoagulant in cardiopulmonary bypass studies in a dog model. // Cardiovascular Surgery. 1999. v.7. p. 187-194.

57. Markwardt F., Wagner G., Sturzebercher J., Walsmann P. Na-arylsulfonyl-o)-(4-amidinophenyl)-a-aminoalkylcarboxylic amides novel selective inhibitors of thrombin. // Thromb. Res. 1980. v. 17. p.425-431.

58. Hauptmann J. Pharmacology of benzamidine-type thrombin inhibitors. // Folia Haemotol (Leipz.) 1982. v. 109. p. 118-123.

59. Sturzebercher J., Markwardt F., Voigt B., Wagner G., Walsmann P. Cyclic amides of Na-arylsulfonylaminoacylated 4-amidinophenylalanine tight binding inhibitors of thrombin. // Thromb. Haemost. 1983. v.29. p.635-642.

60. Claeson G., Gustavsson S., Mattsson C. New derivatives of p-guanidinophenylalanine as potent reversible inhibitors of thrombin. // Thromb. Haemost. 1983. v.50. p.53-58.109

61. Oweida S.W., Ku D.N., Lamsden A.B., Kam C.M., Powers J.C. In vivo determination of the anticoagulant effect of a substituted isocoumarin (ACITIC). //Thromb. Res. 1990. v.58. p.191-197.

62. Pizzo S.V., Turner A.D., Porter N.A., Gonias S.I. Evaluation of p-amidinophenyl esters as potential antithrombotic agents. Thromb. Haemost. 1986. v.56. p.387-390.

63. Ascenzi P., Gallina C., Bolognesi M. Thrombin inhibition by highly selective 'revercible suicide substrate' N-ethoxycarbonyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-a-azalysine p-nitrophenyl ester. // Protein Pept. Lett. 2005. v.5. p.433-438.

64. Бумблите И.А.Ингибиторы плазмина. // Гематологическая трансфузиология. 1992. т.37. с.26-28.

65. Matsuzaki К., Matsui К., Tanoue Y., Nagano I., Haraguchi N., Tatewaki H. Antifibrinolytic therapy with tranexamic acid in cardiac operations. // Cardiovascular Surgery. 1999. v.7. p. 195-199.

66. Harpel P.C. Plasmin inhibitor interactions. The effectiveness of a2-plasmin inhibitor in the presence of a2-macroglobulin. // J. Exp. Med. 1977. v. 146. p. 1033-1040.

67. Lee K.N., Jackson K.W., Terzyan S., Christiansen V.J., McKee P.A. Using substrate specificity of antiplasmin-cleaving enzyme for fibroblast activation protein inhibitor design. // Biochemistry. 2009. v.23. p.5149-5158.

68. McConnell R.S., York J.L., Frizzel D., Ezzell C. Inhibition studies of some serine and thiol proteinases by new leupeptin analogues. // J. Med. Chem. 1993. v.36. p. 1084-1089.

69. Livingston D. In vitro and in vivo studies of ICE inhibitors. // J. Cell. Biochem. 1997. v.64. p. 19-26.

70. Thopmpson R.C. User of peptide aldehydes to generate transition state analogs of elastase. // Biochemistry. 1973. v. 12. p.47-51.

71. Dobson G., Wlodawer A. Catalytic triads and their relatives. // Trends. Biochem. Sci. 1998. v.23. p.347-352.

72. Степанов B.M. Молекулярная биология. Структура и функции белков. // Под ред. Спирина А.С. Москва. Высшая школа. 1996. с.203-233.

73. Uoet D., Uoet J.G. Biochemistry. // New York. J. Wiley & Sons, Inc. 1995.

74. Potetinova J.V., Milgotina E.I., Makarov V.A., Voyushina T.L. // Russ. J. Bioorg. Chem. 2001. v.3. p.141.

75. Потетинова Ж.В. Стратегия биокаталитического синтеза модифицированных пептидов ингибиторов протеиназ. // Дисс. канд. хим. наук. Москва. 2000.

76. Lynas J.Р., Martin S.L., Walker В. Synthesis and kinetic evaluation of peptide a-keto-P-aldehyde-based inhibitors of trypsin-like proteases. // J. Pharm. Pharmacol. 2001. v.4. p.473-480.

77. Garrett G.S., McPhail S.J., Tornheim K., Correa P.E., Mclver J.M. Synthesis of potent and selective inhibitors of human plasma kallikrein. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 1999. v.9. p.301-306.

78. Teno N., Wanaka K., Okada Y., Tsuda Y., Okamoto U., Hijikata-Okunomiya A., Naito T., Okamoto S. Development of center-directed inhibitors against plasmin. // Chem. Pharm. Bull. 1991. v.39. p.2340-2346.

79. Sanders T.C., Seto C.T. 4-heterocyclohexanone-based inhibitors of the serine proteinase plasmin. // J. Med. Chem. 1999. v.42. p.2969-2976.

80. Hovhannisyan N., Harutyunyan S., Hovhannisyan A., Hambardzumyan A., Chitchyan M., Melkumyan M., Oganezova G., Avetisyan N. The novel inhibitors of serine proteases. // Amino Acids. 2009. v.37. p.531-536.

81. Midura-Nawaczek K., Roszkowska-Jakimiec W., Lepieutsko I., Bruzgo I. Synthesis of benzylamides of dipeptides as potential inhibitors of plasmin. // Pharmazie. 2003. v. 10. p.687-689.

82. Markowska A., Midura-Nawaczek K., Bruzgo I. Low molecular peptides as potential inhibitors of plasmin. // Acta. Pol. Pharm. 2007. v.4. p.355-358.

83. Purwin M., Bruzgo I., Markowska A., Midura-Nawaczek K. Short peptides containing L-lysine and s-aminocaproic acid as potential plasmin inhibitors. // Pol. Pharmazie. 2009. v.l 1. p.765-767.

84. Wanaka K., Okamoto S., Horie N., Hijikata-Okonomiya A., Okamoto U., Naito T., Ohno N., Tsuda Y., Okada Y. Use of an active center-directed plasmin inhibitor elucidates the multiplicity of plasmin actions.

85. Nakamura K., Suzuki T., Hasegawa M., Kato Y., Sasaki H., Inouye K. Characterization of p-aminobenzamidine-based sorbent and its use forhigh-performance affmity-chromatography of trypsin-like proteases. // J. Chromat. A. 2003. v. 1009. p.133-139.

86. Lee E., Enomoto R., Takemura K., Tsuda Y., Okada Y. A selective plasmin inhibitor, trans-aminomethylcyclohexanecarbonyl-L-(0-picolyl)tyrosine-octylamide (YO-2), induces thymocyte apoptosis. // Biochem. Pharmacol. 2002. v.7. p.1315-1323.

87. Szende B., Okada Y., Tsuda Y., Horvath A., Bokonyi G., Okamoto S., Wanaka K., Keri G. A novel plasmin-inhibitor inhibits the growth of human tumor xenografts and decreases metastasis number. // In Vivo. 2010. v.5. p.281-286.

88. Okada Y., Tsuda Y., Tada M., Wanaka K., Hijikata-Okonomiya A., Okamoto U., Okamoto S. Development of plasma kallikrein selective inhibitors. // Biopolymers. 1999. v.51. p.41-50.

89. A. Differences in substrate and inhibitor sequence specificity of human, mouse and rat tissue kallikreins. // J. Biochem. 2004. v.380. p.775-781.

90. Мильготина E. И. Синтез хромогенных субстратов и ингибитора глутамилэндопептидаз с использованием субтилизина. // Дисс. канд. хим. наук. Москва. 2001.

91. Потетинова Ж. В. Стратегия биокаталитического синтеза модифицированных пептидов ингибиторов протеиназ. // Дисс. канд. хим. наук. Москва. 2000.

92. Reetz М. Т. S Synthesis and diastereoselective reactions of N,N-dibenzylamino aldehydes and related compounds. // Chem. Rev. 1999. v.99. p.l 121-1162.

93. McConnell R., Barnes G., Hyong C., Gunn M. Improved solid phase synthesis of C-terminal peptide aldehydes. // J. Med. Chem. 1990. v.33. p.86

94. Rooseboom M., Commandeur J. N. M., Vermeulen N. P. E. Enzyme-catalyzed activation of anticancer prodrugs. // Pharm. Rev. 2004. v.56. p.53-102.

95. Potetinova J. V., Voyushina T. L., Stepanov V. M. Enzymatic synthesis of peptidyl amino alcohols and peptidyl amino aldehydes-serine proteinase inhibitors. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 1997. v.7. p.705-710.

96. Voyushina T. L., Potetinova J. V., Milgotina E. I., Stepanov V. M. Synthesis of peptide aldehydes via enzymatic acylation of amino aldehyde derivatives. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 1999. v.7. p.2953-2959.

97. Schulze A., Giannis A. IBX-mediated conversion of primary alcohols and aldehydes to N-hydroxysuccinimide esters. // Adv. Synth. Catal. 2004. v.346. p.252-256.

98. Myers A.G., Zhong B. Movassagi M., Kung D. W. Synthesis of highly epimerizable N-protected a-amino aldehydes of high enantiomeric excess. // Tetrahedron Lett. 2000. v.41. p. 13 59

99. Saeed A., Ashraf Z. Sodium borohydride reduction of aromatic carboxylic acids via methyl esters.//J. Chem. Sci. 2006. v. 118. p.419-423.

100. Dale D. J., Dunn P. J., Golightly C., Hughes M. L., Levett P. C., Pearce A. K., Searle P. M., Ward G., Wood A. S. The chemical development of the commercial route to sildenafil: a case history. // Org. Proc. Res. Dev. 2000. v.4. p. 17-22.

101. Couladouros E. A., Moutsos V. I. A general synthetic route towards bastadins. Part 2: Synthesis of the western part of bastadins 4-16, and fully functionalized macrocycle of bastadin 12. // Tetrahedron Lett. 1999. v.40. p.7027-7030.

102. Shioiri T., Sasaki S., Hamada Y. Synthetic approach to microsclerodermins: construction of three building blocks. // ARKIVOC. 2003. ii. p.103-122.

103. Livingston D. In vitro and in vivo studies of ICE inhibitors. // J. Cell. Biochem. 1997. v.64. p. 19-26.

104. Reichert D., Kutscher B., Bang H., Brune K., Quinkert G., Schaible H.G. Specific immunophilin ligands as antiasthmatics and immunosuppressants. // Patent US 6258815B 1. 2001.

105. Benedetti F., Berti F., Miertus S., Romeo D., Schillani F., Tossi A. Design, synthesis and preliminary evaluation of peptidomimetic inhibitors of FIIV aspartic protease with an epoxyalcohol core. // ARKIVOC. 2003. xiv. 140-154.

106. Sergeev M. E., Pronin V. B., Voyushina T. L. Procedure for the oxidation of (3-amino alcohols to a-aminoaldehydes. // Synlett. 2005. v. 18. p.2802-2804.

107. Kinugi S., Kobayashi I., Takano K., Murakami I. Effect of pressure on subtilisin catalysis: hydrolysis and peptide synthesis. // Bull. Chem. Soc. Jpn. 1996. v.69. p.3375-3380.

108. Kim J., Dordick J.S. Pressure affects enzyme function in organic media. // Biotech. Bioeng. 1993. v.42. p.772-776.

109. Lopez-Garcia M., Alfonso I., Gotor V. Chemoenzymatic approach to a (R)-3,4-diaminobutanoic acid derivative with a suitable orthogonal protection for solid phase peptide synthesis. // Lett. Org. Chem. 2004. v. 1. p.254-256.

110. Белозерская Г. Г., Воюшина Т. Л., Макаров В. А., Неведрова О. Е., Сергеев М. Е., Сергеева О. А. Синтетические производные пептидов. // Патент РФ 2 341 532 С2. 2008.

111. Favaudon V. Radiation-induced crosslinking between poly(deoxyadenylic-deoxythymidylic acid) and tripeptides containing aromatic residues . // Int. J. Radiat. Biol. 1989. v.55. p.353-364.

112. Harrison J. G., Balasubramanian S. Synthesis and hybridization analysis of a small library of peptide-oligonucleotide conjugates. // Nucleic Acids Res. 1998. v.26. p.3136

113. Debethune L., Kohlhagen G., Grandas A., Pommier Y. Processing of nucleopeptides mimicking the topoisomerase I-DNA covalent complex by tyrosyl-DNA phosphodiesterase. // Nucleic Acids Res. 2002. v.30. p. 1198-1204.

114. Chaloin L., Vidal P., Lory P., Mery J., Lautredou N., Divita J., Heitz F. Design of carrier peptide oligonucleotide conjugate with rapid membranetranslocation. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2007. v.243. p.601-608.

115. Juliano R. L. Peptide-oligonucleotide conjugates for the delivery of antisense and siRNA. // Curr. Opin. Mol. Ther. 2005. v.7. p. 132-136.

116. Marchan V., Grandas A. Synthesis of peptide oligonucleotide conjugates by Diels-Alder cycloaddition in water. // Curr. Protoc. Nucleic Acids Chem. 2007. v.4. p.4.32.

117. Arar K., Aubertin A. M., Roche A. C., Monsigny M., Mayer R. Synthesis and antiviral activity of peptide-oligonucleotide conjugates prepared by using N"-(bromoacetyl)peptides. // Bioconjug. Chem. 1995. v.6. p.573-577.

118. Danieli B., Peri F., Roda G., Carrea G., Riva S. On the regioselectivity of the protease subtilisin towards the acylation of enantiomeric pairs of benzyl and naphthyl glycopyranosides. // Tetrahedron. 1999. v.55. p.2045-2060.

119. Maruyama T., Nagasawa S. I., Goto M. Enzymatic synthesis of sugar amino acid esters in organic solvents. // J. Biosci. Bioeng. 2002. v.94. p.357-361.

120. Liu C. F., Tarn J. P. Subtilisin-catalyzed synthesis of amino acid and peptide esters. Application in a two-step enzymatic ligation strategy. // Org. Lett. 2001. v.3. p.4157-4159.