Синтез нейтральных неогликолипидов для создания модульных систем доставки нуклеиновых кислот тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, кандидат химических наук Иванова, Екатерина Алексеевна

• Иванова, Екатерина Алексеевна
• кандидат химических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат химических наук Иванова, Екатерина Алексеевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений:

1. Литературный обзор

1.1. Введение

1.2. Основные стадии транспорта нуклеиновых кислот

1.3. Модульные липидные транспортные системы

1.3.1. Связывающий и защищающий модуль МЛТС

1.3.2. Биосовместимый и стабилизирующий модуль МЛТС

1.3.3. Адресный модуль МЛТС

1.3.3.1. Углеводные лиганды для нацеленной доставки НК

1.3.3.1.1. Катионные углевод со держащие амфифилы

1.3.3.1.2. Эффект мультивалентности в углеводном распознавании на примере поливалентных нейтральных углеводсодержащих амфифилов

1.3.3.1.3. Создание липосомальных систем доставки НК, содержащих поливалентные гликоконъюгаты

1.3.3.2. Фолиевая кислота как лиганд для нацеливания на опухолевые клетки

1.3.3.3. Другие лиганды для направленной доставки в клетки-мишени

1.3.4. Дополнительные функциональные модули МЛТС, увеличивающие эффективность доставки НК

1.4. Заключение

2. Результаты работы и их обсуждение

2.1. Синтез связывающих модулей МЛТС - катионных амфифилов

2.1.1. Синтез монокатионных амфифилов

2.1.2. Синтез поликатионного гемини-амфифила

2.2. Синтез адресных модулей МЛТС - нейтральных неогликолипидов

2.2.1. Синтез моновалентных неогалактолипидов

2.2.2. Синтез бивалентных неогалактолипидов на основе разветвленных матриц различного типа

2.2.2.1. Синтез гидрофобных предшественников

2.2.2.2. Синтез углеводных предшественников

2.2.3. Синтез бивалентных неогалактолипидов на основе Ь-глутаминовой кислоты

2.2.4. Синтез бивалентных неогалактолипидов на основе 1,3-диаминопропан-2-ола

2.2.5. Синтез бивалентных нейтральных неогалактолипидов на основе спермина

2.3. Физико-химические характеристики и биологические свойства адресных МЛТС,

полученных на основе катионных амфифилов и синтезированных нейтральных бивалентных

неогалактолипидов

2.3.1. Выбор связывающего модуля для адресных МЛТС

2.3.1.1. Определение физико-химических характеристик катионных липосом и их комплексов с плазмидной ДНК

2.3.1.2. Изучение цитотоксичности катионных липосом и доставки с их помощью плазмидной ДНК

2.3.2. Выбор адресного модуля для МЛТС, нацеленных на асиалогликопротеиновый рецептор

2.3.2.1. Определение физико-химических характеристик адресных МЛТС

2.3.2.2. Изучение агглютинации адресных МЛТС в присутствии лектина ЯСАш

3. Экспериментальная часть

3.1. Основные методы

3.2. Синтез связывающих модулей МЛТС

3.2.1. Синтез монокатионных амфифилов

3.2.2. Синтез поликатионного амфифила

3.3. Синтез адресных модулей МЛТС

3.3.1. Синтез моновалентных неогалактолипидов

3.3.2. Синтез бивалентных неогалактолипидов

3.3.2.1. Синтез гидрофобных и углеводных предшественников

3.3.2.2. Синтез бивалентных неогалактолипидов на основе Ь-С1и

3.3.2.2. Синтез бивалентных неогалактолипидов на основе 1,3-диаминопропан-2-ола

3.3.2.3. Синтез бивалентных неогалактолипидов на основе спермина

3.4. Биологические исследования

Выводы

Список литературы

Список сокращений

BGTC - бисгуанидин-трен-холестерин Con А - лектин конканавалин А COSY

DC-Chol - 3 ß-[jV-(7V ,7V' -диметиламиноэтил)карбамоил]холестерин DMRIE - rac-N- [2,3 -ди(терадецилокси)проп-1 -ил] -тУ-(2-гидроксиэтил)-тЧ N-диметиламмоний бромид

DOGS - диоктадециламидо-#-(6-спермилкарбонил)глицин DOPE - 1,2-диолеоил-5?2-глицеро-3-фосфоэтаноламин

DOTMA - гас-Л^-(2,3-Ди(олеилокси)проп-1-ил)-А/,А^Л^-триметиламмоний хлорид DOTAP - гас-//-[2,3-Ди(олеоилокси)проп-1-ил]-А^,7ЧЛ^-триметиламмоний хлорид DOSPA

NLS - сигнал ядерной локализации

N/P - соотношение количества положительно заряженных групп амфифила к количеству отрицательно заряженных фосфатных групп нуклеиновой кислоты ROESY -

siRNA - малая интерферирующая РНК

АГП - асиалогликопротеин

АСГПр - асиалогликопротеиновый рецептор

ДЛС - динамическое лазерное светорассеяние

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИП - индекс полидисперсности

КА - катионный амфифил

КК - Купферовские клетки

KJI - катионные липосомы

КССВ - константа спин-спинового взаимодействия

MJITC - модульная липидная транспортная система

НК - нуклеиновая кислота

ПЭГ - полиэтиленгликоль

РНК - рибонуклеиновая кислота

ТСХ-

ТФ - трансферрин

ФК - фолиевая кислота

ЭСП - эндотелиальные синусоиды печени

ЯМР - ядерный магнитный резонанс

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Синтез нейтральных неогликолипидов для создания модульных систем доставки нуклеиновых кислот»

1.1. Введение

Генная терапия - сравнительно новый метод лечения наследственных и приобретенных заболеваний, направленный на устранение генетических дефектов или придания клеткам новых функций [1, 2] за счет введения в них терапевтических нуклеиновых кислот (НК) (трансфекция). Биофармацевтические препараты на основе НК могут контролировать развитие болезни на уровне активации или ингибирования действия генов, ответственных за ее развитие. В качестве терапевтических НК могут выступать плазмидные ДНК, антисмысловые олигонуклеотиды, малые интерферирующие РНК, рибозимы, ДНК-энзимы и аптамеры. Основными проблемами данного метода лечения являются эффективная доставка НК в нужное место в необходимом количестве, а также создание условий для их длительного функционирования [1 - 3].

Начиная с 90-х годов, разрабатываются невирусные системы доставки на основе катионных амфифилов и липосом, а также полимеров, которые являются альтернативой вирусным системам доставки НК [1, 4 - 10]. Катионные амфифилы (КА) и липосомы имеют ряд преимуществ перед вирусными системами доставки: они не обладают инфекционностью и иммуногенностью, способны переносить НК любого размера. Катионные липосомы (КЛ) легко получать, они стабильны при хранении и экономически доступны. Совокупность вышеперечисленных свойств делает КЛ перспективными транспортными системами для доставки НК в эукариотические клетки. Липосомальные ДНК/РНК-препараты рассматриваются как перспективные фармакологические агенты для лечения онкологических заболеваний, неврологических расстройств (болезнь Паркинсона и Альцгеймера), а также терапии сердечно-сосудистых заболеваний [1, 11].

Однако, для известных на сегодняшний день КЛ характерна низкая эффективность доставки НК, обусловленная наличием внеклеточных и внутриклеточных биологических барьеров, которые должен преодолеть НК-липосомальный комплекс (липоплекс), прежде чем НК осуществит терапевтическое воздействие [12].

Поэтому, в настоящий момент разработка стабильных и нетоксичных транспортных систем для переноса терапевтических генов, которые смогут инкапсулировать и доставлять НК в специфические типы клеток с эффективностью, сравнимой с вирусными векторами, является актуальной задачей биоорганической химии, молекулярной биологии и генной терапии.

1.2. Основные стадии транспорта нуклеиновых кислот с участием катионных липосом

Метод доставки НК в составе комплексов с КЛ называется липофекцией и включает несколько этапов, суммарно определяющих эффективность всего процесса трансфекции.

Для осуществления липофекции клеток необходимо приготовить комплексы НК и катионных липосом, которые образуются за счет электростатических взаимодействий между положительно заряженной группой КА и отрицательно заряженной фосфатной группой НК. В результате такой спонтанной самоассоциации в наноразмерные липоплексы НК оказывается защищенной от разрушающего действия нуклеаз. Липоплексы разнообразны по своей структуре и размеру, причем данные параметры определяются типом используемого КА, количественным соотношением НК и катионных липосом, а также способом их приготовления [13].

Первым этапом липофекции является добавление комплексов к эукариотическим клеткам, их взаимодействие с клеточной мембраной и проникновение внутрь клеток. Использование избытка КЛ (количественное соотношение липосом к НК определяется как среднее отношение Ы/Р - соотношение числа положительно заряженных атомов азота КА к отрицательно заряженным фосфатным группам НК) придает поверхности липоплекса положительный заряд, что способствует взаимодействию комплекса с отрицательно заряженной мембраной клетки. Агрегированные на клеточной поверхности липоплексы проникают внутрь клетки посредством эндоцитоза, кроме того, часть комплексов может остаться невостребованной на поверхности клетки. Следующим этапом является высвобождение липоплекса и НК в его составе из эндосом в цитоплазму прежде, чем НК подвергнется деградации в поздних эндосомах и лизосомах. На конечном этапе происходит диссоциация липоплекса под действием различных полианионных молекул, находящихся в цитоплазме. Дальнейшая судьба доставляемой терапевтической НК будет зависеть от ее типа. В случае з1К]ЧА и антисмысловых олигонуклеотидов доставка в цитозоль является завершающей стадией процесса трансфекции, а для плазмидной ДНК и антигенных олигонуклеотидов понадобится транспорт данных НК в ядро клетки и, в случае ДНК, ее экспрессия.

Для успешного выполнения всех этапов липофекции помимо характеристик самих липоплексов необходимо учитывать и наличие вне- и внутриклеточных барьеров (рис. 1) [12].

Рисунок 1.1. Биологические барьеры, возникающие на пути липоплексов

Под внеклеточными барьерами подразумевают нестабильность липоплексов в кровотоке, а также низкую степень взаимодействия с целевыми клетками-мишенями. Системное введение положительно заряженных липоплексов и взаимодействие их с белками крови, такими как опсонины, альбумин, липопротеины высокой и низкой плотности, может привести к ряду неблагоприятных побочных явлений от разрушения липоплексов и инактивации НК до запуска иммунного ответа через активацию системы комплемента [13].

В ходе трансфекции клеток липоплексам приходится также преодолевать внутренние барьеры, главными из которых являются эндосомальная и ядерная мембраны.

Многочисленные исследования показали, что липоплексы проникают в клетку в основном путем эндоцитоза [14], который может реализовываться по различным механизмам: клатрин-опосредованный эндоцитоз (адсорбционный или рецептор-опосредованный), кавеолин-опосредованный эндоцитоз, фагоцитоз, макропиноцитоз [15]. Было установлено, что механизм проникновения зависит от типа используемых КЛ, типа трансфицируемых клеток, а также от размера комплексов. Относительный вклад каждого способа в проникновение липоплексов через плазматическую мембрану до сих пор изучен недостаточно.

После проникновения в клетку высвобождение липоплексов и НК из эндосом является основным препятствием на пути к осуществлению терапевтического воздействия. Относительно слабая трансфицирующая активность многих КЛ является следствием того, что в большинстве случаев липоплексы и НК не способны успешно высвободиться в цитозоль до деградации в поздних эндосомах и лизосомах. Механизм, который реализуется в ходе высвобождения липоплексов из эндосом, зависит от структуры КА, входящих в их состав. Высвобождение липоплексов и НК происходит в основном за счет локальной дестабилизации мембран в результате взаимодействия молекул КА и анионных липидов из эндосомальной мембраны или по механизму «протонной губки» [6].

В случае плазмидной ДНК и антигенных нуклеотидов для успешной трансфекции необходимо преодолеть ядерную мембрану, представляющую собой оболочку, пронизанную «ядерными порами», с помощью которых происходит обмен веществами между ядром и

цитоплазмой [16] Их проводимость различна и зависит от типа транспортируемых молекул, типа клеток и от стадии клеточного цикла. Небольшие по размеру олигонуклеотиды могут проникать через ядерные поры, диаметр которых составляет 4А Большие молекулы ДНК могут проникать в ядро либо напрямую взаимодействуя с белками комплекса ядерных пор или с помощью специальных белков - транспортинов. Транспортины узнают и связываются с определенными пептидными последовательностями, получившими название «сигнал ядерной локализации» (N1.8), что приводит к переносу белков или НК, связанных с МД через ядерную мембрану [17, 18]

Существование и детальное выяснение лимитирующего действия всех внеклеточных и внутриклеточных барьеров стимулировало разработку липосомальных систем доставки, которые эволюционировали от простых липидных молекул к модульным липидным транспортным системам Все компоненты таких систем должны проходить строгую оценку и отбор с точки зрения эффективности доставки НК, а сами системы должны быть нацелены на специфические органы и ткани.

1.3. Модульные липидные транспортные системы для доставки нуклеиновых кислот

Модульная липидная транспортная система (МЛТС) для доставки НК представляет собой самособирающийся транспортный контейнер, построенный из различных не связанных ковалентно липофильных модулей и запрограммированный на выполнение определенных функций связывание и защиту НК, нацеленность на клетки-мишени, эффективное высвобождение НК из эндосом и транспорт в ядро [19, 20]. Такие МЛТС удачно описывает концепция Л.ВС£)-наночастиц (рис. 2) [20].

Ш о

^ " * «л ш

ш: * ї^'Ш'

4

Рисунок 1.2. АВСИ-наночастицы: (А) НК, (В) липидный защитный слой, (С) биосовместимый или «невидимый» слой, (О) слой биологического распознавания [20]

Ядро АВ представляет собой комплекс НК с катионными липосомами, покрытое защитным слоем С, который обеспечивает целостность частицы в биологических жидкостях, делая ее невидимой для белков сыворотки крови. Слой D обеспечивает активный транспорт транспортных систем к целевым клеткам.

Таким образом, чтобы такая модульная система работала как эффективный переносчик, к ней предъявляют следующие требования [19-21]:

1. Наличие нескольких липофильных модулей:

- связывающий и защищающий модуль - катионные липосомы - для электростатического связывания НК и защиты от действия нуклеаз.

- биосовместимый и стабилизирующий модуль - для снижения степени взаимодействия с молекулами-дезактиваторами (альбумин, липопротеиды низкой плотности, макроглобулины, гепарин) и увеличения времени циркуляции НК в организме;

- адресный модуль - для направленного транспорта НК и более эффективной интернализации внутрь клетки-мишени;

- модуль с последовательностью NLS для активного перемещения НК в ядро (в случае

ДНК).

- дополнительные функциональные модули, «помогающие» основным модулям осуществлять свои функции - мембран-пронизывающие пептиды, эндосомолитические пептиды, стимул-чувствительные элементы и т.д.;

2. Для эффективного высвобождения НК модули должны быть способны к саморазборке внутри клетки-мишени и обладать низкой токсичностью.

3. Концепция модульных систем доставки НК предполагает быстрое «переключение» таких систем на различные типы клеток-мишеней и даже на различные субклеточные компартменты, поэтому необходимо, чтобы все компоненты могли быстро и легко заменяться. Рассмотрим подробнее перечисленные функциональные модули MJITC для переноса НК.

1.3.1. Связывающий и защищающий модуль MJITC

Первым модулем системы доставки, который определяет ее эффективность, являются катионные липосомы. Как правило, катионные липосомы конструируют из КА и липида-хелпера. Липид-хелпер оказывает важное влияние на структуру и свойства липоплексов, улучшая эффективность доставки. Так, было показано, что липосомы, состоящие из КА и цвиттер-ионного фосфолипида DOPE (1,2-диолеоил-^-глицеро-З-фосфоэтаноламин), приводят к более эффективной доставке ДНК, чем липосомы на основе только КА [22-24].

о

DOPE

Этот факт объясняется способностью DOPE к формированию инвертированной гексагональной липидной фазы, что способствовует слиянию или дестабилизации мембран, в частности мембран эндосом, улучшая высвобождение НК [25, 26]. Помимо DOPE в качестве липида-хелпера может использоваться холестерин, который приводит к образованию более «жестких» липосом. Эксперименты in vitro показали, что трансфекция липосомами с холестерином менее эффективна, чем липосомами с DOPE, однако в условиях in vivo холестеринсодержащие липосомы обладали более высоким уровнем трансфицирующей активности, чем липосомы с DOPE [27 - 29].

Структура КА представляет собой комбинацию двух основных доменов -гидрофобного и гидрофильного (катионного), соединенных спейсерной группой с помощью химической связи (линкера) определенного типа.

Катионный

Гидрофобный Спейсер

домен

Рисунок 1.3. Схематичное представление структуры катионных амфифилов

Каждый из доменов вносит свой вклад в активность молекулы КА и определяет ее поведение в организме. Гидрофобный домен участвует в формировании упорядоченных липидных структур, катионный - связывает молекулы НК, а спейсерная группа обеспечивает подвижность катионного и гидрофобного доменов в пространстве. Большое значение имеет линкерная группа, так как ее устойчивость определяет токсичность молекулы амфифила в биологических системах [30, 31]. КА могут быть классифицированы на различные подгруппы согласно их основным структурным элементам:

1) монокатионные алифатические липиды (ООТМА, ООТАР, ОМШЕ), характеризующиеся наличием одного единственного заряженного атома азота в составе полярной головки.

2) поликатионные алифатические амфифилы (DOGS, DOSPA), чей катионный домен содержит несколько заряженных атомов азота.

-NH3

H.N

^33^16

DOSPA

3) катионные производные холестерина (DC-Choi, BGTC).

На сегодняшний день синтезирован большой набор катионных амфифилов [31, 32], однако исследования в этом направлении постоянно развиваются. Для поиска новых агентов трансфекции, обладающих повышенной эффективностью доставки НК, проводятся различные модификации структуры КА. Несмотря на определенные успехи, уровень трансфекции, необходимый для практического использования, еще не достигнут, что связано как с недостатком данных по взаимосвязи «структура-активность», так и с необходимостью детального выяснения механизмов преодоления биологических барьеров на пути

липоплексов. Некоторые закономерности описаны в следующих обзорах [6, 10, 12, 13, 30, 31, 33].

1.3.2. Биосовместимый и стабилизирующий модуль МЛТС

Вторым модульным компонентом, способным защищать МЛТС от инактивации в биологических жидкостях, являются липофильные производные полиэтиленгликоля (ПЭГ). ПЭГ создает стерический барьер вокруг липоплексов, тем самым, предотвращая взаимодействие с компонентами крови и захват липоплексов клетками ретикуло-эндотелиальной системы [34]. Существуют три основных подхода к созданию транспортных систем, содержащих ПЭГ. В первом подходе липофильное производное ПЭГ вводится в состав катионных липосом до образования комплексов с НК. Второй подход основан на включении липофильного производного ПЭГ в уже сформированные липоплексы. В третьем подходе ПЭГ, снабженный реакционноспособной группой, взаимодействует с функциональными группами, расположенными на внешней поверхности липосом. Было показано, что только ПЭГ с молекулярным весом от 2000 Да способен адекватно осуществлять стерическую стабилизацию липоплексов [35]. Однако, несмотря на свои защитные функции, молекулы ПЭГ могут негативно влиять на эффективность доставки НК, затрудняя высвобождение НК из эндосом [36, 37]. Поэтому при конструировании ПЭГ-содержащих систем доставки необходимо обеспечивать баланс между эффективной стерической стабилизацией и эффективностью трансфекции.

1.3.3. Адресный модуль МЛТС

Третьим модулем, который может существенно улучшить эффективность транспорта НК, являются липоконъюгаты с адресными лигандами, которые способны с высокой селективностью связываться с поверхностными рецепторами клетки-мишени. Для достижения максимальной специфичности поверхностный рецептор должен более активно экспрессироваться в целевых клетках по сравнению с другими клетками организма. Связывание лиганда с узнающими его рецепторами способствует более эффективному проникновению переносимого «груза» в цитоплазму за счет рецептор-опосредованного эндоцитоза [38]. Нацеливающие лиганды могут быть как низкомолекулярными соединениями (например, галактоза, фолиевая кислота, липопротеины низкой плотности, небольшие пептиды), так и белками (например, трансферрин и моноклональные антитела) (таблица 1.1) [39].

Таблица 1.1. Лиганды, используемые для нацеленной доставки НК.

Рецептор Клетки Лиганд

Асиалогликопротеиновые рецепторы Гепатоциты Асиалоорсомукоид, галактоза, лактоза, iV-ацетилгалактозамин

Рецептор маннозы Макрофаги, дендритные клетки Манноза

Рецептор лактозы Эпителиальные клетки легких Лактоза

Иммуноглобулиновый Рецептор Fab фрагмент IgG

Рецептор тирозинкиназы НЕК-2 Опухолевые ткани, эпителиальные, мезенхимальные и нейрональные клетки анти-НЕ11-2

Фолатный рецептор Опухолевые клетки, повышенно эксперссирую-щие рецепторы Фолиевая кислота

Интегриновые рецепторы RGD- и NRG-петиды и их миметики

Рецепторы трансферрина Трансферрин

Рецепторы эпидермального фактора роста (БОБ) Клетки N116 (фибробласты), клетки карциномы EGF, моноклональные Антитела

1.3.3.1. Углеводные лиганды для нацеленной доставки НК

Класс белковых молекул, называемых лектннами, способны обратимо и избирательно связывать разнообразные углеводы как в индивидуальном виде, так и в составе гликоконъюгатов, не нарушая ковалентной структуры последних. Лектин-углеводные взаимодействия имеют огромное значение в биологии [40]. Доменные центры лектинов выступают в качестве чувствительнейших биосенсоров, детектирующих определённые углеводные последовательности в олигосахаридах, которые являются специфическими лигандами в углевод-белковом взаимодействии [41].

Лектины позвоночных подразделяются на множество семейств. Из восьми наиболее хорошо изученных групп четыре включают лектины, которые располагаюся внутри клетки, а остальные - функционируют преимущественно за её пределами. К внутриклеточным относятся: семейство калнексина, лектины М-типа, Ь-типа и Р-типа. Эти лектины расположены в люминальных компонентах выделительной системы и участвуют в продвижении, сортировке и нацеливании гликопротеинов. Галектины и лектины С- и Я-типов либо секретируются во внеклеточный матрикс и в биологические жидкости организма, либо локализуются в плазматической мембране, где выполняют ряд функций, включая клеточную адгезию, сигнализацию и распознавание патогенов [42]. В интересах транспорта НК нас будут интересовать лектины, расположенные на клеточной мембране и опосредующие процесс эндоцитоза.

Одним из важнейших органов, для которого разрабатываются направленные MJITC для переноса НК, является печень. Генетические нарушения клеток этого органа приводят к таким заболеваниям, как гемофилия, гиперлипопротеидемия (недостаток рецепторов липопротеинов низкой плотности), гиперхолестеринемия, гиперурикемия, болезнь Коновалова-Вильсона, рак печени [43]. Главная функция печени - поддержание метаболического гомеостаза организма, который включает эффективное накопление аминокислот, углеводов, липидов и витаминов и их последующее хранение, метаболическое обращение, контроль содержания в крови и желчи. Кроме того, печень секретирует в кровь белки - факторы свертывания крови VIII и IX, недостаток которых вызывает гемофилии А или В, соответственно. Поэтому клетки печени являются важной мишенью для генной терапии.

Печень на 60 - 70% состоит из гепатоцитов (клеток паренхимы), которые играют центральную роль в углеводном и жировом обмене всего организма. Гепатоциты образуют складчатые слои, примыкающие к заполненным кровью пространствам - синусоидам. Кровь отделена от поверхности гепатоцитов слоем уплощенных эндотелиальных клеток. Такая структура облегчает выполнение важнейших функций печени, в основе которых лежит обмен метаболитами между клетками печени и кровью. На поверхности гепатоцитов располагаются асиалогликопротеиновые рецепторы (АСГПр), которые относятся к лектинам С-типа млекопитающих. Эти рецепторы играют важную роль в удалении из кровотока десиалированных белков, распознавая их терминальные остатки D-галактозы и А^-ацетил-D-галактозамина [44, 45].

Coiled a-helices

N

Рисунок 1.4. Структура АСГПр гепатоцитов.

Среди полисахаридных адресных лигандов, нацеленных на АСГПр, наиболее часто используют так называемые "асиалогликопротеины" (АГП), которые получают из ряда гликопротеинов после их ферментативной или химической модификации, приводящей к удалению остатков сиаловой кислоты и появлению терминальных галактозильных групп [46, 47]. Позднее было показано, что лигандами для АСГПр могут быть не только гликопротеины, но и другие молекулы, содержащие остатки О-галактозы. Например,

комплексы ДНК с лактозилированным поли-Ь-лизином оказались эффективными при трансфекции клеток гепатокарциномы Нер02 [48].

Селективный барьер между кровью и гепатоцитами образуют линейные эндотелиальные синусоиды печени (ЭСП), играющие важную роль в патогенезе некоторых острых и хронических воспалительных заболеваниях печени. Они составляют 20% от общего числа клеток печени и выполняют защитные функции, очищая кровь от вредоносных составляющих. Механизмы очистки включают рецептор-опосредованный эндоцитоз, трансцитоз и фагоцитоз. Для восстановления гомеостаза после очистки от опасных веществ ЭСП также могут вырабатывать цитокины, эйкозаноиды и молекулы адгезии, которые мобилизуют другие типы клеток печени и иммунной системы. Многие белки и другие молекулы проникают внутрь ЭСП посредством рецептор-опосредованного эндоцитоза

благодаря гиалуроновым, проколлагеновым, фибронектиновым рецепторам. На поверхности

2+

ЭСП также присутствуют Са -зависимые рецепторы, распознающие маннозильные и ТУ-ацетилглюкозаминные остатки в составе гликопротеинов. Обычно ЭСП связывают маленькие молекулы (до 230 нм), но за счёт механизма фагоцитоза они могут поглотить и более крупные частицы. Также эти клетки ответственны за рецептор-опосредованный трансцитоз таких веществ как инсулин и трансферрин [49].

Купферовские клетки (КК) печени являются тканевыми макрофагами и относятся к клеткам ретикулоэндотелиальной системы. Основной функцией КК является выведение из кровотока микроорганизмов, липополисахаридов и опухолевых клеток. Они составляют 15% от общего числа клеток печени и располагаются предпочтительно в перипортальных областях. Подобно ЭСП купферовские клетки имеют на своей поверхности фибронектиновый, маннозный, СО 14 рецепторы, а также рецепторы класса А1 и АН. КК имеют рецепторы, благодаря которым происходит поглощение окисленных липопротеинов низкой плотности (класс рецепторов В1), липопротеинов высокой плотности, а также рецепторы, узнающие немодифицированные липопротеины низкой плотности. Кроме маннозного рецептора, КК обладают ещё двумя углеводузнающими рецепторами, распознающими терминальные остатки галактозы и фукозы [50].

В настоящее время для доставки НК разрабатываются два конкурирующих подхода к конструированию направленных МЛТС. Адресный лиганд либо входит в структуру КА, либо в состав МЛТС наряду со связывающим модулем включается адресный модуль, представляющий липоконьюгат с нацеливающим лигандом.

1.3.3.1.1. Катионные углеводсодержащие амфифилы

Для доставки НК был синтезирован амфифил 1а, который представляет собой бифункциональную молекулу, содержащую остаток галактозы для взаимодействия с АСГПр гепатоцитов и иминогруппу для связывания ДНК [51].

Заключение диссертации по теме «Биоорганическая химия», Иванова, Екатерина Алексеевна

выводы

1. Разработаны методы синтеза и получены 18 новых нейтральных неогалактолипидов, отличающихся количеством углеводных остатков, строением гидрофобного домена, типом линкерных групп, а также природой и длиной спейсерных групп. Полученные углеводсодержащие липоконьюгаты предназначены для использования в качестве адресных модулей MJTTC.

2. Для синтеза бивалентных неогалактолипидов на основе L-глутаминовой кислоты использован новый подход, заключающийся во взаимодействии азидосодержащих производных галактозы с Вос-защищенной L-глутаминовой кислотой в присутствии трибутилфосфина.

3. По результатам биологических испытаний установлено, что липосомы, содержащие поликатионный амфифил на основе спермина, способствуют более эффективной доставке ДНК в клетки, чем липосомы на основе монокатионных амфифилов и коммерческий препарат Lf 2000.

4. Определены физико-химические параметры «обычных» и адресных MJ1TC и установлено, что наличие бивалентных неогалактолипидов в составе липосом может приводить к уменьшению размера липосом.

5. Показано, что адресные MJ1TC, содержащие бивалентные неогалактолипиды, подвергаются агглютинации в присутствии углеводузнающего лектина RCA¡2o, и эффективность этого процесса зависит от строения неогликолипида и его содержания в липосомах.

6. Полученные адресные МЛТС обладают функцией нацеливания и могут быть использованы для дальнейших биологических исследований in vitro и in vivo.

1.4. Заключение

В «идеальную» систему доставки НК должны входить функциональные модули, которые позволяют преодолевать многочисленные биологические барьеры. К таким модулям относятся липоконъюгаты с лигандами для специфического нацеливания на клетки-мишени, соединения, облегчающие проникновение в клетки и высвобождение НК в цитоплазму, модули, пролонгирующие время циркуляции систем доставки в организме, а также сигналы ядерной локализации для транспорта НК в ядро. Большинство липосомальных систем доставки содержат в себе один из перечисленных элементов, что связано с определенными трудностями по встраиванию всех компонентов в единую структуру и дальнейшему обеспечению правильного функционирования каждого компонента. На настоящий момент существует несколько примеров MJTTC, которые успешно сочетают в себе от двух и более функциональных элементов.

Одной из таких систем являются «разумные» липосомы, которые претерпевают структурные изменения в ответ на различные физико-химические стимулы и позволяют эффективно контролировать высвобождение терапевтического «груза» (рис. 1.7 А) [138].

Разумные» липосомы способны выполнять заложенные в них функции только под действием определенных локальных стимулов, таких как изменение температуры, рН, окислительно-восстановительного потенциала. Эти системы конструируют таким образом, чтобы элементы, выполняющие функцию проникновения в клетку, были скрыты функциональными элементами, которые обеспечивают доставку к специфическим клеткам и тканям. Поверхность липосом модифицируют ПЭГ, который присоединяют с помощью рН-чувствительных связей. В случае катионных липосом такое покрытие маскирует положительный заряд липоплексов и предотвращает их агрегацию и быстрое выведение из кровотока. После накопления в опухолевых тканях отсоединение ПЭГ осуществляется за счет гидролиза кислотолабильных линкеров, что обеспечивает взаимодействие липоплекса с клеточной мембраной и повышает их проникновение в клетки.

Рисунок 1.7. Эволюция обычных липосом до «разумных» носителей [138, 139].

А - «разумные липосомы», чья поверхность модифицирована (отдельно или одновременно) за счет включения различных стимул-чувствительных амфифилов, отсоединяемого защитного полимерного покрытия, отсоединяемого защитного полимерного покрытия с прикрепленными к нему нацеливающими лигандами. В - MEND-система, созданная на основе концепции «запрограммированной упаковки».

Новые невирусные системы доставки были разработаны на основе концепции «запрограммированной упаковки» и получили название MEND. Идеальная MEND-система (рис. 1.7 В) состоит из комплекса НК с биогенным катионным полимером и липидной оболочки, содержащей различные функциональные элементы [139]. MEND-системы включают в свой состав многочисленные элементы слияния: пептид R8 или его производные, фьюзогенные липиды.

Пептид R8 опосредует неклассический путь проникновения MEND-частиц в клетку, что приводит к высокой эффективности трансфекции за счет уклонения липоплексов от деградации в эндосомах и лизосомах. Для MEND-систем особенно важно правильно подобрать состав липидной оболочки и разработать пошаговую технологию покрытия НК [141]. Трансфицирующая активность MEND-систем сравнима с активностью аденовирусов, но при этом системы неиммуногенны и обладают низкой токсичностью. В настоящее время MEND-системы успешно применяются для доставки различных НК [139, 141-143].

Multifunctional Envelope-type Nano Device(MEND)

Protein "■transduction domains peptides

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Иванова, Екатерина Алексеевна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Templeton N.S. Optimization of Nonviral Gene Therapeutics in Gene and cell therapy: therapeutic mechanisms and strategies, 3 ed. (Ed. Templeton N. S.). // Boca Raton:CRC Press, 2009.- 1120 pages.

2. Blau H.M., Springer M.L. Gene therapy - a novel form of drug delivery. // N. Engl. J. Med. -1995. - V. 333. - P. 1204-1207.

3. Verma I.M., Weitzman M.D. Gene therapy: twenty-first century medicine. // Ann. Rev. Biochem. - 2005. - V. 74. - P. 711-738.

4. Huang L. Non-viral vectors for gene therapy. 2nd ed. Part 1. / Huang L., Hung M.C., Wagner E. / Advances in Genetics. Amsterdam: Elsevier Academic Press, 2005. - V. 53. - 400 pages.

5. Lv H.T., Zhang S.B., Wang B., Cui S.H., Yan J. Toxicity of cationic lipids and cationic polymers in gene delivery. // J. Control. Release - 2006. - V. 114. - P. 100-109

6. Morille M., Passirani C., Vonarbourg A., Clavreul A., Benoit, J.-P. Progress in developing cationic vectors for non-viral systemic gene therapy against cancer. // Biomaterials. - 2008. -V. 29.-P. 3477-3496

7. Karmali P.P., Chaudhuri A. Cationic liposomes as non-viral carriers of gene medicines: resolved issues, open questions, and future promises. // Med. Res. Rev. - 2007. - V. 27. - P. 696-722.

8. Non-viral gene therapy (Ed. X. Yuan). // Rijeka: InTech, 2011. - 696 pages

9. Mahato R.I. Water insoluble and soluble lipids for gene delivery. // Adv. Drug Del. Rev. -2005.-V. 57.-P. 699-712.

10. Tseng Y.-C., Mozumdar S., Huang L. Lipid-based systemic delivery of siRNA. // Adv. Drug Deliv. Rev. - 2009. - V. 61.-P. 721-731.

11. Spack E.G., Sorgi F.L. Developing non-viral DNA delivery systems for cancer and infectious disease. // Drug Discov. Today. - 2001. -V. 6. - P. 186-197.

12. Zuhorn I.S., Engberts J.B.F.N., Hoekstra D. Gene delivery by cationic lipid vectors: overcoming cellular barriers. // Eur. Biophys. J. - 2007. - V. 36. - P. 349-362.

13. Wasungu L., Hoekstra D. Cationic lipids, lipoplexes and intracellular delivery of gene. // J. Control. Release. - 2006. - V. 116. - P. 255-264

14. El Ouahabi A., Ruysschaert J.M. Formation and intracellular trafficking of lipoplexes and polyplexes. // Molecular Therapy. - 2005. - V. 11. - P. 336-347.

15. Conner S.D., Schmid S.L. Regulated portals of entry into the cell. // Nature. - 2003. - V. 422. -P. 37-44.

16. Wente S.R. Gatekeepers of the nucleus // Science. - 2000. - V. 288. - P. 1374-1377

17. Gorlich D., Mattaj I.W. Nucleocytoplasmic transport. // Science. - 1996. - V. 271. - P. 15131518.

18. Bremner K.H., Seymour L.W., Logan A., Read M.L. Factors influencing the ability of nuclear localization sequence peptides to enhance nonviral gene delivery. // Bioconjugate Chem. -2004. -V. 15. - P. 152-161

19. De Laporte L., Cruz Rea J., Shea L.D. Design of modular non-viral gene therapy vectors. // Biomaterials. - 2006. - V. 27. - P. 947-954.

20. Kostarelos K., Miller A.D. Synthetic, self-assembly ABCD nanoparticles; a structural paradigm for viable synthetic non-viral vectors. // Chem. Soc. Rev. - 2005. - V. 34. - P. 970994.

21. Серебренникова Г.А., Маслов M.A., Морозова Н.Г., Модульные транспортные системы на основе катионных и нейтральных амфифилов для генной терапии // Вестник МИТХТ - 2011. - Т.6(5). - С.72-86.

22. Hui S.W., Langner М., Zhao Y.L., Hurley Е., Chan К. The role of helper lipids in cationic liposome-mediated gene transfer. // Biophys. J. - 1996. - V. 71. - P. 590-599.

23. Mok K.W.C., Cullis P.R. Structural and fusogenic properties of cationic liposomes in the presence of plasmid DNA. // Biophys. J. - 1997. - V. 73. - P. 2534-2545.

24. Kerner M., Meyuhas O., Hirsch-Lerner D., Rosen L.J., Min Z., Barenholz Y. Interplay in lipoplexes between type of pDNA promoter and lipid composition determines transfection efficiency of human growth hormone in NIH3T3 cells in culture. // Biochim. Biophys. Acta. -2001.-V. 1532.-P. 128-136.

25. Zuidam N.J., Barenholz Y. Electrostatic and structural properties of complexes involving plasmid DNA and cationic lipids commonly used for gene delivery. // Biochim. Biophys. Acta. - 1998,-V. 1368.-P. 115-128.

26. Zuidam N.J., Hirsch-Lerner D., Margulies S., Barenholz Y. Lamellarity of cationic liposomes and mode of preparation of lipoplexes affect transfection efficiency. // Biochim. Biophys. Acta, - 1999. -V. 1419. - P. 207-220.

27. Liu Y., Mounkes L.C., Liggitt H.D. Brown C.S., Solodin I., Heath T.D., Debs R.J. Factors influencing the efficiency of cationic liposome-mediated intravenous gene delivery. // Nat. Biotech.- 1997,-V. 15.-P. 167-173.

28. Sternberg В., Hong K., Zheng W., Papahadjopoulos D. Ultrastructural characterization of cationic liposome-DNA complexes showing enhanced stability in serum and high transfection activity in vivo. II Biochim. Biophys. Acta. - 1998. - V. 1375. - P. 23-35.

29. Simberg D., Weisman S., Talmon Y., Faerman A., Shoshani T., Barenholz Y. The role of organ vascularization and lipoplex-serum initial contact in intravenous murine lipofection. // J. Biol. Chem. - 2003. - V. 278. - P. 39858-39865.

30. Srinivas R., Samanta S., Chaudhuri A. Cationic amphiphiles: promising carriers of genetic materials in gene therapy // Chem. Soc. Rev. - 2009. - V. 38. - P. 3326-3338

31. Martin B., Sainlos M., Aissaoui A., Oudrhiri N., Hauchecorne M., Vigneron J.-P., Lehn J.-M., Lehn P. The Design of Cationic Lipids for Gene Delivery. // Curr. Pharm. Design. - 2005. - V. 11. - P. 375-394.

32. Mintzer M.A., Simanek E.E. Nonviral Vectors for Gene Delivery. // Chem. Rev. - 2009. - V. 109.-P. 259-302.

33. Maslov M.A., Zenkova M.A. Non-Viral Gene Delivery Systems Based on Cholesterol Cationic Lipids: Structure-Activity Relationships in Non-viral gene therapy (ed. X. Yuan) // Rijeka: InTech, 2011. - P. 349-380

34. Romberg B., Hennink W.E., Storm G. Sheddable coatings for long-circulating nanoparticles. // Pharm. Res. - 2008. - V. 25. - P. 55-71.

35. Martin-Herranz A., Ahmad A., Evans H.M., Ewert K., Schulze U., Safinya C.R. Surface functionalized cationic lipid-DNA complexes for gene delivery: PEGylated lamellar complexes exhibit distinct DNA-DNA interaction regimes. // Biophys. J. - 2004. - V. 86. - P. 1160-1168.

36. Song L.Y., Ahkong Q.F., Rong Q., Wang Z., Ansell S., Hope M.J., Mui B. Characterization of the inhibitory effect of PEG-lipid conjugates on the intracellular delivery of plasmid and antisense DNA mediated by cationic lipid liposomes. // Biochim. Biophys. Acta. - 2002. - V. 1558. - P. 1-13.

37. Masson C., Garinot M., Mignet N., Wetzer B., Mailhe P., Scherman D., Bessodes M. pH-Sensitive PEG lipids containing orthoester linkers: new potential tools for nonviral gene delivery. // J. Control. Release. - 2004. -V. 99, - P. 423^134.

38. Sapra P., Allen T.M. Internalizing antibodies are necessary for improved therapeutic efficacy of antibody-targeted liposomal drugs. // Cancer Res. - 2002. - V. 62. - P. 7190-7194.

39. Molas M., Gomez-Valades A.G., Vidal-Alabro A., Miguel-Turu M., Bermudez J., Bartrons R., Perales J.C. Receptor-mediated gene transfer vectors: progress towards genetic pharmaceuticals. // Curr. Gene Ther. - 2003. - V. 3. - P. 468-485.

40. Brown J., Hunt R. Lectins // Internal. Rev. Cytol. - 1978. - V. 52. - P. 277-349.

41. Nicolson G., Irimura T. Estimating glycoprotein carbohydrate chain structures by lectin reactivities in polyacrylamide gels. // Biology of the Cell. - 1984. - V. 51. - P. 157-164.

42. Biesa C., Lehra C-M., John F. Lectin-mediated drug targeting: history and applications. //Adv. Drug Deliver. Rev. - 2004. - V. 56. - P. 425- 435.

43. Aneed A.E. Targeted cationic liposomes, technologies and developements. // Pharm. Technol. -2003. - V. 27.-P. 58-62.

44. Ashwell G., Harford J. Carbohydrate-specific receptors of the liver. // Annu. Rev. Biochem. -1982.-V. 51. - P. 531-554.

45. Spiess M. The asialoglycoprotein receptor: a model for endocytic transport receptors. // Biochemistry. - 1990. -V. 29. - P. 10009-10018

46. Zhang Y., Rong X., Gao Q., Maitani Y., Nagai T. Mechanisms of co-modified liver-targeting liposomes as gene delivery carriers based on cellular uptake and antigens inhibition effect. // J. Control. Release. - 2007. - V. 117. - P. 281-290.

47. Salvador F., Alin O., Benet M., Dasi' F., Crespo J. Asialofetuin liposomes for receptor-mediated gene transfer into hepatic cells. // Method. Enzymol. - 2003. - V. 373. - P. 00766879.

48. Erbacher P., Roche A.C., Monsigny M., Midoux P. Glycosylated polylysine/DNA complexes: gene transfer efficiency in relation with the size and the sugar substitution level of glycosylated polylysines and with the plasmid size. // Bioconjugate Chem. - 1995. - V. 6. - P: 401-410.

49. Friedman S.L. Hepatic stellate cells: protean, multifunctional, and enigmatic cells of the liver. // Physiol Rev. - 2008. - V. 88. - P. 125-172.

50. Barbro N.M., Leonie B., Dirk K., Meijer F., Poelstra K. Cell specific delivery of antiinflammatory drugs to hepatic endothelial and Kupffer Cells for the treatment of inflammatory liver diseases in Drug Targeting: Organ-Specific Strategies. (Ed. G. Molema, D.K.F. Meijer) // Wiley-VCH, 2001. - V. 12, - 381 pages.

51. Kawakami S., Munakata C., Fumoto S., Yamashita F., Hashida M. Novel galactosylated liposomes for hepatocyte-selective targeting of lipophilic drugs. // J. Pharm. Sci. - 2001. - V. 90.-P. 105-113.

52. S. Kawakami, F. Yamashita, M. Nishikawa, Y. Takakura, M. Hashida, Asialoglycoprotein receptor-mediated gene transfer using novel galactosylated cationic liposomes. // Biochem Biophys. Res. Commun. - 1998. - V. 252. - P. 78-83.

53. Shigeta K., Kawakami S., Higuchi Y., Okuda T., Yagi H., Yamashita F., Hashida M. Novel histidine-conjugated galactosylated cationic liposomes for efficient hepatocyte-selective gene transfer in human hepatoma HepG2 cells. // J. Control. Release. - 2007. - V. 118. - P. 262270.

54. Lu Y., Kawakami S., Yamashita F., Hashida M. Development of an antigen-presenting cell-targeted DNA vaccine against melanoma by mannosylated liposomes. // Biomaterials. - 2007. -V. 28.-P. 3255-3262.

55. Yeeprae W., Kawakami S., Higuchi Y., Yamashita F., Hashida M. Biodistribution characteristics of mannosylated and fucosylated O/W emulsions in mice. // J. Drug Target. -2005.-V. 13.-P. 479—487.

56. Yeeprae W., Kawakami S., Yamashita F., Hashida M. Effect of mannose density on mannose receptor-mediated cellular uptake of mannosylated O/W emulsions by macrophages // J. Control. Release. - 2006. - V. 114. - P. 193-201.

57. Higuchi Y., Kawakami S., Yamashita F., Hashida M. The potential role of fucosylated cationic liposome/NFkB decoy complexes in the treatment of cytokine-related liver disease// Biomaterials. - 2007. - V. 28. - P. 532-539.

58. Mukthavarama R., Marepallya S., Venkataa M.Y., Vegi G.N., Sistlab R., Chaudhuria A. Cationic glycolipids with cyclic and open galactose head groups for the selective targeting of genes to mouse liver. // Biomaterials. - 2009. - V.30. - P. 2369-2384.

59. Fabio K., Gaucheron J., Di Giorgio C., Vierling P. Novel galactosylated polyamine bolaamphiphiles for gene delivery. // Bioconjugate Chem. - 2003. - V. 14. - P. 358-367.

60. Iters L.E., Ren T., Liu D. Synthesis of targetable cationic amphiphiles. // Tetrahedron Lett. -1999.-V. 40.-P. 7621-7625.

61. Ren T., Zhang G., Liu D. Synthesis of galactosyl compounds for targeted gene delivery. // Bioorgan. Med. Chem. - 2001. - V. 9. - P. 2969-2978.

62. Mahon E., Aastrup T., Barboiu M. Multivalent recognition of lectins by glyconanoparticle systems // Chem. Commun. - 2010. - V. 46. - P. 5491-5493.

63. Lindhorst T.K. Artificial Multivalent Sugar Ligands to Understand and Manipulate Carbohydrate-Protein Interactions in Host-Guest Chemistry: Mimetic Approaches to Study Carbohydrate Recognition (Ed. S. Penades) // Springer Berlin Heidelberg, 2002. - P. 201-235.

64. Lee Y.C., Lee R.T. Carbohydrate-Protein Interactions: Basis of Glycobiology. // Accounts Chem. Res. - 1995. - V. 28. - P. 321-327.

65. Connolly D.T., Townsend R.R., Kawaguchi K., Bell W.R., Lee Y.C. Binding and endocytosis of cluster glycosides by rabbit hepatocytes. Evidence for a short-circuit pathway that does not lead to degradation. // J. Biol. Chem. - 1982. - V. 257. - P. 939-945.

66. Lee Y.C., Townsend R.R., Hardy M.R., Lonngren J., Arnarp J., Haraldsson M., Lonn H. Binding of synthetic oligosaccharides to the hepatic Gal/GalNAc lectin. Dependence on fine structural features. // J. Biol. Chem. - 1983. - V. 258. - P. 199-202.

67. Y.C. Lee, R.T. Lee in Carbohydrates in Chemistry and Biology (Eds. Ernst B., Hart G.W., Sinay P.). // Weinheim: Wiley-WCH, 2000. - V. 4. - P. 549-561.

68. Page D., Aravind S., Roy R. Synthesis and lectin binding properties of dendritic mannopyranoside.//Chem. Commun. - 1996.-V. 16.-P. 1913-1914.

69. Vrasidas I., André S., Valentini P., Bock C., Lensch M., Kaltner H., Liskamp R.M.J., Gabius H.-J., Pieters R.J. Rigidified multivalent lactose molecules and their interactions with mammalian galectins: a route to selective inhibitors. // Org. Biomol. Chem. - 2003. - V. 1. -P. 803-810.

70. Lee R.T., Lin P., Lee Y.C. New synthetic cluster ligands for galactoseLW-acetylgalactos-amine-specific lectin of mammalian liver. // Biochemistry. - 1984. - V. 23. - P. 4255-4261.

71. Biessen E.A.L., Noorman F., van Teijlingen M.E., Kuiper J., Barrett-Bergshoeff M., Bijsterbosch M.K., Rijken D.C., van Berkel T.J.C. Lysine-based cluster mannosides that inhibit ligand binding to the human mannose receptor at nanomolar concentration // J. Biol. Chem. - 1996. - V. 271. - P. 28024-28030.

72. Schierholt A., Hartmann M., Lindhorst T.K. Bi- and trivalent glycopeptide mannopyranosides as inhibitors of type 1 fimbriae-mediated bacterial adhesion: variation of valency, aglycon and scaffolding // Carbohyd. Res. - 2011. - V. 346. - P. 1519-1526.

73. Roy R., Saha U.K. Rational design of multivalent glycoconjugate ligands. Synthesis of libraries of conformationally flexible rotamers of poly-AMinked lactosyl glycines // Chem. Commun. - 1996. - V. 2. - P. 201-202.

74. Johansson E.M.V., Kolomiets E., Rosenau F., Jaeger K.-E., Darbrea T., Reymond J.-L. Combinatorial variation of branching length and multivalency in a large (390 625 member) glycopeptide dendrimer library: ligands for fucose-specific lectins. // New J. Chem. - 2007. -V. 31.-P. 1291-1299.

75. Haltiwanger R.S, Lehrman M.A, Eckhardt A.E., Hill R.L. The distribution and localization of the fucose-binding lectin in rat tissues and the identification of a high affinity form of the mannose/Af-acetylglucosamine-binding lectin in rat liver // J. Biol. Chem. - 1986. - V. 261. -P. 7433-7439.

76. Wittmann V., Seeberger S. Combinatorial solid-phase synthesis of multivalent cyclic neoglycopeptides. // Angew. Chem. Int. Ed. 39, 4348.

77. Ohta T., Miura N., Fujitani N., Nakajima F., Niikura K., Sadamoto R., Guo C.-T., Suzuki T., Suzuki Y., Monde K., Nishimura S.-I. Glycotentacles: synthesis of cyclic glycopeptides; toward a tailored blocker of influenza virus hemagglutinin. // Angew. Chem. Int. Ed. - 2003. -V. 42. - P. 5186-5189.

78. Dubber M., Lindhorst T.K. Synthesis of octopus glycosides: core molecules for the construction of glycoclusters and carbohydrate-centered dendrimers. // Carbohyd. Res. -1998.-V. 310.-P. 35-41.

79. Dubber M., Lindhorst T.K. Synthesis of carbohydrate-centered oligosaccharide mimetics equipped with a functionalized tether // J. Org. Chem. - 2000. - V. 65. - P. 5275-5281.

80. Ortega-Munoz M., Morales-Sanfrutos J., Perez-Balderas F., Hernandez-Mateo F., Giron-Gonzalez M.D., Sevillano-Tripero N., Salto-Gonzalez R., Santoyo-Gonzalez F. Click multivalent neoglycoconjugates as synthetic activators in cell adhesion and stimulation of monocyte/machrophage cell lines. // Org. Biomol. Chem. - 2007. - V. 5. - P. 2291-2301.

81. Dubber M., Patel A., Sadalapure K., Aumtiller I., Lindhorst T.K. Synthesis of functionalized amphiphilic glycoconjugates and glycoclusters. // Eur. J. Org. Chem. - 2006. - V. 16. - P. 5357-5366.

82. Patel A., Lindhorst T.K. A modular approach for the synthesis of oligosaccharide mimetics. // J. Org. Chem. - 2001. - V. 66. - P. 2674-2680.

83. Biessen E.A., Vietsch H., Van Berkel T.J. Cholesterol derivative of a new triantennary cluster galactoside lowers serum cholesterol levels and enhances secretion of bile acids in the rat. // Circulation. - 1995,-V. 91.-P. 1847-1854.

84. Sliedregt L.A., Rensen P.C., Rump E.T., van Santbrink P.J., Bijsterbosch M.K., Valentijn A.R., van der Marel G.A., van Boom J.H., van Berkel T.J., Biessen E.A. Design and synthesis of novel amphiphilic dendritic galactosides for selective targeting of liposomes to the hepatic asialoglycoprotein receptor. // J. Med. Chem. - 1999. - V. 42. - P. 609-618.

85. Rensen P.C.N., van Leeuwen S.H., Sliedregt L.A.J.M., van Berkel T.J.C., Biessen E.A.L. Design and synthesis of novel yV-acetylgalactosamine-terminated glycolipids for targeting of lipoproteins to the hepatic asialoglycoprotein receptor // J. Med. Chem. - 2004. - V. 47. - P. 5798-5808.

86. Kunath K., Von Harpe A., Fischer D., Kissel T. Galactose-PEI-DNA complexes for targeted gene delivery: degree of substitution affects complex size and transfection efficiency. // J. Control. Release. - 2003. - V. 88. - P. 159-172.

87. Watanabe T., Umehara T., Yasui F., Nakagawa S.-I., Yano J., Ohgi T., Sonoke S. Satoh K., Inoue K., Yoshiba M., Kohara M. Liver target delivery of small interfering RNA to the HCV gene by lactosylated cationic liposome. // J. Hepatol. - 2007. - V. 47. - P. 744-750.

88. Horiuchi S., Aoyama Y. Systematic lactose-functionalization of amphiphilic octaamine macrocycle as a gene carrier. Optimization of the charge, size, toxicity, and receptor factors for hepatocyte targeting. // J. Control. Release. - 2006. - V. 116. - P. 107-114

89. Frisch B., Carrière M., Largeau C., Mathey F., Masson C., Schuber F., Scherman D., Escriou V. A new triantennary galactose-targeted PEGylated gene carrier, characterization of its complex with DNA, and transfection of hepatoma cells. // Bioconjugate Chem. - 2004. - V. 15.-P. 754-764.

90. Carrière M., V. Escriou, Jollet A., Scherman D. New synthetic glycolipids for targeted gene transfer: synthesis, formulation in lipoplexes and specific interaction with lectin // Drug Delivery. - 2004. - V. 11. - P. 351-363.

91. Murahashi N., Ishihara H., Sasaki A., Sakagami M., Hamana H. Hepatic acumulation of glutamic acid branched neogalactosyllipid modified liposomes // Biol. Pharm. Bull. - 1997. -V. 20. - P. 259-266.

92. Espuelas S., Haller P., Schuber F., Frisch B. Synthesis of an amphiphilic tetraantennary mannosyl conjugate and incorporation into liposome carriers // Bioorgan. Med. Chem. Lett. -2003.-V. 13.-P. 2557-2560.

93. Leamon C.P., Low P.S. Folate-mediated targeting: from diagnostics to drug and gene delivery. // Drug Discov. Today. - 2001. - V. 6. - P. 44-51.

94. Wu M., Gunning W., Ratnam M. Expression of folate receptor type a in relation to cell type, malignancy, and differentiation in ovary, uterus, and cervix. // Cancer Epidem. Biomar. -1999.-V. 8.-P. 775-782.

95. Hattori Y., MaitaniY. Folate-linked lipid-based nanoparticle for targeted gene delivery. // Curr. Drug Deliv. - 2005. - V. 2. - P. 243-252.

96. Kim S.H., Jeong J.H., Mok H., Lee S.H., Kim S.W., Park T.G. Folate receptor targeted delivery of polyelectrolyte complex micelles prepared from ODN-PEG-folate conjugate and cationic lipids. // Biotechnol. Prog. - 2007. - V. 23. - P. 232-237.

97. Leamon C.P., Reddy J.A., Vlahov I.R., Vetzel M., Parker N., Nicoson J.S., Xu L.C., Westrick E. Synthesis and biological evaluation of EC72: a new folate-targeted chemotherapeutic. // Bioconjug. Chem.-2005,-V. 16.-P. 803-811.

98. Lee R.J., Low P.S. Folate-mediated tumor cell targeting of liposome entrapped doxorubicin in vitro. // Biochim. Biophys. Acta. - 1995. - V. 1233.-P. 134-144.

99. Leamon C.P., Cooper S.R., Hardee G.E. Folate-liposome-mediated antisense oligodeoxynucleotide targeting to cancer cells: evaluation in vitro and in vivo. II Bioconjugate Chem.-2003.-V. 14. - P. 738-747.

100. Guo W.J., Lee T., Sudimack J., Lee R.J. Receptor-specific delivery of liposomes via folate-PEG-Chol. // J. Liposome Res. - 2000. - V. 10. - P. 179-195.

101. Gabizon A., Horowitz A.T., Goren D., Tzemach D., Shmeeda H., Zalipsky S. In vivo fate of folate-targeted polyethene-glycol liposomes in tumorbearing mice. // Clin. Cancer Res. -2003.-V. 9.-P. 6551-6559.

102. Xiang G., Wu J., Lu Y., Liu Z., Lee R.J. Synthesis and evaluation of a novel ligand for folate-mediated targeting liposomes. // Int. J. Pharm. - 2008. - V. 356. - P. 29-36.

103. Yoshizawa T., Hattori Y., Hakoshima M., Koga K., Maitani Y. Folate-linked lipid-based nanoparticles for synthetic siRNA delivery in KB tumor xenografts. // Eur. J. Pharm. Biopharm. - 2008. - V. 70. - P. 718-725.

104. Hattori Y., Maitani Y. Enhanced in vitro DNA transfection efficiency by novel folate-linked nanoparticles in human prostate cancer and oral cancer. // J. Control. Release. - 2004. - V. 97. -P. 173-183.

105. Hofland H.E.J., Masson C., Iginla S., Osetinsky I., Reddy J.A., Leamon C.P., Scherman D., Bessodes M., Wils P. Folate-targeted gene transfer in vivo. II Mol. Ther. - 2002. - V. 5. - P. 739-744.

106. Turk M.J., Breur G.J., Widmer W.R., Paulos C.M., Xu L.C., Grote L.A., Low P.S. Folate-targeted imaging of activated macrophages in rats with adjuvantinduced arthritis. // Arthr. Rheum. - 2002. - V. 4. - P. 1947-1955.

107. Tros De Ilarduya C., Duzgime§ N. Efficient gene transfer by transferrin lipoplexes in the presence of serum. // Biochim. Biophys. Acta. - 2000. - V. 14. - P. 333-342.

108. Da Cruz M.T., Simoes S., Pires P.P., Nir S., De Lima M.C. Kinetic analysis of the initial steps involved in lipoplex-cell interactions: effect of various factors that influence transfection activity. // Biochim. Biophys. Acta. - 2001. - V. 1510. - P. 136-151.

109. Mendonca L.S., Firmino F., Moreira J.N., Pedroso De Lima M.C., Simoes, S. Transferrin receptor-targeted liposomes encapsulating anti-BCR-ABL siRNA or asODN for chronic myeloid leukemia treatment. // Bioconjugate Chem. - 2010. - V. 21. - P. 157-168.

110. Temming K., Schiffelers R.M., Molema G., Kok R.J. RGD-based strategies for selective delivery of therapeutics and imaging agents to the tumour vasculature. // Drug Resist. Update. -2005. - V. 8.-P. 381-402.

111. Heitz F., Morris M.C., Divita G. Twenty years of cell-penetrating peptides: from molecular mechanisms to therapeutics // Br. J. Pharmacol. - 2009. - V. 157. - P. 195-206.

112. Rajur S.B., Roth C.M., Morgan J.R., Yarmush M.L. Covalent protein-oligonucleotide conjugates for efficient delivery of antisense molecules. // Bioconjugate Chem. - 1997. - V. 8. -P. 935-940.

113. Antopolsky M., Azhayeva E., Tengvall U., Auriola S., Jaaskelainen I., Ronkko S., Honkakoski P., Urtti A., Lonnberg H., Azhayev A. Peptide-oligonucleotide phosphorothioate

conjugates with membrane translocation and nuclear localization properties. // Bioconjugate Chem. - 1999. -V. 10. - P. 598-606.

114. Morris M.C., Vidal P., Chaloin L., Heitz F., Divita G. A new peptide vector for efficient delivery of oligonucleotides into mammalian cells. // Nucleic Acids Res. - 1997. - V. 25. - P. 2730-2736.

115. Simeoni F., Morris M.C., Heitz F., Divita G. Insight into the mechanism of the peptide-based gene delivery system MPG: implications for delivery of siRNA into mammalian cells. // Nucleic Acids Res. - 2003. - V. 31. - P. 2717-2724.

116. Rudolph C., Plank C., Lausier J., Schillinger U., Muller R.H., Rosenecker J. Oligomers of the arginine-rich motif of the HIV-1 Tat protein are capable of transferring plasmid DNA into cells.//! Biol. Chem.-2003.-V. 278. - P. 11411-11418.

117. Siprashvili Z., Scholl F.A., Oliver S.F., Adams A., Contag C.H., Wender P.A., Khavari P.A. Gene transfer via reversible plasmid condensation with cysteine-flanked, internally spaced arginine-rich peptides. // Hum. Gene Ther. - 2003. - V. 14. - P. 1225- 1233.

118. Hyndman L., Lemoine J.L., Huang L., Porteous D.J., Boyd A.C., Nan X. HIV-1 Tat protein transduction domain peptide facilitates gene transfer in combination with cationic liposomes. // J. Control. Release. - 2004. - V. 99. - P. 435-444.

119. Torchilin V.P., Levchenko T.S., Rammohan R., Volodina N., Papahadjopoulos-Sternberg B., D'Souza G.G. Cell transfection in vitro and in vivo with nontoxic Tat peptide-liposome-DNA complexes. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2003. - V. 100. - P. 1972-1977.

120. Boomer J.A., Thompson D.H., Sullivan S.M. Formation of plasmid-based transfection complexes with an acid-labile cationic lipid: characterization of in vitro and in vivo gene transfer. // Pharm. Res. - 2002. - V. 19. - P. 1292-1301.

121. Zhu J., Munn R.J., Nantz M.H. Self-cleaving ortho ester lipids: a new class of pH-vulnerable amphiphiles. // J. Am. Chem. Soc. - 2000. - V. 122. - P. 2645-2646.

122. Aissaoui A., Martin B., Kan E., Oudrhiri N., Hauchecorne M., Vigneron J.-P., Lehn J.-M., Lehn P. Novel cationic lipids incorporating an acid-sensitive acylhydrazone linker: synthesis and transfection properties. // J. Med. Chem. - 2004. - V. 47. - P. 5210-5223.

123. Fernández-Carneado J., Kogan M.J., Pujáis S., Giralt E. Amphipathic peptides and drug delivery. // Peptide Science. - 2004. - V. 76. - P. 196-203.

124. Marrtin I., Pecheur E., Ruysschaert J.M., Hoeksttra D. Membrane fusion induced by a short fusogenic peptide is assessed by its insertion and orientation into target bilayers. // Biochemistry. - 1999. - V. 38. - P. 9337-9347.

125. Párente R.A., Nir S., Szoka F.C. pH-Dependent fusion of phosphatidylcholine small vesicles. Induction by a synthetic amphipathic peptide // J. Biol. Chem. - 1988. - V. 263. - P. 47244730.

126. Subbarao N.K., Párente R.A., Szoka F.C., Nadasdi L., Pongracz K. pH-Dependent bilayer destabilization by an amphipatic peptide // Biochemistry. - 1987. - V. 26. - P. 2964-2972.

127. Fattal E., Nir S., Párente R.A., Szoka F.C. Pore-forming peptides induce rapid phospholipids flip-flop in membranes // Biochemistry. - 1994. - V. 33. - P. 6721-6731.

128. Goormaghtigh E., De Meutter J., Szoka F., Cabiaux V., Párente R.A., Ruysschaert J.-M. Secondary structure and orientation of the amphipathic peptide GALA in lipid structures. An infrared-spectroscopic approach // Eur. J. Biochem. - 1991. - V. 195. - P. 421 -429.

129. Párente R.A., Nir S., Szoka F.C. Mechanism of leakage of phospholipids vesicle contents induced by the peptide GALA // Biochemistry. - 1990. - V. 29. - P. 8720-8728.

130. Kichler A., Mason A.J., Bechinger B. Cationic amphipathic histidine-rich peptides for gene delivery // Biochim. Biophys. Acta. - 2006. - V. 1758. - P. 301-307.

131. Mason A.J., Martinez A., Glaubitz C., Danos O., Kichler A., Bechinger B. The antibiotic and DNA transfecting peptide LAH4 selectively associates with, and disorders, anionic lipids in mixed membranes // FASEB J. - 2006. - V. 20. - P. 320-322.

132. Mason A.J., Laborgne C., Moulay G., Martinez A., Danos O., Bachinger B., Kichler A. Optimising histidine rich peptides for efficient DNA delivery in presence of serum. // J. Controll. Release. - 2007. - V. 118. - P. 95-104.

133. Kichler A., Mechtler K., Behr J.-P., Wagner E. Influence of membrane-active peptides on lipospermine/DNA complex mediated gene transfer // Bioconjugate Chem. - 1997. - V. 8. -P. 213-221.

134. Plank C., Zauner W., Wagner E. Application of membrane-active peptides for drug and gene delivery across cellular membranes // Advanced Drug Delivery Reviews. - 1998. - V. 34. - P. 21-35.

135. Wagner E. Application of membrane-active peptides for non-viral gene delivery // Adv. Drug Deliver. Rev. - 1999. - V. 38. - P. 279-289.

136. Fernández-Carneado J., Kogan M.J., Pujáis S., Giralt E. Amphipathic peptides and drug delivery // Peptide Science. - 2004. - V. 76. - P. 196-203.

137. Wyman T.B., Nicol F., Zelphati O., Scaria P.V., Plank C., Szoka F.C. Design, Synthesis, and characterization of a cationic peptide that binds to nucleic acids and permeabilizes bilayers // Biochemistry. - 1997. -V. 36. - P. 3008-3017.

138. Torchilin V.P. Recent advances with liposomes as pharmaceutical carriers. // Nat. Rev. Drug Discov. - 2005. - V. 4. - P. 145-160.

139. Nakamura Т., Akita H., Yamada Y., Hatakeyama H., Harashima H. A multifunctional envelope-type nanodevice for use in nanomedicine: concept and applications. // Acc. Chem. Res.-2012.-V. 45.-P. 1113-1121.

140. Akita H., Kudo A., Minoura A., Yamaguti M., Khalil I.A., Moriguchi R., Masuda Т., Danev R., Nagayama K., Kogure K., Harashima H. Multi-layered nanoparticles for penetrating the endosome and nuclear membrane via a step-wise membrane fusion process. // Biomaterials. -2009.-V. 30.-P. 2940-2949

141. Moriguchi R., Kogue K., Akita H., Futaki S., Miyagishi M., Taira K., Harashima H. A multifunctional envelope-type nano device for novel gene delivery of siRNA plasmids. // Int. J. Pharm. - 2005. - V. 301. - P. 277-285.

142. Yamada Y., Kogure K., Nakamura Y., Inoue K., Akita H., Nagatsugi K., Sasaki S., Suhara Т., Harashima H. Development of efficient packaging method of oligodeoxynucleotides by a condensed nano particle in lipid envelope structure. // Biol. Pharm. Bull. - 2005. - V. 28. - P. 1939-1942.

143. Yamada Y., Akita H., Kogure K., Kamiya H., Harashima H. Mitochondrial drug delivery and mitochondrial disease therapy - an approach to liposome-based delivery targeted to mitochondria // Mitohondrion. - 2007. - V. 7. - P. 63-71.

144. Farhood H., Serbina N., Huang L. The role of dioleoyl phosphatidylethanolamine in cationic liposome mediated gene transfer. // Biochim. Biophys. Acta. - 1995. - V. 1235. - P. 289-295.

145. Zabner J., Fasbender A.J., Moninger Т., Poellinger K.A., Welsh M.J. Cellular and molecular barriers to gene transfer by a cationic lipid. // J. Biol. Chem. - 1995. - V. 270. - P. 18997 -19007.

146. Friend D.S., Papahadjopoulos D., Debs R.J., Endocytosis and intracellular processing accompanying transfection mediated by cationic liposomes. // Biochim. Biophys. Acta. -1996.-V. 1278.-P. 41-50.

147. Lechardeur D., Lukacs G.L. Intracellular barriers to non-viral gene transfer. // Curr. Gene Ther. - 2002. - V. 2.-P. 183-194.

148. Sawant R.R., Torchilin V.P. Liposomes as 'smart' pharmaceutical nanocarriers // Soft Matter. - 2010. - V. 6. - P. 4026-4044.

149. Kogure K., Akita H., Harashima H. Multifunctional envelope-type nano device for non-viral gene delivery: concept and application of programmed packaging // J. Controll. Release. -2007.-V. 122.-P. 246-251.

150. Маслов M.A., Сычева E.B., Морозова Н.Г., Серебренникова Г.А. Катионные амфифилы липидной и нелипидной природы в генной терапии. // Изв. АН, Сер. хим. - 2000. - № 3. -С. 385-400.

151. Gao X., Huang L. A novel cationic liposome reagent for efficient transfection of mammalian cells. // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1991. - V. 179. - P. 280-285.

152. Litzinger D.C., Brown J.M., Wala I., Kaufman S.A., Van G.Y., Farrell C.L., Collins D. Fate of cationic liposomes and their complex with oligonucleotide in vivo. II Biochim. Biophys. Acta.- 1996,-V. 1281.-P. 139-149.

153. Solodin I., Brown C.S., Bruno M.S., Chow C.Y., Jang E.H., Debs R.J., Heath T.D. A Novel series of amphiphilic imidazolinium compounds for in vitro and in vivo gene delivery. // Biochemistry. - 1995. - V. 34. - P. 13537-13544.

154. van der Woude I., Wagenaar A., Meekel A.A., ter Beest M.B., Ruiters M.H., Engberts J.B., Hoekstra D. Novel pyridinium surfactants for efficient, nontoxic in vitro gene delivery. // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. - 1997. - V. 94. - P. 1160-1165.

155. Meekel A.A.P., Wagenaar A., Smisterova J., Kroeze J.E., Haadsma P., Bosgraaf B., Stuart M.C.A., Brisson A., Ruiters M.H.J., Hoekstra D., Engberts J.B.F.N. Synthesis of pyridinium amphiphiles used for transfection and some characteristics of amphiphile/DNA complex formation // Eur. J. Org. Chem. - 2000. - V. 2000. - P. 665-673.

156. Ilies M.A., Seitz W.A., Ghiviriga I., Johnson B.H., Miller A., Thompson E.B., Balaban A.T. Pyridinium cationic lipids in gene delivery: a structure-activity correlation study // J. Med. Chem. - 2004. - V. 47. - P. 3744-3754.

157. Roosjen A., Smisterova J., Driessen C., Anders J.T., Wagenaar A., Hoekstra D., Hulst R., Engberts J.B.F.N. Synthesis and characteristics of biodegradable pyridinium amphiphiles used for in vitro DNA delivery. // Eur. J. Org. Chem. - 2002. - V. 7. - P. 1271-1277.

158. Ilies M.A., Johnson B.H., Makori F., Miller A., Seitz W.A., Thompson E.B., Balaban A.T. Pyridinium cationic lipids in gene delivery: An in vitro and in vivo comparison of transfection efficiency versus a tetraalkylammonium congener // Arch. Biochem. Biophys. - 2005. - V. 435.-P. 217-226.

159. Miller A.D. Cationic liposomes for gene therapy. // Angew. Chem. Int. Ed. - 1998. - V. 37. -P. 1768-1785.

160. Bhattacharyaw S., Bajaj A. Advances in gene delivery through molecular design of cationic lipids // Chem. Commun. - 2009. - V. 31. - P. 4632^1656.

161. Stewart L., Manvell M., Hillery E., Etheridge C.J., Cooper R.G., Stark H., van Heel M., M. Preuss, Alton E.W.F.W., Miller A.D. Physico-chemical analysis of cationic liposome-DNA complexes (lipoplexes) with respect to in vitro and in vivo gene delivery efficiency // J. Chem. Soc. Perkin Trans. - 2001. - V. 2. - P. 624-632.

162. Behr J.P., Demeneix B.A., Loeffler J.P., Perez-Mutul J. Efficient gene transfer into mammalian primary endocrine cells with lipopolyamine-coated DNA // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1989. - V. 86. - P. 6982-6986.

163. Lee E.R., Marshall J., Siegel C.S., Jiang C., Yew N.S., Nichols M.R., Nietupski J.B., Ziegler R.J., Lane M., Wang K.X., Scheule R.K., Harris D.J., Smith A.E., Cheng S.H. Detailed analysis of structures and formulations of cationic lipids for efficient gene transfer to the lung //Hum. Gene Ther. - 1996,- V. 7.-P. 1701-1717.

164. Hawley-Nelson P., Ciccarone V., Gebeyehu G., Jesse J., Feigner P. L. Lipofectamine reagent: a new, higher efficiency polycationic liposome transfection reagent // Focus. - 1993. - V.15. -P. 73-79.

165. Prieto J., Hernandez-Alcoceba R., Gonzalez-Aseguinolaza G., Mazzolini G., Sangro В., Kramer G. Gene therapy of liver diseases. // Expert Opin. Biol. Th. - 2004. - V.4. - P. 10731091.

166. Петухов И.А., Маслов M.A., Морозова Н.Г., Серебренникова Г.А. Синтез поликатионных липидов на основе холестерина и спермина // Известия Академии наук. Серия химическая. - 2010. - № 1. - С. 254-261.

167. Petukhov I.A., Maslov М.А., Morozova N.G., Serebrennikova G.A. Convenient synthesis of polycationic amphiphiles by the Fukuyama reaction // Mendeleev Commun. - 2009. - V. 19-P. 250-252.

168. Maslov M.A., Kabilova Т.О., Petukhov I.A., Morozova N.G., Serebrennikova G.A., Vlassov V.V., Zenkova M.A. Novel cholesterol spermine conjugates provide efficient cellular delivery of plasmid DNA and small interfering RNA // J. Control. Release. - 2012. - V. 160. - P. 182193.

169. Balaji P.V., Qasba P.K., Rao V.S. Molecular dynamics simulations of asialoglycoprotein receptor ligands. // Biochemistry. - 1993. - V. 32. - P. 12599 - 12611.

170. Dam Т. K., Brewer C. F. Multivalent lectin-carbohydrate interactions energetics and mechanisms of binding. // Adv. Carbohydr. Chem. Biochem. - 2010. - V. 63. - P. 139-164

171. Biessen E.A.L., Beuting D.M., Roelen H.C.P.F., van de Marel C.A., van Boom J.H., van Berkel T.J.C. Synthesis of cluster galactosides with high affinity for the hepatic asialoglycoprotein receptor // J. Med. Chem. - 1995. - V. 38. - P. 1538-1546.

172. Толкач A. M., Полоник С. Г., Уварова Н. И. Способ получения н-гликозидов // А. С. 1428755 СССР; Бюл. изобрет. - 1988. - С. 37.

173. Шмендель Е.В., Маслов М.А., Морозова Н.Г., Серебренникова Г.А. Синтез неогликолипидов для применения в невирусных системах доставки генетического

материала // Известия Академии наук. Серия химическая. - 2010. - V. 12. - С. 22252239.

174. Helferich glycosilation in Comprehensive organic name reaction and reagents (Ed. by Z. Wang) // Wiley-Interscience, 2010. - P. 1367-1370.

175. Гершкович А.А. Синтез пептидов. Реагенты и методы. / Гершкович А.А., Кибирев В.К. // Киев: Наук, думка, 1987. - С.119.

176. Kohn М., Breinbauer R. The Staudinger ligation - A gift to chemical biology // Angew. Chem. Int. Ed. - 2004. - V. 43. - P. 3106 -3116.

177. Staudinger H., Hauser E. Reaction of triphenilphosphinimines and alkylhalides // Helv. Chim. Acta. - 1921.-V. 4.-P. 861.

178. Saxon E., Bertozzi C.R. Cell surface engineering by a modified staudinger reaction. // Science. - 2000. - V. 287. - P. 2007 - 2010.

179. Wang C.C., Seo T.S., Li Z., Ruparel H., Ju J. Site-specific fluorescent labeling of DNA using Staudinger ligation. // Bioconjug Chem. - 2003. - V. 14. - P. 697-701.

180. Soellner M.B., Dickson K.A., Nilsson B.L., Raines R.T. Site-specific protein immobilization by Staudinger ligation // J. Am. Chem. Soc. - 2003. - V. 125. - P. 11790-11791.

181. Nilsson B.L., Kiessling L.L., Raines R.T. Staudinger ligation: a peptide from a thioester and azide // Org. Lett. - 2000. - V. 2. - P. 1939-1941.

182. Ahmed O.A.A., Adjimatera N., Pourzand C., Blagbrough I. S. Л^Х-dioleoyl spermine is a novel nonviral lipopolyamine vector for plasmid DNA formulation // Pharmaceutical Research. - 2005. - V. 22. - P. 972-980.

183. Гершкович А.А. Синтез пептидов. Реагенты и методы. / Гершкович А.А., Кибирев В.К. // Киев: Наук, думка, 1987. - С. 47.

184. Neuner P., Monaci P. New Fmoc pseudoisocytosine monomer for the synthesis of a bis-PNA molecule by automated solid-phase Fmoc chemistry // Bioconjug. Chem. - 2002. - V.13. -P.676-678.

185. Winkler J., Urban E., Losert D., Wacheck V., Pehamberger H., Noe C.R. A novel concept for ligand attachment to oligonucleotides via a 2'-succinyl linker. // Nuc. Acids Res. - 2004. - V. 32.-P. 710-718.

186. Adams R., Ulich L.H. The use of oxalyl chloride and bromide for producing acid chlorides? Acid bromides or acid anhydrides // J. Am. Chem. Soc. - 1920. - V. 42. - P. 599-611.

187. Salvati A., Ciani L., Ristori S., Martini G., Masi A., Arcangeli A. Physico-chemical characterization and transfection efficacy of cationic liposomes containing the pEGFP plasmid. // Biophys. Chem. - 2006. - V. 121. - P. 21-29.

188. Bajaj A., Mishra S. K., Kondaiah P., Bhattacharya S. Effect of the headgroup variation on the gene transfer properties of cholesterol based cationic lipids possessing ether linkage // Biochim. Biophys. Acta. -2008. -V. 1778. - P. 1222.

189. Ciani L., Ristori S., Salvati A., Calamai L., Martini G. DOTAP/DOPE and DC-Chol/DOPE lipoplexes for gene delivery: zeta potential measurements and electron spin resonance spectra // Biochim. Biophys. Acta. - 2004. - V.1664. - P. 70-79.

190. Zhang Y., Li H., Sun J., Gao J., Liu W., Li В., Guo Y., Chen J. DC-Chol/DOPE cationic liposomes: A comparative study of the influence factors on plasmid pDNA and siRNA gene delivery // Int. J. Pharm. - 2010. - V. 390. - P. 198-207.

191. Kapoor M., Burgess D.J., Patil S.D. Physicochemical characterization techniques for lipid based delivery systems for siRNA // Int. J. Pharm. - 2012. - V. 427. - P. 35-57.

192. Yang S., Zheng Y., Chen J., Zhang Q., Zhao D., Han D., Chen X. Comprehensive study of cationic liposomes composed of DC-Choi and cholesterol with different mole ratios for gene transfection // Colloid. Surface. B. - 2013. - V. 101. - P. 6-13.

193. Rando R.R., Bangerter F.W. Threshold effects on the lectin-mediated aggregation of synthetic glycolipids containing liposomes // J. Supramol. Struct. - 1979. - V. 11. - P. 295-309.

194. Cummings R.D., Etzler M.E. R-type lectines in Essentials of Glycobiology. 2-nd edition. (Ed. by Varki A., Cummings R.D., Esko J.D. et al.) // Cold Spring Harbor (NY): Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2009. - 784 pages.

195. Gelhausen M., Besson F., Chierici S., Lafont D., Boullanger P., Roux B. Lectin recognition of liposomes containing neoglycolipids. Influence of their lipidic anchor and spacer length // Colloid. Surface B. - 1998. - V. 10. - P. 395-404.

196. Engel A., Chatterjee S.K., Al-Arifi A., Nuhn P. Influence of spacer length on the agglutination of glycolipid-incorporated liposomes by ConA as model membrane // J. Pharm. Sci. - 2003. -V.92.-P. 2229- 2235.

197. Shimada K., Kamps J.A.A.M., Regts J., Ikeda K., Shiozawa Т., Hirota S., Scherphof G.L. Biodistribution of liposomes containing synthetic galactose-terminated diacylglyceryl-polyethyleneglycols // Biochim. Biophys. Acta. - 1997. -V. 1326. - P. 329-341.

198. Tamiaki H., Azefu Y., Shibata R., Sato R., Toma K. Oligomethylene spacer length dependent interaction of synthetic galactolipids incorporated in phospholipid layers with ricin // Colloid. Surface. B. - 2006. - V. 53. - P. 87-93.

199. Аникин M.B., Ушакова И.П., Серебренникова Г.А., Евстигнеева Р.П. Синтез 1,2-ди-О-алкилглицеринов с использованием аллильной защитной группы. // Черкассы. - 1987. -Деп. ОНИИТЭИХим. - №915-хп87

200. Dahmen J., Frejd T., Magnusson G., Noori G. Preparation and applications of 2-bromoethyl glycosides: synthesis of spacer-arm glycosides and agglutination inhibitors. // Carbohyd. Res. - 1982.-V. 111.-P. C1-C4.

201. Донсон P. Справочник биохимика. / Донсон P., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. // Москва: Мир, 1991. - С. 391.

202. Донсон Р. Справочник биохимика. / Донсон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. // Москва: Мир, 1991. - С. 383

203. Донсон Р. Справочник биохимика. / Донсон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. // Москва: Мир, 1991. - С. 403

204. Kritchevsky D., Kirk M.R. Detection of steroids in paper chromatography. // Arch. Biochem. Biophys. - 1952. - V. 35. - P. 346-351

205. Weigel P.H., Naoi M., Roseman S., Lee Y.C. Preparation of 6-aminohexyl D-aldopyranosides // Carbohyd. Res. - 1979. - V. 70. - P. 83-91.