Синтез и изучение связи структура - активность новых производных генно-инженерных полиеновых антибиотиков, родственных амфотерицину B тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, кандидат химических наук Соловьева, Светлана Евгеньевна

• Соловьева, Светлана Евгеньевна
• кандидат химических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат химических наук Соловьева, Светлана Евгеньевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

МОДИФИКАЦИЯ ПРОТИВОГРИБКОВЫХ МАКРОЛИДНЫХ ПОЛИЕНОВЫХ АНТИБИОТИКОВ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

Введение.

1. Природные и генно-инженерные полиеновые макролидные антибиотики

1.1. Природные противогрибковые полиеновые антибиотики.

1.2. Аналоги полиеновых антибиотиков, полученные генно-инженерными методами.

2. Механизм действия полиеновых антибиотиков.

3. Полусинтетические производные полиеновых макролидных антибиотиков: получение и свойства.

3.1. Производные амфотерицина В по готическому гемикеталю агликонового фрагмента.

3.2. Производные полиеновых антибиотиков по карбоксильной группе.

3.3. Производные полиеновых антибиотиков по 3'-аминогруппе остатка микозамина.

3.4. Дважды модифицированные производные полиеновых антибиотиков.

3.5. Фторсодержащие аналоги амфотерицина В.

3.6. Циклические производные амфотерицина В.

3.7. Дгшеры амфотерицина В.

4. Конъюгаты амфотерицина В с макромолекулами: получение и свойства

4.1. Конъюгаты амфотергщина В с полисахаридами.

4.2. Конъюгаты амфотерицина В с полиэтиленгликолем.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Синтез и изучение связи структура - активность новых производных генно-инженерных полиеновых антибиотиков, родственных амфотерицину B»

В последнее десятилетие все более остро стоит проблема лечения инфекционных заболеваний, вызванных грибковыми^ инфекциями, что обусловлено возрастанием числа пациентов с иммуносупрессией различного происхождения, а также развитием устойчивости патогенов к применяемым препаратам.

Углеводсодержащие полиеновые антибиотики-макролиды находят широкое применение в медицинской практике для лечения как поверхностных, так и глубоких микозов благодаря своей высокой активности и широкому спектру действия. Нистатин Аь партрицин А, пимарицин и другие противогрибковые антибиотики применяются местно, а амфотерицин В, единственный из полиенов, используется преимущественно для лечения глубоких системных микозов. Их высокая гемато- и нефротоксичность, плохая растворимость в воде, низкая всасываемость из желудочно-кишечного тракта и целый ряд других побочных реакций стимулировали интенсивные поиски новых менее токсичных и более эффективных препаратов. Однако до последнего времени ни одно из новых природных, полусинтетических или биосинтетических производных из группы полиеновых макролидов, показавшее некоторые преимущества перед «золотым стандартом» амфотерицином В в эксперименте, не было внедрено в клинику.

С развитием генной инженерии за последние годы появилась возможность получать новые активные аналоги полиенов, которые могут быть использованы как сами по себе, так и в качестве стартовых соединений в химическом синтезе для создания новых противогрибковых препаратов с улучшенными фармакологическими характеристиками. Исследования в области получения и изучения связи структура-активность новых полиеновых структур расширяют фундаментальные знания о сайтах молекулы, ответственных за биологическую активность и направлены на создание противогрибковых средств нового поколения.

Целью настоящей работы является разработка методов химической модификации, получение и изучение биологических свойств новых производных генно-инженерных полиеновых антибиотиков, обладающих преимуществами перед родительскими антибиотиками.

Были поставлены следующие задачи: 1) разработать методы препаративной очистки исходных сырцов генно-инженерных полиеновых антибиотиков S44HP, BSG005, BSG18, BSG019; 2) разработать методы избирательной модификации функциональных групп (С(16)-карбоксильной группы или/и 3-аминогруппы) с сохранением основного скелета молекулы антибиотика, ответственного за противогрибковую активность; 3) получить серии новых моно- и дважды модифицированных производных на основе генно-инженерных полиенов S44HP, BSG005, BSG003, BSG022; 4) получить водорастворимые солевые формы синтезированных полусинтетических производных; 5) наработать наиболее активные соединения в количествах, необходимых для изучения в опытах in vivo; 6) для полученных соединений изучить связь структура - противогрибковая активность в опытах in vitro и in vivo.

Модификация противогрибковых макролидных полиеновых антибиотиков (Обзор литературы) Введение

Возрастание числа больных с грибковыми инфекциями (микозами) как поверхностными, так и инвазивными (системными) связано прежде всего со значительным увеличением числа пациентов с иммунодефицитом [1, 2]. Особенную опасность представляют собой инвазивные микозы. Так, например, инвазивный кандидоз характеризуется тяжестью клинических проявлений и высокой (30-70%) смертностью, а смертность при инвазивном аспергиллезе превышает 50% [1]. Частота инвазивного микоза в онкогематологических стационарах достигает 50%, и даже в условиях интенсивной противогрибковой терапии смертность от микозов детей, больных лейкозом, составляет 29% - 39% [3].

Арсенал средств для лечения системных грибковых инфекций ограничен. Уже более 50 лет для лечения применяются полиеновые макролидные антибиотики, среди которых наиболее важен амфотерицин В (АшВ) вследствие его высокой эффективности и широкого спектра действия. Успешное применение противогрибковых препаратов из класса азолов на какое-то время отодвинуло полиеновые макролиды на второй план, однако быстрое привыкание микроорганизмов к азолам [1,2] побудило усилить поиск новых препаратов [2,4].

Важным преимуществом полиенов перед другими типами противогрибковых препаратов является сравнительно низкая частота развития устойчивости к ним. В настоящее время АтВ - единственный полиеновый макролид, разрешенный к применению при системных грибковых инфекциях. Однако применение АтВ существенно ограничено вследствие выраженной нефротоксичности, гематотоксичности, очень низкой растворимости в воде и субоптимальной фармакокинетики (т.е. лечебные дозы препарата близки к максимально переносимым дозам) [1,2].

Необходимость поиска новых противогрибковых средств среди полиенов связаны с потребностью в создании препаратов, более эффективных для лечения инвазивных микозов, и в то же время, лишенных тяжелых побочных эффектов.

В мировой практике создание новых перспективных препаратов осуществляется, главным образом, химической модификацией природных антибиотиков. За последние 15 лет разработаны и предложены новые реагенты и методы, которые позволили получить серии новых полусинтетических производных на основе природных полиенов. Было изучено влияние отдельных элементов структуры антибиотиков на противогрибковую активность в модельных опытах in vitro и in vivo. В ряде случаев удалось получить препараты нового поколения, перспективные для внедрения в клинику.

Механизм действия полиенов, который мог бы помочь в целенаправленном поиске новых структур, еще недостаточно изучен. За эти годы появилась серия публикаций, посвященных углубленному изучению механизма действия полиеновых антибиотиков, и с этой целью специально были синтезированы их новые аналоги.

С развитием генной инженерии за последние годы появилась также возможность создавать новые биосинтетические аналоги [4]. Они могут быть использованы сами по себе или в качестве стартовых соединений в химическом синтезе для получения новых противогрибковых препаратов с улучшенными фармакологическими характеристиками.

В последнее десятилетие опубликовано несколько обзоров, посвященных полиеновым антибиотикам. Однако они либо несут общий ознакомительный характер [5], либо в них сконцентрировано внимание на полном синтезе антибиотика АшВ [6].

Настоящий обзор посвящен основным достижениям за последние ~15 лет в области создания новых аналогов АтВ и других родственных полиенов методами современного химического дизайна.

Заключение диссертации по теме «Биоорганическая химия», Соловьева, Светлана Евгеньевна

выводы

1. Разработаны методы химической модификации генно-инженерных,гептаенов по 3-аминогруппе остатка микозамина или С(16)-карбоксильной группе агликона. Получение карбоксамидов антибиотиков проводилось в присутствии РуВОР без1 предварительной, защиты аминогруппы микозамина. Для модификации 3'-аминогруппы использованы методы восстановительного аминирования, N-аминоацилирования и реакция Амадори.

2. Строение продукта перегруппировки Амадори, образующегося при взаимодействии антибиотика S44HP с 1-13C-D -глюкозой, подтверждено методом С ЯМР спектроскопии.

3. Разработаны методы двойной химической трансформации полиеновых антибиотиков с использованием двух подходов - N-замещение карбоксамидов или амидирование N-аминоацилированных полиеновых антибиотиков.

4. Получено 48 новых соединений (монозамещенные производные N-алкильного или N-аминоацильного типа, или С(16)-карбоксамиды, а также дважды модифицированные аналоги). Изучена их противогрибковая активность в опытах in vitro. Среди них 25 соединений показали близкую или превосходящую активность амфотерицину В.

5. Показано, что влияние на противогрибковую активность введения одного и того же заместителя в молекулу полиеновых антибиотиков, отличающихся заместителями при С(16) может быть разнонаправленным.

6. Установлено, что расположение гидроксильных групп в полиольном регионе агликона является определяющим для проявления противогрибковой активности и наиболее благоприятно в положениях С(7) и С(10), что соответствует антибиотику S44HP, его С(16)-метильному аналогу BSG005 и их производным.

7. Шесть новых производных полиеновых макролидов наработаны в препаративных количествах (чистота >95% по данным ВЭЖХ) для изучения в опытах in vivo; показано, что четыре из них (производные S44HP и BSG005) обладают преимуществом перед амфотерицином В; 2-(Ы,>Т-диметиламино)этиламид S44HP (28) отобран для углубленного доклинического изучения.

Диссертационная работа выполнена в сотрудничестве с Норвежским Университетом Науки и Технологии (г. Трондхейм), а также поддержана грантом Президента РФ НШ 5290-2010 и грантом РФФИ 10-03-00210а.

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор выражает глубокую признательность д.х.н. проф. Преображенской Марии Николаевне за научные консультации и плодотворное обсуждение диссертации.

Автор выражает благодарность за помощь в работе по синтезу и очистке производных к.х.н. А.Н. Тевяшовой, к.х.н. С.С. Принцевской и Т.А. Лойм, за получение и интерпретацию ЯМР-спектров к.х.н. Ю.Н. Лузикову, за получение данных ВЭЖХ -к.б.н. М.И. Резниковой и Н.М. Малютиной, за проведение биологических испытаний сотрудникам отдела микробиологии и лаборатории фармакологии и химиотерапии Учреждения Российской Академии Медицинских Наук НИИ по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе.

5. Заключение

Подводя итог, можно отметить, что за последние 30 лет получено4 множество производных полиеновых антибиотиков и накоплен практический опыт по синтезу и изучению их биологической активности. На основе изучения связи структура -активность определены главные сайты молекулы, ответственные за проявление противогрибковой активности. Предложена молекулярная модель комплекса антибиотика с мишенью. Однако многие вопросы остаются невыясненными. И главное - как нужно изменить, «подправить» молекулу антибиотика, чтобы сохранить высокую противогрибковую активность и снизить токсичность. Имеются объективные сложности в изучении механизма действия полиенов, решение которых могло бы помочь в целенаправленном поиске перспективных структур. В частности, применяющаяся для исследований модель взаимодействия антибиотика с мишенью -мембраной дает недостаточную информацию. Недостаточно изучено влияние заряда в положении С(16) (карбоксильной группы) молекулы амфотерицина В на биологические свойства; не ясно влияние числа и расположения гидроксильных групп в полиольном фрагменте и ряда других факторов на проявление нежелательных токсических эффектов. Все эти проблемы отчасти объясняют, почему до настоящего времени для лечения инвазивных микозов не удалось внедрить в клиническую практику ни одного нового препарата полиеновой группы, заменяющих амфотерицин В, хотя попытки делались неоднократно и делаются сейчас. Проблема снижения токсичности и одновременного увеличения противогрибковой активности не может быть решена только биохимическими исследованиями или в опытах на культурах клеток in vitro.

В то же время синтез и изучение новых рядов полиеновых структур, отличающихся одной или двумя модификациями, и изучение связи структура-активность открывают новые возможности создания и последующего отбора перспективных соединений для углубленного изучения. На достаточно раннем этапе требуется проведение серии биологических испытаний in vivo, поскольку опыты на животных остаются наиболее достоверным способом выявления эффективных лекарственных противогрибковых средств с улучшенными фармакологическими характеристиками. Особую ценность представляют модельные опыты на иммунодефицитных животных, так как они наиболее приближены к условиям будущего клинического применения полиеновых антибиотиков при системных грибковых заболеваниях.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ *

Полиеновые макролидные антибиотики, такие как амфотерицин В (1) и нистатин А1 (2)' (рис 1). используются в клинической практике на протяжении последних 50 лет вследствии их эффективности и широкого спектра действия. Однако и они имеют ряд недостатков, вызванных прежде всего их высокой токсичностью и низкой растворимостью в воде. В промышленных масштабах -1 и 2 производят путем биосинтеза. Одним из перспективных направлений поиска новых полиеновых макролидных антибиотиков являются методы генной инженерии (см. обзор литературы, раздел 1.2).

Рис 1. Структуры некоторых полиеновых антибиотиков применяемых в клинике.

Характеристика исходных генно-инженерных полиеновых антибиотиков.

Объектом настоящего исследования являются новые генно-инженерные полиеновые макролиды: 844НР, ВБОООЗ, В80005, В80018, В8в019 и В8С022 (Рис 2), созданные в Норвежском Университете Науки и Технологии (г. Трондхейм, Норвегия) и представляющие собой аналоги нистатина А1 (2). Новые полиены были получены в результате манипуляций с генным материалом на основе штамма продуцента 2, который содержит 4+2 сопряженных двойных связей и относится к группе тетраенов. В то же время все новые генно-инженерные полиены правомерно рассматривать также близкими аналогами амфотерицина В (1), поскольку они так же, как и амфотерицин В входят в группу гептаенов. нумерация соединений, рисунков, схем и таблиц отлична от использованной в обзоре литературы.

На основе штамма продуцента нистатина А1 (2) бактерии БП-ерЮтусея поиг$е1 АТСС 11455 методами генной инженерии норвежскими учеными (Зотчев С.Б. и сотр.) был создан мутантный штамм 5. поиг$& С050738Р с генетически измененной ПКС КуБС. Из-за отсутствия в домене еноилредуктазы рекомбинантный штамм продуцировал гептаеновый аналог нистатина 28,29-дидегидронистатин А1 - Б44НР (3) (Рис 2) [10].

Рис 2. Структуры генно-инженерных аналогов нистатина А]. он он

16 (3) 844НР, Я=СООН

Л (4) В8С005, Я^СНз

5) BSG022, R=COOH

6) BSG019, R=CH3

R (7) BSG003, R=COOH (8) BSG018, R=CH3

Работа этого фермента в случае биосинтеза 2 приводила к образованию одинарной связи между атомами С(28)-С(29), в то время как в процессе биосинтеза 1 двойная связь в том же положении не восстанавливалась. Соединение 3 превосходило исходный 2 по противогрибковой активности в 2-10 раз в большинстве тестов in vitro, и проявляло более широкий интервал между максимально переносимой дозой (МПД) и средней летальной дозой (1ЛЭ50) в опытах на животных по сравнению с 1 [14]. Появление дополнительной двойной связи С(28)-С(29) в полиеновой части молекулы 2 повышало его противогрибковую активность в отношении большинства изученных штаммов, что может быть объяснено повышением эффективности взаимодействия антибиотика с мишенью микроорганизмов (см. литературный обзор, раздел 2. механизм действия).

Инактивация гена, ответственного за работу метилоксидазы А^уА^, окисляющей С(16)-метильную группу в С(16)-карбоксильную, в рекомбинантном штамме-продуценте 844НР (3) - & поикег, привела к образованию высокоактивного аналога 16-декарбокси-16-метил-28,29-дидегидронистатина А] - ВБ0005 (4) (.Рис 2) (Приложение 1). При сохранении высокой противогрибковой активности на уровне 3, 4 проявил существенно меньшую токсичность по сравнению с 3 и АтВ (1) [15].

Структуры двух других С(16)-карбоксилсодержащих генно-модифицированных полиенов, используемых в работе, были созданы на основе мутантного штамма-продуцента 3 и отличались от него расположением гидроксильных групп в полиольной части молекулы при атомах С(9) и С(10) (Рис 2). Инактивация работы цитохром Р450-зависимой монооксигеназы ЫуяЬ на завершающей стадии биосинтеза 3 привела к блокированию реакции гидроксилирования положения С(10) в молекуле полиена. Таким образом был получен новый полиеновый антибиотик 10-дезокси-28,29-дидегидронистатин А1 - ВБС022 (5) (Рис 2) (Приложение 2). Инактивация дегидратазного домена в модуле 15 (БН15) в ПКС NysJ путем сайт специфического мутагенеза позволило ввести дополнительную гидроксильную группу в положение С(9). В связи с изменением в данной области, участок С(9)-С(11) перестал распознаваться монооксигеназой ЫуяЬ и вследствие этого положение С(10) не гидроксилировалось. Такая генная манипуляция привела к образованию нового поливного антибиотика 9-гидрокси-10-дезокси-28,29-дидегидронистатина А1 - ВБОООЗ (7) (Рис 2) (Приложение 3, 4). Их соответствующие С(16)-декарбокси-С(16)-метильные аналоги - BSG019 (6) и BSG018 (8) (Рис 2) получены так же, как и 4 путем блокирования работы С(16)-метилоксидазы NysN (Приложение 4, 5, 6).

Таким образом, в нашем' распоряжении были 3 пары новых- генно-инженерных^ полиеновых антибиотиков: S44HP (3) и BSG005 (4), BSG022 (5) h<BSG019 (6), BSG003 (7) и BSG018 (8) (Рис 2). Внутри каждой пары заместитель.при,С(16) представлен карбоксильной или метальной группой, а каждая пара отличается от других пар и от AmB (l) расположением гидроксильных групп в области С(7)-С(10) полиольной части, агликона антибиотика. Это является уникальным материалом для изучения роли фрагментов структур данных генно-инженерных полиеновых антибиотиков в проявлении биологической активности.

1. Разработка методов очистки полиеновых антибиотиков.

Генно-инженерные полиеновые антибиотики, являются перспективными для дальнейшего изучения с целью продвижения их в медицинскую практику, а также для использования в качестве стартовых соединений при получении новых полусинтетических производных. В связи с этим, необходимо было наработать исходные генно-инженерные полиеновые антибиотики в препаративных количествах с высокой степенью чистоты (>95% содержания основного вещества по данным ВЭЖХ).

Работа по очистке и химической модификации полиеновых макролидов является нетривиальной- задачей, поскольку осложнена их ограниченной растворимостью в водных растворах и во многих органических растворителях, а также лабильностью в кислых и щелочных растворах, агрегацией, легкостью окисления кислородом воздуха и склонностью к изомеризации транс-диеновых фрагментов в цис-диеновые под действием света.

Образцы генно-инженерных полиенов (3-8) (Рис 2), предоставленные фирмой SINTEF (Норвегия), представляли собой сырцы, выделенные после ферментации и содержащие различные примеси соединений как полиеновой, так и- неполиеновой природы. Антибиотик S44HP (3) единственный из всех имел приемлемую чистоту (9255

94% псь данным ВЭЖХ) и использовался для дальнейшей модификации без предварительной очистки. Суммарное содержание полиенов в сырцах определяли на основании спектрофотометрии их растворов в БМБО (0.01 мг/мл) в УФ диапазоне и в 1 видимой области (ВО) при длине волны 415 нм. В качестве стандарта использовался 3. Полиеновый состав анализировали с помощью ВЭЖХ и масс-спектрометрии. В таблице 1 приведены некоторые характеристики исходных полиенов. В качестве основных примесей полиеновой природы были идентифицированы соответствующие агликоны и вещества, содержащие дополнительный углеводный остаток в составе молекулы.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Соловьева, Светлана Евгеньевна, 2011 год

1. Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии.// Страчунский Л.С., Белоусов Ю.Б., Козлов С.Н.-М: Боргес.- 2002.

2. Demain A.L., Sanchez S. Microbial drug discovery: 80 years of progress.// J.Antibiotics.-2009.-V. 62.-P. 5-16.

3. Caffery P., Aparicio J.F., Malpartida F., Zotchev S.B. Biosynthetic engineering of polyene macrolides towards generation of improved antifungal and antiparasitic agents.// Curr. Top. Med. Chem.-2008.-V. 8.-P. 639-653.

4. Espinel-Ingroff A. Antifungal agents.// Encyclopedia of microbiology, third edition. Elsevier Inc. USA.-2009.

5. Cereghetti D.M., Carreira E.M. Amphotericin B: 50 years of chemistry and biochemistry.// Synthesis.-2006.-V. 6.-P. 914-942.

6. Czerwinski A., Konig W.A., Sowinski P., Borowski E. Amides of polyene macrolide aureofacin. Synthesis and biological properties.// J.Antibiotics.-1987.-V. 40.-P. 10231027.

7. Yoshioka S., Stella V.J. Stability of drugs and dosage forms.// Kluver Academic/Plenum Publishers NY.-2000.

8. Borgos S.E.F., Tsan P., Sletta H., Ellingsen T.E.,.Lancelim J.-M, Zotchev S.B. Probing the structure-function relationship of polyene macrolides: engineered biosynthesis of soluble nystatin analogues.// J. Med. Chem.-2006.-V. 49.-P. 2431-2439.

9. Bruheim P., Borgos S.E.F., Tsan P., Sletta H., Ellingsen Т.Е., Lancelin J-M., Zotchev S.B. Chemical diversity of polyene macrolides produced by Streptomyces noursei

10. АТСС11455 and recombinant strain ERD44 with genetically altered polyketide synthase NysC.//Antimicrob. agents and chemother.-2004.-V. 48.-P. 4120-4129.

11. Byrne В., Carmody M., Gibson E., Rawlings В., Caffrey P. Biosynthesis of deoxyamphotericins and deoxyaphteronolides by engineered strains of Streptomyces nodosus.//Chemistry and Biology.-2003.-V. 10.-P. 1215-1224.

12. Carmody M., Murphy В., Byrne В., Power P., Rai D., Rawlings В., Caffrey P. Biosynthesis of amphotericin derivatives lacking exocyclic carboxyl groups.// J. Biol. Chem.-2005.-V. 280.-P. 34420-34426.

13. Palacios D., Anderson Т., Burke M. A post-PKS oxidation of the amphotericin В skeleton predicted to be critical for channel formation is not required for potent antifungal activity.//J. Am. Chem. Soc.-2007.-V.0129.-P. 13804-13805.

14. Matsumori N., Tahara K., Yamamoto H., Morooka A., Doi M., Oishi Т., Murata M. Direct interaction between amphotericin В and ergosterol in lipid bilayers as revealed by 2HNMR spectroscopy.//J. Am. Chem. Soc.-2009.-V. 131.-P. 11855-11860.

15. Структура и мембранная функция полиеновых макролидных антибиотиков.// Касумов Х.М.-М.: Наука, Баку: ЭЛМ.-2009.

16. Andreoli Т.Е. The structure and function of amphotericin В cholesterol pores in lipid bilayer membranes.// Ann. N.Y.Acad. Sci.-1974.-V. 235.-P. 448-468.

17. Matsumori N., Sawada Y., Murata M: Large molecular assembly of Amphotericin В formed in ergosterol-containing membrane evidenced by solid-state NMR of intramolecular bridged derivative.// J. Am. Chem. Soc.-2006.-V. 128.-P. 11977-11984.

18. Шенин Ю.Д., Белахов В.В. Амфотерицин В: свойства, химическое строение, поиск производных.//Антибиотики и химиотерапия.-1997.-Т. 42.-С. 34-46.

19. Шенин Ю.Д., Белахов В.В., Аравийский Р.А. Нистатин: методы получения, поиск производных и перспективы медицинского применения.// Хим.-фарм. журн.-1993,-Т. 27.-С. 14-21.

20. Driver M.J., Greenlees A.R., MacPherson D.T. A versatile strategy for the derivatisation of the carboxy group of amphotericin B: the preparation of C-16 ketone analogues.// J. Chem. Soc. Perkin Trans.-1992.-V. 23.-P. 3155-3157.

21. Driver M.J., Greenlees A.R., MacLachlan W.S., MacPherson D.T., Taylor A.W. Synthesis of 16-decarboxy-16 hydroxymethyl amphotericin В a novel antifungal agent.// Tetr. Lett.-1992.-V. 33.-P. 4357-4360.

22. Corbett D.F., Dean D.K., Greenlees A.R., Macpherson D.T. Synthesis and antifungal activity of C-16 oximino and vinyl amphotericin В derivatives.// J. Antibiotics.-1995.-V. 48.-P. 509-515.

23. Taylor A.W., Costello B.J., Hunter P.A., MacLachlan.W.S., Shanks C.T. Synthesis and antifungal selectivity of new derivatives of amphotericin B' modified at the C-13 position.//J. Antibiotics.-1993.-V. 46.-P. 486-493.

24. Taylor A.W., MacPherson D.T. Preparation of a novel C-13 thioacetal derivatives ofamphotericin B.// Tetrahedron Lett.-1994.-V. 35.-P. 5289-5292.

25. MacLachlan W.S., Readshaw S.A. Stereoselective synthesis of 13-dehydroxy-(14S)-hydroxyamphotericin В methyl ester.// Tetrahedron Lett.-1995.-V. 36.-P. 1735-1738.

26. Bonner D.P., Mechlinski W., Schaffher C.P. Ill Biological properties of polyene macrolide esters salts.// J. Antibiotics.-1972.-V. 25.-P. 261-262.

27. Jarzebski A., Falkowski L., Borowski E. Synthesis and structure-activity relationship of amides of Amphotericin B.// J. Antibiotics.-1982.-V. 35.-P. 220-229.

28. Slisz M., Cybulska В., Grzybowska J., J.Czub, Prasad R., Borowski E. The mechanism of overcoming multidrug resistance (MDR) of fungi by amphotericin В and its derivatives.// J. Antibiotics.-2007.-V. 60.-P. 436-446.

29. Bruzzese Т., Rimaroli C., Bonabello A., Ferrari E., Signorini M. Amide derivatives of partricin A with potent antifungal activity.// Eur. J. Med. Chem.-1996.-V. 31.-P. 965-972.

30. Белахов B.B., Шенин Ю.Д. Синтез и противогрибковая активность N-бензильных производных амфотерицина В.// Хим.-Фарм. Жур.-2007.-Т. 41.-С. 20-24.

31. Paquet V., Carreira Е.М. Significant improvement of antifungal activity of polyene macrolides by bisalkylation of the mycosamine.// Org. Lett.-2006.-V. 8.-P. 1807-1809.

32. Белахов B.B., Шенин Ю.Д., Аравийский P.A., Штильбанс Е.Б. Синтез и биологическая активность гидрофосфорильных производных амфотерицина В.// Антибиотики и химиотерапия.-1996.-Т. 41.-С. 4-8.

33. Mechlinski W., Schaffher C.P. Polyene macrolide derivatives. I N-acylation and esterification reactions with amphotericin В.// J. Antibiotics.-1972.-V. 25.-P. 256-258.

34. Slisz M., Cybulska В., Mazerski J., Grzybowska J., Borowski E. Studies of the effects of antifungal cationic derivatives of amphotericin В on human erythrocytes.// J. Antibiotics.-2004.-V. 57.-P. 669-678.

35. Grzybowska J., Sowinski P., Gumieniak J., Zieniawa T., Borowski E. N-methyl-N-D-fhictopyranosylamphotericin B methyl ester, new amphotericin B derivative of low toxicity.//J. Antibiotics.-1997.-V. 50.-P. 709-711.

36. K.Wright J.J., Albarella J.A., Krepski L.R., Loebenberg D. N-aminoacyl derivatives of polyene macrolide antibiotics and their esters.// J. Antibiotics.-1982.-V. 35.-P. 911-914.

37. Rimaroli C., Bruzzese T. In vitro activity of new polyene, SPA-S-843, against yeasts.// Antimicrob. Agents Chemother.-1998.-V. 42.-P. 3012-3013.

38. KazanahN., Hamann M.T. SPK-843 (Aparts/Kaken).// Current opinion in investigational drugs.-2005.-V. 6.-P. 845-853.

39. Matsumori N., Umegawa Y., Oishi T., Murata M. Bioactive fluorinated derivative of amphotericin B.// Bioorg. Med. Chem. Lett.-2005.-V. 15.-P. 3565-3567.

40. Tsuchikawa H., Matsushita N., Matsumori N., Murata M., Oishi T. Synthesis of 28-19F-amphotericin B methyl ester.// Tetrahedron Lett.-2006.-V. 47.-P. 6187-6191.

41. Matsumori N., Sawada Y., Murata M. Derivatives with an amino-carbonyl bridge.// J. Am. Chem. Soc.-2005.-V. 127.-P. 10667-.10675

42. Matsumori N., Yamaji N., Matsuoka S., Oishi T., Murata M. Amphotericin B covalent dimers forming sterol-dependent ion-permeable membrane channels.// J. Am. Chem. Soc.-2002.-V. 124.-P. 4180-4181.

43. Umegawa Y., Matsumori N., Oishi T., Murata M. Amphotericin B covalent dimers with carbonyl-amino linkage: a new probe for investigation ion channel assemblies.// Tetrahedron Lett.-2007.-V. 48.-P. 3393-3396.

44. Silverman R. Organic chemistry of drug design and drug action.// San Diego: Elsevier Academic Press.-2004.

45. Falk R., Domb A.J., Polacheck I. A novel: injectable water-soluble amphotericin B-arabinogalactan conjugate.// Antimicrobial agents and chemotherapy.-1999.-V: 43.-P. 1975-1981.

46. Ehrenfreund-Kleinman T., Azzam T., Falk R., Polacheck L Synthesis and characterization of novel' water soluble amphotericin B-arabinogalactan conjugates.// Biomaterials.-2002.-V. 23.-P. 1327-1335.

47. Sokolsky-Papkov M., Domb A.J., Golenser J. Impact of aldehyde content on amphotericin B-dextran imine conjugate toxicity.// Biomacromolecules.-2006.-V. 7.-P. 1529-1535.

48. Ehrenfreund-Kleinman T., Golenser J., Domb A.J. Conjugation of amino-containing drugs to polysaccharides by tosilation: amphotericin B-arabinogalactan conjugates.// Biomaterials.-2004.-V. 25.-P. 3049-3057.

49. Sedlak M., Pravda M., Staud F., Kubicova L., Tycova K., Ventura K. Synthesis of pH-sensitive amphotericin B-poly(ethylene glycol) conjugates and study of their controlled • release in vitro.// Bioorg. Med. Chem.-2007.-V. 15.-P. 4069-4076.

50. Sedlak M.} Pravda M., Kubicova L., Mikulcikova Pi, Ventura K. Synthesis and characterization of a new pH-sensitive amphotericin B-poly(ethylene glycol)-b-poly(L-lysine) conjugate.// Bioorg. Med. Chem. Lett.-2007.-V. 17.-P. 2554-2557.

51. Sedlak M., Drabina P., Bilkova E., Simunek P., Buchta V. New targeting system for antimycotic drugs: p-glucosidase sensitive amphotericin B-star poly(ethylene glycol) conjugate.// Bioorg. Med. Chem. Lett.-2008.-V. 18.-P. 2952-2956.

52. Miroshnikova O.V., Printsevskaya S.S., Olsufyeva E.N., Pavlov A.Y., Nilius A., Hensey-Rudloff D., Preobrazhenskaya M.N. Structure activity relationships in the series of eremomycin carboxamides.// J. Antibiotics.-2000.-V. 48.-P. 3885-3890.