Синтез и изучение свойств поликатионных липофильных агентов трансфекции тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, кандидат химических наук Петухов, Иван Алексеевич

• Петухов, Иван Алексеевич
• кандидат химических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат химических наук Петухов, Иван Алексеевич

Список сокращений.

1. Введение.

2. Литературный обзор.

2.1 Введение и основные положения генной терапии.

2.2. Невирусные векторы на основе поликатионных амфифилов.

2.3. Свойства и эффективность гемини-сурфактантов.

2.4. рН чувствительные конъюгаты для биомедицинского применения.

2.5. Полимеры, липиды и биоконъюгаты, чувствительные к восстановлению.

2.5.1. Катионные полимеры, чувствительные к действию восстанавливающих агентов для внутриклеточной доставки НК.

2.5.2. Полипептиды и белки, чувствительные к восстановлению.

2.5.3. Липосомы, чувствительные к действию восстановливающих агентов.

3. Обсуждение результатов.

3.1. Получение избирательно защищенных-производных спермина.

3.2. Получение производных холестерина с различными линкерными группами.

3.2.1. Синтез бромпроизводных холестерина со сложноэфирным и уретановым линкером.

3.2.2. Синтез галогенпроизводных холестерина с кислотолабильным 0,0-ацетальным линкером.

3.2.3. Синтез амино- и карбоксипроизводных холестерина - с дисульфидной группой в составе спейсера.

3.3. Конденсация холестериновой и сперминовой компонент. Получение целевых поликатионых амфифилов.

3.3.1. Синтез амфифилов типа «голова-хвост» и гемини-амфифилов со сложноэфирным и уретановым линкером.

3.3.2. Синтез поликатионных амфифилов с ацетальным линкером.

3.3.3. Получение поликатионных амфифилов с дисульфидной связью.

3.4. Биологические исследования поликатионных амфифилов.

3.4.1. Изучение токсичности синтезированных амфифилов.

3.4.2. Доставка Р1ТС-меченного дезоксирибонуклеотида (РГГС-СЮМ) комплексами на основе амфифилЮОРЕ.

3.4.2. Доставка плазмидной ДНК комплексами на основе амфифилЮОРЕ.

4. Выводы:.

5. Экспериментальная часть.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Синтез и изучение свойств поликатионных липофильных агентов трансфекции»

Стремительное развитие молекулярной биологии и расширение представлений о молекулярных механизмах, лежащих в основе патогенеза различных заболеваний, привели к значительным изменениям в терапевтических подходах. К настоящему времени известны многие заболевания, не поддающиеся лечению методами традиционной терапии, так как они обусловлены нарушениями в клеточном геноме. Для их лечения развивается одна из перспективных областей медицины — генная терапия. Эта форма терапии заключается в устранении причины заболевания путем введения терапевтического гена, обеспечивающего синтез недостающего белка с последующим восстановлением метаболического равновесия.

Как концептуально перспективный терапевтический подход, генная терапия интенсивно развивается по многим направлениям, которые определяются разнообразием методов введения терапевтического гена в эукариотические клетки (трансфекция). Известны различные методы доставки генетического материала в клетки, в основе которых лежат электропорация, бомбардировка заряженными частицами, инъекция ДНК, использование вирусов, липосом и полимеров. Среди них заметное место занимает метод липофекции, использующий в качестве средства доставки генетической информации в клетки катионные липосомы, обладающими такими преимуществами, как защита ДНК, мРНК и олигонуклеотидов от инактивации и деградации под действием клеточных ферментов, неинфекционность, неиммуногенность, доступность и простота в изготовлении.

В настоящее время для повышения эффективности доставки НК с помощью липидных векторов разрабатываются и изучаются различные модификации структуры катионных липидов, формирующих катионные липосомы, которые отличаются компановкой структурных доменов, природой катионной головки и гидрофобной области, спейсером.

Данная работа является продолжением исследований в области катионных амфифилов липидной природы, предназначенных для генетической трансфекции, и посвящена синтезу и изучению свойств поликатионных амфифилов на основе спермина и холестерина.

2. Литературный обзор

Заключение диссертации по теме «Биоорганическая химия», Петухов, Иван Алексеевич

4. Выводы:

1. Разработана новая универсальная схема синтеза поликатионных амфифилов, на основе холестерина и спермина, предназначенных для доставки генетического материала в эукариотические клетки.

2. Синтезирован ряд поликатионных амфифилов, отличающихся линкером (сложноэфирный, уретановый), длиной спейсера и количеством гидрофобных доменов.

3. Синтезированы кислотолабильные поликатионные амфифилы ацетального типа на основе холестерина и спермина.

4. Впервые получены дисульфидные поликатионные липиды на основе холестерина и спермина, чувствительные к действию внутриклеточных восстановителей.

5. Биологические испытания показали, что липосомальные композиции на основе амфифилов с уретановым линкером 26Ь и 29с обладают высокой эффективностью доставки коротких и протяженных НК в клетки млекопитающих, как в присутствии, так и в отсутствие сыворотки в ростовой среде, что позволяет рассматривать их в качестве перспективных коммерческих агентов трансфекции.

6. Показано, что включение в состав амфифилов дисульфидной связи ведет к увеличению эффективности трансфекции.

5. Экспериментальная часть

В работе использовались перегнанные растворители, реагенты отечественного (Химмед) и зарубежного производства (Merck, Fluka, Aldrich, Acros). CH2CI2 и Et3N кипятили с СаН2 и перегоняли перед реакцией. ДМФА выдерживали над прокаленными молекулярными ситами 4 А. Л/1,Л/4,Л/9-три-трет-бутоксикарбонил-1,12-диамино-4,9-диазадодекан [39] (4а) и ДЛл^-ди-трет-бутоксикарбонил-1,12-диамино-4,9-диазадодекан [149] (11), метилтиометиловый эфир холестерина (18) [156], соединение 22а [158] получали согласно известным методикам.

Тонкослойную хроматографию проводили на пластинках Kieselgel 60 F254 (Merck) в системах растворителей: петролейный эфир-ЕЮАс, 4 : 1 (А); CHCI3-МеОН, 40 : 1 (Б); 36 : 1 (В); 25 : 1 (Г); 20 : 1 (Д); 13:1 (Е); CHCI3-MeOH-Pr1NH2, 4:1:2 (Ж), 3:1:2 (3), CHCI3 (И); толуол (К); петролейный эфир- ЕЮАс, 1 :2 (Л); CHCI3-MeOH-25% водн. NH3, 1:0.1:0.05 (M); CHCI3-MeOH, 10:1 (H); CHCI3-МеОН-СН3СООН, 200: 1 :0.3 (О), CHCI3-MeOH, 10 :0.6 (П); CHCI3-MeOH-СНзСООН, 1 : 0.16 : 0.05 (Р); 1 : 0.12 : 0.05 (С).

Обнаружение пятен на хроматограммах проводили действием хлора с последующим проявлением раствором бензидина [160], реактива Драгендорфа [160], раствора фосформолибденовая кислота - сульфат церия (IV) с последующим прогреванием [161] и с помощью УФ-лампы (254 нм). Колоночную хроматографию осуществляли на силикагеле Kieselgel 60 (0.040 - 0.063 mm, Merck). Спектры ЯМР1Н и 13С регистрировали на импульсном Фурье-спектрометре Bruker DPX-300 (Германия), в CDCI3, если не указано другое (внутренний стандарт SiMe4). Значения химических сдвигов (5) приведены в миллионных долях (м.д.), КССВ (J) в герцах (Гц). Масс-спектры получали на время-пролетном масс-спектрометре Bruker Ultraflex (Германия) методом лазерно-десорбционной ионизации с использованием 2,5-дигидроксибензойной или цианогидроксикоричной кислот в качестве матрицы. Для соединений 25а,с, 26а-с, 29Ь,с масс-спектры записаны на хромато-масс-спектрометре Agilent 1100 (Agilent Technologies) (США) методом химической ионизации при атмосферном давлении. ИК-спектры регистрировались на спектрофотометре Shimadzu IR-435 (Япония). Температуру -плавления определяли- на приборе «Boetius» (Германия). Соединения 26а-с, 29а-с, 32а-с, 34а,Ь, 36 разлагаются без плавления свыше 230°С. лЛлЛм12-Три-бензилоксикарбонил-1,12-диамино-4,9-диазадодекан (4b): Раствор 1.00 г (5.17ммоль) спермина (1) в 40 мл абсолютного метанола, охладили до -78°С (жидкий азот + изопропанол) и в течение 10 минут прикапывали охлажденный до 0°С этилтрифторацетат (0.7 мл, 5.7 ммоль). Реакционную смесь перемешивали, пока температура не поднялась до -10°С (30 минут) и добавили по каплям бензилоксикарбонилхлорид (6.64 мл, 46.5 ммоль) и Et3N (7.20 мл, 51.7 ммоль). Реакционную смесь выдерживали при 25 °С в течение 36 часов. (Rf0.85(Jl) для полностью защищенного полиамина ЗЬ). Метанол удаляли в вакууме, остаток растворяли в CH2CI2 (35 мл) и промывали 3% водным раствором HCl (3 х 10 мл), водой (2x10 мл), сушили над Na2S04, упаривали. Проводили деблокирование трифторацетильной защиты действием раствора NaOH (2.06 г, 51.7 ммоль) в метаноле (15 мл) при комнатной температуре в течение 36 часов. После удаления растворителя в вакууме, остаток растворяли в хлористом метилене (30 мл) и промывали водой (2 х 30 мл), сушили над Na2S04 и упаривали. После хроматографии на силикагеле (CHCI3-MeOH-25% водн. NH3, (25: 1 :0.1)) получили соединение 4Ь в виде масла желтоватого цвета (0.633 г, 30%). Rf 0.51 (Б). Масс-спектр, m/z (/отн(%)): 605.1 [М + Н]+ (100). Вычислено для C34H44N4O6: 604.326 [М]+. Спектр ЯМР 1Н. 1.30-1.55 (м, 4 Н, NCH2(CH2)2CH2N), 1.551.80 (м, 4 Н, 2 ЫСНгСНгСНгЫ), 2.50-2.76 (м, 2 Н, СНгЫНг), 2.93-3.45 (м, ЮН, 5 NCH2), 4.95-5.17 (м, 6 Н, 3 ChbPh), 7.20-7.40 (м, 15 Н, 3 Ph). Спектр ЯМР 13С: 25.55, 25.92, 28.70, 31.20, 37.99, 39.38, 44.36, 44.69, 46.76, 66.68, 67.21, 67.34, 128.03, 128.16, 128.64, 136.87, 137.04, 156.44, 156.63.

Л/4,Л/9,Л/12-Три-(трет-бутоксикарбонил)-Л/1-(2-нитрофенилсульфонил)-1,12-диамино-4,9-диазадодекан (5а): К охлажденному до 0°С раствору соединения 4а (0.431 г, 0.858 ммоль) в безводном CH2CI2 (5 мл) добавили молекулярные сита 4 А (1.0 г) Et3N (0.239 мл, 1.716 ммоль) и 2-нитробензолсульфонилхлорид (0.228 г, 1.02 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 1 ч при 24°С. Молекулярные сита отфильтровали, промывали CH2CI2, растворители удаляли в вакууме. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CHCI3-MeOH (50 : 1). Получили соединение 5а в виде кристаллизующегося масла (0.507 г, 88%). Rf 0.40 (Г). Масс-спектр, m/z (/отн(%)): 710.341 [М + Na]+ (100). Вычислено для CsiHssNsOkjS: 687.351 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 1.27 (уш. с, 31 Н, 3 С(СН3)3 и NCH2(CH2)2CH2N), 1.52-1.71 (м, 4 Н, 2 NCH2ch2ch2N), 2.92-3.11 (м, 8 Н, 4 NCH2), 3.11-3.30 (м, 4 Н, 2 NHChb), 7.597.71 (м, 2 Н), 7.71-8.89 (м, 1 Н) и 8.00-8.11 (м, 1 Н, С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 25.96,

68

28.54, 28.59, 28.93, 37.91, 41.03, 43.78, 44.23, 46.82, 47.05, 79.16, 79.74, 80.02, 125.25, 130.93, 132.68, 133.51, 148.29, 156.17.

Л^.Л^.Л/^-Три-бензилоксикарбонил-^^г-нитрофенилсульфонил)-!,^-диамино-4,9-диазадодекан (5b): К охлажденному до 0°С раствору соединения 4а (0.918 г, 1.152 ммоль) в безводном CH2CI2 (7 мл) добавили Et3N (0.422 мл, 3.04 ммоль), а затем двумя равными порциями 2-нитробензолсульфонилхлорид (0.403 г, 1.82 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 1ч при 24°С. Затем добавили 3 % HCl (10 мл) и перемешивали 3 ч. Реакционную смесь переносили в делительную воронку, промывали CH2CI2 (10 мл), органическую фазу промывали насыщенным раствором NaCI (2x15 мл), сушили над Na2S04, фильтровали и упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CHCI3-MeOH (100:1). Получили соединение 5Ь в виде масла (1.091 г, 91%). Rf 0.40 (Н). Спектр ЯМР 1Н: 1.30-1.60 (м, 4 Н, NCH^ChbbCHzN), 1.60-1.75 (м, 4 Н, 2 NCH2CH2CH2N), 3.00-3.45 (м, 12 Н, 6 NCH2), 5.05-5.25 (м, 6 Н, 3 CI±>Ph) 7.207.40 (м, 15 Н, 3 Ph), 7.60-7.70 (м, 2 Н), 7.70-7.80 (м, 2 Н) и 8.03-8.13 (м, 1 Н, С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 25.10, 25.65, 28.06, 28.51, 37.67, 40.76, 44.09, 46.53, 46.69, 66.47, 67.16, 67.19, 125.11, 127.85, 127.98, 128.45, 130.73, 132.54, 133.31, 136.57, 148.03, 155.99, 156.40, 156.62.

Метип-й-^^^^-три^трет-бутоксшарбонмгЦ-^-аммно-ЛЯ-диазадодец-1-ил]-М-(2-нитрофенилсульфонил)аминоацетат (6): К раствору соединения 5а (0.271 г, 0.394 ммоль) в безводном ДМФА (3 мл) последовательно добавили Cs2C03 (0.128 г, 0.394 ммоль) и метиловый эфир бромуксусной кислоты (0.149 мл, 1.58 ммоль). Реакционную смесь перемешивали Зч при 75°С. К реакционной массе добавляли 15 мл CH2CI2, промывали 5% лимонной килотой (3 х 20 мл), сушили над Na2S04, упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CHCI3-MeOH (175:1). Получили соединение 6 в виде кристаллизующегося масла желтоватого цвета (0.270 г, 90%). Rf 0.51 (В). Спектр ЯМР 1Н: 1.26-1.46 (м, 4 Н, NCH2(CH2)2CH2N), 1.32 (с, 18 Н), 1.35 (с, 93СМе3) 1.46-1.60 (м, 2 Н), 1.60-1.75 (м, 2 Н, 2 NCH2CH2CH2N), 2.90-3.23 (м, 10 Н, 2 СЬЩВосЭСНг, NH(Boc)CH2), 3.23-3.37 (м, 2 Н, N(Nps)CH2CH2), 3-54 (с> 3 Н, ОСН3), 4.10 (с, 2 Н, 0С(0)СН2), 7.46-7.68 (м, 3 Н), 7.87-8.02 (м, 1 Н, С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 25.87, 26.92, 28.46, 28.48, 37.63, 43.96, 44.49, 46.42, 46.75, 47.81, 52.27, 78.96, 79.59, 124.20, 130.86, 131.74, 133.13, 133.70, 148.04, 155.46, 156.07, 169.14.

Метил-Л/-[Л/4,А/9,М12-три-(шре/Т1-бутоксикарбонил)-12-амино-4,9-диазадодец-1-ил]аминоацетат (7): К раствору соединения 6 (0.178 г, 0.235 ммоль) в ДМФА (2 мл) при перемешивании добавили К2С03 (0.036 г, 0.258 ммоль), а затем PhSH (0.241 мл, 2.35 ммоль). Через 1 ч к реакционной массе добавляли 10 мл CH2CI2, промывали водой (15 мл), сушили над Na2S04, упаривали. После хроматографии на силикагеле CHCI3-MeOH-25% водн. NH3, (5 : 0.1 : 0.01) получили соединение 7 в виде кристаллизующегося масла (0.116 г, 86%). Rf 0.33 (П). Масс-спектр, m/z (/от„(%)): 575.456 [М+Н]+ (100). Вычислено для C28H54N4O8: 574.394 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 1.25-1.48 (м, 4 Н, NCH2(ch2hch2N), 1.34 (с, 9 Н), 1.35 (с, 9 Н), 1.36 (с, 93 СМе3) 1.48-1.70 (м, 4 Н, 2 NCH2CH2CH2N), 2.51 (т, 2 Н, J = 7.0, NHCH2CH2), 2.91-3.25 (м, 10 Н, 2 CHaNiBocJChh, NH(Boc)ch2), 3.31 (с, 2 Н, 0С(0)СН2), 3.63 (с, 3 Н, ОСН3). Спектр ЯМР 13С: 25.52, 25.93, 28.39, 28.93, 37.36, 43.75, 44.10, 44.82, 46.80, 50.73,51.66, 78.77, 79.20, 79.43, 155.51, 155.99, 172.79.

2-[Л/4,Л/9,Л/12-три-(трет-бутоксикарбонил)-12-амино-4,9-диазадодец-1-ил]аминоуксусной кислоты гидрохлорид (8): К раствору соединения 7 (0.100 г, 0.174 ммоль) в МеОН (Змл) при перемешивании добавили NaOH (0.031 г, 0.783 ммоль) в 0.5 мл воды. Через 2ч к реакционной массе добавляли 10 мл CH2CI2, промывали 3% водным раствором HCl (15 мл), сушили над Na2S04, упаривали. Получили соединение 8 в виде кристаллов белого цвета (105 мг, 100%). Kf0.33(P). Масс-спектр, m/z (10тн(%)): 561.476 [M-Cl]+ (100). Вычислено для C27H53CIN408: 561.386 [М - Cl]+. Спектр ЯМР 1Н (MD3OD - CDCI3, 1 : 5): 1.171.40 (уш. с, 31 Н, NCH^CbUbC^N, 3 СМе3) 1.40-1.60 (м, 2 Н), 1.70-1.93 (м, 2 Н, 2 NCH2CH2CH2N) 2.63-2.82 (м, 2 Н, CH2NH2CH2CO), 2.83-3.18 (м, ЮН, 2 СНЩВо^СНг, NH(Boc)CH2), 3.30 (с, 2 Н, 0С(0)СН2). Спектр ЯМР 13С: 24.21, 25.10, 27.59, 27.64, 28.16, 36.74, 42.78, 43.29, 43.67, 44.19, 45.79, 46.29, 49.07, 78.47, 79.18, 79.60, 155.73, 155.80, 155.85, 169.73. лЛл^-Ди^трет-бутоксикарбонилН ,12-бис(2-нитрофенилсульфониламино)-4,9-диазадодекан (12): К охлажденному до 0°С раствору соединения 11 (0.676 г, 1.68 ммоль) в безводном CH2CI2 (5 мл) последовательно добавили молекулярные сита 4 А (0.5 г), Et3N (1.0 мл, 6.72 ммоль) и 2-нитробензолсульфонилхлорид (0.893 г, 4.03 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 5 ч при 24°С. Молекулярные сита отфильтровали, промывали СН2С12, растворители удаляли в вакууме. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя СНС13 с последующим увеличением полярности до СНС13-МеОН (50 : 1). Получили соединение 12 в виде кристаллизующегося масла желтоватого цвета (1.01 г, 78%). f?f0.35(I~). Спектр ЯМР 1Н: 1.35 (уш. с, 22 Н, 2 С(СН3)3, СН^СНгЬСНг), 1.48-1.70 (м, 4 Н,

2 СН2СН2СН2), 2.86-3.10 (м, 8 Н, 4 NCH2) 3.10-3.38 (м, 4 Н, 2 NCH2), 7.50-7.75 (м, 4 Н), 7.95-8.05 (м, 2 Н) и 8.05-8.20 (м, 2 Н, 2 С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 25.42, 25.83, 28.38, 28.86, 29.22, 40.66, 43.32, 44.25, 46.46, 46.90, 79.84, 124.47, 130.62, 132.41, 135.69, 148.02, 148.18, 155.42, 156.38.

5-Бромпентаноил)холестерин (14). К охлажденному до 0°С раствору холестерина (13) (2.18 г, 5.6 ммоль) в безводном CH2CI2 (15 мл) добавили Ру (3 мл), а затем раствор хлорангидрида бромвалериановой кислоты (2.25 г, 11.3 ммоль) в CH2CI2 (2.5 мл). Реакционную смесь перемешивали 1 ч при 24 °С, промывали 10%-ным водным раствором HCl (3x5 мл), водой (1x5 мл), сушили над Na2S04, растворитель упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя вещество смесью CHCI3-MeOH (40:1). Получили соединение 14 в виде белых кристаллов (2.955 г, 96%). f?f0.48(A), т.пл. 112-114°С. Найдено (%): С, 70.30; Н, 10.00. С32Н53Вг02. Вычислено (%): С, 69.92; Н, 9.72. ИК-спектр, v/cm-1: 2830, 1736, 1460, 1370, 1240, 670. Спектр ЯМР 1Н: 0.68 (с,

3 Н, С(13)Ме), 0.79 (д, 3 H, J = 6.5, С(25)Ме), 0.80 (д, 3 H, J = 6.5, С(25)Ме), 0.86 (д, ЗН, J =6.5, С(20)Ме), 1.02 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.88-1.65 (м, 23 Н, протоны Chol, 0С(0)СН2(СН2)2), 1.68-2.00 (м, 7 Н, протоны Chol), 2.13-2.34 (м, 2 Н, Н2С(4)), 3.063.19 (м, 2 Н, 0С(0)СН2), 3.40 (т, 2 H, J = 6.7, СН2Вг), 4.34-4.49 (м, 1 Н, Н(3)), 5.275.34 (м, 1 Н, Н(6)).

Холест-5-ен-ЗЭ-ил)имидазол-1-карбоксилат (15): К раствору холестерина (13) (4.00 г, 10.35 ммоль) в безводном CH2CI2 (20 мл) добавили карбонилдиимидазол (1.678 г, 10.35 ммоль), триэтиламин (2 мл, 3.74 ммоль) и кипятили 16 ч при перемешивании. Реакционную смесь промывали 10%-ным водным раствором HCl (3x5 мл), водой (1x5 мл), сушили над Na2S04, растворитель упаривали. Получили соединение 15 в виде белых кристаллов (4 904 г, 99%). Rf 0.7 (Б), т.пл. 124-126°С. Найдено (%): С, 76.26; Н, 10.40; N, 5.56.

2 C35H61N03xH20. Вычислено (%): С, 76.03; Н, 10.08; N, 5.72. ИК-спектр, v/cm"1: 2840, 1730, 1640, 1520, 1460, 1380. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.79 (д,

3 H, J = 6.5, С(25)Ме), 0.80 (д, 3 H, J = 6.5, С(25)Ме), 0.84 (д, 3 H, J = 6.5, С(20)Ме), 0.99 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.90-1.58 (м, 19 Н, протоны Chol), 1.58-2.02 (м, 7 Н, протоны

Chol), 2.38-2.47 (м, 2 H, Н2С(4)), 4.69-4.83 (м, 1 Н, Н(3)), 5.34-5.40 (м, 1 Н, Н(6)), 7.00, 7.36, 8.09 (все с, по 1 Н Im). Спектр ЯМР 13С: 11.88, 18.88, 19.35, 21.21, 22.63, 22.87, 23.98, 24.44, 27.81, 28.19, 28.38, 31.98, 35.96, 36.33, 36.71, 36.92, 38.03, 39.67, 39.83, 42.47, 50.11, 56.27, 56.81, 79.20, 117.44, 123.95, 130.05, 137.14, 138.74, 148.05.

Холест-5-ен-33-ил)-М-(4-гидроксибутил)карбамат (16а): К раствору соединения 15 (1.00 г, 2.08 ммоль) в безводном CH2CI2 (10 мл) добавили 4-амино-1-бутанол (0.287 г, 2.78 ммоль) и кипятили 18 ч при перемешивании. Реакционную смесь промывали 3%-ным водным раствором HCl (1*8 мл), водой (5*5 мл), органический растворитель упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CHCI3-MeOH (30 : 1). Получили соединение 16а в виде белых кристаллов (0.895 г, 87%). Rf0.45(fl), т.пл. 154-156°С. Масс-спектр, m/z (/отн(%)): 524.314 [М + Na]+ (100). Вычислено для Сз2Н56МОз: 501.418 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.98-1.57 (м, 23 Н, протоны Chol, NHCH^Chbb), 1.68-2.02 (м, 7 Н, протоны Chol), 2.14-2.38 (м, 2 Н, Н2С(4)), 3.05-3.20 (м, 2 Н, CH2N), 3.59 (т, 2 Н, J = 5.9, СН2ОН), 4.36-4.48 (м, 1 Н, Н(3)), 4.48-4.62 (м, 1 Н, NH), 5.27-5.35 (м, 1 Н, Н(6)). Спектр ЯМР 13С: 12.10, 18.99, 19.56, 21.14, 22.79, 23.07, 23.93, 24.38, 26.54, 28.12, 28.26, 29.64, 31.96, 35.91, 36.27, 36.65, 37.06, 38.65, 39.61, 39.82, 40.70, 42.40, 49.94, 56.21, 56.77, 62.10, 74.57, 122.63, 139.89, 156.72.

Холест-5-ен-Зр-ил)-№(6-гидроксигексил)карбамат (16Ь): Получали как соединение 16а исходя из соединения 15 (1.00 г, 2.08 ммоль), 6-амино-1-гексанола (0.366 г, 3.12 ммоль). После хроматографии на силикагеле CHCI3-МеОН (50 : 1), получили соединение 16Ь в виде белых кристаллов (0.992 г, 90%). Rf 0.48 (Д), т.пл. 186-188°С. Найдено (%): С 76.96; Н 11.22; N 2.57. C35H6iN03. Вычислено (%): С, 77.29; Н, 11.30; N, 2.58. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.98-1.57 (м, 27 Н, протоны Chol, NHCH2(CH2)4), 1.68-2.00 (м, 7 Н, протоны Chol), 2.13-2.35 (м, 2 Н, Н2С(4)), 3.03-3.16 (м, 2 Н, CH2N), 3.57 (т, 2 Н, J = 6.4, СН2ОН), 4.34-4.49 (м, 1 Н, Н(3)), 5.27-5.34 (м, 1 Н, Н(6)). Спектр ЯМР 13С: 12.03, 18.89, 19.51, 21.21, 22.73, 22.99, 24.00, 24.46, 25.48, 26.57, 28.19, 28.35, 28.41, 30.19 , 32.06, 35.97, 36.36, 36.73, 37.17, 38.76, 39.69,' 39.91, 40.87, 42.49, 50.18, 56.30, 56.86, 62.90, 74.39, 122.64, 140.03, 156.40.

Холест-5-ен-ЗЭ-ил)-Л^-(4-бромбутил)карбамат (17а): К охлажденному до О °С раствору соединения 16а (0.843 г, 1.68ммоль) в безводном CH2CI2 (10 мл) добавили Ph3P (0.793 г, 3.02 ммоль), а затем порциями СВг4 (1.0 г, 3.02 ммоль) и перемешивали 1 ч при 24°С. К реакционной смеси добавили 5 мл МеОН, растворитель упарили. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя CHCI3. Получили соединение 17а в виде белых кристаллов (0.400г, 84%). Rf 0.8 (Д), т.пл. 92-94°С. Найдено (%): С, 68.10; Н, 9.90; N, 2.48. C32H54BrN02. Вычислено (%): С, 68.06; Н, 9.64; N, 2.48. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.98-1.57 (м, 23 Н, протоны Chol, NHCH2(CH2)2), 1.70-2.00 (м, 7 Н, протоны Chol), 2.15-2.38 (м, 2 Н, Н2С(4)), 3.05-3.16 (м, 2 Н, CH2N), 3.35 (т, 2 Н, J = 6.5, СН2Вг), 4.36-4.48 (м, 1 Н, Н-3), 4.48-4.62 (м, 1 Н, NH), 5.27-5.34 (м, 1 Н, Н-6). Спектр ЯМР 13С: 12.17, 18.74, 19.37, 21.20, 22.87, 23.14, 24.00, 24.44, 28.18, 28.33, 28.90, 30.00, 32.02, 33.43, 35.97, 36.33, 36.71, 37.12, 38.72, 39.67, 39.88, 40.12, 42.46, 50.02, 56.27, 56.83, 74.48, 122.69, 139.93, 156.34.

Холест-5-ен-ЗЭ-ил)-Л/-(6-бромгексил)карбамат (17Ь): Получали как соединение 17а, исходя из соединения 16Ь (0.585 г, 1.1 ммоль), Ph3P (0.579 г, 2.2 ммоль) и СВг4 (0.945 г, 2.89 ммоль). Получили соединение 17Ь в виде белых кристаллов (0.548 г, 84%). f?f0.85(fl), т.пл. 106-108 °С. Найдено (%): С, 69.24; Н, 10.15; N, 2.31. C35H6oBrN02. Вычислено (%): С, 69.28; Н, 9.97; N, 2.31. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.98-1.57 (м, 27 Н, протоны Chol, NHCH2(CH2)4), 1.68-1.98 (м, 7 Н, протоны'Chol), 2.12-2.34 (м, 2 Н, Н2С(4)), 3.03-3.15 (м, 2 Н, CH2N), 3.34 (т, 2 Н, J = 6.8, СН2Вг), 4.35-4.48 (м, 1 Н, Н(3)), 4.48-4.62 (м, 1 Н, NH), 5.28-5.33 (м, 1 Н, Н(6)). Спектр ЯМР 13С: 12.04, 18.90; 19.52, 21.23, 22.74, 23.00, 24.01, 24.47, 26.08, 27.99, 28.19, 28.37, 28.42, 30.08, 32.07, 32.81, 33.91, 35.98, 36.37, 36.75, 37.18, 38.76, 39.70, 39.92, 40.94, 42.50, 50.20, 56.32, 56.87, 74.40, 122.66, 140.03, 156.35.

Зр-[(2-Бромэтокси)метокси]холест-5-ен (20а): К раствору метилтиометилового эфира (18) (0.115 г, 0.26 ммоль) в безводном дихлорэтане (Змл) в атмосфере аргона добавили 2,6-лутидин (0.120 мл, 1.03 ммоль), 2-бромэтанол (0.073 мл, 1.03 ммоль) и через 5 мин. бром (0.026 мл, 0.51 ммоль). Через 20 мин к реакционной массе прилили дихлорэтан (10 мл), промывали водой (3x10 мл), сушили над Na2S04, упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя толуолом. Получили соединение 20а в виде кристаллизующегося светло-желтого масла (0.074 г, 55%). /?f 0.40 (К). Масс-спектр, m/z (/отн(%)): 562.2 [М]+. Вычислено для СзоН51Вг02: 562.274 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.60 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.84 (д, 3 Н, J =6.5, С(20)Ме), 0.93(с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.93-1.63 (м, 21 Н, протоны Chol), 1.65-2.05 (м, 5 Н, протоны Chol), 2.10-2.35 (м, 2 Н, Н2С(4)), 3.33-3.48 (м, 1 Н, Н(3)), 3.43 (т, 2 Н, J = 6.1, СН2СН2О), 3.81 (т, 2 Н, J = 6.1, СН2Вг), 4.72 (с, 2 Н, 0СН20), 5.23-5.33 (м, 1 Н, Н(6)). Спектр ЯМР 13С: 11.82, 18.68, 19.32, 21.00, 22.54, 22.81, 23.79, 24.24, 27.96, 28.20, 28.78, 30.82, 31.80, 31.87, 35.75, 36.13, 36.65, 37.13, 39.37, 39.46, 39.69, 42.24, 50.05, 56.07, 56.67, 67.72, 77.06, 93.43, 121.84, 140.44.

Зр-[(4-Хлорбутокси)метокси]холест-5-ен (20Ь): Получали как соединение 20а исходя из 18 (0.400 г, 0.90 ммоль), дихлорэтана (9 мл), 2,6-лутидина (0.313 мл, 2.69 ммоль), 4-хлорбутан-1-ола (1.22 мл, 8.95 ммоль), брома (0.091мл,

I.79 ммоль). Получили соединение 20Ь в виде кристаллизующегося светло-желтого масла (0.340 г, 75%). Rf0.42(K). Масс-спектр, m/z (/0Тн(%)): 506.861 [М]+ (100). Вычислено для C32H55CI02: 506.389 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.67 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.87 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.91 (д, 3 Н, J =6.5, С(20)Ме), 1.00 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.93-1.63 (м, 23 Н, протоны Chol, CH2CH2CH2CH2CI), 1.65-2.05 (м, 7 Н, протоны Chol, (CH2)2CH2CH2CI), 2.15-2.43 (м, 2 Н, Н2С(4)), 3.34-3.50 (м, 1 Н, Н(3)), 3.57 (т, 2 Н, J = 6.1, СНгСНгО), 3.58 (т, 2 Н, 6.1, J = 6.5, CH2CI), 4.73 (с, 2 Н, 0СН20), 5.30-5.40 (м, 1 Н, Н(6)). Спектр ЯМР 13С:

II.84, 18.69, 19.35, 21.03, 22.56, 22.82, 23.80, 24.27, 27.06, 28.01, 28.23, 28.87, 29.49, 31.85, 31.91, 35.78, 36.16, 36.72, 37.21, 39.49, 39.52, 39.74, 42.29, 44.91, 50.11, 56.10, 56.72, 66.81, 76.88, 93.40, 121.78, 140.682.

ЗР-[(6-Хлоргексилокси)метокси]холест-5-ен (20с): Получали как соединение 20а исходя из 18 (1.00 г, 2.25 ммоль), дихлорэтана (14 мл), 2,6-лутидина (0.786 мл, 6.75 ммоль), 6-хлоргексан-1-ола (1.50 мл, 11.25 ммоль), брома (0.231 мл, 4.50 ммоль). Получили соединение 20с в виде бесцветного масла 0.800 г (66%). f?f0.44(K). Масс-спектр, m/z (/0™(%)): 534.499 [М]+ (100). Вычислено для C34H59CI02: 534. 420 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.67 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.87 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.91 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 1.00 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.93-1.63 (м, 27 Н, протоны Chol, (CH2)3CH2CH2CI), 1.65-2.05 (м, 7 Н, протоны Chol, (CH2)4CH2CH2CI), 2.15-2.43 (м, 2 Н, Н2С(4)), 3.54

3.50 (м, 1 Н, Н(3)), 3.54 (т, 2 Н, J = 6.4, СНгСНгО), 3.55 (т, 2 Н, 6.1, J = 6.7, CH2CI), 4.73 (с, 2 Н, 0СН20), 5.31-5.40 (м, 1 Н, Н(6)). Спектр ЯМР 13С: 12.29, 19.14, 19.81, 21.48, 23.01, 23.27, 24.25, 24.72, 26.00, 27.14, 28.45, 28.67, 29.31, 29.98, 32.30, 32.36, 33.00, 36 22, 36.61, 37.17, 37.67, 39.94, 39.97, 40.18, 42.74, 45.49, 50.56, 56.55, 57.17, 68.01, 77.21, 93.84, 122.16, 141.18.

3-[3-(Холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)пропил]дитиопропионовая кислота (22Ь). К раствору холестерина (13) (1.0 г, 2.59 ммоль) в безводном этилацетате (40 мл) в атмосфере аргона добавили дитиодипропионовую кислоту (1.09 г, 5.17 ммоль) и при 0°С добавили DCC (1.067 мг, 5.17 ммоль), а затем DMAP (0.158 мл, 1.29 ммоль) и Et3N (0.54 мл, 3.88 ммоль). Через 12 ч реакционную массу фильтровали, промывали 3 % раствором соляной кислоты (3 х 30 мл), сушили над Na2S04, упаривали. После хроматографии на силикагеле (CHCI3-MeOH-CH3COOH, (25 : 0.1 : 0.03)) получили соединение 22Ь в виде кристаллов белого цвета (0.681 г, 45%). Rf 0.40 (О). Масс-спектр, m/z (/отн(%)): 601.217 [М + Na]+ (100). Вычислено для C33H5404S2: 578.346 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.67 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.6, С(25)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J = 6.6, С(25)Ме), 0.91 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 1.01 (с, ЗН, С(Ю)Ме), 0.95-1.70 (м, 21 Н, протоны Chol), 1.75-2.10 (м, 5 Н, протоны Chol), 2.26-2.40 (м, 2 Н, Н2С(4)), 2.70 (т, 2 Н, J =7.1, ChbCOOChol), 2.79 (т, 2 Н, J = 7.5, СНзСООН), 2.92 (т, 2 Н, J = 7.1, CH2S), 2.92 (т, 3 Н, J = 7.5, CH2S), 4.52-4.78 (м, 1 Н, Н(3)), 5.30-5.45 (м, 1 Н, Н(6)). Спектр ЯМР 13С: 11.83, 18.69, 19.28, 21.00, 22.54, 22.80, 23.81, 24.26, 27.73, 27.98, 28.20, 31.82, 31.87, 32.70, 33.31, 33.86, 34.42, 35.76, 36.16, 36.54, 36.92, 38.04, 39.49, 39.69, 49.98, 56.11, 56.65, 74.54, 122.74, 139.45, 171.08, 177.59.

Холест-5-ен-ЗР-ил)-Л/-{2-[(2-аминоэтил)дитио]этил}карбамат (23): К суспензии цистамина (1.98 г, 13 ммоль), в безводной смеси растворителей CH2CI2-Et3N-flHOKcaH (30:10:10 мл) добавили соединение 15 (0.782 г, 1,63 ммоль) и перемешивали при кипении в течение 35 ч. Реакционную массу фильтровали, промывали 3 % водным раствором HCl (3 х 30 мл), сушили над Na2S04, фильтровали, упаривали. После хроматографии на силикагеле (CHCI3-MeOH, (10 : 1)) получили соединение 23 в виде кристаллов светло коричневого цвета (0.580 г, 59%). Kf0.30(H). Масс-спектр, m/z (/от „(%)): 565.456 [М - С1]+ (100). Вычислено для C32H57CIN202S2: 601.390 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.6, С(25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.6, С(25)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J =6.2, С(20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.87-1.62 (м, 21 Н, протоны Chol), 1.65

2.07 (м, 5 Н, протоны Chol), 2.17-2.40 (м, 2 Н, Н2С(4)), 2.70-2.90 (м, 2 Н, CHaNHa), 2.90-3.17 (м, 2 Н, ChbNHCOOChol), 3.17-3.60 (м, 4 Н, 2 CHzS), 2.79 (т, 2 Н, J =7.5, CHzCOOH), 2.92 (т, 2 Н, J = 7.1, CH2S), 2.92 (т, 3 Н, J = 7.5, CH2S), 4.20-4.58 (м, 1 Н, Н(3)), 5.22-5.40 (м, 1 Н, Н(6)), 5.43-5.70 (м, 1 Н, NHCO), 7.00-7.50 (м, 3 Н, NH3). Спектр ЯМР 13С: 11.98, 18.84, 19.49, 21.19, 22.65, 22.90, 24.06, 24.41, 28.09, 28.35, 32.00, 35.81, 35.95, 36.34, 36.68, 37.14, 38.21, 38.75, 39.29, 39.63, 39.89, 50.11, 56.39, 56.81, 74.69, 122.65, 139.89, 156.44.

Л/9,М14,Л/17-Три-(трет-бутоксикарбонил)-Л/5-(2-нитрофенилсульфонил)-1-(холест-5-ен-ЗР-илоксикарбонил)-17-амино-5,9,14-триазагептадекан (24а): К раствору соединения 5а (0.175 г, 0.254 ммоль) в безводном ДМФА (Змл) последовательно добавили Cs2C03 (0.083 г, 0.254 ммоль) и бромид 14 (0.168 г, 0.306 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 1 ч при 60°С. Осадок отфильтровывали через Cellte® 545, промывали CH2CI2. После удаления растворителей в вакууме остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CHCI3-MeOH (100:1). Получили соединение 24а в виде кристаллизующегося масла (0.253 г, 86%). Rf 0.38 (В). Масс-спектр, m/z (/0™(%)): 1178.741 [М + Na]+ (100). Вычислено для CesH^NsO^S: 1155.748 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.83 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.90-2.00 (м, 38 Н, протоны Chol, 2 СН2(СН2)2СН2, 2 NCH2ch2ch2N), 1.36 (уш. с, 18 Н) и 1.39 (уш. с, 9 Н, ЗС(СНз)з), 2.11-2.33 (м, 4 Н, Н2С(4), 0С(0)СН2), 2.95-3.12 (м, 8 Н, 4 NCH2), 3.12-3.30 (м, 6 Н, CHzNH, 2 NCH2), 4.43-4.59 (м, 1 Н, Н(3)), 5.01-5.26 (м, 1 Н, NH), 5.26-5.34 (м, 1 Н, Н(6)), 7.50-7.59 (м, 1 Н), 7.59-7.70 (м, 2 Н) и 7.87-8.00 (м, 1 Н, С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 11.94, 18.80, 19.39, 21.11, 22.03, 22.64, 22.89, 23.90, 24.36, 25.61, 25.79, 27.87, 28.07, 28.29, 28.53, 31.94, 31.98, 34.00, 35.86, 36.26, 36.68, 37.07, 37.67, 38.22, 39.60, 39.82, 42.40, 43.94, 44.54, 45.19, 46.77, 47.07, 50.12, 56.23, 56.78, 74.02, 79.58, 122.73, 124.24, 130.80, 131.73, 133.50, 133.58 139.71, 148.13, 155.50, 156.10, 172.51.

Л/9,Л/14,Л/17-Три-(шреш-бутоксикарбонил)-Л/5-(2-нитрофенилсульфонил)-Л/1-(холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-1,17-диамино-5,9,14-триазагептадекан (24Ь): Получали как соединение 24а исходя из соединения 5а (0.098 г, 0.142 ммоль), Cs2C03 (0.046 г, 0.142 ммоль) и бромида 17а (0.096 г, 0.170 ммоль). Получили соединение 24Ь в виде кристаллизующегося масла (0.157 г, 94%). /?f 0.4 (В). Масс-спектр, m/z (/отн(%)): 1193.762 [М + Na]+ (100). Вычислено для

CeaHioeNeOiaS: 1170.759 [M]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.84 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 0.94 (с, ЗН, С(Ю)Ме), 0.90-2.00 (м, 38 Н, протоны Chol, 2 СН2(СН2)2СН2, 2 NCH2CH2CH2N), 1.36 (уш. с, 18 Н) и 1.39 (уш. с, 9 Н, 3 С(СН3)з), 2.11-2.33 (м, 2 Н, Н2С(4)), 2.91-3.12 (м, 10 Н, CHzNH, 4 NCH2), 3.12-3.30 (м, 6 Н, СЩМН, 2 NCH2), 4.32-4.47 (м, 1 Н, Н(3)), 4.55-4.96 (м, 1 Н, NH), 4.96-5.25 (м, 1 Н, NH), 5.25-5.33 (м, 1 Н, Н(6)), 7.50-7.59 (м, 1 Н), 7.59-7.70 (м, 2 Н) и 7.87-8.00 (м, 1 Н, С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 11.97, 18.84, 19.44, 21.17, 22.67, 22.92, 23.95, 24.40, 25.61, 26.01, 27.20, 27.57, 28.11, 28.30, 28.58, 32.01, 35.90, 36.31, 36.54, 36.69, 37.13, 37.80, 38.70, 39.63, 39.87, 40.36, 42.44, 44.16, 44.70, 45.57, 46.70, 50.15, 56.27, 56.82, 74.36, 79.66, 122.56, 124.27, 130.83, 131.77, 133.48, 133.61, 139.98, 148.18, 155.56, 156.16, 156.35.

Л/11,Л/16,Л/19-Три-(трет-бутоксикарбонил)-Л/7-(2-нитрофенилсульфонил)-Л/1-(холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-1,1 Э-диамино-7,11,16-триазанонадекан (24с): Получали как соединение 24а исходя из соединения 5а (0.203 г, 0.302 ммоль), Cs2C03 (0.098 г, 0.302 ммоль) и бромида 17Ь (0.215 г, 0.362 ммоль). Получили соединение 24с в виде кристаллизующегося масла (0.382 г, 88%). Rf 0.45 (В). Масс-спектр, m/z(/0TH(%)): 1221.424 [М + Na]+(100). Вычислено для C65HiioN6012S: 1198.790 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.84 (д, 3 Н, J =6.5, С(20)Ме), 0.94 (с, ЗН, С(Ю)Ме), 0.90-2.00 (м, 42 Н, протоны Chol, NHCH^ChbbC^N, 2 NCHzChbC^N, СН2(СН2)4СН2), 1.37 (уш. с, 18 Н) и 1.39 (уш. с, 9 Н, 3 С(СН3)з), 2.11-2.35 (м, 2 Н, Н2С(4)), 2.92-3.13 (м, ЮН, ChhNH, 4 NCH2), 3.13-3.33 (м, 6 Н, ChbNH, 2 NCH2), 4.33-4.47 (м, 1 Н, Н(3)), 4.50-4.85 (м, 1 Н, NH), 4.96-5.25 (м, 1 Н, NH), 5.26-5.35 (м, 1 Н, Н(6)), 7.51-7.59 (м, 1 Н), 7.59-7.70 (м, 2 Н) и 7.87-8.00 (м, 1 Н, С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 12.00, 18.87, 19.48, 21.20, 22.70, 23.00, 23.98, 24.43, 25.91, 26.31, 26.37, 27.60, 28.09, 28.14, 28.36, 28.60, 30.30, 32.05, 35.93, 36.34, 36.72, 37.16, 37.81, 38.74, 39.66, 39.90, 40.88, 42.47, 44.13, 44.67, 45.28, 46.82, 47.48, 50.19, 56.30, 56.85, 74.36, 79.65, 122.57, 124.29, 130.87, 131.73, 133.57, 133.68, 140.03, 148.20, 155.59, 156.18, 156.33. a,Nu,Nn-Tpw-(mpem-6yTOKCWKap6oHMn)^-{xonecT-5-eH-3ß-илоксикарбонил)-17-амино-5,9,14-триазагептадекан (25а): К раствору соединения 24а (0.150 г, 0.130 ммоль) в ДМФА (3 мл) при перемешивании добавили К2С03 (0.072 г, 0.520 ммоль), а затем PhSH (0.13 мл, 1.310 ммоль).

Через 1 ч реакционную массу фильтровали через Celite® 545, промывали осадок МеОН, растворитель упаривали в вакууме. После хроматографии на силикагеле CHCI3-MeOH-25% водн. NH3, (25:1:0.1) получили соединение 25а в виде желтоватого кристаллизующегося масла (0.079 г, 83%). Rf 0.33 (Е). Масс-спектр, m/z (/0Тн(%)): 971.7 [М + Н]+ (100). Вычислено для СбгНюг^Ов: 970.7 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.84 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.90-2.00 (м, 38 Н, протоны Chol, 2 СН2(СН2)2СН2, 2 NCH2CH2CH2N), 1.36 (уш. с, 18 Н) и 1.39 (уш. с, 9 Н, 3 С(СН3)3), 2.15-2.33 (м, 4 Н, 0С(0)СН2, Н2С(4)), 2.60-2.87 (м, 4 Н, CthNHChh). 2.96-3.35 (м, ЮН, СНгЫН, 4 NCH2), 4.44-4.59 (м, 1 Н, Н(3)), 5.01-5.26 (м, 1 Н, NHBoc), 5.26-5.33 (м, 1 Н, Н(6)). Спектр ЯМР 13С: 11.94, 18.81, 19.40, 21.12, 22.29, 22.66, 22.91, 23.91, 24.37, 25.82, 27.88, 28.09, 28.31, 28.54, 31.94, 31.99, 34.02,

35.87, 36.27, 36.68, 37.07, 37.53, 38.22, 39.60, 39.82, 42.39, 43.42, 43.99, 44.35, 45.45, 46.88, 47.25, 50.12, 56.22, 56.78, 74.12, 79.70, 122.74, 139.71, 156.14, 172.53.

Л/9,Л/14,Л/17-Три-(трет-бутоксикарбонил)-Л/1-(холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-1,17-диамино-5,9,14-триазагептадекан (25Ь): Получали как соединение 25а исходя из 24Ь (0.130 г, 0.110 ммоль), К2С03 (0.050 г, 0.360 ммоль) и PhSH (0.1мл, 1.10 ммоль). Получили соединение 25Ь в виде желтоватого аморфного вещества (0.107 г, 99 %). Rf 0.35 (Е). Масс-спектр, m/z (/отн(%)): 986.796 [М + Н]+ (100). Вычислено для C57Hio3N508: 985.781 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.84 (д, ЗН, J = 6.5, С(20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.90-2.00 (м, 38 Н, протоны Chol, 2 СН2(СНг)2СН2, 2 МСН2СНгСН2Ы), 1.36 (уш. с, 18 Н, 2 С(СН3)3), 1.39 (уш. с, 9 Н, С(СН3)3), 2.11-2.33 (м, 2 Н, Н2С(4)), 2.53-2.82 (м, 4 Н, CHaNHChb), 2.95-3.33 (м, 12 Н, 2 CÜNH, 4 NCH2), 4.32-4.47 (м, 1 Н, Н(3)), 4.55-4.96 (м, 1 Н, NH), 4.96-5.25 (м, 1 Н, NH), 5.25-5.33 (м, 1 Н, Н(6)). Спектр ЯМР 13С: 11.92, 18.77, 19.40, 21.10, 22.62,

22.88, 23.88, 24.34, 26.01, 27.40, 28.05, 28.25, 28.28, 28.51, 31.93, 35.84, 36.23, 36.61, 37.06, 37.58, 38.66, 39.57, 39.79, 40.29, 42.36, 43.73, 44.21, 46.56, 46.84, 50.07, 56.19, 56.75, 74.21, 79.67, 122.46, 139.94, 156.15, 156.41.

Л/11,Л/16,Л/19-Три-(трет-бутоксикарбонил)-Л/1-(холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-1,19-диамино-7,11,16-триазанонадекан (25с): Получали как соединение 25а исходя из 24с (0.106 г, 0.088 ммоль), К2С03 (0.053 г, 0.380 ммоль) и PhSH (0.1мл, 1.10 ммоль). Получили соединение 25с в виде желтоватого аморфного вещества (0.079 г, 89 %). f?f 0.37 (Е). Масс-спектр, m/z (/отн(%)): 1014.7

M + Hf (100). Вычислено для C59Hi07N5O8: 1013.8 [Mf. Спектр ЯМР 1Н: 0 61 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.84 (д, ЗН, J =6.5, С(20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.90-2.00 (м, 42 Н, протоны Chol, NHCH2(ch2)2ch2N, 2 NCH2CH2CH2N, СН2(СН2)4сн2), 1.37 (уш. с, 18 Н) и 1.39 (уш. с, 9 Н, 3 С(СНз)з), 2.11-2.35 (м, 2 Н, Н2С(4)), 2.47-2.76 (м, 4 Н, CÜ-NHChb), 2.933.30 (м, 12 Н, 2 СНгЫН, 4 NCH2), 4.32-4.52 (м, 1 Н, Н(3», 4.50-4.85 (м, 1 Н, NH), 4.96-5.25 (м, 1 Н, NH), 5.26-5.35 (м, 1 Н, Н(6)). Спектр ЯМР 13С: 11.95, 18.81, 19.43, 21.13, 22.66, 22.92, 23.92, 24.38, 25.59, 25.96, 26.31, 26.37, 27.60, 28.09, 28.29, 28.32, 28.54, 29.93, 31.97, 35.89, 36.27, 36.65, 37.10, 37.55, 38.69, 39.60, 39.83, 40.79, 42.40, 43.73, 44.20, 44.30, 45.83, 45.90, 46.47, 46.60, 46.84, 47.08, 50.10, 56.22, 56.78, 74.22, 79.56, 122.50, 139.97, 156.13, 156.18, 156.33.

17-Амино-1-(холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-5,9,14-триазагептадекан, тетрагидрохлорид (26а): К раствору соединения 25а (0.164 г, 0.169 ммоль) в 4 мл CH2CI2 добавили 4н HCl в диоксане (4 мл) и перемешивали 2 ч при 24°С. Растворители удаляли в вакууме, остаток перекристаллизовывали из смеси CHCI3-EtOH (1 : 1). Получили соединение 26а в виде аморфных бежевых кристаллов (0.136 г, 99%). Rf 0.35 (Ж). Масс-спектр, m/z (/отн(%)): 671.5 [М-4HCI + Н]+ (100). Вычислено для C42H82Cl4N402: 670.61 [М -4HCI]+. Спектр ЯМР 1Н (D20): 0.61 (с, ЗН, С(13)Ме), 0.77 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.84 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.90-2.00 (м, 38 Н, протоны Chol, NHCH2(ch2)2CH2N, 2 NCH2CH2CH2N, СН2(сн2)2СН2), 2.11-2.32 (м, 2 Н, Н2С(4)), 2.90-3.15 (м, 16 Н, 0С(0)СН2, 7 CH2N), 4.20-4.40 (м, 1 Н, Н(3)), 5.205.35 (м, 1 Н, Н(6)).

1,17-Диамино-М1-(холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-5,9,14-триазагептадекан тетрагидрохлорид (26Ь): Получали как соединение 26а исходя из 25Ь (0.120 г, 0.122 ммоль). Получили соединение 26Ь в виде аморфных бежевых кристаллов (0.098 г, 97%). Rf0.38(>K). Масс-спектр, m/z (/отн(%)): 686.6 [М - 4HCI + Н]+ (100). Вычислено для C42H83Cl4N502: 685.63 [M-4HCI]+. Спектр ЯМР 1Н (D20): 0.60 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.76 (д, 3 Н, .7 = 6.5, С(25)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 0.95 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.90-2.00 (м, 38 Н, протоны Chol, NHCH2(CH2)2CH2N, 2 NCH2CH2CH2N, СН^СНг^СНг), 2.10-2.33 (м, 2 Н, Н2С(4)), 2.91-3.15 (м, 16 Н, 8 CH2N), 4.13-4.39 (м, 1 Н, Н(3)), 5.17-5.38 (м, 1 Н, Н(6)).

1,19-Диамино-Л/1"(холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-7,11,16-триазанонадекан, тетрагидрохлорид (26с): Получали как соединение 26а исходя из 25с (0.144 г, 0.142 ммоль). Получили соединение 26с в виде аморфных бежевых кристаллов (0.116 г, 95%). /?f0.40(>K). Масс-спектр, m/z (/0™(%)): 714.6 [М - 4HCI + Н]+(100). Вычислено для C44H87CI4N5O2: 713.65 [М - 4HCI]+. Спектр ЯМР 1Н (D20): 0.61 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.77 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 0.94 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.91-2.05 (м, 42 Н, протоны Chol, NHCH2(ch2)2ch2N, 2 NCHhChbChbN, СЬЫСН^СНг), 2.12-2.35 (м, 2 Н, Н2С(4)), 2.91-3.14 (м, 16 Н, 8 CH2N), 4.13-4.40 (м, 1 Н, Н(3)), 5.17-5.38 (м, 1 Н, Н(6)).

Л/9,Л/14-Ди-(тре/п-бутоксикарбонил)-Л/5,Л/18-бис(2-нитрофенилсульфонил)-1,22-бис(холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-5,9,14,18-тетраазадокозан (27а): К раствору соединения 12 (0.200 г, 0.259 ммоль) в безводном ДМФА (7 мл) последовательно добавили CS2CO3 (0.084 г, 0.259 ммоль) и бромид 14 (0.300 г, 0.546 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 1 ч при 60°С. Осадок отфильтровывали через Celite® 545, промывали CH2CI2. После удаления растворителей в вакууме, остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью СНС1з-МеОН-25% водный NH3 (60 : 2 : 0.1 с увеличением полярности до 60:4:0.1). Получили соединение 27а в виде кристаллизующегося светло-желтого масла (0.307 г, 78%). Rf 0.38 (В). Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 6Н, 2 С(13)Ме), 0.79 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С(25)Ме), 0.80 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С(25)Ме), 0.83 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С(20)Ме), 0.94 (с, 6 Н, 2 С(Ю)Ме), 0.90-2.07 (м, 68 Н, протоны Chol, 3 СН2(СН2)2СН2, 2 NCH2ch2ch2N), 1.36 (уш. с, 18 Н, 2 С(СНз)з), 2.20-2.38 (м, 8 Н, 2 Н2С(4), 2 0С(0)СН2), 3.00-3.17 (м, 8 Н, 4 NCH2), 3.17-3.31 (м, 8 Н, 4 NCH2), 4.33-4.49 (м, 2 Н, 2 Н(3)), 5.25-5.34 (м, 2 Н, 2 Н(6)), 7.497.60 (м, 2 Н), 7.58-7.69 (м, 4 Н) и 7.88-7.98 (м, 2 Н, 2 С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 11.95, 18.64, 19.21, 20.96, 21.88, 22.46, 22.69, 23.75, 24.19, 25.58, 25.74, 27.30, 27.46, 27.72, 27.89, 28.11, 28.37, 31.81, 31.82, 33.84, 35.68, 36.12, 36.52, 36.93, 38.07, 39.44, 39.68, 42.25, 44.48, 45.07, 46.99, 47.02, 50.01, 56.12, 56.64, 73.85, 79.37, 122.2, 124.06, 130.60, 131.54, 133.38, 139.58, 147.00, 155.32, 172.30.

Л/9,Л/14-Ди-(трет-бутоксикарбонил)-Л/5,Л/18-бис(2-нитрофенилсульфонил)-1,22-бис(холест-5-ен-Зр-илоксикарбониламино)-5,9,14,18-тетраазадокозан (27Ь): Получали как соединение 27а исходя из соединения 12 (0.200 г, 0.259 ммоль), Cs2C03 (0.127 г, 0.389 ммоль) и соединения

17а (0.300 г, 0.531 ммоль). Остаток элюировали системой CHCI3-MeOH (100 : 0.5 с увеличением полярности до 100:1). Получили соединение 27Ь в виде кристаллизующегося светло-желтого масла (0.276 г, 57%). Rf 0.38 (В). Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 6 Н, 2 С(13)Ме), 0.79 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С(25)Ме), 0.80 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С(25)Ме), 0.83 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С(20)Ме), 0.94 (с, 6 Н, 2 С(Ю)Ме), 0.90-2.00 (м, 68 Н, протоны Chol, 3 СН2(СН2)2СН2, 2 NCH2CH2CH2N), 1.36 (уш. с, 18 Н, 2 С(СНз)з), 2.11-2.38 (м, 4 Н, 2 Н2С(4)), 2.96-3.14 (м, 12 Н, 2 ChbNH, 4 NCH2), 3.143.29 (м, 8 Н, 4 NCH2), 4.33-4.49 (м, 2 Н, 2 Н(3)), 4.58-4.75 (м, 2 Н, 2 NH), 5.26-5.33 (м, 2 Н, 2 Н(6)), 7.51-7.58 (м, 2 Н), 7.58-7.69 (м, 4 Н) и 7.88-7.98 (м, 2 Н, 2 С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 11.95, 18.81, 19.43, 21.13, 22.66, 22.92, 23.92, 24.37, 25.52, 26.02, 27.13, 27.54, 28.09, 28.27, 28.32, 28.56, 31.96, 31.98, 35.88, 36.27, 36.64, 37.08, 38.68, 39.60, 39.81, 40.30, 42.39, 44.71, 45.20, 45.67, 47.28, 47.64, 50.09, 56.22, 56.77, 74.27, 79.62, 122.53, 124.25, 130.72, 131.81, 133.36, 133.65, 139.93, 148.11, 155.53, 156.33.

Л/1\М16-Ди-(трет-бутоксикарбонил)ЛУ7,Л/?°-бис(2-нитрофенилсульфонил)-1,26-бис(холест-5-ен-Зр-илоксикарбониламино)-7,11,16,20-тетраазагексакозан (27с): Получали как соединение 27а исходя из соединения 12 (0.200 г, 0.259 ммоль), CS2CO3 (0.084 г, 0.259 ммоль) и соединения 17Ь (0.338 г, 0.569 ммоль). Вещество элюировали системой CHCI3-MeOH (100 : 0.5 с увеличением полярности до 100: 1). Получили соединение 27с в виде кристаллизующегося светло-желтого масла (0.262 г, 56%). Rf 0.40 (В). Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 6 Н, 2 С(13)Ме), 0.79 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С(25)Ме), 0.80 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С(25)Ме), 0.83 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С(20)Ме), 0.94 (с, 6 Н, 2 С(Ю)Ме), 0.90-2.00 (м, 76 Н, протоны Chol, NCH2(CH2)2CH2N, 2 NCbhChhCHhN, 2 СНг^Нг^СНг), 1.37 (уш. с, 18 Н, 2 С(СНз)з), 2.11-2.37 (м, 4 Н, 2 Н2С(4)), 2.96-3.14 (м, 12 Н, 2 CHzNH, 4 NCH2), 3.14-3.30 (м, 8 Н, 4 NCH2), 4.33-4.50 (м, 2 Н, 2 Н(3)), 4.55-4.78 (м, 2 Н, 2 NH), 5.26-5.32 (м, 2 Н, 2 Н(6)), 7.51-7.58 (м, 2 Н), 7.59-7.68 (м, 4 Н) и 7.88-7.97 (м, 2 Н, 2 С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 11.97, 18.83, 19.45, 21.14, 22.68, 22.94, 23.93, 24.40, 25.68, 26.25, 26.38, 27.50, 28.03, 28.11, 28.30, 28.34, 28.57, 29.97, 31.97, 35.90, 36.28, 36.66, 37.10, 38.70, 39.61, 39.83, 40.79, 42.41, 44.65, 45.14, 47.20, 50.10, 56.22, 56.78, 74.25, 79.61, 122.53, 124.26, 130.77, 131.78, 133.54, 133.62, 139.98, 148.11, 155.54, 156.29.

Л/^А/^-Ди^тре/п-бутоксикарбонилН ,22-бис(холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-5,9,14,18-тетраазадокозан (28а): К раствору соединения 27а

0.215 г, 0.126 ммоль) в ДМФА (2 мл) при перемешивании добавили К2С03 (0.035 г, 0.252 ммоль), а затем PhSH (0.13 мл, 1.13 ммоль). Через 1 ч реакционную массу фильтровали через Celite® 545, промывали осадок МеОН, растворитель упаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CHCI3-MeOH-25% водный NH3 (100:10:1). Получили соединение 28а в виде желтоватого кристаллизующегося масла (0.100 г, 60 %). Rf 0.32 (Е). Масс-спектр, m/z (/отн(%)): 1339.642 [М]+ (100). Вычислено для C84H146N408: 1339.114 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 6 Н, 2С(13)Ме), 0.79 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С(25)Ме), 0.80 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С(25)Ме), 0.83 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С(20)Ме), 0.94 (с, 6Н, 2 С(Ю)Ме), 0.90-2.03 (м, 68 Н, протоны Chol, 3 СН2(СН2)2СН2, 2 nch2cm2ch2n), 1.37 (уш. с, 18 Н, 2С(СН3)3), 2.30-2.35 (м, 8 Н, 2 Н2С(4), 2 0С(0)СН2), 2.50-2.70 (м, 8 Н, 2 СЩЧНСНг), 3.00-3.30 (м, 8 Н, 4 NCH2), 4.40-4.50 (м, 2 Н, 2 Н(3)), 5.25-5.33 (м, 2 Н, 2 Н(6)). Спектр ЯМР 13С: 12.03, 18.91, 19.47, 21.24, 22.71, 22.94, 24.03, 24.46, 26.07, 28.03, 28.16, 28.38, 28.66, 29.20, 32.10, 34.60, 35.95, 36.40, 36.80, 37.21, 38.37, 39.72, 39.97, 42.54, 45.03, 47.03, 49.55, 50.30, 56.41, 56.93, 74.04, 79.59, 122.76, 139.90, 155.97, 172.99.

Л/9,Л/14-Ди-(трет-бутоксикарбонил)-1,22-бис(холест-5-ен-Зр-илоксикарбониламино)-5,9,14,18-тетраазадокозан (28Ь): Получали как соединение 28а исходя из соединения 27Ь (0.200 г, 0.115 ммоль), К2С03 (0.048 г, 0.345 ммоль) и PhSH (0.14 мл, 1.15 ммоль). Остаток элюировали системой CHCI3-МеОН-25% NH3 водн. (120:7.6:1). Получили соединение 28Ь в виде светло-желтого кристаллизующегося масла (0.121 г, 77%). Rf0.30(E). Масс-спектр, m/z (/отн(%)): 1370.339 [М + Н]+ (100). Вычислено для C84H148N608: 1369.136 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 6 Н, 2 С(13)Ме), 0.79 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С(25)Ме), 0.80 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С(25)Ме), 0.83 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С(20)Ме), 0.94 (с, 6 Н, 2 С(Ю)Ме), 0.90-2.00 (м, 68 Н, протоны Chol, 3 СНг^ЬЬЬСНг, 2 МСН2СНгСН2М), 1.37 (уш. с, 18 Н, 2 С(СН3)3), 2.10-2.35 (м, 4 Н, 2 Н2С(4)), 2.47-2.62 (м, 8 Н, 2 CHzNHChb). 2-98 3.28 (м, 12 Н, 2 СЩМН, 4 NCH2), 4.34-4.49 (м, 2 Н, 2 Н(3)), 4.58-4.70 (м, 2 Н, 2 NH), 4.92-5.11 (м, 2 Н, 2 NH), 5.25-5.33 (м, 2 Н, 2 Н(6)). Спектр ЯМР 13С: 12.00, 18.86, 19.49, 21.19, 22.70, 22.96, 23.97, 24.43, 25.86, 26.14, 27.13, 27.97, 28.15, 28.37, 28.62, 32.02, 35.94, 36.33, 36.70, 37.15, 38.76, 39.66, 39.88, 40.86, 42.45, 44.45, 45.17, 46.81, 47.41, 50.15, 56.28, 56.83, 74.25, 79.54, 122.55, 140.02, 155.53, 156.38.

Л/11,Л/16-Ди-(трет-бутоксикарбонил)-1,26-бис-(холест-5-ен-Зр-илоксикарбониламино)-7,11,16,20-тетраазагексакозан (28с): Получали как 28а исходя из соединения 27с (0.330 г, 0.184 ммоль), К2С03 (0.076 г, 0.552 ммоль) и PhSH (0.19 мл, 1.83 ммоль). Получили соединение 28с в виде светло-желтого кристаллизующегося масла (0.185 г, 71 %). f?f 0.33(E). Масс-спектр, m/z (/0Тн(%)): 1426.339 [М + Н]+ (100). Вычислено для C88Hi56N608: 1425.198 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.61 (с, 6 Н, 2 С(13)Ме), 0.79 (д, 6 H, J = 6.5, 2 С(25)Ме), 0.80 (д, 6 H, J = 6.5, 2 С(25)Ме), 0.83 (д, 6 H, J = 6.5, 2 С(20)Ме), 0.94 (с, 6 Н, 2 С(Ю)Ме), 0.90-2.00 (м, 76 Н, протоны Chol, NCH2(CH2)2CH2N, 2 NCHaCHbCh^N, 2 СН^СН^СНг), 1.37 (уш. с, 18 Н, 2 С(СНз)з), 2.12-2.35 (м, 4 Н, 2 Н2С(4)), 2.47-2.61 (м, 8 Н, 2 CH2NHCH2), 2.99-3.27 (м, 12 Н, 2 ChbNH, 4 NCH2), 4.34-4.49 (м, 2 H, 2 Н(3)), 4.57-4.70 (м; 2 Н, 2 NH), 5.26-5.33 (м, 2 Н, 2 Н(6)). Спектр ЯМР 13С: 11.97, 18.83, 19.45, 21.14, 22.68, 22.94, 23.93, 24.40, 25.68, 26.25, 26.38, 27.50, 28.03, 28.11, 28.30, 28.34, 28.57, 29.97, 31.97, 35.90, 36.28, 36.66, 37.10, 38.70, 39.61, 39.83, 40.79, 42.41, 44.65, 45.14, 47.20, 50.10, 56.22, 56.78, 74.25, 79.61, 122.53, 139.98, 155.54, 156.29.

1,22-Бис(холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-5,9^14,18-тетраазакозан тетрагидрохлорид. (29а): К раствору, соединения 28а, (0.100 г, 0.075 ммоль) в CH2CI2 (3 мл) добавили.4н раствор HCl в диоксане (4 мл) и перемешивали 2 ч при 24°С. Растворитель удаляли в вакууме, осадок промывали СН3ОН (5 мл). Получили соединение 29а в виде бежевых кристаллов (79 мг, 82%). Rf 0.40 (Ж). Масс-спектр, m/z (/0Тн(%)): 1139.784 [M-4HCI]+ (100). Вычислено для C74H134Cl4N404: 1139.009 [M - 4 HCI]+. Спектр ЯМР 1Н (flMCO-d6 - CDCI3, 1 : 3): 0.61 (с, 6 Н, 2 С(13)Ме), 0.77 (д, 6 H, J = 6.5, 2 С(25)Ме), 0.79 (д, 6 H, J = 6.5, 2 С(25)Ме), 0.84 (д, 6 H, J = 6.5, 2 С(20)Ме), 0.94 (с, 6 Н, 2С(10)Ме), 0.90-2.03 (м, 68 Н, протоны Choi, NHCH2(CH2)2CH2N, 2 NCH2CH2CH2N, 2 СН2(СН2)2СН2), 2.15-2.25 (м, 8 H, 2 Н2С(4), 2 0С(0)СН2), 2.90-3.15 (м, 16 Н, 8 CHbN), 4.20-4.40 (м, 2 Н, 2 Н(3)), 5.20-5.35 (м, 2 Н, 2 Н(6)).

1,22-Бис(холест-5-ен-Зр-илоксикарбониламино)-5,9,14,18-тетраазадокозан тетрагидрохлорид (29Ь): Получали как соединение 29а исходя из соединения 28Ь (0.086 г, 0.063 ммоль). Получили соединение 29Ь в виде бежевых кристаллов (82 мг, 99%). /^0.40(Ж). Масс-спектр, m/z (1от(%)): 1170.1 [М - 4 HCl + Н]+ (100). Вычислено для C74Hi36Cl4N604: 1169.13 [M - 4 HCIf. Спектр ЯМР 1Н (CD3OD - CDCI3, 1:4): 0.61 (с, 6 Н, 2С(13)Ме), 0.77 (д, 6 H, J = 6.5, 2 С(25)Ме), 0.79 (д, 6 H, J = 6.5, 2 С(25)Ме), 0.83 (д, 6 H,J = 6.5, 2 С(20)Ме), 0.94 (с, 6Н, 2 С(Ю)Ме), 0.90-2.04 (м, 68 Н, протоны Chol, NHCH2(CH2)2CH2NH, 2 NCHsCHzCHzN, 2 СН2(СН2)4СН2), 2.11-2.34 (м, 4 H, 2 Н2С(4)), 2.41-2.60 (м, 8 Н,

2 CH2NHCH2), 3.00-3.28 (м, 12 Н, 2 CÜ-NH, 4 NCH2), 4.33-4.49 (м, 2 Н, 2 Н(3)), 5.265.33 (м, 2 Н, 2 Н(6)).

1,26-Бис(холест-5-ен-Зр-илоксикарбониламино)-7,11,16,20-тетраазагексакозан тетрагидрохлорид (29с): Получали как соединение 29а соединения 28с (0.160 г, 0.112 ммоль). Получили соединение 29с в виде бежевых кристаллов (146 мг, 95%). Rf0.45(>K). Масс-спектр, m/z (/отн(%)): 1226.3 [М-4 HCl + Н]+ (100). Вычислено для C78H144CI4N6O4: 1225.13 [М - 4 HCI]+. Спектр ЯМР 1Н (ДМСО-ds - CDCI3, 1:3): 0.61 (с, 6 Н, 2С(13)Ме), 0.79 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С(25)Ме), 0.80 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С(25)Ме), 0.83 (д, 6 Н, J = 6.5, 2 С(20)Ме), 0.94 (с, 6 Н, 2 С(Ю)Ме), 0.91-2.04 (м, 76 Н, протоны Chol, NHCH2(CH2)2CH2NH, 2 NCH2CH2CH2N, 2 СН2(СН2)4СН2), 2.12-2.35 (м, 4 H, 2 Н2С(4)), 2.40-2.61 (м, 8 Н, 2 CH2NHCH2), 2.99-3.27 (м, 12 Н, 2 CÜNH, 4 NCH2), 4.34-4.49 (м, 2 Н, 2 Н(3)), 4.574.70 (м, 2 Н, 2 NH), 5.26-5.33 (м, 2 Н, 2 Н(6)).

Л/7,Л/12,Л/15-Три-бензилоксикарбонил-Л/3-(2-нитрофенилсульфонил)-1-(холест-5-ен-Зр-илоксиметокси)-15-амино-3,7,12-триазапентадекан (30а): К раствору соединения 5Ь (0.156 г, 0.20 ммоль) в безводном ДМФА (Змл) последовательно добавили Сэ2СОз (0.035 г, 0.11 ммоль) и соединение 20а (0.114 г, 0.22 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 2 ч при 60 °С, приливали 15 мл СНСЬ, промывали 20% водным раствором NaCI (2x15 мл), сушили над Na2S04, упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CHCI3-MeOH (200:1 с увеличением полярности до 50:1). Получили соединение 30а в виде кристаллизующегося масла (0.228 г, 94%). Rf 0.40 (Б). Спектр ЯМР 1Н: 0.64 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.83 (д, 3 Н, J =6.5, С(25)Ме), 0.84 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.89 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 0.95 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.93-2.05 (м, 33 Н, протоны Chol, NCH2(CH2)2CH2N, 2 ГМСНгСНгСНгЫ), 2.08-2.35 (м, 2 Н, Н2С(4)), 2.95-3.45 (м, 15 Н, Н(3), 7 NCH2), 3.45-3.55 (м, 2 Н, ЫСНгСНгО), 4.404.65 (м, 2 Н, 0СН20), 4.95-5.18 (м, 6 Н, 3 CÜPh), 5.23-5.38 (м, 1 Н, Н(6)), 7.15-7.40 (м, 15 Н, 3 Ph) 7.50-7.80 (м, 3 Н) и 7.88-8.03 (м, 1 Н, С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 11.85, 18.71, 19.33, 21.02, 22.57, 22.83, 23.78, 24.26, 25.17, 25.74, 26.90, 27.98, 28.20, 28.79, 31.82, 31.90, 35.75, 36.14, 36.44, 36.67, 37.12, 37.56, 38.13, 39.38, 39.48, 39.70, 42.27, 44.01, 46.38, 46.95, 50.10, 56.08, 56.69, 65.59, 66.36, 67.09, 76.93, 93.29, 121.86, 124.05, 127.86, 128.02, 128.44, 128.50, 130.86, 133.41, 136.64, 140.48, 147.99, 155.95, 156.50.

Л^.^^Л/^-Три-бензилоксикарбонил-Л^^г-нитрофенилсульфонил)-!-(холест-5-ен-Зр-илоксиметокси)-17-амино-5,9,14-триазагептадекан (ЗОЬ): К раствору соединения 5Ь (0.377 г, 0.48 ммоль) в безводном ДМФА (9 мл) последовательно добавили CS2CO3 (0.156 г, 0.48 ммоль), соединение 20Ь (0.266 г, 0.53 ммоль) и Bu4NI (0.088 г, 0.24 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 20 ч при 85°С, приливали 15 мл CHCI3, промывали 20% водным раствором NaCI (4 х 25 мл), сушили над Na2S04, упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CHCI3-MeOH (100 : 1 с увеличением полярности до 50:1). Получили соединение ЗОЬ в виде кристаллизующегося масла (0.299 г, 50%). R, 0.42 (Б). Спектр ЯМР 1Н: 0.68 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.87 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.91 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 1.00 (с, ЗН, С(Ю)Ме), 0.93-2.10 (м, 37 Н, протоны Chol, 2 СН2(СН2)2СН2, 2 NCH2CH2CH2N), 2.13-2.41 (м, 2 Н, Н2С(4)), 2.90-3.54 (м, 17 Н, Н(3), 7 NCH2> СН2СНгО), 4.67 (с, 2 Н, 0СН20), 5.00-5.15 (м, 6 Н, 3 Cj^Ph), 5.31-5.38 (м, 1 Н, Н(6)), 7.21-7.42 (м, 15 Н, 3 Ph) 7.50-7.72 (м, 3 Н) и 7.86-8.07 (м, 1 Н, С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 11.84, 18.71, 19.33, 21.05, 22.53, 22.77, 23.81, 24.27, 24.95, 25.24, 25.60, 26.69, 27.08, 27.34, 27.99, 28.19, 28.90, 31.89, 31.92, 35.75, 35.87, 36.18, 36.74, 37.22, 39.50, 39.55, 39.78, 42.32, 43.71, 44.09, 45.04, 46.58, 46.92, 50.19, 56.18, 56.76, 66.95, 67.09, 67.51, 76.96, 93.41, 121.73, 124.09, 127.85, 127.99, 128.20, 128.55, 130.68, 131.52, 133.39, 136.66, 140.71, 148.05, 156.00, 156.97, 157.46.

Л/11,Л/16,Л/19-Три-бензилоксикарбонил-Л/7-(2-нитрофенилсульфонил)-1-(холест-5-ен-Зр-илоксиметокси)-19-амино-7,11,16-триазадодекан (30с):

Получали как соединение ЗОЬ исходя из соединения 5Ь (0.313 г, 0.40 ммоль), Cs2C03 (0.129 г, 0.40 ммоль), соединения 20с (0.255 г, 0.48 ммоль) и Bu4NI (0.074 г, 0.20 ммоль). Получили соединение 30с в виде масла (0.278 г, 54%). R\ 0.43 (Б). Спектр ЯМР 1Н: 0.68 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.87 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.91 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 1.00 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.95-2.05 (м, 41 Н, протоны Chol, NCH2(CH2)2CH2N, OCH2(CH2)4CH2N, 2 NCH2CüCH2N), 2.20-2.41 (м, 2 H, Н2С(4)), 3.00-3.35 (м, 14 Н, 7 NCH2), 3.35-3.45 (м, 1 Н, Н(3)), 3.50 (т, 2 Н, J = 6.5, СНгСНгО), 4.71 (с, 2 Н, 0СН20), 5.00-5.20 (м, 6 Н, 3 CHzPh), 5.32-5.39 (м, 1 Н, Н(6)), 7.21-7.42 (м, 15 Н, 3 Ph) 7.52-7.73 (м, 3 Н) и 7.90-8.00 (м, 1 Н, С6Н4). Спектр ЯМР 13С: 11.99, 18.84, 19.51, 21.17, 22.71, 22.97, 23.95, 24.42, 25.37, 25.70, 25.95, 26.53, 27.25, 28.15, 28.37, 29.02, 29.69, 31.99, 32.06, 35.92, 36.30, 36.87, 37.35, 37.61, 38.24, 39.64, 39.67, 39.88, 42.43, 44.09, 44.48, 44.78, 46.89, 47.07, 50.25, 56.25, 56.86, 66.59, 67.29, 67.70, 76.97,93.56,

85

121.88, 124.25, 128.04, 128.20, 128.61, 128.65, 130.91, 131.70, 133.56, 136.78, 140.88, 148.11, 156.11, 156.65, 156.88.

Л/7,Л/12,Л/15-Три-бензилоксикарбонил-1-(холест-5-ен-Зр-илоксиметокси)-15-амино-3,7,12-триазапентадекан (31а): К раствору соединения 30а (0.200 г, 0.16ммоль) в ДМФА (5 мл) при перемешивании добавили К2СОэ (0.074 г, 0.54 ммоль), а затем PhSH (0.167 мл, 1.62ммоль). Через 15 мин к реакционной массе добавляли CHCI3 (10 мл), промывали 20% раствором NaCI (3x15 мл), сушили над Na2S04, упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью CHCI3-MeOH-25% водный NH3 (100:5:0.1). Получили соединение 31а в виде желтоватого масла (0.165 г, 97%). f?f0.58 (Н). Масс-спектр, m/z (1от{%))\ 1047.767 [М+Н]+ (100). Вычислено для C64H94N408: 1046.707 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.68(с, 3 Н, С(13)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.87 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.92 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 1.00 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.93-2.1 (м, 33 Н, протоны Chol, NCH2(CH2)2CH2N, 2 NCH2CH2CH2N), 2.20-2.40 (м,

2 Н, Н2С(4)), 2.50-3.00 (м, 4 Н, СШМНСНг), 3.00-3.30 (м, ЮН, 5 NCH2), 3.30-3.50 (м, 1 Н, Н(3)), 3.50-3.80 (м, 2 Н, МСН2СНгО), 4.73 (с, 2 Н, 0СН20), 5.00-5.15 (м, 6 Н,

3 ChbPh), 5.25-5.40 (м, 1 Н, Н(6)), 7.20-7.40 (м, 15 Н,' 3 Ph). Спектр ЯМР 13С: 11.97, 18.85, 19.45, 21.19, 22.66, 22.90, 23.96, 24.40, 25.44, 25.86, 27.27, 28.11, 28.32, 29.03, 32.03, 35.88, 36.33, 36.87, 37.35, 37.90, 39.65, 39.92, 42.46, 44.29, 44.29, 44.87, 46.67, 46.90, 50.33, 56.33, 56.90, 65.72, 66.63, 67.29, 77.26, 93.75, 121.92, 127.99, 128.15, 128.57, 128.61, 136.87, 140.78,156.58.

Л/^Л/^М^-Три-бензилоксикарбонил-! -(холест-5-ен-Зр-илоксиметокси)-17-амино-5,9,14-триазагептадекан (31Ь): Получали как соединение 31а исходя из ЗОЬ (0.220 г, 0.17 ммоль), К2СОэ (0.080 г, 0.58 ммоль), PhSH (0.179 мл, 1.75 ммоль). Получили соединение 31 b в виде желтоватого масла (0.139 г, 74 %). Яг 0.60 (Н). Масс-спектр, m/z (/отн(%)): 1075.760 [М+Н]+ (100). Вычислено для C66H98N408: 1074.738 [М]\ Спектр ЯМР 1Н: 0.68 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.87 (д, 3 Н, J =6.5, С(25)Ме), 0.91 (д, 3 Н, J =6.5, С(20)Ме), 1.00 (с, ЗН, С(Ю)Ме), 0.95-2.08 (м, 37 Н, протоны Chol, 2 СН2(СН2)2СН2, 2 NCH2ch2ch2N), 2.15-2.40 (м, 2 Н, Н2С(4)), 2.45-2.65 (м, 4 Н, ch2nhch2), 3.033.35 (м, 10 Н, 5 NCH2), 3.35-3.50 (м, 1 Н, Н(3)), 3.53 (т, 2 Н, J = 6.2, СНгСНаО), 4.72 (с, 2 Н, 0СН20), 5.03-5.17 (м, 6 Н, 3 Ch^Ph), 5.31-5.38 (м, 1 Н, Н(6)), 7.20-7.42 (м, 15 Н, 3 Ph). Спектр ЯМР 13С: 11.96, 18.83, 19.45, 21.17, 22.65, 22.90, 23.94, 24.39, 25.34, 25.82, 26.25, 27.27, 28.10, 28.32, 29.03, 29.78, 32.02, 32.04, 35.88, 36.31,

36.86, 37.38, 37.79, 39.62, 39.68, 39.91, 43.44, 44.21, 45.03, 46.66, 47.19, 50.30, 56.30, 56.88, 67.15, 67.26, 67.86, 76.95, 93.56, 121.762, 127.91, 128.08, 128.14, 128.55, 128.57, 128.63, 136.95, 140.92, 156.50, 156.56.

М11,Л/16,Л/1э-Три-бензилоксикарбонил-1-(холест-5-ен-Зр-илоксиметокси)-19-амино-7,11,16-триазадодекан (31с): Получали как соединение 31а исходя из 30с (0.210 г, 0.17 ммоль), К2СОэ (0.074 г, 0.54 ммоль), PhSH (0.167 мл, 1.63 ммоль). Получили соединение 31с в виде желтоватого масла (0.150 г, 83 %). Rf0.61(H). Масс-спектр, m/z (/0™(%))' 1103.6 [M+Hf (100). Вычислено для C68H102N4O8: 1102.770 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.67 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.6, С(25)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J =6.6, С(25)Ме), 0.91 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 1.00 (с, ЗН, С(Ю)Ме), 0.96-2.07 (м, 41 Н, протоны Chol, NCh^CühCHhN, OCH2(ch2)4ch2N, 2 NCH2CH2CH2N), 2.15-2.40 (м, 2 H, Н2С(4)), 2.45-2.70 (м, 4 Н, CÜNHChb). 3.02-3.35 (м, 10 Н, 5 NCH2), 3.35-3.45 (м, 1 Н, Н(3)), 3.53 (т, 2 Н, J = 6.0, СН2СНгО), 4.71 (с, 2 Н, 0СН20), 5.00-5.15 (м, 6 Н, 3 CJiPh), 5.32-5.37 (м, 1 Н, Н(6)), 7.21-7.40 (м, 15 Н, 3 Ph). Спектр ЯМР 13С: 11.95, 18.82, 19.44, 21.15, 22.64, 22.89, 23.92, 24.38, 25.37, 25.84, 26.33, 26.76, 27.55, 28.08, 28.31, 29.01, 32.00, 32.03, 35.86, 36.29, 36.84, 37.35, 37.81, 38.30, 39.61, 39.66, 39.89, 42.42, 44.21, 44.98, 46.60, 47.08, 49.64, 50 28, 56.28, 56.86, 67.16, 67.24, 67.63, 76.96, 93.53, 121.79, 127.91, 128.07, 128.12, 128.53, 128.57, 128.62, 136.92, 140.86, 156.29, 156.53, 156.71.

15-Амино-1-(холест-5-ен-Зр-илоксиметокси)-3,7,12-триазапентадекан, тетрагидрохлорид (32а): К раствору соединения 31а (131 мг, 0.13 ммоль) в THF (10 мл) добавили 5 % Pd/C (524 мг) и продували Н2 в течении 8 ч. Реакционную массу фильтровали, упаривали, сухой остаток промывали диэтиловым эфиром (5x10 мл). Получили соединение 32а в виде белых кристаллов (51 мг, 62%). Масс-спектр, m/z (/0™(%)): 645.581 [М+Н]+ (100). Вычислено для C4oH76N402: 644.597 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.58 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.75 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.76 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.81 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 0.90 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.90-2.00 (м, 33 Н, протоны Chol, NHCH2(CH2)2CH2N, 2 NHCH2CH2CH2NH), 2.102.29 (м, 2 Н, Н2С(4)), 2.65-3.00 (м, 8 Н, 4 CH2N), 3.20-3.50 (м, 9 Н, Н(3), NCHzCHzO, 3 NCH2), 4.64 (с, 2 Н, 0СН20), 5.15-5.30 (м, 1 Н, Н(6)).

17-Амино-1-(холест-5-ен-ЗР-илоксиметокси)-5,9,14-триазагептадекан, тетрагидрохлорид (32Ь): Получали как соединение 32а исходя из 31 b (0.059 г, 0.06 ммоль), 5% Pd/C (177 мг). Получили соединение 32Ь в виде белых кристаллов (20 мг, 55%). Масс-спектр, m/z (1тн(%))\ 673.736 [М+Н]+ (100). Вычислено для C42H8oN402: 672.628 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.59 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.74 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.75 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.80 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 0.90 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.91-2.03 (м, 37 Н, протоны Chol, NHCH2(CH2)2CH2N, 2 NHCH2CH2CH2NH, СН2(СН2)2СН2), 2.10-2.30 (м, 2 Н, Н2С(4)),

2.69-3.05 (м, 14 Н, 3 CH2NCH2, NCH2), 3.21-3.51 (м, 1 Н, Н(3)), 3.55 (т, 2 Н, J = 6.2, СН2СН2О), 4.72 (с, 2 Н, 0СН20), 5.14-5.19 (м, 1 Н, Н(6)).

19-Амино-1 -(холест-5-ен-Зр-илоксиметокси)-7,11,16-триазадодекан, тетрагидрохлорид (32с): Получали как соединение 32а исходя из 31с (0.058 г, 0.05 ммоль), 5% Pd/C (177 мг). Получили соединение 32с в виде белых кристаллов (23 мг, 60%). Масс-спектр, m/z (/отн(%)): 701. 834 [М+Н]+ (100). Вычислено для C44H84N402: 700.659 [М]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.60 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.74 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.75 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.79 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 0.91 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.91-2.03 (м, 41 Н, протоны Chol, NHCH2(CH2)2CH2N, 2 NHCH2CH2CH2NH, СН2(СШ)4СН2), 2.11-2.30 (м, 2 Н, Н2С(4)),

2.70-3.07 (м, 14 Н, 3 CH2NCH2, NCH2), 3.22-3.51 (м, 1 Н, Н(3)), 3.54 (т, 2 Н, J = 6.2, СН2СНгО), 4.71 (с, 2 Н, 0СН20), 5.15-5.20 (м, 1 Н, Н(6)).

Холест-5-ен-Зр-ил)-Л/11,Л/16,Л/19-три-(/прет-бутилоксикарбонил)-19-амино-6-оксо-3,4-дитиа-7,11,16-триазадодеканоат (33а). К раствору соединения 4а (99 мг, 0.198 ммоль) в ДМФА (2.5 мл) последовательно добавили соединение 22а (0,131 г, 0.238 ммоль), TBTU (0.076 мг, 0.238 ммоль) и Et3N (0.033 мл, 0.238 ммоль). Через 1 ч упариваем, остаток хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя смесью СНС1з-МеОН (100 : 1). Получили соединение 33а в виде кристаллизующегося бесцветного масла (0.122 г, 60%). f?f0.35(B). Спектр ЯМР 1Н: 0.68 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.91 (д, 3 Н, J =6.5, С(20)Ме), 1.02 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.90-2.10 (м, 34 Н, протоны Chol, 2 NCH2CH2CH2N, NCH2(CH2)2CH2N), 1.43 (с, 9 Н), 1.45 (с, 9 Н) и 1.50 (с, 9 Н, 3 С(СНз)з), 2.29-2.40 (м, 2 Н, Н2С(4)), 3.02-3.35 (м, 12 Н, 6 CJiN), 3.47 (с, 2 Н, SChbCOOChol), 3.54 (с, 2 Н, SCÜCONH), 4.35-4.75 (м, 1 Н, Н(3)), 5.27-5.40 (м, 1 Н, Н(6)). Спектр ЯМР 13С: 11.85, 18.72, 19.27, 21.05, 22.53, 22.77, 23.83, 24.27, 25.91, 27.70, 27.99, 28.19, 28.44, 28.47, 29.67, 31.88, 31.91, 33.94, 35.77, 36.20, 36.60, 36.95, 37.68, 38.00, 39.52, 39.75, 41.04, 41.71, 42.67, 44.11, 46.85, 49.14, 50.08, 56.20, 56.72, 75.76, 79.64, 122.99, 139.31, 156.01, 167.95, 169.08.

Холест-б-ен-ЗР-ил^Л/^М^ЛР^ри^трет-бутилоксикарбонил)^!-амино-8-оксо-4,5-дитиа-9,13,18-триазагенэйкозаноат (33b): Получали как соединение 33а исходя из соединения 4а (0.158 г, 0.314 ммоль), соединения 22Ь (0.218 г, 0.377 ммоль), TBTU (0.121 г, 0.377 ммоль) и Et3N (0.053 мл, 0.377 ммоль). Получили соединение ЗЗЬ в виде кристаллизующегося бесцветного масла (0.178 г, 82%). Rf 0.4 (Б). Спектр ЯМР 1Н: 0.68 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.91 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 1.02 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.91-2.05 (м, 34 Н, протоны Chol, 2 nch2ch2ch2n, NCH^ChhhCHzN), 1.46 (уш. с, 27 Н, СМе3), 2.27-2.37 (м, 2 Н, Н2С(4)), 2.58 (т, 2 Н, J =7.1, SCHzChbCOOChol), 2.70 (т, 2 Н, J =7.1, SCH2CH2CONH), 2.87-3.00 (м, 4 Н,

2 SCH2), 3.07-3.40 (м, 12 Н, 6 CH^N), 4.55-4.72 (м, 1 Н, Н(3)), 5.33-5.40 (м, 1 Н, Н(6)). Спектр ЯМР 13С: 11.82, 18.67, 19.28, 20.98, 22.54, 22.80, 23.78, 24.24, 25.94, 27.17, 27.64, 27.72, 27.98, 28.19, 28.33, 28.41, 31.79, 31.86, 33.11, 33.82, 34.40, 35.75, 35.97, 36.13, 36.54, 36.91, 38.05, 39.47, 39.66, 42.94, 43.31, 46.66, 46.81, 49.95, 56.06, 56.63, 74.46, 79.92, 80.33, 122.74, 139.46, 157.02, 157.51, 170.66, 171.13.

Холест-5-ен-Зр-ил)-19-амино-6-оксо-3,4-дитиа-7;11,16-триазадодеканоат тригидрохлорид (34а): К раствору соединения 33а (0.055 г, 0.053 ммоль) в 3 мл CH2CI2 добавили 4н. HCl в диоксане (1 мл) и перемешивали

1 ч при 24°С. Растворители удаляли в вакууме, остаток промывали chci3. Получили соединение 29а в виде аморфных бежевых кристаллов (0.030 г, 67%). Rf 0.85 (Ж). Масс-спектр, m/z (/0™(%)): 735.623 [М - 3HCI + Н]+ (100). Вычислено для C4iH77Cl3N403S2: 734.520 [М - 3HCI]+. Спектр ЯМР 1Н (CDCI3- CD3OD, 1 : 5): 0.67 (с,

3 Н, С(13)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.86 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме), 0.92 (д, ЗН, J =6.5, С(20)Ме), 1.03 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.91-2.05 (м, 34 Н, протоны Chol,

2 NCH2ChUCH2N, NCH2(ch2)2CH2N), 2.30-2.41 (м, 2 Н, Н2С(4)), 2.91-3.21 (м, 12 Н, 6 ch2n), 3.46 (с, 2 Н, SChbCOOChol), 3.55 (с, 2 Н, sch2conh), 4.36-4.76 (м, 1 Н, Н(3)), 5.28-5.41 (м, 1 Н, Н(6)).

Холест-5-ен-Зр-ил)-21-амино-8-оксо-4,5-дитиа-9,13,18-триазагенэйкозаноат тригидрохлорид (34Ь): Получали как соединение 34а исходя из ЗЗЬ-(0.05 г, 0.073 ммоль). Получили соединение 34Ь в виде аморфных белых кристаллов (0.048 г, 76%). Rf 0.86 (Ж). Масс-спектр, m/z (/от„(%)): 763.725 [М - 3HCI + Н]+ (100). Вычислено для C43H8iCI3N403S2: 762.552 [М - 3HCI]+. Спектр ЯМР 1Н (CDCI3- cd3od, 1 : 5): 0.68 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.84 (д, 3 Н, J = 6.5, С(25)Ме),

0.85 (д, 3 H, J = 6.5, C(25)Me), 0.90 (д, 3 H, J = 6.5, C(20)Me), 1.01 (с, 3 H, С(Ю)Ме), 0.90-2.06 (м, 34 H, протоны Chol, 2 nch2ch2ch2n, NCH2(ch2)2CH2N), 2.27-2.37 (м, 2 H, H2C(4)), 2.59 (т, 2 H, J =7.1, SCHzChbCOOChol), 2.71 (т, 2 H, J =7.1, SCH2ch2conh), 2.88-3.21 (m, 16 H, 2 SCH2, 6 ch2n), 4.55-4.72 (m, 1 H, H(3)), 5.335.40 (m, 1 H, H(6)).

Л/14,М19,Л/22-Три-(шрет-бутилоксикарбонил)-Л/1-(холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-1,22-диамино-8-оксо-3,4-дитиа-7,10,14,19-тетраазадокозан (35): К охлажденному до 0°С раствору соединения 8а (100 мг, 0.167 ммоль) в ДМФА (5 мл) последовательно добавили TBTU (0.134 мг, 419 ммоль), раствор соединения 23 (0.302 мг, 0.502 ммоль), DIEA (0.146 мл, 0.837 ммоль) в ДМФА (2.5 мл). Через 2 ч к реакционной массе добавляли 20 мл CH2CI2, промывали 3 % водным раствором HCl (2 x15 мл), сушили над Na2S04, упаривали. После хроматографии на силикагеле CHCI3-MeOH, (80:1) получили соединение 35 в виде кристаллизующегося масла (0.176 г, 92%). Rf0.57(C). Масс-спектр, m/z (/отн(%)): 1107.867 [M - Cl]+ (100). Вычислено для C59H107CIN6O9S2: 1107.754 [M-Cl]+. Спектр ЯМР 1Н: 0.64 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.83 (д, 3 H, J = 6.6, С(25)Ме), 0.84 (д, 3 H, J = 6.6, С(25)Ме), 0.88 (д, 3 H, J = 6.5, С(20)Ме), 0.97 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.85-1.70 (м, 36 Н, протоны Chol, NCH2(ch2)2ch2N, nch2ch2ch2nh2ch2co), 1.40 (с, 9 H), 1.41 (с, 9 H) и 1.42 (с, 9 Н, ЗС(СНз)з), 1.70-2.07 (м, 7 Н, протоны Chol, b0cnhch2ch2ch2n), 2.20-2.39 (м, 2 Н, Н2С(4)), 2.55 (т, 2 H, J =6.5, ch2nh2ch2co), 2.76-2.84 (м, 4 Н, 2 ch2s), 3.01-3.32 (м, ЮН, 2 CH2N(Boc)CH2, NH(Boc)CÜ). 3.21 (с, 2 H, ch2nh2ch2co), 3.44 (квартет, J = 6.2, 2 H, ChbNHCOOChol), 3.57 (квартет, J = 6.3, 2 H, ch2oconhch2), 4.30-4.58 (м, 1 H, H(3)), 5.25-5.50 (m, 1 H, H(6)). Спектр ЯМР 13C: 11.93, 18.80, 19.40, 21.12, 22.63, 22.88, 23.91, 24.36, 25.98, 28.06, 28.25, 28.29, 28.52, 28.54, 28.56, 31.97, 31.98, 35.85, 36.27, 36.64, 37.08, 37.82, 37.94, 38.51, 38.64, 39.59, 39.83, 44.11, 46.73, 47.07, 50.12, 56.24, 56.78, 74.57, 79.07, 79.53, 79.64, 122.56, 139.87, 156.17, 156.18, 156.19.

1,22-Диамино-Л/1-(холест-5-ен-Зр-илоксикарбонил)-8-оксо-3,4-дитиа-7,10,14,19-тетраазадокозан (36): К раствору соединения 35 (0.200 г, 0.146 ммоль) в 4 мл THF добавили 4 н HCl в диоксане (3 мл) и перемешивали 3 ч при 24°С. Растворители удаляли в вакууме, остаток промывали МеОН. Получили соединение 36 в виде белых кристаллов (0.155 г, 81%). Rf 0.35 (Ж). Масс-спектр, m/z (/0Тн(%)): 807.654 [M - 4HCI + Н]+ (100). Вычислено для C44H86CI4N603S2: 806.589

М - 4НС1]+. Спектр ЯМР 1Н (D20): 0.65 (с, 3 Н, С(13)Ме), 0.84 (д, 3 Н, J =6.6, С(25)Ме), 0.85 (д, 3 Н, J = 6.6, С(25)Ме), 0.87 (д, 3 Н, J = 6.5, С(20)Ме), 0.96 (с, 3 Н, С(Ю)Ме), 0.85-1.70 (м, 38 Н, протоны Chol, NCH2(ch2)2CH2N, NCH2ch2ch2NH2CH2CO), 1.70-2.07 (м, 5 Н, протоны Chol), 2.21-2.40 (м, 2 Н, Н2С(4)), 2.54 (т, 2 Н, J = 6.5, CH2NH2CH2CO), 2.77-2.84 (м, 4 Н, 2 CH2S), 2.94-3.25 (м, 14 Н, 7ch2n), 3.45 (квартет, J = 6.2, 2 Н, CHzNHCOOChol), 3.56 (квартет, J = 6.3, 2 Н, СН2ОСОЫНСШ. 4.31-4.59 (м, 1 Н, Н(3)), 5.24-5.49 (м, 1 Н, Н(6)).

Получение композиции катионный амфифил-DOPE

Раствор поликатионного амфифила (26а-с, 29а-с, 34а,Ь, 36) и нейтрального фосфолипида DOPE в 50% мольном соотношении в подходящем органическом растворителе упаривали в вакууме до образования липидной пленки. Полученную липидную пленку гидратировали в необходимом количестве (с = 1мМ) автоклавированной деионизированной воды в течение 3-6 часов, а затем озвучивали на ультразвуковой бане до получения однородной смеси.

Доставка в клетки FITC-меченного олигонуклеотида с использованием композиции катионный амфифил-DOPE

Исследование проникновения FITC-меченного олигонуклеотида в клетки НЕК 293 проводили с помощью проточной цитофлоуметрии. Эффективность доставки оценивали по количеству трансфицированных клеток от общего количества клеток в образце. Клетки высаживали в 24-луночные планшеты (2x105 клеток на лунку) и культивировали в течение суток при 37 °С в атмосфере, содержащей 5% С02. Перед проведением трансфекции для экспериментов в присутствии или в отсутствие сыворотки среду в лунках заменяли на 200 мкл среды DMEM, содержащей 10% FBS, или DMEM, не содержащей сыворотку, соответственно. Одну из композиций (26a-c-DOPE, 29a-c-DOPE, 34a,b-DOPE, 36-DOPE) в среде OptiMEM смешивали с раствором FITC-меченного олигонуклеотида (конечная концентрация олигонуклеотида в лунке 1 мкМ) в этой же среде в соответствии с выбранным соотношением P/N (отношение количество отрицательных зарядов фосфатных групп к количеству положительных зарядов атомов азота) и инкубировали 20 минут при комнатной температуре. Затем образовавшиеся комплексы добавляли к клеткам и инкубировали в течение 4 ч. По окончании инкубации клетки промывали PBS (300 мкл), добавляли 40 мкл раствора трипсина и инкубировали 1-2 мин. (37°С, 5%С02). По окончании инкубации в лунки добавляли 200 мкл DMEM с 10% сыворотки, клетки суспендировали и переносили

91 в пробирки. Полученную клеточную суспензию центрифугировали при 1000-1200 об./мин., 4°С, отбирали среду и клетки промывали 0.5 мл PBS. Затем клетки фиксировали путем суспендирования в 600 мкл 2% раствора формальдегида в PBS. Анализ уровня трансфекции клеток проводили на флуоцитометре FC500 (Beckman-Coulter), определяя число FITC-положительных клеток в популяции и-средний уровень флуоресценции клеток, определяемый при длине волны возбуждения 488 нм. В качестве агентов сравнения использовали коммерческую композицию Lipofectamine®2000.

Трансфекция клеток НЕК 293 плазмидной ДНК с использованием композиции катионный амфифил-DOPE.

Исследование доставки плазмидной ДНК в клетки НЕК 293 проводили с помощью проточной цитофлоуметрии. Эффективность трансфекции оценивали по количеству клеток, в которых происходит экспрессия зеленого флуоресцентного белка (EGFP) от общего количества клеток в популяции. Клетки высаживали в 24-луночные планшеты (1.2х105 клеток на лунку для клеток НЕК 293) и культивировали в течение суток при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СОг. Перед проведением трансфекции-для экспериментов в присутствии или в отсутствие сыворотки среду в лунках заменяли на 200 мкл среды DMEM, содержащей 10% FBS, или DMEM, не содержащей сыворотку, соответственно. Одну из композиций (26a-c-DOPE, 29a-c-DOPE, 34a,b-DOPE, 36-DOPE) в среде OptiMEM смешивали с раствором ДНК плазмиды pEGFP-C2 (0.5 мкг в лунке) в этой же среде в определенном соотношении P/N, полученную смесь добавляли к клеткам и инкубировали в течение 24 ч. Через 4 часа среду в лунках со средой без сыворотки заменяли среду на DMEM' с 10% сывороткой. По окончании инкубации клетки обрабатывали и анализировали, как описано в доставки в клетки FITC-меченного олигонуклеотида с использованием композиции катионный амфифил-DOPE.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Петухов, Иван Алексеевич, 2010 год

1. Mintzer М.А. and Simanek Е.Е. / Nonviral Vectors for Gene Delivery // Chem. Rev., 2009, 109 (2), P. 259-302

2. Templeton N. S. / Gene and cell therapy: therapeutic mechanisms and strategies. 3rd ed. / CRC, 2008

3. Vonarbourg A, Passirani C, Saulnier P, Benoit J.P. / Parameters influencing the stealthiness of colloidal drug delivery systems // Biomaterials, 2006, 27(24), P. 435673.

4. Rejman J., Bragonzi A., Conese M. Role of clathrin- and caveolae-mediated endocytosis in gene transfer mediated by lipo- and. polyplexes // Mol Ther, 2005, V. 12(3), P. 468-74.

5. Mellman I. / Endocytosis and moleculansorting // Annu Rev Cell Dev Biol; 1996, V. 12, P. 575-625.

6. Francis C.L., Ryan.T.A., Jones, B.D., Smith. S.J., Falkow S. / Ruffles induced by Salmonella and other stimuli direct macropinocytosis of bacteria.// Nature, 1993, V. 364(6438), P: 639-642.

7. Harbottle R.P., Cooper R.G., Hart S.L., Ladhoff A., McKay Т., Knight A.M. et al. / An RGD-oligolysine peptide: a prototype construct for integrin-mediated gene delivery // Hum Gene Ther, 1998, V. 9(7), P. 1037^7.

8. Wiethoff С, M., Middaugh С R. / Barriers to Nonviral Gene Delivery1 // J. Pharmaceut. Sci. 2003, V.92, 2, P. 203-217

9. Remy J.S., Abdallah В., Zanta M. A., Boussif O., Behr. J.P. / Demeneix B. Gene transfer with lipospermines and polyethylenimines // Adv. Drug Del. Rev. 1998; V. 30, P. 85-95

10. Luo D., Saltzman Wi M. / Synthetic DNA delivery systems // Nat. Biotechnol. 2000, V. 18, P. 33-37.

11. Feigner P.L, Gadek T.R., Holm.M., Roman R., Chan H.W., Wenz M., Northrop J.P., Ringold G.M., Danielsen M: / Lipofection: A highly efficient, lipid-mediated'DNA-transfection procedure// Proc. Natl.-Acad. Sci., 1987, V. 84, P. 7413-7417

12. Akinc A., Zumbuehl A., Goldberg M., LeshchinerE.S., Busini V., Zimmermann T.S. et al. / A combinatorial library of lipid-like materials for delivery of RNAi therapeutics // NATURE BIOTECHNOLOGY, 2008, V. 26 (5), P. 561-569.

13. Zimmermann T.S. et al: / RNAi-mediated gene silencing in non-human primates // Nature, 2006, V. 441, P. 111-114.

14. Bloomfield, V.A. I DNA condensation II Curr. Opin. Struct. Biol., 1996, V. 6, P. 334-341.

15. Allison S.A., Herr J.C. and Schurr J.M. / Structure of viral cp 29 DNA condensed by simple triamines: a light-scattering and electronmicroscopy study // Biopolymers, 1981, V. 20, P. 469-488

16. Stewart K.D. and Gray T.A. / Survey of the DNA Binding Properties of Natural and Synthetic Polyamino Compounds // J. Phys. Org. Chem., 1992, V. 5, P. 461-466

17. Geall A.J., Taylor R.J., Earll M.E., Eaton M.A.W. and Blagbrough I.S. / Synthesis of cholesterol-polyamine carbamates: pKa studies and condensation of calf thymus DNA// Chem. Commun., 1998, P. 1403-1404

18. Wilson R.W. and Bloomfield V.A. / Counterion-induced condensation of deoxyribonucleic acid: a light-scattering study // Biochemistry, 1979, V. 18, P. 21922196.

19. Zana R. / Alkanediyl-alpha, omega-bis(dimethylalkylammonium bromide) surfactants: II. Krafft temperature and melting temperature // J. Colloid Interface Sci., 2002, V. 252 (1), P. 259-61

20. Kim T.S., Kida T., Nakatsuji Y., Ikeda I. / Preparation and Properties of Multiple Ammonium Salts Quaternized by Epichlorohydrin // Langmuir, 1996, V. 12 (26), P. 6304-6308.

21. In M., Bee V., Aguerre-Chariol O., Zana R. / Quaternary Ammonium Bromide Surfactant Oligomers in Aqueous Solution: Self-Association and Microstructure // Langmuir, 2000, V. 16 (1), P. 141-148.

22. Zana R.; Talmon Y. / Dependence of aggregate morphology on structure of dimeric surfactants// Nature, 1993, V. 362, P. 228-230.

23. Moss R.A.; Li J.-M. / Bilayer-bridging bolaamphiphilic lipids // J. Am. Chem. Soc., 1992, V. 114 (23), P. 9227-9229.

24. McGregor C., Perrin C., Monck M., Camilleri P., Kirby A.J. / Rational Approaches to the Design of Cationic Gemini Surfactants for Gene Delivery // J. Am. Chem. Soc., 2001, V. 123 (26), P. 6215-6220.

25. Gerweck L.E., Seetharaman K. / Cellular pH gradient in tumor versus normal tissue: potential exploitation for the treatment of cancer // Cancer Res. 1996, V. 56 (6), P. 1194-1198.

26. Hunt C.A., MacGregor R.D., Siegal R.A. / Engineering targeted In vivo drug delivery I. The physiological & physicochemical principles governing opportunities & limitations // Pharm.Res. 1986, V. 3, P. 333-344.

27. Torchillin V.P. / Recent advances with liposomes as pharmaceutical carriers // Nat.Rev., Drug. Discov., 2005, V. 4, P. 145-160.

28. Shim W.S., Kim J.H., Kim K„ Kim Y.S., Park R.W., Kim I.S., Kwon I.C., Lee D.S. / pH-and temperature-sensitive, injectable, biodegradable block copolymer hydrogels as carriers for paclitaxel // Int.J.Pharm., 2007, V. 331 (1), P. 11-18.

29. Kim Y.H., Bae Y.H., Kim S.W. / pH/temperature-sensitive polymers for macromolecular drug loading and release // J.Control.Release, 1994, V. 28 (1-3), P. 143-152.

30. Benns J.M., Choi J.S., Mahato R.I., Park J.S., Kim S.W. / pH-sensitive cationic polymer gene delivery vehicle: N-Ac-poly(L-histidine)-graft-poly(L-lysine) comb shaped polymer// Bioconjug.Chem., 2000, V. 11 (5), P. 637-645.

31. Dufresne M.H., Garrec D.L., Sant V., Leroux J.C., Ranger M. / Preparation and characterization of water-soluble pH-sensitive nanocarriers for drug delivery // Int.J.Pharm., 2004, V. 277 (1-2), P. 81-90.

32. Liua S.Q., Wiradharma N., Gao S.J., Tong Y.W., Yang Y.Y. / Biofunctional micelles self-assembled from a folate-conjugated block copolymer for targeted intracellular delivery of anticancer drugs // Biomaterials, 2007, V. 28, P. 1423-1433.

33. Lee E.S., Na K., Bae Y.H. / Polymeric micelle for tumor pH and folate-mediated targeting // J.Control.Release, 2003, V. 91 (1-2), P. 103-113.

34. Fattal E., Couvreur P., Dubernet C. / «Smart» delivery of antisense oligonucleotides by anionic pH-sensitive liposomes // Adv.DrugDeliv.Rev., 2004, V. 56 (7), P. 931-946.

35. Boomer J.A., Thompson D.H., Sullivan S.M. / Formation of plasmid-based transfection complexes with an acid-labile cationic lipid: characterization of in vitro and in vivo // Gene Transfer. Pharm Res, 2002, V. 19 (9), P. 1292-1301

36. Zhu M.Z., Wu Q.H., Zhang G„ Ran T., Liu D., Guo Q.X. / Synthesis and evaluation of cationic lipids bearing cholesteryl groups for gene delivery in vitro // Bull.Chem.Soc.Jpn, 2002, V. 75 (10), P. 2207-2213.

37. Zhu J., Munn R.J., Nantz M.H. / Self-cleaving ortho ester lipids: a new class of pH-vulnerable amphiphiles//J.Am.Chem.Soc, 2000, V. 122 (11), P. 2645-2646.

38. Guo X., MacKay J.A., Szoka F.C. / Mechanism of pH-triggered collapse of phosphatidylethanolamine liposomes stabilized by an orthoester polyethyleneglycol lipid // Biophys. J., 2003, 84 (3), P. 1784- 1795.

39. Li S., Dory Y.L., Deslongchamps P. / Hydrolysis of cyclic orthoesters: experimental observations and theoretical rationalization // Tetrahedron, 1996, V. 52 (47), P. 14841-14854.

40. Masson C., Garinot M., Mignet N., Wetzer B., Mailhe P., Scherman D„ Bessodes M. / pH-sensitive PEG lipids containing orthoester linkers: new potential tools for nonviral gene delivery II Journal of Controlled Release, 2004, V. 99, P. 423-434

41. Choi J.S., MacKay J.A., Szoka FC.Jr. / Low-pH-sensitive PEG-stabilized plasmid-lipid nanoparticles: preparation and characterization // Bioconjug Chem., 2003, V. 14 (2), P. 420-429.

42. Wheeler O. H., Rosado-Lojo O. / Kinetics of formation and hydrolysis of steroid Girard-T hydrazones // Tetrahedron, 1962, V. 18, P. 477-482.

43. Simoes S., Moreira- J.N., Fonseca C., Duzgunes N., Lima M.C. / On the formulation of pH-sensitive liposomes with long circulation times // Adv.Drug Deliv.Rev., 2004, V. 56, P. 947-965.

44. Sergeeva A., Kolonin M.G., Molldrem J.J., Pasqualini R., Arap W. / Display technologies: application for the discovery of drug and gene delivery agents // Adv.Drug Deliv.Rev., 2006, V. 58 (15), P. 1622-1654.

45. Couffin-Hoarau A.C., Leroux J.C. / Report on the use of poly(organophosphazenes) for the design of stimuli-responsive vesicles // Biomacromolecules, 2004, V. 5, P. 2082-2087.

46. De Wolf H.K., Luten J., Snel C.J., Oussoren C., Hennink W.E., Storm G. / In vivo tumor transfection mediated by polyplexes based on biodegradable poly(DMAEA)-phosphazene//Journal of controlled release, 2005, V. 109 (1-3), P. 275-287

47. Papanicolaou I., Briggs S., Alpar H.O. / Increased resistance of DNA lipoplexes to protein binding in vitro by surface-modification with a multivalent hydrophilic polymer //J.Drug Target, 2004, V. 12 (8), P. 541-547.

48. Roux E., Passirani C., Scheffold S., Benoit J.P., Leroux J.C. / Serum-stable and long-circulating, PEGylated, pH-sensitive liposomes // J.Control.Release, 2004, V. 94, P. 447—451.

49. Shen H., Eisenberg A. / Control of architecture in block-copolymer vesicles II Angew. Chem., 2000, V. 39 (18), P. 3310-3312.

50. Liu S., Armes S.P. / Synthesis and aqueous solution behavior of a pH-responsive schizophrenic diblock copolymer// Langmuir, 2003, V. 19, P. 4432—4438.

51. Taillefer J., Jones M.C., Brasseur N., vanLier J.E., Leroux J.C. / Preparation and characterization of pH-responsive polymeric micelles for the delivery of photosensitizing anticancer drugs // J.Pharm.Sci., 2000, V. 89 (1), P. 52-62.

52. LeGarrec D., Taillefer J., VanLier J.E., Lenaerts V., Leroux J.C. / Optimizing pH-responsive polymeric micelles for drug delivery in a cancer photodynamic therapy model // J.DrugTarget., 2002, V. 10 (5), P. 429-437.

53. Shima M.S., Kwon Y.J., Controlled cytoplasmic and nuclear localization of plasmid DNA and siRNA by differentially tailored polyethylenimine, Journal of Controlled Release, 133 (3), (2009), 206-213.

54. Shima M.S., Kwon Y.J. / Acid-transforming polypeptide micelles for targeted nonviral gene delivery // Biomaterials, 2010, V. 31 (12), P. 3404-3413.

55. Ko I.K., Ziady A., Lu S., Kwon Y.J. / Acid-degradable cationic methacrylamide polymerized in the presence of plasmid DNA as tunable non-viral gene carrier // Biomaterials, 2008, V. 29, P. 3872-3881.

56. Townsend D.M., Tew K.D., Tapiero H. / The importance of glutathione in human disease // Biomed Pharmacother, 2003, V. 57(3-4), P. 145-55.

57. Go Y-M., Jones D.P. / Redox compartmentalization in eukaryotic cells. // Biochim. Biophys Acta, 2008, V. 1780 (11), P. 1273-1290.

58. Wu G., Fang Y-Z., Yang S., Lupton J.R., Turner N.D. / Glutathione metabolism and its implications for health // J. Nutr., 2004, V. 134(3), P. 489-92.

59. Hassan S.M., Rechnitz G.A. / Determination of glutathione and glutathione reductase with a silver sulfide membrane electrode // Anal.Chem., 1982, V. 54, P. 1972-1976.

60. Saito G, Swanson J.A., Lee K.D. / Drug delivery strategy utilizing conjugation via reversible disulfide linkages: role and site of cellular reducing activities // Adv. Drug. Deliv. Rev., 2003 V. 55(2), P. 199-215.

61. Kuppusamy P:, Afeworki M., Shankar R.A., Coffin D., Krishna M.C., Hahn S.M., et al. / In vivo electron paramagnetic resonance imaging of tumor heterogeneity and oxygenation in a murine model // Cancer Res., 1998, V. 58(7), P. 1562-1568.

62. Kuppusamy P., Li H., Ilangovan G., Cardounel A.J., Zweier J.L., Yamada K., et al. / Noninvasive imaging of tumor redox status and its modification by tissue glutathione levels. II Cancer Res., 2002, V. 62(1), P. 307-312.

63. Gosselin M.A., Guo W.J., Lee R.J. / Efficient gene transfer using reversibly cross-linked low molecular weight polyethylenimine II Bioconjugate Chem., 2001, V. 12(6), P. 989-994.

64. Wang Y., Chen P., Shen J. / The development and characterization of a glutathione-sensitive cross-linked polyethylenimine gene vector// Biomaterials, 2006, V. 27(30), P. 5292-5298.

65. Peng Q., Zhong Z.L., Zhuo R.X. / Disulfide cross-linked polyethylenimines (PEI) prepared via thiolation of low molecular weight PEI as highly efficient gene vectors // Bioconjugate Chem., 2008, V. 19(2), P. 499-506.

66. Sun Y-X., Zeng X., Meng Q-F., Zhang X-Z., Cheng S-X., Zhuo R-X. / The influence of RGD addition on the gene transfer characteristics of disulfidecontaining polyethyleneimine/DNA complexes // Biomaterials, 2008, V. 29(32), P. 4356-4365.

67. Choi S., Lee K-D. / Enhanced gene delivery using disulfide-crosslinked low molecular weight polyethylenimine with listeriolysin o-polyethylenimine disulfide conjugate II J. Control Release, 2008, V. 131(1), P. 70-76.

68. Neu M., Germershaus O., Behe M., Kissel T. / Bioreversibly crosslinked polyplexes of PEI and high molecular weight PEG show extended circulation times in vivo // J. Control Release, 2007, V. 124 (1-2), P. 69-80.

69. Anderson D.G., Lynn D.M., Langer R. / Semi-automated synthesis and screening of a large library of degradable cationic polymers for gene delivery // Angew. Chem., 2003, V. 42 (27), P. 3153-3158.

70. Christensen L.V., Chang C.W., Yockman J.W., Conners R., Jackson H., Zhong Z.Y., et al. / Reducible poly(amido ethylenediamine) for hypoxia-inducible VEGF delivery // J. Control Release, 2007, V. 118 (2), P. 254-261.

71. Jeong J.H., Christensen L.V., Yockman J.W., Zhong Z.Y., Engbersen J.F.J., Kim W.J., et al. / Reducible poly(amido ethylenimine) directed to enhance RNA interference II Biomaterials, 2007, V. 28 (10), P. 1912-1917.

72. Wang X-L., Nguyen T., Gillespie D., Jensen R., Lu Z-R. / A multifunctional and reversibly polymerizable carrier for efficient siRNA delivery // Biomaterials, 2008, V. 29 (1), P. 15-22.

73. McKenzie D.L., Smiley E., Kwok K.Y., Rice K.G. / Low molecular weight disulfide cross-linking peptides as nonviral gene delivery carriers // Bioconjugate Chem., 2000, V. 11 (6), P. 901-909.

74. Wong S.Y., Pelet J.M., Putnam D. / Polymer systems for gene delivery-past, present, and future // Prog. Polym. Sci., 2007, V. 32 (8-9), P. 799-837.

75. Manickam D.S., Hirata A., Putt D.A., Lash L.H., Hirata F., Oupick D. / Overexpression of Bcl-2 as a proxy redox stimulus to enhance activity of non-viral redox-responsive delivery vectors // Biomaterials, 2008, V. 29 (17), P. 2680-2688.

76. Stevenson M., Ramos-Perez V., Singh S., Soliman M., Preece J.A., Briggs S.S. et al. / Delivery of siRNA mediated by histidine-containing reducible polycations // J. Control Release, 2008, V. 130 (1), P. 46-56.

77. Mok H.J., Park T.G. / Self-crosslinked and reducible fusogenic peptides for intracellular delivery of siRNA // Biopolymers, 2008, V. 89 (10), P. 881-888.

78. Lo S.L., Wang S. / An endosomolytic Tat peptide produced by incorporation of histidine and cysteine residues as a nonviral vector for DNA transfection // Biomaterials, 2008, V. 29 (15), P. 2408-2414.

79. Manickam D.S., Oupicky D. / Multiblock reducible copolypeptides containing histidine-rich and nuclear localization sequences for gene delivery // Bioconjugate Chem., 2006, V. 17 (6), P. 1395-1403.

80. Oishi M., Hayama T., Akiyama Y., Takae S., Harada A., Yarnasaki Y., et al. / Supramolecular assemblies for the cytoplasmic delivery of antisense oligodeoxynucleotide: polyion complex (PIC) micelles based on poly(ethylene glycol)

81. SS-oligodeoxynucleotide conjugate // Biomacromolecules, 2005, V. 6 (5), P. 24492454.

82. Takae S., Miyata K„ Oba M., Ishii T., Nishiyama N., Itaka K„ et al. / PEG-detachable polyplex micelles based on disulfide-linked block catiomers as bioresponsive nonviral gene vectors // J.Am. Chem. Soc., 2008, V. 130 (18), P. 60016009.

83. Ghosh Y.K., Visweswariah S.S., Bhattacharya S. / Nature of linkage between the cationic headgroup and cholesteryl skelton controls gene transfection efficiency // FEBS Lett., 2000, V. 473, P. 341-344.

84. Ghosh Y.K., Visweswariah S.S., Bhattacharya S. / Advantage of the ether linkage between the positive charge and the cholesteryl skeleton in cholesterol-based amphiphiles as vectors for gene delivery // Bioconjugate Chem., 2002, V. 13, P. 378384.

85. Wether B., Byk G., Frederic M., Airiau M., Blanche F., Piterd B. et al. / Reductible cationic lipids for gene transfer// Biochem J., 2001, V. 356 (3), P. 747-756.

86. Zuber G., Zammut-ltaliano L., Dauty E., Behr J-P. / Targeted gene delivery to cancer cells: directed assembly of nanometric DNA particles coated with folic acid // Agnew. Chem., 2003, V. 42,(23), P. 2666-2669.

87. Balakirev M., Schoehn G., Chroboczek J. / Lipoic acid-derived amphiphiles for redox-controlled DNA delivery// Chem. Biol., 2000, V. 7(10), P. 813-819.

88. Chittimalla C., Zammut-ltaliano L., Zuber G., Behr J.P. / Monomolecular DNA nanoparticles for intravenous delivery of genes // J. Am. Chem. Soc., 2005, V. 127 (32), P. 11436-11441.

89. Maeda Т., Fujimoto K. / A reduction-triggered delivery by a liposomal carrier possessing membrane-permeable ligands and a detachable coating // Colloids Surfaces B: Biointerfaces, 2006, V. 49 (1), P. 15-21.

90. Patil S.D., Rhodes D.G. and Burgess D.J. I DNA-based Therapeutics and DNA Delivery Systems: A Comprehensive Review // AAPS J., 2005, V. 7 (1), P. 61-77.

91. Huang L,, Hung M.-C., Wagner E. / Non-viral Vectors for Gene Therapy. Part 1 II Elsevier, Amsterdam, 2005.

92. Martin B., Sainlos M., Aissaoui A., Oudrhiri N., Hauchecorne M., Vigneron J.-P., Lehn J.-M., and Lehn P. / The design of cationic lipids for gene delivery // Curr. Pharm. Design, 2005, V. 11 (3), P. 375-394.

93. Kostarelos K. and Miller A.D. / Synthetic, self-assembly ABCD nanoparticies; a structural paradigm for viable synthetic non-viral vectors // Chem. Soc. Rev., 2005, V. 34, P. 970.

94. Ghosh Y.K., Visweswariah S.S. and Bhattacharya S. / Advantage of the Ether Linkage between the Positive Charge and the Cholesteryl Skeleton in Cholesterol-Based Amphiphiles as Vectors for Gene Delivery // Bioconjugate Chem. 2002, V. 13, P. 378-384.

95. Hasegawa- S., Hirashima N. and Nakanishi Ml I Comparative Study of Transfection Efficiency of Cationic Cholesterols Mediated by Liposomes-Based Gene Delivery // Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2002, V. 12, P. 1299-1302

96. Маслов M.A., Сычева1 E.B., Морозова Н.Г., Серебренникова Г.А. / Катионныеамфифилы липидной и нелипидной природы в генной терапии // Изв. АН, Сер. хим., 2000, №3, С. 385-400 Russ. Chem. Bull., 2000, V. 49, P. 385 (Engl.1. Transl.).

97. Miller A.D. I Cationic Liposomes for Gene Therapy // Angew. Chem., Int. Ed., 1998, V. 37, P. 1768-1785.

98. S.J. Ryhanen, M.J. Saily, T.Paukku, S. Borocci, G. Mancini, J.M. Holopainen and P.K.J. Kinnunen / Surface Charge Density Determines the Efficiency of Cationic Gemini Surfactant Based Lipofection // Biophysical Journal, 2003, V. 84, P. 578-587

99. Sternberg B., Sorgi F.L. and Huang L. / New structures in complex formation between DNA and cationic liposomes visualized by freeze-fracture electron microscopy // FEBS Lett., 1994, V. 356 (2-3), P. 361-366

100. Kawaura C., Nogucki A., Furuno T. and Nakonishi M. / Atomic force microscopy for studying gene transfection mediated by cationic liposomes with a cationic cholesterol derivative // FEBS Lett., 1998, V. 421 (1), P. 69.

101. U'Ren L., Kedl R., Dow S. / Vaccination with liposome-DNA complexes elicits enhanced antitumor immunity // Cancer Gene Ther., 2006, V. 13, P. 1033-1044.

102. Gregoriadis G., Bacon A., Caparros-Wanderley W., McCormack B. / Plasmid DNA Vaccines: Entrapment into Liposomes by Dehydration-Rehydration // Methods in Enzymology, 2003, V. 367, P. 70-80.

103. Tabor C.W. and Tabor H. / Polyamines // Annu. Rev: Biochem., 1984, V. 53, P. 749-790.

104. Ouameur A.A. and Tajmir-Riahi H.-A. / Structural Analysis of DNA Interactions with Biogenic Polyamines and Cobalt(lll)hexamine Studied by Fourier Transform Infrared and Capillary Electrophoresis // J. Biol. Chem., 2004, V. 279, P. 42041-42054.

105. Eds J.-Y. Wang and R. A. Casero Jr! / Polyamine Cell Signaling: Physiology, Pharmacology and Cancer Research /, Humana Press Inc., 2006, P.91.

106. Geall A.J., Taylor R.J., Earll M.E., Eaton M.A.W. and Blagbrough I.S. / Synthesis of cholesteryl polyamine carbamates: pK(a) studies and condensation of calf thymus DNA // Bioconjugate Chem., 2000, V. 11 (3), P. 314-326.

107. Cooper R.G.,Etheridge C.J., Stewart L., Marshall J., Rudginsky S., Cheng S.H. and Miller A.D., Chem. Eur. J., 1998, V. 4, P. 137.

108. Lv H., Zhang S., Wang B., Cui S. and Yan J. / Toxicity of cationic lipids and cationic polymers in gene delivery//J. Control. Release, 2006, V. 114 (1), P. 100-109.

109. Guo X., Szoka F.C. / Chemical'approaches to triggerable lipid,vesicles for drug and gene delivery II Acc. Chem. Res., 2003; V. 36 (5), P. 335-341.

110. Asokan A., Cho M.J. / Cytosolic delivery of macromolecules. 3. Synthesis and characterization of acid-sensitive bis-detergents // Bioconjugate Chem., 2004, V. 15 (6), P. 1166-1173.

111. Hellberg P.-E., Bergstrom K., Juberg M. / Nonionic cleavable ortho ester surfactants // J. Surfact. Deterg., 2000, V. 3, P. 369-379.

112. Huang Z., Guo X., Li W., MacKay J.A., Szoka F.C. / Acid-triggered transformation of diortho ester phosphocholine liposome // J. Am. Chem. Soc., 2006, V. 128 (1), P. 60-61.

113. Ronsin G., Perrin C., Guédat P., Kremer A., Camilleri P. and Kirby A.J. / Novelspermine-based cationic gemini surfactants for gene delivery // Chem. Commun., 2001, P. 2234.

114. Miller K.A., Kumar E.V., Wood S.J., Cromer J.R., Datta A. and David S.A. / Lipopolysaccharide Sequestrants: Structural Correlates of Activity and Toxicity in Novel Acylhomospermines // J. Med. Chem., 2005, V. 48 (7), P. 2589-2599.

115. Geall A.J. and Blagbrough I.S. / Homologation of Polyamines in the Rapid Synthesis of Lipospermine Conjugates and Related Lipoplexes // Tetrahedron, 2000, V. 56 (16), P. 2449-2460.

116. Fukuyama Т., Jow C.-K., and Cheung M. / 2- and 4-Nitrobenzenesulfonamides: Exceptionally versatile means for preparation of secondary amines and protection of amines // Tetrahedron Lett., 1995, V. 36 (36), P. 6373-6374.

117. Fukuyama Т., Cheung M., Jow C.-K., Hidai Y., and Kan T. / 2,4-Dinitrobenzenesulfonamides: A simple and practical method for the preparation of a variety of secondary amines and diamines // Tetrahedron Lett., 1997, V. 38 (33), P. 5831-5834.

118. Maslov M.A., Morozova N.G., Serebrennikova G.A. / A Convenient Method for Synthesis of Cationic Glycerolipids via Methylthiomethyl Ethers // Mendeleev Commun. 2000. V. 10. P. 65-66

119. Маслов M.A., Морозова Н.Г., Серебренникова Г.А. / Удобный метод получения катионных глицеролипидов с потенциальной биологической активностью II Изв. АН, Сер. хим., 2002, № 3, С. 1778-1783 Russ. Chem. Bull., 2002, V. 51, P. 1931-11936 (Engl. Transl.).

120. Sokolik V.N., Sokolova T.V., Maslov M.A., Morozova N.G., Serebrennikova G.A. / Synthesis of cationic cholesterol-containing amphiphiles with an acid-labile linker // Mendeleev Commun., 2007, V. 17, P. 281-283.

121. Маслов M.A., Морозова Н.Г., Сенан И.М., Серебренникова Г.А. / Синтез катионных липидных агентов трансфекции с О,О- или N.O-ацетальными связями / Биоорган, химия, 2009, Т. 35, № 5, С. 696-700

122. Fuxing Tang and Jeffrey A.Hughes / Use of Dithiodiglycolic Acid as a Tether for Cationic Lipids Decreases the Cytotoxicity and Increases Transgene Expression of

123. Plasmid DNA in Vitro // Bioconjugate Chem., 1999, V. 10, P. 791-796

124. Greene T.W., Wuts P.G.M. / Protective Groups in Organic Synthesis // Wiley-Interscience, 4 edition, 2006

125. Донсон P., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. /Справочник биохимика // Мир, Москва, 1991 Dowson R.M.C., Elliot D.C., Elliot W.H. and Jones K.H. / Date for Biochemical Research // Clarendon Press, Oxford, 1986.

126. Kritchevsky D., Kirk M.R. / Radioactive eggs. III. Degradation of yolk glycerol // Arch. Biochem. Biophys. 1952, V. 39 (2), P. 305-309.